晕燥援圆 冉宇靓, 等援肺癌抑制性抗体及其抗原的鉴定 员员员 糟藻责贼燥则, 耘郧云砸 ) 家族相关通路以及血管内皮生长因子 ( 增葬泽糟怎造葬则藻灶凿燥贼澡藻造蚤葬造早则燥憎贼澡枣葬糟贼燥则, 灾耘郧云 ) 及其受 [ 缘体相关通路 ] 然而临床研究表明, 仅仅针对这两类靶位治疗肺癌的疗效并不尽如

Transcription

1 员员园 悦澡蚤灶藻泽藻允燥怎则灶葬造燥枣悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则葬责赠 灾燥造援员源晕燥援圆粤责则援圆园园苑 [ 文章编号 ] 摇员园园苑鄄猿愿缘载 ( 圆园园苑 ) 园圆鄄园员员园鄄园缘 论著 肺癌抑制性抗体及其抗原的鉴定 冉宇靓, 胡摇海, 陈立钊, 遇摇珑, 孙立新, 杨治华 ( 中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所细胞生物学及分子生物学研究室, 北京摇员园园园圆员 ) [ 摘摇要 ] 摇目的 : 鉴定抑制肺癌细胞生长的功能性单克隆抗体员耘圆及其抗原, 为治疗肺癌提供有潜力的靶向抗体治疗剂和分子靶位 方法 : 采用活细胞荧光 酝栽栽细胞增殖实验 耘蕴陨杂粤 动物体内治疗实验等方法检测鼠单克隆抗体员耘圆对人肺癌细胞增殖的抑制 单抗与癌细胞的结合部位 单抗的亚类和单抗对肺癌移植瘤的抑制, 以宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早和酝粤蕴阅陨栽韵云质谱方法鉴定该功能性单抗的抗原 结果 : 单抗员耘圆能够与肺癌细胞郧蕴悦愿圆和晕悦陨鄄匀缘圆园的细胞膜结合, 在体外能够明显抑制肺癌细胞的增殖 动物实验表明单抗员耘圆能够抑制肺癌移植瘤的生长, 抑制率达源怨豫 宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早显示其抗原相对分子质量约员员园园园园, 质谱鉴定该抗原为氨甲酰磷酸合成酶 ( 糟葬则遭葬皂燥赠造鄄责澡燥泽责澡葬贼藻泽赠灶贼澡藻贼葬泽藻员, 悦孕杂员 ) 结论 : 单抗员耘圆能够在体内外抑制肺癌的生长, 具有成为肺癌靶向治疗剂的潜力 该抗体识别的抗原悦孕杂员可表达于肺癌细胞的细胞膜, 可能是一个肺癌靶向治疗的新靶位 [ 关键词 ] 摇肺癌 ; 功能性单克隆抗体 ; 抗原 ; 靶位 ; 靶向治疗 [ 中图分类号 ] 摇砸猿苑摇摇摇摇 [ 文献标志码 摇粤 粤枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造葬灶贼蚤遭燥凿赠贼葬则早藻贼蚤灶早造怎灶早糟葬灶糟藻则葬灶凿蚤贼忆泽葬灶贼蚤早藻灶 砸粤晕再怎鄄造蚤葬灶早, 匀哉匀葬蚤, 悦匀耘晕蕴蚤鄄扎澡葬燥, 再哉蕴燥灶早, 杂哉晕蕴蚤鄄曾蚤灶早, 再粤晕郧在澡蚤鄄澡怎葬 ( 阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣悦藻造造怎造葬则月蚤燥造燥早赠葬灶凿酝燥造藻糟怎造葬则月蚤燥造燥早赠, 悦葬灶糟藻则陨灶泽贼蚤贼怎贼藻, 悦澡蚤灶藻泽藻粤糟葬凿藻皂赠燥枣酝藻凿蚤糟葬造杂糟蚤藻灶糟藻泽驭孕藻噪蚤灶早哉灶蚤燥灶酝藻凿蚤糟葬造悦燥造造藻早藻, 月藻蚤躁蚤灶早员园园园圆员, 悦澡蚤灶葬 ) [ 粤遭泽贼则葬糟贼 ] 摇韵遭躁藻糟贼蚤增藻 : 栽燥蚤凿藻灶贼蚤枣赠葬枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造皂燥灶燥糟造燥灶葬造葬灶贼蚤遭燥凿赠员耘圆葬早葬蚤灶泽贼造怎灶早糟葬灶糟藻则葬灶凿蚤贼泽葬灶贼蚤早藻灶, 泽燥葬泽贼燥责则燥增蚤凿藻葬糟葬灶凿蚤凿葬贼藻葬灶贼蚤遭燥凿赠凿则怎早葬灶凿皂燥造藻糟怎造藻贼葬则早藻贼枣燥则贼澡藻葬灶贼蚤鄄造怎灶早糟葬灶糟藻则贼澡藻则葬责赠援酝藻贼澡燥凿泽 : 栽澡藻蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶燥枣贼澡藻造怎灶早糟葬灶糟藻则糟藻造造泽, 遭蚤灶凿蚤灶早憎蚤贼澡贼怎皂燥则糟藻造造泽, 蚤泽燥贼赠责藻泽, 葬灶凿蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶燥枣蚤皂责造葬灶贼藻凿贼怎皂燥则早则燥憎贼澡燥枣员耘圆皂燥灶燥糟造燥灶葬造葬灶贼蚤鄄遭燥凿赠憎藻则藻泽贼怎凿蚤藻凿遭赠蚤皂皂怎灶燥枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻, 耘蕴陨杂粤, 糟藻造造责则燥造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶葬泽泽葬赠, 葬灶凿蚤灶增蚤增燥贼怎皂燥则贼则藻葬贼皂藻灶贼藻曾责藻则蚤皂藻灶贼泽援栽澡藻糟燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早葬灶贼蚤早藻灶燥枣员耘圆憎葬泽蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿遭赠宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早葬灶凿酝粤蕴阅陨鄄栽韵云皂葬泽泽泽责藻糟贼则燥皂藻贼则赠援砸藻泽怎造贼泽 : 栽澡藻员耘圆葬灶贼蚤遭燥凿赠糟燥怎造凿则藻糟燥早灶蚤扎藻糟藻造造泽怎则枣葬糟藻责则燥贼藻蚤灶燥枣造怎灶早糟葬灶糟藻则糟藻造造造蚤灶藻郧蕴悦愿圆葬灶凿匀悦陨鄄匀缘圆园葬灶凿燥遭增蚤燥怎泽造赠蚤灶澡蚤遭蚤贼藻凿贼澡藻造怎灶早糟葬灶糟藻则糟藻造造早则燥憎贼澡蚤灶增蚤增燥援粤灶蚤皂葬造藻曾责藻则蚤皂藻灶贼则藻增藻葬造藻凿贼澡葬贼员耘圆葬灶贼蚤遭燥凿赠泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠蚤灶澡蚤遭蚤贼藻凿造怎灶早贼怎皂燥则早则燥憎贼澡遭赠源怨豫援宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早则藻增藻葬造藻凿贼澡葬贼贼澡藻皂燥造藻糟怎造葬则憎藻蚤早澡贼燥枣贼澡藻葬灶贼蚤早藻灶燥枣员耘圆葬灶贼蚤遭燥凿赠憎葬泽葬遭燥怎贼员员园园园园援酝葬泽泽枣蚤灶早藻则鄄责则蚤灶贼则藻增藻葬造藻凿贼澡蚤泽责则燥贼藻蚤灶憎葬泽糟葬则遭葬皂燥赠造鄄责澡燥泽责澡葬贼藻泽赠灶贼澡藻贼葬泽藻员 ( 悦孕杂员 ) 援悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶 : 员耘圆皂燥灶燥糟造燥灶葬造葬灶贼蚤遭燥凿赠糟葬灶泽怎责鄄责则藻泽泽造怎灶早贼怎皂燥则早则燥憎贼澡蚤灶增蚤贼则燥葬灶凿蚤灶增蚤增燥 ; 蚤贼皂蚤早澡贼遭藻糟燥皂藻葬糟葬灶凿蚤凿葬贼藻凿则怎早枣燥则贼葬则早藻贼藻凿造怎灶早糟葬灶糟藻则贼则藻葬贼皂藻灶贼援悦孕杂员, 贼澡藻葬灶贼蚤早藻灶燥枣员耘圆, 造燥糟葬贼藻泽燥灶贼澡藻皂藻皂遭则葬灶藻燥枣造怎灶早糟葬灶糟藻则糟藻造造泽葬灶凿蚤贼皂葬赠遭藻糟燥皂藻葬灶燥增藻造皂燥造藻糟怎造藻贼葬则早藻贼枣燥则造怎灶早糟葬灶藻则贼澡藻则葬责赠援 [ 运藻赠憎燥则凿泽 ] 摇造怎灶早糟葬灶糟藻则 ; 枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造皂燥灶燥糟造燥灶葬造葬灶贼蚤遭燥凿赠 ; 葬灶贼蚤早藻灶 ; 贼葬则早藻贼 ; 贼葬则早藻贼蚤灶早贼澡藻则葬责赠 [ 悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则, 圆园园苑, 员源 ( 圆 ): 员员园鄄员员源 ] 摇摇 [ 员摇摇肺癌是世界上发病率最高的恶性肿瘤之一 ] 在我国城市中其发病率和病死率均居首位 虽然近年来以手术 放化疗为主的综合治疗手段有了较大 [ 圆提高, 但肺癌患者的缘年生存率仍低于员缘豫 ] 靶向治疗是近年来肿瘤治疗领域取得的重大突破, 美国云阅粤已批准多种靶向治疗药物用于临床, 例如匀藻则糟藻责贼蚤灶和粤增葬泽贼蚤灶等单抗靶向药物用于乳腺癌和转移性结肠癌的治疗已在临床上取得了显著的疗 [ 猿鄄源效 ], 为肿瘤治疗提供了一种全新的策略 目前肺癌靶向治疗的药物众多, 但主要集中于两类分子靶位 : 表皮生长因子受体 ( 藻责蚤凿藻则皂葬造早则燥憎贼澡枣葬糟贼燥则则藻鄄 [ 基金项目 ] 摇 国家自然科学基金重点项目 ( 晕燥援猿园圆猿园员缘园 ); 国家重点 摇摇摇摇 基础研究发展规划 ( 怨苑猿计划 ) 项目 ( 晕燥援圆园园圆悦月缘员猿员园远 ) [ 作者简介 ] 摇 冉宇靓 ( 员怨苑猿鄄 ), 男, 重庆市人, 博士, 副研究员, 主 摇 摇 摇 摇 要从事肿瘤免疫防治及抗体工程药物方面的研究 [ 通讯作者 ] 摇 杨治华, 耘皂葬蚤造 : 赠葬灶早赃扎澡蚤澡怎葬赃责则燥枣岳赠葬澡燥燥援糟燥皂援糟灶

2 晕燥援圆 冉宇靓, 等援肺癌抑制性抗体及其抗原的鉴定 员员员 糟藻责贼燥则, 耘郧云砸 ) 家族相关通路以及血管内皮生长因子 ( 增葬泽糟怎造葬则藻灶凿燥贼澡藻造蚤葬造早则燥憎贼澡枣葬糟贼燥则, 灾耘郧云 ) 及其受 [ 缘体相关通路 ] 然而临床研究表明, 仅仅针对这两类靶位治疗肺癌的疗效并不尽如人意, 尚需要发现 [ 远更多针对肺癌的有效治疗靶位 ] 本课题组采用 [ 苑本室建立的高通量筛选功能性单抗技术平台 ], 研制获得了初步显示能在体内外抑制肺癌生长的小鼠功能性单克隆抗体员耘圆 ( 另文发表 ) 在此基础上, 本研究深入探讨该单抗在体内外对肺癌的抑制作用, 并鉴定其抗原, 以期为肺癌治疗提供有潜在应用价值的新治疗靶位和抗体靶向治疗剂 员摇材料与方法员援员摇主要材料和试剂肺癌细胞系郧蕴悦愿圆 ( 肺腺癌 ) 晕悦陨鄄匀缘圆园( 肺鳞癌 ) 为本室保藏 远周龄月粤蕴月辕糟小鼠购自中国药品生物制品检定所 [ 实验动物合格证号 : 杂悦载运 ( 京 ) 圆园园缘鄄园园园源 ] 酝员怨怨 员远源园 阅酝耘酝 陨酝耘酝培养液均购自郧蚤遭糟燥月砸蕴公司 ; 胎牛血清 ( 枣藻贼葬造遭燥增蚤灶藻泽藻则怎皂, 云月杂 ) 为匀赠糟造燥灶藻公司产品 ; 遭蚤燥贼蚤灶鄄马抗小鼠陨早郧购自灾藻糟贼燥则公司 ;α 鄄贼怎遭造蚤灶兔多抗为杂葬灶贼葬悦则怎扎公司产品 ; 云陨栽悦标记的羊抗兔购自灾藻糟贼燥则公司 ; 悦赠猿标记葬增蚤凿蚤灶购自允葬糟噪泽燥灶公司 ; 孕灾阅云膜由酝蚤造造蚤责燥则藻生产 ; 阅粤孕陨购自杂蚤早皂葬公司 ; 单抗亚类检测试剂盒由杂燥怎贼澡藻则灶月蚤燥贼藻糟澡公司生产 ; 宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼蚤灶早试剂购自普利莱公司 蛋白酶切用胰酶购于罗氏公司, 质谱鉴定用 α 鄄氰基鄄源鄄羟基肉桂酸购于杂蚤早皂葬公司 小鼠单克隆抗体员耘圆按文献 [ 苑 ] 采用人肺癌组织细胞免疫方法制备, 其上清可抑制郧蕴悦愿圆细胞增殖, 其腹水可抑制裸鼠郧蕴悦愿圆移植瘤的生长 员援圆摇细胞培养杂交瘤细胞采用含员园豫云月杂的阅酝耘酝培养液培养 ; 肺癌细胞系郧蕴悦愿圆和晕悦陨鄄匀缘圆园采用含员园豫云月杂的员远源园培养液培养 员援猿摇活细胞免疫荧光检测单抗与肺癌细胞的结合状态按怨园园园辕孔肿瘤细胞接种于怨远孔培养板, 猿苑益 缘豫悦韵圆孵箱培养圆凿 细胞约苑园豫汇合后, 用孕月杂洗涤每孔中的细胞后加入一定浓度的待测抗体, 室温孵育员澡, 用含员豫月杂粤的孕月杂洗涤缘次, 每次缘皂蚤灶 ; 加入远园 μ 造含园援缘 μ 早辕皂造遭蚤燥贼蚤灶标记马抗鼠二抗或远园 μ 造含园援缘 μ 早辕皂造云陨栽悦标记羊抗兔抗体, 室温孵育猿园皂蚤灶, 用含员豫月杂粤的孕月杂洗涤缘次, 每次缘皂蚤灶 ; 加入远园 μ 造员颐员园园园稀释的悦赠猿鄄粤增蚤鄄凿蚤灶, 室温孵育猿园皂蚤灶后, 孕月杂洗涤缘次, 每次缘皂蚤灶 ; 最后用含员园 μ 早辕皂造阅粤孕陨的缘园豫甘油缘园 μ 造封片观察 员援源摇 耘蕴陨杂粤检测单抗类型及亚类 采用杂燥怎贼澡藻则灶月蚤燥贼藻糟澡的单抗亚类耘蕴陨杂粤检测试剂盒测定待测单抗的类型, 操作按照试剂盒说明书进行 员援缘摇 酝栽栽法检测员耘圆对郧蕴悦愿圆细胞增殖的影响 在怨远孔板采用酝栽栽法检测员耘圆抗体对郧蕴悦愿圆 细胞增殖的影响 分为孕月杂对照组 正常鼠陨早郧 ( 员园园 μ 早辕皂造 ) 组 员耘圆高剂量 ( 员园园 μ 早辕皂造 ) 组 员耘圆低剂量 ( 圆园 μ 早辕皂造 ) 组, 每组每次检测设猿个平行孔, 每孔在园凿时接种细胞数为员园园园个, 在园 猿 缘 苑 怨凿 分别每天检测员次 员援远摇 体内抑瘤实验 将月粤蕴月辕糟裸鼠分为抗体治疗组 ( 高剂量组 低剂量组 ) 孕月杂治疗组 正常鼠陨早郧治疗对照组, 每组 远远只 将人肺癌细胞系郧蕴悦愿圆按每只小鼠员伊员园 细胞皮下接种 接种后缘凿 ( 已能扪及肿瘤时 ), 开始腹腔注射纯化抗体进行治疗 每次每只小鼠注射的高剂量为圆园园 μ 早, 低剂量为缘园 μ 早 治疗第员周, 每天员次, 连续缘凿, 以后每周圆次 圆园凿时处死小鼠, 测瘤重, 按抑制率越 ( 员鄄治疗组平均瘤重辕治疗组平均瘤重 ) 豫的公式计算肿瘤生长抑制率 员援苑摇 宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早检测员耘圆抗体的抗原表达 样品经杂阅杂鄄孕粤郧耘分离后, 采用半干式电转移法将蛋白从凝胶转移到硝酸纤维素膜上 丽春红染色确定蛋白转移到膜上并标出相对分子质量的位置 将膜放在缘豫的脱脂奶 ( 溶于孕月杂, 责匀苑援源 ) 中 源益封闭过夜, 与员园 μ 早辕皂造一抗猿苑益下孵育员澡, 孕月杂清洗后与匀砸孕标记的羊抗小鼠陨早郧 ( 员颐员园园园 ) 猿苑益下孵育员澡 用栽月杂洗膜源次后用耘悦蕴发光试剂盒显影 员援愿摇 肺癌抗原的提取和质谱鉴定 用含有员豫栽则蚤贼燥灶载员园园的孕月杂从郧蕴悦愿圆细胞中提取细胞蛋白, 用员耘圆抗体在提取的细胞蛋白中进行免疫沉淀, 免疫沉淀复合物在杂阅杂鄄孕粤郧耘分离后进行银染显色 从银染的孕粤郧耘胶中挖取宰藻泽贼藻则灶显影的相应蛋白条带, 脱色后胶块真空离心干燥 以圆缘皂皂燥造辕蕴的碳酸氢氨为溶剂配制猿援苑缘 μ 早辕皂造的胰酶溶液 将胰酶溶液约员缘 μ 造加入样品, 猿苑益消化员远澡 酶解后在离心管中加入缘豫栽云粤溶液员圆园 μ 造, 源园益反应员澡, 吸取上清液 再加入圆援缘豫栽云粤辕缘园豫悦粤晕溶液员圆园 μ 造猿园益反应员澡 吸取上清液, 合并后冰冻干燥 向样品管中加入缘 μ 造园援

3 员员圆 灾燥造援员源 缘豫栽云粤溶液溶解, 取出园援缘 μ 造作基质辅助激光解吸附辕电离飞行时间质谱鉴定 ( 酝粤蕴阅陨鄄栽韵云 ), 采用 α 鄄氰基鄄源鄄羟基肉桂酸 ( 悦匀悦粤 ) 作为基质 肽指纹谱匹配在酝葬泽糟燥贼数据库中进行 ( 澡贼贼责 : 辕辕憎憎憎援皂葬贼则蚤曾鄄泽糟蚤藻灶糟藻援糟燥皂辕糟早蚤辕蚤灶凿藻曾援责造 ) 员援怨摇统计学处理小鼠移植瘤瘤重以 ( 珋曾依泽 ) 表示, 组间差异采用贼检验分析, 所有统计学处理采用杂孕杂杂软件 ( 杂孕杂杂公司 ), 软件版本号为员猿援园 圆援源抗肺癌单抗员耘圆体内对肺癌移植瘤生长的抑制用员耘圆抗体进行了体内抑瘤试验 在单抗治疗后圆园凿 ( 接种肿瘤后圆缘凿 ) 处死动物, 收获各组的肿瘤, 称瘤重, 计算各组的平均瘤重 高剂量和低剂量员耘圆抗体对肿瘤瘤重的抑制率分别为源怨援源豫和源园援员豫 ( 孕约园援园缘 ) 由此表明, 员耘圆抗体在体内能显著抑制人肺癌移植瘤的生长 ( 图猿 ) 圆摇结摇果 圆援员摇员耘圆单抗与肺癌细胞膜蛋白的反应用兔抗 α 鄄贼怎遭造蚤灶抗体作为细胞膜是否被通透的对照, 采用活细胞免疫荧光法检测员耘圆杂交瘤克隆上清与圆种肺癌细胞系郧蕴悦愿圆和晕悦陨鄄匀缘圆园的活细胞反应 结果发现, 员耘圆抗体能够与肺癌细胞系郧蕴悦愿圆和晕悦陨鄄匀缘圆园活细胞的细胞膜反应 ( 图员 ), 而 α 鄄贼怎遭造蚤灶为阴性, 未见绿色荧光 由于对照 α 鄄贼怎遭造蚤灶的免疫荧光阳性则说明细胞膜已经被通透, 抗 α 鄄贼怎遭造蚤灶的抗体分子进入了细胞 ; 而 α 鄄贼怎遭造蚤灶为阴性, 说明细胞没有被通透, 抗体无法进入细胞内 因此, 该结果表明该员耘圆是与细胞膜上而非胞质的蛋白结合, 说明员耘圆抗体所识别的抗原位于人肺癌细胞的细胞膜上 图圆摇员耘圆抗体在体外抑制郧蕴悦愿圆肺癌细胞的增殖云蚤早援圆摇陨灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶燥枣员耘圆皂燥灶燥糟造燥灶葬造葬灶贼蚤遭燥凿赠燥灶责则燥造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶燥枣造怎灶早糟葬灶糟藻则糟藻造造郧蕴悦愿圆蚤灶增蚤贼则燥 图员摇活细胞免疫荧光检测员耘圆抗体与肺癌细胞晕悦陨鄄匀缘圆园和郧蕴悦愿圆的反应 ( 伊圆园园 ) 云蚤早援员摇陨皂皂怎灶燥枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻燥枣增蚤葬遭造藻晕悦陨鄄匀缘圆园葬灶凿郧蕴悦愿圆糟藻造造泽凿藻贼藻糟贼藻凿遭赠员耘圆葬灶贼蚤遭燥凿赠 ( 伊圆园园 ) 粤 : 晕悦陨鄄匀缘圆园糟藻造造泽 ; 月 : 郧蕴悦愿圆糟藻造造泽援晕怎糟造藻燥造怎泽憎藻则藻遭造怎藻泽贼葬蚤灶藻凿遭赠阅粤孕陨圆援圆摇员耘圆单抗对肺癌细胞郧蕴悦愿圆增殖的抑制采用肿瘤细胞增殖酝栽栽测定法, 测定员耘圆抗体对肺癌细胞系郧蕴悦愿圆生长的抑制 结果显示, 员耘圆抗体对郧蕴悦愿圆细胞生长有显著的抑制 图圆显示员耘圆单抗对肺癌细胞增殖抑制的细胞生长曲线 圆援猿功能性单抗亚类的鉴定采用单抗亚类检测试剂盒检测员耘圆单抗的亚类, 结果显示员耘圆单抗为小鼠陨早郧员型 图猿摇员耘圆抗体治疗后肺癌移植瘤质量的改变云蚤早援猿摇酝葬泽泽糟澡葬灶早藻燥枣蚤皂责造葬灶贼藻凿造怎灶早糟葬灶糟藻则葬枣贼藻则员耘圆葬灶贼蚤遭燥凿赠贼则藻葬贼皂藻灶贼圆援缘摇员耘圆抗原的鉴定用宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早测定了员耘圆抗体所识别的抗原的相对分子质量, 如图源粤, 员耘圆抗原相对分子质量约员员园园园园 从免疫沉淀的蛋白电泳中挖取相应蛋白条带, 进行了酝粤蕴阅陨鄄栽韵云的肽指纹图谱鉴定 ( 图源月 ) 经酝葬泽糟燥贼数据库对比, 鉴定员耘圆抗原为氨甲酰磷酸合成酶 ( 糟葬则遭葬皂燥赠造鄄责澡燥泽责澡葬贼藻泽赠灶贼澡藻贼葬泽藻员, 悦孕杂员 ), 匹配分值为苑怨, 匹配可信度远远高于远源分的怨缘豫可信分值 猿摇讨摇论肿瘤的靶向治疗是近年来肿瘤治疗领域的一个

4 晕燥援圆 冉宇靓, 等援肺癌抑制性抗体及其抗原的鉴定 员员猿 重大突破 由于靶向治疗的药物通常仅与其相应的靶位结合, 通过直接影响其靶位分子的功能, 或本身带有的物理或化学的效应分子来达到杀伤或抑制目 [ 愿标细胞的药效 ] 由于作用靶位明确, 药物通常具有很高的选择性, 可以有效地杀伤或抑制目标细胞, 而对于正常组织细胞不产生或仅产生较小的毒性作 [ 怨用 ] 靶向治疗已成功应用于多种肿瘤的治疗, 取得了令人瞩目的疗效 如赫赛汀 ( 抗匀耘砸圆人源化 [ 员园单抗 ) 治疗乳癌 ] 美罗华 ( 抗悦阅圆园人源化单抗 ) [ 员员治疗淋巴瘤 ] 格列卫( 酪氨酸激酶抑制剂 ) 治疗慢 [ 员圆性粒细胞白血病 胃肠道间质瘤 ] 阿瓦斯汀 ( 抗 [ 员猿 ] 灾耘郧云人源化抗体 ) 治疗大肠癌等 目前常用的化疗药物对于肿瘤的复发转移疗效一直差强人意, 而已有的研究表明新型靶向药物对那些化疗不敏感肿瘤的复发和转移也具有较好的疗效 在临床上使用的靶向药物中, 抗匀耘砸圆的抗体类药物赫赛汀能 [ 员源够明显地抑制乳腺癌患者的肺转移 ], 抗血管类药 [ 员猿物贝伐单抗能够抑制结肠癌患者的复发和转移 ] 图源摇员耘圆抗体的抗原鉴定结果云蚤早援源摇陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣糟燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早葬灶贼蚤早藻灶燥枣员耘圆葬灶贼蚤遭燥凿赠粤 : 宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早泽澡燥憎泽贼澡藻皂燥造藻糟怎造葬则皂葬泽泽燥枣贼澡藻葬灶贼蚤早藻灶燥枣员耘圆葬灶贼蚤遭燥凿赠蚤泽葬遭燥怎贼员员园园园园 ; 员 : 酝葬则噪藻则 ; 圆 : 员耘圆 ; 月 : 酝葬泽泽枣蚤灶早藻则责则蚤灶贼燥枣贼澡藻葬灶贼蚤早藻灶燥枣员耘圆葬灶贼蚤遭燥凿赠, 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿遭赠酝粤蕴阅陨鄄栽韵云 摇摇肿瘤靶向药物的研究重点是在于靶标的寻找 对于肿瘤靶标的要求主要有以下方面 :( 员 ) 特异性, 即靶标在人体内的分布主要集中于肿瘤细胞或肿瘤相关的各种支持细胞如肿瘤血管 肿瘤间质细胞, 或者是肿瘤的基质 从药效学的观点来说即是相应的靶向药物能容易地达到肿瘤组织, 并聚集于肿瘤组 [ 员缘织 ; 而在正常组织中分布和滞留很少 ] ( 圆 ) 功能性, 即靶标对于肿瘤的生长转移具有重要作用, 而对于正常组织细胞的生理功能不产生严重的影响 ( 猿 ) 膜蛋白 由于目前抗体分子仍然是优选的靶向药物, 而抗体分子不能够进入细胞只能和细胞膜蛋白结合 ; 另外, 药物不需进入细胞即发挥作用, 将能大大减少药物毒性作用 因此, 膜蛋白是肿瘤靶向治疗的优选靶位 肺癌的治疗仍然是个世界性的难题, 目前肺癌仍然没有很好的靶向治疗药物和分子靶标 本研究证实, 功能性单抗员耘圆能够与肺癌细胞系晕悦陨鄄匀缘圆园和郧蕴悦愿圆的细胞膜结合, 表明该抗体的抗原分布于细胞膜, 且在肺癌的腺癌和鳞癌细胞均有分布 员耘圆在体内外对肺癌的生长均有明显的抑制作用 质谱鉴定的结果表明, 员耘圆的抗原蛋白是悦孕杂员 [ 员远悦孕杂员是参与尿素循环的最重要的酶之一 ], 通常定位于细胞线粒体膜, 在胞质中也有分布 然而最新研究表明, 在肿瘤发生过程中许多胞内分子会异 [ 员苑常定位到细胞膜上 ] 因此, 推测氨甲酰磷酸合成酶也可能是由于类似的原因, 在肿瘤细胞中从线粒体膜上转位到了细胞膜上 悦孕杂员有多种异构体, 有 [ 员愿报道显示其多表达于肝和肠上皮细胞 ], 但某些异构体仅表达于睾丸, 并可能参与精子发生的过 [ 员怨程 ] 目前已经有文献报道, 悦孕杂员可能参与了肝 [ 圆园癌的发生发展 ] ; 在胃癌中也存在特异的高表达, [ 圆员被认为可能是胃癌的标志物之一 ] ; 但尚未有报道其作为膜蛋白的表达分布情况 本研究结果显示了采用抗体干扰或抑制肺癌细胞表面悦孕杂员的功能对于肺癌细胞的体内外生长均具有显著的抑制作用, 提示了悦孕杂员可能通过某种未知的机制参与了肺癌的发生或发展 我们将进一步对悦孕杂员基因的组织表达谱和作用机制进行详细的研究, 以明确该基因

5 员员源 灾燥造援员源 作为肺癌靶向治疗分子靶位的潜力 总之, 本研究证实了抗肺癌功能性单克隆抗体员耘圆体内外抑制肺癌生长的活性, 采用质谱技术鉴定其抗原为悦孕杂员, 为肺癌的靶向治疗提供了一种新的候选靶分子, 并为研究新的肺癌靶向治疗性抗体药物提供了实验依据 [ 参考文献 ] [ 员 ] 摇月燥赠造藻孕, 云藻则造葬赠允援悦葬灶糟藻则蚤灶糟蚤凿藻灶糟藻葬灶凿皂燥则贼葬造蚤贼赠蚤灶耘怎则燥责藻圆园园源 [ 允 ] 援粤灶灶韵灶糟燥造, 圆园园缘, 员远 ( 猿 ): 源愿员鄄源愿愿援 [ 圆 ] 摇宰蚤灶早燥孕粤, 砸蚤藻泽蕴粤, 郧蚤燥增蚤灶燥郧粤, 藻贼葬造援粤灶灶怎葬造则藻责燥则贼贼燥贼澡藻灶葬鄄贼蚤燥灶燥灶贼澡藻泽贼葬贼怎泽燥枣糟葬灶糟藻则, 员怨苑猿鄄员怨怨远, 憎蚤贼澡葬泽责藻糟蚤葬造泽藻糟贼蚤燥灶燥灶造怎灶早糟葬灶糟藻则葬灶凿贼燥遭葬糟糟燥泽皂燥噪蚤灶早 [ 允 ] 援允晕葬贼造悦葬灶糟藻则陨灶泽贼, 员怨怨怨, 怨员 ( 愿 ): 远苑缘鄄远怨园援 [ 猿 ] 摇酝燥则则蚤泽杂砸, 悦葬则藻赠蕴粤援栽则葬泽贼怎扎怎皂葬遭葬灶凿遭藻赠燥灶凿 : 晕藻憎责燥泽泽蚤遭蚤造蚤贼蚤藻泽枣燥则贼澡藻贼则藻葬贼皂藻灶贼燥枣匀耘砸圆鄄责燥泽蚤贼蚤增藻遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援韵灶糟燥造燥早赠 ( 宰蚤造造蚤泽贼燥灶孕葬则噪 ) 援圆园园远, 圆园 ( 员源 ): 员苑远猿鄄员苑苑员援 [ 源 ] 摇杂澡蚤澡栽, 蕴蚤灶凿造藻赠悦援月藻增葬糟蚤扎怎皂葬遭 : 粤灶葬灶早蚤燥早藻灶藻泽蚤泽蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则枣燥则贼澡藻贼则藻葬贼皂藻灶贼燥枣泽燥造蚤凿皂葬造蚤早灶葬灶糟蚤藻泽 [ 允 ] 援悦造蚤灶栽澡藻则, 圆园园远, 圆愿 ( 员员 ): 员苑苑怨鄄员苑愿园圆援 [ 缘 ] 摇悦葬泽糟燥灶藻栽, 郧则蚤凿藻造造蚤悦, 悦蚤葬则凿蚤藻造造燥云援悦燥皂遭蚤灶藻凿贼葬则早藻贼藻凿贼澡藻则葬责蚤藻泽蚤灶灶燥灶鄄泽皂葬造造糟藻造造造怎灶早糟葬灶糟藻则 : 粤憎蚤灶灶藻则泽贼则葬贼藻早赠 [ 允 ]? 悦怎则则韵责蚤灶韵灶糟燥造, 圆园园苑, 员怨 ( 圆 ): 怨愿鄄员园圆援 [ 远 ] 摇砸葬皂葬造蚤灶早葬皂杂, 月藻造葬灶蚤悦孕援砸藻糟藻灶贼葬凿增葬灶糟藻泽蚤灶贼葬则早藻贼藻凿贼澡藻则葬责赠枣燥则灶燥灶鄄泽皂葬造造糟藻造造造怎灶早糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援耘曾责藻则贼韵责蚤灶栽澡藻则栽葬则早藻贼泽, 圆园园苑, 员员 ( 圆 ): 圆源缘鄄圆缘苑援 [ 苑 ] 摇在澡葬灶早再, 砸葬灶再, 再怎蕴, 藻贼葬造援酝燥灶燥糟造燥灶葬造葬灶贼蚤遭燥凿赠贼燥澡怎皂葬灶藻鄄泽燥责澡葬早藻葬造糟葬灶糟藻则藻灶凿燥贼澡藻造蚤怎皂蚤灶澡蚤遭蚤贼泽葬灶早蚤燥早藻灶藻泽蚤泽葬灶凿贼怎皂燥则早则燥憎贼澡 [ 允 ] 援粤灶贼蚤糟葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园园远, 圆远 ( 源月 ): 圆怨远猿鄄圆怨苑园援 [ 愿 ] 摇韵造凿蕴允援陨皂皂怎灶燥贼澡藻则葬责赠枣燥则糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援杂糟蚤粤皂, 员怨怨远, 圆苑缘 ( 猿 ): 员猿远鄄员源猿援 [ 怨 ] 摇杂糟燥贼贼, 粤酝, 悦藻遭燥灶允援悦造蚤灶蚤糟葬造责则燥皂蚤泽藻燥枣贼怎皂燥怎则蚤皂皂怎灶燥造燥早赠 [ 允 ] 援蕴葬灶糟藻贼, 员怨怨苑, 猿源怨 ( 杂圆 ): 员怨鄄圆圆援 [ 员园 ] 月葬泽藻造早葬允, 晕燥则贼燥灶蕴, 粤造遭葬灶藻造造允, 藻贼葬造援砸藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼澡怎皂葬灶蚤扎藻凿葬灶贼蚤鄄匀耘砸圆葬灶贼蚤遭燥凿赠 ( 匀藻则糟藻责贼蚤灶 ) 藻灶澡葬灶糟藻泽贼澡藻葬灶贼蚤贼怎皂燥则葬糟贼蚤增蚤贼赠燥枣责葬糟造蚤贼葬曾藻造葬灶凿凿燥曾燥则怎遭蚤糟蚤灶葬早葬蚤灶泽贼匀耘砸圆辕灶藻怎燥增藻则藻曾责则藻泽泽蚤灶早澡怎皂葬灶遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则曾藻灶燥早则葬枣贼泽 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则砸藻泽, 员怨怨愿, 缘愿 ( 员猿 ): 圆愿圆缘鄄圆愿猿员援 [ 员员 ] 云燥则葬灶允酝, 砸燥澡葬贼蚤灶藻则粤在杂, 悦怎灶灶蚤灶早澡葬皂阅, 藻贼葬造援耘怎则燥责藻葬灶责澡葬泽藻 Ⅱ 泽贼怎凿赠燥枣则蚤贼怎曾蚤皂葬遭 ( 糟澡蚤皂藻则蚤糟葬灶贼蚤鄄悦阅圆园皂燥灶燥糟造燥灶葬造葬灶贼蚤遭燥凿赠 ) 枣燥则责葬贼蚤藻灶贼泽憎蚤贼澡灶藻憎造赠凿蚤葬早灶燥泽藻凿皂葬灶贼造藻鄄糟藻造造造赠皂责澡燥皂葬葬灶凿责则藻增蚤鄄燥怎泽造赠贼则藻葬贼藻凿皂葬灶贼造藻鄄糟藻造造造赠皂责澡燥皂葬, 蚤皂皂怎灶燥糟赠贼燥皂葬, 葬灶凿泽皂葬造造月鄄糟藻造造造赠皂责澡燥糟赠贼蚤糟造赠皂责澡燥皂葬 [ 允 ] 援允悦造蚤灶韵灶糟燥造, 圆园园园, 员愿 ( 圆 ): 猿员苑鄄猿圆猿援 [ 员圆 ] 运葬灶贼葬则躁蚤葬灶匀, 酝藻造燥允灾, 栽怎则葬杂, 藻贼葬造援悦澡则燥灶蚤糟皂赠藻造燥蚤凿造藻怎噪藻皂蚤葬 : 阅蚤泽藻葬泽藻遭蚤燥造燥早赠葬灶凿糟怎则则藻灶贼葬灶凿枣怎贼怎则藻贼澡藻则葬责藻怎贼蚤糟泽贼则葬贼藻早蚤藻泽 [ 允 ] 援匀藻皂葬贼燥造燥早赠粤皂杂燥糟匀藻皂葬贼燥造耘凿怎糟孕则燥早则葬皂, 圆园园园, 怨园鄄员园怨援 [ 员猿 ] 云藻则灶葬灶凿燥晕匀, 匀怎则憎蚤贼扎匀陨援栽葬则早藻贼藻凿贼澡藻则葬责赠燥枣糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则 : 悦造蚤灶蚤糟葬造藻曾责藻则蚤藻灶糟藻憎蚤贼澡遭藻增葬糟蚤扎怎皂葬遭 [ 允 ] 援韵灶糟燥造燥早蚤泽贼, 圆园园源, 怨 ( 杂员 ): 员员鄄员愿援 [ 员源 ] 栽燥噪怎凿葬再, 杂怎扎怎噪蚤再, 韵澡贼葬酝, 藻贼葬造援悦燥皂责葬泽泽蚤燥灶葬贼藻怎泽藻燥枣澡怎皂葬灶鄄蚤扎藻凿葬灶贼蚤鄄匀耘砸圆辕灶藻怎责则燥贼藻蚤灶, 贼则葬泽贼怎扎怎皂葬遭枣燥则皂藻贼葬泽贼葬贼蚤糟遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则蚤灶允葬责葬灶 [ 允 ] 援月则藻葬泽贼悦葬灶糟藻则, 圆园园员, 愿 ( 源 ): 猿员园鄄猿员缘援 [ 员缘 ] 杂糟燥贼贼, 粤酝, 宰藻造贼杂援粤灶贼蚤遭燥凿赠鄄遭葬泽藻凿蚤皂皂怎灶燥造燥早蚤糟葬造贼澡藻则葬责蚤藻泽 [ 允 ] 援悦怎则则韵责蚤灶陨皂皂怎灶燥造, 员怨怨苑, 怨 ( 缘 ): 苑员苑鄄苑圆圆援 [ 员远 ] 粤凿糟燥糟噪酝宰, 韵鸳月则蚤藻灶宰耘援酝燥造藻糟怎造葬则糟造燥灶蚤灶早燥枣糟阅晕粤枣燥则则葬贼葬灶凿澡怎皂葬灶糟葬则遭葬皂赠造责澡燥泽责澡葬贼藻泽赠灶贼澡藻贼葬泽藻 [ 陨允 ] 援允月蚤燥造悦澡藻皂, 员怨愿源, 圆缘怨 ( 圆员 ): 员猿源苑员鄄员猿源苑远援 [ 员苑 ] 粤则葬责酝粤, 蕴葬澡凿藻灶则葬灶贼葬允, 酝蚤灶贼扎孕允, 藻贼葬造援悦藻造造泽怎则枣葬糟藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣贼澡藻泽贼则藻泽泽则藻泽责燥灶泽藻糟澡葬责藻则燥灶藻郧砸孕苑愿藻灶葬遭造藻泽贼怎皂燥则贼葬则早藻贼蚤灶早遭赠糟蚤则糟怎造葬贼蚤灶早造藻早藻灶凿泽 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则悦藻造造援圆园园源, 远 ( 猿 ): 圆苑缘鄄圆愿源援 [ 员愿 ] 晕蚤泽澡蚤赠葬皂葬运, 月藻则泽贼藻蚤灶郧, 韵凿葬栽, 藻贼葬造援悦造燥灶蚤灶早葬灶凿灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻泽藻择怎藻灶糟藻燥枣糟阅晕粤藻灶糟燥凿蚤灶早澡怎皂葬灶造蚤增藻则泽藻则蚤灶藻鄄责赠则怎增葬贼藻葬皂蚤灶鄄燥贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻 [ 允 ] 援耘怎则允月蚤燥糟澡藻皂, 员怨怨园, 员怨源 ( 员 ): 怨鄄员愿援 [ 员怨 ] 匀怎燥砸, 在澡怎匀, 蕴怎蕴, 藻贼葬造援酝燥造藻糟怎造葬则糟造燥灶蚤灶早, 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶葬灶凿糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽燥枣葬灶燥增藻造蚤泽燥枣燥则皂燥枣糟葬则遭葬皂赠造责澡燥泽责澡葬贼藻泽赠灶贼澡藻贼葬泽藻陨蚤灶澡怎皂葬灶贼藻泽贼蚤泽 [ 允 ] 援允月蚤燥糟澡藻皂酝燥造月蚤燥造, 圆园园缘, 猿愿 ( 员 ): 圆愿鄄猿猿援 [ 圆园 ] 运蚤灶燥泽澡蚤贼葬酝, 酝蚤赠葬贼葬酝援哉灶凿藻则藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣皂砸晕粤蚤灶澡怎皂葬灶澡藻责鄄葬贼燥糟藻造造怎造葬则糟葬则糟蚤灶燥皂葬枣燥糟怎泽蚤灶早燥灶藻蚤早澡贼造燥糟蚤 [ 允 ] 援匀藻责葬贼燥造燥早赠, 圆园园圆, 猿远 ( 圆 ): 源猿猿鄄源猿愿援 [ 圆员 ] 蕴蚤怎栽匀, 蕴蚤阅悦, 郧怎悦云, 藻贼葬造援悦葬则遭葬皂赠造责澡燥泽责澡葬贼藻泽赠灶贼澡藻贼葬泽藻陨援粤灶燥增藻造皂葬则噪藻则枣燥则早葬泽贼则蚤糟糟葬则糟蚤灶燥皂葬 [ 允 ] 援悦澡蚤灶酝藻凿允 ( 耘灶早造 ) 援员怨愿怨, 员园圆 ( 愿 ): 远猿园鄄远猿愿援 [ 收稿日期 ] 摇圆园园远原员圆原圆园 [ 修回日期 ] 摇圆园园苑原园猿原员园 [ 本文编辑 ] 摇王摇莹 檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿 文稿中统计学符号规范化书写的要求 读者 作者 编者 摇摇本刊严格遵守国家标准郧月猿猿缘愿原怨猿 统计学术语 的有关规定 为此, 请作者书写统计学符号时注意以下要求 :( 员 ) 样本的算术平均数用英文小写珋曾, 不用大写载, 也不用酝藻葬灶或酝 ;( 圆 ) 标准差用英文小写泽, 不用杂阅 ;( 猿 ) 标准误用英文小写泽珋曾, 不圆用杂耘 ;( 源 ) 贼检验用英文小写贼 ;( 缘 ) 云检验用英文大写云 ;( 远 ) 卡方检验用希文小写 χ ;( 苑 ) 相关系数用英文小写则 ;( 愿 ) 自由度用圆希文小写 ν;( 怨 ) 样本数用英文小写灶 ;( 员园 ) 概率用英文大写孕 ;( 员员 ) 以上符号珋曾 泽 泽珋曾 贼 云 χ 则 ν 灶 孕均为斜体 请作者注意遵照执行 ( 本刊编辑部 ) 摇摇