苑怨园 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员远年员圆月, 圆猿 ( 远 ) 灶葬灶燥则燥凿泽葬糟贼蚤增藻造赠贼葬则早藻贼藻凿早葬泽贼则蚤糟糟葬灶糟藻则贼蚤泽泽怎藻泽, 葬造葬则早藻灶怎皂遭藻则燥枣贼澡藻皂葬糟糟怎皂怎造葬贼藻凿蚤灶贼澡藻早葬泽贼则蚤糟糟葬灶糟藻则贼蚤泽泽怎藻泽葬灶凿藻灶鄄澡葬灶糟藻凿泽蚤早

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1 中国肿瘤生物治疗杂志摇澡贼贼责 : 辕辕憎憎憎援遭蚤燥贼澡藻则援燥则早悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则, 阅藻糟援圆园员远, 灾燥造援圆猿, 晕燥援远 苑愿怨 阅韵陨 : 员园援猿愿苑圆辕躁援蚤泽泽灶援员园园苑鄄猿愿缘载援圆园员远援园远援园园怨 基础研究 金纳米棒标记的人悦陨运细胞用于胃癌靶向光声成像与免疫治疗 员圆圆圆圆圆员员, 圆杨瑶, 张春雷, 夏芳芳, 刘岩磊, 杨蒙, 张晶晶, 方姗, 崔大祥 ( 员援温州医科大学检验医学和生命科学学院, 浙江温州猿圆缘园园园 ; 圆援上海交通大学纳米生物医学工程研究所上海智能诊疗仪器工程技术研究中心, 上海 圆园园圆源园 ) [ 摘摇要 ] 摇目的 : 利用金纳米棒标记的人细胞因子诱导杀伤细胞 ( 悦陨运 ) 主动靶向体内胃癌细胞的特性, 实现胃癌的局部光声成像, 观察金纳米棒在胃癌组织中的分布, 测量血清中细胞因子浓度变化 方法 : 取健康志愿者的全血提取外周血单个核细胞, 在多种细胞因子的诱导下扩增出悦陨运细胞 ; 采用种子合成法制备金纳米棒并对其表面进行二氧化硅修饰与表征 ; 利用胃癌细胞系酝郧悦愿园猿细胞建立裸鼠胃癌皮下瘤模型 ; 制备金纳米棒标记的悦陨运细胞, 尾静脉注射进入荷胃癌的裸鼠模型, 注射后不同时间点, 进行光声成像观察金纳米棒标记的悦陨运细胞在肿瘤部位的分布 ; 注射后猿凿, 收集裸鼠血清, 测量陨蕴鄄圆 陨蕴鄄员苑 γ 鄄陨云晕的浓度, 评判免疫治疗效果 结果 : 悦陨运细胞成功制备 ; 制备的金纳米棒长为远园灶皂, 宽为愿灶皂, 二氧化硅厚度为 圆园灶皂 ; 制备的金纳米棒被人悦陨运细胞内吞 ; 金纳米棒标记的人悦陨运细胞能够主动靶向体内胃癌组织, 在胃癌组织中大量聚集, 呈现出增强的光声成像信号 ; 细胞因子陨蕴鄄圆 陨蕴鄄员苑与 γ 鄄陨云晕的浓度显著升高 ( 孕约园郾园缘 ) 结论 : 金纳米棒标记的悦陨运细胞能够主动靶向体内胃癌组织, 高效聚集并呈现出增强的光声成像信号, 同时升高血液中细胞因子水平, 增强免疫治疗功能 [ 关键词 ] 摇细胞因子诱导的杀伤细胞 ; 金纳米棒 ; 胃癌裸鼠模型 ; 光声成像 ; 免疫治疗 垣 [ 中图分类号 ] 摇砸苑猿园援缘 ; 砸苑猿援猿缘源摇摇摇摇 [ 文献标识码 ] 摇粤摇摇摇摇 [ 文章编号 ] 摇员园园苑鄄猿愿缘载 ( 圆园员远 ) 园远鄄园苑愿怨鄄园远 哉泽蚤灶早澡怎皂葬灶悦陨运糟藻造造泽造葬遭藻造藻凿憎蚤贼澡早燥造凿灶葬灶燥则燥凿泽枣燥则贼葬则早藻贼藻凿责澡燥贼燥葬糟燥怎泽贼蚤糟蚤皂葬早蚤灶早葬灶凿蚤皂皂怎灶燥贼澡藻则葬责赠燥枣早葬泽贼则蚤糟糟葬灶糟藻则 员圆圆圆圆圆员再粤晕郧再葬燥, 在匀粤晕郧悦澡怎灶造藻蚤, 载陨粤云葬灶早枣葬灶早, 蕴陨哉再葬灶造藻蚤, 再粤晕郧酝藻灶早, 在匀粤晕郧允蚤灶早躁蚤灶早, 云粤晕郧杂澡葬灶, 悦哉陨员, 圆阅葬曾蚤葬灶早 ( 员援杂糟澡燥燥造燥枣蕴葬遭燥则葬贼燥则赠酝藻凿蚤糟蚤灶藻葬灶凿蕴蚤枣藻杂糟蚤藻灶糟藻, 宰藻灶扎澡燥怎酝藻凿蚤糟葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠, 宰藻灶扎澡燥怎猿圆缘园猿缘, 在澡藻躁蚤葬灶早, 悦澡蚤灶葬 ; 圆援陨灶泽贼蚤贼怎贼藻燥枣晕葬灶燥月蚤燥皂藻凿蚤糟蚤灶藻葬灶凿耘灶早蚤灶藻藻则蚤灶早, 杂澡葬灶早澡葬蚤陨灶贼藻造造蚤早藻灶贼耘灶早蚤灶藻藻则蚤灶早砸藻泽藻葬则糟澡悦藻灶贼藻则枣燥则阅蚤葬早灶燥泽蚤泽葬灶凿栽则藻葬贼皂藻灶贼陨灶泽贼则怎皂藻灶贼, 杂澡葬灶早澡葬蚤允蚤葬燥栽燥灶早怎灶蚤增藻则泽蚤贼赠, 泽澡葬灶早澡葬蚤圆园园圆源园, 悦澡蚤灶葬 ) [ 粤遭泽贼则葬糟贼 ] 摇韵遭躁藻糟贼蚤增藻 : 哉泽蚤灶早责则燥责藻则贼赠燥枣澡怎皂葬灶糟赠贼燥噪蚤灶藻鄄蚤灶凿怎糟藻凿噪蚤造造藻则糟藻造造泽 ( 悦陨运 ) 贼葬则早藻贼蚤灶早早葬泽贼则蚤糟糟葬灶糟藻则糟藻造造泽贼燥葬糟澡蚤藻增蚤藻造燥糟葬造责澡燥贼燥葬糟燥怎泽贼蚤糟蚤皂葬早蚤灶早燥枣早葬泽贼则蚤糟糟葬灶糟藻则, 贼燥燥遭泽藻则增藻凿蚤泽贼则蚤遭怎贼蚤燥灶燥枣早燥造凿灶葬灶燥则燥凿泽蚤灶早葬泽贼则蚤糟糟葬灶糟藻则贼蚤泽泽怎藻泽葬灶凿贼燥皂藻葬泽怎则藻糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶糟澡葬灶早藻泽燥枣糟赠贼燥噪蚤灶藻泽蚤灶泽藻则怎皂援酝藻贼澡燥凿泽 : 孕藻则蚤责澡藻则葬造遭造燥燥凿皂燥灶燥糟怎糟造藻葬则糟藻造造泽憎藻则藻藻曾贼则葬糟贼藻凿枣则燥皂憎澡燥造藻遭造燥燥凿燥枣澡藻葬造贼澡赠增燥造怎灶贼藻藻则泽葬灶凿悦陨运糟藻造造泽憎藻则藻葬皂责造蚤枣蚤藻凿蚤灶凿怎糟藻凿怎灶凿藻则蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶泽燥枣皂怎造贼蚤责造藻糟赠贼燥噪蚤灶藻泽援粤泽藻藻凿泽赠灶贼澡藻泽蚤泽皂藻贼澡燥凿憎葬泽怎泽藻凿贼燥责则藻责葬则藻早燥造凿灶葬灶燥则燥凿泽葬灶凿贼燥皂燥凿蚤枣赠贼澡藻蚤则泽怎则枣葬糟藻泽憎蚤贼澡泽蚤造蚤糟燥灶凿蚤燥曾蚤凿藻 ( 圆园灶皂贼澡蚤糟噪 ) 援粤灶怎凿藻皂燥怎泽藻皂燥凿藻造憎蚤贼澡泽怎遭糟怎贼葬灶藻燥怎泽曾藻灶燥早则葬枣贼燥枣早葬泽贼则蚤糟贼怎皂燥则憎葬泽藻贼葬遭造蚤泽澡藻凿怎泽蚤灶早早葬泽贼则蚤糟糟葬灶糟藻则酝郧悦愿园猿造蚤灶藻糟藻造造泽援栽澡藻悦陨运糟藻造造泽造葬遭藻造藻凿憎蚤贼澡早燥造凿灶葬灶燥则燥凿泽憎藻则藻蚤灶躁藻糟贼藻凿蚤灶贼燥糟葬怎凿葬造增藻蚤灶燥枣贼澡藻灶怎凿藻皂蚤糟藻憎蚤贼澡曾藻灶燥早则葬枣贼燥枣早葬泽贼则蚤糟糟葬灶糟藻则葬灶凿凿蚤泽贼则蚤遭怎贼蚤燥灶燥枣贼澡藻悦陨运糟藻造造泽造葬遭藻造藻凿憎蚤贼澡早燥造凿灶葬灶燥则燥凿泽蚤灶贼澡藻贼怎皂燥则贼蚤泽泽怎藻泽憎葬泽燥遭泽藻则增藻凿憎蚤贼澡责澡燥贼燥葬糟燥怎泽贼蚤糟蚤皂葬早蚤灶早葬贼增葬则蚤燥怎泽贼蚤皂藻责燥蚤灶贼泽燥枣贼澡藻蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶援粤枣贼藻则猿凿葬赠泽燥枣贼澡藻蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶, 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽燥枣陨蕴鄄圆, 陨蕴鄄苑葬灶凿 γ 鄄陨云晕蚤灶泽藻则怎皂燥枣贼澡藻灶怎凿藻皂蚤糟藻憎藻则藻凿藻贼藻糟贼藻凿遭赠耘蕴陨杂粤葬泽泽葬赠援砸藻泽怎造贼泽 : 悦陨运糟藻造造泽葬灶凿早燥造凿灶葬灶燥则燥凿泽憎藻则藻泽怎糟糟藻泽泽枣怎造造赠皂葬凿藻援栽澡藻早燥造凿灶葬灶燥则燥凿泽憎蚤贼澡远园灶皂造燥灶早葬灶凿愿灶皂憎蚤凿藻憎藻则藻泽憎葬造造燥憎藻凿遭赠贼澡藻澡怎皂葬灶悦陨运援栽澡藻澡怎皂葬灶悦陨运糟藻造造泽造葬遭藻造藻凿憎蚤贼澡贼澡藻早燥造凿 [ 基金项目 ] 摇国家怨苑猿课题资助项目 ( 晕燥援圆园员缘悦月怨猿员愿园圆 ); 国家自然科学基金资助项目 ( 晕燥援愿员圆圆缘园员园, 愿员园圆愿园园怨 ); 上海市科委基金资助项目 ( 晕燥援员猿晕酝员源园员缘园园 ) 孕则燥躁藻糟贼泽怎责责燥则贼藻凿遭赠贼澡藻晕葬贼蚤燥灶葬造怨苑猿孕则燥躁藻糟贼云燥怎灶凿葬贼蚤燥灶 ( 晕燥援圆园员缘悦月怨猿员愿园圆 ), 贼澡藻晕葬贼蚤燥灶葬造晕葬贼怎则葬造杂糟蚤藻灶糟藻云燥怎灶凿葬贼蚤燥灶燥枣悦澡蚤鄄灶葬 ( 晕燥援愿员圆圆缘园员园, 愿员园圆愿园园怨 ), 葬灶凿贼澡藻杂澡葬灶早澡葬蚤酝怎灶蚤糟蚤责葬造杂糟蚤藻灶糟藻悦燥皂皂蚤贼贼藻藻云燥怎灶凿葬贼蚤燥灶 ( 晕燥援员猿晕酝员源园员缘园园 ) [ 作者简介 ] 摇杨瑶 ( 员怨愿苑原 ), 女, 内蒙古鄂尔多斯人, 硕士生, 主要从事纳米粒子标记的人细胞因子诱导杀伤细胞在胃癌诊疗中的应用研究, 耘鄄皂葬蚤造 : 糟则赠泽贼葬造赃凿藻造赠造怎造怎岳澡燥贼皂葬蚤造援糟燥皂 [ 通信作者 ] 摇崔大祥 ( 悦哉陨阅葬曾蚤葬灶早, 糟燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早葬怎贼澡燥则 ), 耘鄄皂葬蚤造 : 凿曾糟怎蚤岳泽躁贼怎怎援藻凿怎援糟灶

2 苑怨园 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员远年员圆月, 圆猿 ( 远 ) 灶葬灶燥则燥凿泽葬糟贼蚤增藻造赠贼葬则早藻贼藻凿早葬泽贼则蚤糟糟葬灶糟藻则贼蚤泽泽怎藻泽, 葬造葬则早藻灶怎皂遭藻则燥枣贼澡藻皂葬糟糟怎皂怎造葬贼藻凿蚤灶贼澡藻早葬泽贼则蚤糟糟葬灶糟藻则贼蚤泽泽怎藻泽葬灶凿藻灶鄄澡葬灶糟藻凿泽蚤早灶葬造蚤灶早燥枣责澡燥贼燥葬糟燥怎泽贼蚤糟蚤皂葬早蚤灶早憎葬泽责则藻泽藻灶贼藻凿援悦燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽燥枣糟赠贼燥噪蚤灶藻泽陨蕴鄄圆, 陨蕴鄄苑葬灶凿 γ 鄄陨云晕泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠蚤灶糟则藻葬泽藻凿, 葬灶凿憎藻则藻澡蚤早澡藻则贼澡葬灶贼澡燥泽藻蚤灶贼澡藻糟燥灶贼则燥造早则燥怎责 ( 孕约园援园缘 ) 援悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶 : 栽澡藻悦陨运糟藻造造泽造葬遭藻造藻凿憎蚤贼澡贼澡藻早燥造凿灶葬灶燥则燥凿泽糟燥怎造凿葬糟贼蚤增藻造赠贼葬则早藻贼早葬泽贼则蚤糟糟葬灶糟藻则贼蚤泽泽怎藻泽, 藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼造赠糟燥造造藻糟贼葬灶凿责则藻泽藻灶贼藻灶澡葬灶糟藻凿泽蚤早灶葬造蚤灶早燥枣责澡燥贼燥葬糟燥怎泽贼蚤糟蚤皂鄄葬早蚤灶早援粤贼贼澡藻泽葬皂藻贼蚤皂藻, 糟赠贼燥噪蚤灶藻造藻增藻造蚤灶遭造燥燥凿糟燥怎造凿遭藻藻造藻增葬贼藻凿葬灶凿糟怎则葬贼蚤增藻藻枣枣蚤糟葬糟赠燥枣贼澡藻蚤皂皂怎灶燥贼澡藻则葬责赠糟燥怎造凿遭藻藻灶澡葬灶糟藻凿援 [ 运藻赠憎燥则凿泽 ] 摇糟赠贼燥噪蚤灶藻鄄蚤灶凿怎糟藻凿噪蚤造造藻则糟藻造造泽 ( 悦陨运 ); 早燥造凿灶葬灶燥则燥凿泽 ; 灶怎凿藻皂燥怎泽藻皂燥凿藻造憎蚤贼澡曾藻灶燥早则葬枣贼燥枣早葬泽贼则蚤糟贼怎皂燥则 ; 责澡燥贼燥葬糟燥怎泽贼蚤糟蚤皂葬早蚤灶早 ; 蚤皂皂怎灶燥贼澡藻则葬责赠援 [ 悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则, 圆园员远, 圆猿 ( 远 ): 苑愿怨鄄苑怨源援阅韵陨 : 员园援猿愿苑圆辕躁援蚤泽泽灶援员园园苑鄄猿愿缘载援圆园员远援园远援园园怨 ] 摇摇 摇摇胃癌是我国常见的恶性肿瘤, 发病率与病死率 [ 员均较高 ] 早期胃癌症状轻微甚至无症状, 而当临床症状明显时, 病变多为晚期 胃癌的治疗方法主要有手术切除 放疗 化疗与生物治疗 目前仍以手术切除为主, 但是大多数胃癌患者发现较晚, 手术治 [ 圆鄄源疗效果欠佳, 术后缘年生存率不到圆缘豫 ], 如何提高中晚期胃癌患者生存率已成为一个关键问题 近年来, 免疫治疗已成为一个新的研究热点, 特别是细胞因子诱导的杀伤 ( 糟赠贼燥噪蚤灶藻鄄蚤灶凿怎糟藻凿噪蚤造造藻则, 悦陨运 ) 细胞是一类具备抑制甚至杀伤肿瘤细胞功能的免疫活 [ 缘鄄远性细胞, 目前已在临床应用 ] 部分研究表明, 悦陨运细胞能够主动靶向体内的肿瘤细胞或组织, 分泌特殊的细胞因子, 调节肿瘤的微环境, 杀死肿瘤细胞, 是一种比较有效的免疫细胞治疗方法 但是, 到目前为止, 悦陨运细胞在体内的分布研究比较少, 也是增强悦陨运细胞治疗效果的一个关键问题 随着纳米生物技术的快速发展, 利用纳米材料的特殊效应, 实现肿瘤诊断治疗一体化已成为国际上的研究热 [ 苑鄄愿点 ] 金纳米棒作为一种生物安全性好的纳米材料, 具有独特可调节的表面等离子共振特性, 可用于光声成像与光热治疗, 具有合成方法简单 化学性质 [ 怨鄄员园稳定 产出率高等优点 ] 这些特点使得金纳米棒在多种疾病诊疗一体化的研究中得到应用 在本研究, 笔者利用金纳米棒的光学特性, 结合悦陨运细胞的靶向体内肿瘤特性, 研究金纳米棒标记的悦陨运细胞靶向体内胃癌细胞的可行性, 并调查悦陨运细胞的体内分布, 以及对细胞因子浓度的影响, 为进一步实现胃癌的靶向成像与免疫治疗奠定基础 员摇材料与方法员援员摇主要材料与试剂月粤蕴月辕 ( 糟杂孕云级 ) 裸鼠 ( 雄性, 源耀耀耀耀耀远周龄 ) 购自斯莱克公司 ( 实验动物合格证号为怨粤猿猿远园缘远鄄缘怨愿怨苑员月云鄄云怨苑缘粤悦月愿鄄悦缘阅耘园粤月园 ), 人胃癌酝郧悦愿园猿株细胞 ( 阅酝耘酝培养基贴壁培养 ) 购自中国科学院 细胞研究所 新鲜全血来自本实验室健康志愿者 十六烷基三甲基溴化铵 ( 悦栽粤月 ) 硝酸银 抗坏血酸 硼氢化纳 正硅酸乙酯购自阿拉丁公司 载鄄灾陨鄄灾韵培养基 悦悦运鄄愿试剂盒购自上海翊圣生物科技有限公司 淋巴细胞分离液购自达科为生物科技有限公司 细胞因子悦阅猿皂粤遭 γ 鄄陨云晕 陨蕴鄄圆以及检测试剂盒分别购自德国匀赠泽噪蚤造造公司 上海凯茂生物医药垣有限公司及上海华新生物高技术有限公司, 悦阅猿 垣悦阅缘远等单克隆抗体购自月阅公司 员援圆摇金纳米棒 ( 早燥造凿灶葬灶燥则燥凿泽, 郧晕砸泽 ) 的合成 修饰及表征观察 合成金纳米晶种子反应体系 : 悦栽粤月 ( 园援员皂燥造辕蕴 ) 苑援缘皂造 ; 氯金酸 ( 圆源援猿皂燥造辕蕴 ) 员园猿 μ 造 ; 硼氢化钠 ( 园援园员皂燥造辕蕴 ) 远园园 μ 造 ; 超纯水员援愿皂造 在员园皂造反应瓶中加入上述反应体系, 猿园益均匀搅拌后迅速加入预冷的硼氢化钠溶液并快速搅拌圆皂蚤灶, 静置圆澡 金纳米棒生长液反应体系 : 悦栽粤月 ( 园援员皂燥造辕蕴 ) 缘园皂造 ; 氯金酸 ( 圆源援猿皂燥造辕蕴 ) 员援园猿皂造 ; 硫酸 ( 园援缘皂燥造辕蕴 ) 员援园皂造 ; 硝酸银 ( 园援园员皂燥造辕蕴 ) 苑缘园 μ 造 ; 抗坏血酸 ( 园援员皂燥造辕蕴 ) 源园园 μ 造 在缘园皂造具塞锥形瓶中加入上述反应体系, 猿园益均匀搅拌 剧烈搅拌圆皂蚤灶, 加入金纳米晶种员圆园 μ 造后继续搅拌圆园泽后恒温完全静置 待变色后静置过夜 正硅酸乙酯 ( 贼藻贼则葬藻贼澡赠造燥则贼澡燥泽蚤造蚤糟葬贼藻, 栽耘韵杂 ) 修饰金纳米棒 : 氢氧化钠 ( 员皂燥造辕蕴 ) 调节员园皂造金纳米棒溶液责匀值至员园援园, 猿园益均匀搅拌 ; 分三次加入远园园 μ 造栽耘韵杂溶液 ( 员园皂皂燥造辕蕴 ), 每次间隔猿园皂蚤灶 ; 恒温均匀搅拌圆源澡 金纳米棒表征观察 : 用灾葬则蚤葬灶悦葬则赠缘园分光光度计检测郧晕砸及硅修饰的金纳米棒 ( 郧晕砸岳杂蚤韵圆 ) 纳米颗粒的可见鄄近红外光谱 纳米颗粒的尺寸形貌特征用高分辨透射电子显微镜观察 员援猿摇 外周血单核细胞提取及悦陨运细胞培养扩增 分离人外周血单核细胞 ( 孕月酝悦 ), 培养扩增 悦陨运细胞用含 γ 鄄陨云晕 ( 圆园园园哉辕皂造 ) 的载鄄灾陨灾韵培养

3 杨瑶, 等援金纳米棒标记的人悦陨运细胞用于胃癌靶向光声成像与免疫治疗 苑怨员 基, 培养第员天加陨蕴鄄圆 ( 员园园园哉辕皂造 ) 和悦阅猿皂粤遭 ( 员园园灶早辕皂造 ) 培养圆耀耀耀耀耀猿周, 利用流式细胞术分析 悦陨运细胞表面悦阅猿 悦阅缘远表达情况, 使用云造燥憎躁燥软件进行数据分析 员援源摇郧晕砸标记悦陨运细胞和检测郧晕砸对悦陨运细胞存活率影响 将悦陨运细胞与郧晕砸在猿苑益, 缘豫悦韵圆培养箱共同孵育远澡, 使悦陨运细胞内吞金纳米棒 利用悦悦运鄄愿 试剂盒测定不同浓度纳米材料对悦陨运细胞存活率的影响 暗视野显微镜观察悦陨运细胞内吞纳米材料的情况 员援缘摇 光声成像观察纳米颗粒在裸鼠模型体内分布 远裸鼠右髋皮下注射员伊员园个对数生长期人胃癌酝郧悦愿园猿株细胞建立裸鼠胃癌皮下瘤模型 待胃猿癌皮下瘤长至员缘园耀耀耀耀耀圆园园皂皂时, 按实验分组分别进行尾静脉注射 :( 粤 ) 注射孕月杂 ;( 月 ) 注射携带郧晕砸岳杂蚤韵圆纳米颗粒的悦陨运细胞 ;( 悦 ) 注射郧晕砸岳杂蚤韵圆纳米颗粒 尾静脉注射后员 猿和缘凿, 用耘灶凿则葬晕藻曾鄄怎泽员圆愿小动物光声成像系统对裸鼠模型胃癌皮下瘤及瘤周组织进行光声成像探针分布观察 光声成像采集的光声信号数据通过韵泽蚤则蚤曾软件进行分析 每组观察缘耀耀耀耀耀苑个动物 员援远摇 耘蕴陨杂粤方法测量裸鼠血清细胞因子 尾静脉注射裸鼠胃癌模型金纳米棒标记人悦陨运 细胞后猿凿, 收集裸鼠的血液, 分离血清, 同时收集正常裸鼠血清作为对照 按照耘蕴陨杂粤试剂盒, 说明书步骤操作, 测量陨蕴鄄员 陨蕴鄄源 陨蕴鄄员圆与陨云晕鄄 γ 细胞因子浓度 员援苑摇 统计学处理 采用杂孕杂杂员苑援园统计分析软件, 计量数据以珋曾依泽 表示 用贼检验比较组间差异, 孕约园援园缘或孕约园援园员 表示差异有统计学意义 圆摇 圆援员摇 结果 金纳米棒表征 郧晕砸及郧晕砸岳杂蚤韵圆的可见光鄄近红外吸收光谱 ( 图员 ), 显示其横向等离子体共振吸收峰在缘圆园灶皂, 纵向等离子体共振吸收峰在愿园愿灶皂 其中缘圆园灶皂是金元素的吸收峰, 而处于愿员园灶皂左右的金纳米棒长宽比在猿耀耀耀耀耀缘颐员的范围内, 有利于获得较好的光热治疗效果 摇摇透射电子显微镜 ( 图圆 ) 显示, 种子合成法制备的郧晕砸及郧晕砸岳杂蚤韵圆在蒸馏水中分散均匀 大小均一, 长度为远园灶皂, 宽度为愿灶皂, 包覆的二氧化硅层厚约圆园灶皂 图员摇 郧晕砸及郧晕砸岳杂蚤韵圆纳米颗粒的可见鄄近红外吸收光谱 云蚤早援员摇栽澡藻增蚤泽蚤遭造藻葬灶凿灶藻葬则蚤灶枣则葬则藻凿葬遭泽燥则责贼蚤燥灶泽责藻糟贼则燥泽糟燥责赠燥枣郧晕砸葬灶凿郧晕砸岳杂蚤韵圆灶葬灶燥责葬则贼蚤糟造藻泽 图圆摇 郧晕砸 : 郧燥造凿灶葬灶燥则燥凿泽 ; 郧晕砸岳杂蚤韵圆 : 郧燥造凿灶葬灶燥则燥凿泽皂燥凿蚤枣蚤藻凿憎蚤贼澡泽蚤造蚤糟燥灶 郧晕砸及郧晕砸岳杂蚤韵圆纳米颗粒的透射电镜图 云蚤早援圆摇陨皂葬早藻泽燥枣贼澡藻郧晕砸葬灶凿郧晕砸岳杂蚤韵圆灶葬灶燥责葬则贼蚤糟造藻泽憎蚤贼澡贼则葬灶泽皂蚤泽泽蚤燥灶藻造藻糟贼则燥灶皂蚤糟则燥泽糟燥责藻 ( 遭葬则增葬造怎藻 : 缘园灶皂 ) 圆援圆摇 细胞 悦陨运细胞表型分析和金纳米棒成功标记悦陨运 流式细胞术检测悦陨运细胞表型云造燥憎躁燥软件分垣垣析结果 ( 图猿 ) 显示悦阅猿栽细胞怨圆援远愿豫 悦阅缘远栽 垣垣细胞源园援远猿豫 悦阅猿悦阅缘远栽细胞猿怨援圆远豫, 这一结果提示体外扩增的悦陨运细胞具备较强的杀伤靶细胞能力 与显微镜明场对比, 暗视野显微镜下可见负载郧晕砸岳杂蚤韵圆的悦陨运细胞发出荧光 ( 图源 ) 此结果表明, 悦陨运细胞被修饰的金纳米棒成功标记 圆援猿摇 金纳米棒对悦陨运细胞和酝郧悦愿园猿细胞无毒性 细胞毒性试验结果 ( 图缘 ) 显示, 不同浓度的 郧晕砸岳杂蚤韵圆对悦陨运细胞和酝郧悦愿园猿细胞的细胞活性无显著影响 ( 孕跃园援园缘 ) 圆援源摇金纳米棒标记悦陨运细胞在胃癌裸鼠体内光声成像信号增强, 分布均匀 金纳米棒标记的悦陨运细胞在胃癌裸鼠模型体内能够主动靶向胃癌细胞, 在注射后第缘天, 仍呈现

4 苑怨圆 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员远年员圆月, 圆猿 ( 远 ) 成像信号较强, 具有统计学差异 ( 孕约园援园缘 ) 图猿摇 悦陨运细胞表型流式分析 云蚤早援猿摇悦陨运糟藻造造责澡藻灶贼燥贼赠责藻葬灶葬造赠扎藻凿遭赠枣造燥憎糟赠贼燥皂藻贼则赠葬泽泽葬赠 图远摇裸鼠胃癌皮下瘤光声成像图云蚤早援远摇孕澡燥贼燥葬糟燥怎泽贼蚤糟蚤皂葬早蚤灶早泽燥枣泽怎遭糟怎贼葬灶藻燥怎泽早葬泽贼则蚤糟糟葬灶糟藻则蚤灶贼澡藻灶怎凿藻皂蚤糟藻粤 : 孕月杂糟燥灶贼则燥造早则燥怎责 ; 月 : 悦陨运糟藻造造造燥葬凿藻凿憎蚤贼澡郧晕砸早则燥怎责 ; 悦 : 郧晕砸岳杂蚤韵圆早则燥怎责 图源摇吞噬郧晕砸岳杂蚤韵圆的悦陨运细胞暗视野显微镜观察结果 ( 伊员园园 ) 云蚤早援源摇陨皂葬早藻泽燥枣悦陨运糟藻造造泽泽憎葬造造燥憎藻凿憎蚤贼澡郧晕砸岳杂蚤韵圆灶葬灶燥责葬则贼蚤糟造藻泽燥遭泽藻则增藻凿憎蚤贼澡凿葬则噪枣蚤藻造凿皂蚤糟则燥泽糟燥责藻 ( 伊员园园 ) 图苑摇 不同处理组标准化光声成像信号值 云蚤早援苑摇晕燥则皂葬造蚤扎藻凿责澡燥贼燥葬糟燥怎泽贼蚤糟泽蚤早灶葬造增葬造怎藻泽蚤灶增葬则蚤燥怎泽贼则藻葬贼皂藻灶贼早则燥怎责泽 ( 灶越缘 ) 孕约园援园缘增泽孕月杂早则燥怎责 图缘摇不同浓度郧晕砸岳杂蚤韵圆对悦陨运细胞和酝郧悦愿园猿细胞活性的影响云蚤早援缘摇耘枣枣藻糟贼燥枣郧晕砸岳杂蚤韵圆灶葬灶燥责葬则贼蚤糟造藻蚤灶增葬则蚤藻贼赠糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽燥灶增蚤葬遭蚤造蚤贼蚤藻泽燥枣悦陨运葬灶凿酝郧悦愿园猿糟藻造造泽出增强的均匀分布的光声信号 ( 图远月 ); 单纯的郧晕砸岳杂蚤韵圆注射组, 也能呈现出光声信号 ( 图远悦 ), 但是分布不均匀, 这种现象是由于实体瘤组织的高通透性和滞留效应 ( 简称耘孕砸效应 ) 的结果 ; 对照组注射孕月杂, 光声信号很弱 ( 图远粤 ) 此结果表明, 金纳米棒标记的悦陨运细胞能够主动靶向体内胃癌细胞, 高效聚集, 并呈现出均匀分布 上述光声信号用韵泽蚤则蚤曾软件值标准化结果 ( 图苑 ) 显示, 同对照组相比, 金纳米棒标记的悦陨运细胞在动物模型体内光声 圆援缘摇金纳米棒标记悦陨运细胞升高胃癌裸鼠血清细胞因子注射金纳米棒标记悦陨运细胞的裸鼠模型血清细胞因子测量结果 ( 图愿 ) 表明, 实验组中陨蕴鄄员 陨蕴鄄源 陨蕴鄄员圆与陨云晕鄄 γ 浓度较正常裸对照血清显著升高, 有统计学差异 ( 孕约园援园缘 ) 猿摇讨摇论胃癌是我国常见的恶性肿瘤 如何实现胃癌的靶向成像与同步免疫治疗是一个挑战性难题 本研究利用金纳米棒的光学特性, 结合悦陨运细胞的靶向体内肿瘤特性, 制备了金纳米棒标记的悦陨运细胞, 通过尾静脉注射, 成功实现了胃癌裸鼠模型的靶向光声成像与免疫细胞治疗

5 杨瑶, 等援金纳米棒标记的人悦陨运细胞用于胃癌靶向光声成像与免疫治疗 苑怨猿 内胃癌组织的部位, 又能够通过分泌细胞因子, 调节免疫, 对胃癌进行免疫细胞治疗, 具有临床转化前景, 具体机制仍在进一步研究之中 [ 参考文献 ] 图愿摇不同处理组胃癌裸鼠血清细胞因子浓度云蚤早援愿摇悦燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽燥枣泽藻则怎皂糟赠贼燥噪蚤灶藻泽燥枣则怎凿藻皂蚤糟藻憎蚤贼澡早葬泽贼则蚤糟糟葬灶糟藻则蚤灶增葬则蚤燥怎泽贼则藻葬贼造皂藻灶贼早则燥怎责泽栽则藻葬贼皂藻灶贼早则燥怎责 : 杂藻则怎皂枣则燥皂则怎凿藻皂蚤糟藻憎蚤贼澡早葬泽贼则蚤糟糟葬灶糟藻则蚤灶躁藻糟贼藻凿憎蚤贼澡悦陨运糟藻造造泽造燥葬凿藻凿憎蚤贼澡郧晕砸 ; 悦燥灶贼则燥造早则燥怎责 : 杂藻则怎皂枣则燥皂灶燥则皂葬造则怎凿藻皂蚤糟藻 孕约园援园缘增泽糟燥灶贼则燥造早则燥怎责摇摇金纳米棒通过表面二氧化硅修饰, 显著增强了其生物相容性, 对悦陨运细胞与胃癌细胞的生长显示出无明显毒性, 表明硅修饰的金纳米棒具有生物医 [ 员园鄄员员学临床应用前景 ] 本研究结果表明, 硅修饰的金纳米棒能够被悦陨运细胞内吞, 实现了金纳米棒对悦陨运细胞的标记 制备胃癌裸鼠皮下瘤模型, 经尾静脉注射金纳米棒标记悦陨运细胞后, 利用光声成像设备, 观察到金纳米棒标记悦陨运细胞能够主动靶向体内胃癌细胞, 并高效聚集在胃癌组织部位, 呈现均匀分布 说明利用金纳米棒标记悦陨运细胞, 既可以发现体内胃癌细胞的部位, 又可以直接观察悦陨运细胞在体内的分布 悦陨运细胞因其酝匀悦非限制性抗肿瘤作用及主 [ 员圆鄄员猿动识别并靶向体内肿瘤细胞的能力 ], 已被批准作为第三类治疗技术, 进入临床应用 但是由于悦陨运细胞是一组异质性细胞群, 其治疗机制仍比较复杂 在本研究中, 我们检测了静脉注射后第缘天的细胞因子陨蕴鄄员 陨蕴鄄源 陨蕴鄄员圆与陨云晕鄄 γ 的浓度显著升高, 说明悦陨运细胞可能通过分泌细胞因子, 调节肿 [ 员源鄄员缘瘤细胞的微环境, 实现对胃癌的免疫治疗 ] 金纳米棒标记悦陨运细胞能够升高体内细胞因子水平, 具有调节细胞免疫功能 特别是陨云晕鄄 γ 浓度显著升高, 具有杀伤癌细胞的功能 因此, 金纳米棒标记的悦陨运细胞对体内胃癌细胞具有免疫治疗的功能 但悦陨运细胞调控免疫网络的机制, 仍需要进一步研究 总之, 本研究表明 : 金纳米棒标记的悦陨运细胞 [ 员远鄄员苑能够主动靶向体内胃癌细胞 ], 并在胃癌组织中 [ 员愿鄄圆园呈现均匀分布, 既可以用于光声成像 ], 发现体 [ 员 ] 摇栽粤运粤匀粤杂匀陨栽, 杂粤陨运粤宰粤再, 运陨栽粤郧粤宰粤再援郧葬泽贼则蚤糟糟葬灶糟藻则 : 糟怎则则藻灶贼泽贼葬贼怎泽燥枣凿蚤葬早灶燥泽蚤泽葬灶凿贼则藻葬贼皂藻灶贼 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则泽 ( 月葬泽藻造 ), 圆园员猿, 缘 ( 员 ): 源愿鄄远猿援阅韵陨 : 员园援猿猿怨园辕糟葬灶糟藻则泽缘园员园园源愿 [ 圆 ] 摇悦哉陨阅载, 在匀粤晕郧悦蕴, 蕴陨哉月, 藻贼葬造援砸藻早则藻泽泽蚤燥灶燥枣早葬泽贼则蚤糟糟葬灶糟藻则遭赠泽赠泽贼藻皂蚤糟蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶燥枣砸晕粤灶葬灶燥责葬则贼蚤糟造藻泽糟葬则则赠蚤灶早遭燥贼澡造蚤早葬灶凿葬灶凿泽蚤砸晕粤 [ 允辕韵蕴 ] 援杂糟蚤砸藻责, 圆园员缘, 缘 : 员园苑圆远 [ 圆园员远鄄园员鄄园员 ] 援澡贼贼责 : 辕辕憎憎憎援灶葬贼怎则藻援糟燥皂辕葬则贼蚤糟造藻泽辕泽则藻责员园苑圆远援阅韵陨 : 员园援员园猿愿辕泽则藻责员园苑圆远援 [ 猿 ] 摇悦哉陨阅, 在匀粤晕郧蕴, 再粤晕载允, 藻贼葬造援粤皂蚤糟则燥葬则则葬赠鄄遭葬泽藻凿早葬泽贼则蚤糟糟葬则糟蚤灶燥皂葬责则藻憎葬则灶蚤灶早泽赠泽贼藻皂 [ 允 ] 援宰燥则造凿允郧葬泽贼则燥藻灶贼藻则燥造, 圆园园缘, 员员 ( 怨 ): 员圆苑猿鄄员圆愿圆援阅韵陨 : 员园援猿苑源愿辕憎躁早援增员员援蚤怨援员圆苑猿援 [ 源 ] 摇悦匀耘晕宰匝, 在匀耘晕郧砸杂, 在匀粤晕郧杂宰, 藻贼葬造援栽澡藻蚤灶糟蚤凿藻灶糟藻泽葬灶凿皂燥则贼葬造蚤贼蚤藻泽燥枣皂葬躁燥则糟葬灶糟藻则泽蚤灶糟澡蚤灶葬, 圆园员园 [ 允 ] 援悦澡蚤灶允悦葬灶糟鄄藻则, 圆园员源, 猿猿 ( 愿 ): 源园圆鄄源园缘援阅韵陨 : 员园援缘苑猿圆辕糟躁糟援园员源援员园园愿源援 [ 缘 ] 摇杂悦匀酝陨阅栽鄄宰韵蕴云陨, 蕴耘云栽耘砸韵灾粤孕, 酝耘匀栽粤月, 藻贼葬造援孕澡藻灶燥鄄贼赠责蚤糟糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶葬灶凿蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣藻枣枣藻糟贼燥则糟藻造造泽蚤灶增燥造增藻凿蚤灶贼怎皂燥则糟藻造造则藻糟燥早灶蚤贼蚤燥灶燥枣糟赠贼燥噪蚤灶藻鄄蚤灶凿怎糟藻凿噪蚤造造藻则糟藻造造泽 [ 允 ] 援耘曾责匀藻皂葬贼燥造, 员怨怨猿, 圆员 ( 员猿 ): 员远苑猿鄄员远苑怨援 [ 远 ] 摇蕴哉孕匀, 晕耘郧砸陨晕砸杂援粤灶燥增藻造责燥责怎造葬贼蚤燥灶燥枣藻曾责葬灶凿藻凿澡怎皂葬灶垣垣悦阅猿悦阅缘远糟藻造造泽凿藻则蚤增藻凿枣则燥皂栽糟藻造造泽憎蚤贼澡责燥贼藻灶贼蚤灶增蚤增燥葬灶贼蚤贼怎鄄皂燥则葬糟贼蚤增蚤贼赠蚤灶皂蚤糟藻憎蚤贼澡泽藻增藻则藻糟燥皂遭蚤灶藻凿蚤皂皂怎灶燥凿藻枣蚤糟蚤藻灶糟赠 [ 允 ] 援允陨皂皂怎灶燥造, 员怨怨源, 员缘猿 ( 源 ): 员远愿苑鄄员远怨远援 [ 苑 ] 摇月粤韵悦悦, 悦韵晕阅耘允, 孕韵蕴韵耘, 藻贼葬造援粤责则燥皂蚤泽蚤灶早则燥葬凿憎蚤贼澡糟澡葬造造藻灶早藻泽 : 憎澡藻则藻葬则藻早燥造凿灶葬灶燥责葬则贼蚤糟造藻泽蚤灶贼则葬灶泽造葬贼蚤燥灶葬造则藻泽藻葬则糟澡? [ 允 ] 援晕葬灶燥皂藻凿蚤糟蚤灶藻 ( 蕴燥灶凿 ), 圆园员源, 怨 ( 员缘 ): 圆猿缘猿鄄圆猿苑园援阅韵陨 : 员园援圆圆员苑辕灶灶皂援员源援员缘缘援 [ 愿 ] 摇蕴陨哉再蕴, 再粤晕郧酝, 在匀粤晕郧允孕, 藻贼葬造援匀怎皂葬灶蚤灶凿怎糟藻凿责造怎则蚤责燥鄄贼藻灶贼泽贼藻皂糟藻造造泽枣燥则贼怎皂燥则贼葬则早藻贼藻凿凿藻造蚤增藻则赠燥枣早燥造凿灶葬灶燥则燥凿泽葬灶凿藻灶鄄澡葬灶糟藻凿责澡燥贼燥贼澡藻则皂葬造贼澡藻则葬责赠 [ 允 ] 援粤悦杂晕葬灶燥, 圆园员远, 员园 ( 圆 ): 圆猿苑缘鄄圆猿愿缘援阅韵陨 : 员园援员园圆员辕葬糟泽灶葬灶燥援缘遭园苑员苑圆援 [ 怨 ] 摇在匀粤晕郧悦, 蕴陨悦, 蕴陨哉再, 藻贼葬造援郧燥造凿晕葬灶燥糟造怎泽贼藻则泽鄄遭葬泽藻凿灶葬灶燥鄄责则燥遭藻泽枣燥则泽蚤皂怎造贼葬灶藻燥怎泽枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻蚤皂葬早蚤灶早葬灶凿贼葬则早藻贼藻凿责澡燥贼燥凿赠鄄灶葬皂蚤糟贼澡藻则葬责赠憎蚤贼澡泽怎责藻则蚤燥则责藻灶藻贼则葬贼蚤燥灶葬灶凿则藻贼藻灶贼蚤燥灶遭藻澡葬增蚤燥则蚤灶贼怎皂燥则泽 [ 允 ] 援粤凿增葬灶糟藻凿云怎灶糟贼蚤燥灶葬造酝葬贼藻则蚤葬造泽, 圆园员缘, 圆缘 ( 愿 ): 员猿员源鄄员猿圆缘援阅韵陨 : 员园援员园园圆辕葬凿枣皂援圆园员源园猿园怨缘援 [ 员园 ] 悦匀耘晕再杂, 云砸耘再宰, 运陨酝杂, 藻贼葬造援杂蚤造蚤糟葬鄄糟燥葬贼藻凿早燥造凿灶葬灶燥则燥凿泽葬泽责澡燥贼燥葬糟燥怎泽贼蚤糟泽蚤早灶葬造灶葬灶燥葬皂责造蚤枣蚤藻则泽 [ 允 ] 援晕葬灶燥蕴藻贼贼, 圆园员员, 员员 ( 圆 ): 猿源愿鄄猿缘源援阅韵陨 : 员园援员园圆员辕灶造员园源圆园园远援 [ 员员 ] 蕴陨在酝, 匀哉粤晕郧孕, 在匀粤晕郧载允, 藻贼葬造援砸郧阅鄄糟燥灶躁怎早葬贼藻凿凿藻灶鄄凿则蚤皂藻则鄄皂燥凿蚤枣蚤藻凿早燥造凿灶葬灶燥则燥凿泽枣燥则蚤灶增蚤增燥贼怎皂燥则贼葬则早藻贼蚤灶早葬灶凿责澡燥鄄贼燥贼澡藻则皂葬造贼澡藻则葬责赠 [ 允 ] 援酝燥造孕澡葬则皂, 圆园员园, 苑 ( 员 ): 怨源鄄员园源援阅韵陨 : 员园援员园圆员辕皂责怨园园员源员缘援 [ 员圆 ] 允陨粤晕郧允, 载哉晕, 宰哉悦, 藻贼葬造援栽则藻葬贼皂藻灶贼燥枣葬凿增葬灶糟藻凿早葬泽贼则蚤糟糟葬灶糟藻则遭赠糟澡藻皂燥贼澡藻则葬责赠糟燥皂遭蚤灶藻凿憎蚤贼澡葬怎贼燥造燥早燥怎泽糟赠贼燥噪蚤灶藻鄄蚤灶鄄凿怎糟藻凿噪蚤造造藻则糟藻造造泽 [ 允 ] 援粤灶贼蚤悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园园远, 圆远 ( 猿月 ): 圆圆猿苑鄄圆圆源圆援 [ 员猿 ] 砸耘栽栽陨晕郧耘砸耘, 运哉覶陨杂, 晕粤哉酝粤晕晕陨, 藻贼葬造援栽澡藻糟赠贼燥贼燥曾蚤糟责燥鄄贼藻灶贼蚤葬造燥枣蚤灶贼藻则造藻怎噪蚤灶鄄员缘鄄泽贼蚤皂怎造葬贼藻凿糟赠贼燥噪蚤灶藻鄄蚤灶凿怎糟藻凿噪蚤造造藻则糟藻造造泽葬鄄

6 苑怨源 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员远年员圆月, 圆猿 ( 远 ) 早葬蚤灶泽贼造藻怎噪藻皂蚤葬糟藻造造泽援藻贼葬造援栽澡藻糟赠贼燥贼燥曾蚤糟责燥贼藻灶贼蚤葬造燥枣蚤灶贼藻则造藻怎噪蚤灶鄄员缘鄄泽贼蚤皂怎造葬贼藻凿糟赠贼燥噪蚤灶藻鄄蚤灶凿怎糟藻凿噪蚤造造藻则糟藻造造泽葬早葬蚤灶泽贼造藻怎噪藻皂蚤葬糟藻造造泽 [ 允 ] 援悦赠贼燥贼澡藻则葬责赠, 圆园员圆, 员源 ( 员 ): 怨员鄄员园猿援阅韵陨 : 员园援猿员园怨辕员源远缘猿圆源怨援圆园员员援远员猿怨猿员援 [ 员源 ] 蕴陨悦, 蕴陨粤晕郧杂, 在匀粤晕郧悦, 藻贼葬造援粤造造燥早藻灶蚤糟凿藻灶凿则蚤贼蚤糟糟藻造造葬灶凿贼怎皂燥则糟藻造造枣怎泽藻凿增葬糟糟蚤灶藻枣燥则贼葬则早藻贼藻凿蚤皂葬早蚤灶早葬灶凿藻灶澡葬灶糟藻凿蚤皂皂怎鄄灶燥贼澡藻则葬责藻怎贼蚤糟藻枣枣蚤糟葬糟赠燥枣早葬泽贼则蚤糟糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援月蚤燥皂葬贼藻则蚤葬造泽, 圆园员缘, 缘源 : 员苑苑鄄员愿苑援阅韵陨 : 员园援员园员远辕躁援遭蚤燥皂葬贼藻则蚤葬造泽援圆园员缘援园猿援园圆源援 [ 员缘 ] 悦粤孕孕耘蕴悦, 匀哉耘晕耘悦运耘杂, 杂哉耘酝酝耘砸耘砸粤, 藻贼葬造援悦赠贼燥贼燥曾蚤糟责燥贼藻灶贼蚤葬造燥枣陨蕴鄄员缘鄄葬糟贼蚤增葬贼藻凿糟赠贼燥噪蚤灶藻鄄蚤灶凿怎糟藻凿噪蚤造造藻则糟藻造造泽葬早葬蚤灶泽贼澡怎鄄皂葬灶灶藻怎则燥遭造葬泽贼燥皂葬糟藻造造泽 [ 允辕韵蕴 ] 援孕藻凿蚤葬贼则月造燥燥凿悦葬灶糟藻则, 圆园员远, 远猿 ( 员圆 ): 圆圆猿园鄄圆圆猿怨 [ 圆园员远鄄园愿鄄园员 ] 援澡贼贼责 : 辕辕燥灶造蚤灶藻造蚤遭则葬则赠援憎蚤造藻赠援糟燥皂辕憎燥造员辕凿燥蚤辕员园援员园园圆辕责遭糟援圆远员源苑辕枣怎造造援阅韵陨 : 员园援员园园圆辕责遭糟援圆远员源苑援 [ 员远 ] 宰粤晕郧悦, 月粤韵悦, 蕴陨粤晕郧杂, 藻贼葬造援砸郧阅鄄糟燥灶躁怎早葬贼藻凿泽蚤造蚤糟葬鄄糟燥葬贼藻凿早燥造凿灶葬灶燥则燥凿泽燥灶贼澡藻泽怎则枣葬糟藻燥枣糟葬则遭燥灶灶葬灶燥贼怎遭藻泽枣燥则贼葬则早藻贼藻凿责澡燥贼燥鄄葬糟燥怎泽贼蚤糟蚤皂葬早蚤灶早燥枣早葬泽贼则蚤糟糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援晕葬灶燥泽糟葬造藻砸藻泽蕴藻贼贼, 圆园员源, 怨 ( 员 ): 圆远源援阅韵陨 : 员园援员员愿远辕员缘缘远鄄圆苑远载鄄怨鄄圆远源援 [ 员苑 ] 再粤晕郧再, 在匀粤晕郧允, 载陨粤云, 藻贼葬造援匀怎皂葬灶悦陨运糟藻造造泽造燥葬凿藻凿憎蚤贼澡葬怎灶葬灶燥则燥凿泽葬泽葬贼澡藻则葬灶燥泽贼蚤糟责造葬贼枣燥则皂枣燥则贼葬则早藻贼藻凿责澡燥贼燥葬糟燥怎泽贼蚤糟蚤皂鄄葬早蚤灶早葬灶凿藻灶澡葬灶糟藻凿蚤皂皂怎灶燥贼澡藻则葬责赠葬灶凿责澡燥贼燥贼澡藻则皂葬造贼澡藻则葬责赠 [ 允 ] 援 晕葬灶燥泽糟葬造藻砸藻泽蕴藻贼贼, 圆园员远, 员员 ( 员 ): 圆愿缘援阅韵陨 : 员园援员员愿远辕泽员员远苑员鄄园员远鄄员源远愿鄄愿援 [ 员愿 ] 允陨粤匝, 郧耘允, 蕴陨哉宰, 藻贼葬造援郧燥造凿灶葬灶燥则燥凿岳泽蚤造蚤糟葬鄄糟葬则遭燥灶凿燥贼泽葬泽皂怎造贼蚤枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造责澡燥贼燥贼澡藻则葬灶燥泽贼蚤糟泽枣燥则枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻葬灶凿责澡燥贼燥葬糟燥怎泽贼蚤糟蚤皂葬早蚤灶早鄄早怎蚤凿藻凿泽赠灶藻则早蚤泽贼蚤糟责澡燥贼燥凿赠灶葬皂蚤糟辕责澡燥贼燥贼澡藻则皂葬造贼澡藻则葬责赠 [ 允 ] 援晕葬灶燥泽糟葬造藻, 圆园员远, 愿 ( 圆远 ): 员猿园远苑鄄员猿园苑苑援阅韵陨 : 员园援员园猿怨辕糟远灶则园猿源缘怨凿援 [ 员怨 ] 匝陨晕匀, 在匀粤韵再, 在匀粤晕郧允, 藻贼葬造援陨灶枣造葬皂皂葬贼蚤燥灶鄄贼葬则早藻贼藻凿早燥造凿灶葬灶燥则燥凿泽枣燥则蚤灶贼则葬增葬泽糟怎造葬则责澡燥贼燥葬糟燥怎泽贼蚤糟蚤皂葬早蚤灶早凿藻贼藻糟贼蚤燥灶燥枣皂葬贼则蚤曾皂藻贼葬造造燥责则燥贼藻蚤灶葬泽藻鄄圆 ( 酝酝孕圆 ) 蚤灶葬贼澡藻则燥泽糟造藻则燥贼蚤糟责造葬择怎藻泽 [ 允辕韵蕴 ] 援晕葬灶燥皂藻凿蚤糟蚤灶藻, 圆园员远, 员圆 ( 苑 ): 员苑远缘鄄员苑苑源 [ 圆园员远鄄园愿鄄园员 ] 援澡贼贼责 : 辕辕凿曾援凿燥蚤援燥则早辕员园援员园员远辕躁援灶葬灶燥援圆园员远援园圆援园员远援阅韵陨 : 员园援员园员远辕躁援灶葬灶燥援圆园员远援园圆援园员远援 [ 圆园 ] 在匀韵晕郧允, 再粤晕郧杂, 宰耘晕蕴, 藻贼葬造援陨皂葬早蚤灶早鄄早怎蚤凿藻凿责澡燥贼燥葬糟燥怎泽贼蚤糟凿则怎早则藻造藻葬泽藻葬灶凿泽赠灶藻则早蚤泽贼蚤糟糟澡藻皂燥鄄责澡燥贼燥葬糟燥怎泽贼蚤糟贼澡藻则葬责赠憎蚤贼澡责葬鄄糟造蚤贼葬曾藻造鄄糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早灶葬灶燥责葬则贼蚤糟造藻泽 [ 允 ] 援允悦燥灶贼则燥造砸藻造藻葬泽藻, 圆园员远, 圆圆远 : 苑苑鄄愿苑援阅韵陨 : 员园援员园员远辕躁援躁糟燥灶则藻造援圆园员远援园圆援园员园援 [ 收稿日期 ] 摇圆园员远原园苑原圆园 [ 修回日期 ] 摇圆园员远原员园原圆愿 [ 本文编辑 ] 摇宋关鸿 檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿 读者 作者 编者 常见参考文献著录格式示例 员摇专著著录格式 : 主要责任者援题名 [ 文献类型标志 ] 援其他责任者 ( 例如翻译者 ) 援版本项 ( 员版不著录 ) 援出版地 : 出版者, 出版年 : 起页鄄止页援 [ 员 ] 摇粤月砸粤酝杂宰月, 月耘耘砸杂酝匀, 月耘砸运韵宰砸援默克老年病手册 [ 酝 ] 援陈灏珠, 王赞舜, 刘厚鈺, 等援译援第圆版援北京 : 人民卫生出版社, 员怨怨远 : 圆圆鄄圆缘援圆摇专著析出文献著录格式 : 析出文献主要责任者援文献题名 [ 文献类型标志 ] 辕辕专著主要责任者援专著题名援版本项援出版地 : 出版者, 出版年 : 起页鄄止页援 [ 员 ] 摇宰耘陨晕杂栽耘陨晕蕴, 杂宰粤砸栽在酝晕援孕葬贼澡燥早藻灶蚤糟责则燥责藻则贼蚤藻泽燥枣蚤灶增葬凿蚤灶早皂蚤糟则燥燥则早葬灶蚤泽皂泽 [ 酝 ] 辕辕杂韵阅耘砸酝粤晕宰粤允则, 杂韵阅耘酝粤晕宰粤援孕葬贼澡燥造燥早蚤糟责澡赠泽蚤燥造燥早赠 : 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂泽燥枣凿蚤泽藻葬泽藻援孕澡蚤造葬凿藻造责澡蚤葬 : 杂葬怎灶凿藻则泽, 员怨苑源 : 源缘苑鄄源苑圆援猿摇期刊文献著录格式 : 主要责任者援题名 [ 文献类型标志 ] 援刊名, 出版年, 卷号 ( 期号 ): 起页鄄止页援 [ 员 ] 摇晕韵月蕴耘杂运晕, 郧哉粤晕在, 载陨粤韵运, 藻贼葬造援栽澡藻葬糟贼蚤增藻糟燥灶枣燥则皂葬贼蚤燥灶燥枣遭藻贼葬鄄葬则则藻泽贼蚤灶员 : 凿蚤则藻糟贼藻增蚤凿藻灶糟藻枣燥则贼澡藻责澡燥泽责澡葬贼藻泽藻灶泽燥则蚤灶贼澡藻晕鄄凿燥皂葬蚤灶葬灶凿糟燥灶枣燥则皂葬贼蚤燥灶葬造凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽蚤灶贼澡藻葬糟贼蚤增藻泽贼葬贼藻泽燥枣遭藻贼葬鄄葬则则藻泽贼蚤灶泽员葬灶凿鄄圆 [ 允 ] 援允月蚤燥造悦澡藻皂, 圆园园苑, 圆愿圆 ( 圆怨 ): 圆员猿苑园鄄圆员猿愿员援阅韵陨 : 员园援员园苑源辕躁遭糟援酝远员员源愿猿圆园园援源摇专利文献著录格式 : 专利申请者或所有者援专刊题名 : 专利国别, 专利号 [ 文献类型标志 ] 援公告日期或公开日期援 [ 员 ] 摇钱其军, 李琳芳, 吴红平, 等援一种多功能免疫杀伤转基因细胞 ( 孕陨运 ) 其制备方法及用途: 中国, 圆园员园员园员源怨远愿猿怨 [ 孕 ] 援圆园员园鄄员园鄄员源援缘摇学位论文著录格式 : 责任者援题名 [ 文献类型标志 ] 援学位授予单位所在地 : 学位授予单位, 年援 [ 员 ] 摇曹新广援悦葬贼澡藻责泽蚤灶蕴和悦赠泽贼葬贼蚤灶月的表达与大肠癌生物学行为的关系 [ 阅 ] 援郑州, 郑州大学, 圆园园苑援远摇电子文献著录格式 : 主要责任者援题名 [ 文献类型标志辕文献载体标志 ] 援刊名, 出版年, 卷号 ( 期号 ): 起页鄄止页 ( 更新或修改日期 )[ 引用日期 ] 援获取和访问路径援 [ 员 ] 摇运粤蕴韵杂酝, 蕴耘灾陨晕耘月蕴, 孕韵砸栽耘砸阅蕴, 藻贼葬造援栽糟藻造造泽憎蚤贼澡糟澡蚤皂藻则蚤糟葬灶贼蚤早藻灶则藻糟藻责贼燥则泽澡葬增藻责燥贼藻灶贼葬灶贼蚤贼怎皂燥则藻枣枣藻糟贼泽葬灶凿糟葬灶藻泽贼葬遭造蚤泽澡皂藻皂燥则赠蚤灶责葬贼蚤藻灶贼泽憎蚤贼澡葬凿增葬灶糟藻凿造藻怎噪藻皂蚤葬 [ 允辕韵蕴 ] 援杂糟蚤栽则葬灶泽造酝藻凿, 圆园员员, 猿 : 怨缘则葬苑猿 [ 圆园员远鄄园远鄄园愿 ] 援澡贼贼责 : 辕辕泽贼皂援泽糟蚤藻灶糟藻皂葬早援燥则早辕糟燥灶贼藻灶贼辕猿辕怨缘辕怨缘则葬苑猿援造燥灶早援阅韵陨 : 员园援员员圆远辕泽糟蚤贼则葬灶泽造皂藻凿援猿园园圆愿源圆援 [ 圆 ] 摇匀韵孕运陨晕杂韵晕粤援哉晕陨酝粤砸悦葬灶凿皂藻贼葬凿葬贼葬 : 阅怎遭造蚤灶糟燥则藻 [ 耘月辕韵蕴 ] 援 [ 员怨怨怨鄄员圆鄄园愿 ] 援澡贼贼责 : 辕辕憎憎憎援蚤枣造葬援燥则早辕陨灾辕蚤枣造葬远源辕员猿愿鄄员远员藻援澡贼皂援