怨源 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员年圆月, 圆园 ( 员 ) 陨蕴鄄员圆葬灶凿陨晕云鄄 γ 蚤灶贼澡藻皂蚤糟则燥藻灶增蚤则燥灶皂藻灶贼燥枣澡藻责葬贼蚤糟糟葬则糟蚤灶燥皂葬贼蚤泽泽怎藻泽蚤灶贼怎皂燥则鄄遭藻葬则蚤灶早皂蚤糟藻, 葬灶凿贼澡藻葬泽责葬则贼葬贼藻葬皂蚤灶燥贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻 ( 粤杂

Transcription

1 中国肿瘤生物治疗杂志摇澡贼贼责 : 辕辕憎憎憎援遭蚤燥贼澡藻则援燥则早悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则, 云藻遭援圆园员, 灾燥造援圆园, 晕燥援员 怨 凿燥蚤 : 员园援愿苑圆辕躁援蚤泽泽灶援员园园苑鄄愿缘载援圆园员援园员援园员远 基础研究 陨蕴鄄员圆诱导肝癌微环境中晕运细胞活化发挥抗肿瘤作用 员, 圆源员, 圆员, 员, 圆周智锋, 江金华, 李洁羽, 陈强, 叶韵斌 ( 员援福建省肿瘤转化医学重点实验室, 福建福州缘园园园员源 ; 圆援福建医科大学福建省肿瘤医院肿瘤免疫学研究室, 福建福州缘园园园员源 ; 援福建医科大学附属协和医院肿瘤内科, 福建福州缘园园园员源 ; 源援龙岩市第二医院肿瘤内科, 福建龙岩远源园园园 ) [ 摘摇要 ] 摇目的 : 探讨陨蕴鄄员圆通过诱导肝癌微环境中晕运细胞活化诱导抗肿瘤的效果 方法 : 晕韵阅辕杂悦陨阅小鼠皮下注射肝癌 匀藻责郧圆细胞, 成瘤后腹腔注射人外周血淋巴细胞 ( 责藻则蚤责澡藻则葬造遭造燥燥凿造赠皂责澡燥糟赠贼藻, 孕月蕴 ), 建立匀悦悦鄄澡怎孕月蕴荷瘤小鼠模型 将荷瘤小鼠随机分为陨蕴鄄员圆组和孕月杂对照组, 瘤内注射陨蕴鄄员圆后, 观测荷瘤小鼠瘤体积 体重 一般状况的变化, 陨蕴鄄员圆瘤内注射后第园 天耘蕴陨杂粤法检测荷瘤小鼠肝癌组织微环境中陨蕴鄄员圆 陨晕云鄄 γ 含量以及小鼠外周血中天门冬氨酸氨基转移酶 ( 葬泽责葬则贼葬贼藻葬皂蚤灶鄄燥贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻, 粤杂栽 ) 及谷丙转氨酶 ( 葬造葬灶蚤灶藻葬皂蚤灶燥贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻, 粤蕴栽 ) 的含量, 免疫组化法检测陨蕴鄄员圆治疗后肝癌微环境中晕运细胞活化性受体晕运郧圆阅 晕运责源源 晕运责园 晕运责源远, 以及抑制性受体运陨砸圆阅蕴辕悦阅员缘愿遭 晕运郧圆粤辕悦阅员缘怨葬的表达 结果 : 第员圆 员愿 圆源 园 天陨蕴鄄员圆组荷瘤小鼠瘤体积均小于孕月杂组 [( 缘怨源援源苑依圆园缘援缘员 ) 增泽 ( 愿圆援员园依员愿苑援源怨 ) 皂皂,( 怨远援远员依源圆苑援怨缘 ) 增泽 ( 员缘园援愿苑依源远愿援圆 ) 皂皂,( 员圆愿缘援园圆依远愿援缘远 ) 增泽 ( 员怨苑缘援源怨依远缘缘援缘源 ) 皂皂,( 员怨园援远源依源苑员援源 ) 增泽 ( 圆缘远愿援苑苑依苑愿源援远愿 ) 皂皂, 均孕约园郾园缘 ] 陨蕴鄄员圆组小鼠肝癌组织中陨蕴鄄员圆与陨晕云鄄 γ 的表达水平均明显高于孕月杂组 [( 圆援怨远依员援园圆 ) 增泽 ( 员援缘依园援苑缘 ) 责早辕皂造, ( 员圆援圆远依源援员员 ) 增泽 ( 苑援愿员依援源远 ) 责早辕皂造, 均孕约园援园缘 ] 陨蕴鄄员圆组与孕月杂组相比, 血清粤蕴栽水平第苑天显著升高 [( 苑援愿缘依员园郾苑员 ) 增泽 ( 源员援苑依员郾员 ) 哉辕蕴 ; 孕约园援园缘 ], 第员源天达到高峰 陨蕴鄄员圆组治疗后肝癌组织中晕运细胞活化性受体晕运郧圆阅 晕运责源源 晕运责园的表达较孕月杂组高 ( 孕约园援园缘 ), 晕运责源远的表达未见明显升高 ; 而晕运细胞抑制性受体悦阅员缘愿遭和悦阅员缘怨葬表达较 孕月杂组低 ( 孕约园援园缘 ) 结论 : 肝癌模型小鼠瘤体内陨蕴鄄员圆注射可上调瘤组织内晕运细胞活化性受体 陨蕴鄄员圆 陨云晕鄄 γ 的表达, 下调抑制性受体的表达, 从而抑制小鼠模型中肿瘤的生长 [ 关键词 ] 摇晕运细胞 ; 活化性受体 ; 抑制性受体 ; 陨蕴鄄员圆 ; 陨云晕鄄 γ; 移植性肝癌 [ 中图分类号 ] 摇砸苑缘援苑 ; 砸苑园援摇摇摇摇 [ 文献标志码 ] 摇粤摇摇摇摇 [ 文章编号 ] 摇员园园苑鄄愿缘载 ( 圆园员 ) 园员鄄园园怨鄄园远 陨蕴鄄员圆责造葬赠泽葬灶贼蚤鄄贼怎皂燥则藻枣枣藻糟贼遭赠蚤灶凿怎糟蚤灶早晕运糟藻造造葬糟贼蚤增葬贼蚤燥灶蚤灶澡藻责葬贼蚤糟糟葬则糟蚤灶燥鄄皂葬皂蚤糟则燥藻灶增蚤则燥灶皂藻灶贼 员, 圆源员, 圆员, 员, 圆在澡燥怎在澡蚤枣藻灶早, 允蚤葬灶早允蚤灶澡怎葬, 蕴蚤允蚤藻赠怎, 悦澡藻灶匝蚤葬灶早, 再藻再怎灶遭蚤灶 ( 员援运藻赠蕴葬遭燥则葬贼燥则赠燥枣栽怎皂燥则栽则葬灶泽造葬贼蚤燥灶葬造酝藻凿蚤糟蚤灶藻蚤灶云怎躁蚤葬灶孕则燥增蚤灶糟藻, 云怎扎澡燥怎缘园园员源, 云怎躁蚤葬灶, 悦澡蚤灶葬 ; 圆援蕴葬遭燥则葬贼燥则赠燥枣栽怎皂燥则陨皂皂怎灶燥造燥早赠, 云怎躁蚤葬灶孕则燥增蚤灶糟蚤葬造栽怎皂燥则匀燥泽责蚤贼葬造, 云怎躁蚤葬灶酝藻凿蚤糟葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠, 云怎扎澡燥怎缘园园员源, 云怎躁蚤葬灶, 悦澡蚤灶葬 ; 援阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣酝藻凿蚤糟葬造韵灶糟燥造燥早赠, 哉灶蚤燥灶匀燥泽责蚤贼葬造粤枣枣蚤造蚤葬贼藻凿贼燥云怎躁蚤葬灶酝藻凿蚤糟葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠, 云怎扎澡燥怎缘园园员源, 云怎躁蚤葬灶, 悦澡蚤灶葬 ; 源援阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣酝藻凿蚤糟葬造韵灶糟燥造燥早赠, 杂藻糟燥灶凿匀燥泽责蚤贼葬造燥枣蕴燥灶早赠葬灶悦蚤贼赠, 蕴燥灶早赠葬灶远源园园园, 云怎躁蚤葬灶, 悦澡蚤灶葬 ) [ 粤遭泽贼则葬糟贼 ] 摇韵遭躁藻糟贼蚤增藻 : 栽燥藻曾责造燥则藻贼澡藻藻灶澡葬灶糟藻凿葬灶贼蚤鄄贼怎皂燥则藻枣枣藻糟贼燥枣陨蕴鄄员圆贼澡则燥怎早澡蚤灶凿怎糟蚤灶早晕运糟藻造造葬糟贼蚤增蚤贼蚤燥灶蚤灶澡藻责葬贼蚤糟糟葬则糟蚤灶燥皂葬皂蚤糟则燥藻灶增蚤则燥皂藻灶贼援酝藻贼澡燥凿泽 : 栽澡藻澡藻责葬贼蚤糟糟葬糟蚤灶燥皂葬匀藻责郧圆糟藻造造泽憎藻则藻泽怎遭糟怎贼葬灶藻燥怎泽造赠蚤灶躁藻糟贼藻凿蚤灶贼燥晕韵阅辕杂悦陨阅皂蚤糟藻, 葬灶凿澡怎皂葬灶责藻则蚤责澡藻则葬造遭造燥燥凿造赠皂责澡燥糟赠贼藻泽 ( 孕月蕴 ) 憎藻则藻蚤灶贼则燥责藻则蚤贼燥灶藻葬造造赠蚤灶躁藻糟贼藻凿葬枣贼藻则贼怎皂燥则枣燥则皂葬贼蚤燥灶贼燥藻泽贼葬遭造蚤泽澡匀悦悦鄄澡怎孕月蕴贼怎皂燥则鄄遭藻葬则蚤灶早皂燥怎泽藻皂燥凿藻造援栽澡藻贼怎皂燥则鄄遭藻葬则蚤灶早皂蚤糟藻憎藻则藻则葬灶凿燥皂蚤扎藻凿蚤灶贼燥陨蕴鄄员圆早则燥怎责葬灶凿孕月杂糟燥灶贼则燥造早则燥怎责援酝蚤糟藻憎藻则藻蚤灶贼则葬贼怎皂燥则葬造蚤灶躁藻糟贼藻凿憎蚤贼澡陨蕴鄄员圆, 葬灶凿贼澡藻糟澡葬灶早藻泽燥枣贼怎皂燥则增燥造怎皂藻葬灶凿遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼葬泽憎藻造造葬泽早藻灶藻则葬造糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽燥枣贼怎皂燥则鄄遭藻葬则蚤灶早皂蚤糟藻憎藻则藻燥遭泽藻则增藻凿援耘蕴陨杂粤葬泽泽葬赠憎葬泽责藻则枣燥则皂藻凿贼燥藻曾葬皂蚤灶藻贼澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶造藻增藻造泽燥枣 [ 基金项目 ] 摇福建省卫生厅青年科研基金项目 ( 晕燥援圆园园怨鄄圆鄄园 ); 福建省科技厅重点项目 ( 晕燥援圆园园愿陨园园员圆 ) 孕则燥躁藻糟贼泽怎责责燥则贼藻凿遭赠贼澡藻杂糟蚤藻灶糟藻孕则燥躁藻糟贼枣燥则再燥怎灶早杂糟澡燥造葬则泽枣则燥皂匀藻葬造贼澡月怎则藻葬怎燥枣云怎躁蚤葬灶孕则燥增蚤灶糟藻 ( 晕燥援圆园园怨鄄圆鄄园 ), 葬灶凿贼澡藻运藻赠孕则燥躁藻糟贼燥枣杂糟蚤藻灶糟藻葬灶凿栽藻糟澡灶燥造燥早赠月怎则藻葬怎燥枣云怎躁蚤葬灶孕则燥增蚤灶糟藻 ( 晕燥援圆园园愿陨园园员圆 ) [ 作者简介 ] 摇周智锋 ( 员怨苑苑原 ), 男, 福建省莆田市人, 硕士, 主治医师, 主要从事肿瘤免疫学方面的研究 耘鄄皂葬蚤造 : 扎扎枣圆园园源员圆岳择择援糟燥皂 [ 通信作者 ] 摇叶韵斌 ( 再藻再怎灶遭蚤灶, 糟燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早葬怎贼澡燥则 ), 耘鄄皂葬蚤造 : 扎躁赠怎灶遭蚤灶岳员愿怨援糟灶

2 怨源 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员年圆月, 圆园 ( 员 ) 陨蕴鄄员圆葬灶凿陨晕云鄄 γ 蚤灶贼澡藻皂蚤糟则燥藻灶增蚤则燥灶皂藻灶贼燥枣澡藻责葬贼蚤糟糟葬则糟蚤灶燥皂葬贼蚤泽泽怎藻泽蚤灶贼怎皂燥则鄄遭藻葬则蚤灶早皂蚤糟藻, 葬灶凿贼澡藻葬泽责葬则贼葬贼藻葬皂蚤灶燥贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻 ( 粤杂栽 ) 葬灶凿葬造葬灶蚤灶藻葬皂蚤灶燥贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻 ( 粤蕴栽 ) 造藻增藻造泽蚤灶责藻则蚤责澡藻则葬造遭造燥燥凿燥枣皂蚤糟藻园凿葬赠泽葬枣贼藻则陨蕴鄄员圆蚤灶贼则葬鄄贼怎皂燥则葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶援陨皂皂怎灶燥澡蚤泽贼燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠葬泽泽葬赠憎葬泽怎泽藻凿贼燥葬灶葬造赠扎藻贼澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶泽燥枣晕运鄄葬糟贼蚤增葬贼蚤灶早则藻糟藻责贼燥则泽 : 晕运郧圆阅, 晕运责源源, 晕运责园, 晕运责源远, 葬灶凿蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则赠晕运则藻糟藻责贼燥则泽 : 运陨砸圆阅蕴辕悦阅员缘愿遭葬灶凿晕运郧圆粤辕悦阅员缘怨葬蚤灶澡藻责葬贼蚤糟糟葬则糟蚤灶燥皂葬皂蚤糟则燥藻灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬枣贼藻则陨蕴鄄员圆贼则藻葬贼皂藻灶贼援砸藻泽怎造贼泽 : 韵灶凿葬赠员圆, 员愿, 圆源葬灶凿园, 贼澡藻贼怎皂燥则增燥造怎皂藻泽憎藻则藻泽皂葬造造藻则蚤灶贼澡藻陨蕴鄄员圆早则燥怎责贼澡葬灶贼澡燥泽藻蚤灶贼澡藻孕月杂早则燥怎责 ([ 缘怨源援源苑依圆园缘援缘员 ] 增泽 [ 愿圆援员园依员愿苑援源怨 ] 皂皂,[ 怨远援远员依源圆苑援怨缘 ] 增泽 [ 员缘园郾愿苑依源远愿援圆 ] 皂皂,[ 员圆愿缘援园圆依远愿援缘远 ] 增泽 [ 员怨苑缘援源怨依远缘缘援缘源 ] 皂皂,[ 员怨园援远源依源苑员援源 ] 增泽 [ 圆缘远愿援苑苑依苑愿源援远愿 ] 皂皂, 孕约园援园缘 ) 援栽澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶造藻增藻造泽燥枣陨蕴鄄员圆葬灶凿陨云晕鄄 γ 蚤灶贼澡藻陨蕴鄄员圆早则燥怎责憎藻则藻泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠澡蚤早澡藻则贼澡葬灶贼澡燥泽藻蚤灶贼澡藻孕月杂早则燥怎责 ([ 圆援怨远依员援园圆 ] 增泽 [ 员援缘依园援苑缘 ] 责早辕皂造,[ 员圆援圆远依源援员员 ] 增泽 [ 苑援愿员依援源远 ] 责早辕皂造, 孕约园郾园缘 ) 援栽澡藻泽藻则怎皂粤蕴栽造藻增藻造泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠蚤灶糟则藻葬泽藻凿蚤灶贼澡藻陨蕴鄄员圆早则燥怎责糟燥皂责葬则藻凿贼燥贼澡藻孕月杂早则燥怎责燥灶凿葬赠苑 ([ 苑郾愿缘依员园援苑员 ] 增泽 [ 源员援苑依员援员 ] 哉辕蕴, 孕约园援园缘 ), 葬灶凿则藻葬糟澡藻凿葬责藻葬噪葬贼凿葬赠员源援栽澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶泽燥枣晕运鄄葬糟贼蚤增葬鄄贼蚤灶早则藻糟藻责贼燥则泽晕运郧圆阅, 晕运责源源葬灶凿晕运责园憎藻则藻泽贼葬贼蚤泽贼蚤糟葬造造赠澡蚤早澡藻则蚤灶贼澡藻陨蕴鄄员圆早则燥怎责贼澡葬灶贼澡燥泽藻蚤灶贼澡藻孕月杂早则燥怎责 ( 孕约园郾园缘 ), 贼澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶造藻增藻造燥枣晕运责源远泽澡燥憎藻凿灶燥泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼怎责鄄则藻早怎造葬贼蚤燥灶, 憎澡蚤造藻贼澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶造藻增藻造泽燥枣晕运蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则赠则藻鄄糟藻责贼燥则泽悦阅员缘愿遭葬灶凿悦阅员缘怨葬憎藻则藻凿藻糟则藻葬泽藻凿糟燥皂责葬则藻凿贼燥贼澡藻孕月杂早则燥怎责 ( 孕约园援园缘 ) 援悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶 : 陨蕴鄄员圆蚤灶贼则葬贼怎皂燥则葬造蚤灶鄄躁藻糟贼蚤燥灶糟葬灶怎责鄄则藻早怎造葬贼藻贼澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶泽燥枣晕运鄄葬糟贼蚤增葬贼蚤灶早则藻糟藻责贼燥则泽, 陨蕴鄄员圆葬灶凿陨云晕鄄 γ, 葬灶凿凿燥憎灶鄄则藻早怎造葬贼藻贼澡藻晕运蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则赠则藻糟藻责贼燥则泽蚤灶贼澡藻澡藻责葬贼蚤糟糟葬则糟蚤灶燥皂葬皂燥怎泽藻皂燥凿藻造, 贼澡藻则藻枣燥则藻藻枣枣藻糟贼蚤增藻造赠蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤灶早贼澡藻贼怎皂燥则早则燥憎贼澡蚤灶皂燥怎泽藻皂燥凿藻造援 [ 运藻赠憎燥则凿泽 ] 摇晕运糟藻造造 ; 葬糟贼蚤增葬贼燥则赠则藻糟藻责贼燥则 ; 蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则赠则藻糟藻责贼燥则 ; 陨蕴鄄员圆 ; 陨云晕鄄 γ; 贼则葬灶泽责造葬灶贼藻凿澡藻责葬贼蚤糟糟葬则糟蚤灶燥皂葬 [ 悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则, 圆园员, 圆园 ( 员 ): 怨鄄怨愿 ] 摇摇 摇摇原发性肝癌是常见恶性肿瘤之一, 其病死率居我国恶性肿瘤第圆位 尽管针对原发性肝癌的局部治疗取得到了较快的发展, 但治疗效果仍不显著 近年来, 生物治疗已成为继手术 放疗 化疗后肿瘤治疗的第源种模式, 并显示出了良好的应用前景 陨蕴鄄员圆是一种多功能的细胞因子, 主要介导细胞免疫, 在诱导辅助性栽细胞亚群员 ( 栽鄄澡藻造责藻则糟藻造造员, 栽澡员 ) 型细胞的分化中发挥重要调节作用, 通过促进 陨云晕鄄 γ 的分泌使晕运细胞 栽细胞大量增殖并增强其细胞毒性, 并能单独诱导其他细胞因子生成, 从而发挥强大的生物学功能, 在炎症及抗肿瘤免疫中扮演 [ 员着重要的角色 ] 陨蕴鄄员圆自被发现之时起, 就因其对 晕运细胞 栽细胞的刺激作用, 而受到广泛重视 陨蕴鄄员圆全身用药后不良反应较大, 如发热 胃肠道反 [ 圆应, 淋巴细胞减少及肝功能异常等 ], 一定程度上限制了它的应用, 因此陨蕴鄄员圆局部用药已成为近年来的研究热点 但陨蕴鄄员圆局部用药对肿瘤微环境中 晕运细胞的作用机制尚不清楚 本课题通过人肝癌小鼠匀悦悦鄄澡怎鄄孕月蕴鄄晕韵阅辕杂悦陨阅模型瘤内注射陨蕴鄄员圆, 探究陨蕴鄄员圆对肝癌微环境中晕运细胞的生物学作用, 为肝癌免疫治疗提供实验依据 员摇 员援员摇 材料与方法 细胞株及主要试剂 人肝细胞癌细胞株匀藻责郧圆为本科室常规冻存 栽酝酝葬贼则蚤早藻造酝葬贼则蚤曾月葬泽藻皂藻灶贼酝藻皂遭则葬灶糟藻购于月阅月蚤燥鄄 泽糟蚤藻灶糟藻泽公司, 阅酝耘酝培养基购于美国陨灶增蚤贼则燥早藻灶公司, 胎牛血清购于美国陨灶增蚤贼则燥早藻灶公司, 阅酝杂韵购于美国杂蚤早皂葬公司, 郧栽鄄栽缘缘员培养液购于栽粤运粤砸粤月陨韵公司, 陨蕴鄄员圆购于孕藻责则燥栽藻糟澡公司, 鼠抗人 晕运郧圆阅 晕运责园 晕运责源源 晕运责源远 悦阅员缘愿遭 悦阅员缘怨葬多克隆抗体购自粤遭糟葬皂公司, 即用型免疫组化超敏 哉造贼则葬泽藻灶泽蚤贼蚤增藻杂鄄孕 ( 鼠辕兔 ) 试剂盒 柠檬酸盐抗原修复液 阅粤月显色试剂盒购于迈新公司, 耘蕴陨杂粤检测 陨云晕鄄 γ 试剂盒 小鼠粤杂栽及粤蕴栽购于砸驭阅公司 员援圆摇 匀悦悦鄄澡怎鄄孕月蕴鄄晕韵阅辕杂悦陨阅小鼠模型的建立 源园只晕韵阅辕杂悦陨阅雌性小鼠购于上海斯莱克实验动物有限公司 [ 实验动物合格证为号 : 杂悦载运 ( 沪 ) 圆园园苑原园园园缘 ] 小鼠饲养于福建医科大学实验动物中心, 严格按照杂孕云级标准要求进行饲养 取对数生长期的匀藻责郧圆细胞, 胰酶消化至细胞悬液 ; 在源益条件下将细胞悬液与酝葬贼则蚤早藻造基质胶按员颐员比例混合, 使愿细胞悬液密度达到员伊员园辕皂造, 在源益冰盒中保存 运输, 于员澡内注射 选取源耀耀耀耀耀耀耀耀远周龄, 体重员愿耀耀耀耀耀耀耀耀圆园早的 晕韵阅辕杂悦陨阅雌性小鼠, 对小鼠右侧腋下皮肤进行消毒, 用带圆圆郧针头的员皂造注射器抽取细胞悬液, 自右侧肋部腋前线沿冠状面方向进针至皮下, 缓慢转动针头, 使其方向朝向右腋下, 缓慢将细胞悬液注射至小鼠右侧腋部皮下, 每只小鼠注射员园园 μ 造, 即每只小鼠苑注射匀藻责郧圆细胞数量为员伊员园个 ; 圆周后瘤块体积长至约园园皂皂 瘤块体积的测量方法: 分别量取瘤块最大径 ( 葬皂皂 ) 和与其垂直的短径遭 ( 皂皂 ), 按公式

3 周智锋, 等援陨蕴鄄员圆诱导肝癌微环境中晕运细胞活化发挥抗肿瘤作用 怨缘 圆灾 ( 皂皂 ) 越葬伊遭伊员辕圆进行计算 抽取健康人外周血, 肝素抗凝, 加入等体积的人淋巴细胞分离液和稀释后的外周血, 远园园伊早离心圆园皂蚤灶, 用吸管小心吸出淋巴细胞层, 孕月杂洗涤, 缘园园伊早 离心远皂蚤灶圆次, 郧栽鄄栽缘缘员培养液重悬淋巴细胞, 调苑整细胞密度至圆伊员园辕皂造 ; 注射器抽取细胞悬液, 用 圆圆郧针头将淋巴细胞悬液注射于晕韵阅辕杂悦陨阅小鼠腹腔, 每只小鼠注射员皂造 员援摇 肝癌模型小鼠瘤体组织内注射陨蕴鄄员圆 将建立好的匀悦悦鄄澡怎鄄孕月蕴鄄晕韵阅辕杂悦陨阅小鼠模型随机分为圆组, 实验组在第员 源 苑天分别进行瘤体组织内注射陨蕴鄄员圆, 每次注射总量为员园园 μ ( 造员 μ 早辕 μ 造 ); 对照组同样条件注射无菌孕月杂液, 每次注射量员园园 μ 造 员援源摇耘蕴陨杂粤法检测肿瘤微环境陨蕴鄄员圆 陨晕云鄄 γ 及外周血粤蕴栽 粤杂栽含量 第员 苑 员源 圆员天截尾取小鼠外周血, 在第圆愿天摘眼球取外周血, 用于粤蕴栽 粤杂栽水平检测 ; 第圆愿天颈椎脱臼处死小鼠, 苑缘豫酒精浸泡小鼠缘皂蚤灶, 无菌条件下剥离瘤块, 制成细胞悬液, 离心后取上清检测 陨蕴鄄员圆 陨晕云鄄 γ 耘蕴陨杂粤法步骤为设置标准品孔和样本孔, 标准品孔各加不同浓度的标准品缘园 μ 造 ; 样本孔先加待测样本员园 μ 造, 再加样本稀释液源园 μ 造 ; 设空白对照 除空白对照外, 标准品孔和样本孔中每孔加入 匀砸孕标记的检测抗体员园园 μ 造, 用封板膜封住反应孔, 苑益孵育远园皂蚤灶 弃去液体, 吸水纸上拍干, 每孔加满洗涤液, 静置员皂蚤灶, 甩去洗涤液, 吸水纸上拍干, 重复洗板缘次, 每孔加入底物粤 月各缘园 μ 造, 苑益避光孵育员缘皂蚤灶 每孔加入终止液缘园 μ 造, 员缘皂蚤灶内在 源缘园灶皂波长处测定各孔的阅值 员援缘摇免疫组化法检测肝癌微环境中晕运细胞受体的表达 肝癌组织切片脱蜡 水化, 自来水冲洗, 柠檬酸抗原修复液高温高压抗原修复, 滴加缘园 μ 造过氧化物酶阻断剂 ( 试剂粤 ), 室温下孵育员园皂蚤灶, 孕月杂冲洗, 弃去孕月杂, 滴加正常非免疫动物血清 ( 试剂月 ) 缘园 μ 造, 室温下孵育员园皂蚤灶, 孕月杂冲洗, 弃去血清, 滴加员颐员园园的晕运郧圆阅 悦阅员缘怨葬 悦阅员缘愿遭 晕运责园 晕运责源源 晕运责源远第一抗体, 室温下孵育远园皂蚤灶, 孕月杂 冲洗, 弃去孕月杂, 滴加生物素标记的第二抗体 ( 试剂 悦 ) 缘园 μ 造, 室温下孵育员园皂蚤灶 ; 孕月杂冲洗, 弃去孕月杂, 滴加链霉素抗生物素蛋白 过氧化物酶试剂 ( 试剂 阅 ) 缘园 μ 造, 室温孵育员园皂蚤灶, 孕月杂冲洗, 弃去孕月杂, 滴加新鲜配制的阅粤月显色试剂, 在显微镜下观察显色效果, 自来水冲洗终止显色, 苏木精复染, 孕月杂冲洗, 酒精脱水, 中性树胶封固 每批染色均用孕月杂代替一抗作空白对照, 正常羊血清代替一抗作阴性对照 结果判断 : 细胞核和 ( 或 ) 细胞质出现黄色 棕黄色或棕褐色颗粒者为阳性细胞 免疫组化阳性细胞判定标准, 参照杂怎造扎藻则泽分级法, 即阳性反应强度的分级兼顾染色深浅和阳性细胞所占百分比 :( 员 ) 着色强度分为源级 : 无阳性着色, 园分 ; 可见浅黄色阳性颗粒, 员分 ; 可见棕黄色阳性颗粒, 圆分 ; 可见棕褐色阳性颗粒, 分 ( 圆 ) 阳性细胞数分源级 : 查缘个高倍视野, 计算员园园个细胞中的阳性百分率, 并求出平均值 无阳性细胞着色, 园分 ; 阳性细胞数约圆缘豫, 员分 ; 阳性细胞数占圆缘豫耀耀耀耀耀耀耀耀缘园豫, 圆分 ; 阳性细胞数跃缘园豫, 分 免疫组化阳性细胞判定标准为 ( 员 ) ( 圆 ) 之和, 园分为阴性 ( 原 ), 员耀耀耀耀耀耀耀耀圆分为阳性 ( 垣 ), 耀耀耀耀耀耀耀耀远分为中度阳性 ( ), 苑耀耀耀耀耀耀耀耀怨分为强阳性 ( ) 员援远摇 统计学处理 采用杂孕杂杂员苑援园统计学软件, 计量资料以珋曾依泽 表示, 进行贼检验 ; 等级资料进行秩和检验, 所有统计均采用双侧分析, 孕约园援园缘或孕约园援园员表示差异具有统计学意义 圆摇结摇果 圆援员摇 肝癌模型小鼠的一般情况 肝癌肿瘤内注射陨蕴鄄员圆或孕月杂后观察发现, 圆组小鼠精神状态均较好, 饮食正常, 毛色有光泽 陨蕴鄄员圆 组员缘豫 ( 辕圆园 ) 的小鼠瘤内注射陨蕴鄄员圆后约圆凿会出现大便稀软的现象, 在注射后约第远天完全消失, 孕月杂 组小鼠大便未出现异常 每隔圆耀耀耀耀耀耀耀耀凿对皮下瘤块进行测量, 结果 ( 图员 ) 显示, 第员圆 员愿 圆源 园天陨蕴鄄员圆组小鼠瘤体积均小于孕月杂组 [( 缘怨源援源苑依圆园缘郾缘员 ) 增泽 ( 愿圆援员园依员愿苑援源怨 ) 皂皂,( 怨远郾远员依源圆苑援怨缘 ) 增泽 ( 员缘园援愿苑依源远愿郾圆 ) 皂皂,( 员圆愿缘援园圆依远愿援缘远 ) 增泽 ( 员怨苑缘援源怨依远缘缘援缘源 ) 皂皂,( 员怨园援远源依源苑员郾源 ) 增泽 ( 圆缘远愿援苑苑依苑愿源援远愿 ) 皂皂 ; 孕约园郾园缘 ] 圆援圆摇 陨蕴鄄员圆治疗后肝癌组织中陨蕴鄄员圆 陨云晕鄄 γ 的表达 肝癌肿瘤内注射陨蕴鄄员圆后第园天处死小鼠, 取出瘤块后检测肿瘤组织中陨蕴鄄员圆 陨云晕鄄 γ 的表达, 结果 ( 图圆 ) 显示 : 陨蕴鄄员圆组小鼠瘤组织上清液中陨蕴鄄员圆 陨云晕鄄 γ 的表达水平明显高于孕月杂对照组 [( 圆援怨远依员郾园圆 ) 增泽 ( 员援缘依园援苑缘 ) 责早辕皂造, 孕约园援园缘 ;( 员圆援圆远依源援员员 ) 增泽 ( 苑援愿员依援源远 ) 责早辕皂造, 孕约园援园缘 ] 圆援摇 陨蕴鄄员圆瘤内注射对小鼠肝功能的影响 耘蕴陨杂粤法检测小鼠外周血中粤蕴栽 粤杂栽的含量 结果 ( 图 ) 显示, 瘤内注射陨蕴鄄员圆及孕月杂后, 第员天及第圆愿天, 陨蕴鄄员圆组与孕月杂组相比, 小鼠外周血粤蕴栽 的含量差异无统计学意义 ( 孕跃园援园缘 ) 与孕月杂组同期对照相比, 陨蕴鄄员圆组小鼠外周血粤蕴栽水平第苑天

4 怨远 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员年圆月, 圆园 ( 员 ) 出现上升 [( 苑郾愿缘依员园援苑员 ) 增泽 ( 源员援苑依员援员 ) 哉辕蕴 ; 孕约园郾园缘 ], 并在第员源天达到高峰, 随后粤蕴栽 水平逐渐恢复正常 图员摇荷瘤小鼠瘤内注射陨蕴鄄员圆后瘤块体积的变化云蚤早援员摇悦澡葬灶早藻泽燥枣贼怎皂燥则增燥造怎皂藻葬枣贼藻则陨蕴鄄员圆蚤灶贼则葬贼怎皂燥则葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶蚤灶贼怎皂燥则鄄遭藻葬则蚤灶早皂蚤糟藻 孕约园援园缘增泽孕月杂早则燥怎责图圆摇小鼠肿瘤组织中陨蕴鄄员圆 陨云晕鄄 γ 的表达云蚤早援圆摇耘曾责则藻泽泽蚤燥灶泽燥枣陨蕴鄄员圆葬灶凿陨云晕鄄 γ 蚤灶皂燥怎泽藻贼怎皂燥则贼蚤泽泽怎藻泽 孕约园援园缘增泽孕月杂早则燥怎责 图摇陨蕴鄄员圆瘤内注射对小鼠外周血粤蕴栽 粤杂栽水平的影响云蚤早援摇耘枣枣藻糟贼燥枣陨蕴鄄员圆蚤灶贼则葬贼怎皂燥则葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶燥灶粤蕴栽葬灶凿粤杂栽造藻增藻造泽蚤灶皂燥怎泽藻责藻则蚤责澡藻则葬造遭造燥燥凿 孕约园援园缘, 孕约园援园员增泽粤蕴栽 ( 孕月杂 ) 早则燥怎责圆援源摇瘤内注射陨蕴鄄员圆后肝癌组织中晕运细胞受体的表达荷瘤小鼠瘤内分别注射陨蕴鄄员圆和孕月杂, 免疫组化法检测肝癌组织微环境中晕运细胞活化性受体晕运郧圆阅 晕运责源源 晕运责园 晕运责源远及抑制性受体悦阅员缘愿遭 悦阅员缘怨葬的表达 孕月杂组晕运细胞活化性受体晕运郧圆阅 晕运责源源及晕运责园阳性细胞较少, 颜色较淡, 陨蕴鄄员圆组治疗后晕运细胞活化性受体晕运郧圆阅 晕运责源源 晕运责园的细胞较治疗前增多, 颜色较深, 即阳性反应强度较治疗前增高 ( 孕约园郾园缘 ), 但活化性受体晕运责源远的阳性反应强度未见明显变化 ( 孕跃园郾园缘 ) 孕月杂组抑制性受体悦阅员缘愿遭及悦阅员缘怨葬阳性细胞较多, 颜色较深 ; 陨蕴鄄员圆组晕运细胞抑制性受体悦阅员缘愿遭 悦阅员缘怨葬阳性反应强度较治疗前降低 ( 孕约园援园缘 ), 颜色较淡 ( 表员, 图源 ) 表员摇荷瘤小鼠瘤内注射陨蕴鄄员圆后晕运细胞受体的表达 ( 灶 ) 栽葬遭援员摇耘曾责则藻泽泽蚤燥灶泽燥枣晕运糟藻造造则藻糟藻责贼燥则泽蚤灶贼怎皂燥则鄄遭藻葬则蚤灶早皂蚤糟藻葬枣贼藻则陨蕴鄄员圆蚤灶贼则葬贼怎皂燥则葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶 ( 灶 ) 郧则燥怎责 晕运郧圆阅 晕运责园 晕运责源源 晕运责源远 悦阅员缘愿遭 悦阅员缘怨葬 孕月杂远源园苑圆员苑园愿圆园缘源员苑园 陨蕴鄄员圆圆缘员苑圆员缘源源源圆员远源 孕约园援园缘约园援园缘约园援园缘跃园援园缘约园援园缘约园援园缘 摇讨摇论 陨蕴鄄员圆是很强的促进晕运细胞毒性作用的细胞 因子, 不到员责皂燥造辕蕴的陨蕴鄄员圆就能明显增强晕运细胞杀伤活性, 而陨蕴鄄圆和陨云晕鄄 γ 要达到同样效果则至 [ 少需要倍以上的浓度 ] 陨蕴鄄员圆可直接上调晕运

5 周智锋, 等援陨蕴鄄员圆诱导肝癌微环境中晕运细胞活化发挥抗肿瘤作用 怨苑 细胞表面悦阅圆 悦阅员员葬 悦阅缘远等黏附分子的表达, 从 [ 源而增强晕运细胞的杀伤活性 ] [ 缘 ] 临床研究表明, 使用陨蕴鄄员圆治疗可以活化和扩增肿瘤患者外周血的 晕运细胞, 产生抗瘤效应, 在与陨蕴鄄员圆共培养员圆澡后, 可诱使晕运细胞分泌大量的陨云晕鄄 γ 栽晕云鄄 α 和郧酝鄄悦杂云, 而与陨蕴鄄源共培养的晕运细胞则不分泌这些细胞因子 值得一提的是, 与陨蕴鄄员圆共培养的晕运细胞具有诱导不成熟阅悦分化为成熟阅悦的作用, 后者可 [ 远以与晕运细胞一起发挥协同性抗肿瘤效应 ] 与其 [ 圆他生物试剂一样, 陨蕴鄄员圆全身用药不良反应较大 ], 所以本研究选择陨蕴鄄员圆瘤内直接注射 图源摇 肝癌组织内注射陨蕴鄄员圆后 晕运细胞受体的表达 ( 伊源园园 ) 云蚤早援源摇耘曾责则藻泽泽蚤燥灶泽燥枣晕运糟藻造造则藻糟藻责贼燥则泽蚤灶澡藻责葬贼蚤糟糟葬则糟蚤灶燥皂葬贼蚤泽泽怎藻泽葬枣贼藻则蚤灶贼则葬贼怎皂燥则葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶燥枣陨蕴鄄员圆 ( 伊源园园 ) 摇摇本实验通过荷瘤匀悦悦鄄澡怎鄄孕月蕴鄄晕韵阅辕杂悦陨阅小鼠瘤内注射陨蕴鄄员圆和孕月杂, 结果显示, 陨蕴鄄员圆组瘤体积第 员圆天明显小于孕月杂组, 但陨蕴鄄员圆组员缘豫 ( 辕圆园 ) 荷瘤小鼠注射陨蕴鄄员圆后第圆天出现腹泻, 孕月杂组未见明显不良反应 瘤内注射陨蕴鄄员圆后荷瘤小鼠外周血粤蕴栽 逐渐上升 ( 孕约园援园缘 ), 但随后恢复正常 说明虽然瘤内直接注射陨蕴鄄员圆能达到治疗目的, 仍有一定不良反应, 但随后逐渐恢复正常 同时本研究结果显示, 陨蕴鄄员圆瘤内注射能上调肿瘤微环境中晕运细胞 陨云晕鄄 γ 的合成和分泌, 且陨蕴鄄员圆组中荷瘤小鼠瘤体积较小, 因此陨蕴鄄员圆对肿瘤生长起一定抑制作用 正常情况下, 晕运细胞识别自体细胞表面的 酝匀悦 Ⅰ 类分子, 抑制性受体在信号传导平衡中占主 [ 苑导地位 ], 因而不杀伤自体细胞 但肿瘤细胞和病毒感染细胞异常表达酝匀悦 Ⅰ 类分子, 导致相应的 活化性受体作用占主导, 促进晕运细胞活化, 释放细 [ 愿胞因子, 发挥细胞毒作用 ] 抑制性受体悦阅员缘怨葬 不仅向晕运细胞传递抑制信号, 而且可封闭悦阅员远触发的杂赠运和胞外调节激酶耘孕运的活化信号通路, 抑 [ 怨制晕运细胞的细胞毒活性 ] 晕运细胞表面的活化性受体包括天然细胞毒受体 ( 灶葬贼怎则葬造糟赠贼燥贼燥曾蚤糟蚤贼赠则藻鄄糟藻责贼燥则, 晕悦砸 ): 晕运责园 晕运责源源 晕运责源远 晕运郧圆阅 运陨砸圆阅杂及其辅助刺激活化性受体等 [ 员园鄄员员 ] 晕运责源远 是第一个被识别的晕悦砸, 它选择性表达于所有静息 [ 员圆和活化的晕运细胞 ] ; 晕运责园选择性表达于部分静 [ 员息和活化的晕运细胞 ] [ 员源 ] ; 晕运责源源与晕运责源远及 晕运责园不同, 它只表达在激活的晕运细胞表面, 它们在细胞表面的表达程度与晕运细胞功能的发挥密切相关 已经证实, 晕运郧圆阅和晕悦砸在介导的晕运细胞毒作用中起协同作用 然而, 对表面表达低密度 晕悦砸的晕运细胞 ( 晕悦砸凿怎造造型 ) 来说, 晕运郧圆阅介导的 [ 员缘对肿瘤细胞的杀伤作用已经得到证实 ] 目前陨蕴鄄员圆作用于晕运细胞治疗肝癌, 其研究主要在于晕运细胞数量 杀伤及分泌陨云晕鄄 γ 水平等方 [ 员远面 ], 然而晕运细胞发挥杀伤作用是通过其表面活 [ 员苑化性受体与抑制性受体综合作用的结果 ] 在澡葬灶早 [ 员愿 ] 等进行体外实验表明, 陨蕴鄄员圆能上调晕运郧圆阅和穿孔素的表达以提高晕运细胞的细胞毒作用 本课题以动物体内实验检测人肝癌荷瘤小鼠肿瘤微环境中 晕运细胞受体治疗前后变化, 结果显示, 经陨蕴鄄员圆瘤内注射后, 表达活化性受体晕运郧圆阅 晕运责园和 晕运责源源的晕运细胞增多, 颜色深染, 表明这些晕运细胞在陨蕴鄄员圆作用下, 活化性受体被进一步上调, 进而提高晕运细胞杀伤肿瘤细胞 然而活化性受体 晕运责源远治疗前后表达量无明显差异, 究其原因可能是由于晕运责源远表达于所有休止期和活化的晕运细胞, 所以即使陨蕴鄄员圆刺激休止期晕运细胞成为活化 晕运细胞, 但总量是不变的 同时表达抑制性受体 悦阅员缘愿及悦阅员缘怨葬的晕运细胞数量减少, 而且颜色淡浅, 表示抑制性受体被抑制 当陨蕴鄄员圆瘤内注射后, 活化性受体表达升高, 同时抑制性受体的表达降低, 活化性受体辕抑制性受体的比例升高, 导致晕运细胞抗肿瘤作用增强 肿瘤微环境中晕运细胞在杀伤肿瘤细胞的同时 [ 员怨和肿瘤细胞之间发生了相互免疫编辑作用 ], 晕运 细胞受肿瘤细胞的编辑作用导致其细胞表面晕运细胞活化性受体表达下降, 抑制性受体表达增强, 使得 晕运细胞的抗肿瘤效应减弱 采取措施阻断晕运细胞的抑制性信号通路或增强活化性信号通路是提高 [ 圆园 ] 晕运细胞抗肿瘤效应的主要手段 有研究发现,

6 怨愿 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员年圆月, 圆园 ( 员 ) 头颈部鳞状细胞癌患者, 术前给予则澡造蕴鄄员圆 ( 员园园耀耀耀耀耀耀耀耀 园园灶早辕噪早 ) 瘤内注射, 可显著增加肿瘤组织中 垣悦阅缘远晕运细胞的数量, 而且患者生存率提高与大量 陨云晕鄄 γ 的产生密切相关 本课题采用陨蕴鄄员圆肝癌模型小鼠瘤内直接注射, 使得肿瘤微环境晕运细胞活化性受体上调, 同时抑制性受体下调, 陨蕴鄄员圆及 陨云晕鄄 γ 的合成和分泌明显增加, 从而对肿瘤生长起到明显抑制作用 [ 参考文献 ] [ 员 ] 摇运藻则噪葬则杂孕, 砸藻泽贼蚤枣燥晕孕援栽澡藻责燥憎藻则葬灶凿责蚤贼枣葬造造泽燥枣陨蕴鄄员圆 [ 允 ] 援月造燥燥凿, 圆园员圆, 员员怨 ( 员愿 ): 源园怨远鄄源园怨苑援 [ 圆 ] 摇孕燥则贼蚤藻造躁藻允耘, 运则怎蚤贼宰匀, 杂糟澡怎造藻则酝, 藻贼葬造援孕澡葬泽藻陨泽贼怎凿赠燥枣泽怎遭糟怎鄄贼葬灶藻燥怎泽造赠葬凿皂蚤灶蚤泽贼藻则藻凿则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼澡怎皂葬灶蚤灶贼藻则造藻怎噪蚤灶鄄员圆蚤灶责葬鄄贼蚤藻灶贼泽憎蚤贼澡葬凿增葬灶糟藻凿则藻灶葬造糟藻造造糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援悦造蚤灶悦葬灶糟藻则砸藻泽, 员怨怨怨, 缘 ( 员圆 ): 怨愿鄄怨愿怨援 [ ] 摇云怎载, 蕴蚤怎再, 蕴蚤蕴, 藻贼葬造援匀怎皂葬灶灶葬贼怎则葬造噪蚤造造藻则糟藻造造泽藻曾责则藻泽泽蚤灶早贼澡藻皂藻皂燥则赠鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿皂葬则噪藻则悦阅源缘砸韵枣则燥皂贼怎遭藻则糟怎造燥怎泽责造藻怎则蚤泽赠鄄则藻泽责燥灶凿皂燥则藻泽贼则燥灶早造赠葬灶凿则葬责蚤凿造赠贼澡葬灶悦阅源缘砸韵灶葬贼怎则葬造噪蚤造造藻则糟藻造造泽枣燥造造燥憎蚤灶早泽贼蚤皂怎造葬贼蚤燥灶憎蚤贼澡蚤灶贼藻则造藻怎噪蚤灶鄄员圆 [ 允 ] 援陨皂皂怎灶燥造燥早赠, 圆园员员, 员源 ( 员 ): 源员鄄源怨援 [ 源 ] 摇阅燥憎藻造造粤悦, 韵造凿澡葬皂运粤, 月澡葬贼贼砸陨, 藻贼葬造援蕴燥灶早鄄贼藻则皂责则燥造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶燥枣枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造澡怎皂葬灶晕运糟藻造造泽, 憎蚤贼澡糟燥灶增藻则泽蚤燥灶燥枣悦阅缘远 ( 凿蚤皂 ) 晕运糟藻造造泽贼燥葬悦阅缘远 ( 遭则蚤早澡贼 ) 责澡藻灶燥贼赠责藻, 蚤灶凿怎糟藻凿遭赠糟葬则糟蚤灶燥皂葬糟藻造造泽糟燥鄄藻曾责则藻泽泽蚤灶早源鄄员月月蕴葬灶凿陨蕴鄄员圆 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则陨皂皂怎灶燥造陨皂鄄皂怎灶燥贼澡藻则, 圆园员圆, 远员 ( 缘 ): 远员缘鄄远圆愿援 [ 缘 ] 摇酝葬则糟藻灶葬则燥耘, 阅藻造造葬悦酝, 月藻造造燥则葬云, 藻贼葬造援陨蕴鄄员圆燥则陨蕴鄄源责则蚤皂藻澡怎鄄皂葬灶晕运糟藻造造泽贼燥皂藻凿蚤葬贼藻枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造造赠凿蚤增藻则早藻灶贼蚤灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶泽憎蚤贼澡凿藻灶凿则蚤贼蚤糟糟藻造造泽燥则贼怎皂燥则泽 [ 允 ] 援允陨皂皂怎灶燥造, 圆园园缘, 员苑源 ( 苑 ): 怨怨圆鄄怨怨愿援 [ 远 ] 摇晕早怎赠藻灶鄄孕澡葬皂栽晕, 再葬灶早阅匀, 晕早怎赠藻灶栽粤, 藻贼葬造援韵责贼蚤皂葬造糟怎造贼怎则藻糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽枣燥则贼澡藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶燥枣灶葬贼怎则葬造噪蚤造造藻则糟藻造造鄄蚤灶凿怎糟藻凿凿藻灶凿则蚤贼蚤糟糟藻造造泽枣燥则糟葬灶糟藻则蚤皂皂怎灶燥贼澡藻则葬责赠 [ 允 ] 援悦藻造造酝燥造陨皂皂怎灶燥造, 圆园员圆, 怨 ( 员 ): 源缘鄄缘援 [ 苑 ] 摇 悦澡葬则燥怎凿藻澡匀晕, 杂糟澡皂蚤藻凿蕴, 郧燥灶扎葬造藻扎粤, 藻贼葬造援 匝怎葬灶贼蚤贼赠燥枣 垣匀蕴粤鄄悦泽怎则枣葬糟藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶葬灶凿造蚤糟藻灶泽蚤灶早燥枣运陨砸圆阅蕴 灶葬贼怎则葬造噪蚤造鄄 造藻则糟藻造造泽 [ 允 ] 援陨皂皂怎灶燥早藻灶藻贼蚤糟泽, 圆园员圆, 远源 ( 员园 ): 苑怨鄄苑源缘援 [ 愿 ] 摇孕造葬糟噪藻栽, 魻则早藻造酝, 杂糟澡葬造造藻则酝, 藻贼葬造援孕造葬贼藻造藻贼鄄凿藻则蚤增藻凿酝匀悦糟造葬泽泽 Ⅰ 糟燥灶枣藻则泽葬责泽藻怎凿燥灶燥则皂葬造责澡藻灶燥贼赠责藻贼燥糟葬灶糟藻则糟藻造造泽贼澡葬贼泽怎遭增藻则贼泽贼澡藻葬灶贼蚤贼怎皂燥则则藻葬糟贼蚤增蚤贼赠燥枣灶葬贼怎则葬造噪蚤造造藻则蚤皂皂怎灶藻糟藻造造泽 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园员圆, 苑圆 ( 圆 ): 源源园鄄源源愿援 [ 怨 ] 摇酝燥则葬灶凿蚤云, 云藻则则藻贼贼蚤耘, 悦葬泽贼则蚤糟燥灶蚤砸援杂燥造怎遭造藻匀蕴粤鄄郧凿葬皂责藻灶泽悦阅怨源辕晕运郧圆粤藻曾责则藻泽泽蚤燥灶葬灶凿枣怎灶糟贼蚤燥灶葬灶凿凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造造赠皂燥凿怎鄄造葬贼藻泽糟澡藻皂燥贼葬曾蚤泽葬灶凿糟赠贼燥噪蚤灶藻葬灶凿糟澡藻皂燥噪蚤灶藻泽藻糟则藻贼蚤燥灶蚤灶 悦阅缘远遭则蚤早澡贼葬灶凿悦阅缘远凿蚤皂晕运糟藻造造泽 [ 允 ] 援月造燥燥凿, 圆园员员, 员员愿 ( 圆圆 ): 缘愿源园鄄缘愿缘园援 [ 员园 ] 匀藻糟澡贼酝蕴, 砸燥泽藻灶贼葬造月, 匀燥则造葬糟澡藻则栽, 藻贼葬造援晕葬贼怎则葬造糟赠贼燥贼燥曾蚤糟蚤贼赠则藻糟藻责贼燥则泽晕运责园, 晕运责源源葬灶凿晕运责源远遭蚤灶凿贼燥凿蚤枣枣藻则藻灶贼澡藻责葬则葬灶泽怎造枣葬贼藻辕澡藻责葬则蚤灶泽藻择怎藻灶糟藻泽 [ 允 ] 援允孕则燥贼藻燥皂藻砸藻泽, 圆园园怨, 愿 ( 圆 ): 苑员圆鄄苑圆园援 [ 员员 ] 匀蚤造责藻则贼允, 郧则燥泽泽藻鄄匀燥增藻泽贼蕴, 郧则俟灶藻遭葬糟澡云, 藻贼葬造援悦燥皂责则藻澡藻灶泽蚤增藻葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣晕运郧圆阅造蚤早葬灶凿藻曾责则藻泽泽蚤燥灶葬灶凿则藻造藻葬泽藻蚤灶造藻怎噪藻皂蚤葬 : 陨皂鄄责造蚤糟葬贼蚤燥灶泽枣燥则晕运郧圆阅鄄皂藻凿蚤葬贼藻凿晕运糟藻造造则藻泽责燥灶泽藻泽 [ 允 ] 援允陨皂皂怎鄄灶燥造, 圆园员圆, 员愿怨 ( ): 员远园鄄员苑员援 [ 员圆 ] 郧造葬泽灶藻则粤, 郧澡葬凿蚤葬造造赠匀, 郧怎则悦, 藻贼葬造援砸藻糟燥早灶蚤贼蚤燥灶葬灶凿责则藻增藻灶贼蚤燥灶燥枣贼怎皂燥则皂藻贼葬泽贼葬泽蚤泽遭赠贼澡藻晕运则藻糟藻责贼燥则晕运责源远辕晕悦砸员 [ 允 ] 援允陨皂鄄皂怎灶燥造, 圆园员圆, 员愿愿 ( 远 ): 圆缘园怨鄄圆缘员缘援 [ 员 ] 匀葬则贼皂葬灶灶允, 栽则葬灶栽灾, 运葬怎凿藻藻则允, 藻贼葬造援栽澡藻泽贼葬造噪凿燥皂葬蚤灶葬灶凿贼澡藻早造赠糟燥泽赠造葬贼蚤燥灶泽贼葬贼怎泽燥枣贼澡藻葬糟贼蚤增葬贼蚤灶早灶葬贼怎则葬造噪蚤造造藻则糟藻造造则藻糟藻责贼燥则晕运责园葬则藻蚤皂责燥则贼葬灶贼枣燥则造蚤早葬灶凿遭蚤灶凿蚤灶早 [ 允 ] 援允月蚤燥造悦澡藻皂, 圆园员圆, 圆愿苑 ( 苑 ): 员缘圆苑鄄员缘怨援 [ 员源 ] 悦蚤糟糟蚤葬云, 粤糟糟葬则凿燥鄄孕葬造怎皂遭燥粤, 粤造藻泽泽葬灶凿则燥砸, 藻贼葬造援陨灶贼藻则造藻怎噪蚤灶鄄垣圆圆葬灶凿蚤灶贼藻则造藻怎噪蚤灶鄄圆圆鄄责则燥凿怎糟蚤灶早晕运责源源灶葬贼怎则葬造噪蚤造造藻则糟藻造造泽蚤灶泽怎遭糟造蚤灶蚤糟葬造早怎贼蚤灶枣造葬皂皂葬贼蚤燥灶蚤灶葬灶噪赠造燥泽蚤灶早泽责燥灶凿赠造蚤贼蚤泽 [ 允 ] 援粤则贼澡则蚤鄄贼蚤泽砸澡藻怎皂, 圆园员圆, 远源 ( 远 ): 员愿远怨鄄员愿苑愿援 [ 员缘 ] 阅燥皂葬蚤糟葬悦陨, 云怎藻则贼藻泽酝月, 砸燥泽泽蚤蕴耘援栽怎皂燥怎则鄄藻曾责藻则蚤藻灶糟藻凿栽糟藻造造泽责则燥皂燥贼藻晕运糟藻造造葬糟贼蚤增蚤贼赠贼澡则燥怎早澡贼则燥早燥糟赠贼燥泽蚤泽燥枣晕运郧圆阅葬灶凿晕运责源远造蚤早葬灶凿泽 [ 允 ] 援耘酝月韵砸藻责, 圆园园怨, 员园 ( 愿 ): 怨园愿鄄怨员缘援 [ 员远 ] 在葬遭葬造葬酝, 宰葬灶早蕴, 匀藻则灶葬灶凿藻扎鄄粤造糟燥糟藻遭葬砸, 藻贼葬员援韵责贼蚤皂蚤扎葬贼蚤燥灶燥枣贼澡藻栽藻贼鄄燥灶泽赠泽贼藻皂贼燥则藻早怎造葬贼藻蚤灶贼藻则造藻怎噪蚤灶员圆藻曾责则藻泽泽蚤燥灶蚤灶贼澡藻造蚤增藻则枣燥则贼澡藻贼则藻葬贼皂藻灶贼燥枣澡藻责葬贼蚤糟贼怎皂燥则泽 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园园源, 远源 ( 愿 ): 圆苑怨怨鄄圆愿园源援 [ 员苑 ] 运燥灶躁藻增蚤糟郧, 允怎则蚤泽蚤糟灾, 允燥增蚤糟灾, 藻贼葬造援陨灶增藻泽贼蚤早葬贼蚤燥灶燥枣晕运糟藻造造枣怎灶糟贼蚤燥灶葬灶凿贼澡藻蚤则皂燥凿怎造葬贼蚤燥灶蚤灶凿蚤枣枣藻则藻灶贼皂葬造蚤早灶葬灶糟蚤藻泽 [ 允 ] 援陨皂鄄皂怎灶燥造砸藻泽, 圆园员圆, 缘圆 ( 员辕圆 ): 员怨鄄员缘远援 [ 员愿 ] 在澡葬灶早悦, 在澡葬灶早允, 晕蚤怎允, 藻贼葬造援陨灶贼藻则造藻怎噪蚤灶鄄员圆蚤皂责则燥增藻泽糟赠贼燥贼燥曾蚤糟鄄蚤贼赠燥枣灶葬贼怎则葬造噪蚤造造藻则糟藻造造泽增蚤葬怎责则藻早怎造葬贼藻凿藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣晕运郧圆阅 [ 允 ] 援匀怎皂陨皂皂怎灶燥造, 圆园园愿, 远怨 ( 愿 ): 源怨园鄄缘园园援 [ 员怨 ] 梅家转, 周摇健, 郭坤元援自然杀伤细胞与肿瘤细胞之间的免疫编辑 [ 允 ] 援中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园园愿, 员缘 ( 员 ): 愿远鄄愿怨援 [ 圆园 ] 增葬灶匀藻则责藻灶悦酝, 增葬灶凿藻则蕴葬葬噪允粤, 凿藻灾则蚤藻泽陨允, 藻贼葬造援陨灶贼则葬贼怎皂燥则葬造则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼澡怎皂葬灶蚤灶贼藻则造藻怎噪蚤灶鄄员圆葬凿皂蚤灶蚤泽贼则葬贼蚤燥灶蚤灶澡藻葬凿葬灶凿灶藻糟噪泽择怎葬皂燥怎泽糟藻造造糟葬则糟蚤灶燥皂葬责葬贼蚤藻灶贼泽皂燥凿蚤枣蚤藻泽造燥糟燥则藻早蚤燥灶葬造造赠皂责澡灶燥凿藻葬则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻葬灶凿蚤灶凿怎糟藻泽灶葬贼怎则葬造噪蚤造造藻则糟藻造造蚤灶枣蚤造贼则葬贼蚤燥灶蚤灶贼澡藻责则蚤皂葬则赠贼怎皂燥则 [ 允 ] 援悦造蚤灶悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园园缘, 员员 ( 缘 ): 员愿怨怨鄄员怨园怨援 [ 收稿日期 ] 摇圆园员圆原园怨原圆源 [ 修回日期 ] 摇圆园员圆原员员原圆源 [ 本文编辑 ] 摇周玲琳