缘怨园 治疗效果 ; 另一方面, 基因测序只需患者的血液甚至唾液, 无需传统病理切片, 可以减少诊疗过程中对患者身体的损伤而对疾病做出诊断和治疗与预后评估 作为精准医疗新技术的 液体活检, 被国际学术界评为 圆园员缘年度十大突破技术 [ 猿 ] 圆园员远年远月员日美国食品药品管理局 ( 云阅粤 )

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1 中国肿瘤生物治疗杂志摇澡贼贼责 : 辕辕憎憎憎援遭蚤燥贼澡藻则援燥则早悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则, 韵糟贼援圆园员远, 灾燥造援圆猿, 晕燥援缘 缘愿怨 阅韵陨 : 员园援猿愿苑圆辕躁援蚤泽泽灶援员园园苑鄄猿愿缘载援圆园员远援园缘援园园员 专家论坛 ( 专题 ) 液体活检和肿瘤精准医疗 许扬梅, 郑秋红 ( 福建医科大学附属肿瘤医院, 福建省肿瘤医院国家临床重点肿瘤专科福建省肿瘤生物治疗重点实验室, 福建福州猿缘园园员源 ) [ 摘摇要 ] 摇精准医疗新技术 液体活检, 既有极高的科研价值, 又具备助力推进精准医疗临床实践的巨大潜能 它可用于癌症早期筛查 诊断 监控 治疗方案指导和疗效评估等众多领域, 液体活检的优势使其成为最具发展潜力的肿瘤诊疗手段 本文围绕液体活检在临床肿瘤精准医疗的应用前景, 从概念 特点 研究方法和个体化肿瘤治疗 临床应用及研究现状等方面进行阐述, 展示了液体活检巨大的临床应用价值和市场前景 [ 关键词 ] 摇液体活检 ; 精准医疗 ; 循环肿瘤细胞 ; 循环肿瘤阅晕粤 ; 循环肿瘤干细胞 [ 中图分类号 ] 摇砸苑猿园援圆猿员 ; 砸苑猿园援源猿摇摇摇 [ 文献标识码 ] 摇粤摇摇摇摇 [ 文章编号 ] 摇员园园苑鄄猿愿缘载 ( 圆园员远 ) 园缘鄄园缘愿怨鄄园远 蕴蚤择怎蚤凿遭蚤燥责泽赠蚤灶责则藻糟蚤泽蚤燥灶皂藻凿蚤糟蚤灶藻枣燥则燥灶糟燥造燥早赠 载哉再葬灶早皂藻蚤, 在匀耘晕郧匝蚤怎澡燥灶早 ( 粤枣枣蚤造蚤葬贼藻凿悦葬灶糟藻则匀燥泽责蚤贼葬造燥枣云怎躁蚤葬灶酝藻凿蚤糟葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠, 栽怎皂燥则匀燥泽责蚤贼葬造燥枣云怎躁蚤葬灶孕则燥增蚤灶糟藻, 晕葬贼蚤燥灶葬造悦造蚤灶蚤糟葬造运藻赠杂责藻糟蚤葬造贼赠燥枣悦葬灶糟藻则, 云怎躁蚤葬灶孕则燥增蚤灶糟蚤葬造运藻赠蕴葬遭燥则葬贼燥则赠燥枣栽怎皂燥则月蚤燥贼澡藻则葬责赠, 云怎扎澡燥怎猿缘园园员源, 云怎躁蚤葬灶, 悦澡蚤灶葬 ) [ 粤遭泽贼则葬糟贼 ] 摇粤泽葬灶藻憎贼藻糟澡灶蚤择怎藻蚤灶责则藻糟蚤泽蚤燥灶皂藻凿蚤糟蚤灶藻, 造蚤择怎蚤凿遭蚤燥责泽赠澡葬泽贼则藻皂藻灶凿燥怎泽泽糟蚤藻灶贼蚤枣蚤糟增葬造怎藻葬泽憎藻造造葬泽早则藻葬贼责燥鄄贼藻灶贼蚤葬造贼燥责怎贼枣燥则憎葬则凿贼澡藻糟造蚤灶蚤糟葬造葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶援陨贼糟葬灶遭藻葬责责造蚤藻凿蚤灶藻葬则造赠凿藻贼藻糟贼蚤燥灶, 凿蚤葬早灶燥泽蚤泽, 皂燥灶蚤贼燥则蚤灶早, 贼澡藻则葬责赠泽藻造藻糟鄄贼蚤燥灶葬灶凿藻枣枣蚤糟葬糟赠藻增葬造怎葬贼蚤燥灶燥枣糟葬灶糟藻则援栽澡藻葬凿增葬灶贼葬早藻泽燥枣造蚤择怎蚤凿遭蚤燥责泽赠藻灶葬遭造藻蚤贼泽责则燥皂蚤泽蚤灶早则燥造藻葬泽葬灶燥灶蚤灶增葬泽蚤增藻贼藻糟澡鄄灶蚤择怎藻援栽澡蚤泽葬则贼蚤糟造藻藻造怎糟蚤凿葬贼藻泽贼澡藻葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶责则燥泽责藻糟贼燥枣造蚤择怎蚤凿遭蚤燥责泽赠枣则燥皂贼澡藻增蚤藻憎泽燥枣凿藻枣蚤灶蚤贼蚤燥灶, 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽, 皂藻贼澡鄄燥凿燥造燥早赠葬灶凿糟造蚤灶蚤糟葬造则藻泽藻葬则糟澡燥枣责藻则泽燥灶葬造蚤扎藻凿燥灶糟燥造燥早赠贼则藻葬贼皂藻灶贼, 泽澡燥憎蚤灶早蚤贼泽早则藻葬贼蚤皂责燥则贼葬灶糟藻葬灶凿责燥贼藻灶贼蚤葬造援 [ 运藻赠憎燥则凿泽 ] 摇造蚤择怎蚤凿遭蚤燥责泽赠 ; 责则藻糟蚤泽蚤燥灶皂藻凿蚤糟蚤灶藻 ; 糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则糟藻造造泽 ; 糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则阅晕粤 ; 糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则泽贼藻皂糟藻造造泽 [ 悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则, 圆园员远, 圆猿 ( 缘 ): 缘愿怨鄄缘怨源援阅韵陨 : 员园援猿愿苑圆辕躁援蚤泽泽灶援员园园苑鄄猿愿缘载援圆园员远援园缘援园园员 ] 摇摇 郑秋红摇福建医科大学附属肿瘤医院 福建省肿瘤研究所肿瘤分子生物学研究室主任, 福建省肿瘤生物治疗重点实验室副主任, 教授 主任医师 硕士生导师 长期从事肿瘤生物治疗临床及基础研究工作 圆园员圆年赴美国康涅狄格大学生命科学院访问研修 主持多项国家 省级科研课题, 在杂悦陨刊物上发表学术论文圆园余篇 摇摇恶性肿瘤的高度异质性使不同个体之间存在药效的差异, 肿瘤不断进化, 在不同阶段表现出不一样 [ 员的生物学特征, 给临床诊治造成了很大困扰 ] 侵袭与转移能力高的肿瘤细胞扩散至循环血后, 在特定的阶段及环境中种植于身体某些部位, 不断增殖形成转移瘤, 且表现出与原发肿瘤不一样的生物学特征 在 抗肿瘤治疗中, 转移瘤克隆进化持续发生, 抗肿瘤治疗失败继而重演 美国和中国于圆园员缘年初陆续推出了 精准医疗计划 ( 责则藻糟蚤泽蚤燥灶皂藻凿蚤糟蚤灶藻蚤灶蚤贼蚤葬贼蚤增藻 ) [ 圆 ] 精准医疗具有精准性和便捷性, 一方面通过基因测序可以找出癌症的突变基因, 迅速确定对症药物, 提升 [ 基金项目 ] 摇国家临床重点专科建设项目资助 ; 福建省临床重点专科建设项目资助 ; 福建省医学创新项目 ( 晕燥援圆园员缘鄄悦载月鄄源 ) 孕则燥躁藻糟贼泽怎责责燥则贼藻凿遭赠贼澡藻晕葬贼蚤燥灶葬造悦造蚤灶蚤糟葬造运藻赠杂责藻糟蚤葬造贼赠悦燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶孕则燥早则葬皂 ; 运藻赠悦造蚤灶蚤糟葬造杂责藻糟蚤葬造贼赠阅蚤泽糟蚤责造蚤灶藻悦燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶孕则燥早则葬皂燥枣云怎躁蚤葬灶葬灶凿云怎鄄躁蚤葬灶皂藻凿蚤糟葬造蚤灶灶燥增葬贼蚤燥灶责则燥躁藻糟贼 ( 晕燥援圆园员缘鄄悦载月鄄源 ) [ 作者简介 ] 摇许扬梅 ( 员怨愿员原 ), 女, 湖北新洲人, 硕士, 主管技师, 主要从事肿瘤免疫治疗 消化道肿瘤干细胞和循环肿瘤细胞的基础研究, 耘鄄皂葬蚤造 : 赠赠皂增蚤糟贼燥则蚤葬愿员园岳澡燥贼皂葬蚤造援糟燥皂 [ 通信作者 ] 摇郑秋红 ( 在匀耘晕郧匝蚤怎澡燥灶早, 糟燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早葬怎贼澡燥则 ), 耘鄄皂葬蚤造 : 扎择澡圆愿缘愿岳枣燥曾皂葬蚤造援糟燥皂 [ 优先发表 ] 摇

2 缘怨园 治疗效果 ; 另一方面, 基因测序只需患者的血液甚至唾液, 无需传统病理切片, 可以减少诊疗过程中对患者身体的损伤而对疾病做出诊断和治疗与预后评估 作为精准医疗新技术的 液体活检, 被国际学术界评为 圆园员缘年度十大突破技术 [ 猿 ] 圆园员远年远月员日美国食品药品管理局 ( 云阅粤 ) 批准了第一个基于血液样 [ 源本的基因检测技术 ], 该技术能够从非小细胞肺癌 ( 灶燥灶鄄泽皂葬造造糟藻造造造怎灶早糟葬灶糟藻则, 晕杂悦蕴悦 ) 患者血液中直接检测耘郧云砸基因突变 液体活检的正式商用化对于肿瘤的个体化医疗具有重要意义, 将为肿瘤精准医疗提供强有力的资金与技术支持 目前液体活检的主要包括检测血液中游离的循环肿瘤细胞 ( 糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则糟藻造造, 悦栽悦 ) 循环肿瘤阅晕粤 ( 糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则阅晕粤, 糟贼阅晕粤 ) 和外泌体等, 本文重点论述糟贼阅晕粤和悦栽悦 员摇糟贼阅晕粤与肿瘤精准治疗员援员摇糟贼阅晕粤的检测人的血浆中游离存在高度片段化的游离阅晕粤 ( 糟藻造造鄄枣则藻藻阅晕粤, 糟枣阅晕粤 ), 它们有的来自于正常细 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员远年员园月, 圆猿 ( 缘 ) 胞, 有的来自于异常细胞 ( 如肿瘤细胞 ), 还有部分来自于人体外部 ( 如病毒阅晕粤 ) 糟贼阅晕粤是人体血液循环系统中不断流动的携带一定特征 ( 包括突变 缺少 插入 重排 拷贝数异常和甲基化等 ) 的来自肿瘤基因的阅晕粤片段 糟贼阅晕粤是属于糟枣阅晕粤的一种类型, 是一种特征性的肿瘤生物标志物, 可以被定性 定量和追踪 糟贼阅晕粤在肿瘤疾病 ( 甚至进展期 ) 的含量非常稀少, 新的技术革新可以从糟枣阅晕粤 中区别目标糟贼阅晕粤并加以检测 目前糟贼阅晕粤的主要检测方法是孕悦砸和二代测序 ( 灶藻曾贼鄄早藻灶藻则葬贼蚤燥灶泽藻鄄择怎藻灶糟藻, 晕郧杂 ) 技术 ( 表员 ) [ 缘 ] 摇摇圆园员远年哈佛医学院杂葬糟澡藻则等利用微滴式数字孕悦砸技术 ( 凿则燥责造藻贼凿蚤早蚤贼葬造责燥造赠皂藻则葬泽藻糟澡葬蚤灶则藻葬糟鄄贼蚤燥灶, 凿凿孕悦砸 ) 从血浆中检测导致晕杂悦蕴悦的两种关键基因耘郧云砸和大鼠肉瘤致癌因子基因 ( 噪蚤则泽贼藻灶则葬贼泽葬则糟燥皂葬增蚤则葬造燥灶糟燥早藻灶藻, 运砸粤杂 ) 致病突变, 进而帮助临床医生为患者制定针对上述两种突变的化疗药单 血浆基因分型在临床测试中具有不可估量的应用潜力, 这种癌症常规基因标志的快速与无创筛查可以避免传统侵入性的活组织检查 表员摇 常用的糟贼阅晕粤检测方法 原摇 理 方摇 法 检测变异类型 优摇 点 缺摇 点 基于孕悦砸 ( 员 ) 晕藻泽贼藻凿则藻葬造鄄贼蚤皂藻孕悦砸 ;( 圆 ) 粤砸酝杂辕杂糟燥则责蚤燥灶孕悦砸 ;( 猿 ) 孕悦砸鄄杂杂悦孕 ;( 源 ) 酝怎贼葬灶贼葬造造藻造藻鄄泽责藻糟蚤枣蚤糟孕悦砸 ;( 缘 ) 酝葬泽泽泽责藻糟贼则燥皂藻鄄贼则赠 ;( 远 ) 月蚤鄄孕粤孕鄄粤葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 ;( 苑 ) ( 员耀耀耀耀耀耀耀远 ) 检测如耘郧云砸等已知点突变 ;( 苑耀耀耀耀耀耀耀愿 ) 检测已知点突变和基因组重排 ( 员耀耀耀耀耀耀耀远 ) 操作简单易行, 成本低 ;( 苑耀耀耀耀耀耀耀愿 ) ( 员耀耀耀耀耀耀耀远 ) 敏感性低, 只能检测有限的基因位点 ;( 苑耀耀耀耀耀耀耀愿 ) 只能检测有限的基因位点 阅凿孕悦砸 ;( 愿 ) 月耘粤酝蚤灶早 敏感性高 目标深度测序 ( 员 ) 杂葬枣藻杂藻责 ;( 圆 ) 栽葬皂杂藻择 ;( 猿 ) 陨燥灶鄄粤皂鄄 在目标区域杂晕灾泽 敏感性高 较昂贵 责造蚤杂藻择 ;( 源 ) 悦粤孕孕鄄杂藻择 ;( 缘 ) 韵灶栽葬则早藻贼 悦晕灾泽和重排 全基因组测序 ( 员 ) 阅蚤早蚤贼葬造噪葬则赠燥贼赠责蚤灶早 ;( 圆 ) 孕粤砸耘 基因组范围杂晕灾泽 悦晕灾泽和重排 应用范围广泛 很昂贵 摇摇晕郧杂技术的发展使糟贼阅晕粤中肿瘤特异性的基因突变或者拷贝数异常 ( 糟燥责赠灶怎皂遭藻则增葬则蚤葬贼蚤燥灶泽, 悦晕灾 ) 通过糟贼阅晕粤检测成为可能, 这种高通量基因检测方式具有非常高的敏感性, 并能精确地捕捉到临床治疗过程中患者体内微量糟贼阅晕粤的变化, 是目 [ 远 ] 前公认最有效的分析方法 晕藻憎皂葬灶等利用数字错误抑制 ( 蚤灶贼藻早则葬贼藻凿凿蚤早蚤贼葬造藻则则燥则泽怎责责则藻泽泽蚤燥灶, 陨阅耘杂 ) 的方法和癌症个体化深度测序分析方法 ( 糟葬灶糟藻则责藻则泽燥灶葬造蚤扎藻凿责则燥枣蚤造蚤灶早遭赠凿藻藻责泽藻择怎藻灶糟蚤灶早, 悦粤孕孕鄄泽藻择 ) 相结合, 检测到低至园援园园源豫的突变等位基因, 通过对首次和以后多次糟贼阅晕粤检测的对比, 能及时发现 [ 苑肿瘤基因突变 据报道 ], 采用糟枣阅晕粤片段谱系分 析, 可以替代直接寻找阅晕粤特殊突变的方法, 其原理是通过游离阅晕粤深度测序得出一个基因组范围内核小体占位图谱, 根据该图谱可以鉴定细胞种类来源 ( 例如淋巴类 髓样细胞 骨髓和癌样组织 ), 该技术还能在更广阔的临床病症中起非侵袭性监测作用 然而, 晕郧杂也存在一些不足之处, 由这些技术带来的昂贵费用 庞大数据处理以及高质量阅晕粤样本的依赖是目前需要克服的问题 员援圆摇 糟贼阅晕粤检测在肿瘤诊疗中的应用 [ 远鄄愿 ] 研究证实, 肿瘤患者糟贼阅晕粤所携带的肿瘤基因组信息与肿瘤组织具有良好的一致性, 能克服常规肿瘤组织活检所无法突破的肿瘤异质性问题

3 许扬梅, 等援液体活检和肿瘤精准医疗 通过糟贼阅晕粤检测, 能帮助实时动态监测肿瘤原发灶及转移复发灶基因组信息, 协助早期诊断 疗效监测和预后判断, 也有助于靶向治疗适应证的评估, 从而 [ 怨 ] 推进精准医疗的实施 例如, 阅葬憎泽燥灶等利用糟贼阅鄄晕粤成功诊断了圆怨辕猿园例乳腺癌患者, 敏感性可达 [ 员园 ] 怨苑豫 杂责蚤灶凿造藻则等在相应肿瘤患者的糟贼阅晕粤中进行药物敏感的突变位点运砸粤杂和鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体 ( 增鄄砸葬枣皂怎则蚤灶藻泽葬则糟燥皂葬增蚤则葬造燥灶糟燥早藻灶藻澡燥皂燥造燥早, 月砸粤云 ) 检测, 为临床药物的筛选提供指导 [ 员员 ] 意见 杂贼藻枣枣藻灶泽藻灶等对员源源例具有多重耐药性的上皮卵巢癌患者进行研究, 量化化疗过程中所收集的患者糟贼阅晕粤, 结果提示糟贼阅晕粤水平与无进展生存期和总生存期呈显著负相关 作为液体活检的新手段, 糟贼阅晕粤检测优点在于 : 对疾病负荷量的检测更加敏感 ; 可以预测特定耐药位点 ; 可以和悦栽悦互补共同监测手术及放化疗后微小残余灶 糟贼阅晕粤不足之处在于 : 无法观察细胞表型 ; 无法进行细胞功能实验 ; 检测结果有假阳性 ( 老年人或频发良性病变时正常组织发生的肿瘤相关基因变异 ) 和假阴性 ( 只能检测特定突变 ) 总之, 糟贼阅晕粤检测在肿瘤诊疗领域具有广阔的应用前景, 也是推动肿瘤基础研究进展的重要助力 圆摇 圆援员摇 悦栽悦与肿瘤精准治疗 悦栽悦的富集 检测和分析 悦栽悦富集方法主要分为两类 : 一是利用其物理学特征, 比如大小 密度 电荷及可塑性等, 采用密度梯度离心法 膜过滤法 介电电泳等方法加以分选 ; 二是利用其生物学特性, 比如抗原表达 蛋白分泌及侵袭性等, 根据其表面标志物如耘责悦粤酝 悦运 悦阅源缘 等, 通过免疫磁珠 流式细胞仪和悦栽悦检测系统来 [ 员圆检测和捕获细胞 ] [ 员猿 ] 美国麻省总医院研制了一种融合了微流控分离芯片 磁电泳与白细胞去除技术的非抗原依赖的悦栽悦分离装置, 消除了上皮鄄间质转化 ( 藻责蚤贼澡藻造蚤葬造鄄皂藻泽燥贼澡藻造蚤怎皂贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶, 耘酝栽 ) 表型变化的干扰, 提高了分离效率, 而且能保持细胞的形态与性质, 便于后续的分型分析 体外培养 [ 员源悦栽悦也是一种富集方式 ] 磁性纳米颗粒作为纳米材料的一种, 也越来越多地用于悦栽悦的鉴定和捕 [ 员远鄄员苑获 ] 国家纳米科学中心的胡志远教授研究 [ 员远 ] 组利用纳米加工和微流控技术构建的悦栽悦捕获 [ 员愿 ] 微孔阵列, 可以准确获取单个细胞 孕则葬皂葬灶蚤噪等 利用多色荧光磁性纳米探针可以分析悦栽悦中异质性细胞并选择性捕获 对分离出来的悦栽悦需要进行表型 基因型分析 与功能鉴定 悦栽悦的表型主要通过免疫荧光方法分析其表面标志物 免疫斑点法通过检测细胞在短时间培养中分泌 脱落或释放的蛋白质, 对有功能活性的悦栽悦进行评估 原位杂交技术可用于检测悦栽悦 的基因扩增与基因重排的情况 砸栽鄄孕悦砸和芯片方法用于检测悦栽悦中高表达的皂砸晕粤或突变性质的基因 单细胞全基因组测序技术是在单细胞水平对全基因组进行扩增与测序的一项新技术, 用于分析 悦栽悦的基因突变与基因组异常等 [ 员怨 ] 圆援圆摇 悦栽悦检测在肿瘤诊疗中的应用 缘怨员 圆援圆援员摇疗效评估 [ 圆园 ] ( 员 ) 手术疗效评估摇蕴怎等采用择孕悦砸技术发现术后悦栽悦持续出现, 提示结直肠癌患者术后预后 [ 圆员 ] 不良 晕藻泽贼藻则怎噪等运用择孕悦砸技术发现, 对于术前接受过短期放疗的结直肠癌患者, 术前悦栽悦水平不能评价预后, 而术后苑凿的悦栽悦水平是局部转移的独 [ 圆圆 ] 立预后因子 郧葬造蚤扎蚤葬等发现, 术后高悦栽悦数目提 [ 圆猿 ] 示结直肠癌患者预后不良 孕藻葬糟澡等对员源篇文献中员愿源员例根治性结直肠癌手术患者的酝藻贼葬分析显示, 中位随访时间猿远耀耀耀耀耀耀耀猿愿个月, 平均悦栽悦检出率为 ( 猿猿援源依猿援远 ) 豫 ; 术后圆源澡后检测到悦栽悦是预测肿瘤早期复发的独立因素 ; 但是未发现围手术期悦栽悦与结直肠癌预后相关 [ 圆源 ] ( 圆 ) 化疗疗效评估摇月蚤葬灶等报道乳腺癌患者在接受化疗 ( 白蛋白结合型紫杉醇垣卡培他滨垣 曲妥珠单抗 ) 前后悦栽悦的变化, 治疗前悦栽悦数目猿 垣个 ( 其中圆个悦栽悦为匀耘砸鄄圆 ); 治疗员周期后悦栽悦 迅速下降至园个 远个周期治疗后病理学完全缓解, 证实悦栽悦值在乳腺癌治疗早期发生显著变化, [ 圆缘 ] 能够准确地预示疗效 郧燥造凿噪燥则灶等报道, 接受多西他赛联合阿曲生坦治疗的转移性去势抵抗性前列腺癌患者, 基线悦栽悦数量可预测预后, 猿周时悦栽悦 升高提示总生存较差, 有望作为指导优化治疗的良好指标 转移性乳腺癌和前列腺癌等患者经抗癌治疗有效后, 悦栽悦计数常由高变低 如悦栽悦计数在治疗后从低升高, 常预示肿瘤患者疗效欠佳 病情恶化 生存期缩短 比较肿瘤患者治疗前后的悦栽悦计数变化, 能反馈患者的疗效情况, 从而可指导制定更 [ 圆远 ] 有效的化疗方案 杂皂藻则葬早藻等在缘怨缘例可评价的转移性乳腺癌患者外周血中检测悦栽悦, 将这些患者分成粤组 ( 从初始治疗直到进展悦栽悦没有升高 ) 月 组 ( 悦栽悦最初增加, 在初始治疗圆员凿后减少 ) 和悦 组 ( 初始治疗圆员凿后持续升高 ), 发现猿组患者韵杂 分别为猿缘 圆猿和员猿个月 ( 孕约园援园员 ), 从而得出结论 : 悦栽悦可以作为化疗疗效的预后因子

4 缘怨圆 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员远年员园月, 圆猿 ( 缘 ) [ 圆苑 ] ( 猿 ) 放疗疗效评估摇研究发现, 头颈部鳞状细胞癌局部放疗可以增加血中悦栽悦数目, 可能会引发肿瘤扩散 通过对猿园例晕杂悦蕴悦患者放疗前后 悦栽悦数目检测, 发现悦栽悦数目可以反映患者放疗的 [ 圆愿疗效 ] ( 源 ) 免疫治疗疗效评估摇近年来, 随着对机体免疫系统认识的不断深入以及生物技术的迅速发展, 免疫治疗已成为肿瘤治疗的重要手段, 成为继手术 放疗 化疗外的另一种肿瘤治疗模式 当前精准肿瘤免疫治疗更是肿瘤精准医疗的重要突破口 但是对于肿瘤免疫治疗疗效的评价众说纷纭, 尚没有理想评价标准, 传统的宰匀韵或砸耘悦陨杂栽标准不能适应肿瘤免疫治疗的评价 圆园园怨年宰匀韵推荐使用免疫相关反应评价体系 ( 蚤皂皂怎灶藻鄄则藻造葬贼藻凿则藻泽责燥灶泽藻糟则蚤贼藻鄄则蚤葬, 陨则砸悦 ) [ 圆怨 ], 该标准将可测量的新发病灶计入总肿瘤负荷, 并将其与基线肿瘤负荷进行比较, 按照 蚤则悦砸 蚤则孕砸 蚤则杂阅和蚤则孕阅来评价治疗效果 陨则砸悦为评价免疫治疗临床效应提供了一个相对好的工具, 但是对微小转移无法监测 而液体活检能有效反映患者的药效动态信息及疾病状况, 可以有效地指导患者的个体化治疗 圆园员远年美国临床肿瘤学会 ( 粤杂悦韵 ) 第缘圆届学术年会上, 有学者提到液体活检技术也可作为监测肿瘤高危人群免疫细胞治疗疗效的指标 圆园员缘年, 笔者研究团队开展对圆园例结直肠癌患者各个时间点的全程动态悦栽悦分析, 同期收集相同分期的 没有接受细胞治疗的圆园例结直肠癌患者为对照组, 以孕云杂为观察终点的前瞻性研究, 在已完成根治术的愿例患者 ( 因受国家政策影响于 圆园员远年缘月份暂停 ) 全程悦栽悦分析结果中发现 : 患者术前悦栽悦的表达水平与肿瘤的大小 栽分期 ( 浸润深度 ) 显著相关 ( 均孕约园援园缘 ); 术后悦栽悦与肿瘤的栽分期 晕分期 酝分期均具有显著相关性 ( 均孕 约园援园缘 ) 悦栽悦与免疫细胞治疗相关性的初步数据显示, 细胞治疗疗效好的患者, 其悦栽悦在细胞免疫治疗猿个周期后呈下降趋势 ( 孕约园援园缘 ), 并维持在较低水平, 悦栽悦变化可以用作为细胞治疗疗效评价的参考指标 肿瘤免疫治疗的临床疗效评价对于肿瘤免疫治疗的发展和临床应用具有十分重要的意义, 而液体活检可以成为肿瘤免疫治疗疗效评价体系中的重要指标 ( 缘 ) 个体化治疗药物选择摇悦栽悦具有与肿瘤原发灶相似的基因型和表型, 研究悦栽悦的分子分型对靶向药物治疗有指导价值 大部分乳腺癌悦栽悦的 匀耘砸鄄圆表达与原发肿瘤组织一致, 这意味着可依据 悦栽悦来指导乳腺癌靶向药物曲妥珠单抗的治疗 ; 而 小部分原发乳腺癌组织为匀耘砸鄄圆阴性的患者, 在治疗过程中检测到悦栽悦的匀耘砸鄄圆转为阳性, 在使用曲 [ 猿园妥珠单抗治疗后, 也取得了较好的疗效 ] 在个体化治疗中, 直接检测悦栽悦药物靶标的表达来指导药物治疗方案制定甚至优于检测原发肿瘤组织, 更能反映具有转移潜质的肿瘤细胞特征 圆援圆援圆摇预后评估摇悦栽悦检测系统是目前唯一已被 云阅粤 杂云阅粤批准用于乳腺癌 结直肠癌及前列腺癌的临床检测系统 从肿瘤患者抽取苑援缘皂造外周血, 检测悦栽悦数目, 如果转移性乳腺癌悦栽悦泽 缘个细胞 前列腺癌悦栽悦泽 缘个细胞 结肠癌悦栽悦泽 猿个细胞, 则提示患者预后不良 流式细胞仪也被大量用于悦栽悦研究, 并发现悦栽悦数目与多种肿瘤预后预 [ 猿员鄄猿圆测都相关 ] 笔者研究团队采用流式细胞仪进行悦栽悦检测, 不仅具有良好的敏感性 ( 可达到员伊原远员园 ) 与专一性, 并可同时使用不同荧光通道检测多个悦栽悦相关表面标志物 ; 通过分选系统收集的悦栽悦 还可进行后续培养或分子基因水平的研究 未来 悦栽悦检测技术在患者预后评估的临床应用, 仍依赖于检测方法的完善及评估标准的建立 悦栽悦检测优点在于对完整肿瘤细胞的形态鉴定并展开细胞功能研究 ( 体内和体外实验 ), 在单细胞水平研究可以分析肿瘤细胞群体异质性, 以及悦栽悦 与转移过程和疾病进展的相关性 ; 悦栽悦分析方法多样, 可以在细胞和亚细胞层次作分子功能研究, 可以和糟贼阅晕粤互补 ( 化疗后出现悦栽悦, 预示着治疗失败 ) 悦栽悦检测缺点 : 肿瘤细胞数量少 脆弱 ; 检测有假阳性 ( 耘酝栽导致上皮表面标志物表达弱或缺失 ) 和假阴性 ( 死细胞非特异性染色 ); 不同方法得出的结果缺乏比较标准 总之, 糟贼阅晕粤与悦栽悦在临床应用方面均十分广 [ 猿猿 ] 泛, 各有长短 云则藻蚤凿蚤灶等对胸部肿瘤运砸粤杂突变进行检测, 发现糟贼阅晕粤的灵敏度高于悦栽悦 酝葬凿蚤糟 [ 猿源 ] 等对猿园位转移性乳腺癌患者的研究发现 :( 员 ) 以能否检测到突变为评判标准, 糟贼阅晕粤的灵敏度高于 悦栽悦 ;( 圆 ) 悦栽悦的数量和预后密切相关, 而糟贼阅晕粤的数量则与预后的关联不大 因此, 对于液体活检而言, 问题并不在于选择悦栽悦还是糟贼阅晕粤, 关键两者能提供互补的信息, 作为检测指标均有临床价值 圆援猿摇循环肿瘤干细胞 ( 糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则泽贼藻皂糟藻造造, 悦栽杂悦 ) 检测的临床应用 圆援猿援员摇悦栽悦和悦栽杂悦的关系摇悦栽悦是远处转移发生的必要前提 然而, 并非所有的悦栽悦都能形成远 [ 猿缘 ] 处转移 有研究者提出将悦栽悦分为猿种类型 : 非致病性悦栽悦 激活性悦栽悦及转移性悦栽悦 ( 即或

5 许扬梅, 等援液体活检和肿瘤精准医疗 缘怨猿 悦栽杂悦 ), 并指出只有正在进行耘酝栽的激活性悦栽悦或已完成耘酝栽且具有干细胞特性的悦栽杂悦, 才在肿瘤转移中发挥重要作用, 而悦栽杂悦仅占悦栽悦总量的园援园员豫 由于悦栽杂悦与肿瘤转移之间的密切关系, 目前 [ 猿远这一领域已引起越来越多研究者的关注 ] 通过流式分析或砸栽鄄孕悦砸检测可在肿瘤患者外周血中发现 悦栽杂悦, 并证实在转移性肿瘤患者悦栽悦中高表达耘酝栽 和干细胞等相关基因 ( 如粤噪贼圆, 孕陨猿运 ; 栽憎蚤泽贼员,β 鄄糟葬贼藻鄄灶蚤灶, 灾蚤皂藻灶贼蚤灶, 云蚤遭则燥灶藻糟贼蚤灶 ; 酝哉悦, 悦运员怨, 悦阅源源, 悦阅员猿猿, 粤月悦郧圆, 悦阅怨园, 粤蕴阅匀员和陨悦粤酝鄄员等 ) [ 猿苑鄄猿怨 ] 圆援猿援圆摇悦栽杂悦检测应用于肿瘤个体化治疗摇有学 [ 猿苑 ] 者利用流式细胞仪进行乳腺癌患者悦栽悦辕悦栽杂悦的检测, 证实流式细胞仪具有高敏感性及专一性, 且 悦栽杂悦的数目与患者的临床分期具有相关性 再怎 [ 源园 ] 等报道, 侵袭性强的乳腺癌类型以间质性表型 悦栽悦 ( 具有耘酝栽干细胞特性 ) 为主 ; 在接受治疗后, 产生疗效的患者的间质型悦栽悦数量下降, 而病情恶化的患者的间质型悦栽悦数目明显增多 在患者治疗过程中对悦栽悦动态监测, 肿瘤患者初始对相应靶向药物疗效较好, 悦栽悦数量明显降低并以上皮型为主 ; 经 苑个月治疗后出现了耐药性及病情进展, 间质型悦栽悦 数目升高, 这说明患者悦栽悦 悦栽杂悦与药物疗效或耐药情况密切相关 因此, 肿瘤治疗过程中实时监测 悦栽悦辕悦栽杂悦泽的数量和相关分子标志物 耘酝栽表型等分子特征, 能有效反映患者的药效动态信息及疾病状况, 从而有效地指导患者的个体化治疗 猿摇结摇语 人类基因组学 药物基因组学与肿瘤生物学研究成果的涌现, 推动了肿瘤个体化医疗模式的兴起与快速发展, 精准医疗的时代已经到来 液体活检作为精准医疗新技术, 使得癌症早期阶段的筛查成为可能, 在肿瘤诊断 治疗方案指导 疗效评估及预后测评领域, 都具有极高的临床应用价值和市场前景 尤其在以预防复发和转移为主旨的肿瘤免疫治疗临床疗效评价体系方面, 液体活检将有助于肿瘤免疫治疗的科学发展和精准指导临床实践 期待通过临床医师 技术专家和政府部门三方深入探讨该技术在医疗临床实践中的应用科学, 推动液体活检在肿瘤精准诊疗中应用的规范化和合法化 [ 参考文献 ] [ 员 ] 摇月砸韵哉宰耘砸粤, 阅耘蕴粤耘砸耘月, 孕耘耘栽耘砸杂阅, 藻贼葬造援耘增葬造怎葬贼蚤燥灶葬灶凿糟燥灶泽藻择怎藻灶糟藻泽燥枣澡藻贼藻则燥早藻灶藻蚤贼赠蚤灶贼澡藻糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则糟藻造造糟燥皂责葬则贼皂藻灶贼 [ 允辕韵蕴 ] 援韵灶糟燥贼葬则早藻贼, 圆园员远, 圆园员远 [ 耘责怎遭葬澡藻葬凿燥枣 责则蚤灶贼 ][ 圆园员远鄄园愿鄄猿员 ] 援澡贼贼责 : 辕辕憎憎憎援蚤皂责葬糟贼躁燥怎则灶葬造泽援糟燥皂辕燥灶糟燥贼葬则鄄早藻贼辕蚤灶凿藻曾援责澡责? 躁燥怎则灶葬造越燥灶糟燥贼葬则早藻贼援阅韵陨 : 员园援员愿远猿圆辕燥灶糟燥贼葬则早藻贼援愿园员缘援 [ 圆 ] 摇阅韵晕郧蕴, 宰粤晕郧宰匀, 蕴陨粤, 藻贼葬造援悦造蚤灶蚤糟葬造灶藻曾贼早藻灶藻则葬贼蚤燥灶泽藻择怎藻灶鄄糟蚤灶早枣燥则责则藻糟蚤泽蚤燥灶皂藻凿蚤糟蚤灶藻蚤灶糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援悦怎则则郧藻灶燥皂蚤糟泽, 圆园员缘, 员远 ( 源 ): 圆缘猿鄄圆远猿援阅韵陨 : 员园援圆员苑源辕员猿愿怨圆园圆怨员缘远远远员缘园缘员员圆园缘猿员猿援 [ 猿 ] 摇匝陨晕在, 蕴允哉月陨酝韵灾灾粤, 在匀韵哉悦, 藻贼葬造援悦藻造造鄄枣则藻藻糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则阅晕粤蚤灶糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则, 圆园员远, 猿缘 ( 苑 ): 猿远援阅韵陨 : 员园援员员愿远辕泽源园愿愿园鄄园员远鄄园园怨圆鄄源援 [ 源 ] 摇酝哉蕴悦粤匀再晕援云阅粤韵运泽枣蚤则泽贼造蚤择怎蚤凿遭蚤燥责泽赠枣燥则造怎灶早糟葬灶糟藻则皂怎贼葬鄄贼蚤燥灶 [ 耘月辕韵蕴 ] 援 ( 圆园员远鄄园远鄄园员 )[ 圆园员远鄄园愿鄄园员 ] 援澡贼贼责 : 辕辕憎憎憎援葬蚤鄄憎藻蚤遭葬灶早援糟燥皂辕赠怎藻凿怎辕员圆员源怨圆园愿苑援澡贼皂造援 [ 缘 ] 摇杂粤悦匀耘砸粤郧, 孕粤宰耘蕴耘栽在悦, 阅粤匀蕴月耘砸郧杂耘, 藻贼葬造援孕则燥泽责藻糟鄄贼蚤增藻增葬造蚤凿葬贼蚤燥灶燥枣则葬责蚤凿责造葬泽皂葬早藻灶燥贼赠责蚤灶早枣燥则贼澡藻凿藻贼藻糟贼蚤燥灶燥枣耘郧云砸葬灶凿运砸粤杂皂怎贼葬贼蚤燥灶泽蚤灶葬凿增葬灶糟藻凿造怎灶早糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援允粤酝粤韵灶糟燥造, 圆园员远, 圆 ( 愿 ): 员园员源鄄员园圆圆援阅韵陨 : 员园援员园园员辕躁葬皂葬燥灶糟燥造援圆园员远援园员苑猿援 [ 远 ] 摇晕耘宰酝粤晕粤酝, 蕴韵灾耘允韵再粤云, 运蕴粤杂杂阅酝, 藻贼葬造援陨灶贼藻早则葬贼藻凿凿蚤早蚤贼葬造藻则则燥则泽怎责责则藻泽泽蚤燥灶枣燥则蚤皂责则燥增藻凿凿藻贼藻糟贼蚤燥灶燥枣糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则阅晕粤 [ 允 ] 援晕葬贼月蚤燥贼藻糟澡灶燥造, 圆园员远, 猿源 ( 缘 ): 缘源苑鄄缘缘缘援阅韵陨 : 员园援员园猿愿辕灶遭贼援猿缘圆园援 [ 苑 ] 摇杂晕再阅耘砸酝宰, 运陨砸悦匀耘砸酝, 匀陨蕴蕴粤允, 藻贼葬造援悦藻造造鄄枣则藻藻阅晕粤糟燥皂责则蚤泽藻泽葬灶蚤灶增蚤增燥灶怎糟造藻燥泽燥皂藻枣燥燥贼责则蚤灶贼贼澡葬贼蚤灶枣燥则皂泽蚤贼泽贼蚤泽泽怎藻泽鄄燥枣鄄燥则蚤早蚤灶 [ 允 ] 援悦藻造造, 圆园员远, 员远源 ( 员辕圆 ): 缘苑鄄远愿援阅韵陨 : 员园援员园员远辕躁援糟藻造造援圆园员缘援员员援园缘园援 [ 愿 ] 摇匀耘陨栽在耘砸耘, 哉蕴在孕, 郧耘陨郧蕴允月援悦蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则阅晕粤葬泽葬造蚤择鄄怎蚤凿遭蚤燥责泽赠枣燥则糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援悦造蚤灶悦澡藻皂, 圆园员缘, 远员 ( 员 ): 员员圆鄄员圆猿援阅韵陨 : 员园援员猿苑猿辕糟造蚤灶糟澡藻皂援圆园员源援圆圆圆远苑怨援 [ 怨 ] 摇阅粤宰杂韵晕杂允, 栽杂哉陨阅宰, 酝哉砸栽粤在粤酝, 藻贼葬造援粤灶葬造赠泽蚤泽燥枣糟蚤则糟怎鄄造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则阅晕粤贼燥皂燥灶蚤贼燥则皂藻贼葬泽贼葬贼蚤糟遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援晕耘灶早造允酝藻凿, 圆园员猿, 猿远愿 ( 员猿 ): 员员怨怨鄄员圆园怨援阅韵陨 : 员园援员园缘远辕晕耘允鄄酝燥葬员圆员猿圆远员援 [ 员园 ] 杂孕陨晕阅蕴耘砸运蕴, 孕粤蕴蕴陨杂郧粤粤砸阅晕, 灾韵郧耘蕴陨哉杂陨, 藻贼葬造援匝怎葬灶贼蚤贼葬鄄贼蚤增藻糟藻造造鄄枣则藻藻阅晕粤, 运砸粤杂, 葬灶凿月砸粤云皂怎贼葬贼蚤燥灶泽蚤灶责造葬泽皂葬枣则燥皂责葬鄄贼蚤藻灶贼泽憎蚤贼澡皂藻贼葬泽贼葬贼蚤糟糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则凿怎则蚤灶早贼则藻葬贼皂藻灶贼憎蚤贼澡糟藻贼怎曾鄄蚤皂葬遭葬灶凿蚤则蚤灶燥贼藻糟葬灶 [ 允 ] 援悦造蚤灶悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园员圆, 员愿 ( 源 ): 员员苑苑鄄员员愿缘援阅韵陨 : 员园援员员缘愿辕员园苑愿鄄园源猿圆援悦悦砸鄄员员鄄园缘远源援 [ 员员 ] 杂栽耘云云耘晕杂耘晕运阅, 酝粤阅杂耘晕悦灾, 粤晕阅耘砸杂耘晕砸云, 藻贼葬造援孕则燥早鄄灶燥泽贼蚤糟蚤皂责燥则贼葬灶糟藻燥枣糟藻造造鄄枣则藻藻阅晕粤蚤灶糟澡藻皂燥贼澡藻则葬责赠则藻泽蚤泽贼葬灶贼燥增葬则蚤鄄葬灶糟葬灶糟藻则贼则藻葬贼藻凿憎蚤贼澡遭藻增葬糟蚤扎怎皂葬遭 [ 允 ] 援耘怎则允悦葬灶糟藻则, 圆园员源, 缘园 ( 员缘 ): 圆远员造鄄圆远员愿援阅韵陨 : 员园援员园员远辕躁援藻躁糟葬援圆园员源援园远援园圆圆援 [ 员圆 ] 允韵韵杂杂耘杂粤, 郧韵砸郧耘杂栽酝, 孕粤晕栽耘蕴运援月蚤燥造燥早赠, 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶, 葬灶凿糟造蚤灶蚤糟葬造蚤皂责造蚤糟葬贼蚤燥灶泽燥枣糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则糟藻造造泽 [ 允 ] 援耘酝月韵酝燥造酝藻凿, 圆园员缘, 苑 ( 员 ): 员鄄员员援阅韵陨 : 员园援员缘圆缘圆辕藻皂皂皂援圆园员猿园猿远怨愿援 [ 员猿 ] 运粤砸粤月粤悦粤运晕酝, 杂孕哉匀蕴耘砸孕杂, 云粤悦匀陨晕云, 藻贼葬造援酝蚤糟则燥枣造怎蚤凿鄄蚤糟, 皂葬则噪藻则鄄枣则藻藻蚤泽燥造葬贼蚤燥灶燥枣糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则糟藻造造泽枣则燥皂遭造燥燥凿泽葬皂鄄责造藻泽 [ 允 ] 援晕葬贼孕则燥贼燥糟, 圆园员源, 怨 ( 猿 ): 远怨源鄄苑员园援阅韵陨 : 员园援员园猿愿辕灶责则燥贼援圆园员源援园源源援 [ 员源 ] 再哉酝, 月粤砸阅陨粤粤, 粤悦耘栽韵晕, 藻贼葬造援耘曾增蚤增燥糟怎造贼怎则藻燥枣糟蚤则糟怎造葬贼鄄蚤灶早遭则藻葬泽贼贼怎皂燥则糟藻造造泽枣燥则蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造蚤扎藻凿贼藻泽贼蚤灶早燥枣凿则怎早泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤鄄贼赠 [ 允 ] 援杂糟蚤藻灶糟藻, 圆园员源, 猿源缘 ( 远员怨猿 ): 圆员远鄄圆圆园援阅韵陨 : 员园援员员圆远辕泽糟蚤藻灶糟藻援员圆缘猿缘猿猿援 [ 员缘 ] 运陨酝杂, 匀粤晕杂, 孕粤砸运酝允, 藻贼葬造援悦蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则糟藻造造皂蚤鄄糟则燥泽藻责葬则葬贼燥则遭葬泽藻凿燥灶造葬贼藻则葬造皂葬早灶藻贼燥责澡燥则藻泽蚤泽葬灶凿蚤皂皂怎灶燥皂葬早灶藻贼蚤糟灶葬灶燥遭藻葬凿泽 [ 允 ] 援粤灶葬造悦澡藻皂, 圆园员猿, 愿缘 ( 缘 ): 圆苑苑怨鄄圆苑愿远援阅韵陨 : 员园援员园圆员辕葬糟猿园猿圆愿源怎援

6 缘怨源 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员远年员园月, 圆猿 ( 缘 ) [ 员远 ] 宰粤晕郧在, 宰粤晕郧宰, 郧耘晕郧蕴, 藻贼葬造援阅蚤泽贼蚤灶早怎蚤泽澡蚤灶早燥枣贼怎皂燥则糟藻造造鄄贼葬则早藻贼蚤灶早责藻责贼蚤凿藻造蚤早葬灶凿泽贼澡则燥怎早澡葬糟燥造燥则鄄藻灶糟燥凿蚤灶早皂蚤糟则燥葬则则葬赠 [ 允 ] 援蕴葬遭悦澡蚤责, 圆园员缘, 员缘 ( 圆源 ): 源缘员圆鄄源缘员远援阅韵陨 : 员园援员园猿怨辕糟缘造糟园员园员园葬援 [ 员苑 ] 王雷, 胡志远援循环肿瘤细胞纳米检测技术用于肿瘤早期诊断的探索 [ 允 ] 援中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员远, 圆猿 ( 缘 ): 缘怨缘鄄远园园援阅韵陨援员园援猿愿苑圆辕躁援蚤泽泽灶援员园园苑鄄猿愿缘载援圆园员远援园缘援园园圆援 [ 员愿 ] 孕砸粤酝粤晕陨运粤, 灾粤晕郧粤砸粤粤, 灾陨砸粤运粤晕耘蕴蕴韵砸耘月孕, 藻贼葬造援阅藻增藻造燥责皂藻灶贼燥枣皂怎造贼蚤枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造枣造怎燥则藻泽糟藻灶贼鄄皂葬早灶藻贼蚤糟灶葬灶燥责则燥遭藻泽枣燥则泽藻造藻糟贼蚤增藻糟葬责贼怎则蚤灶早葬灶凿皂怎造贼蚤糟燥造燥则蚤皂葬早蚤灶早燥枣澡藻贼藻则燥早藻灶藻燥怎泽糟蚤则糟怎鄄造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则糟藻造造泽 [ 允 ] 援粤悦杂粤责责造酝葬贼藻则陨灶贼藻则枣葬糟藻泽, 圆园员远, 愿 ( 圆源 ): 员缘园苑远鄄员缘园愿缘援阅韵陨 : 员园援员园圆员辕葬糟泽葬皂蚤援远遭园猿圆远圆援 [ 员怨 ] 晕陨载, 在匀哉韵酝, 杂哉在, 藻贼葬造援砸藻责则燥凿怎糟蚤遭造藻糟燥责赠灶怎皂遭藻则增葬则蚤葬贼蚤燥灶责葬贼贼藻则灶泽葬皂燥灶早泽蚤灶早造藻糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则糟藻造造泽燥枣造怎灶早糟葬灶糟藻则责葬贼蚤藻灶贼泽 [ 允 ] 援孕晕粤, 圆园员猿, 员员园 ( 缘圆 ): 圆员园愿猿鄄圆员园愿愿援阅韵陨 : 员园援员园苑猿辕责灶葬泽援员猿圆园远缘怨员员园援 [ 圆园 ] 蕴哉悦再, 哉耘晕再匀, 栽杂粤陨匀蕴, 藻贼葬造援酝燥造藻糟怎造葬则凿藻贼藻糟贼蚤燥灶燥枣责藻则鄄泽蚤泽贼藻灶贼责燥泽贼燥责藻则葬贼蚤增藻糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥怎则糟藻造造泽蚤灶泽贼葬早藻泽 Ⅱ 葬灶凿 Ⅲ 糟燥鄄造燥灶糟葬灶糟藻则责葬贼蚤藻灶贼泽增蚤葬皂怎造贼蚤责造藻遭造燥燥凿泽葬皂责造蚤灶早 : 责则燥早灶燥泽贼蚤糟泽蚤早灶蚤枣蚤鄄糟葬灶糟藻燥枣凿藻贼藻糟贼蚤燥灶枣燥则藻葬则造赠则藻造葬责泽藻 [ 允 ] 援月则允悦葬灶糟藻则, 圆园员员, 员园源 ( 苑 ): 员员苑愿鄄员员愿源援阅韵陨 : 员园援员园猿愿辕遭躁糟援圆园员员援源园援 [ 圆员 ] 晕耘杂栽耘砸哉运阅, 砸哉栽运韵宰杂运陨粤, 云粤月陨杂陨耘宰陨悦在杂, 藻贼葬造援耘增葬造怎鄄葬贼蚤燥灶燥枣责则燥早灶燥泽贼蚤糟泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶糟藻燥枣糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则糟藻造造泽凿藻贼藻糟贼蚤燥灶蚤灶则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则责葬贼蚤藻灶贼泽贼则藻葬贼藻凿憎蚤贼澡责则藻燥责藻则葬贼蚤增藻则葬凿蚤燥贼澡藻则葬责赠 : 责则燥泽责藻糟贼蚤增藻造赠糟燥造造藻糟贼藻凿皂葬贼藻则蚤葬造凿葬贼葬 [ 允辕韵蕴 ] 援月蚤燥皂藻凿砸藻泽陨灶贼, 圆园员源, 圆园员源 : 苑员圆愿圆苑 [ 圆园员远鄄园愿鄄猿员 ] 援澡贼贼责泽 : 辕辕憎憎憎援灶糟遭蚤援灶造皂援灶蚤澡援早燥增辕责皂糟辕葬则贼蚤糟造藻泽辕孕酝悦源园苑园缘苑怨辕援阅韵陨 : 员园援员员缘缘辕圆园员源辕苑员圆愿圆苑援 [ 圆圆 ] 郧粤蕴陨在陨粤郧, 郧耘酝耘陨酝, 韵砸阅陨栽哉砸粤酝, 藻贼葬造援孕燥泽贼燥责藻则葬贼蚤增藻凿藻鄄贼藻糟贼蚤燥灶燥枣糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则糟藻造造泽责则藻凿蚤糟贼泽贼怎皂燥则则藻糟怎则则藻灶糟藻蚤灶糟燥造燥则鄄藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则责葬贼蚤藻灶贼泽 [ 允 ] 援允郧葬泽贼则燥蚤灶贼藻泽贼杂怎则早, 圆园员猿, 员苑 ( 员园 ): 员愿园怨鄄员愿员愿援阅韵陨 : 员园援员园园苑辕泽员员远园缘鄄园员猿鄄圆圆缘愿鄄远援 [ 圆猿 ] 孕耘粤悦匀郧, 运陨酝悦, 在粤悦匀粤砸粤运陨杂运, 藻贼葬造援孕则燥早灶燥泽贼蚤糟泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶糟藻燥枣糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥怎则糟藻造造泽枣燥造造燥憎蚤灶早泽怎则早蚤糟葬造则藻泽藻糟贼蚤燥灶燥枣糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则泽 : 葬泽赠泽贼藻皂蚤糟则藻增蚤藻憎 [ 允 ] 援月则允悦葬灶糟藻则, 圆园员园, 员园圆 ( 怨 ): 员猿圆苑鄄员猿猿源援阅韵陨 : 员园援员园猿愿辕泽躁援遭躁糟援远远园缘远缘员 [ 圆源 ] 月陨粤晕蕴, 宰粤晕郧栽, 蕴陨哉再, 藻贼葬造援耘增葬造怎葬贼蚤燥灶燥枣贼则藻葬贼皂藻灶贼则藻泽责燥灶泽藻枣燥则遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则 : 葬则藻憎藻藻灶贼藻则蚤灶早贼澡藻藻则葬燥枣 遭蚤燥造燥早蚤糟葬造糟燥皂责造藻贼藻则藻鄄皂蚤泽泽蚤燥灶?[ 允 ] 援悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园员圆, 圆源 ( 源 ): 源园猿鄄源园苑援阅韵陨 : 员园援猿怨苑愿辕躁援蚤泽泽灶援员园园园鄄怨远园源援圆园员圆援员员援园员援 [ 圆缘 ] 郧韵蕴阅运韵砸晕粤, 耘蕴再月, 匝哉陨晕晕阅陨, 藻贼葬造援悦蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则糟藻造造糟燥怎灶贼泽葬则藻责则燥早灶燥泽贼蚤糟燥枣燥增藻则葬造造泽怎则增蚤增葬造蚤灶杂宰韵郧杂园源圆员 : 葬责澡葬泽藻 Ⅲ 贼则蚤葬造燥枣凿燥糟藻贼葬曾藻造憎蚤贼澡燥则憎蚤贼澡燥怎贼葬贼则葬泽藻灶贼葬灶枣燥则皂藻贼葬泽贼葬贼蚤糟糟葬泽贼则葬鄄贼蚤燥灶则藻泽蚤泽贼葬灶贼责则燥泽贼葬贼藻糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援允悦造蚤灶韵灶糟燥造, 圆园员源, 猿圆 ( 员员 ): 员员猿远鄄员员源圆援阅韵陨 : 员园援员圆园园辕允悦韵援圆园员猿援缘员援苑源员苑援 [ 圆远 ] 杂酝耘砸粤郧耘允月, 月粤砸蕴韵宰宰耘, 匀韵砸栽韵月粤郧再陨郧晕, 藻贼葬造援悦蚤则鄄糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则糟藻造造泽葬灶凿则藻泽责燥灶泽藻贼燥糟澡藻皂燥贼澡藻则葬责赠蚤灶皂藻贼葬泽贼葬贼蚤糟遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则 : 杂宰韵郧杂园缘园园 [ 允 ] 援允悦造蚤灶韵灶糟燥造, 圆园员源, 猿圆 ( 猿员 ): 猿源愿猿鄄猿源愿怨援阅韵陨 : 员园援员圆园园辕允悦韵援圆园员源援缘远援圆缘远员援 [ 圆苑 ] 栽陨晕匀韵云耘砸陨, 匀砸陨杂栽韵在韵灾粤栽, 杂栽砸韵酝月耘砸郧耘砸悦, 藻贼葬造援酝燥鄄灶蚤贼燥则蚤灶早燥枣糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则糟藻造造泽葬灶凿贼澡藻蚤则藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣耘郧云砸辕责澡燥泽责澡燥鄄耘郧云砸凿怎则蚤灶早糟燥皂遭蚤灶藻凿则葬凿蚤燥贼澡藻则葬责赠则藻早蚤皂藻灶泽蚤灶造燥糟葬造造赠葬凿增葬灶糟藻凿泽择怎葬皂燥怎泽糟藻造造糟葬则糟蚤灶燥皂葬燥枣贼澡藻澡藻葬凿葬灶凿灶藻糟噪 [ 允 ] 援陨灶贼允砸葬凿蚤葬贼韵灶糟燥造月蚤燥造孕澡赠泽, 圆园员圆, 愿猿 ( 缘 ): 远愿缘鄄远怨园援阅韵陨 : 员园援员园员远辕躁援蚤躁则燥遭责援圆园员圆援园圆援园园怨援 [ 圆愿 ] 阅韵砸杂耘再允云, 运粤韵郧阅, 酝粤悦粤砸栽匀哉砸运酝, 藻贼葬造援栽则葬糟噪蚤灶早增蚤鄄葬遭造藻糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则糟藻造造泽 ( 悦栽悦泽 ) 蚤灶贼澡藻责藻则蚤责澡藻则葬造遭造燥燥凿燥枣灶燥灶鄄 泽皂葬造造糟藻造造造怎灶早糟葬灶糟藻则 ( 晕杂悦蕴悦 ) 责葬贼蚤藻灶贼泽怎灶凿藻则早燥蚤灶早凿藻枣蚤灶蚤贼蚤增藻则葬鄄凿蚤葬贼蚤燥灶贼澡藻则葬责赠 : 责蚤造燥贼泽贼怎凿赠则藻泽怎造贼泽 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则, 圆园员缘, 员圆员 ( 员 ): 员猿怨鄄员源怨援阅韵陨 : 员园援员园园圆辕糟灶糟则援圆愿怨苑缘援 [ 圆怨 ] 宰韵蕴悦匀韵运允阅, 匀韵韵杂粤, 韵阅粤再杂, 藻贼葬造援郧怎蚤凿藻造蚤灶藻泽枣燥则贼澡藻藻增葬造怎鄄葬贼蚤燥灶燥枣陨皂皂怎灶燥贼澡藻则葬责赠葬糟贼蚤增蚤贼赠蚤灶泽燥造蚤凿贼怎皂燥则泽 : 蚤皂皂怎灶藻鄄则藻造葬贼藻凿则藻鄄泽责燥灶泽藻糟则蚤贼藻则蚤葬 [ 允 ] 援悦造蚤灶悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园园怨, 员缘 ( 圆猿 ): 苑源员圆鄄苑源圆园援阅韵陨 : 员园援员员缘愿辕员园苑愿鄄园源猿圆援悦悦砸鄄园怨鄄员远圆源援 [ 猿园 ] 蕴陨哉再, 蕴陨哉匝, 宰粤晕郧栽, 藻贼葬造援悦蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则糟藻造造泽蚤灶匀耘砸圆鄄责燥泽蚤贼蚤增藻皂藻贼葬泽贼葬贼蚤糟遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则责葬贼蚤藻灶贼泽 : 葬增葬造怎葬遭造藻责则燥早灶燥泽贼蚤糟葬灶凿责则藻凿蚤糟贼蚤增藻遭蚤燥皂葬则噪藻则 [ 允 ] 援月酝悦悦葬灶糟藻则, 圆园员猿, 员猿 ( 员 ): 圆园圆援阅韵陨 : 员园援员员愿远辕员源苑员鄄圆源园苑鄄员猿鄄圆园圆援 [ 猿员 ] 宰粤砸运陨粤晕陨酝耘, 运匀韵韵月蕴, 栽粤晕阅杂, 藻贼葬造援粤灶怎造贼则葬鄄澡蚤早澡鄄贼澡则燥怎早澡责怎贼泽责蚤则葬造皂蚤糟则燥枣造怎蚤凿蚤糟遭蚤燥糟澡蚤责枣燥则贼澡藻藻灶则蚤糟澡皂藻灶贼燥枣糟蚤则糟怎鄄造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则糟藻造造泽 [ 允 ] 援粤灶葬造赠泽贼, 圆园员源, 员猿怨 ( 员猿 ): 猿圆源缘鄄猿圆缘缘援阅韵陨 : 员园援员园猿怨辕糟源葬灶园园猿缘缘葬援 [ 猿圆 ] 宰粤栽粤晕粤月耘酝, 哉耘匀粤砸粤再, 再粤酝粤杂郧匀陨栽粤晕, 藻贼葬造援酝怎造贼蚤糟燥造鄄燥则凿藻贼藻糟贼蚤燥灶燥枣则葬则藻贼怎皂燥则糟藻造造泽蚤灶遭造燥燥凿怎泽蚤灶早葬灶燥增藻造枣造燥憎糟赠贼燥皂藻鄄贼则赠鄄遭葬泽藻凿泽赠泽贼藻皂 [ 允 ] 援悦赠贼燥皂藻贼则赠粤, 圆园员源, 愿缘 ( 猿 ): 圆园远鄄圆员猿援阅韵陨 : 员园援员园园圆辕糟赠贼燥援葬援圆圆源圆圆援 [ 猿猿 ] 云砸耘陨阅陨晕酝月, 云砸耘再阅陨晕粤阅灾, 蕴耘哉晕郧酝援悦蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则阅晕粤燥怎贼责藻则枣燥则皂泽糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则糟藻造造泽枣燥则运砸粤杂皂怎贼葬贼蚤燥灶凿藻贼藻糟鄄贼蚤燥灶蚤灶贼澡燥则葬糟蚤糟皂葬造蚤早灶葬灶糟蚤藻泽 [ 允 ] 援悦造蚤灶悦澡藻皂, 圆园员缘, 远员 ( 员园 ): 员圆怨怨鄄员猿园源援阅韵陨 : 员园援员猿苑猿辕糟造蚤灶糟澡藻皂援圆园员缘援圆源圆源缘猿援 [ 猿源 ] 酝粤阅陨悦允, 运陨陨粤蕴粤陨晕耘晕粤, 月陨阅粤砸阅云悦, 藻贼葬造援悦蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则阅晕粤葬灶凿糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则糟藻造造泽蚤灶皂藻贼葬泽贼葬贼蚤糟贼则蚤责造藻灶藻早葬贼蚤增藻遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则责葬贼蚤藻灶贼泽 [ 允 ] 援陨灶贼允悦葬灶糟藻则, 圆园员缘, 员猿远 ( 怨 ): 圆员缘愿鄄圆员远缘援阅韵陨 : 员园援员园园圆辕蚤躁糟援圆怨圆远缘援 [ 猿缘 ] 杂悦粤栽耘晕粤砸, 月韵栽栽韵晕陨孕, 郧陨粤砸阅陨晕粤月援悦蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥怎则糟藻造造泽葬灶凿糟葬灶糟藻则泽贼藻皂糟藻造造泽 : 葬则燥造藻枣燥则责则燥贼藻燥皂蚤糟泽蚤灶凿藻枣蚤灶蚤灶早贼澡藻蚤灶贼藻则则藻造葬鄄贼蚤燥灶泽澡蚤责泽遭藻贼憎藻藻灶枣怎灶糟贼蚤燥灶, 责澡藻灶燥贼赠责藻葬灶凿凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶憎蚤贼澡责燥鄄贼藻灶贼蚤葬造糟造蚤灶蚤糟葬造葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶泽 [ 允 ] 援月蚤燥糟澡蚤皂月蚤燥责澡赠泽粤糟贼葬, 圆园员圆, 员愿猿缘 ( 圆 ): 员圆怨鄄员源猿援阅韵陨 : 员园援员园员远辕躁援遭遭糟葬灶援圆园员圆援员圆援园园圆援 [ 猿远 ] 再粤晕郧酝匀, 陨酝砸粤蕴陨粤, 匀耘耘杂悦匀耘晕悦援悦蚤则糟怎造葬贼蚤灶早糟葬灶糟藻则泽贼藻皂糟藻造造泽 : 贼澡藻蚤皂责燥则贼葬灶糟藻贼燥泽藻造藻糟贼 [ 允 ] 援悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园员缘, 圆苑 ( 缘 ): 源猿苑鄄源源怨援阅韵陨 : 员园援猿怨苑愿辕躁援蚤泽泽灶援员园园园鄄怨远园源援圆园员缘援园源援园愿援 [ 猿苑 ] 宰粤晕郧晕, 杂匀陨蕴, 蕴陨匀, 藻贼葬造援阅藻贼藻糟贼蚤燥灶燥枣糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则糟藻造造泽葬灶凿贼怎皂燥则泽贼藻皂糟藻造造泽蚤灶责葬贼蚤藻灶贼泽憎蚤贼澡遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则遭赠怎泽蚤灶早枣造燥憎糟赠贼燥皂藻贼则赠 : 葬增葬造怎葬遭造藻贼燥燥造枣燥则凿蚤葬早灶燥泽蚤泽葬灶凿责则燥早灶燥泽蚤泽藻增葬造怎葬贼蚤燥灶 [ 允 ] 援栽怎皂燥则月蚤燥造, 圆园员圆, 猿猿 ( 圆 ): 缘远员鄄缘远怨援阅韵陨 : 员园援员园园苑辕泽员猿圆苑苑鄄园员员鄄园猿园猿鄄员援 [ 猿愿 ] 杂哉晕再云, 载哉再, 再粤晕郧载砸, 藻贼葬造援悦蚤则糟怎造葬贼蚤灶早泽贼藻皂糟藻造造鄄造蚤噪藻藻责蚤鄄贼澡藻造蚤葬造糟藻造造葬凿澡藻泽蚤燥灶皂燥造藻糟怎造藻鄄责燥泽蚤贼蚤增藻贼怎皂燥则糟藻造造泽蚤灶凿蚤糟葬贼藻责燥燥则责则燥早灶燥泽蚤泽燥枣澡藻责葬贼燥糟藻造造怎造葬则糟葬则糟蚤灶燥皂葬葬枣贼藻则糟怎则葬贼蚤增藻则藻泽藻糟贼蚤燥灶 [ 允 ] 援匀藻责葬贼燥造燥早赠, 圆园员猿, 缘苑 ( 源 ): 员源缘愿鄄员源远愿援阅韵陨 : 员园援员园园圆辕澡藻责援圆远员缘员援 [ 猿怨 ] 蕴陨哉杂, 蕴陨晕, 再哉载, 藻贼葬造援耘曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣蚤灶贼藻则糟藻造造怎造葬则葬凿澡藻泽蚤燥灶皂燥造藻糟怎造藻员遭赠澡藻责葬贼燥糟藻造造怎造葬则糟葬则糟蚤灶燥皂葬泽贼藻皂糟藻造造泽葬灶凿糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早贼怎皂燥则糟藻造造泽 [ 允 ] 援郧葬泽贼则燥藻灶贼藻则燥造燥早赠, 圆园员猿, 员源源 ( 缘 ): 员园猿员鄄员园源员援阅韵陨 : 员园援员园缘猿辕躁援早葬泽贼则燥援圆园员猿援园员援园源远援 [ 源园 ] 再哉酝, 月粤砸阅陨粤粤, 宰陨栽栽晕耘砸月杂, 藻贼葬造援悦蚤则糟怎造葬贼蚤灶早遭则藻葬泽贼贼怎皂燥则糟藻造造泽藻曾澡蚤遭蚤贼凿赠灶葬皂蚤糟糟澡葬灶早藻泽蚤灶藻责蚤贼澡藻造蚤葬造葬灶凿皂藻泽藻灶糟澡赠皂葬造糟燥皂鄄责燥泽蚤贼蚤燥灶 [ 允 ] 援杂糟蚤藻灶糟藻, 圆园员猿, 猿猿怨 ( 远员员怨 ): 缘愿园鄄缘愿源援阅韵陨 : 员园援员员圆远辕泽糟蚤藻灶糟藻援员圆圆愿缘圆圆援 [ 收稿日期 ] 摇圆园员远原园愿原圆远 [ 修回日期 ] 摇圆园员远原园怨原园苑 [ 本文编辑 ] 摇党瑞山