中国肿瘤生物治疗杂志摇圆园园缘允怎灶 ; 圆 ( 圆 ) 圆缘 国际上近期报告的几种依赖端粒酶的条件复制性腺病 [ 猿鄄缘 ] 毒治疗肿瘤的研究结果类似 为了提高重组病毒的选择性, 在悦晕匀运猿园园的基础上, 我们进一步利用缺氧反应元件 ( 澡赠责燥曾蚤葬则藻泽责燥灶泽藻藻造鄄藻皂藻灶贼, 匀砸耘

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1 圆源 中国肿瘤生物治疗杂志摇圆园园缘允怎灶 ; 圆 ( 圆 ): 圆源耀耀耀耀耀耀耀耀圆愿悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则 [ 文章编号 ] 摇园园苑鄄猿愿缘载 ( 圆园园缘 ) 园圆鄄园圆源鄄园缘 选择性增殖腺病毒悦晕匀运缘园园治疗乳腺癌的实验研究 圆猿圆圆李月敏, 宋三泰, 江泽飞, 徐建明, 张琪, 李明颖, 钱炎珍, 崔贞福, 钱其军 ( 援军事医学科学院附 猿园苑医院肿瘤四科, 北京摇园园园猿怨 ; 圆援第二军医大学东方肝胆外科医院, 上海摇圆园园源猿愿 ; 猿援上海新霁生物新科技有限公司, 上海摇圆园圆园猿 ) [ 摘摇要 ] 摇目的 : 观察选择性增殖腺病毒悦晕匀运缘园园对乳腺癌的特异性杀伤作用 方法 : 行病毒增殖实验和细胞生长抑制实验, 验证悦晕匀运缘园园选择性复制和杀伤能力 ; 宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼检测腺病毒耘粤和耘月在细胞中的表达 结果 : 悦晕匀运缘园园在乳腺癌细胞中复制能力与野生型腺病毒憎贼粤凿缘相似, 较韵晕再载鄄园缘增殖能力强 在正常成纤维细胞中悦晕匀运缘园园病毒增殖能力明显减弱, 较憎贼粤凿缘增殖能力弱园园园倍左右 悦晕匀运缘园园可有效杀伤乳腺癌细胞株 ; 而悦晕匀运缘园园对正常成纤维细胞的杀伤力较憎贼粤凿缘减弱约园园倍 悦晕匀运缘园园病毒的耘粤可以选择性在端粒酶阳性的乳腺癌细胞株中表达, 在端粒酶阴性的正常成纤维细胞株月允中不表达, 悦晕匀运缘园园可以选择性地在缺氧条件下表达耘月 动物实验结果显示, 静脉注射悦晕匀运缘园园可以显著抑制酝悦云鄄苑乳腺癌细胞裸鼠移植瘤的生长, 治疗效果与给药剂量相关 结论 : 肿瘤选择性增殖腺病毒悦晕匀运缘园园可选择性在端粒酶阳性的乳腺癌细胞中复制, 并产生体内外杀伤作用 [ 关键词 ] 摇肿瘤增殖病毒 ; 乳腺癌 ; 基因治疗 ; 端粒酶 ; 匀砸耘 [ 中图分类号 ] 摇砸苑猿苑援怨摇摇摇摇 [ 文献标识码 ] 摇粤 粤悦燥灶凿蚤贼蚤燥灶葬造造赠砸藻责造蚤糟葬贼蚤灶早粤凿藻灶燥增蚤则怎泽悦晕匀运缘园园枣燥则贼澡藻栽则藻葬贼皂藻灶贼燥枣月则藻葬泽贼悦葬灶糟藻则 蕴陨再怎藻鄄皂蚤灶悦哉陨在澡藻灶鄄枣怎, 杂韵晕郧杂葬灶鄄贼葬蚤圆圆, 匝陨粤晕匝蚤鄄躁怎灶 圆猿, 允陨粤晕郧在藻鄄枣藻蚤, 载哉允蚤葬灶鄄皂蚤灶早, 在匀粤晕郧匝蚤, 蕴陨酝蚤灶早鄄赠蚤灶早, 匝陨粤晕再葬灶鄄扎澡藻灶 ( 援阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣月则藻葬泽贼悦葬灶糟藻则, 猿园苑匀燥泽责蚤贼葬造, 月藻蚤躁蚤灶早园园园猿怨, 悦澡蚤灶葬 ; 圆援灾蚤则葬造 葬灶凿郧藻灶藻栽澡藻则葬责赠悦藻灶贼藻则, 耘葬泽贼藻则灶匀藻责葬贼燥遭蚤造蚤葬则赠杂怎则早藻则赠陨灶泽贼蚤贼怎贼藻, 杂藻糟燥灶凿酝蚤造蚤贼葬则赠酝藻凿蚤糟蚤灶藻哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠, 杂澡葬灶早鄄澡葬蚤圆园园源猿愿, 悦澡蚤灶葬 ; 猿援杂澡葬灶早澡葬蚤杂蚤灶燥鄄郧藻灶藻月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠悦燥皂责葬灶赠, 杂澡葬灶早澡葬蚤圆园圆园猿, 悦澡蚤灶葬 ) [ 粤遭泽贼则葬糟贼 ] 摇韵遭躁藻糟贼蚤增藻 : 栽燥藻增葬造怎葬贼藻贼澡藻泽藻造藻糟贼蚤增藻造赠燥灶糟燥造赠贼蚤糟藻枣枣藻糟贼燥枣糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶葬造造赠则藻责造蚤糟葬贼蚤灶早葬凿藻灶燥增蚤则怎泽悦晕匀运缘园园蚤灶遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则援酝藻贼澡燥凿泽 : 宰藻怎泽藻凿增蚤则怎泽责则燥造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶葬泽泽葬赠糟藻造造增蚤葬遭蚤造蚤贼赠葬泽泽葬赠贼燥藻增葬造怎葬贼藻贼澡藻责则燥造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶葬灶凿糟赠贼燥造赠泽蚤泽泽藻鄄造藻糟贼蚤增蚤贼赠燥枣悦晕匀运缘园园援粤灶凿憎藻怎泽藻凿宰藻泽贼藻则灶鄄遭造燥贼贼燥糟燥灶枣蚤则皂贼澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣葬凿藻灶燥增蚤则怎泽悦晕匀运缘园园耘粤葬灶凿耘月蚤灶糟葬灶糟藻则葬灶凿灶燥则皂葬造糟藻造造泽援砸藻泽怎造贼泽 : 栽澡藻悦晕匀运缘园园增蚤则怎泽责则燥造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶葬遭蚤造蚤贼赠蚤灶遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则糟藻造造造蚤灶藻泽蚤泽泽蚤皂蚤造葬则贼燥贼澡葬贼燥枣憎贼粤凿缘, 遭藻贼贼藻则贼澡葬灶贼澡葬贼燥枣韵晕再载鄄园缘增蚤则怎泽援匀燥憎藻增藻则, 悦晕匀运缘园园增蚤则怎泽则藻责造蚤糟葬贼藻园园园鄄枣燥造凿造藻泽泽贼澡葬灶贼澡葬贼燥枣憎贼粤凿缘蚤灶灶燥则鄄皂葬造枣蚤遭则燥遭造葬泽贼糟藻造造造蚤灶藻泽援悦晕匀运缘园园糟葬灶藻枣枣藻糟贼蚤增藻造赠噪蚤造造遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则糟藻造造, 憎澡蚤造藻蚤贼泽澡燥憎泽葬贼贼藻灶怎葬贼藻凿糟赠贼燥造赠泽蚤泽蚤灶灶燥则皂葬造枣蚤鄄遭则燥遭造葬泽贼糟藻造造泽, 憎蚤贼澡葬遭燥怎贼园园鄄枣燥造凿造藻泽泽贼澡葬灶贼澡葬贼燥枣憎贼粤凿缘援悦晕匀运缘园园耘粤蚤泽藻曾责则藻泽泽藻凿蚤灶贼藻造燥皂藻则葬泽藻鄄责燥泽蚤贼蚤增藻遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则糟藻造造泽遭怎贼灶燥贼蚤灶贼藻造燥皂藻则葬泽藻鄄灶藻早葬贼蚤增藻灶燥则皂葬造枣蚤遭则燥遭造葬泽贼糟藻造造泽援耘月责则燥贼藻蚤灶糟葬灶遭藻凿藻贼藻糟贼藻凿怎灶凿藻则澡赠责燥曾蚤葬糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶遭怎贼灶燥贼蚤灶灶燥则皂燥曾蚤葬糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽援陨灶贼则葬增藻灶燥怎泽蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶泽燥枣悦晕匀运缘园园, 赠蚤藻造凿藻凿泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼贼怎皂燥则早则燥憎贼澡凿藻造葬赠蚤灶贼澡藻贼藻造燥皂藻则鄄葬泽藻鄄责燥泽蚤贼蚤增藻遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则曾藻灶燥早则葬枣贼泽贼澡燥怎早澡贼澡藻酝悦云鄄苑则藻责则藻泽藻灶贼葬增藻则赠枣葬泽贼早则燥憎蚤灶早贼怎皂燥则糟藻造造造蚤灶藻援粤灶贼蚤贼怎皂燥则藻枣枣蚤糟葬糟赠燥枣则藻责造蚤糟葬贼蚤燥灶鄄糟燥皂责藻贼藻灶贼葬凿藻灶燥增蚤则怎泽悦晕匀运缘园园蚤灶增蚤增燥憎葬泽葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿憎蚤贼澡蚤灶糟则藻葬泽藻凿凿燥泽葬早藻燥枣悦晕匀运缘园园援悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶泽 : 栽澡藻则藻泽怎造贼泽责则燥增藻贼澡葬贼悦晕匀运缘园园澡葬泽澡蚤早澡造赠责则燥造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶泽藻造藻糟贼蚤增蚤贼赠葬灶凿责燥贼藻灶贼糟赠贼燥造赠泽蚤泽藻枣枣藻糟贼燥灶遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则援 [ 运藻赠憎燥则凿泽 ] 摇则藻责造蚤糟葬贼蚤增藻葬凿藻灶燥增蚤则怎泽 ; 遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则 ; 早藻灶藻贼澡藻则葬责赠 ; 贼藻造燥皂藻则葬泽藻 ; 匀砸耘, 摇摇国内外的研究结果显示, 澡栽耘砸栽启动子可以成功 [ 鄄圆地调控腺病毒选择性靶向肿瘤细胞 ] 我们也成功地重组出一株澡栽耘砸栽启动子调控的靶向端粒酶阳性肿瘤细胞的腺病毒悦晕匀运猿园园, 该病毒的体内外研究与 [ 基金项目 ] 摇国家愿远猿计划重点资助项目 ( 圆园园粤粤圆苑园猿 ); 国家自摇摇摇摇然科学基金国际合作项目 ( 猿园圆园远园愿圆源 ) [ 作者简介 ] 摇李月敏 ( 怨远愿鄄 ), 女, 河北人, 主要从事肿瘤临床和基摇摇摇摇础方面的研究 [ 通讯作者 ] 摇钱其军, 耘鄄皂葬蚤造 : 择蚤葬灶早躁岳赠葬澡燥燥援糟燥皂

2 中国肿瘤生物治疗杂志摇圆园园缘允怎灶 ; 圆 ( 圆 ) 圆缘 国际上近期报告的几种依赖端粒酶的条件复制性腺病 [ 猿鄄缘 ] 毒治疗肿瘤的研究结果类似 为了提高重组病毒的选择性, 在悦晕匀运猿园园的基础上, 我们进一步利用缺氧反应元件 ( 澡赠责燥曾蚤葬则藻泽责燥灶泽藻藻造鄄藻皂藻灶贼, 匀砸耘 ) 启动子, 调控另一病毒早期复制必需蛋白耘月表达, 改造后的双启动子调控的病毒悦晕匀运缘园园 可更加特异性地靶向肿瘤细胞, 从而更大限度的保护 [ 远正常组织 ] 本研究对悦晕匀运缘园园选择性杀伤乳腺癌细胞的研究结果作一介绍 摇 援摇 材料与方法 病毒 悦晕匀运缘园园为第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室构建制备, 腺病毒增殖必需基因 耘粤和耘月分别由澡栽耘砸栽启动子和缺氧启动子匀砸耘 调控 憎贼粤凿缘为本室保存, 韵晕再载鄄园缘为美国加州大学 月藻则噪粤允教授惠赠 援圆摇细胞株及细胞培养人乳腺癌细胞株酝悦云苑 ( 野生型孕缘猿 ) 杂运鄄月砸鄄猿 ( 匀耘砸鄄圆过表达 ) 及正常成纤维细胞株月允, 酝砸悦鄄缘购自美国粤栽悦悦 ; 圆怨猿细胞购自酝蚤糟则燥遭蚤曾月蚤燥泽赠泽贼藻皂公司购自美国粤栽悦悦 乳腺癌细胞株酝悦云苑, 杂运鄄月砸鄄猿用含 园豫晕悦杂 ( 新生牛血清 ) 的阅酝耘酝培养液, 人正常成纤维细胞株月允, 酝砸悦鄄缘用含园豫云月杂 ( 胎牛血清 ) 的 酝耘酝培养液, 在猿苑益, 缘豫悦韵圆条件下培养, 园援圆缘豫胰酶消化细胞 传代 援猿摇 实验动物 月葬造遭辕糟裸鼠, 源耀耀耀耀耀耀耀耀远周龄, 共缘园只, 雌性, 平均重量 圆园耀耀耀耀耀耀耀耀圆猿早, 购自上海中科院动物培育中心 援源摇病毒增殖实验缘取对数生长期细胞计数铺远孔板, 缘伊园辕孔, 常规培养圆源澡 ( 正常成纤维细胞则需培养源愿澡, 待形成接触抑制后加入病毒 ), 待细胞贴壁后, 以酝韵陨越缘责枣怎辕糟藻造造分别加入病毒悦晕匀运缘园园, 韵晕再载鄄园缘和憎贼粤凿缘, 病毒作用圆澡后弃去含病毒的培养液, 换用含缘豫血清的培养液猿皂造, 分别在园, 远, 圆, 圆源, 源愿, 怨远澡用细胞刮子将细胞刮下来移至缘皂造离心管中, 冻融猿次, 使病毒从细胞中充分释放出来, 栽悦陨阅缘园方法检测病毒滴度, 具体方法参见匝遭蚤燥早藻灶藻公司的说明书 援缘摇细胞生长抑制实验采取酝栽栽方法, 在酶标仪缘苑园灶皂波长读数, 参照波长为远缘园灶皂 根据公式计算在不同酝韵陨值情况下各细胞存活率 细胞存活率豫越 ( 加药组韵阅值辕对照组韵阅值 ) 伊园园豫 每个独立实验分别在不同时间重复猿次, 取其平均值 援远摇宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼检测腺病毒耘粤和耘月的表达缘对数生长期细胞计数铺远孔板, 缘伊园辕孔, 常规条件下培养圆源澡, 以酝韵陨为加入悦晕匀运缘园园病毒, 感染猿凿, 移去细胞培养上清液, 孕月杂冲洗后, 加入酝鄄孕耘砸酝葬皂皂葬造蚤葬灶孕则燥贼藻蚤灶耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶砸藻葬早藻灶贼 ( 孕陨耘砸悦耘, 砸燥糟噪枣燥则凿, 陨蕴 ) 裂解细胞, 用细胞刮子刮下细胞, 离心收集上清 宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼方法检测胞浆中耘粤和耘月蛋白 抗腺病毒耘粤和耘月单克隆抗体购自杂葬灶贼葬郧则怎扎月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠公司 氧浓度园援豫以下继续培养乳腺癌细胞远澡后, 收集并裂解细胞, 收集上清检测缺氧环境条件下耘月蛋白表达 援苑摇体内抑制肿瘤生长作用裸鼠右侧腹部皮下接种人乳腺癌细胞株酝悦云鄄苑 远细胞, 缘伊园个辕园援皂造辕只 肿瘤细胞皮下注射后源凿, 可观察到约猿皂皂左右皮下肿瘤结节, 成瘤率 园园豫 肿瘤生长较快, 接种后园凿, 待瘤结节长至直径远皂皂以上时准备治疗 将其中肿瘤体积大小较为均匀的源园只裸鼠随机分为源组, 对照组 : 每只裸鼠尾静脉直接注射园园 μ 造病毒保存液 ( 园皂皂燥造辕蕴栽则蚤泽鄄匀悦造责匀愿援园, 圆皂皂燥造辕蕴酝早悦造圆, 源豫杂怎糟则燥泽藻 ) 悦晕匀运缘园园鄄 怨 ( 伊园责枣怎 ) 组 : 静脉注射射悦晕匀运缘园园病毒纯化液伊怨园责枣怎辕园园 μ 造辕只裸鼠, 隔日次, 共缘次 悦晕匀运缘园园鄄圆 怨 ( 缘伊园责枣怎 ) 组 : 静脉注射射悦晕匀运缘园园病毒纯化液缘伊怨园责枣怎辕园园 μ 造辕只裸鼠, 隔日次, 共缘次 悦晕匀运缘园园鄄猿 园 ( 伊园责枣怎 ) 组 : 静脉注射射悦晕匀运缘园园病毒纯化液园伊园责枣怎辕园园 μ 造辕只裸鼠, 隔日次, 共缘次 瘤体积圆猿计算公式 : 葬伊遭伊园援缘皂皂 圆摇结摇果 圆援摇病毒增殖实验结果显示悦晕匀运缘园园在乳腺癌细胞株中的增殖曲线与憎贼粤凿缘相近, 圆源澡病毒开始增殖加快, 源愿耀耀耀耀耀耀耀耀怨远澡 可以达到较高水平 源愿澡悦晕匀运缘园园在杂运鄄月砸鄄猿和 酝悦云鄄苑乳腺癌细胞中的病毒滴度可较园澡高圆园园园园倍和圆缘圆缘倍 ; 源愿澡憎贼粤凿缘在杂运鄄月砸鄄猿和酝悦云鄄苑的增殖倍数分别为苑愿圆和猿怨远愿圆倍 ; 二者在杂运鄄月砸鄄猿和 酝悦云鄄苑的增殖倍数均较韵晕再载鄄园缘强 ( 分别为园园园倍和圆缘猿倍 ) 在月允和酝砸悦鄄缘正常成纤维细胞中, 悦晕匀运缘园园病毒源愿澡增殖倍数分别为愿倍和猿倍, 源愿澡后病毒增殖开始进入平台期, 怨远澡增殖倍数仍仅有 猿耀耀耀耀耀耀耀耀园园倍 而憎贼粤凿缘在正常成纤维细胞中的增殖曲线与在肿瘤细胞中相似, 源愿澡增殖倍数可高达苑愿圆 倍和猿怨远愿圆倍 ( 图, 圆 ) 该结果证实了悦晕匀运缘园园在肿瘤细胞中复制能力很明显, 而在正常细胞酝砸悦鄄缘, 月允中的增殖能力明显下降

3 圆远 中国肿瘤生物治疗杂志摇圆园园缘允怎灶 ; 圆 ( 圆 ) 圆援圆摇病毒对细胞的生长抑制作用图猿显示出病毒悦晕匀运缘园园在不同酝韵陨情况下对乳腺癌细胞杂运鄄月砸鄄猿 酝悦云鄄苑以及正常细胞月允的杀伤作用 每个独立实验分别在不同时间重复猿次, 取其平均值 可以看出, 悦晕匀运缘园园在酝韵陨园责枣怎辕糟藻造造以下可以有效杀伤半数乳腺癌细胞株 悦晕匀运缘园园对正常成纤维细胞的杀伤力明显减弱, 悦晕匀运缘园园在酝韵陨园园园孕云哉辕糟藻造造时, 病毒作用苑凿后月允细胞存活率仍在缘园豫以上 即乳腺癌细胞株和正常成纤维细胞株的陨悦缘园 ( 孕云哉辕糟藻造造 ) 相差园园倍以上 有氧环境下, 感染憎贼粤凿缘的乳腺癌细胞株中均可以检测出悦晕匀运缘园园耘月蛋白表达 ( 图缘 ) 圆援源摇 体内肿瘤抑制作用 酝悦云鄄苑裸鼠移植瘤成瘤率高, 肿瘤生长迅速, 不依赖雌激素刺激其生长 可以观察到对照组肿瘤生长迅速 ; 经悦晕匀运缘园园治疗后, 肿瘤增长速度变慢, 有的肿瘤停止生长, 未见肿瘤消退现象 第圆周时, 治疗组肿瘤体积明显小于对照组 ( 孕约园援园缘 ) 研究显示, 病毒剂量与治疗效果成正相关 剂量越高, 治疗效果越明显, 园肿瘤体积越小 伊园责枣怎组治疗效果明显优于缘伊怨怨怨园责枣怎组和伊园责枣怎组 ( 孕约园援园缘 ) 缘伊园责枣怎组疗怨园效显著优于伊园责枣怎组 ( 孕约园援园缘 )( 图远 ) 伊园 责枣怎伊缘次的给药方案取得了猿辕园疾病稳定 ( 杂阅, 泽贼葬鄄怨怨遭造藻凿蚤泽藻葬泽藻 ); 缘伊园责枣怎组有辕园杂阅 ; 伊园责枣怎组无 杂阅 ; 对照组肿瘤明显增长迅速, 观察期结束时, 肿瘤体积明显大于各治疗组肿瘤体积 在观察的愿周时间内, 所有实验动物未出现死亡现象 图摇病毒憎贼粤凿缘, 韵晕再载鄄园缘, 悦晕匀运缘园园在正常成纤维细胞中的增殖倍数随时间变化曲线云蚤早援摇憎贼粤凿缘, 韵晕再载鄄园缘葬灶凿悦晕匀运缘园园责则燥造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶皂怎造贼蚤责造蚤糟蚤贼赠蚤灶灶燥则皂葬造枣蚤遭则燥遭造葬泽贼糟藻造造泽粤 : 酝砸悦鄄缘 ; 月 : 月允 圆援猿摇宰藻泽贼藻则灶印迹分析悦晕匀运缘园园耘粤和耘月基因表达人正常成纤维细胞株端粒酶阴性, 缺乏澡栽耘砸栽启动子活性, 感染悦晕匀运缘园园的人正常成纤维细胞株中未检测到悦晕匀运缘园园耘粤表达 ; 乳腺癌细胞株中端粒酶阳性, 澡栽耘砸栽启动子活性很高, 在感染悦晕匀运缘园园的乳腺癌细胞株中能够检测到耘粤蛋白表达 而憎贼粤凿缘无论感染乳腺癌细胞或正常成纤维细胞均可检测到耘粤蛋白的表达 ( 图源 ) 缺氧环境条件下感染悦晕匀运缘园园的乳腺癌细胞株中可以检测出悦晕匀运缘园园耘月蛋白表达, 正常有氧环境下则无 ; 无论在缺氧环境条件或正常 图圆摇病毒憎贼粤凿缘, 韵晕再载鄄园缘, 悦晕匀运缘园园在乳腺癌细胞的增殖倍数随时间变化曲线 ( 栽悦陨阅缘园法 ) 云蚤早援圆摇憎贼粤凿缘, 韵晕再载鄄园缘葬灶凿悦晕匀运缘园园责则燥造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶皂怎造贼蚤责造蚤糟蚤贼赠蚤灶遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则糟藻造造泽粤 : 杂运鄄月砸鄄猿 ; 月 : 酝悦云鄄苑 猿摇讨摇论 端粒酶的活化是肿瘤发生的早期事件, 并且在肿瘤

4 中国肿瘤生物治疗杂志摇圆园园缘允怎灶 ; 圆 ( 圆 ) 圆苑 [ 苑 ] 的发展过程中持续存在 基于病毒复制选择性和应用的普遍性这两点要求, 采用端粒酶逆转录酶 ( 贼藻造燥皂藻则鄄葬泽藻则藻增藻则泽藻贼则葬灶泽糟则蚤责贼葬泽藻, 澡栽耘砸栽 ) 基因启动子驱动耘粤, 靶向端粒酶阳性的肿瘤细胞, 而对端粒酶阴性的正常细胞则不起作用, 这可能是一项非常有前途的增殖病毒改造策略 肿瘤组织内部大量乏氧细胞的存在是实体肿 动子活化是实体肿瘤特异性的改变, 国外有学者曾用缺氧反应启动子的基因治疗策略治疗肿瘤, 发现匀砸耘 启动子在乏氧的肿瘤细胞内的活性较正常肝或脾内的活性高园园园倍左右, 可以使外源基因主要在肿瘤内 [ 愿鄄怨 ] 表达, 而在正常细胞内表达明显减弱 因此, 澡栽耘砸栽启动子和匀砸耘启动子双调控的肿瘤增殖病毒可能会赋予重组病毒特异性的肿瘤靶向能力 图源摇 云蚤早援源摇 图猿摇悦晕匀运缘园园病毒不同酝韵陨情况下酝悦云鄄苑, 杂运鄄月砸鄄猿和月允细胞存活曲线云蚤早援猿摇悦藻造造泽怎则增蚤增葬造糟怎则增藻葬枣贼藻则藻曾责燥泽怎则藻蚤灶增葬则蚤燥怎泽酝韵陨泽燥枣悦晕匀运缘园园 宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼检测悦晕运缘园园和憎贼粤凿缘耘粤的表达 阅藻贼藻糟贼蚤燥灶燥枣增蚤则怎泽耘陨粤藻曾责则藻泽泽蚤燥灶蚤灶遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则糟藻造造泽葬灶凿枣蚤遭则燥遭造葬泽贼糟藻造造泽 : 杂运鄄月砸鄄猿 ( 憎贼粤凿缘 ); 圆 : 杂运鄄月砸鄄猿 ( 悦晕匀运缘园园 ); 猿 : 酝悦云鄄苑 ( 悦晕匀运缘园园 ); 源 : 酝悦云鄄苑 ( 悦晕匀运缘园园 ); 缘 : 月允 ( 悦晕匀运缘园园 ); 远 : 圆怨猿 ( 粤凿藻灶燥增蚤则怎泽耘贼则葬灶枣藻糟贼藻凿糟藻造造 ) 图缘摇宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼检测悦晕匀运缘园园耘月的表达云蚤早援缘摇阅藻贼藻糟贼蚤燥灶燥枣悦晕匀运缘园园耘月藻曾责则藻泽泽蚤燥灶蚤灶灶燥则皂燥曾蚤葬葬灶凿澡赠责燥曾蚤葬糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽 : 杂运鄄月砸鄄猿 ( 悦晕匀运缘园园, 澡赠责燥曾蚤葬 ); 圆 : 杂运鄄月砸鄄猿 ( 悦晕匀运缘园园, 灶燥则皂燥曾蚤葬 ); 猿 : 杂运鄄月砸鄄猿 ( 憎贼粤凿缘, 澡赠责燥曾蚤葬 ); 源 : 杂运鄄月砸鄄猿 ( 憎贼粤凿缘, 灶燥则皂燥曾蚤葬 ); 缘 : 圆怨猿 ( 粤凿藻灶燥增蚤则怎泽耘贼则葬灶枣藻糟贼藻凿糟藻造造 ) 瘤的另一个重要特性, 肿瘤缺氧的微环境是肿瘤放化疗耐受的重要原因之一 缺氧的信息在肿瘤细胞内部通过一系列的信号传导系统, 导致匀陨云鄄转录因子的表达, 最后导致细胞内具有缺氧反应元件 ( 澡赠责燥曾蚤葬则藻鄄泽责燥灶泽藻藻造藻皂藻灶贼, 匀砸耘 ) 的基因的活化和表达 匀砸耘启 图远摇 悦晕匀运缘园园抗裸鼠乳腺癌移植瘤作用 云蚤早援远摇 粤灶贼蚤贼怎皂燥则藻枣枣蚤糟葬糟赠燥枣悦晕匀运缘园园蚤灶灶怎凿藻 皂蚤糟藻遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则曾藻灶燥早则葬枣贼泽 摇摇我们的研究结果证实增殖病毒悦晕匀运缘园园在端粒酶阳性乳腺癌细胞中增殖的能力仍很强, 与野生型腺病毒相似, 而在正常成纤维细胞中源愿澡增殖倍数仅为 愿倍和猿倍, 悦晕匀运缘园园的复制选择性优于悦晕匀运猿园园 ( 源愿澡增殖愿愿耀耀耀耀耀耀耀耀愿园倍 ) [ 鄄圆 ] 细胞生长抑制实验同样证明, 悦晕匀运缘园园对乳腺癌细胞的杀伤力令人满意, 但对正常细胞的杀伤作用更弱, 较对乳腺癌细胞的杀伤能力弱园园倍 将增殖病毒作为基因治疗的平台是提高疗效的重要策略 我们实验室已成功构建出携带肿瘤治疗基因 责缘猿 鼠内皮抑素 γ 干扰素的增殖病毒悦晕匀运缘园园鄄责缘猿, 悦晕匀运缘园园鄄皂耘和悦晕匀运缘园园鄄澡 γ, 实验结果将另文发表 肿瘤的基因治疗自愿园年代提出以来, 经历了圆园余年的发展, 尽管肿瘤的基因治疗方案是非常安全的, 但其抗肿瘤效应也非常低, 甚至无任何治疗作用 最主要原因是目前基因治疗的载体系统在体内存在转染率低 抗癌基因表达量低及不能靶向肿瘤细胞等缺点, 这 [ 园严重阻碍了肿瘤基因治疗在临床中的疗效 ] 然而, 增殖病毒作为基因治疗的载体可以克服复制缺陷型病毒转染率低和治疗基因表达量低的难题 病毒在肿瘤原发灶和转移灶中选择性复制, 局部病毒浓度可以很高, 基因表达量相应成千上万倍提高, 从而发挥两者的协同优势, 进一步提高抗肿瘤的疗效 这一新的肿瘤基因治疗策略可能会为临床提供一种有利的新武器 [ 参考文献 ]

5 圆愿 中国肿瘤生物治疗杂志摇圆园园缘允怎灶 ; 圆 ( 圆 ) [ ] 摇杂怎悦匝, 载怎藻匀月, 宰葬灶早载匀, 藻贼葬造援孕燥贼藻灶贼葬灶贼蚤贼怎皂燥则葬造藻枣枣蚤糟葬糟赠燥枣葬灶燥增藻造则藻责造蚤糟葬贼蚤增藻葬凿藻灶燥增蚤则怎泽悦晕匀运猿园园贼葬则早藻贼蚤灶早贼燥贼澡藻贼藻造燥皂藻则葬泽藻鄄责燥泽蚤贼蚤增藻糟葬灶糟藻则糟藻造造泽 [ 允 ] 援允悦葬灶糟藻则砸藻泽悦造蚤灶韵灶糟燥造, 圆园园源, 猿园 ( 园 ): 缘怨鄄远园猿援 [ 圆 ] 摇李月敏, 宋三泰, 江泽飞, 等援端粒酶逆转录酶启动子调控的肿瘤增殖腺病毒悦晕匀运猿园园对肝癌细胞的杀伤作用 [ 允 ] 援中华医学杂志, 圆园园缘, 愿缘 ( 苑 ): 源远愿鄄源苑圆援 [ 猿 ] 摇陨则增蚤灶早允, 宰葬灶早在, 孕燥憎藻造造杂, 藻贼葬造援悦燥灶凿蚤贼蚤燥灶葬造造赠则藻责造蚤糟葬贼蚤增藻葬凿藻鄄灶燥增蚤则怎泽凿则蚤增藻灶遭赠贼澡藻澡怎皂葬灶贼藻造燥皂藻则葬泽藻责则燥皂燥贼藻则责则燥增蚤凿藻泽遭则燥葬凿鄄泽责藻糟贼则怎皂葬灶贼蚤贼怎皂燥则葬糟贼蚤增蚤贼赠憎蚤贼澡燥怎贼造蚤增藻则贼燥曾蚤糟蚤贼赠 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则郧藻灶藻栽澡藻则, 圆园园源, ( 猿 ): 苑源鄄愿缘援 [ 源 ] 摇匀怎葬灶早栽郧, 杂葬增燥灶贼葬怎泽酝允, 杂澡蚤灶燥扎葬噪蚤运, 藻贼葬造援栽藻造燥皂藻则葬泽藻鄄凿藻鄄责藻灶凿藻灶贼燥灶糟燥造赠贼蚤糟葬凿藻灶燥增蚤则怎泽枣燥则糟葬灶糟藻则贼则藻葬贼皂藻灶贼 [ 允 ] 援郧藻灶藻栽澡藻则, 圆园园猿, 园 ( 缘 ): 圆源鄄圆源苑援 [ 缘 ] 摇宰蚤则贼澡栽, 在藻灶凿藻则蕴, 杂糟澡怎造贼藻月, 藻贼葬造援粤贼藻造燥皂藻则葬泽藻鄄凿藻责藻灶凿藻灶贼糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶葬造造赠则藻责造蚤糟葬贼蚤灶早葬凿藻灶燥增蚤则怎泽枣燥则泽藻造藻糟贼蚤增藻贼则藻葬贼皂藻灶贼燥枣糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园园猿, 远猿 ( 圆 ): 猿愿鄄猿愿愿援 [ 远 ] 摇在澡葬灶早匝, 宰怎酝悦, 蕴蚤再酝, 藻贼葬造援粤灶燥增藻造则藻责造蚤糟葬贼蚤燥灶鄄糟燥皂责藻贼藻灶贼 葬凿藻灶燥增蚤则怎泽悦晕匀运缘园园蚤灶贼澡藻贼则藻葬贼皂藻灶贼燥枣澡藻责贼燥糟藻造造怎造葬则糟葬则糟蚤灶燥皂葬蚤灶增蚤贼则燥援 [ 允 ] 援悦澡蚤灶藻泽藻鄄郧藻则皂葬灶允悦造蚤灶韵灶糟燥造, 圆园园源, 猿 ( 圆 ): 苑园鄄苑源援 [ 苑 ] 摇运蚤皂晕宰, 孕蚤葬贼赠泽扎藻噪, 酝粤, 孕则燥憎泽藻运砸, 藻贼葬造援杂责藻糟蚤枣蚤糟葬泽泽燥糟蚤葬贼蚤燥灶燥枣澡怎皂葬灶贼藻造燥皂藻则葬泽藻葬糟贼蚤增蚤贼赠憎蚤贼澡蚤皂皂燥则贼葬造糟藻造造泽葬灶凿糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援杂糟蚤藻灶糟藻, 怨怨源, 圆远远 : 圆园鄄圆园缘援 [ 愿 ] 摇月蚤灶造藻赠运, 粤泽噪澡葬皂在, 酝葬则贼蚤灶蕴, 藻贼葬造援匀赠责燥曾蚤葬鄄皂藻凿蚤葬贼藻凿贼怎皂燥怎则贼葬则早藻贼蚤灶早 [ 允 ] 援郧藻灶藻栽澡藻则, 圆园园猿, 园 ( 苑 ): 缘源园鄄缘源怨援 [ 怨 ] 摇悦燥憎藻灶砸蕴, 宰蚤造造蚤葬皂泽运允, 悦澡蚤灶躁藻耘悦, 藻贼葬造援匀赠责燥曾蚤葬贼葬则早藻贼藻凿早藻灶藻贼澡藻则葬责赠贼燥蚤灶糟则藻葬泽藻贼澡藻藻枣枣蚤糟葬糟赠燥枣贼蚤则葬责葬扎葬皂蚤灶藻葬泽葬灶葬凿躁怎增葬灶贼贼燥则葬凿蚤燥贼澡藻则葬责赠 : 砸藻增藻则泽蚤灶早贼怎皂燥则则葬凿蚤燥则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻葬灶凿藻枣枣藻糟贼蚤灶早糟怎则藻 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园园源, 远源 ( 源 ): 猿怨远鄄源园圆援 [ 园 ] 灾蚤造藻砸郧, 砸怎泽泽藻造造杂允, 蕴藻皂燥蚤灶藻晕砸, 藻贼葬造援悦葬灶糟藻则早藻灶藻贼澡藻则葬责赠 : 匀葬则凿造藻泽泽燥灶泽葬灶凿灶藻憎糟燥怎则泽藻泽 [ 允 ] 援郧藻灶藻栽澡藻则, 圆园园园, 苑 ( ): 圆鄄愿援 [ 收稿日期 ] 摇圆园园缘原园猿原园缘 [ 修回日期 ] 摇圆园园缘原园缘原圆圆 [ 本文编辑 ] 摇韩摇丹 研究简报 [ 文章编号 ] 摇园园苑鄄猿愿缘载 ( 圆园园缘 ) 园圆鄄园圆愿鄄园 尿多酸肽对乳腺癌细胞间黏附分子鄄表达的影响 圆郑摇伟, 马摇林放疗科, 北京摇园园愿缘猿 ), 陈摇凛, 李摇荣, 蒋彦永 ( 援解放军总医院普外科, 北京摇园园愿缘猿 ; 圆援解放军总医院 摇摇肿瘤是一种分化障碍性疾病, 与细胞增殖 分化和凋亡失调有关 近来研究发现肿瘤细胞的去分化过程可通过诱导分化剂将肿瘤细胞诱导分化成正常细胞 抑制肿瘤细胞增殖或诱导细胞分化 凋亡是最新的肿瘤治疗方法 诱导分化疗法 喜滴克癌细胞分化剂鄄尿多酸肽 ( 悦阅粤鄄 Ⅱ) 是从健康人尿中提取和纯化的一组天然活性成分的抗肿瘤制剂, 通过抑制异常甲基转移酶而诱导肿瘤细胞分化 为研究悦阅粤鄄 Ⅱ 对乳腺癌的诱导分化作用, 我们以全反式维甲酸 ( 粤栽砸粤 ) 为阳性对照, 选用不同生物特征的细胞株作为研究对象, 观察了悦阅粤鄄 Ⅱ 对乳腺癌间黏附分子鄄 ( 陨悦粤酝鄄 ) 表达的影响, 以期为悦阅粤鄄 Ⅱ 治疗乳腺癌提供一定的实验依据和理论基础 实验选用酝悦云鄄苑和酝阅粤鄄酝月鄄圆猿两种人乳腺癌细胞株, 从中国医学科学院基础研究所细胞中心购得 圆株具有不同的生物学特性 对照组不加药 ; 悦阅粤鄄 Ⅱ 实验组培养液中加入 悦阅粤鄄 Ⅱ( 终浓度为援缘皂早辕皂造 ); 粤栽砸粤阳性对照组培养液中加入粤栽砸粤 ( 终浓度为 μ 皂燥造辕蕴 ) 各组培养远耀耀耀耀耀耀耀耀苑凿, 胰酶消远化成单细胞悬液 ; 取单细胞悬液源伊园细胞, 放入培养瓶中在摇床上继续培养园澡后, 缘园园早离心缘皂蚤灶, 孕月杂 ( 园援园皂燥造辕蕴, 责匀苑援源 ) 漂洗猿次, 用孕月杂 ( 园援园皂燥造辕蕴 ) 皂造重悬, 使细胞远缘浓度为源伊园细胞辕皂造, 取圆缘 μ 造细胞 ( 伊园 ) 置入缘皂造试管, 加入 μ 早人陨早郧室温封闭缘皂蚤灶, 加入园 μ 造鼠抗人 陨悦粤酝鄄单克隆抗体陨早郧鄄云陨栽悦标记 ( 砸驭阅杂赠泽贼藻皂泽, 陨灶糟援美国 ), 在圆耀耀耀耀耀耀耀耀愿益孵育猿园耀耀耀耀耀耀耀耀源缘皂蚤灶, 源皂造孕月杂 ( 园援园皂燥造辕蕴, 责匀苑郾源 ) 漂洗圆次, 用圆园园耀耀耀耀耀耀耀耀源园园 μ 造孕月杂重悬细胞, 上机进行 云粤悦杂检测 乳腺癌细胞株酝悦云鄄苑和酝阅粤鄄酝月鄄圆猿经培养后, 用流式细胞仪检测细胞陨悦粤酝鄄的表达, 发现悦阅粤鄄 Ⅱ 实验组和粤栽鄄砸粤组各乳腺癌细胞株细胞陨悦粤酝鄄的表达比对照组增加, 酝悦云鄄苑细胞株分别从远援怨源道增加到源猿援愿圆道和源圆援缘缘道, 酝阅粤鄄酝月鄄圆猿细胞株从圆援缘猿道分别增加到猿远援愿愿道和猿源郾圆道 乳腺癌分化标记物研究最多的是功能性标记物, 如耘砸状态 细胞角蛋白 ( 糟赠贼燥噪藻则葬贼蚤灶泽 ), 陨悦粤酝鄄, 耘酝粤 陨悦粤酝鄄在许多细胞的分化过程中起着重要作用, 是乳腺癌细胞分化的重要标记 陨悦粤酝鄄在正常乳腺上皮细胞表达, 但在乳腺癌细胞株或乳腺癌组织中表达均下降或缺失, 陨悦粤酝鄄表达阴性的肿瘤细胞可减少与细胞毒性淋巴细胞表面蕴云粤鄄的结合, 帮助乳腺癌细胞逃避机体的免疫监视, 使其具有更大的转移潜能和更差的预后 我们试验结果提示悦阅粤鄄 Ⅱ 不仅可促进乳腺癌细胞分化, 同时还可通过陨悦粤酝鄄的表达增加来提高机体细胞免疫功能 但亦有报道悦阅粤鄄 Ⅱ 与肝癌细胞培养猿凿后细胞膜上陨悦粤酝鄄表达下降 这种现象的原因目前尚无法解释, 是否与肿瘤细胞类型或检测方法有关需要进一步证实 [ 关键词 ] 摇乳腺癌 ; 尿多酸肽 ( 悦阅粤鄄 Ⅱ); 维甲酸 ; 细胞间黏附分子鄄 [ 中图分类号 ] 摇砸苑猿园摇摇摇摇 [ 文献标识码 ] 摇阅 [ 收稿日期 ] 摇圆园园缘原园圆原圆 [ 修回日期 ] 摇圆园园缘原园源原怨 [ 本文编辑 ] 摇韩摇丹摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇 [ 基金项目 ] 摇国家自然科学基金 ( 猿园苑园远远 ) 资助课题