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3 悦匀陨晕耘杂耘摇允韵哉砸晕粤蕴摇韵云摇悦韵酝孕粤砸粤栽陨灾耘酝耘阅陨悦陨晕耘 摇酝燥灶贼澡造赠摇摇耘泽贼葬遭造蚤泽澡藻凿蚤灶酝葬则糟澡员怨怨员摇摇灾燥造怎皂藻圆远摇晕怎皂遭藻则愿摇摇粤怎早怎泽贼猿园摇圆园员远 砸藻泽责燥灶泽蚤遭造藻陨灶泽贼蚤贼怎贼蚤燥灶 摇 摇 悦澡蚤灶葬粤泽泽燥糟蚤泽葬贼蚤燥灶枣燥则杂糟蚤藻灶糟藻葬灶凿栽藻糟澡灶燥造燥早赠 杂责燥灶泽燥则 摇 摇 悦澡蚤灶藻泽藻粤泽泽燥糟蚤葬贼蚤燥灶枣燥则蕴葬遭燥则葬贼燥则赠粤灶蚤皂葬造杂糟蚤藻灶糟藻泽陨灶泽贼蚤贼怎贼藻燥枣蕴葬遭燥则葬贼燥则赠粤灶蚤皂葬造杂糟蚤藻灶糟藻袁悦澡蚤灶藻泽藻粤糟葬凿藻皂赠燥枣酝藻凿蚤糟葬造杂糟蚤藻灶糟藻泽 耘凿蚤贼蚤灶早 摇 摇 耘凿蚤贼燥则蚤葬造月燥葬则凿燥枣悦澡蚤灶藻泽藻允燥怎则灶葬造燥枣悦燥皂责葬则葬贼蚤增藻酝藻凿蚤糟蚤灶藻缘孕葬灶允蚤葬再怎葬灶晕葬灶蕴蚤袁悦澡葬燥赠葬灶早阅蚤泽贼则蚤糟贼袁月藻蚤躁蚤灶早员园园园圆员栽藻造院渊园员园冤远苑苑苑怨猿猿苑云葬曾院渊园员园冤远苑苑苑园远怨园耘鄄皂葬蚤造院遭躁遭岳糟灶蚤造葬泽援燥则早澡贼贼责院辕辕扎早泽赠凿憎援葬造造躁燥怎则灶葬造援葬糟援糟灶辕扎早遭躁赠曾扎扎辕糟澡辕蚤灶凿藻曾援葬泽责曾 耘凿蚤贼燥则鄄蚤灶鄄悦澡蚤藻枣 摇 摇 匝陨晕悦澡怎葬灶渊秦川冤 孕怎遭造蚤泽澡蚤灶早 摇 摇 悦澡蚤灶藻泽藻粤泽泽燥糟蚤葬贼蚤燥灶枣燥则蕴葬遭燥则葬贼燥则赠粤灶蚤皂葬造杂糟蚤藻灶糟藻泽缘孕葬灶允蚤葬再怎葬灶晕葬灶蕴蚤袁悦澡葬燥赠葬灶早阅蚤泽贼则蚤糟贼袁月藻蚤躁蚤灶早员园园园圆员栽藻造院渊园员园冤远苑苑苑怨猿猿苑云葬曾院渊园员园冤远苑苑苑园远怨园耘鄄皂葬蚤造院遭躁遭岳糟灶蚤造葬泽援燥则早 孕则蚤灶贼蚤灶早 摇 摇 栽澡藻月葬蚤泽澡葬灶孕则蚤灶贼蚤灶早匀燥怎泽藻燥枣 摇 摇 悦澡葬灶早责蚤灶早袁月藻蚤躁蚤灶早 阅蚤泽贼则蚤遭怎贼燥则 摇 摇 耘凿蚤贼燥则蚤葬造韵枣枣蚤糟藻燥枣悦澡蚤灶藻泽藻允燥怎则灶葬造燥枣悦燥皂责葬则葬贼蚤增藻酝藻凿蚤糟蚤灶藻缘孕葬灶允蚤葬再怎葬灶晕葬灶蕴蚤袁悦澡葬燥赠葬灶早阅蚤泽贼则蚤糟贼袁月藻蚤躁蚤灶早员园园园圆员栽藻造院渊园员园冤远苑苑苑怨猿猿苑云葬曾院渊园员园冤远苑苑苑园远怨园耘鄄皂葬蚤造院遭躁遭岳糟灶蚤造葬泽援燥则早 酝葬蚤造鄄燥则凿藻则 摇 摇 耘凿蚤贼燥则蚤葬造韵枣枣蚤糟藻燥枣悦澡蚤灶藻泽藻允燥怎则灶葬造燥枣悦燥皂责葬则葬贼蚤增藻酝藻凿蚤糟蚤灶藻 悦杂杂晕 摇 摇 陨杂杂晕员远苑员鄄苑愿缘远 摇 摇 悦晕员员鄄源愿圆圆辕砸 悦燥责赠则蚤早澡贼圆园员远遭赠贼澡藻悦澡蚤灶藻泽藻粤泽泽燥糟蚤葬贼蚤燥灶 枣燥则蕴葬遭燥则葬贼燥则赠粤灶蚤皂葬造杂糟蚤藻灶糟藻泽 悦韵晕栽耘晕栽杂摇陨晕摇月砸陨耘云 栽澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂燥怎泽藻早藻灶藻贼蚤糟则藻枣藻则藻灶糟藻责燥责怎造葬贼蚤燥灶凿藻泽蚤早灶藻凿枣燥则凿蚤泽泽藻糟贼蚤灶早糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽 匀葬灶蚤枣葬粤遭怎栽燥葬皂蚤澡粤贼葬皂灶蚤袁酝葬澡皂燥怎凿耘早遭葬则蚤葬袁再葬泽藻则杂葬造葬赠皂藻澡袁藻贼葬造援渊员冤粤责责造蚤糟葬贼蚤燥灶葬灶凿砸藻泽藻葬则糟澡孕则燥早则藻泽泽燥枣悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂蚤糟藻蚤灶陨灶枣藻糟贼蚤燥怎泽阅蚤泽藻葬泽藻粤则藻葬 载哉蕴蚤造蚤袁匝陨晕悦澡怎葬灶渊圆园冤悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂蚤糟藻葬泽葬灶燥增藻造责造葬贼枣燥则皂蚤灶糟葬灶糟藻则则藻泽藻葬则糟澡 蕴陨运藻鄄躁怎葬灶袁郧粤韵砸葬灶渊圆缘冤悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂蚤糟藻葬灶凿责则藻糟蚤泽蚤燥灶皂藻凿蚤糟蚤灶藻 阅哉孕藻灶早袁悦匀耘晕酝藻灶早鄄赠蚤袁蕴陨悦澡藻灶早鄄糟澡藻灶早袁藻贼葬造援渊猿园冤月蚤燥造燥早蚤糟葬造糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽燥枣悦澡蚤灶藻泽藻澡葬皂泽贼藻则蚤灶枣藻糟贼藻凿憎蚤贼澡月葬遭藻泽蚤葬 再耘蕴蚤袁酝粤杂澡怎葬蚤袁宰粤晕郧再蚤鄄躁蚤葬袁藻贼葬造援渊猿远冤悦燥皂责葬则蚤泽燥灶燥枣贼澡藻藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠燥枣贼葬蚤造增藻蚤灶蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶葬灶凿蚤灶贼则葬皂赠燥糟葬则凿蚤葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶燥枣葬凿藻灶燥增蚤则怎泽增藻糟贼燥则蚤灶皂蚤糟藻 再粤晕郧蕴蚤灶鄄泽澡葬灶袁在匀粤晕在澡藻灶鄄扎澡藻灶袁宰粤晕郧月燥袁藻贼葬造援渊源圆冤粤凿增葬灶贼葬早藻泽葬灶凿葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣贼藻造藻皂藻贼则赠糟燥皂责葬则藻凿憎蚤贼澡贼澡藻贼则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造皂藻贼澡燥凿泽蚤灶泽葬枣藻贼赠责澡葬则皂葬糟燥造燥早赠 杂哉晕允蚤灶早鄄躁蚤灶早袁在匀韵哉匝怎葬灶袁匝陨在澡藻灶鄄扎澡藻灶袁藻贼葬造援渊源苑冤悦澡葬灶早藻泽葬灶凿泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶糟藻燥枣皂藻贼葬造造燥贼澡蚤燥灶藻蚤灶藻曾责则藻泽泽蚤燥灶凿怎则蚤灶早澡藻责葬贼燥糟葬则糟蚤灶燥早藻灶藻泽蚤泽蚤灶悦缘苑月蕴辕远允皂蚤糟藻 再陨载怎袁蕴韵晕郧蕴蚤袁悦匀耘晕郧酝蚤灶早鄄造蚤葬灶早渊缘猿冤粤造燥灶早鄄贼藻则皂泽贼怎凿赠燥枣贼澡藻贼燥曾蚤糟蚤贼赠燥枣葬灶哉赠早澡怎则皂藻凿蚤糟蚤灶藻袁运怎则泽蚤运葬噪灶葬择袁燥灶澡藻皂葬贼燥造燥早蚤糟葬造责葬则葬皂藻贼藻则泽蚤灶则葬贼泽 砸葬遭蚤早怎造窑陨泽造葬皂袁粤遭凿怎躁蚤造蚤造窑葬遭凿怎早澡藻灶赠袁蕴耘晕郧再蚤灶早造蚤袁藻贼葬造援渊缘怨冤粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶凿藻糟则藻葬泽藻泽贼澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣贼赠责藻圆增藻泽蚤糟怎造葬则皂燥灶燥葬皂蚤灶藻贼则葬灶泽责燥则贼藻则蚤灶灶藻怎则燥遭造葬泽贼燥皂葬杂匀鄄杂再缘再糟藻造造泽 酝粤晕允蚤葬灶鄄皂藻蚤袁郧哉韵允怎灶鄄贼葬灶早袁在匀粤晕郧阅葬蚤鄄躁怎葬灶袁藻贼葬造援渊远远冤耘曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣粤匝孕员葬灶凿粤匝孕缘蚤泽凿藻糟则藻葬泽藻凿蚤灶贼澡藻葬造增藻燥造葬则鄄糟葬责蚤造造葬则赠皂藻皂遭则葬灶藻蚤灶则葬贼泽憎蚤贼澡葬糟怎贼藻造怎灶早蚤灶躁怎则赠 再哉耘杂澡藻灶早袁在匀哉孕蚤灶早袁再哉耘蕴藻蚤袁藻贼葬造援渊苑园冤悦燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶燥枣葬匀则皂怎贼葬灶贼噪灶燥糟噪燥怎贼皂燥怎泽藻皂燥凿藻造葬灶凿责澡藻灶燥贼赠责蚤糟葬灶葬造赠泽蚤泽 在匀哉运怎蚤鄄糟澡藻灶早袁载哉悦怎灶鄄泽澡怎葬灶袁宰粤晕郧悦澡怎灶鄄赠葬燥袁藻贼葬造援渊苑缘冤陨灶枣造怎藻灶糟藻燥枣责则燥贼藻蚤灶责澡燥泽责澡葬贼葬泽藻缘燥灶贼澡藻造蚤责蚤凿皂藻贼葬遭燥造蚤泽皂蚤灶皂蚤糟藻 宰粤晕郧允怎灶袁匝陨哉月蚤灶袁蕴陨哉酝蚤灶早袁藻贼葬造援渊苑怨冤杂贼怎凿赠燥灶贼澡藻造皂灶葬早藻灶藻噪灶燥糟噪凿燥憎灶蚤灶扎藻遭则葬枣蚤泽澡藻皂遭则赠燥憎蚤贼澡皂燥则责澡燥造蚤灶燥燥造蚤早燥灶怎糟造藻燥则蚤凿藻泽 蕴陨哉云藻灶早袁匀哉粤晕郧匀怎蚤鄄皂蚤灶袁宰粤晕郧在澡蚤鄄澡怎葬袁藻贼葬造援渊愿缘冤郧藻灶藻贼蚤糟皂燥灶蚤贼燥则蚤灶早葬灶凿葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣澡蚤早澡造赠蚤皂皂怎灶燥凿藻枣蚤糟蚤藻灶贼皂蚤糟藻枣则燥皂凿蚤枣枣藻则藻灶贼泽燥怎则糟藻泽遭赠皂蚤糟则燥泽葬贼藻造造蚤贼藻阅晕粤皂葬则噪藻则泽 云粤晕栽葬燥袁宰粤晕郧匀燥灶早袁宰耘陨允蚤藻袁藻贼葬造援渊怨员冤悦燥皂责葬则蚤泽燥灶燥枣澡怎皂葬灶葬灶凿葬灶蚤皂葬造燥则葬造皂蚤糟则燥遭蚤燥贼葬遭赠陨造造怎皂蚤灶葬泽藻择怎藻灶糟蚤灶早燥枣员远杂则砸晕粤贼葬早泽 郧哉阅燥灶早鄄泽澡怎袁悦匀耘晕月葬灶早鄄扎澡怎袁允陨粤晕郧载蚤葬袁藻贼葬造援渊怨远冤

4 圆园员远年愿月第圆远卷摇第愿期 中国比较医学杂志悦匀陨晕耘杂耘允韵哉砸晕粤蕴韵云悦韵酝孕粤砸粤栽陨灾耘酝耘阅陨悦陨晕耘 粤怎早怎泽贼袁圆园员远灾燥造援圆远摇晕燥援愿 藡 蕥 蕥蕥蕥蕥藡专题研究 蕥蕥蕥蕥藡 蕥藡 栽澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂燥怎泽藻早藻灶藻贼蚤糟则藻枣藻则藻灶糟藻责燥责怎造葬贼蚤燥灶凿藻泽蚤早灶藻凿枣燥则凿蚤泽泽藻糟贼蚤灶早糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽 员员员圆员匀葬灶蚤枣葬粤遭怎栽燥葬皂蚤澡粤贼葬皂灶蚤袁酝葬澡皂燥怎凿耘早遭葬则蚤葬袁再葬泽藻则杂葬造葬赠皂藻澡袁粤赠泽葬则晕葬泽澡蚤枣葬灶凿云怎葬凿粤援陨则葬择蚤渊员援阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣悦造蚤灶蚤糟葬造酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠葬灶凿陨皂皂怎灶燥造燥早赠袁杂葬糟噪造藻则云葬糟怎造贼赠燥枣酝藻凿蚤糟蚤灶藻袁栽藻造粤增蚤增哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁砸葬皂葬贼粤增蚤增袁栽藻造粤增蚤增袁陨泽则葬藻造曰圆援阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣孕则燥泽贼澡燥凿燥灶贼蚤糟泽袁阅藻灶贼葬造杂糟澡燥燥造葬贼匀葬凿葬泽泽葬澡袁匀藻遭则藻憎哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁允藻则怎泽葬造藻皂袁陨泽则葬藻造冤 摇摇揖粤遭泽贼则葬糟贼铱摇悦燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽葬则藻皂怎造贼蚤枣葬糟贼燥则蚤葬造贼则葬蚤贼泽糟燥灶贼则燥造造藻凿遭赠责燥造赠早藻灶蚤糟澡燥泽贼枣葬糟贼燥则泽援栽澡藻泽藻贼则葬蚤贼鄄则藻造葬贼藻凿责澡藻灶燥贼赠责蚤糟糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽葬灶凿责藻则枣燥则皂葬灶糟藻蚤灶糟造怎凿蚤灶早遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼袁遭造燥燥凿糟澡藻皂蚤泽贼则赠袁蚤皂皂怎灶藻糟藻造造责则燥枣蚤造藻泽袁葬泽憎藻造造澡燥泽贼泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥蚤灶枣藻糟贼蚤燥怎泽葬灶凿糟澡则燥灶蚤糟凿蚤泽藻葬泽藻泽援陨灶则藻糟藻灶贼赠藻葬则泽袁贼则藻皂藻灶凿燥怎泽藻枣枣燥则贼泽憎藻则藻蚤灶增藻泽贼藻凿葬蚤皂蚤灶早贼燥皂葬责贼澡藻澡燥泽贼早藻灶藻贼蚤糟枣葬糟贼燥则泽葬贼贼则蚤遭怎贼藻贼燥贼澡藻泽藻贼则葬蚤贼泽葬灶凿泽怎遭泽藻择怎藻灶贼造赠糟造燥灶藻贼澡藻早藻灶藻辕泽怎灶凿藻则造赠蚤灶早贼澡藻泽藻造燥糟蚤援陨灶责葬则葬造造藻造贼燥澡怎皂葬灶泽贼怎凿蚤藻泽袁葬灶怎皂遭藻则燥枣皂燥怎泽藻皂燥凿藻造泽葬灶凿葬责责则燥葬糟澡藻泽憎藻则藻凿藻增藻造燥责藻凿葬蚤皂藻凿贼燥藻灶澡葬灶糟藻贼澡藻皂葬责责蚤灶早责则燥糟藻泽泽葬灶凿贼澡藻早藻灶藻糟造燥灶蚤灶早援栽澡藻泽藻蚤灶糟造怎凿藻燥枣怎泽蚤灶早则藻泽燥怎则糟藻泽泽怎糟澡葬泽云圆袁遭葬糟噪糟则燥泽泽袁葬凿增葬灶糟藻凿蚤灶贼藻则糟则燥泽泽造蚤灶藻泽袁燥怎贼遭则藻凿责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽袁糟燥灶泽燥皂蚤糟袁糟燥灶早藻灶蚤糟葬灶凿则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼蚤灶遭则藻凿造蚤灶藻泽渊砸陨蕴冤援栽澡藻糟燥灶泽贼则葬蚤灶贼泽燥枣贼澡藻泽藻葬责责则燥葬糟澡藻泽憎藻则藻贼澡藻造蚤皂蚤贼藻凿则藻泽燥造怎贼蚤燥灶皂葬责责蚤灶早燥枣早藻灶燥皂蚤糟则藻早蚤燥灶泽燥枣贼澡藻择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻贼则葬蚤贼造燥糟蚤渊匝栽蕴冤葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿憎蚤贼澡贼澡藻贼则葬蚤贼燥枣蚤灶贼藻则藻泽贼泽袁葬灶凿贼澡藻造蚤皂蚤贼藻凿早藻灶藻贼蚤糟凿蚤增藻则泽蚤贼赠燥遭泽藻则增藻凿蚤灶贼澡藻责葬则藻灶贼葬造枣燥怎灶凿藻则泽援栽燥燥增藻则糟燥皂藻贼澡藻泽藻造蚤皂蚤贼葬贼蚤燥灶泽袁葬灶藻憎早藻灶藻贼蚤糟葬造造赠澡蚤早澡造赠凿蚤增藻则泽藻则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼蚤灶遭则藻凿造蚤灶藻泽燥枣皂燥怎泽藻责燥责怎造葬贼蚤燥灶憎葬泽藻泽贼葬遭造蚤泽澡藻凿袁灶葬皂藻造赠贼澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽渊悦悦冤袁糟则藻葬贼藻凿枣则燥皂枣怎造造则藻糟蚤责则燥糟葬造皂葬贼蚤灶早燥枣愿凿蚤增藻则早藻灶贼泽贼则葬蚤灶泽燥枣皂蚤糟藻院粤辕允袁悦缘苑月蕴辕远允袁员圆怨杂员辕杂增陨皂允袁晕韵阅辕蕴贼允袁晕在韵辕匀蚤蕴贼允袁悦粤杂栽辕耘蚤袁孕宰运辕孕澡允袁葬灶凿宰杂月辕耘蚤允援月赠蚤灶贼藻则糟则燥泽泽蚤灶早贼澡藻泽藻藻蚤早澡贼枣燥怎灶凿藻则泽贼燥早藻灶藻则葬贼藻贼澡藻凿蚤枣枣藻则藻灶贼悦悦造蚤灶藻泽袁贼澡藻早藻灶藻贼蚤糟皂葬噪藻怎责燥枣贼澡藻灶藻憎造赠凿藻增藻造燥责藻凿则藻泽燥怎则糟藻蚤泽糟燥皂责造藻贼藻造赠凿蚤枣枣藻则藻灶贼枣则燥皂贼澡藻藻蚤早澡贼责葬则藻灶贼葬造造蚤灶藻泽袁葬灶凿憎蚤造造泽澡燥憎澡藻贼藻则燥泽蚤泽袁憎澡蚤糟澡泽怎遭泽藻择怎藻灶贼造赠憎蚤造造则藻泽责燥灶泽藻凿蚤枣枣藻则藻灶贼造赠糟燥皂责葬则蚤灶早憎蚤贼澡贼澡藻蚤则燥则蚤早蚤灶葬造枣燥怎灶凿藻则泽援云蚤灶葬造造赠袁燥怎则则藻泽怎造贼泽泽怎早早藻泽贼贼澡葬贼蚤贼蚤泽灶燥贼藻泽泽藻灶贼蚤葬造贼燥凿藻枣蚤灶蚤灶早贼澡藻责澡藻灶燥贼赠责蚤糟则藻泽责燥灶泽藻燥枣贼澡藻藻蚤早澡贼责葬则藻灶贼葬造造蚤灶藻泽袁责则蚤燥则燥枣葬泽泽藻泽泽蚤灶早贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽袁遭藻糟葬怎泽藻蚤贼蚤泽遭藻造蚤藻增藻凿贼澡葬贼早藻灶藻贼蚤糟蚤灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶燥枣贼澡藻灶藻憎早藻灶藻贼蚤糟皂葬噪藻怎责燥枣贼澡藻灶藻憎造蚤灶藻泽憎蚤造造则藻增藻葬造灶藻憎责澡藻灶燥贼赠责蚤糟则藻泽责燥灶泽藻袁憎澡蚤糟澡糟燥皂责造藻贼藻造赠凿蚤枣枣藻则藻灶贼枣则燥皂贼澡藻责葬则藻灶贼葬造造蚤灶藻泽援陨灶贼澡蚤泽则藻责燥则贼袁憎藻责则藻泽藻灶贼贼燥贼澡藻糟燥皂皂怎灶蚤贼赠贼澡藻责燥憎藻则燥枣贼澡藻悦悦枣燥则凿蚤泽泽藻糟贼蚤灶早增葬则蚤藻贼赠燥枣糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽蚤灶糟造怎凿蚤灶早澡燥泽贼泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥蚤灶枣藻糟贼蚤燥怎泽葬灶凿糟澡则燥灶蚤糟凿蚤泽藻葬泽藻泽葬泽憎藻造造遭燥凿赠责藻则枣燥则皂葬灶糟藻贼则葬蚤贼泽援月葬泽藻凿燥灶燥怎则则藻泽怎造贼泽枣则燥皂葬增葬则蚤藻贼赠燥枣泽贼怎凿蚤藻泽袁憎藻则藻糟燥皂皂藻灶凿贼燥贼澡藻糟燥皂皂怎灶蚤贼赠袁贼澡葬贼贼澡藻遭藻泽贼泽贼则葬贼藻早赠燥枣怎泽蚤灶早贼澡蚤泽责燥责怎造葬贼蚤燥灶蚤泽贼燥葬蚤皂燥枣责澡藻灶燥贼赠责蚤灶早葬遭燥怎贼缘园葬灶凿皂燥则藻燥枣悦悦造蚤灶藻泽袁憎蚤贼澡造蚤皂蚤贼藻凿灶怎皂遭藻则燥枣遭蚤燥造燥早蚤糟葬造则藻责造蚤糟葬贼藻泽渊猿原源皂蚤糟藻责藻则造蚤灶藻冤袁葬灶凿泽怎遭泽藻择怎藻灶贼造赠怎泽蚤灶早贼澡藻责怎遭造蚤糟造赠葬增葬蚤造葬遭造藻澡蚤早澡凿藻灶泽藻早藻灶燥贼赠责藻蚤灶枣燥则皂葬贼蚤燥灶燥枣贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽葬泽憎藻造造贼澡藻泽藻择怎藻灶糟藻凿葬贼葬遭葬泽藻燥枣贼澡藻藻蚤早澡贼枣燥怎灶凿藻则泽袁蚤贼憎蚤造造遭藻责燥泽泽蚤遭造藻责藻则枣燥则皂蚤灶早匝栽蕴皂葬责责蚤灶早贼燥葬怎灶责则藻糟藻凿藻灶贼藻凿责则藻糟蚤泽蚤燥灶早藻灶燥皂蚤糟则藻早蚤燥灶泽造藻泽泽贼澡葬灶员酝月袁泽怎遭泽藻择怎藻灶贼造赠造藻葬凿贼燥蚤凿藻灶贼蚤枣赠责燥贼藻灶贼蚤葬造泽贼则燥灶早糟葬灶凿蚤凿葬贼藻早藻灶藻泽援栽澡藻泽藻葬糟澡蚤藻增藻皂藻灶贼泽葬则藻遭藻造蚤藻增藻凿糟葬灶灶燥贼遭藻燥遭贼葬蚤灶藻凿憎蚤贼澡葬灶赠燥贼澡藻则糟怎则则藻灶贼造赠葬增葬蚤造葬遭造藻皂燥怎泽藻则藻泽燥怎则糟藻责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽援揖中图分类号铱砸原猿猿摇摇揖文献标识码铱粤摇摇揖文章编号铱员远苑员鄄苑愿缘远渊圆园员远冤园愿鄄园园园员鄄员怨凿燥蚤院员园郾猿怨远怨援躁援蚤泽泽灶援员远苑员原苑愿缘远郾圆园员远郾园愿郾园园员 月葬糟噪早则燥怎灶凿悦燥灶贼则燥造造藻凿葬灶凿泽贼葬灶凿葬则凿蚤扎藻凿蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼蚤燥灶泽燥枣贼澡藻早藻灶藻贼蚤糟泽燥枣泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥憎葬则凿泽糟燥皂责造藻曾凿蚤泽藻葬泽藻憎蚤贼澡糟燥皂责造藻曾藻贼蚤燥造燥早蚤藻泽袁蚤灶糟造怎凿蚤灶早蚤灶枣藻糟贼蚤燥怎泽葬灶凿糟澡则燥灶蚤糟凿蚤泽藻葬泽藻泽葬则藻葬造皂燥泽贼蚤皂责燥泽泽蚤遭造藻贼燥遭藻责藻则枣燥则皂藻凿蚤灶澡怎皂葬灶泽凿怎藻贼燥皂怎造贼蚤责造藻造蚤皂蚤贼葬贼蚤燥灶泽援酝葬躁燥则造蚤皂蚤贼葬贼蚤燥灶泽葬则藻凿怎藻贼燥凿蚤枣枣蚤糟怎造贼赠燥枣糟燥灶贼则燥造造蚤灶早藻灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造 糟澡葬造造藻灶早藻泽袁葬灶凿泽蚤灶糟藻泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠蚤贼泽藻造枣蚤泽葬野糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼冶袁皂藻葬灶蚤灶早贼澡葬贼袁蚤贼蚤泽糟燥灶贼则燥造造藻凿遭赠贼澡藻糟怎皂怎造葬贼蚤增藻藻枣枣藻糟贼葬灶凿蚤灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶泽燥枣灶怎皂藻则燥怎泽早藻灶藻贼蚤糟造燥糟蚤葬灶凿藻灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造枣葬糟贼燥则泽援陨灶糟则燥泽泽藻泽遭藻贼憎藻藻灶早藻灶藻贼蚤糟葬造造赠凿藻枣蚤灶藻凿泽贼则葬蚤灶泽燥枣皂蚤糟藻袁糟澡则燥皂燥泽燥皂葬造则藻早蚤燥灶泽则藻泽责燥灶泽蚤遭造藻枣燥则贼澡藻早藻灶藻贼蚤糟增葬则蚤葬灶糟藻燥枣糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽糟葬灶遭藻皂葬责责藻凿葬泽择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻贼则葬蚤贼造燥糟蚤渊匝栽蕴冤蚤灶藻曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽葬增葬蚤造葬遭造藻枣燥则责则藻糟蚤泽藻泽贼怎凿赠

5 圆中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 怎灶凿藻则凿藻枣蚤灶藻凿糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽渊陨则葬择蚤藻贼葬造援圆园园园葬葬灶凿圆园园园遭冤援陨皂责燥则贼葬灶贼造赠袁糟燥皂责葬则葬贼蚤增藻皂葬责责蚤灶早泽澡燥憎泽贼澡葬贼贼澡藻皂葬躁燥则蚤贼赠燥枣皂怎则蚤灶藻早藻灶藻泽澡葬增藻噪灶燥憎灶澡燥皂燥造燥早怎藻泽蚤灶贼澡藻澡怎皂葬灶早藻灶燥皂藻藻皂责澡葬泽蚤扎蚤灶早贼澡藻则藻造藻增葬灶糟藻燥枣匝栽蕴葬灶葬造赠泽蚤泽葬灶凿早藻灶藻蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶蚤灶贼澡藻皂燥怎泽藻皂燥凿藻造枣燥则怎灶凿藻则泽贼葬灶凿蚤灶早糟燥皂责造藻曾凿蚤泽藻葬泽藻蚤灶澡怎皂葬灶泽援韵灶糟藻匝栽蕴燥则贼澡藻糟燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早早藻灶藻泽澡葬增藻遭藻藻灶蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿蚤灶贼澡藻皂燥怎泽藻袁早藻灶藻贼蚤糟葬灶葬造赠泽蚤泽糟葬灶贼澡藻灶遭藻藻曾贼藻灶凿藻凿泽怎糟糟藻泽泽枣怎造造赠贼燥澡怎皂葬灶泽援陨贼蚤泽憎藻造造噪灶燥憎贼澡葬贼贼澡藻怎泽葬早藻燥枣皂燥怎泽藻皂燥凿藻造泽蚤泽贼蚤早澡贼造赠藻泽贼葬遭造蚤泽澡藻凿蚤灶则藻泽藻葬则糟澡燥枣澡怎皂葬灶皂藻凿蚤糟蚤灶藻渊运造燥责燥糟噪蚤藻贼葬造援圆园员园曰砸葬灶噪蚤灶藻灶藻贼葬造援圆园园远曰宰蚤糟噪藻则藻贼葬造援圆园园缘冤援陨灶则藻糟藻灶贼赠藻葬则泽袁藻增蚤凿藻灶糟藻燥枣早藻灶藻贼蚤糟造燥糟蚤糟燥灶贼则燥造造蚤灶早葬憎蚤凿藻增葬则蚤藻贼赠燥枣糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽澡葬泽葬糟糟怎皂怎造葬贼藻凿贼澡则燥怎早澡匝栽蕴皂葬责责蚤灶早泽贼怎凿蚤藻泽蚤灶皂蚤糟藻葬灶凿燥贼澡藻则泽责藻糟蚤藻泽曰赠藻贼枣燥则贼澡藻皂燥泽贼责葬则贼袁葬造遭藻蚤贼憎蚤贼澡泽燥皂藻蚤皂责燥则贼葬灶贼藻曾糟藻责贼蚤燥灶泽袁贼澡藻早藻灶藻泽怎灶凿藻则造赠蚤灶早贼澡藻泽藻皂葬责责藻凿造燥糟蚤则藻皂葬蚤灶怎灶噪灶燥憎灶援栽澡蚤泽则藻泽怎造贼藻凿蚤灶贼澡藻则藻葬造蚤扎葬贼蚤燥灶贼澡葬贼葬灶藻憎皂燥凿藻造鄄责燥责怎造葬贼蚤燥灶凿藻凿蚤糟葬贼藻凿贼燥早藻灶藻贼蚤糟葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽憎葬泽灶藻藻凿藻凿贼燥怎灶凿藻则泽贼葬灶凿糟燥皂责造藻曾澡怎皂葬灶凿蚤泽藻葬泽藻泽援粤枣贼藻则 皂怎糟澡凿蚤泽糟怎泽泽蚤燥灶蚤灶贼澡藻早藻灶藻贼蚤糟泽糟燥皂皂怎灶蚤贼赠贼澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽渊悦悦冤憎葬泽凿藻泽蚤早灶藻凿贼燥责则燥增蚤凿藻葬灶藻憎皂燥怎泽藻则藻泽燥怎则糟藻枣燥则澡蚤早澡则藻泽燥造怎贼蚤燥灶葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽袁憎蚤贼澡责葬则贼蚤糟怎造葬则藻皂责澡葬泽蚤泽燥灶贼则葬蚤贼泽则藻造藻增葬灶贼贼燥澡怎皂葬灶澡藻葬造贼澡蚤灶蚤贼泽遭则燥葬凿藻泽贼葬泽责藻糟贼泽渊栽澡则藻葬凿早蚤造造藻贼葬造援圆园园圆曰悦澡怎则糟澡蚤造造藻贼葬造援圆园园源冤援栽澡蚤泽怎灶蚤择怎藻则藻枣藻则藻灶糟藻早藻灶藻贼蚤糟则藻泽燥怎则糟藻憎蚤造造藻增藻灶贼怎葬造造赠糟燥皂责则蚤泽藻葬泽藻贼燥枣葬责责则燥曾蚤皂葬贼藻造赠猿缘园则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼蚤灶遭则藻凿造蚤灶藻泽渊砸陨蕴冤糟则藻葬贼藻凿枣则燥皂枣怎造造则藻糟蚤责则燥糟葬造皂葬贼蚤灶早泽燥枣愿凿蚤增藻则早藻灶贼泽贼则葬蚤灶泽燥枣皂蚤糟藻院粤辕允袁悦缘苑月蕴辕远允袁员圆怨杂员辕杂增陨皂允袁晕韵阅辕蕴贼允袁晕在韵辕匀蚤蕴贼允袁悦粤杂栽辕耘蚤袁孕宰运辕孕澡允袁葬灶凿宰杂月辕耘蚤允援悦燥灶贼则燥造造藻凿则葬灶凿燥皂蚤扎葬贼蚤燥灶憎葬泽责藻则枣燥则皂藻凿凿怎则蚤灶早贼澡藻遭则藻藻凿蚤灶早责则燥糟藻泽泽贼燥遭则藻葬噪怎责造葬则早藻造蚤灶噪葬早藻凿蚤泽藻择怎蚤造蚤遭则蚤怎皂遭造燥糟噪泽葬灶凿贼燥则藻糟燥皂遭蚤灶藻贼澡藻灶葬贼怎则葬造早藻灶藻贼蚤糟增葬则蚤葬贼蚤燥灶责则藻泽藻灶贼蚤灶贼澡藻泽藻蚤灶遭则藻凿泽贼则葬蚤灶泽憎蚤贼澡贼澡藻葬蚤皂贼燥糟则藻葬贼藻葬怎灶蚤择怎藻葬灶凿蚤灶藻曾澡葬怎泽贼蚤遭造藻则藻泽燥怎则糟藻燥枣砸陨泽贼则葬蚤灶泽藻曾澡蚤遭蚤贼蚤灶早葬造葬则早藻责澡藻灶燥贼赠责蚤糟葬灶凿早藻灶藻贼蚤糟凿蚤增藻则泽蚤贼赠渊砸燥遭藻则贼泽藻贼葬造援圆园园苑冤援云蚤早怎则藻员泽澡燥憎泽贼澡藻凿藻增藻造燥责皂藻灶贼燥枣葬灶蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造悦悦造蚤灶藻葬灶凿贼澡藻怎造贼蚤皂葬贼藻皂燥泽葬蚤糟早藻灶燥贼赠责藻泽贼则怎糟贼怎则藻葬枣贼藻则葬泽藻则蚤藻泽燥枣蚤灶遭则藻藻凿蚤灶早 云蚤早援员摇杂蚤灶早造藻悦悦造蚤灶藻渊悦悦苑愿源冤枣怎灶灶藻造遭则藻藻凿蚤灶早泽糟澡藻皂藻遭赠藻蚤早澡贼枣燥怎灶凿藻则泽贼则葬蚤灶泽援耘葬糟澡悦悦造蚤灶藻燥则蚤早蚤灶葬贼藻泽枣则燥皂葬灶蚤灶凿藻责藻灶凿藻灶贼造赠遭则藻藻凿蚤灶早枣怎灶灶藻造燥枣贼澡藻藻蚤早澡贼悦悦枣燥怎灶凿藻则泽泽燥贼澡葬贼藻增藻则赠则藻糟燥皂遭蚤灶葬贼蚤燥灶泽蚤贼藻蚤灶贼澡藻悦悦责燥责怎造葬贼蚤燥灶蚤泽袁怎灶蚤择怎藻造赠早藻灶藻则葬贼藻凿援陨灶贼澡蚤泽藻曾葬皂责造藻袁葬悦悦造蚤灶藻蚤泽责则燥凿怎糟藻凿枣则燥皂贼澡藻遭则藻藻凿蚤灶早造蚤灶藻憎蚤贼澡造葬遭燥则葬贼燥则赠糟燥凿藻援咱栽澡则藻葬凿早蚤造造葬灶凿悦澡怎则糟澡蚤造造圆园员圆暂

6 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 猿 早藻灶藻则葬贼蚤燥灶泽援月葬泽藻凿燥灶泽蚤皂怎造葬贼蚤燥灶泽贼怎凿蚤藻泽袁贼澡藻员园园砸陨蕴遭藻蚤灶早凿藻增藻造燥责藻凿葬贼燥怎则造葬遭泽澡燥怎造凿葬造造燥憎皂葬责责蚤灶早葬匝栽蕴藻曾责造葬蚤灶蚤灶早葬贼燥贼葬造燥枣缘豫燥枣贼澡藻砸陨蕴责澡藻灶燥贼赠责蚤糟增葬则蚤葬贼蚤燥灶渊藻择怎蚤增葬造藻灶贼贼燥圆郾缘豫燥枣云圆增葬则蚤葬贼蚤燥灶冤贼燥葬灶葬增藻则葬早藻皂藻葬灶造燥糟葬贼蚤燥灶藻则则燥则燥枣猿郾缘糟酝渊灾葬造凿葬则藻贼葬造援圆园园远冤援陨灶蚤贼蚤葬造造赠袁葬造造悦悦皂蚤糟藻憎藻则藻早藻灶燥贼赠责藻凿憎蚤贼澡皂燥怎泽藻凿蚤增藻则泽蚤贼赠葬则则葬赠渊酝阅粤冤贼澡葬贼糟燥灶泽蚤泽贼远圆园袁园园园杂晕孕皂葬则噪藻则泽渊再葬灶早藻贼葬造援圆园园怨冤援宰藻枣蚤造贼藻则藻凿燥怎贼葬造造杂晕孕泽憎蚤贼澡澡藻贼藻则燥扎赠早燥怎泽燥则皂蚤泽泽蚤灶早早藻灶燥贼赠责藻泽蚤灶贼澡藻愿悦悦枣燥怎灶凿藻则泽袁燥则贼澡葬贼憎藻则藻灶燥贼蚤灶糟燥皂皂燥灶遭藻贼憎藻藻灶贼澡藻葬则则葬赠泽袁造藻葬增蚤灶早员苑园袁怨猿缘杂晕孕泽援栽澡藻杂晕孕泽憎藻则藻皂葬责责藻凿燥灶贼燥遭怎蚤造凿猿苑燥枣贼澡藻皂燥怎泽藻早藻灶燥皂藻援栽澡藻匀粤孕孕再匀酝酝渊酝燥贼贼藻贼葬造援圆园园园冤糟燥皂责怎贼藻凿葬凿藻泽糟藻灶贼责则燥遭葬遭蚤造蚤贼赠凿蚤泽贼则蚤遭怎贼蚤燥灶枣燥则藻葬糟澡燥枣贼澡藻员苑园袁怨猿缘杂晕孕泽蚤灶贼藻则增葬造泽袁憎澡蚤糟澡憎藻则藻凿怎糟藻凿贼燥愿缘猿猿蚤灶贼藻则增葬造泽遭赠葬增藻则葬早蚤灶早贼澡藻皂葬贼则蚤糟藻泽蚤灶早则燥怎责泽燥枣灶越圆园糟燥灶泽藻糟怎贼蚤增藻杂晕孕泽援栽澡蚤泽则藻凿怎糟贼蚤燥灶则藻凿怎糟藻凿枣怎则贼澡藻则贼澡藻藻枣枣藻糟贼泽燥枣早藻灶燥贼赠责蚤灶早藻则则燥则葬灶凿皂葬凿藻葬灶葬造赠泽蚤泽枣葬泽贼藻则援酝藻葬灶澡藻贼藻则燥扎赠早燥泽蚤贼赠憎葬泽糟燥皂责怎贼藻凿葬糟则燥泽泽藻葬糟澡憎蚤灶凿燥憎燥枣圆园杂晕孕泽援云蚤早怎则藻圆泽澡燥憎泽贼澡藻早藻灶燥皂蚤糟则藻糟燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶燥枣葬悦悦造蚤灶藻葬枣贼藻则早藻灶燥贼赠责蚤灶早憎蚤贼澡贼澡藻酝阅粤葬灶凿怎泽蚤灶早匀粤孕孕再泽燥枣贼憎葬则藻渊酝燥贼贼藻贼葬造援圆园园缘冤援砸藻糟藻灶贼造赠袁葬造造皂蚤糟藻憎藻则藻则藻早藻灶燥贼赠责藻凿葬贼葬灶葬凿增葬灶糟藻凿早藻灶藻则葬贼蚤燥灶泽憎蚤贼澡灶藻憎苑缘园园糟怎泽贼燥皂凿藻泽蚤早灶杂晕孕葬则则葬赠袁皂燥怎泽藻怎灶蚤增藻则泽葬造早藻灶燥贼赠责藻葬则则葬赠渊酝哉郧粤冤袁憎澡蚤糟澡责则燥增蚤凿藻凿贼澡藻早藻灶燥皂藻葬则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻燥枣贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽渊陨则葬择蚤藻贼葬造援袁圆园员员冤援云蚤灶葬造造赠袁葬枣贼藻则缘葬凿增葬灶糟藻凿早藻灶藻则葬贼蚤燥灶泽袁葬造造悦悦造蚤灶藻泽 憎藻则藻早藻灶燥贼赠责藻凿憎蚤贼澡酝藻早葬酝哉郧粤袁葬灶凿贼澡藻早藻灶燥贼赠责藻泽燥枣贼澡藻贼澡则藻藻杂晕孕葬则则葬赠泽憎藻则藻皂藻则早藻凿贼燥责则藻责葬则藻葬泽蚤灶早造藻早藻灶燥贼赠责藻枣蚤造藻袁憎澡蚤糟澡憎葬泽怎泽藻凿蚤灶匝栽蕴皂葬责责蚤灶早渊蕴藻增赠藻贼葬造援圆园员缘冤援栽澡则藻藻枣燥怎灶凿藻则泽燥枣贼澡藻悦悦渊悦粤杂栽辕耘蚤允袁孕宰运辕孕澡允袁葬灶凿宰杂月辕耘蚤允冤葬则藻憎蚤造凿鄄凿藻则蚤增藻凿袁则藻责则藻泽藻灶贼蚤灶早贼澡藻泽怎遭泽责藻糟蚤藻泽酝援皂糟葬泽贼葬灶藻怎泽袁酝援皂皂怎泽糟怎造怎泽葬灶凿酝援皂援凿燥皂藻泽贼蚤糟怎泽则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠袁葬灶凿憎澡蚤糟澡糟燥灶贼则蚤遭怎贼藻葬造葬则早藻灶怎皂遭藻则燥枣泽藻择怎藻灶糟藻增葬则蚤葬灶贼泽灶燥贼泽藻早则藻早葬贼蚤灶早葬皂燥灶早糟造葬泽泽蚤糟葬造泽贼则葬蚤灶泽凿藻泽糟藻灶凿藻凿枣则燥皂酝援皂援凿燥皂藻泽贼蚤糟怎泽渊皂燥泽贼糟造葬泽泽蚤糟葬造泽贼则葬蚤灶泽凿蚤枣枣藻则枣则燥皂贼澡藻则藻枣藻则藻灶糟藻悦缘苑月蕴辕远允葬贼葬遭燥怎贼源皂蚤造造蚤燥灶杂晕孕泽袁憎澡藻则藻葬泽孕宰运葬灶凿悦粤杂栽藻葬糟澡凿蚤枣枣藻则葬贼葬遭燥怎贼员苑皂蚤造造蚤燥灶杂晕孕泽袁葬灶凿宰杂月葬贼远皂蚤造造蚤燥灶渊运藻葬灶藻藻贼葬造援圆园员员冤援悦燥灶泽藻择怎藻灶贼造赠择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻贼则葬蚤贼造燥糟怎泽渊匝栽蕴冤皂葬责责蚤灶早怎泽蚤灶早贼澡藻悦悦泽怎糟糟藻藻凿藻凿贼燥怎灶糟燥增藻则灶燥增藻造匝栽蕴泽蚤灶增燥造增蚤灶早糟燥灶贼则葬泽贼泽遭藻贼憎藻藻灶贼澡藻憎蚤造凿鄄凿藻则蚤增藻凿泽贼则葬蚤灶泽袁葬泽泽澡燥憎灶蚤灶葬责蚤造燥贼藻曾责藻则蚤皂藻灶贼蚤灶憎澡蚤糟澡憎藻枣蚤灶藻鄄皂葬责责藻凿匝栽蕴泽葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿憎蚤贼澡泽怎则增蚤增葬造葬枣贼藻则蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶遭赠粤泽责藻则早蚤造造怎泽枣怎皂蚤早葬贼怎泽袁憎藻皂葬责责藻凿藻蚤早澡贼匝栽蕴泽袁枣蚤增藻燥枣憎澡蚤糟澡蚤灶增燥造增藻凿糟燥灶贼则葬泽贼泽憎蚤贼澡憎蚤造凿鄄凿藻则蚤增藻凿泽贼则葬蚤灶泽葬灶凿憎澡蚤糟澡憎燥怎造凿灶燥贼澡葬增藻遭藻藻灶责则藻泽藻灶贼蚤灶葬糟则燥泽泽遭藻贼憎藻藻灶糟造葬泽泽蚤糟葬造造葬遭燥则葬贼燥则赠蚤灶遭则藻凿泽贼则葬蚤灶泽渊蕴陨杂冤渊云蚤早援猿冤援栽澡藻泽藻泽贼怎凿蚤藻泽糟燥灶枣蚤则皂贼澡葬贼遭赠责澡藻灶燥贼赠责蚤灶早葬则藻造葬贼蚤增藻造赠皂燥凿藻泽贼灶怎皂遭藻则燥枣悦悦造蚤灶藻泽渊葬则燥怎灶凿苑园造蚤灶藻泽冤袁憎蚤贼澡泽怎枣枣蚤糟蚤藻灶贼则藻责造蚤糟葬贼蚤燥灶袁蚤贼蚤泽责燥泽泽蚤遭造藻贼燥皂葬责匝栽蕴泽贼燥葬则藻泽燥造怎贼蚤燥灶燥枣葬遭燥怎贼员酝遭渊灾葬造凿葬则藻贼葬造援圆园园远冤援 云蚤早援圆摇砸藻糟燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶泽燥枣贼澡藻早藻灶燥皂藻泽燥枣则藻责则藻泽藻灶贼葬贼蚤增藻悦悦造蚤灶藻泽陨蕴原员愿葬灶凿陨蕴原缘园苑枣则燥皂贼澡藻澡蚤凿凿藻灶酝葬则噪燥增皂燥凿藻造渊匀酝酝冤蚤皂责造藻皂藻灶贼藻凿遭赠匀粤孕孕再责则燥早则葬皂援栽澡藻载鄄葬曾蚤泽泽澡燥憎泽贼澡藻员怨葬怎贼燥泽燥皂藻泽袁贼澡藻再鄄葬曾蚤泽泽澡燥憎泽愿责葬则藻灶贼葬造枣燥怎灶凿藻则泽贼则葬蚤灶泽燥枣贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽援栽澡藻遭造葬糟噪澡燥则蚤扎燥灶贼葬造遭葬灶凿泽则藻责则藻泽藻灶贼早藻灶藻贼蚤糟葬造造赠枣蚤曾藻凿造燥糟蚤袁糟燥灶贼则蚤遭怎贼藻凿燥灶造赠遭赠燥灶藻枣燥怎灶凿藻则袁憎澡蚤造藻早则葬赠遭葬灶凿泽则藻责则藻泽藻灶贼造燥糟蚤憎蚤贼澡则藻泽蚤凿怎葬造澡藻贼藻则燥扎赠早燥泽蚤泽咱阅怎则则葬灶贼藻贼葬造援圆园员员暂援

7 源中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 云蚤早援猿摇耘泽贼蚤皂葬贼藻凿藻枣枣藻糟贼泽燥灶泽怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻葬枣贼藻则粤泽责藻则早蚤造造怎泽枣怎皂蚤早葬贼怎泽蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶袁枣燥则贼澡藻藻蚤早澡贼悦悦枣燥怎灶凿藻则泽贼则葬蚤灶泽枣燥则藻葬糟澡燥枣泽藻增藻灶匝栽蕴泽蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿蚤灶葬泽糟则藻藻灶燥枣远远悦悦造蚤灶藻泽援耘枣枣藻糟贼泽葬则藻泽澡燥憎灶葬泽凿藻增蚤葬贼蚤燥灶泽则藻造葬贼蚤增藻贼燥宰杂月辕耘蚤允袁憎澡蚤糟澡蚤泽葬则遭蚤贼则葬则蚤造赠葬泽泽蚤早灶藻凿贼澡藻贼则葬蚤贼藻枣枣藻糟贼燥枣园援栽澡藻载鄄葬曾蚤泽燥枣藻葬糟澡责造燥贼泽澡燥憎泽贼澡藻枣燥怎灶凿藻则泽贼则葬蚤灶泽援栽澡藻再鄄葬曾蚤泽泽澡燥憎泽贼澡藻藻泽贼蚤皂葬贼藻凿藻枣枣藻糟贼燥灶泽怎则增蚤增葬造枣燥则贼澡藻澡葬责造燥贼赠责藻燥枣贼澡藻糟燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早悦悦枣燥怎灶凿藻则援匝栽蕴泽粤袁月袁悦袁郧葬灶凿贼燥泽燥皂藻藻曾贼藻灶贼阅葬造造蚤灶增燥造增藻葬糟燥灶贼则葬泽贼遭藻贼憎藻藻灶葬憎蚤造凿鄄凿藻则蚤增藻凿泽贼则葬蚤灶渊悦粤杂栽袁孕宰运燥则宰杂月冤葬灶凿贼澡藻燥贼澡藻则枣燥怎灶凿藻则泽援咱阅怎则则葬灶贼藻贼葬造援圆园员员暂援 陨灶葬则藻糟藻灶贼泽贼怎凿赠袁憎藻澡葬增藻泽澡燥憎灶贼澡葬贼贼澡藻早藻灶藻贼蚤糟遭葬糟噪早则燥怎灶凿燥枣贼澡藻悦悦皂蚤糟藻蚤泽贼澡藻皂葬蚤灶凿藻贼藻则皂蚤灶葬灶贼燥枣早怎贼皂蚤糟则燥遭蚤燥皂藻凿蚤增藻则泽蚤贼赠渊运燥增葬糟泽藻贼葬造援圆园员员冤援栽澡藻泽藻则藻泽怎造贼泽葬则藻葬灶燥贼澡藻则泽贼则燥灶早责则燥燥枣贼澡葬贼贼澡藻早藻灶藻贼蚤糟皂葬噪藻怎责燥枣贼澡藻悦悦蚤泽怎灶蚤择怎藻葬灶凿糟葬灶造藻葬凿贼燥怎灶凿藻则泽贼葬灶凿贼澡藻蚤则藻枣枣藻糟贼燥灶澡燥泽贼则藻泽责燥灶泽藻葬灶凿责藻则枣燥则皂葬灶糟藻援云怎则贼澡藻则袁遭赠蚤灶糟燥则责燥则葬贼蚤灶早增葬则蚤葬贼蚤燥灶凿葬贼葬枣则燥皂贼澡藻早藻灶燥皂藻泽藻择怎藻灶糟藻泽燥枣贼澡藻悦悦枣燥怎灶凿藻则泽 葬增葬蚤造葬遭造藻枣则燥皂贼澡藻杂葬灶早藻则酝燥怎泽藻郧藻灶燥皂藻泽孕则燥躁藻糟贼渊运藻葬灶藻藻贼葬造援圆园员员冤原葬灶凿则藻泽贼则蚤糟贼蚤灶早葬贼贼藻灶贼蚤燥灶贼燥增葬则蚤葬灶贼泽憎澡燥泽藻凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽葬糟则燥泽泽贼澡藻枣燥怎灶凿藻则泽葬则藻糟燥灶泽蚤泽贼藻灶贼憎蚤贼澡贼澡藻责葬贼贼藻则灶燥枣葬糟贼蚤燥灶燥枣贼澡藻匝栽蕴渊再葬造糟蚤灶藻贼葬造援圆园园缘冤袁贼澡藻造蚤泽贼燥枣糟葬灶凿蚤凿葬贼藻早藻灶藻泽怎灶凿藻则匝栽蕴泽糟葬灶遭藻泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠则藻枣蚤灶藻凿援栽澡藻泽藻泽贼怎凿蚤藻泽糟燥灶枣蚤则皂贼澡葬贼遭赠责澡藻灶燥贼赠责蚤灶早葬则藻造葬贼蚤增藻造赠皂燥凿藻泽贼灶怎皂遭藻则燥枣悦悦造蚤灶藻泽渊葬则燥怎灶凿苑园造蚤灶藻泽冤袁憎蚤贼澡泽怎枣枣蚤糟蚤藻灶贼则藻责造蚤糟葬贼蚤燥灶袁蚤贼蚤泽责燥泽泽蚤遭造藻贼燥皂葬责匝栽蕴泽贼燥葬则藻泽燥造怎贼蚤燥灶燥枣葬遭燥怎贼员酝遭渊阅怎则则葬灶贼藻贼葬造援圆园员员曰灾藻则藻凿藻贼葬造援圆园员源曰蕴藻增赠藻贼葬造援圆园员缘曰粤赠造燥则藻贼葬造援圆园员员曰孕澡蚤造蚤责藻贼葬造援圆园员员曰运藻造葬凿葬藻贼葬造援圆园员员曰载蚤燥灶早藻贼葬造援圆园员源曰砸葬皂藻贼葬造援圆园员源曰郧则葬造蚤灶泽噪蚤藻贼葬造援圆园员缘曰砸燥早葬造葬藻贼葬造援圆园员源曰孕澡蚤造造蚤责责蚤藻贼葬造援圆园员源曰云藻则则蚤泽藻贼葬造援圆园员猿曰栽澡葬蚤泽扎藻贼葬造援圆园员圆曰月燥贼贼燥皂造赠藻贼葬造援圆园员圆曰酝葬贼澡藻泽藻贼葬造援圆园员员曰郧藻造蚤灶葬泽藻贼葬造援圆园员员曰在燥皂遭藻糟噪藻贼葬造援圆园员员冤援酝燥怎泽藻郧藻灶藻贼蚤糟砸藻泽燥怎则糟藻责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽渊郧砸孕泽冤葬则藻责燥责怎造葬则枣燥则贼澡藻泽贼怎凿赠燥枣糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽葬灶凿遭蚤燥造燥早蚤糟葬造泽赠泽贼藻皂泽蚤灶遭燥贼澡皂藻凿蚤糟葬造葬灶凿造蚤枣藻泽糟蚤藻灶糟藻泽葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶泽遭藻糟葬怎泽藻早藻灶燥贼赠责蚤灶早蚤泽燥灶造赠则藻择怎蚤则藻凿燥灶糟藻渊憎澡葬贼澡葬泽 遭藻藻灶凿藻泽糟则蚤遭藻凿葬泽贼澡藻野早藻灶燥贼赠责藻燥灶糟藻袁责澡藻灶燥贼赠责藻皂葬灶赠贼蚤皂藻泽冶责葬则葬凿蚤早皂冤袁则藻责造蚤糟葬贼藻蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造泽糟葬灶遭藻责则燥凿怎糟藻凿憎蚤贼澡贼澡藻泽葬皂藻早藻灶燥贼赠责藻葬贼憎蚤造造葬造造燥憎蚤灶早枣燥则燥责贼蚤皂葬造糟葬泽藻辕糟燥灶贼则燥造葬灶凿早藻灶藻鄄遭赠鄄藻灶增蚤则燥灶皂藻灶贼凿藻泽蚤早灶泽渊月则燥皂葬灶圆园园缘冤援匀藻则藻蚤灶憎藻凿藻皂燥灶泽贼则葬贼藻燥怎则增葬则蚤燥怎泽泽贼怎凿蚤藻泽怎泽蚤灶早贼澡藻悦悦皂燥怎泽藻责燥责怎造葬贼蚤燥灶枣燥则凿蚤泽泽藻糟贼蚤灶早贼澡藻早藻灶藻贼蚤糟葬则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻怎灶凿藻则造赠蚤灶早贼澡藻责澡藻灶燥贼赠责蚤糟增葬则蚤葬贼蚤燥灶燥遭泽藻则增藻凿葬皂燥灶早糟藻则贼葬蚤灶袁责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽袁凿藻枣蚤灶藻凿葬泽糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼蚤灶藻蚤贼澡藻则遭葬泽蚤糟遭蚤燥造燥早蚤糟葬造辕责澡赠泽蚤燥造燥早蚤糟葬造凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽燥则澡燥泽贼则藻泽责燥灶泽藻贼燥憎葬则凿泽蚤灶枣藻糟贼蚤燥怎泽燥则糟澡则燥灶蚤糟凿蚤泽藻葬泽藻泽援陨灶枣藻糟贼蚤燥怎泽凿蚤泽藻葬泽藻泽贼怎凿蚤藻泽蚤灶燥怎则造葬遭泽糟葬灶灶藻凿蚤灶凿藻责藻灶凿藻灶贼造赠贼澡藻悦悦责燥责怎造葬贼蚤燥灶则藻泽责燥灶泽藻贼燥憎葬则凿泽增葬则蚤燥怎泽噪灶燥憎灶责葬贼澡燥早藻灶泽袁泽怎糟澡葬泽粤泽责藻则早蚤造造怎泽枣怎皂蚤早葬贼怎泽渊阅怎则则葬灶贼藻贼葬造援圆园员员冤袁运造藻遭泽蚤藻造造葬责灶藻怎皂燥灶蚤葬藻渊灾藻则藻凿藻贼葬造援圆园员源冤袁糟燥鄄蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶憎蚤贼澡孕燥则责澡赠则燥皂燥灶葬泽早蚤灶早蚤增葬造蚤泽葬灶凿云怎泽燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂灶怎糟造藻葬贼怎皂渊杂澡怎泽贼藻则皂葬灶藻贼葬造援圆园员猿冤袁孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽葬藻则怎早蚤灶燥泽葬渊蕴燥则侉藻贼葬造援圆园员缘冤袁葬灶凿澡燥泽贼则藻泽责燥灶泽藻贼燥憎葬则凿泽皂蚤糟则燥遭蚤葬造贼燥曾蚤灶泽渊蕴孕杂辕蕴孕粤冤枣燥则泽贼怎凿赠燥枣泽藻责泽蚤泽援粤泽憎藻造造袁糟燥皂责造藻曾糟澡则燥灶蚤糟凿蚤泽藻葬泽藻泽袁糟葬灶糟藻则葬灶凿遭藻澡葬增蚤燥则葬造凿蚤泽藻葬泽藻泽憎蚤贼澡糟燥皂责造藻曾藻贼蚤燥造燥早蚤藻泽憎藻则藻泽贼怎凿蚤藻泽葬贼燥怎则造葬遭怎泽蚤灶早贼澡藻责燥憎藻则燥枣贼澡藻悦悦责燥责怎造葬贼蚤燥灶援陨灶糟造怎凿蚤灶早泽贼怎凿赠燥枣澡蚤早澡鄄枣葬贼凿蚤藻贼蚤灶凿怎糟藻凿贼赠责藻圆凿蚤葬遭藻贼藻泽渊栽圆阅冤葬灶凿皂藻贼葬遭燥造蚤糟泽赠灶凿则燥皂藻渊粤贼葬皂灶蚤藻贼葬造援圆园员远冤袁凿藻增藻造燥责皂藻灶贼燥枣糟燥造燥灶糟葬灶糟藻则渊阅燥则皂葬灶藻贼葬造援圆园员远冤袁葬灶凿葬怎贼蚤泽皂援粤凿凿蚤贼蚤燥灶葬造造赠袁憎藻葬则藻泽糟葬灶灶蚤灶早贼澡藻悦悦责燥责怎造葬贼蚤燥灶枣燥则早藻灶藻贼蚤糟枣葬糟贼燥则泽怎灶凿藻则造赠蚤灶早遭葬泽蚤糟

8 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 缘 责澡藻灶燥贼赠责蚤糟增葬则蚤葬贼蚤燥灶蚤灶灶燥则皂葬造泽贼葬贼藻憎蚤贼澡燥怎贼凿蚤泽藻葬泽藻蚤灶 贼澡藻遭葬糟噪早则燥怎灶凿袁贼澡蚤泽蚤灶糟造怎凿藻泽蚤灶枣造怎藻灶糟蚤灶早 蚤皂皂怎灶藻 则藻泽责燥灶泽藻 糟藻造造 造蚤灶藻葬早藻泽 蚤灶 责藻则蚤责澡藻则葬造 遭造燥燥凿袁 遭燥凿赠 糟燥皂责燥泽蚤贼蚤燥灶 贼则葬蚤贼泽 怎泽蚤灶早 凿怎葬造鄄藻灶藻则早赠 载鄄则葬赠 葬遭泽燥则责贼蚤燥皂藻贼则赠 渊阅耘载粤冤援 哉灶凿藻则泽贼葬灶凿蚤灶早 贼澡藻 澡燥泽贼 泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥葬造造燥枣贼澡藻泽藻糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽蚤泽蚤皂责燥则贼葬灶贼 泽蚤灶糟藻葬造造葬枣枣藻糟贼蚤灶早葬造造泽赠泽贼藻皂泽怎灶凿藻则贼澡藻泽葬皂藻早藻灶藻贼蚤糟 遭葬糟噪早则燥怎灶凿援 孕怎遭造蚤泽澡藻凿 砸藻泽怎造贼泽 哉泽蚤灶早 悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻 悦则燥泽泽责燥责怎造葬贼蚤燥灶 员摇 陨灶枣藻糟贼蚤燥怎泽凿蚤泽藻葬泽藻泽 员郾员摇 酝葬责 澡燥泽贼 泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠 贼燥 粤泽责藻则早蚤造造怎泽 枣怎皂蚤早葬贼怎泽蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶 陨灶增葬泽蚤增藻凿蚤泽泽藻皂蚤灶葬贼藻凿葬泽责藻则早蚤造造燥泽蚤泽蚤泽葬泽藻则蚤燥怎泽 凿蚤泽藻葬泽藻蚤灶澡怎皂葬灶泽袁蚤灶枣造蚤糟贼蚤灶早泽藻增藻则藻凿葬皂葬早藻贼燥贼澡藻 噪蚤凿灶藻赠泽袁造蚤增藻则袁泽责造藻藻灶袁遭则葬蚤灶袁澡藻葬则贼葬灶凿燥贼澡藻则燥则早葬灶泽 渊蕴葬贼早佴员怨怨怨袁杂燥怎遭葬灶蚤葬灶凿悦澡葬灶凿则葬泽藻噪葬则圆园园圆冤援栽澡藻 则蚤泽噪燥枣葬糟择怎蚤则蚤灶早蚤灶增葬泽蚤增藻责怎造皂燥灶葬则赠葬泽责藻则早蚤造造燥泽蚤泽蚤泽 葬造泽燥 澡蚤早澡藻则 蚤灶 蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造泽 憎蚤贼澡 凿藻枣藻糟贼蚤增藻 蚤皂皂怎灶藻 泽赠泽贼藻皂泽袁泽怎糟澡葬泽贼澡燥泽藻泽怎枣枣藻则蚤灶早枣则燥皂灶藻怎贼则燥责藻灶蚤葬援 哉泽藻则泽燥枣糟燥则贼蚤糟燥泽贼藻则燥蚤凿泽燥则燥贼澡藻则蚤皂皂怎灶燥泽怎责责则藻泽泽蚤增藻 贼澡藻则葬责蚤藻泽袁泽怎糟澡葬泽贼澡燥泽藻怎泽藻凿贼燥责则藻增藻灶贼则藻躁藻糟贼蚤燥灶 枣燥造造燥憎蚤灶早燥则早葬灶贼则葬灶泽责造葬灶贼葬贼蚤燥灶袁葬灶凿造葬贼藻鄄泽贼葬早藻澡怎皂葬灶 蚤皂皂怎灶燥凿藻枣蚤糟蚤藻灶糟赠增蚤则怎泽蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶葬则藻葬造泽燥葬贼澡蚤早澡藻则 则蚤泽噪援 栽燥憎葬则凿泽 皂葬责责蚤灶早 燥枣 澡燥泽贼 泽怎糟糟藻责贼葬遭蚤造蚤贼赠 贼燥 粤泽责藻则早蚤造造怎泽枣怎皂蚤早葬贼怎泽渊粤云冤袁蚤灶责则藻增蚤燥怎泽泽贼怎凿赠憎藻 责澡藻灶燥贼赠责藻凿 猿苑员 皂蚤糟藻 枣则燥皂 远远 悦悦 造蚤灶藻泽 枣燥则 泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥粤泽责藻则早蚤造造怎泽枣怎皂蚤早葬贼怎泽蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶援 栽澡藻 泽怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻葬枣贼藻则蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶则葬灶早藻凿枣则燥皂源贼燥圆愿凿葬赠泽 葬灶凿增葬则蚤藻凿泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠遭藻贼憎藻藻灶悦悦造蚤灶藻泽渊孕约园郾园缘冤援 云蚤早怎则藻源泽澡燥憎泽贼澡藻皂藻葬灶泽怎则增蚤增葬造责则燥枣蚤造藻燥枣贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽葬枣贼藻则蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶憎蚤贼澡粤云援月则燥葬凿泽藻灶泽藻澡藻则蚤贼葬遭蚤造蚤贼赠憎葬泽园郾员愿援匝栽蕴皂葬责责蚤灶早遭葬泽藻凿燥灶泽怎则增蚤增葬造葬灶葬造赠泽蚤泽葬灶凿葬灶糟藻泽贼则葬造澡葬责造燥贼赠责藻则藻糟燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶燥枣贼澡藻悦悦早藻灶燥皂藻泽蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿早藻灶燥皂藻鄄憎蚤凿藻泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼匝栽蕴泽燥灶糟澡则燥皂燥泽燥皂藻泽圆袁猿袁愿袁员园渊贼憎燥匝栽蕴冤袁员缘葬灶凿员愿援匝栽蕴皂葬责责蚤灶早则藻泽燥造怎贼蚤燥灶增葬则蚤藻凿遭藻贼憎藻藻灶圆葬灶凿员员郾远酝遭援哉泽藻燥枣增葬则蚤葬贼蚤燥灶凿葬贼葬枣则燥皂贼澡藻早藻灶燥皂藻泽燥枣贼澡藻悦悦枣燥怎灶凿藻则泽贼则葬蚤灶泽则藻枣蚤灶藻贼澡藻泽藻匝栽蕴泽枣怎则贼澡藻则葬灶凿泽怎早早藻泽贼泽藻增藻则葬造糟葬灶凿蚤凿葬贼藻早藻灶藻泽渊阅怎则则葬灶贼藻贼葬造援圆园员员冤援栽燥燥怎则噪灶燥憎造藻凿早藻贼澡蚤泽憎葬泽贼澡藻枣蚤则泽贼则藻责燥则贼皂葬责责蚤灶早泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠造燥糟蚤枣燥则蚤灶增葬泽蚤增藻葬泽责藻则早蚤造造燥泽蚤泽蚤灶蚤皂皂怎灶藻鄄糟燥皂责藻贼藻灶贼皂蚤糟藻援员郾圆摇酝葬责澡燥泽贼泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥运造藻遭泽蚤藻造造葬责灶藻怎皂燥灶蚤葬藻蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶援运造藻遭泽蚤藻造造葬责灶藻怎皂燥灶蚤葬藻渊运责冤袁蚤泽燥灶藻燥枣贼澡藻皂葬躁燥则责怎造皂燥灶葬则赠责葬贼澡燥早藻灶泽糟葬怎泽蚤灶早泽藻增藻则藻责灶藻怎皂燥灶蚤葬葬灶凿泽藻责泽蚤泽皂葬蚤灶造赠蚤灶蚤皂皂怎灶燥糟燥皂责则燥皂蚤泽藻凿责葬贼蚤藻灶贼泽援哉泽蚤灶早贼澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽责燥责怎造葬贼蚤燥灶葬泽葬澡蚤早澡早藻灶藻贼蚤糟葬造造赠凿蚤增藻则泽藻则藻枣藻则藻灶糟藻葬灶凿蚤灶贼则葬责藻则蚤贼燥灶藻葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶燥枣运责葬泽蚤灶枣藻糟贼蚤燥怎泽糟澡葬造造藻灶早藻袁藻灶葬遭造藻凿怎泽凿蚤泽泽藻糟贼蚤灶早贼澡藻早藻灶藻贼蚤糟葬则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻糟燥灶贼则蚤遭怎贼蚤灶早贼燥运责澡燥泽贼泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠葬贼凿蚤枣枣藻则藻灶贼贼蚤皂藻责燥蚤灶贼泽凿怎则蚤灶早贼澡藻糟澡葬造造藻灶早藻援云燥则贼澡蚤泽责怎则责燥泽藻袁猿圆愿皂蚤糟藻早藻灶藻则葬贼藻凿枣则燥皂苑猿悦悦造蚤灶藻泽憎藻则藻糟澡葬造造藻灶早藻凿憎蚤贼澡运原圆袁泽贼则葬蚤灶燥枣运责袁葬贼糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶源燥枣员园悦云哉辕皂造渊悦燥造燥灶赠枣燥则皂蚤灶早怎灶蚤贼泽责藻则皂造冤蚤灶躁藻糟贼藻凿蚤灶贼则葬责藻则蚤贼燥灶藻葬造造赠渊陨孕冤援酝蚤糟藻则藻泽责燥灶泽藻贼燥憎葬则凿泽贼澡藻蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶憎葬泽皂燥灶蚤贼燥则藻凿凿葬蚤造赠枣燥造造燥憎蚤灶早贼澡藻糟澡葬造造藻灶早藻枣燥则员缘凿葬赠泽袁葬贼贼藻则皂泽燥枣遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼葬灶凿泽怎则增蚤增葬造援陨灶灾藻则藻凿藻贼葬造援圆园员源憎藻澡葬增藻责怎遭造蚤泽澡藻凿燥怎则枣蚤灶凿蚤灶早泽袁憎澡蚤造藻遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼增葬则蚤葬贼蚤燥灶遭藻贼憎藻藻灶贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽憎藻则藻 云蚤早援源摇酝藻葬灶泽怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻渊凿葬赠泽冤燥枣凿蚤枣枣藻则藻灶贼悦悦造蚤灶藻泽蚤灶则藻泽责燥灶泽藻贼燥粤泽责藻则早蚤造造怎泽枣怎皂蚤早葬贼怎泽蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶援栽澡藻载鄄葬曾蚤泽则藻责则藻泽藻灶贼泽贼澡藻凿蚤枣枣藻则藻灶贼悦悦造蚤灶藻泽憎澡蚤造藻再鄄葬曾蚤泽则藻责则藻泽藻灶贼泽贼澡藻皂藻葬灶泽怎则增蚤增葬造凿葬赠泽渊依杂耘酝冤援云怎造造凿藻贼葬蚤造泽燥枣贼澡藻葬灶葬造赠泽蚤泽葬则藻责则藻泽藻灶贼藻凿蚤灶阅怎则则葬灶贼藻贼葬造援圆园员员援

9 远中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 灶燥贼泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼凿怎则蚤灶早贼澡藻蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶责藻则蚤燥凿袁泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼增葬则蚤葬贼蚤燥灶渊孕约园郾园缘冤憎葬泽燥遭泽藻则增藻凿蚤灶皂藻葬灶泽怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻遭藻贼憎藻藻灶贼澡藻凿蚤枣枣藻则藻灶贼悦悦造蚤灶藻泽渊云蚤早援缘粤冤援杂怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻枣燥造造燥憎蚤灶早贼澡藻运责蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶增葬则蚤藻凿葬皂燥灶早贼澡藻悦造蚤灶藻泽贼燥则藻泽怎造贼蚤灶泽怎则增蚤增葬造遭藻贼憎藻藻灶圆贼燥员缘凿葬赠泽责燥泽贼蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶袁蚤皂责燥则贼葬灶贼造赠憎藻灶燥贼蚤糟藻凿贼澡葬贼皂蚤糟藻贼澡葬贼泽怎则增蚤增藻凿皂燥则藻贼澡葬灶苑凿葬赠泽糟燥怎造凿泽怎则增蚤增藻贼澡藻糟燥皂责造藻贼藻糟澡葬造造藻灶早藻责藻则蚤燥凿袁憎澡蚤糟澡皂蚤早澡贼遭藻糟则蚤贼蚤糟葬造贼蚤皂藻责燥蚤灶贼枣燥则贼澡藻凿蚤泽藻葬泽藻援栽澡藻憎蚤凿藻增葬则蚤葬贼蚤燥灶燥遭泽藻则增藻凿蚤灶则藻泽责燥灶泽藻贼燥 蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶责则燥增藻泽贼澡葬贼澡燥泽贼则藻泽责燥灶泽藻贼燥蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶蚤泽澡蚤早澡造赠澡藻则蚤贼葬遭造藻袁糟燥灶贼则燥造造藻凿遭赠早藻灶藻泽援陨灶凿藻藻凿遭则燥葬凿泽藻灶泽藻圆圆澡藻则蚤贼葬遭蚤造蚤贼赠渊匀冤糟燥灶枣蚤则皂贼澡蚤泽袁憎澡藻则藻匀憎葬泽园郾源缘援晕藻曾贼泽贼藻责葬蚤皂藻凿贼燥皂葬责贼澡藻早藻灶藻贼蚤糟则藻早蚤燥灶泽怎灶凿藻则造赠蚤灶早贼澡藻泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼增葬则蚤葬灶糟藻泽燥枣贼澡藻皂藻葬灶泽怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻葬贼凿蚤枣枣藻则藻灶贼贼蚤皂藻责燥蚤灶贼泽遭藻贼憎藻藻灶凿葬赠泽员贼燥圆援哉泽蚤灶早燥灶造赠源愿悦悦造蚤灶藻泽燥枣贼澡藻怎灶蚤择怎藻皂燥怎泽藻皂燥凿藻造燥枣悦悦责燥责怎造葬贼蚤燥灶藻灶葬遭造藻泽泽怎糟糟藻泽泽枣怎造皂葬责责蚤灶早燥枣葬贼造藻葬泽贼贼澡则藻藻匝栽蕴泽葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿憎蚤贼澡澡燥泽贼泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥运造藻遭泽蚤藻造造葬 云蚤早援缘摇郧藻灶藻贼蚤糟凿蚤泽泽藻糟贼蚤燥灶燥枣澡燥泽贼则藻泽责燥灶泽藻贼燥运造藻遭泽蚤藻造造葬责灶藻怎皂燥灶蚤葬蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶援云蚤早援缘粤援泽澡燥憎泽责澡藻灶燥贼赠责蚤糟责则燥枣蚤造藻燥枣皂藻葬灶泽怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻渊凿葬赠泽冤燥枣贼澡藻凿蚤枣枣藻则藻灶贼悦悦造蚤灶藻泽葬灶凿枣燥怎则蚤灶遭则藻凿泽贼则葬蚤灶泽葬枣贼藻则蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶憎蚤贼澡运造藻遭泽蚤藻造造葬责灶藻怎皂燥灶蚤葬援载鄄葬曾蚤泽则藻责则藻泽藻灶贼泽贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽袁再鄄葬曾蚤泽则藻责则藻泽藻灶贼泽贼澡藻皂藻葬灶泽怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻蚤灶凿葬赠泽渊依杂耘酝冤援云蚤早援缘月葬灶凿悦责则藻泽藻灶贼贼澡藻匝栽蕴皂葬责责蚤灶早则藻泽怎造贼泽怎泽蚤灶早贼澡藻责澡藻灶燥贼赠责蚤糟葬灶凿早藻灶燥贼赠责蚤糟凿葬贼葬燥枣贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽援陨灶贼燥贼葬造则藻泽怎造贼泽则藻增藻葬造藻凿贼澡则藻藻泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼匝栽蕴泽葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿憎蚤贼澡泽怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻葬枣贼藻则蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶憎蚤贼澡运责袁燥灶凿葬赠泽匝栽蕴燥灶糟澡则燥皂燥泽燥皂藻源灶葬皂藻凿运责则造员渊云蚤早援缘月冤葬灶凿燥灶凿葬赠愿贼憎燥匝栽蕴泽灶葬皂藻凿运责则造圆葬灶凿运责则造猿燥灶糟澡则燥皂燥泽燥皂藻泽愿葬灶凿员愿袁则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠渊悦冤援栽澡藻载鄄葬曾蚤泽泽澡燥憎泽贼澡藻员怨糟澡则燥皂燥泽燥皂藻泽袁再鄄葬曾蚤泽造燥早孕燥枣贼澡藻造蚤灶噪葬早藻葬灶葬造赠泽蚤泽援咱灾藻则藻凿藻贼葬造援圆园员源暂

10 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 苑 责灶藻怎皂燥灶蚤葬渊云蚤早援缘月冤援蕴蚤灶噪葬早藻葬灶葬造赠泽蚤泽澡葬泽糟燥灶枣蚤则皂藻凿贼澡藻皂葬责责蚤灶早燥枣贼澡则藻藻泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼匝栽蕴泽袁灶葬皂藻凿运造藻遭泽蚤藻造造葬责灶藻怎皂燥灶蚤葬则藻泽蚤泽贼葬灶贼造燥糟怎泽员袁圆袁葬灶凿猿渊运责则造员袁运责则造圆葬灶凿运责则造猿冤袁造燥糟葬贼藻凿燥灶糟澡则燥皂燥泽燥皂藻泽源袁愿袁葬灶凿员愿袁则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援栽澡藻皂葬责责藻凿匝栽蕴泽憎藻则藻泽责藻糟蚤枣蚤糟贼燥糟藻则贼葬蚤灶贼蚤皂藻责燥蚤灶贼泽凿怎则蚤灶早贼澡藻蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶袁泽怎早早藻泽贼蚤灶早凿蚤枣枣藻则藻灶贼野责造葬赠藻则泽冶渊早藻灶藻泽冤糟澡葬灶早蚤灶早凿怎则蚤灶早则藻泽责燥灶泽藻责则燥早则藻泽泽渊悦澡则援源 凿葬赠圆葬灶凿悦澡则援愿葬灶凿员愿枣燥则凿葬赠愿冤援栽澡藻皂藻灶贼蚤燥灶藻凿匝栽蕴泽凿藻皂燥灶泽贼则葬贼藻贼澡藻责燥憎藻则燥枣贼澡藻悦悦责燥责怎造葬贼蚤燥灶贼燥藻灶葬遭造藻枣蚤灶藻皂葬责责蚤灶早憎蚤贼澡澡蚤早澡则藻泽燥造怎贼蚤燥灶泽怎早早藻泽贼蚤灶早灶葬则则燥憎早藻灶燥皂蚤糟蚤灶贼藻则增葬造泽渊造藻泽泽贼澡葬灶园郾远酝遭冤袁憎澡藻则藻葬泽贼澡藻憎蚤造凿凿藻则蚤增藻凿泽贼则葬蚤灶泽憎藻则藻贼澡藻皂葬蚤灶糟燥灶贼则蚤遭怎贼燥则泽枣燥则贼澡藻早藻灶藻贼蚤糟增葬则蚤葬灶糟藻枣燥则贼澡藻澡燥泽贼泽泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠援郧藻灶藻遭则燥憎泽藻则藻泽怎造贼泽燥枣贼澡藻泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼匝栽蕴泽枣燥则糟葬灶凿蚤凿葬贼藻早藻灶藻泽袁糟燥灶枣蚤则皂藻凿贼澡藻蚤则则藻造藻增葬灶糟藻贼燥憎葬则凿泽贼澡藻糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼燥枣泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥憎葬则凿泽运造藻遭泽蚤藻造葬责灶藻怎皂燥灶蚤葬援悦葬灶凿蚤凿葬贼藻早藻灶藻泽造燥糟葬贼藻凿憎蚤贼澡蚤灶贼澡藻匝栽蕴泽蚤灶贼藻则增葬造泽蚤灶糟造怎凿藻凿噪灶燥憎灶责则燥贼藻蚤灶糟燥凿蚤灶早早藻灶藻泽贼澡葬贼葬则藻蚤灶增燥造增藻凿蚤灶糟藻造造葬凿澡藻泽蚤燥灶葬灶凿糟赠贼燥泽噪藻造藻贼燥灶泽贼则怎糟贼怎则藻袁憎澡蚤糟澡责造葬赠泽皂葬躁燥则则燥造藻责澡葬早燥糟赠贼燥泽蚤泽葬灶凿枣燥则藻造蚤皂蚤灶葬贼蚤灶早遭葬糟贼藻则蚤葬造蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶渊运责则造员匝栽蕴曰糟葬灶凿蚤凿葬贼藻早藻灶藻泽陨噪遭噪葬责鄄陨灶澡蚤遭蚤贼燥则燥枣噪葬责责葬造蚤早澡贼责燥造赠责藻责贼蚤凿藻早藻灶藻藻灶澡葬灶糟藻则蚤灶月鄄糟藻造造泽袁噪蚤灶葬泽藻糟燥皂责造藻曾鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿责则燥贼藻蚤灶袁粤糟贼造苑葬葬灶凿粤糟贼造苑遭鄄葬糟贼蚤灶鄄造蚤噪藻苑葬葬灶凿苑遭袁憎澡蚤造藻枣燥则运责则造员匝栽蕴曰悦贼灶灶葬造员原糟葬贼藻灶蚤灶葬造责澡葬鄄造蚤噪藻员早藻灶藻冤援栽澡蚤泽憎葬泽贼澡藻枣蚤则泽贼则藻责燥则贼燥枣皂葬责责蚤灶早皂怎造贼蚤责造藻澡燥泽贼泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠造燥糟蚤枣燥则运责蚤灶蚤皂皂怎灶藻鄄糟燥皂责藻贼藻灶贼皂蚤糟藻袁憎澡蚤糟澡凿藻皂燥灶泽贼则葬贼藻泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠贼澡藻糟燥皂责造藻曾蚤贼赠燥枣澡燥泽贼则藻泽责燥灶泽藻贼燥运责蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶凿藻泽责蚤贼藻贼澡藻枣蚤曾藻凿藻灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽援匝栽蕴葬灶葬造赠泽蚤泽泽怎早早藻泽贼泽皂怎造贼蚤责造藻运责鄄泽责藻糟蚤枣蚤糟则藻早蚤燥灶泽燥灶贼澡藻早藻灶燥皂藻袁贼澡葬贼凿蚤枣枣藻则枣则燥皂贼澡藻匝栽蕴蚤灶则藻泽责燥灶泽藻贼燥粤泽责藻则早蚤造造怎泽枣怎皂蚤早葬贼怎泽袁蚤灶增燥造增蚤灶早早藻灶藻泽憎蚤贼澡凿蚤枣枣藻则藻灶贼则燥造藻泽凿怎则蚤灶早蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶葬灶凿澡燥泽贼则藻泽责燥灶泽藻援粤造造贼澡藻泽藻则藻泽怎造贼泽葬灶凿泽怎糟糟藻泽泽燥枣枣蚤灶藻皂葬责责蚤灶早憎蚤贼澡怎灶蚤择怎藻则藻泽燥造怎贼蚤燥灶澡葬增藻糟燥灶枣蚤则皂藻凿贼澡藻增葬造怎葬遭造藻怎泽藻燥枣贼澡藻贼澡则藻藻憎蚤造凿凿藻则蚤增藻凿泽贼则葬蚤灶泽袁葬泽枣燥怎灶凿藻则泽燥枣贼澡藻悦悦责燥责怎造葬贼蚤燥灶援员郾猿摇酝葬责澡燥泽贼泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥燥则葬造皂蚤曾藻凿蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶渊孕援早蚤灶早蚤增葬造蚤泽葬灶凿云援灶怎糟造藻葬贼怎皂冤孕藻则蚤燥凿燥灶贼葬造蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶渊责藻则蚤燥凿燥灶贼蚤贼蚤泽冤蚤泽贼澡藻皂燥泽贼糟燥皂皂燥灶糟澡则燥灶蚤糟蚤灶枣造葬皂皂葬贼燥则赠凿蚤泽藻葬泽藻蚤灶澡怎皂葬灶泽袁 憎澡蚤糟澡则藻泽怎造贼泽蚤灶凿藻泽贼则怎糟贼蚤燥灶燥枣贼燥燥贼澡鄄泽怎责责燥则贼蚤灶早贼蚤泽泽怎藻泽葬灶凿藻增藻灶贼怎葬造造赠造藻葬凿蚤灶早贼燥贼燥燥贼澡造燥泽泽援栽澡蚤泽责则燥糟藻泽泽蚤泽糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎藻凿遭赠凿藻泽贼则怎糟贼蚤燥灶燥枣贼澡藻责藻则蚤燥凿燥灶贼葬造造蚤早葬皂藻灶贼袁枣燥则皂葬贼蚤燥灶燥枣责藻则蚤燥凿燥灶贼葬造责燥糟噪藻贼泽袁葬灶凿葬造增藻燥造葬则遭燥灶藻则藻泽燥则责贼蚤燥灶渊宰蚤造造蚤葬皂泽援员怨怨园冤援栽澡藻凿蚤泽藻葬泽藻蚤泽蚤灶蚤贼蚤葬贼藻凿遭赠责藻则蚤燥凿燥灶贼葬造责葬贼澡燥早藻灶蚤糟遭葬糟贼藻则蚤葬袁憎澡蚤糟澡葬糟糟怎皂怎造葬贼藻葬泽泽怎遭早蚤灶早蚤增葬造遭蚤燥枣蚤造皂葬灶凿泽贼蚤皂怎造葬贼藻葬灶蚤灶枣造葬皂皂葬贼燥则赠则藻泽责燥灶泽藻蚤灶贼澡藻澡燥泽贼早蚤灶早蚤增葬渊宰蚤造泽燥灶援员怨怨缘冤援粤灶藻曾糟藻泽泽蚤增藻燥则泽怎泽贼葬蚤灶藻凿则藻泽责燥灶泽藻造藻葬凿泽贼燥糟澡则燥灶蚤糟蚤灶枣造葬皂皂葬贼蚤燥灶袁憎澡蚤糟澡蚤泽葬责燥贼藻灶贼葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶泽赠泽贼藻皂枣燥则则藻糟则怎蚤贼蚤灶早澡怎皂燥则葬造葬灶凿糟藻造造怎造葬则糟燥皂责燥灶藻灶贼泽燥枣贼澡藻蚤皂皂怎灶藻泽赠泽贼藻皂援砸藻糟藻灶贼造赠袁泽藻增藻则葬造造蚤灶藻泽燥枣藻增蚤凿藻灶糟藻泽怎早早藻泽贼贼澡葬贼贼澡藻则藻蚤泽葬泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼早藻灶藻贼蚤糟糟燥皂责燥灶藻灶贼葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿憎蚤贼澡贼澡藻泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥糟澡则燥灶蚤糟责藻则蚤燥凿燥灶贼蚤贼蚤泽渊月葬噪藻则藻贼葬造援圆园园园葬灶凿圆园园圆冤援宰藻怎泽藻贼澡藻燥则葬造皂蚤曾藻凿蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶泽赠泽贼藻皂渊燥枣贼澡藻贼憎燥葬灶葬藻则燥遭蚤糟早则葬皂灶藻早葬贼蚤增藻遭葬糟贼藻则蚤葬孕燥则责澡赠则燥皂燥灶葬泽早蚤灶早蚤增葬造蚤泽葬灶凿云怎泽燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂灶怎糟造藻葬贼怎皂冤葬泽憎葬泽责则藻增蚤燥怎泽造赠凿藻泽糟则蚤遭藻凿遭赠孕燥造葬噪渊孕燥造葬噪藻贼葬造援圆园园怨冤援栽澡藻责澡藻灶燥贼赠责藻蚤泽皂藻葬泽怎则藻凿葬泽贼澡藻则藻泽蚤凿怎葬造葬造增藻燥造葬则遭燥灶藻增燥造怎皂藻袁蚤灶猿皂皂袁葬枣贼藻则蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶怎泽蚤灶早贼澡藻皂蚤糟则燥鄄悦栽泽糟葬灶袁憎澡蚤糟澡责则燥增蚤凿藻泽葬灶葬糟糟怎则葬贼藻皂藻葬泽怎则藻皂藻灶贼燥枣贼澡藻葬贼贼葬糟澡皂藻灶贼造燥泽泽葬则燥怎灶凿贼澡藻葬灶蚤皂葬造贼藻藻贼澡渊宰蚤造藻灶泽噪赠藻贼葬造援圆园园缘冤援粤泽葬泽贼藻责贼燥憎葬则凿泽蚤凿藻灶贼蚤枣赠蚤灶早葬灶凿泽怎遭泽藻择怎藻灶贼造赠糟造燥灶蚤灶早贼澡藻泽藻早藻灶藻贼蚤糟枣葬糟贼燥则泽袁憎藻澡葬增藻葬泽泽藻泽泽藻凿葬贼燥贼葬造燥枣圆苑圆皂蚤糟藻渊员园猿枣藻皂葬造藻泽葬灶凿员远怨皂葬造藻泽冤早藻灶藻则葬贼藻凿枣则燥皂则葬灶凿燥皂造赠泽藻造藻糟贼藻凿圆猿悦悦造蚤灶藻泽怎泽藻凿葬泽早藻灶藻贼蚤糟则藻枣藻则藻灶糟藻渊早藻灶燥贼赠责藻冤葬灶凿蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶憎蚤贼澡孕燥则责澡赠则燥皂燥灶葬泽早蚤灶早蚤增葬造蚤泽葬灶凿云怎泽燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂灶怎糟造藻葬贼怎皂葬泽藻灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造糟澡葬造造藻灶早藻枣燥则遭燥灶藻造燥泽泽藻增葬造怎葬贼蚤燥灶渊责澡藻灶燥贼赠责藻冤援栽澡藻泽贼怎凿赠糟燥澡燥则贼糟燥灶泽蚤泽贼藻凿燥枣贼憎燥藻曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造早则燥怎责泽曰员冤悦燥灶贼则燥造 贼则藻葬贼藻凿憎蚤贼澡责澡燥泽责澡葬贼藻遭怎枣枣藻则藻凿鄄泽葬造蚤灶藻渊孕月杂冤憎蚤贼澡燥怎贼遭葬糟贼藻则蚤葬渊悦月灾越糟燥灶贼则燥造遭燥灶藻增燥造怎皂藻冤葬灶凿圆冤悦澡葬造造藻灶早藻鄄蚤灶枣藻糟贼藻凿憎蚤贼澡燥则葬造皂蚤曾藻凿蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶渊孕援早蚤灶早蚤增葬造蚤泽葬灶凿云援灶怎糟造藻葬贼怎皂冤袁藻葬糟澡悦悦造蚤灶藻则藻责则藻泽藻灶贼葬贼蚤增藻蚤灶遭燥贼澡早则燥怎责泽援栽澡藻遭燥灶藻造燥泽泽责澡藻灶燥贼赠责藻蚤灶则藻泽责燥灶泽藻贼燥蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶憎葬泽糟葬造糟怎造葬贼藻凿遭赠凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽遭藻贼憎藻藻灶贼澡藻遭燥灶藻增燥造怎皂藻泽葬皂燥灶早贼澡藻泽藻贼憎燥早则燥怎责泽枣燥则藻葬糟澡悦悦造蚤灶藻援栽澡藻泽贼怎凿赠枣蚤灶凿蚤灶早泽葬泽责怎遭造蚤泽澡藻凿蚤灶杂澡怎泽贼藻则皂葬灶藻贼葬造援圆园员猿袁则藻增藻葬造泽澡蚤早澡造赠泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼增葬则蚤葬贼蚤燥灶渊责约园郾园缘冤蚤灶遭燥灶藻造燥泽泽责澡藻灶燥贼赠责藻葬皂燥灶早贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽蚤灶则藻泽责燥灶泽藻贼燥蚤灶枣藻糟贼蚤燥怎泽糟澡葬造造藻灶早藻渊云蚤早援远冤援栽澡藻悦悦

11 愿中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 造蚤灶藻泽憎藻则藻糟造怎泽贼藻则藻凿遭赠泽怎遭鄄早则燥怎责泽遭葬泽藻凿燥灶贼澡藻蚤则则藻泽责燥灶泽藻贼燥贼澡藻蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶蚤灶贼藻则皂泽燥枣遭燥灶藻增燥造怎皂藻袁泽怎泽糟藻责贼蚤遭造藻袁则藻泽蚤泽贼葬灶贼葬灶凿蚤灶贼藻则皂藻凿蚤葬贼藻援圆缘豫燥枣贼澡藻泽糟葬灶灶藻凿悦悦造蚤灶藻泽憎藻则藻糟燥灶泽蚤凿藻则藻凿野陨灶枣藻糟贼蚤燥怎泽杂怎泽糟藻责贼蚤遭造藻冶泽蚤灶糟藻贼澡藻赠泽澡燥憎藻凿遭燥灶藻造燥泽泽蚤灶则藻泽责燥灶泽藻贼燥贼澡藻糟澡葬造造藻灶早藻渊陨蕴圆远辕陨蕴缘苑辕陨蕴苑圆辕陨蕴员愿圆辕陨蕴员怨远葬灶凿陨蕴苑员员冤袁贼澡藻则藻泽贼苑缘豫燥枣贼澡藻泽糟葬灶灶藻凿悦悦造蚤灶藻泽憎藻则藻藻蚤贼澡藻则则藻泽蚤泽贼葬灶贼燥则皂燥凿藻则葬贼藻造赠泽怎泽糟藻责贼蚤遭造藻憎蚤贼澡灶燥泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻蚤灶遭燥灶藻增燥造怎皂藻援耘泽贼蚤皂葬贼藻凿遭则燥葬凿圆泽藻灶泽藻澡藻则蚤贼葬遭蚤造蚤贼赠渊匀冤憎葬泽园郾源枣燥则遭燥贼澡悦月灾葬灶凿砸月灾袁憎澡蚤造藻园郾圆枣燥则蕴月灾援栽澡藻泽藻枣蚤灶凿蚤灶早泽贼则燥灶早造赠葬枣枣蚤则皂泽藻曾蚤泽贼藻灶糟藻燥枣泽贼则燥灶早早藻灶藻贼蚤糟遭葬糟噪早则燥怎灶凿怎灶凿藻则造赠蚤灶早凿藻增藻造燥责皂藻灶贼燥枣责藻则蚤燥凿燥灶贼蚤贼蚤泽葬灶凿糟燥灶枣蚤则皂泽贼澡藻怎泽藻枣怎造灶藻泽泽燥枣贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽枣燥则匝栽蕴皂葬责责蚤灶早枣燥则泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥责藻则蚤燥凿燥灶贼葬造蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶援栽澡藻则藻枣燥则藻袁贼澡藻泽贼怎凿赠憎葬泽藻曾贼藻灶凿藻凿贼燥贼澡藻葬泽泽藻泽泽皂藻灶贼燥枣耀员园园悦悦造蚤灶藻泽枣燥则责藻则蚤燥凿燥灶贼蚤贼蚤泽怎泽蚤灶早贼澡蚤泽责则燥贼燥糟燥造袁葬灶凿则藻糟藻灶贼造赠憎藻皂葬责责藻凿匝栽蕴葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿憎蚤贼澡澡燥泽贼泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥责藻则蚤燥凿燥灶贼蚤贼蚤泽渊怎灶责怎遭造蚤泽澡藻凿凿葬贼葬冤援 员郾源摇 酝葬责 澡燥泽贼 泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠 贼燥 孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽 葬藻则怎早蚤灶燥泽葬援孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽葬藻则怎早蚤灶燥泽葬 渊孕援 葬藻则怎早蚤灶燥泽葬冤 蚤泽 造蚤泽贼藻凿葬皂燥灶早贼澡藻宰匀韵渊宰燥则造凿匀藻葬造贼澡韵则早葬灶蚤扎葬贼蚤燥灶冤 造藻葬凿蚤灶早则藻泽蚤泽贼葬灶贼责葬贼澡燥早藻灶泽憎蚤贼澡早则藻葬贼藻泽贼责怎遭造蚤糟澡藻葬造贼澡 糟燥灶糟藻则灶袁贼燥遭藻燥灶藻燥枣皂葬躁燥则遭葬糟贼藻则蚤葬造蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶泽渊员园原 员缘豫燥枣糟葬泽藻泽冤蚤灶澡燥泽责蚤贼葬造泽葬灶凿澡藻葬造贼澡糟葬则藻泽赠泽贼藻皂泽 憎燥则造凿憎蚤凿藻援 杂藻增藻则藻蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶憎蚤贼澡孕援 葬藻则怎早蚤灶燥泽葬蚤泽 贼赠责蚤糟葬造葬皂燥灶早蚤灶贼藻灶泽蚤增藻糟葬则藻怎灶蚤贼责葬贼蚤藻灶贼泽渊陨悦哉冤憎蚤贼澡 澡蚤早澡 则蚤泽噪 枣燥则 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 燥枣 增藻灶贼蚤造葬贼燥则鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿 责灶藻怎皂燥灶蚤葬渊灾粤孕冤葬灶凿杂藻责泽蚤泽渊郧藻造造葬贼造赠葬灶凿匀葬灶糟燥糟噪 圆园员猿冤援宰蚤凿藻增葬则蚤葬贼蚤燥灶泽葬则藻燥遭泽藻则增藻凿蚤灶澡燥泽贼则藻泽责燥灶泽藻袁 皂葬蚤灶造赠蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造泽葬贼则蚤泽噪葬灶凿悦赠泽贼蚤糟云蚤遭则燥泽蚤泽责葬贼蚤藻灶贼泽 贼燥憎葬则凿泽孕援葬藻则怎早蚤灶燥泽葬蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶援 杂燥枣葬则皂葬灶赠藻枣枣燥则贼泽 憎藻则藻蚤灶增藻泽贼藻凿蚤灶凿蚤泽泽藻糟贼蚤灶早孕援 葬藻则怎早蚤灶燥泽葬早藻灶燥贼赠责蚤糟 枣藻葬贼怎则藻泽贼澡葬贼皂蚤早澡贼遭藻怎灶凿藻则造赠蚤灶早贼澡藻增葬则蚤葬贼蚤燥灶泽蚤灶澡燥泽贼 则藻泽责燥灶泽藻造藻葬凿蚤灶早贼燥凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造凿蚤泽藻葬泽藻责澡藻灶燥皂藻灶燥灶爷泽 葬灶凿责葬贼澡燥早藻灶藻泽蚤泽渊月蚤葬灶糟燥灶蚤藻贼葬造援圆园员员曰悦蚤早葬灶葬藻贼葬造援 圆园园怨曰月则葬早燥灶扎蚤 藻贼 葬造援 圆园园怨曰 晕早怎赠藻灶 葬灶凿 杂蚤灶早澡 圆园园远冤援 再藻贼袁则藻糟藻灶贼泽贼怎凿赠葬责责则燥葬糟澡藻泽葬则藻枣燥糟怎泽藻凿 蚤灶泽贼藻葬凿燥灶凿蚤泽泽藻糟贼蚤灶早贼澡藻澡燥泽贼早藻灶藻贼蚤糟遭葬糟噪早则燥怎灶凿贼澡葬贼 皂蚤早澡贼遭藻责造葬赠蚤灶早糟则怎糟蚤葬造则燥造藻糟燥灶贼则燥造造蚤灶早贼澡藻增葬则蚤葬贼蚤燥灶泽 蚤灶则藻泽责燥灶泽藻泽藻增藻则蚤贼赠渊宰藻蚤造藻则葬灶凿阅则怎皂皂圆园员猿冤援栽燥 葬凿凿则藻泽泽贼澡蚤泽 葬责责则燥葬糟澡袁 增葬则蚤燥怎泽 泽贼怎凿蚤藻泽 蚤灶 皂怎则蚤灶藻 皂燥凿藻造泽葬泽泽藻泽泽藻凿皂怎造贼蚤责造藻皂蚤糟藻泽贼则葬蚤灶泽蚤灶枣藻糟贼藻凿遭赠孕援 葬藻则怎早蚤灶燥泽葬 葬灶凿 则藻责藻葬贼藻凿造赠 贼澡藻 则藻泽怎造贼泽 糟燥灶枣蚤则皂藻凿 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼增葬则蚤葬贼蚤燥灶蚤灶蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶则藻泽责燥灶泽藻遭藻贼憎藻藻灶贼澡藻 蚤灶遭则藻凿泽贼则葬蚤灶泽渊月则葬早燥灶扎蚤圆园员园袁阅藻杂蚤皂燥灶藻藻贼葬造援 云蚤早援远摇悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽渊悦悦冤造蚤灶藻泽葬造增藻燥造葬则遭燥灶藻增燥造怎皂藻糟澡葬灶早藻泽蚤灶则藻泽责燥灶泽藻贼燥燥则葬造皂蚤曾藻凿蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶援粤凿葬则噪郧葬则赠糟燥造怎皂灶责则藻泽藻灶贼泽糟燥灶贼则燥造遭燥灶藻增燥造怎皂藻渊悦月灾冤葬灶凿葬造蚤早澡贼郧则葬赠糟燥造怎皂灶责则藻泽藻灶贼泽则藻泽蚤凿怎葬造遭燥灶藻增燥造怎皂藻渊砸月灾冤援蕴葬遭藻造藻凿憎蚤贼澡葬泽贼藻则蚤泽噪渊鄢冤葬则藻远悦悦造蚤灶藻泽燥枣贼燥贼葬造圆猿悦悦造蚤灶藻泽渊陨造圆远袁陨蕴缘苑袁陨蕴苑圆袁陨蕴员愿圆袁陨蕴员怨远袁葬灶凿陨蕴苑员员冤泽澡燥憎蚤灶早葬泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼遭燥灶藻造燥泽泽渊孕约园郾园缘冤葬灶凿猿糟燥灶泽蚤凿藻则藻凿贼燥遭藻泽怎泽糟藻责贼蚤遭造藻贼燥贼澡藻蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶援载鄄葬曾蚤泽则藻责则藻泽藻灶贼泽贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽袁再鄄葬曾蚤泽则藻责则藻泽藻灶贼泽贼澡藻葬造增藻燥造葬则遭燥灶藻增燥造怎皂藻皂皂 渊杂澡怎泽贼藻则皂葬灶藻贼葬造援圆园员猿冤援

12 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 怨 圆园员源冤援粤泽泽贼藻责枣燥则憎葬则凿泽枣蚤灶藻皂葬责责蚤灶早燥枣贼澡藻泽藻则藻早蚤燥灶泽蚤灶贼澡藻早藻灶燥皂藻怎泽蚤灶早贼澡藻悦悦皂燥怎泽藻责燥责怎造葬贼蚤燥灶袁蕴燥则藻爷藻贼葬造援圆园员缘葬泽泽藻泽泽藻凿贼燥贼葬造燥枣怨圆皂蚤糟藻渊缘园皂葬造藻泽袁源圆枣藻皂葬造藻泽冤早藻灶藻则葬贼藻凿枣则燥皂员苑悦悦造蚤灶藻泽葬灶凿糟澡葬造造藻灶早藻凿遭赠孕援葬藻则怎早蚤灶燥泽葬蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶渊蚤灶贼则葬贼则葬糟澡藻葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶冤袁枣燥造造燥憎蚤灶早贼澡藻蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶憎蚤贼澡孕援葬藻则怎早蚤灶燥泽葬袁澡燥泽贼则藻泽责燥灶泽藻憎葬泽凿藻贼藻则皂蚤灶藻凿枣燥则苑凿葬赠泽蚤灶贼藻则皂泽燥枣泽怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻渊凿葬赠泽冤葬灶凿遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼渊早则葬皂冤糟澡葬灶早藻泽援粤泽则藻责燥则贼藻凿遭赠蕴燥则藻爷藻贼葬造援圆园员缘袁贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽增葬则蚤藻凿泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠蚤灶贼澡藻蚤则泽怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻渊云蚤早援苑粤冤则葬灶早蚤灶早遭藻贼憎藻藻灶造藻贼澡葬造则藻泽责燥灶泽藻渊泽怎则增蚤增葬造员郾缘凿葬赠泽冤贼燥糟燥皂责造藻贼藻则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻渊员园园豫泽怎则增蚤增葬造冤援粤泽憎藻造造袁贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽增葬则蚤藻凿蚤灶贼澡藻蚤则遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼糟澡葬灶早藻泽枣燥造造燥憎蚤灶早贼澡藻糟澡葬造造藻灶早藻袁憎澡藻则藻枣藻憎悦悦造蚤灶藻泽泽澡燥憎藻凿泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼凿藻糟则藻葬泽藻蚤灶遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼葬灶凿燥贼澡藻则泽泽澡燥憎藻凿则藻糟燥增藻则赠燥枣月宰葬枣贼藻则凿葬赠缘援杂怎皂皂葬则蚤扎蚤灶早贼澡藻皂藻葬灶泽怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻渊酝杂栽冤葬灶凿责藻则糟藻灶贼葬早藻糟澡葬灶早藻蚤灶遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼燥枣凿葬赠员 渊悦月宰员冤渊云蚤早援苑月冤援匀藻则藻遭赠袁怎泽蚤灶早枣藻憎造蚤灶藻泽燥枣贼澡藻悦悦责燥责怎造葬贼蚤燥灶憎藻凿藻皂燥灶泽贼则葬贼藻贼澡藻则燥造藻燥枣泽贼则燥灶早早藻灶藻贼蚤糟糟燥皂责燥灶藻灶贼泽糟燥灶贼则燥造造蚤灶早贼澡藻澡燥泽贼则藻泽责燥灶泽藻凿藻泽责蚤贼藻枣蚤曾藻凿葬灶凿泽贼则蚤糟贼造赠糟燥灶贼则燥造造藻凿藻灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽援悦藻则贼葬蚤灶造赠藻泽贼蚤皂葬贼藻凿遭则燥葬凿泽藻灶泽藻澡藻则蚤贼葬遭蚤造蚤贼赠糟葬造糟怎造葬贼蚤燥灶泽泽澡燥憎灶贼燥遭藻澡蚤早澡枣燥则遭燥贼澡贼则葬蚤贼泽燥枣贼澡藻则藻泽责燥灶泽藻责燥泽贼圆蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶袁泽怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻憎蚤贼澡匀越园郾缘源葬灶凿遭燥凿赠圆憎藻蚤早澡贼造燥泽泽憎蚤贼澡匀越园郾圆愿援阅怎藻贼燥贼澡藻泽藻责则燥皂蚤泽蚤灶早枣蚤灶凿蚤灶早泽袁灶怎皂遭藻则燥枣悦悦造蚤灶藻泽憎藻则藻藻曾贼藻灶凿藻凿袁葬灶凿则藻糟藻灶贼造赠憎藻皂葬责责藻凿匝栽蕴葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿憎蚤贼澡澡燥泽贼泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥孕援葬藻则怎早蚤灶燥泽葬蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶渊怎灶责怎遭造蚤泽澡藻凿凿葬贼葬冤援 员郾缘摇酝葬责澡燥泽贼泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥泽藻责泽蚤泽渊怎灶责怎遭造蚤泽澡藻凿冤援杂藻责泽蚤泽蚤泽葬泽藻增藻则藻澡藻葬造贼澡糟燥皂责造蚤糟葬贼蚤燥灶袁怎泽怎葬造造赠贼则蚤早早藻则藻凿遭赠蚤皂皂怎灶藻则藻泽责燥灶泽藻燥枣贼澡藻遭燥凿赠葬早葬蚤灶泽贼蚤灶枣藻糟贼蚤燥怎泽凿蚤泽藻葬泽藻渊蕴藻增赠藻贼葬造援圆园园猿冤援哉泽怎葬造造赠袁泽藻责泽蚤泽蚤泽贼则藻葬贼藻凿憎蚤贼澡葬灶贼蚤遭蚤燥贼蚤糟贼澡藻则葬责蚤藻泽贼燥早藻贼澡藻则憎蚤贼澡葬早早则藻泽泽蚤增藻燥责藻则葬贼蚤增藻蚤灶贼藻则增藻灶贼蚤燥灶葬灶凿泽怎责责燥则贼蚤增藻贼则藻葬贼皂藻灶贼泽枣燥则贼澡藻遭燥凿赠泽赠泽贼藻皂泽蚤灶蚤灶贼藻灶泽蚤增藻糟葬则藻怎灶蚤贼渊陨悦哉冤援阅藻泽责蚤贼藻糟燥灶贼蚤灶怎藻泽葬凿增葬灶糟藻泽蚤灶葬灶贼蚤遭蚤燥贼蚤糟贼澡藻则葬责蚤藻泽葬灶凿皂藻凿蚤糟葬造泽怎责责燥则贼袁澡蚤早澡皂燥则遭蚤凿蚤贼赠葬灶凿皂燥则贼葬造蚤贼赠燥枣泽藻责泽蚤泽葬则藻则藻责燥则贼藻凿渊云则蚤藻凿皂葬灶藻贼葬造援员怨怨愿冤援杂藻责泽蚤泽责葬贼澡燥早藻灶藻泽蚤泽蚤泽泽贼怎凿蚤藻凿枣则燥皂皂怎造贼蚤责造藻凿蚤则藻糟贼蚤燥灶泽袁燥灶藻蚤泽遭葬泽藻凿燥灶凿蚤泽泽藻糟贼蚤灶早贼澡藻皂蚤糟则燥遭蚤葬造枣葬糟贼燥则泽糟燥灶贼则蚤遭怎贼蚤灶早贼燥贼澡藻凿蚤泽藻葬泽藻葬灶凿葬灶燥贼澡藻则蚤泽澡燥泽贼枣葬糟贼燥则泽糟燥灶贼则蚤遭怎贼蚤灶早贼燥贼澡藻泽藻责泽蚤泽凿藻增藻造燥责皂藻灶贼葬灶凿责则燥早则藻泽泽援云燥糟怎泽蚤灶早燥灶澡燥泽贼则藻泽责燥灶泽藻袁泽燥枣葬则泽贼怎凿蚤藻泽泽澡燥憎贼澡葬贼泽藻责贼蚤糟则藻泽责燥灶泽藻燥枣贼澡藻澡燥泽贼蚤泽贼则蚤早早藻则藻凿皂葬蚤灶造赠遭赠皂蚤糟则燥遭蚤葬造贼燥曾蚤灶泽袁责则蚤皂葬则蚤造赠蕴蚤责燥责燥造赠泽糟糟澡葬则蚤凿藻糟燥皂责燥灶藻灶贼泽渊蕴孕杂冤蚤灶早则葬皂灶藻早葬贼蚤增藻遭葬糟贼藻则蚤葬葬灶凿造蚤责燥贼藻蚤糟澡燥蚤糟葬糟蚤凿渊蕴栽粤冤蚤灶早则葬皂责燥泽蚤贼蚤增藻遭葬糟贼藻则蚤葬渊增葬灶凿藻则孕燥造造葬灶凿韵责葬造圆园园愿曰酝葬贼贼泽泽燥灶藻贼葬造援员怨怨猿冤援阅怎藻贼燥增葬则蚤葬贼蚤燥灶泽蚤灶泽藻责泽蚤泽蚤灶糟蚤凿藻灶糟藻葬灶凿泽藻增藻则蚤贼赠葬皂燥灶早责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽袁蚤贼蚤泽藻增蚤凿藻灶贼贼澡葬贼泽贼则燥灶早早藻灶藻贼蚤糟枣葬糟贼燥则泽皂蚤早澡贼遭藻糟燥灶贼则燥造造蚤灶早贼澡藻凿藻增藻造燥责皂藻灶贼燥枣泽藻责泽蚤泽蚤灶则藻泽责燥灶泽藻贼燥蚤灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶憎蚤贼澡皂蚤糟则燥遭蚤葬造贼燥曾蚤灶泽凿怎则蚤灶早蚤灶枣藻糟贼蚤燥怎泽凿蚤泽藻葬泽藻援阅蚤泽泽藻糟贼蚤灶早贼澡藻早藻灶藻贼蚤糟葬则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻怎灶凿藻则造赠蚤灶早贼澡藻泽藻责泽蚤泽凿藻增藻造燥责皂藻灶贼葬灶凿泽藻增藻则蚤贼赠蚤泽灶藻糟藻泽泽葬则赠枣燥则责则藻增藻灶贼蚤燥灶葬灶凿凿藻增藻造燥责皂藻灶贼燥枣责藻则泽燥灶葬造蚤扎藻凿蚤皂责造藻皂藻灶贼葬贼蚤燥灶泽贼燥糟燥皂遭葬贼泽藻责泽蚤泽 云蚤早援苑摇悦悦造蚤灶藻泽则藻泽责燥灶泽藻贼燥孕援葬藻则怎早蚤灶燥泽葬葬蚤则憎葬赠蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶援云蚤早援苑粤泽澡燥憎泽贼澡藻皂藻葬灶泽怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻渊酝杂栽冤蚤灶凿葬赠泽渊依杂耘酝冤援云蚤早援苑月泽澡燥憎贼澡藻责藻则糟藻灶贼葬早藻糟澡葬灶早藻泽蚤灶遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼渊悦月宰员冤枣燥造造燥憎蚤灶早贼澡藻蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶援载鄄葬曾蚤泽则藻责则藻泽藻灶贼泽贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽袁再鄄葬曾蚤泽则藻责则藻泽藻灶贼泽贼澡藻皂藻葬灶泽怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻蚤灶凿葬赠泽渊依杂耘酝冤蚤灶云蚤早援野粤冶葬灶凿豫糟澡葬灶早藻蚤灶遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼蚤灶云蚤早援野月冶援

13 员园中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 凿藻贼藻则蚤燥则葬贼蚤燥灶援匀藻灶糟藻袁燥灶早燥蚤灶早泽贼怎凿赠蚤灶燥怎则造葬遭怎泽蚤灶早贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽责燥责怎造葬贼蚤燥灶葬泽凿蚤枣枣藻则藻灶贼澡燥泽贼早藻灶藻贼蚤糟则藻枣藻则藻灶糟藻泽葬灶凿蕴孕杂辕蕴栽粤泽藻责葬则葬贼藻造赠蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶泽葬泽藻灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造糟澡葬造造藻灶早藻枣燥则澡燥泽贼藻曾责燥泽怎则藻贼燥皂蚤糟则燥遭蚤葬造贼燥曾蚤灶泽援匀蚤贼澡藻则贼燥袁圆怨远皂蚤糟藻早藻灶藻则葬贼藻凿枣则燥皂员远悦悦造蚤灶藻泽憎藻则藻早蚤增藻灶葬灶蚤援责援蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶燥枣蕴孕杂渊凿蚤泽泽燥造增藻凿蚤灶孕月杂冤袁贼澡藻则藻葬枣贼藻则澡燥泽贼则藻泽责燥灶泽藻憎葬泽皂燥灶蚤贼燥则藻凿枣燥则苑圆澡燥怎则泽蚤灶贼藻则皂泽燥枣泽怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻渊澡燥怎则泽冤袁遭燥凿赠燥贼藻皂责藻则葬贼怎则藻渊悦冤葬灶凿憎藻蚤早澡贼渊早则葬皂冤糟澡葬灶早藻泽援孕则藻造蚤皂蚤灶葬则赠凿葬贼葬葬灶葬造赠泽蚤泽泽澡燥憎藻凿渊云蚤早援愿粤冤葬泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼增葬则蚤葬贼蚤燥灶蚤灶泽怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻袁憎澡藻则藻泽燥皂藻悦悦造蚤灶藻泽藻曾澡蚤遭蚤贼藻凿蚤灶糟则藻葬泽藻凿蕴孕杂泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠葬灶凿凿蚤藻凿葬枣贼藻则葬灶葬增藻则葬早藻燥枣猿园澡燥怎则泽蚤灶糟燥灶贼则葬泽贼憎蚤贼澡贼澡藻蕴孕杂鄄则藻泽蚤泽贼葬灶贼悦悦造蚤灶藻泽贼澡葬贼泽怎则增蚤增藻凿贼澡藻苑圆澡燥怎则泽糟澡葬造造藻灶早藻援酝燥则藻蚤皂责燥则贼葬灶贼造赠袁贼憎燥憎葬赠粤晕韵灾粤燥枣泽藻曾藻枣枣藻糟贼糟则燥泽泽悦悦造蚤灶藻泽则藻增藻葬造藻凿葬泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼泽藻曾藻枣枣藻糟贼渊孕约园郾园缘冤袁蚤灶憎澡蚤糟澡枣燥则皂燥泽贼燥枣贼澡藻泽糟葬灶灶藻凿悦悦造蚤灶藻泽袁皂葬造藻泽憎藻则藻皂燥则藻责则燥灶藻贼燥泽藻责贼蚤糟泽澡燥糟噪贼澡葬灶枣藻皂葬造藻泽燥枣贼澡藻泽葬皂藻悦悦造蚤灶藻渊云蚤早援愿月冤援粤贼贼澡藻造藻增藻造燥枣贼澡藻则皂葬造则藻泽责燥灶泽藻袁 皂葬蚤灶则藻泽责燥灶泽藻凿怎则蚤灶早贼澡藻枣蚤则泽贼猿园澡燥怎则泽枣燥造造燥憎蚤灶早贼澡藻蕴孕杂蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶憎葬泽糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎藻凿遭赠澡赠责燥贼澡藻则皂蚤葬枣燥则皂燥泽贼燥枣贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽袁葬枣贼藻则憎葬则凿泽贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽增葬则蚤藻凿蚤灶贼澡藻蚤则则藻泽责燥灶泽藻贼燥憎葬则凿泽藻蚤贼澡藻则澡赠责藻则贼澡藻则皂蚤葬燥则澡赠责燥贼澡藻则皂蚤葬渊云蚤早援愿悦冤援杂蚤皂蚤造葬则增葬则蚤葬贼蚤燥灶泽憎藻则藻燥遭泽藻则增藻凿蚤灶遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼糟澡葬灶早藻泽葬枣贼藻则贼澡藻糟澡葬造造藻灶早藻渊云蚤早援愿阅冤援韵怎则责则藻造蚤皂蚤灶葬则赠凿葬贼葬葬灶葬造赠泽蚤泽糟燥灶枣蚤则皂泽贼澡藻泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶糟藻燥枣增葬则蚤葬贼蚤燥灶蚤灶澡燥泽贼则藻泽责燥灶泽藻贼燥贼澡藻贼燥曾蚤糟皂蚤糟则燥遭蚤葬造糟燥皂责燥灶藻灶贼蕴孕杂蚤灶贼藻则皂泽燥枣泽怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻葬灶凿葬造泽燥责葬则葬皂藻贼藻则泽燥枣遭燥凿赠贼藻皂责藻则葬贼怎则藻葬灶凿憎藻蚤早澡贼糟澡葬灶早藻泽袁泽怎早早藻泽贼蚤灶早贼澡藻蚤灶增燥造增藻皂藻灶贼燥枣皂怎造贼蚤责造藻遭燥凿赠泽赠泽贼藻皂泽贼燥遭藻糟燥灶贼则燥造造藻凿遭赠泽贼则燥灶早早藻灶藻贼蚤糟糟燥皂责燥灶藻灶贼泽援酝藻葬灶憎澡蚤造藻袁枣怎则贼澡藻则悦悦造蚤灶藻葬则藻遭藻蚤灶早葬泽泽藻泽泽藻凿憎蚤贼澡蕴孕杂糟澡葬造造藻灶早藻贼燥藻灶则蚤糟澡贼澡藻责澡藻灶燥贼赠责蚤糟凿葬贼葬则藻枣藻则藻灶糟藻葬灶凿藻灶葬遭造藻枣蚤灶藻皂葬责责蚤灶早燥枣贼澡藻早藻灶燥皂蚤糟则藻早蚤燥灶泽则藻泽责燥灶凿蚤灶早贼燥蕴孕杂援粤泽憎藻造造袁泽蚤皂蚤造葬则藻曾责藻则蚤皂藻灶贼蚤泽燥灶早燥蚤灶早憎蚤贼澡蕴栽粤泽贼蚤皂怎造葬贼蚤燥灶援 云蚤早援愿摇悦悦造蚤灶藻泽泽藻责贼蚤糟则藻泽责燥灶泽藻贼燥憎葬则凿泽贼澡藻皂蚤糟则燥遭蚤葬造贼燥曾蚤糟糟燥皂责燥灶藻灶贼造蚤责燥责燥造赠泽糟糟澡葬则蚤凿藻渊蕴孕杂冤援云蚤早援愿粤泽澡燥憎泽悦悦造蚤灶藻泽皂藻葬灶渊依杂耘酝冤泽怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻渊匀则冤责则燥枣蚤造藻凿怎则蚤灶早贼澡藻苑圆澡燥怎则泽葬枣贼藻则贼澡藻蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶援云蚤早援愿月泽澡燥憎泽贼澡藻凿葬贼葬泽责造蚤贼遭赠泽藻曾蚤灶藻葬糟澡悦悦造蚤灶藻凿怎藻贼燥泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼泽藻曾藻枣枣藻糟贼袁载鄄葬曾蚤泽则藻责则藻泽藻灶贼泽贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽袁再鄄葬曾蚤泽则藻责则藻泽藻灶贼泽贼澡藻皂藻葬灶泽怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻蚤灶澡燥怎则泽渊依杂耘酝冤袁蚤灶蚤灶云蚤早援月鄄憎澡蚤贼藻糟燥造怎皂灶枣燥则枣藻皂葬造藻泽袁遭造怎藻糟燥造怎皂灶枣燥则皂葬造藻泽援云蚤早援愿悦葬灶凿阅责则藻泽藻灶贼泽皂怎造贼蚤责造藻责葬贼贼藻则灶泽燥枣贼藻皂责藻则葬贼怎则藻渊悦冤葬灶凿遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼渊阅冤糟澡葬灶早藻泽凿怎则蚤灶早贼澡藻苑圆澡燥怎则泽责燥泽贼蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶援悦澡葬灶早藻泽蚤灶贼藻皂责藻则葬贼怎则藻葬灶凿遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼憎藻则藻糟葬造糟怎造葬贼藻凿葬泽责藻则糟藻灶贼葬早藻燥枣蚤灶蚤贼蚤葬造增葬造怎藻援载鄄葬曾蚤泽则藻责则藻泽藻灶贼泽贼蚤皂藻葬枣贼藻则蕴孕杂蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶渊匀则冤袁再鄄葬曾蚤泽则藻责则藻泽藻灶贼泽责藻则糟藻灶贼葬早藻燥枣贼澡藻蚤灶蚤贼蚤葬造遭燥凿赠贼藻皂责藻则葬贼怎则藻渊云蚤早援悦冤辕憎藻蚤早澡贼渊云蚤早援阅冤援

14 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 员员 圆摇 悦悦造蚤灶藻泽枣燥则泽贼怎凿赠燥枣悦燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则 韵灶藻枣燥则皂燥枣贼澡藻蚤灶澡藻则蚤贼藻凿糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则蚤泽枣葬皂蚤造蚤葬造葬凿藻灶燥皂葬贼燥怎泽责燥造赠责燥泽蚤泽渊云粤孕冤泽赠灶凿则燥皂藻袁葬则葬则藻凿燥皂蚤灶葬灶贼早藻灶藻贼蚤糟凿蚤泽藻葬泽藻袁憎澡蚤糟澡蚤泽糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎藻凿遭赠皂怎造贼蚤责造藻蚤灶贼藻泽贼蚤灶葬造责燥造赠责泽渊酝燥泽藻则藻贼葬造援员怨怨猿袁砸怎遭蚤灶枣藻造凿藻贼葬造援员怨怨猿曰杂澡藻灶早藻贼葬造援圆园员园曰杂蚤造增藻则皂葬灶藻贼葬造援圆园园猿曰杂怎则葬憎藻藻则葬藻贼葬造援圆园园远冤援陨贼蚤泽糟葬怎泽藻凿遭赠葬枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造皂怎贼葬贼蚤燥灶蚤灶贼澡藻葬凿藻灶燥皂葬贼燥怎泽责燥造赠责燥泽蚤泽糟燥造蚤渊粤责糟冤早藻灶藻援陨灶燥则凿藻则贼燥蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻贼澡藻泽赠灶凿则燥皂藻蚤灶酝蚤灶垣辕原增蚤增燥袁粤责糟皂燥怎泽藻憎葬泽凿藻增藻造燥责藻凿袁蚤皂蚤贼葬贼蚤灶早贼澡藻责燥造赠责责澡藻灶燥皂藻灶燥灶蚤灶澡怎皂葬灶泽渊允燥泽造赠灶藻贼葬造援员怨怨员曰运蚤灶扎造藻则藻贼葬造援员怨怨员曰阅蚤藻贼则蚤糟澡藻贼葬造援员怨怨猿曰匀葬则葬凿葬藻贼葬造援员怨怨怨曰匀蚤则燥澡葬泽澡蚤葬灶凿运葬灶葬蚤圆园园猿冤援陨灶责则藻增蚤燥怎泽垣辕原泽贼怎凿蚤藻泽袁酝蚤灶皂燥怎泽藻憎葬泽怎泽藻凿枣燥则蚤凿藻灶贼蚤枣赠蚤灶早贼澡藻早藻灶藻泽渊皂燥凿蚤枣蚤藻则泽冤葬枣枣藻糟贼蚤灶早贼澡藻枣怎灶糟贼蚤燥灶燥枣粤责糟早藻灶藻援悦怎则则藻灶贼造赠袁葬灶怎皂遭藻则燥枣糟澡则燥皂燥泽燥皂葬造则藻早蚤燥灶泽葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿憎蚤贼澡皂燥凿蚤枣蚤藻则泽燥枣粤责糟早藻灶藻憎藻则藻皂葬责责藻凿渊酝韵酝员原员园冤袁遭怎贼枣葬蚤造藻凿贼燥蚤凿藻灶贼蚤枣赠贼澡藻葬糟贼怎葬造早藻灶藻泽蚤灶贼澡藻泽藻造燥糟蚤贼澡葬贼葬枣枣藻糟贼贼澡藻枣怎灶糟贼蚤燥灶燥枣粤责糟早藻灶藻袁凿怎藻贼燥贼澡藻造燥憎则藻泽燥造怎贼蚤燥灶皂葬责责蚤灶早燥枣贼澡藻泽藻则藻早蚤燥灶泽渊蕴葬憎则藻灶糟藻藻贼葬造援圆园园苑曰悦燥则皂蚤藻则藻贼葬造援圆园园园曰酝燥则蚤灶藻贼葬造援员怨怨苑曰酝燥泽藻则藻贼葬造援员怨怨圆曰韵蚤噪葬则蚤灶藻灶赠藻贼葬造援圆园园怨曰杂蚤造增藻则皂葬灶藻贼葬造援圆园园圆冤栽澡藻悦悦皂蚤糟藻葬则藻葬责燥憎藻则枣怎造贼燥燥造枣燥则澡蚤早澡则藻泽燥造怎贼蚤燥灶皂葬责责蚤灶早燥枣造燥糟蚤葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿憎蚤贼澡糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽袁葬灶凿糟葬灶造藻葬凿贼燥泽怎早早藻泽贼泽贼则燥灶早糟葬灶凿蚤凿葬贼藻早藻灶藻泽怎灶凿藻则造赠蚤灶早贼澡藻泽藻造燥糟蚤援粤泽责则燥燥枣燥枣糟燥灶糟藻责贼葬遭燥怎贼贼澡藻怎泽藻燥枣悦悦皂燥怎泽藻责燥责怎造葬贼蚤燥灶枣燥则皂葬责责蚤灶早皂燥凿蚤枣蚤藻则泽燥枣粤责糟袁憎藻澡葬增藻早藻灶藻则葬贼藻凿葬渊悦悦鄄悦缘苑月蕴辕远造蚤灶藻泽糟葬则则赠蚤灶早酝蚤灶辕垣贼澡藻粤责糟皂怎贼葬贼蚤燥灶冤云员皂燥怎泽藻责燥责怎造葬贼蚤燥灶袁遭赠酝蚤灶垣辕原糟则燥泽泽蚤灶早皂葬造藻皂蚤糟藻燥枣悦缘苑月造辕远允糟葬则则赠蚤灶早粤责糟憎蚤贼澡枣藻皂葬造藻泽燥枣葬凿增葬灶糟藻凿蚤灶遭则藻藻凿蚤灶早早藻灶藻则葬贼蚤燥灶泽燥枣悦悦造蚤灶藻泽援栽澡藻泽贼怎凿赠糟燥澡燥则贼糟燥灶泽蚤泽贼藻凿燥枣圆苑云员悦悦鄄悦缘苑月蕴辕酝蚤灶辕垣远造蚤灶藻泽糟葬则则赠蚤灶早贼澡藻粤责糟皂怎贼葬贼蚤燥灶援栽澡藻造蚤贼贼藻则泽枣则燥皂贼澡藻泽藻皂葬贼蚤灶早憎藻则藻贼藻泽贼藻凿遭赠责燥造赠皂藻则葬泽藻糟澡葬蚤灶则藻葬糟贼蚤燥灶渊孕悦砸冤蚤灶燥则凿藻则贼燥凿蚤泽贼蚤灶早怎蚤泽澡贼澡藻造蚤贼贼藻则糟葬则则赠蚤灶早粤责糟皂怎贼葬灶贼早藻灶藻泽枣则燥皂贼澡藻憎蚤造凿贼赠责藻援云员澡藻贼藻则燥扎赠早燥怎泽皂燥怎泽藻糟葬则则蚤藻则泽枣燥则贼澡藻皂怎贼葬贼藻凿粤责糟早藻灶藻憎藻则藻澡燥怎泽藻凿葬灶凿噪藻责贼枣燥则葬枣蚤增藻鄄皂燥灶贼澡责藻则蚤燥凿燥灶葬员圆原澡燥怎则造蚤早澡贼辕凿葬则噪糟赠糟造藻援阅怎则蚤灶早贼澡蚤泽责藻则蚤燥凿袁遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼渊早则葬皂冤憎葬泽皂燥灶蚤贼燥则藻凿遭蚤鄄憎藻藻噪造赠援粤贼贼澡藻贼藻则皂蚤灶葬造贼蚤皂藻责燥蚤灶贼袁 皂蚤糟藻憎藻则藻泽葬糟则蚤枣蚤糟藻凿袁责葬糟噪藻凿糟藻造造增燥造怎皂藻憎葬泽皂藻葬泽怎则藻凿渊葬灶藻皂蚤葬蚤灶凿蚤糟葬贼燥则冤葬灶凿泽责造藻藻灶葬灶凿蚤灶贼藻泽贼蚤灶藻憎藻则藻则藻皂燥增藻凿援栽澡藻泽责造藻藻灶憎藻蚤早澡贼憎葬泽皂藻葬泽怎则藻凿渊蚤灶枣造葬皂皂葬贼蚤燥灶蚤灶凿蚤糟葬贼燥则冤葬灶凿陨灶贼藻泽贼蚤灶藻泽憎藻则藻凿蚤增蚤凿藻凿蚤灶贼燥泽皂葬造造蚤灶贼藻泽贼蚤灶藻葬灶凿糟燥造燥灶枣燥则枣怎则贼澡藻则糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶燥枣造藻灶早贼澡袁憎藻蚤早澡贼葬灶凿责燥造赠责糟燥怎灶贼援栽澡藻灶怎皂遭藻则葬灶凿泽蚤扎藻泽燥枣责燥造赠责泽蚤灶贼澡藻泽皂葬造造蚤灶贼藻泽贼蚤灶藻葬灶凿糟燥造燥灶憎藻则藻则藻糟燥则凿藻凿葬枣贼藻则枣蚤曾葬贼蚤燥灶蚤灶员园豫灶藻怎贼则葬造遭怎枣枣藻则藻凿枣燥则皂葬造蚤灶渊晕月云冤燥增藻则灶蚤早澡贼袁葬灶凿泽贼葬蚤灶藻凿憎蚤贼澡皂藻贼澡赠造藻灶藻遭造怎藻援云蚤灶凿蚤灶早泽燥枣贼澡藻泽贼怎凿赠憎藻则藻则藻糟藻灶贼造赠责怎遭造蚤泽澡藻凿葬贼阅燥则皂葬灶藻贼葬造援圆园员远袁则藻增藻葬造蚤灶早葬泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠憎蚤凿藻增葬则蚤葬贼蚤燥灶燥枣葬造造贼澡藻责澡藻灶燥贼赠责蚤糟责葬则葬皂藻贼藻则泽蚤灶糟造怎凿蚤灶早贼燥贼葬造灶怎皂遭藻则燥枣责燥造赠责泽渊云蚤早援怨冤酝蚤灶辕垣葬皂燥灶早贼澡藻悦悦鄄悦缘苑月蕴辕远造蚤灶藻泽糟葬则则赠蚤灶早贼澡藻粤责糟 皂怎贼葬贼蚤燥灶袁凿藻泽责蚤贼藻贼澡藻糟燥灶泽贼葬灶贼藻灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽枣燥则贼澡藻燥增藻则葬造造责燥责怎造葬贼蚤燥灶援匀藻灶糟藻袁贼澡藻泽藻泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼增葬则蚤葬贼蚤燥灶泽葬则藻泽怎早早藻泽贼藻凿贼燥遭藻葬贼贼则蚤遭怎贼藻凿遭赠贼澡藻增葬则蚤葬贼蚤燥灶燥枣贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽早藻灶藻贼蚤糟遭葬糟噪早则燥怎灶凿泽援粤灶凿蚤灶凿藻藻凿袁葬澡藻则蚤贼葬遭蚤造蚤贼赠糟葬造糟怎造葬贼蚤燥灶糟藻则贼蚤枣蚤藻泽贼澡蚤泽圆泽贼葬贼藻皂藻灶贼憎蚤贼澡澡蚤早澡匀增葬造怎藻燥枣园郾远源枣燥则贼澡藻贼燥贼葬造灶怎皂遭藻则燥枣责燥造赠责泽援粤凿凿蚤贼蚤燥灶葬造造赠袁阅怎则皂葬灶藻贼葬造援圆园员远葬泽泽藻泽泽藻凿泽藻糟燥灶凿葬则赠藻枣枣藻糟贼泽燥枣贼澡藻凿蚤泽藻葬泽藻袁泽怎糟澡葬泽遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼糟澡葬灶早藻泽袁葬灶藻皂蚤葬葬灶凿泽责造藻灶燥皂藻早葬造赠渊藻灶造葬则早藻凿泽责造藻藻灶冤援耘泽贼蚤皂葬贼藻凿孕藻葬则泽燥灶糟燥则则藻造葬贼蚤燥灶泽渊栽葬遭造藻员冤则藻责燥则贼泽泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼灶藻早葬贼蚤增藻糟燥则则藻造葬贼蚤燥灶遭藻贼憎藻藻灶贼澡藻灶怎皂遭藻则燥枣责燥造赠责泽葬灶凿责葬糟噪藻凿糟藻造造增燥造怎皂藻渊则越原园郾愿源袁孕约园郾园员冤袁蚤援藻援贼澡藻皂燥则藻责燥造赠责泽渊糟燥造燥灶糟葬灶糟藻则冤贼澡藻造燥憎藻则责葬糟噪藻凿糟藻造造增燥造怎皂藻渊葬灶藻皂蚤葬冤袁葬灶凿责燥泽蚤贼蚤增藻泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼糟燥则则藻造葬贼蚤燥灶遭藻贼憎藻藻灶灶怎皂遭藻则燥枣责燥造赠责泽葬灶凿杂责造藻藻灶豫憎藻蚤早澡贼渊则越园郾苑源袁孕约园郾园员冤袁蚤援藻援贼澡藻皂燥则藻责燥造赠责泽渊糟燥造燥灶糟葬灶糟藻则冤贼澡藻造葬则早藻则泽责造藻藻灶渊杂责造藻灶燥皂藻早葬造赠冤援粤泽枣燥则遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼糟澡葬灶早藻泽袁蚤贼蚤泽葬责责葬则藻灶贼贼澡葬贼葬造贼澡燥怎早澡憎澡藻灶糟燥皂责葬则藻凿贼燥糟燥灶贼则燥造悦悦造蚤灶藻泽皂燥泽贼燥枣贼澡藻悦悦鄄悦缘苑月蕴辕远造蚤灶藻泽糟葬则则赠蚤灶早贼澡藻粤责糟 酝蚤灶辕垣皂怎贼葬贼蚤燥灶早葬蚤灶造藻泽泽憎藻蚤早澡贼凿怎则蚤灶早贼澡藻枣蚤增藻皂燥灶贼澡泽责藻则蚤燥凿袁葬灶凿赠藻贼贼澡藻则藻蚤泽葬泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼增葬则蚤葬贼蚤燥灶蚤灶责葬贼贼藻则灶泽燥枣遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼早葬蚤灶遭藻贼憎藻藻灶贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽援粤贼贼澡藻贼蚤皂藻燥枣憎则蚤贼蚤灶早贼澡蚤泽则藻责燥则贼袁造蚤灶噪葬早藻葬灶葬造赠泽蚤泽憎葬泽责藻则枣燥则皂藻凿葬灶凿皂燥凿蚤枣蚤藻则枣燥则粤责糟早藻灶藻泽葬灶凿贼澡藻蚤则葬遭蚤造蚤贼赠贼燥蚤灶凿怎糟藻糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则憎藻则藻皂葬责责藻凿渊怎灶责怎遭造蚤泽澡藻凿凿葬贼葬冤援

15 员圆中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 云蚤早援怨摇粤增藻则葬早藻灶怎皂遭藻则燥枣责燥造赠责泽渊依杂耘酝冤蚤灶贼澡藻圆苑云员悦悦鄄悦缘苑月蕴辕远原酝蚤灶造蚤灶藻泽渊灶越员原员远皂蚤糟藻辕造蚤灶藻冤援 载鄄葬曾蚤泽则藻责则藻泽藻灶贼泽悦悦造蚤灶藻泽葬灶凿贼澡藻悦缘苑月蕴辕远泽贼则葬蚤灶憎澡蚤糟澡蚤泽粤责糟 酝蚤灶辕垣 皂怎贼葬贼蚤燥灶 糟葬则则蚤藻则渊枣蚤则泽贼遭造葬糟噪糟燥造怎皂灶枣则燥皂贼澡藻造藻枣贼冤袁再鄄葬曾蚤泽则藻责则藻泽藻灶贼泽灶怎皂遭藻则燥枣责燥造赠责泽援咱阅燥则皂葬灶藻贼葬造援圆园员远暂 栽葬遭援员摇 孕藻葬则泽燥灶糟燥则则藻造葬贼蚤燥灶增葬造怎藻泽遭藻贼憎藻藻灶贼则葬蚤贼泽院贼燥贼葬造责燥造赠责泽袁蚤灶贼藻泽贼蚤灶藻造藻灶早贼澡袁蚤灶贼藻泽贼蚤灶藻豫憎藻蚤早澡贼袁豫孕悦灾袁泽责造藻藻灶豫鄢鄢鄢憎藻蚤早澡贼葬灶凿责燥造赠责泽责藻则糟皂援悦燥则则藻造葬贼蚤燥灶蚤泽泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼葬贼孕约园郾园缘悦燥则则藻造葬贼蚤燥灶蚤泽泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼葬贼孕约园郾园员援咱阅燥则皂葬灶藻贼葬造援圆园员远暂 猿摇 悦悦造蚤灶藻泽枣燥则栽赠责藻圆阅蚤葬遭藻贼藻泽泽贼怎凿赠 栽澡藻责则藻增葬造藻灶糟藻燥枣贼赠责藻圆凿蚤葬遭藻贼藻泽渊栽圆阅冤袁蚤灶贼澡藻责葬泽贼凿藻糟葬凿藻泽袁澡葬泽蚤灶糟则藻葬泽藻凿蚤灶贼燥藻责蚤凿藻皂蚤糟责则燥责燥则贼蚤燥灶泽袁葬灶凿蚤灶赠藻葬则圆园园园憎葬泽员缘园皂蚤造造蚤燥灶葬灶凿蚤贼蚤泽藻曾责藻糟贼藻凿贼燥凿燥怎遭造藻遭赠贼澡藻赠藻葬则圆园圆缘援杂藻增藻则葬造造蚤灶藻泽燥枣藻增蚤凿藻灶糟藻责则燥增蚤凿藻泽怎责责燥则贼枣燥则贼澡藻则燥造藻燥枣早藻灶藻贼蚤糟增葬则蚤葬贼蚤燥灶蚤灶贼澡藻 责葬贼澡燥早藻灶藻泽蚤泽燥枣栽圆阅葬灶凿蚤灶泽怎造蚤灶则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻援陨灶贼澡蚤泽糟燥灶贼藻曾贼袁凿蚤葬遭藻贼藻泽糟葬灶遭藻糟燥灶泽蚤凿藻则藻凿葬泽葬糟燥皂责造藻曾凿蚤泽藻葬泽藻袁憎澡藻则藻贼澡藻糟澡葬造造藻灶早藻蚤泽贼澡藻宰藻泽贼藻则灶凿蚤藻贼葬灶凿悦悦造蚤灶藻泽葬泽早藻灶藻贼蚤糟则藻枣藻则藻灶糟藻援砸藻糟藻灶贼责怎遭造蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣燥怎则泽贼怎凿赠遭赠粤贼葬皂灶蚤藻贼葬造援圆园员远袁蚤灶贼则燥凿怎糟藻泽贼澡藻责燥憎藻则枣怎造怎贼蚤造蚤贼赠燥枣悦悦造蚤灶藻泽责燥责怎造葬贼蚤燥灶枣燥则怎灶凿藻则泽贼葬灶凿蚤灶早贼澡藻早藻灶藻贼蚤糟遭葬泽藻泽燥枣澡蚤早澡枣葬贼渊源圆豫枣葬贼冤凿蚤藻贼鄄蚤灶凿怎糟藻凿栽圆阅

16 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 员猿 渊匀云阅蚤灶凿怎糟藻凿栽圆阅冤援杂贼怎凿赠糟燥澡燥则贼糟燥灶泽蚤泽贼藻凿燥枣远愿猿皂蚤糟藻早藻灶藻则葬贼藻凿枣则燥皂圆员悦悦造蚤灶藻泽曰皂蚤糟藻憎藻则藻凿蚤增蚤凿藻凿蚤灶贼燥贼憎燥藻曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造早则燥怎责泽院员冤悦燥灶贼则燥造 皂葬蚤灶贼葬蚤灶藻凿燥灶悦澡燥憎泽贼葬灶凿葬则凿则燥凿藻灶贼泽爷凿蚤藻贼葬灶凿圆冤悦澡葬造造藻灶早藻早则燥怎责 皂葬蚤灶贼葬蚤灶藻凿燥灶匀云阅袁藻葬糟澡悦悦造蚤灶藻憎葬泽则藻责则藻泽藻灶贼葬贼蚤增藻蚤灶遭燥贼澡早则燥怎责泽援栽澡藻凿蚤藻贼葬则赠糟澡葬造造藻灶早藻泽贼葬则贼藻凿葬贼葬早藻燥枣愿憎藻藻噪泽燥造凿造葬泽贼蚤灶早枣燥则员圆憎藻藻噪泽袁蚤灶憎澡蚤糟澡遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼渊早则葬皂冤葬灶凿泽蚤扎藻渊造藻灶早贼澡袁憎葬蚤泽贼糟蚤则糟怎皂枣藻则藻灶糟藻冤憎藻则藻葬泽泽藻泽泽藻凿遭蚤鄄憎藻藻噪造赠援粤贼贼澡藻贼藻则皂蚤灶葬造贼蚤皂藻责燥蚤灶贼袁葬灶蚤灶贼则葬责藻则蚤贼燥灶藻葬造早造怎糟燥泽藻贼燥造藻则葬灶糟藻贼藻泽贼渊陨孕郧栽栽冤憎葬泽责藻则枣燥则皂藻凿贼燥藻增葬造怎葬贼藻贼澡藻凿蚤葬遭藻贼燥早藻灶蚤糟泽贼葬贼怎泽燥枣贼澡藻皂蚤糟藻蚤灶则藻泽责燥灶泽藻贼燥贼澡藻凿蚤藻贼葬则赠糟澡葬造造藻灶早藻袁糟燥皂责葬则藻凿遭藻贼憎藻藻灶悦悦造蚤灶藻泽憎蚤贼澡蚤灶藻葬糟澡早则燥怎责渊早藻灶藻贼蚤糟藻枣枣藻糟贼冤葬灶凿葬造泽燥遭藻贼憎藻藻灶早则燥怎责泽渊凿蚤藻贼藻枣枣藻糟贼冤援孕怎遭造蚤泽澡藻凿枣蚤灶凿蚤灶早泽葬贼粤贼葬皂灶蚤藻贼葬造援圆园员远责则藻泽藻灶贼泽葬灶藻曾贼藻灶泽蚤增藻增葬则蚤葬贼蚤燥灶泽燥枣葬造造贼澡藻皂藻葬泽怎则藻凿责澡藻灶燥贼赠责藻泽遭藻贼憎藻藻灶贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽袁蚤皂责燥则贼葬灶贼造赠遭燥凿赠 凿蚤葬遭藻贼燥早藻灶蚤糟葬灶凿憎藻蚤早澡贼则藻泽责燥灶泽藻贼燥匀云阅糟澡葬造造藻灶早藻泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠蚤灶枣造怎藻灶糟藻凿遭赠贼澡藻澡燥泽贼早藻灶藻贼蚤糟遭葬糟噪早则燥怎灶凿憎蚤贼澡泽贼则燥灶早泽藻曾藻枣枣藻糟贼蚤灶藻葬糟澡悦悦造蚤灶藻袁蚤灶凿蚤糟葬贼蚤灶早贼澡葬贼皂葬造藻泽葬灶凿枣藻皂葬造藻泽枣则燥皂贼澡藻泽葬皂藻悦悦造蚤灶藻藻曾责藻则蚤藻灶糟藻贼澡藻凿蚤泽藻葬泽藻凿蚤枣枣藻则藻灶贼造赠援悦悦造蚤灶藻泽泽澡燥憎藻凿皂怎造贼蚤责造藻责葬贼贼藻则灶泽枣燥则早造怎糟燥泽藻糟造藻葬则葬灶糟藻渊云蚤早援员园冤袁蚤灶憎澡蚤糟澡凿蚤枣枣藻则藻灶贼燥怎贼糟燥皂藻泽葬则藻燥遭泽藻则增藻凿蚤灶糟造怎凿蚤灶早则藻泽蚤泽贼蚤遭蚤造蚤贼赠袁泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠葬灶凿皂燥凿藻则葬贼藻蚤灶贼藻则皂藻凿蚤葬贼藻则藻泽责燥灶泽藻援杂燥皂藻悦悦造蚤灶藻泽憎藻则藻澡蚤早澡造赠泽怎泽糟藻责贼蚤遭造藻贼燥憎葬则凿泽糟燥灶泽怎皂责贼蚤燥灶燥枣匀云阅泽澡燥憎蚤灶早蚤皂责葬蚤则藻凿早造怎糟燥泽藻贼燥造藻则葬灶糟藻憎澡藻灶糟燥皂责葬则藻凿贼燥皂蚤糟藻枣则燥皂糟燥灶贼则燥造早则燥怎责燥枣贼澡藻泽葬皂藻悦悦造蚤灶藻援杂蚤皂蚤造葬则枣蚤灶凿蚤灶早葬贼贼澡藻造藻增藻造燥枣遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼糟澡葬灶早藻泽袁泽澡燥憎蚤灶早皂怎造贼蚤责造藻责葬贼贼藻则泽袁泽燥皂藻贼燥憎葬则凿泽糟燥灶贼蚤灶怎藻泽早葬蚤灶袁泽燥皂藻贼燥憎葬则凿泽皂燥凿藻则葬贼藻早葬蚤灶葬灶凿泽燥皂藻藻增藻灶泽澡燥憎藻凿澡蚤早澡遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻噪藻藻责蚤灶早贼澡藻蚤则遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼遭葬造葬灶糟藻凿凿藻泽责蚤贼藻匀云阅糟燥灶泽怎皂责贼蚤燥灶渊云蚤早援员园冤援 云蚤早援员园摇运蚤灶藻贼蚤糟泽燥枣早造怎糟燥泽藻糟造藻葬则葬灶糟藻枣燥则员苑悦悦造蚤灶藻泽渊泽责造蚤贼遭赠泽藻曾冤葬泽葬泽泽藻泽泽藻凿凿怎则蚤灶早贼澡藻员愿园皂蚤灶怎贼藻泽蚤灶贼则葬责藻则蚤贼燥灶藻葬造早造怎糟燥泽藻贼燥造藻则葬灶糟藻贼藻泽贼渊陨孕郧栽栽冤葬枣贼藻则员圆憎藻藻噪泽燥灶悦澡燥憎凿蚤藻贼渊悦匀袁员愿豫枣葬贼冤葬灶凿燥灶澡蚤早澡枣葬贼凿蚤藻贼渊匀云阅袁源圆豫枣葬贼冤援栽澡藻凿葬则噪糟藻灶贼则葬造造蚤灶藻泽澡燥憎泽葬增藻则葬早藻早造怎糟燥泽藻造藻增藻造泽渊皂早辕凿蕴冤葬糟则燥泽泽造蚤灶藻泽援悦澡葬则贼粤袁酝葬造藻泽鄄悦澡燥憎曰月袁酝葬造藻泽鄄匀云阅曰悦袁云藻皂葬造藻泽鄄悦澡燥憎曰阅袁枣藻皂葬造藻泽鄄匀云阅援咱粤贼葬皂灶蚤藻贼葬造援圆园员远暂

17 员源中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 摇摇栽澡藻遭燥贼贼燥皂造蚤灶藻燥枣贼澡蚤泽糟燥皂责则藻澡藻灶泽蚤增藻泽贼怎凿赠蚤泽贼澡葬贼野燥灶藻泽蚤扎藻凿燥藻泽灶燥贼枣蚤贼葬造造冶蚤灶糟燥灶贼藻曾贼燥枣凿蚤藻贼泽袁早藻灶藻贼蚤糟遭葬糟噪早则燥怎灶凿燥枣澡燥泽贼责造葬赠泽糟则蚤贼蚤糟葬造则燥造藻蚤灶遭燥凿赠则藻泽责燥灶泽藻贼燥憎葬则凿泽匀云阅燥则泽贼葬灶凿葬则凿凿蚤藻贼援栽澡藻则藻枣燥则藻袁凿蚤泽糟燥增藻则蚤灶早贼澡藻糟葬灶凿蚤凿葬贼藻早藻灶藻泽蚤灶增燥造增藻凿蚤灶泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠燥则则藻泽蚤泽贼蚤遭蚤造蚤贼赠憎蚤造造遭则蚤灶早怎泽糟造燥泽藻则贼燥憎葬则凿泽责藻则泽燥灶葬造蚤扎藻凿凿蚤藻贼泽枣燥则责则藻增藻灶贼蚤燥灶葬灶凿贼则藻葬贼皂藻灶贼燥枣燥遭藻泽蚤贼赠葬灶凿栽圆阅凿藻增藻造燥责皂藻灶贼援匝怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻贼则葬蚤贼造燥糟蚤渊匝栽蕴冤贼澡葬贼凿藻贼藻则皂蚤灶藻泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥匀云阅糟澡葬造造藻灶早藻袁葬泽藻曾责则藻泽泽藻凿蚤灶遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼葬灶凿贼燥贼葬造葬则藻葬怎灶凿藻则糟怎则增藻燥枣燥增藻则葬造造蚤灶贼则葬责藻则蚤贼燥灶藻葬造早造怎糟燥泽藻贼燥造藻则葬灶糟藻贼藻泽贼渊陨孕郧栽栽冤责澡藻灶燥贼赠责藻泽憎藻则藻蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿则藻糟藻灶贼造赠贼燥遭藻责怎遭造蚤泽澡藻凿泽燥燥灶援云怎则贼澡藻则皂燥则藻袁责则藻糟蚤泽藻匝栽蕴皂葬责责蚤灶早枣燥则蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造贼蚤皂藻责燥蚤灶贼泽凿怎则蚤灶早贼澡藻陨孕郧栽栽葬灶凿遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼葬糟糟怎皂怎造葬贼蚤燥灶憎葬泽责藻则枣燥则皂藻凿葬灶凿匝栽蕴皂葬责责藻凿渊怎灶责怎遭造蚤泽澡藻凿凿葬贼葬冤援 源摇 悦悦造蚤灶藻泽枣燥则枣怎灶凿葬皂藻灶贼葬造月燥凿赠贼则葬蚤贼泽 源郾员摇阅蚤泽泽藻糟贼蚤灶早早藻灶藻贼蚤糟遭葬糟噪早则燥怎灶凿燥枣遭燥凿赠糟燥皂责燥泽蚤贼蚤燥灶渊怎灶责怎遭造蚤泽澡藻凿冤陨灶贼澡蚤泽泽贼怎凿赠袁憎藻葬蚤皂贼燥凿藻贼藻则皂蚤灶藻贼澡藻早藻灶藻贼蚤糟枣葬糟贼燥则泽怎灶凿藻则造赠蚤灶早贼澡藻遭燥凿赠糟燥皂责燥泽蚤贼蚤燥灶怎泽蚤灶早贼澡藻悦悦责燥责怎造葬贼蚤燥灶葬灶凿贼澡藻责燥憎藻则燥枣贼澡藻阅耘载粤泽糟葬灶贼藻糟澡灶蚤择怎藻援栽澡藻枣燥造造燥憎蚤灶早责澡藻灶燥贼赠责藻泽憎藻则藻则藻糟燥则凿藻凿遭赠贼澡藻阅耘载粤圆泽糟葬灶曰员冤遭燥灶藻贼蚤泽泽怎藻枣藻葬贼怎则藻泽曰遭燥灶藻葬则藻葬渊糟皂冤袁遭燥灶藻皂蚤灶藻则葬造糟燥灶贼藻灶贼渊月酝悦冤袁遭燥灶藻皂蚤灶藻则葬造凿藻灶泽蚤贼赠渊月酝阅冤袁圆冤杂燥枣贼贼蚤泽泽怎藻泽曰枣葬贼渊早则葬皂冤袁造藻葬灶渊早则葬皂冤袁责藻则糟藻灶贼葬早藻枣葬贼渊豫枣葬贼冤援哉泽蚤灶早贼澡藻责澡藻灶燥贼赠责蚤糟凿葬贼葬葬灶凿早藻灶燥贼赠责蚤糟凿葬贼葬燥枣贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽憎蚤造造藻灶葬遭造藻早藻灶燥皂藻鄄憎蚤凿藻泽糟葬灶葬灶葬造赠泽蚤泽枣燥则蚤凿藻灶贼蚤枣赠蚤灶早择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻贼则葬蚤贼造燥糟蚤葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿憎蚤贼澡贼澡藻泽藻贼则葬蚤贼泽援粤凿凿蚤贼蚤燥灶葬造造赠袁遭燥凿赠造藻灶早贼澡渊月蕴越凿蚤泽贼葬灶糟藻蚤灶糟皂遭藻贼憎藻藻灶灶燥泽藻葬灶凿葬灶怎泽冤袁憎葬蚤泽贼 糟蚤则糟怎皂枣藻则藻灶糟藻袁遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼渊月宰冤袁贼澡藻遭燥凿赠皂葬泽泽圆蚤灶凿藻曾渊月酝陨越月宰辕月蕴冤憎藻则藻皂藻葬泽怎则藻凿枣燥则藻葬糟澡皂燥怎泽藻袁憎澡蚤糟澡憎蚤造造葬造泽燥遭藻怎泽藻凿葬泽葬责澡藻灶燥贼赠责藻枣燥则凿藻贼藻则皂蚤灶蚤灶早贼澡藻增葬则蚤葬贼蚤燥灶遭藻贼憎藻藻灶贼澡藻凿蚤枣枣藻则藻灶贼悦悦造蚤灶藻泽援韵灶葬增藻则葬早藻源原员园蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造泽燥枣员愿贼燥圆园原憎藻藻噪燥造凿皂蚤糟藻燥枣遭燥贼澡泽藻曾藻泽枣则燥皂藻葬糟澡则葬灶凿燥皂造赠怎泽藻凿员缘悦悦造蚤灶藻泽袁憎澡蚤糟澡憎藻则藻皂葬蚤灶贼葬蚤灶藻凿燥灶泽贼葬灶凿葬则凿则燥凿藻灶贼凿蚤藻贼袁憎藻则藻葬灶葬造赠泽藻凿援云蚤早怎则藻员圆援粤贼燥阅泽澡燥憎贼澡藻责则燥枣蚤造藻泽燥枣贼澡藻凿蚤枣枣藻则藻灶贼贼藻泽贼藻凿贼则葬蚤贼泽燥枣凿蚤枣枣藻则藻灶贼悦悦造蚤灶藻泽怎泽蚤灶早阅耘载粤泽糟葬灶援栽澡藻泽贼葬贼蚤泽贼蚤糟葬造葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣贼澡藻责澡藻灶燥贼赠责蚤糟则藻泽怎造贼泽澡葬增藻泽澡燥憎灶泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼渊孕约园郾园缘冤增葬则蚤葬贼蚤燥灶泽遭藻贼憎藻藻灶贼澡藻凿蚤枣枣藻则藻灶贼悦悦造蚤灶藻泽援杂藻曾藻枣枣藻糟贼憎葬泽葬造泽燥燥遭泽藻则增藻凿憎蚤贼澡贼澡藻凿蚤枣枣藻则藻灶贼贼藻泽贼藻凿贼则葬蚤贼泽援源郾圆摇郧藻灶藻贼蚤糟遭葬糟噪早则燥怎灶凿燥枣陨皂皂怎灶藻则藻泽责燥灶泽藻渊怎灶责怎遭造蚤泽澡藻凿冤酝葬责责蚤灶早择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻贼则葬蚤贼造燥糟蚤渊匝栽蕴泽冤藻枣枣藻糟贼蚤灶早贼澡藻蚤皂皂怎灶藻则藻泽责燥灶泽藻糟藻造造泽造蚤灶藻葬早藻泽蚤灶贼澡藻责藻则蚤责澡藻则葬造遭造燥燥凿葬灶凿泽怎遭泽藻择怎藻灶贼造赠蚤凿藻灶贼蚤枣赠蚤灶早贼澡藻早藻灶藻泽怎灶凿藻则造赠蚤灶早贼澡藻泽藻匝栽蕴糟葬灶造藻葬凿贼燥遭藻贼贼藻则怎灶凿藻则泽贼葬灶凿蚤灶早燥枣贼澡藻澡燥泽贼则藻泽责燥灶泽藻贼燥贼澡藻泽藻凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤灶枣藻糟贼蚤燥怎泽凿蚤泽藻葬泽藻泽援云燥则贼澡蚤泽责怎则责燥泽藻袁憎藻蚤灶蚤贼蚤葬贼藻凿葬泽贼怎凿赠葬蚤皂藻凿燥枣皂葬责责蚤灶早贼澡藻早藻灶藻泽袁憎澡蚤糟澡糟燥灶贼则燥造贼澡藻责则燥凿怎糟贼蚤燥灶燥枣增葬则蚤燥怎泽泽怎遭泽藻贼泽燥枣糟藻造造泽贼澡葬贼葬则藻责葬则贼蚤糟蚤责葬贼蚤灶早蚤灶贼澡藻澡燥泽贼凿藻枣藻灶泽藻援匀藻则藻袁憎藻责则藻泽藻灶贼贼澡藻蚤皂皂怎灶藻责则燥枣蚤造藻泽凿葬贼葬燥灶员缘悦悦皂燥怎泽藻造蚤灶藻泽遭赠择怎葬灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣贼澡藻葬皂燥怎灶贼燥枣责藻则蚤责澡藻则葬造遭造燥燥凿栽袁月袁葬灶凿皂葬糟则燥责澡葬早藻泽糟藻造造泽燥枣皂葬贼怎则藻皂蚤糟藻渊猿原缘皂蚤糟藻责藻则造蚤灶藻燥枣员园憎藻藻噪泽燥造凿冤援栽澡藻蚤皂皂怎灶燥责澡藻灶燥贼赠责蚤灶早憎葬泽责藻则枣燥则皂藻凿怎泽蚤灶早枣造燥憎糟赠贼燥皂藻贼则赠葬灶葬造赠泽蚤泽怎泽蚤灶早枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻葬糟贼蚤增葬贼藻凿糟藻造造泽贼葬蚤灶蚤灶早渊云粤悦杂冤贼藻糟澡灶燥造燥早赠援月造燥燥凿泽葬皂责造藻泽憎藻则藻糟燥造造藻糟贼藻凿枣则燥皂贼澡藻燥则遭蚤贼葬造增藻灶燥怎泽责造藻曾怎泽燥枣皂蚤糟藻援月造燥燥凿泽葬皂责造藻泽枣则燥皂蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造皂蚤糟藻憎藻则藻蚤灶糟怎遭葬贼藻凿憎蚤贼澡泽责藻糟蚤枣蚤糟葬灶贼蚤遭燥凿蚤藻泽蚤灶糟造怎凿蚤灶早葬灶贼蚤悦阅猿藻渊栽糟藻造造泽冤袁葬灶贼蚤 云蚤早援员员摇 运蚤灶藻贼蚤糟泽燥枣遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼渊早冤皂藻葬灶泽渊依杂耘酝冤燥枣枣藻皂葬造藻泽渊粤冤葬灶凿皂葬造藻泽渊月冤燥枣圆员悦悦造蚤灶藻泽凿怎则蚤灶早员圆憎藻藻噪泽燥灶澡蚤早澡枣葬贼凿蚤藻贼葬则赠糟澡葬造造藻灶早藻渊匀云阅袁源圆豫枣葬贼冤援咱粤贼葬皂灶蚤藻贼葬造援圆园员远暂

18 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 员缘 云蚤早援员圆摇孕澡藻灶燥贼赠责蚤糟责则燥枣蚤造藻泽燥枣贼澡藻遭燥凿赠糟燥皂责燥泽蚤贼蚤燥灶糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽葬泽泽藻泽泽藻凿遭赠阅耘载粤泽糟葬灶燥枣凿蚤枣枣藻则藻灶贼悦悦造蚤灶藻泽援载鄄葬曾蚤泽则藻责则藻泽藻灶贼贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽袁再鄄葬曾蚤泽则藻责则藻泽藻灶贼责澡藻灶燥贼赠责蚤糟贼则葬蚤贼增葬造怎藻曰野粤冶则藻责则藻泽藻灶贼泽遭燥凿赠贼蚤泽泽怎藻憎藻蚤早澡贼蚤灶早则葬皂袁野月冶则藻责则藻泽藻灶贼泽责藻则糟藻灶贼葬早藻云葬贼渊豫冤袁野悦冶则藻责则藻泽藻灶贼泽遭燥灶藻皂蚤灶藻则葬造糟燥灶贼藻灶贼蚤灶早则葬皂袁野阅冶圆则藻责则藻泽藻灶贼泽遭燥灶藻皂蚤灶藻则葬造凿藻灶泽蚤贼赠蚤灶早则葬皂辕糟皂援 悦阅员怨渊月糟藻造造泽冤袁葬灶凿葬灶贼蚤悦阅员员遭渊皂葬糟则燥责澡葬早藻泽冤援渊云蚤早援员猿冤援韵怎则泽贼怎凿赠则藻增藻葬造藻凿皂葬则噪藻凿凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽蚤灶贼澡藻则藻造葬贼蚤增藻责则燥责燥则贼蚤燥灶泽燥枣凿蚤枣枣藻则藻灶贼糟藻造造泽蚤灶贼澡藻凿蚤枣枣藻则藻灶贼悦悦皂燥怎泽藻造蚤灶藻泽援栽澡藻则藻造葬贼蚤增藻责则燥责燥则贼蚤燥灶泽增葬则蚤藻凿遭藻贼憎藻藻灶员猿郾缘原源猿豫枣燥则月造赠皂责澡燥糟赠贼藻泽葬灶凿遭藻贼憎藻藻灶远郾缘原猿远豫枣燥则栽造赠皂责澡燥糟赠贼藻泽援粤泽枣燥则皂葬糟则燥责澡葬早藻泽贼澡藻蚤则责则燥责燥则贼蚤燥灶增葬造怎藻则葬灶早藻憎葬泽员园郾远原猿怨豫蚤灶贼澡藻凿蚤枣枣藻则藻灶贼悦悦造蚤灶藻泽援韵怎则则藻泽怎造贼泽葬则藻糟燥皂责葬贼蚤遭造藻憎蚤贼澡贼澡藻则藻泽怎造贼泽袁憎澡蚤糟澡葬造则藻葬凿赠责怎遭造蚤泽澡藻凿枣燥则凿蚤枣枣藻则藻灶贼糟燥皂皂藻则糟蚤葬造造赠葬增葬蚤造葬遭造藻蚤灶遭则藻凿皂燥怎泽藻泽贼则葬蚤灶泽援栽澡怎泽袁贼澡藻泽藻则藻泽怎造贼泽枣燥则皂贼澡藻遭葬泽蚤泽枣燥则藻曾贼藻灶凿蚤灶早贼澡藻泽贼怎凿赠燥枣皂燥则藻悦悦造蚤灶藻泽袁葬灶凿则藻糟藻灶贼造赠怎泽蚤灶早责澡藻灶燥贼赠责蚤糟凿葬贼葬 枣则燥皂远猿造蚤灶藻泽袁憎藻憎藻则藻葬遭造藻贼燥皂葬责匝栽蕴葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿憎蚤贼澡贼澡藻蚤皂皂怎灶藻责则燥枣蚤造藻糟藻造造泽渊怎灶责怎遭造蚤泽澡藻凿凿葬贼葬冤援源郾猿摇酝葬责匝栽蕴枣燥则贼则葬遭藻糟怎造葬则遭燥灶藻皂蚤糟则燥葬则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻酝蚤糟则燥葬则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻燥枣贼则葬遭藻糟怎造葬则遭燥灶藻泽贼则怎糟贼怎则藻蚤泽糟燥灶泽蚤凿藻则藻凿葬泽糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼糟燥灶贼则燥造造藻凿遭赠皂怎造贼蚤责造藻早藻灶藻贼蚤糟枣葬糟贼燥则泽援栽澡藻则藻枣燥则藻袁皂蚤糟则燥泽贼则怎糟贼怎则藻燥枣贼则葬遭藻糟怎造葬则遭燥灶藻蚤泽噪灶燥憎灶贼燥凿蚤枣枣藻则葬皂燥灶早责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽则藻泽怎造贼蚤灶早蚤灶责澡藻灶燥贼赠责蚤糟增葬则蚤葬贼蚤燥灶泽贼燥憎葬则凿泽凿藻增藻造燥责皂藻灶贼燥枣燥泽贼藻燥责燥则燥泽蚤泽葬灶凿遭燥灶藻枣则葬糟贼怎则藻泽渊皂藻糟澡葬灶蚤糟泽贼则藻灶早贼澡冤援栽则葬遭藻糟怎造葬则遭燥灶藻皂蚤糟则燥泽贼则怎糟贼怎则藻增葬则蚤葬贼蚤燥灶泽糟葬灶造藻葬凿贼燥枣则葬糟贼怎则藻则蚤泽噪增葬则蚤葬贼蚤燥灶泽遭藻贼憎藻藻灶蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造凿藻泽责蚤贼藻贼澡藻蚤则泽蚤皂蚤造葬则遭燥灶藻皂蚤灶藻则葬造凿藻灶泽蚤贼赠渊月酝阅冤袁蚤灶凿蚤糟葬贼蚤灶早贼澡葬贼 云蚤早援员猿摇孕藻则糟藻灶贼葬早藻燥枣栽袁月葬灶凿皂葬糟则燥责澡葬早藻蚤皂皂怎灶藻糟藻造造泽蚤灶员缘灶葬觙增藻悦悦皂燥怎泽藻造蚤灶藻泽援栽澡藻载鄄葬曾蚤泽则藻责则藻泽藻灶贼泽贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽袁再鄄葬曾蚤泽则藻责则藻泽藻灶贼泽贼澡藻责藻则糟藻灶贼葬早藻袁蚤灶糟造怎凿蚤灶早泽贼葬灶凿葬则凿藻则则燥则泽燥枣贼澡藻贼澡则藻藻贼藻泽贼藻凿蚤皂皂怎灶藻糟藻造造泽蚤灶悦悦造蚤灶藻泽葬贼葬早藻燥枣愿原怨憎藻藻噪燥造凿皂蚤糟藻援栽澡藻责藻则糟藻灶贼葬早藻燥枣栽袁月葬灶凿皂葬糟则燥责澡葬早藻蚤皂皂怎灶藻糟藻造造泽蚤灶责藻则蚤责澡藻则葬造遭造燥燥凿憎葬泽葬泽泽藻泽泽藻凿遭赠云粤悦杂葬灶葬造赠泽蚤泽援

19 员远中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 葬凿凿蚤贼蚤燥灶葬造遭燥灶藻枣藻葬贼怎则藻泽袁泽怎糟澡葬泽贼则葬遭藻糟怎造葬则遭燥灶藻皂蚤糟则燥泽贼则怎糟贼怎则藻凿藻贼藻则皂蚤灶藻泽贼澡藻遭燥灶藻泽贼则藻灶早贼澡渊悦澡葬责责葬则凿藻贼葬造援圆园员员冤援陨灶葬贼贼藻皂责贼泽贼燥糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎藻贼澡藻早藻灶藻贼蚤糟遭葬糟噪早则燥怎灶凿怎灶凿藻则造赠蚤灶早贼澡藻泽藻枣藻葬贼怎则藻泽袁蕴藻增赠藻贼葬造援圆园员缘袁泽糟葬灶灶藻凿贼澡藻枣藻皂燥则葬造凿蚤泽贼葬造皂藻贼葬责澡赠泽蚤糟燥枣员远园皂蚤糟藻早藻灶藻则葬贼藻凿枣则燥皂猿员悦悦造蚤灶藻泽枣燥则贼则葬遭藻糟怎造葬则贼则葬蚤贼泽皂藻葬泽怎则藻凿遭赠皂蚤糟则燥贼燥皂燥早则葬责澡蚤糟渊悦栽冤葬灶葬造赠泽蚤泽援栽澡藻皂藻葬泽怎则藻凿贼则葬遭藻糟怎造葬则贼则葬蚤贼泽糟燥皂责则蚤泽藻凿燥枣贼则葬遭藻糟怎造葬则遭燥灶藻增燥造怎皂藻枣则葬糟贼蚤燥灶渊月灾辕栽灾冤袁灶怎皂遭藻则渊栽遭援晕冤袁贼澡蚤糟噪灶藻泽泽渊栽遭援栽澡冤袁葬灶凿糟燥灶灶藻糟贼蚤增蚤贼赠凿藻灶泽蚤贼赠渊悦燥灶灶援阅冤援粤灶凿蚤灶凿藻藻凿袁怎泽蚤灶早则藻造葬贼蚤增藻造赠泽皂葬造造灶怎皂遭藻则燥枣悦悦造蚤灶藻泽袁蕴藻增赠藻贼葬造援圆园员缘泽怎糟糟藻藻凿藻凿蚤灶皂葬责责蚤灶早泽蚤曾择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻贼则葬蚤贼造燥糟蚤袁憎澡藻则藻源造燥糟蚤燥灶糟澡则燥皂燥泽燥皂藻泽圆葬灶凿苑枣燥则月灾辕栽灾葬灶凿栽遭援栽澡渊圆造燥糟蚤枣燥则藻葬糟澡贼则葬蚤贼冤袁贼憎燥葬凿凿蚤贼蚤燥灶葬造造燥糟蚤燥灶糟澡则燥皂燥泽燥皂藻泽愿葬灶凿员源枣燥则栽遭援晕葬灶凿悦燥灶灶援阅袁则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠渊云蚤早援员源冤渊员豫枣葬造泽藻凿蚤泽糟燥增藻则赠则葬贼藻冤援郧藻灶燥皂藻遭则燥憎泽藻燥枣贼澡藻皂葬责责藻凿匝栽蕴泽泽怎早早藻泽贼灶藻憎造赠早藻灶藻泽憎蚤贼澡则藻造藻增葬灶糟藻贼燥泽噪藻造藻贼葬造遭蚤燥造燥早赠贼燥遭藻枣怎则贼澡藻则增葬造蚤凿葬贼藻凿援匀藻则蚤贼葬遭蚤造蚤贼赠增葬造怎藻泽燥枣贼澡藻泽藻贼则葬蚤贼泽糟燥灶枣蚤则皂藻凿贼澡藻蚤则澡蚤早澡早藻灶藻贼蚤糟糟燥皂责燥灶藻灶贼则葬灶早蚤灶早枣则燥皂园郾远贼燥园郾苑援陨灶贼澡蚤泽泽贼怎凿赠袁蕴藻增赠藻贼葬造援圆园员缘凿藻皂燥灶泽贼则葬贼藻泽枣燥则贼澡藻枣蚤则泽贼贼蚤皂藻泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼早藻灶藻贼蚤糟造蚤灶噪葬早藻遭藻贼憎藻藻灶皂怎造贼蚤责造藻早藻灶藻贼蚤糟造燥糟蚤葬灶凿贼则葬遭藻糟怎造葬则皂蚤糟则燥泽贼则怎糟贼怎则葬造枣藻葬贼怎则藻泽袁泽怎早早藻泽贼蚤灶早灶藻憎糟葬灶凿蚤凿葬贼藻早藻灶藻泽贼燥遭藻枣怎则贼澡藻则增葬造蚤凿葬贼藻凿枣燥则贼澡藻蚤则糟燥灶贼则蚤遭怎贼蚤燥灶蚤灶皂蚤糟则燥泽贼则怎糟贼怎则藻贼则葬遭藻糟怎造葬则遭燥灶藻贼则葬蚤贼泽援 悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶泽 栽澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽渊悦悦冤蚤泽葬灶藻曾贼鄄早藻灶藻则葬贼蚤燥灶皂燥怎泽藻早藻灶藻贼蚤糟则藻枣藻则藻灶糟藻责燥责怎造葬贼蚤燥灶凿藻泽蚤早灶藻凿 遭赠贼澡藻皂燥怎泽藻早藻灶藻贼蚤糟泽糟燥皂皂怎灶蚤贼赠枣燥则澡蚤早澡则藻泽燥造怎贼蚤燥灶皂葬责责蚤灶早燥枣早藻灶藻贼蚤糟枣葬糟贼燥则泽燥枣则藻造藻增葬灶糟藻贼燥澡怎皂葬灶澡藻葬造贼澡袁泽怎糟澡葬泽泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥蚤灶枣藻糟贼蚤燥怎泽葬灶凿糟澡则燥灶蚤糟凿蚤泽藻葬泽藻泽袁葬灶凿则藻泽责燥灶泽藻贼燥皂藻凿蚤糟葬造蚤灶贼藻则增藻灶贼蚤燥灶泽援匀燥憎藻增藻则袁蚤贼蚤泽葬增藻则赠枣造藻曾蚤遭造藻则藻泽燥怎则糟藻憎蚤贼澡增藻则赠憎蚤凿藻责燥贼藻灶贼蚤葬造葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶贼燥糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽燥枣蚤灶贼藻则藻泽贼枣燥则澡怎皂葬灶皂藻凿蚤糟蚤灶藻葬灶凿造蚤增藻泽贼燥糟噪葬早则蚤糟怎造贼怎则藻援栽澡藻悦悦憎蚤造造藻增藻灶贼怎葬造造赠糟燥灶泽蚤泽贼燥枣葬泽藻贼燥枣葬遭燥怎贼猿缘园则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼蚤灶遭则藻凿造蚤灶藻泽葬则藻糟怎则则藻灶贼造赠葬增葬蚤造葬遭造藻枣燥则泽贼怎凿赠援栽澡藻泽藻造蚤灶藻泽憎藻则藻早藻灶藻则葬贼藻凿遭赠则藻糟蚤责则燥糟葬造糟则燥泽泽藻泽遭藻贼憎藻藻灶愿枣燥怎灶凿藻则造蚤灶藻泽袁蚤灶糟造怎凿蚤灶早葬皂燥灶早贼澡藻皂缘则藻造葬贼蚤增藻造赠怎灶则藻造葬贼藻凿糟造葬泽泽蚤糟葬造造葬遭燥则葬贼燥则赠泽贼则葬蚤灶泽袁葬灶凿猿造蚤灶藻泽凿藻则蚤增藻凿枣则燥皂则藻糟藻灶贼憎蚤造凿葬糟糟藻泽泽蚤燥灶泽渊贼憎燥酝怎泽泽怎遭泽责藻糟蚤藻泽袁葬灶凿燥灶藻酝怎泽凿燥皂藻泽贼蚤糟怎泽冤援栽澡藻悦悦则藻泽燥怎则糟藻糟燥灶贼葬蚤灶泽藻曾贼则藻皂藻造赠憎蚤凿藻早藻灶藻贼蚤糟凿蚤增藻则泽蚤贼赠则藻造葬贼蚤增藻贼燥藻曾蚤泽贼蚤灶早皂燥怎泽藻早藻灶藻贼蚤糟则藻泽燥怎则糟藻泽袁葬灶凿澡葬泽葬造则藻葬凿赠凿藻皂燥灶泽贼则葬贼藻凿怎灶责则藻糟藻凿藻灶贼藻凿责燥憎藻则枣燥则澡蚤早澡则藻泽燥造怎贼蚤燥灶匝栽蕴皂葬责责蚤灶早援郧藻灶燥贼赠责藻泽葬灶凿葬造造早藻灶藻则葬贼藻凿责澡藻灶燥贼赠责藻泽憎蚤造造遭藻泽贼燥则藻凿糟藻灶贼则葬造造赠葬灶凿皂葬凿藻责怎遭造蚤糟造赠葬增葬蚤造葬遭造藻皂葬噪蚤灶早贼澡藻悦悦葬野郧藻灶燥贼赠责藻燥灶糟藻袁责澡藻灶燥贼赠责藻燥灶糟藻冶则藻泽燥怎则糟藻援孕澡藻灶燥贼赠责蚤糟凿蚤泽贼则蚤遭怎贼蚤燥灶燥枣悦悦造蚤灶藻泽蚤泽葬造泽燥糟燥灶泽蚤泽贼藻灶贼憎蚤贼澡贼澡藻责则藻泽藻灶糟藻燥枣增藻则赠造葬则早藻增葬则蚤葬贼蚤燥灶葬皂燥灶早贼澡藻皂蚤灶择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻贼则葬蚤贼泽葬泽憎藻造造援栽澡藻藻泽贼蚤皂葬贼藻凿澡藻则蚤贼葬遭蚤造蚤贼赠渊匀圆冤藻枣枣藻糟贼泽燥枣贼澡藻凿蚤枣枣藻则藻灶贼葬泽泽藻泽泽藻凿责澡藻灶燥贼赠责蚤糟贼则葬蚤贼泽则藻糟燥则凿藻凿燥灶悦悦皂蚤糟藻渊栽葬遭援圆冤袁澡葬增藻糟燥灶枣蚤则皂藻凿贼澡葬贼贼澡藻早藻灶藻贼蚤糟枣葬糟贼燥则泽葬则藻贼澡藻皂葬躁燥则责造葬赠藻则怎灶凿藻则造赠蚤灶早贼澡蚤泽责澡藻灶燥贼赠责蚤糟增葬则蚤葬贼蚤燥灶泽援栽澡藻责怎遭造蚤泽澡藻凿葬灶凿怎灶责怎遭造蚤泽澡藻凿则藻泽怎造贼泽澡蚤早澡造蚤早澡贼藻凿贼澡藻怎泽藻枣怎造灶藻泽泽燥枣贼澡蚤泽皂燥怎泽藻郧砸孕泽贼燥蚤凿藻灶贼蚤枣赠糟燥皂责造藻曾早藻灶藻贼蚤糟贼则葬蚤贼泽袁憎澡蚤糟澡皂葬赠造藻葬凿贼燥 云蚤早援员源摇匝栽蕴澡葬责造燥贼赠责藻皂葬责责蚤灶早燥枣贼则葬遭藻糟怎造葬则遭燥灶藻贼则葬蚤贼泽怎泽蚤灶早贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽援韵灶贼澡藻造藻枣贼泽蚤凿藻曰责澡藻灶燥贼赠责蚤糟责则燥枣蚤造藻燥枣贼澡藻贼则葬遭藻糟怎造葬则遭燥灶藻枣藻葬贼怎则藻泽月灾辕栽灾袁栽遭援晕袁栽遭援栽澡葬灶凿悦燥灶灶援阅援载鄄葬曾蚤泽则藻责则藻泽藻灶贼泽悦悦造蚤灶藻泽葬灶凿再鄄葬曾蚤泽则藻责则藻泽藻灶贼泽贼澡藻责澡藻灶燥贼赠责蚤糟贼则葬蚤贼增葬造怎藻援韵灶贼澡藻则蚤早澡贼泽蚤凿藻曰匝栽蕴皂葬责责蚤灶早则藻泽怎造贼泽则藻增藻葬造蚤灶早远泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼匝栽蕴泽怎泽蚤灶早贼澡藻责澡藻灶燥贼赠责蚤糟葬灶凿早藻灶燥贼赠责蚤糟凿葬贼葬燥枣贼澡藻悦悦造蚤灶藻泽葬贼匀粤孕孕再泽燥枣贼憎葬则藻援咱蕴藻增赠藻贼葬造援圆园员缘暂

20 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 员苑 摇摇摇栽葬遭援圆摇耘泽贼蚤皂葬贼藻凿澡藻则蚤贼葬遭蚤造蚤贼赠燥枣增葬则蚤藻贼赠燥枣责澡藻灶燥贼赠责蚤糟贼则葬蚤贼泽葬泽泽藻泽泽藻凿蚤灶贼澡藻悦悦皂蚤糟藻栽燥责蚤糟悦澡葬造造藻灶早藻栽则葬蚤贼匀圆 陨灶枣藻糟贼蚤燥怎泽凿蚤泽藻葬泽藻泽 栽怎皂燥则蚤早藻灶藻泽蚤泽 栽赠责藻圆阅蚤葬遭藻贼藻泽凿蚤葬遭藻贼藻泽 韵遭藻泽蚤贼赠 月燥凿赠糟燥皂责燥泽蚤贼蚤燥灶 陨皂皂怎灶藻泽赠泽贼藻皂 粤泽责藻则早蚤造造怎泽枣怎皂蚤早葬贼怎泽 杂怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻渊凿葬赠泽冤 园援苑愿 运造藻遭泽蚤藻造造葬责灶藻怎皂燥灶葬蚤藻 杂怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻渊凿葬赠泽冤 园援源缘 孕援早蚤灶早蚤增葬造蚤泽葬灶凿云援灶怎糟造藻葬贼怎皂 孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽葬藻则怎早蚤灶燥泽葬 悦月灾砸月灾蕴月灾 杂怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻渊凿葬赠泽冤月燥凿赠憎藻蚤早澡贼造燥泽泽渊早则冤 园援源园援源园援圆 园援缘源园援圆愿 蕴蚤责燥责燥造赠泽糟糟澡葬则蚤凿藻渊蕴孕杂冤杂怎则增蚤增葬造贼蚤皂藻渊匀则冤园援员怨 悦悦原悦缘苑月蕴辕远造蚤灶藻泽糟葬则则赠蚤灶早粤责糟酝蚤灶辕垣皂怎贼葬贼蚤燥灶 匀蚤早澡枣葬贼凿蚤藻贼渊源圆豫冤 匀蚤早澡枣葬贼凿蚤藻贼渊源圆豫冤 阅耘载粤泽糟葬灶 云粤悦杂葬灶葬造赠泽蚤泽 栽燥贼葬造责燥造赠责泽灶怎皂遭藻则豫孕葬糟噪藻凿悦藻造造增燥造怎皂藻豫杂责造藻藻灶憎藻蚤早澡贼 意陨孕郧栽栽栽燥贼葬造粤哉悦裔陨孕郧栽栽栽燥贼葬造粤哉悦 意月燥凿赠宰藻蚤早澡贼早葬蚤灶裔月燥凿赠宰藻蚤早澡贼早葬蚤灶 月燥凿赠豫云葬贼圆月燥灶藻皂蚤灶藻则葬造凿藻灶泽蚤贼赠渊月酝阅早则辕糟皂冤 栽糟藻造造泽月糟藻造造泽酝葬糟则燥责澡葬早藻泽 园援远源园援缘员园援缘猿 园援源猿园援猿苑 园援缘猿园援猿愿 园援源源园援园园 园援猿源园援猿园园援员远 栽则葬遭藻糟怎造葬则遭燥灶藻皂蚤糟则燥葬则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻 酝蚤糟则燥贼燥皂燥早则葬责澡赠泽糟葬灶 月灾辕栽灾栽遭援晕栽遭援栽澡悦燥灶灶援阅 园援远猿园援苑员园援缘远园援远苑 陨孕郧栽栽越蚤灶贼则葬责藻则蚤贼燥灶藻葬造早造怎糟燥泽藻贼燥造藻则葬灶糟藻贼藻泽贼曰粤哉悦越葬则藻葬怎灶凿藻则糟怎则增藻援栽则葬遭藻糟怎造葬则遭燥灶藻增燥造怎皂藻枣则葬糟贼蚤燥灶渊月灾辕栽灾冤袁灶怎皂遭藻则渊栽遭援晕冤袁贼澡蚤糟噪灶藻泽泽渊栽遭援栽澡冤袁葬灶凿糟燥灶灶藻糟贼蚤增蚤贼赠凿藻灶泽蚤贼赠渊悦燥灶灶援阅冤 贼则葬灶泽造葬贼蚤燥灶贼燥澡怎皂葬灶凿蚤泽藻葬泽藻泽援粤灶怎皂遭藻则燥枣责则藻增蚤燥怎泽泽贼怎凿蚤藻泽澡葬增藻泽澡燥憎灶贼澡藻噪灶燥憎造藻凿早藻早葬蚤灶藻凿蚤灶贼澡藻皂燥怎泽藻藻曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造泽赠泽贼藻皂泽糟葬灶遭藻葬责责造蚤藻凿贼燥澡怎皂葬灶泽援栽澡蚤泽则藻泽藻葬则糟澡憎蚤造造糟燥灶贼蚤灶怎藻贼燥皂葬噪藻皂葬躁燥则凿蚤泽糟燥增藻则蚤藻泽蚤灶遭蚤燥皂藻凿蚤糟葬造则藻泽藻葬则糟澡葬灶凿袁贼澡怎泽袁糟燥灶贼则蚤遭怎贼藻贼燥葬遭藻贼贼藻则怎灶凿藻则泽贼葬灶凿蚤灶早葬灶凿贼则藻葬贼皂藻灶贼燥枣澡怎皂葬灶葬灶凿造蚤增藻泽贼燥糟噪凿蚤泽藻葬泽藻泽援参考文献院 咱员暂摇 粤贼葬皂灶蚤匀允袁酝燥贼贼砸袁杂燥造造藻则酝袁藻贼葬造援 匀蚤早澡鄄枣葬贼鄄凿蚤藻贼蚤灶凿怎糟藻凿 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼燥枣蚤灶糟则藻葬泽藻凿枣葬泽贼蚤灶早早造怎糟燥泽藻造藻增藻造泽葬灶凿蚤皂责葬蚤则藻凿 则藻泽责燥灶泽藻贼燥蚤灶贼则葬责藻则蚤贼燥灶藻葬造早造怎糟燥泽藻糟澡葬造造藻灶早藻蚤灶贼澡藻糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻 糟则燥泽泽皂燥怎泽藻早藻灶藻贼蚤糟则藻枣藻则藻灶糟藻责燥责怎造葬贼蚤燥灶咱允暂援 月酝悦郧藻灶藻贼袁 圆园员远袁员苑院员园援 咱圆暂摇 粤赠造燥则阅蕴袁灾葬造凿葬则宰袁云燥怎造凿泽鄄酝葬贼澡藻泽宰袁藻贼葬造援郧藻灶藻贼蚤糟葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽蚤灶贼澡藻藻皂藻则早蚤灶早悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽咱允暂援 郧藻灶燥皂藻砸藻泽袁圆园员员袁圆员院员圆员猿原员圆圆圆援 咱猿暂摇 月葬噪藻则孕允袁砸燥燥责藻灶蚤葬灶 阅悦援 郧藻灶藻贼蚤糟泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥糟澡则燥灶蚤糟 责藻则蚤燥凿燥灶贼葬造凿蚤泽藻葬泽藻咱允暂援 酝蚤糟则燥遭藻泽陨灶枣藻糟贼袁圆园园圆袁源院员员缘苑 原员员远苑援 咱源暂摇 月葬噪藻则孕允袁 阅蚤曾燥灶 酝袁 砸燥燥责藻灶蚤葬灶 阅悦援 郧藻灶藻贼蚤糟 糟燥灶贼则燥造 燥枣 泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥孕燥则责澡赠则燥皂燥灶葬泽早蚤灶早蚤增葬造蚤泽鄄蚤灶凿怎糟藻凿葬造增藻燥造葬则遭燥灶藻 造燥泽泽蚤灶皂蚤糟藻咱允暂援陨灶枣藻糟贼蚤燥灶陨皂皂怎灶蚤贼赠袁圆园园园袁远愿院缘愿远源原缘愿远愿援 咱缘暂摇 月蚤葬灶糟燥灶蚤陨袁酝蚤造葬灶蚤粤袁悦蚤早葬灶葬悦袁藻贼葬造援孕燥泽蚤贼蚤增藻泽蚤早灶葬贼怎则藻鄄贼葬早早藻凿 皂怎贼葬早藻灶藻泽蚤泽蚤灶孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽粤藻则怎早蚤灶燥泽葬院栽则葬糟噪蚤灶早责葬贼澡燥鄄葬凿葬责贼蚤增藻皂怎贼葬贼蚤燥灶泽责则燥皂燥贼蚤灶早葬蚤则憎葬赠泽糟澡则燥灶蚤糟蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶咱允暂援孕蕴燥杂孕葬贼澡燥早藻灶泽袁圆园员员袁苑渊圆冤院藻员园园员圆苑园援咱远暂摇月燥贼贼燥皂造赠阅袁云藻则则蚤泽酝栽袁粤蚤糟澡藻则蕴阅袁藻贼葬造援耘曾责则藻泽泽蚤燥灶择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻贼则葬蚤贼蕴燥糟蚤枣燥则藻曾贼则藻皂藻澡燥泽贼则藻泽责燥灶泽藻贼燥蚤灶枣造怎藻灶扎葬粤蚤灶责则藻鄄糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽皂蚤糟藻咱允暂援郧猿渊月藻贼澡藻泽凿葬冤袁圆园员圆袁圆渊圆冤院圆员猿原圆圆员援咱苑暂摇月则葬早燥灶扎蚤粤袁孕葬则燥灶蚤酝袁晕燥灶蚤泽粤袁藻贼葬造援孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽葬藻则怎早蚤灶燥泽葬皂蚤糟则燥藻增燥造怎贼蚤燥灶凿怎则蚤灶早糟赠泽贼蚤糟枣蚤遭则燥泽蚤泽造怎灶早蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶藻泽贼葬遭造蚤泽澡藻泽糟造燥灶藻泽憎蚤贼澡葬凿葬责贼藻凿增蚤则怎造藻灶糟藻咱允暂援粤皂允砸藻泽责蚤则悦则蚤贼悦葬则藻酝藻凿袁圆园园怨袁员愿园渊圆冤院员猿愿原员源缘援咱愿暂摇月则葬早燥灶扎蚤粤援酝怎则蚤灶藻皂燥凿藻造泽燥枣葬糟怎贼藻葬灶凿糟澡则燥灶蚤糟造怎灶早蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶憎蚤贼澡糟赠泽贼蚤糟枣蚤遭则燥泽蚤泽责葬贼澡燥早藻灶泽咱允暂援陨灶贼允酝藻凿酝蚤糟则燥遭蚤燥造袁圆园员园袁猿园园渊愿冤院缘愿源原缘怨猿援咱怨暂摇月则燥皂葬灶运宰援栽澡藻早藻灶燥皂藻泽燥枣则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼蚤灶遭则藻凿造蚤灶藻泽咱允暂援郧藻灶藻贼蚤糟泽圆园园缘袁员远怨渊圆冤院员员猿猿原员员源远援咱员园暂摇悦澡葬责责葬则凿阅袁月葬泽造佴酝云袁蕴藻早则葬灶凿耘袁藻贼葬造援晕藻憎造葬遭燥则葬贼燥则赠贼燥燥造泽蚤灶贼澡藻葬泽泽藻泽泽皂藻灶贼燥枣遭燥灶藻择怎葬造蚤贼赠咱允暂援韵泽贼藻燥责燥则燥泽陨灶贼袁圆园员员袁圆圆渊愿冤院圆圆圆缘原圆圆源园援咱员员暂摇悦澡怎则糟澡蚤造造郧袁粤蚤则藻赠阅袁粤造造葬赠藻藻匀袁藻贼葬造援栽澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽袁葬糟燥皂皂怎灶蚤贼赠则藻泽燥怎则糟藻枣燥则贼澡藻早藻灶藻贼蚤糟葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽咱允暂援晕葬贼怎则藻郧藻灶藻贼蚤糟泽袁圆园园源袁猿远院员员猿猿原员员猿苑援咱员圆暂摇悦蚤早葬灶葬悦袁悦怎则糟怎则俅蕴袁蕴藻燥灶藻酝砸袁藻贼葬造援孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽葬藻则怎早蚤灶燥泽葬藻曾责造燥蚤贼泽造蚤责蚤凿粤葬灶凿皂怎则燥责藻责贼蚤凿藻泽皂燥凿蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶葬泽葬泽贼则葬贼藻早赠贼燥造燥憎藻则蚤灶灶葬贼藻蚤皂皂怎灶蚤贼赠凿怎则蚤灶早糟赠泽贼蚤糟枣蚤遭则燥泽蚤泽造怎灶早蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶咱允暂援孕蕴燥杂韵灶藻袁圆园园怨袁源渊员圆冤院藻愿源猿怨援

21 员愿中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 咱员猿暂摇 悦燥则皂蚤藻则砸栽袁月蚤造早藻则粤允袁蕴蚤造造蚤糟澡砸月袁藻贼葬造援 栽澡藻酝燥皂员粤运砸 蚤灶贼藻泽贼蚤灶葬造贼怎皂燥则则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻则藻早蚤燥灶糟燥灶泽蚤泽贼泽燥枣孕造葬圆早圆葬葬灶凿葬造燥糟怎泽 凿蚤泽贼葬造贼燥阅源酝蚤贼远源咱允暂援韵灶糟燥早藻灶藻袁圆园园园袁员怨院猿员愿圆原猿员怨圆援 咱员源暂摇 阅藻杂蚤皂燥灶藻酝袁杂责葬早灶怎燥造燥蕴袁蕴燥则侉晕陨袁藻贼葬造援 匀燥泽贼郧藻灶藻贼蚤糟 遭葬糟噪早则燥怎灶凿 蚤灶枣造怎藻灶糟藻泽 贼澡藻 则藻泽责燥灶泽藻 贼燥 贼澡藻 燥责责燥则贼怎灶蚤泽贼蚤糟 孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽葬藻则怎早蚤灶燥泽葬蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶葬造贼藻则蚤灶早糟藻造造鄄皂藻凿蚤葬贼藻凿蚤皂皂怎灶蚤贼赠 葬灶凿 遭葬糟贼藻则蚤葬造 则藻责造蚤糟葬贼蚤燥灶 咱允暂援 孕蕴燥杂 韵灶藻袁 圆园员源袁 怨 渊怨冤院藻员园远愿苑猿援 咱员缘暂摇 阅蚤藻贼则蚤糟澡宰云袁蕴葬灶凿藻则耘杂袁杂皂蚤贼澡允杂袁藻贼葬造援郧藻灶藻贼蚤糟蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣酝燥皂原员袁葬皂葬躁燥则皂燥凿蚤枣蚤藻则造燥糟怎泽葬枣枣藻糟贼蚤灶早酝蚤灶鄄蚤灶凿怎糟藻凿 蚤灶贼藻泽贼蚤灶葬造灶藻燥责造葬泽蚤葬蚤灶贼澡藻皂燥怎泽藻咱允暂援 悦藻造造员怨怨猿袁苑缘院远猿员 原远猿怨援 咱员远暂摇 阅燥则皂葬灶粤袁月葬藻则阅袁栽燥皂造蚤灶泽燥灶陨袁藻贼葬造援 郧藻灶藻贼蚤糟葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣 蚤灶贼藻泽贼蚤灶葬造责燥造赠责凿藻增藻造燥责皂藻灶贼蚤灶悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂蚤糟藻糟葬则则赠蚤灶早 贼澡藻粤责糟渊酝蚤灶辕垣冤皂怎贼葬贼蚤燥灶咱允暂援 月酝悦郧藻灶藻贼援 圆园员远袁员怨曰 员苑院源远援 咱员苑暂摇 阅怎则则葬灶贼悦袁栽葬赠藻皂匀袁再葬造糟蚤灶月袁藻贼葬造援悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂蚤糟藻 葬灶凿贼澡藻蚤则责燥憎藻则贼燥皂葬责澡燥泽贼泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥粤泽责藻则早蚤造造怎泽枣怎皂蚤早葬贼怎泽 蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶咱允暂援郧藻灶燥皂藻砸藻泽袁圆园员员袁圆员院员圆猿怨原员圆源愿援 咱员愿暂摇 云藻则则蚤泽酝栽袁粤赠造燥则阅蕴袁月燥贼贼燥皂造赠阅袁藻贼葬造援酝燥凿藻造蚤灶早澡燥泽贼早藻灶藻贼蚤糟 则藻早怎造葬贼蚤燥灶燥枣蚤灶枣造怎藻灶扎葬责葬贼澡燥早藻灶藻泽蚤泽蚤灶贼澡藻糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽 咱允暂援孕蕴燥杂孕葬贼澡燥早袁圆园员猿袁怨渊圆冤院藻员园园猿员怨远援 咱员怨暂摇 云则蚤藻凿皂葬灶郧袁杂蚤造增葬耘袁灾蚤灶糟藻灶贼允蕴援匀葬泽贼澡藻皂燥则贼葬造蚤贼赠燥枣泽藻责贼蚤糟 泽澡燥糟噪糟澡葬灶早藻凿憎蚤贼澡贼蚤皂藻咱允暂援悦则蚤贼悦葬则藻酝藻凿袁员怨怨愿袁圆远渊员圆冤院 圆园苑愿 愿远援 咱圆园暂摇 郧藻造蚤灶葬泽砸袁悦澡藻泽造藻则耘允袁灾葬泽糟燥灶糟藻造燥泽阅袁藻贼葬造援 粤早藻灶藻贼蚤糟 葬责责则燥葬糟澡贼燥贼澡藻责则藻凿蚤糟贼蚤燥灶燥枣凿则怎早泽蚤凿藻藻枣枣藻糟贼泽院遭造藻燥皂赠糟蚤灶蚤灶凿怎糟藻泽 糟燥灶糟燥则凿葬灶贼责澡藻灶燥贼赠责藻泽蚤灶皂蚤糟藻燥枣贼澡藻糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽咱允暂援 孕澡葬则皂早藻灶燥皂蚤糟泽孕藻则泽酝藻凿袁圆园员员袁源院猿缘原源缘援 咱圆员暂摇 郧藻造造葬贼造赠 杂蕴袁 匀葬灶糟燥糟噪 砸耘援 孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽 葬藻则怎早蚤灶燥泽葬院 灶藻憎 蚤灶泽蚤早澡贼泽蚤灶贼燥责葬贼澡燥早藻灶藻泽蚤泽葬灶凿澡燥泽贼凿藻枣藻灶糟藻泽咱允暂援孕葬贼澡燥早阅蚤泽袁 圆园员猿袁远苑渊猿冤院员缘怨原员苑猿援 咱圆圆暂摇 郧则葬造蚤灶泽噪蚤蕴耘袁云藻则则蚤泽酝栽袁粤赠造燥则阅蕴袁藻贼葬造援 郧藻灶燥皂藻憎蚤凿藻 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 杂粤砸杂鄄悦燥灾 泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠 造燥糟蚤 怎泽蚤灶早 贼澡藻 悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻 悦则燥泽泽 咱允暂援 孕蕴燥杂 郧藻灶藻贼袁 圆园员缘袁 员员 渊员园冤院藻员园园缘缘园源援 咱圆猿暂摇 匀葬则葬凿葬晕袁栽葬皂葬蚤再袁陨泽澡蚤噪葬憎葬栽袁藻贼葬造援陨灶贼藻泽贼蚤灶葬造责燥造赠责燥泽蚤泽蚤灶 皂蚤糟藻憎蚤贼澡葬凿燥皂蚤灶葬灶贼泽贼葬遭造藻皂怎贼葬贼蚤燥灶燥枣贼澡藻遭藻贼葬鄄糟葬贼藻灶蚤灶早藻灶藻 咱允暂援耘酝月韵允袁员怨怨怨袁员愿院缘怨猿员原缘怨源圆援 咱圆源暂摇 匀蚤则燥澡葬泽澡蚤杂袁运葬灶葬蚤再援悦藻造造葬凿澡藻泽蚤燥灶泽赠泽贼藻皂葬灶凿澡怎皂葬灶糟葬灶糟藻则 皂燥则责澡燥早藻灶藻泽蚤泽咱允暂援悦葬灶糟藻则杂糟蚤袁圆园园猿袁怨源院缘苑缘原缘愿员援 咱圆缘暂摇 陨则葬择蚤云援云蚤灶藻皂葬责责蚤灶早燥枣择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻贼则葬蚤贼造燥糟蚤怎泽蚤灶早葬凿增葬灶糟藻凿 蚤灶贼藻则糟则燥泽泽造蚤灶藻泽燥枣皂蚤糟藻葬灶凿责燥泽蚤贼蚤燥灶葬造糟造燥灶蚤灶早燥枣贼澡藻糟燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早 早藻灶藻泽咱允暂援允耘曾责蕴怎灶早砸藻泽袁圆园园园葬袁圆远院远源员原远源怨援 咱圆远暂摇 陨则葬择蚤云袁 悦造葬责糟燥贼 杂袁 运怎皂葬灶 孕袁 藻贼 葬造援 云蚤灶藻 皂葬责责蚤灶早 燥枣 贼则赠责葬灶燥泽燥皂蚤葬泽蚤泽 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 匝栽蕴泽 蚤灶 皂蚤糟藻 怎泽蚤灶早 葬凿增葬灶糟藻凿 蚤灶贼藻则糟则燥泽泽造蚤灶藻泽咱允暂援 酝葬皂皂葬造蚤葬灶郧藻灶燥皂藻袁圆园园园遭袁员员院远源缘 原远源愿援 咱圆苑暂摇 陨则葬择蚤云粤袁 酝葬澡葬躁灶藻 酝袁 杂葬造葬赠皂葬澡 粤袁 藻贼 葬造援 栽澡藻 早藻灶燥皂藻 葬则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻燥枣贼澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂燥怎泽藻早藻灶藻贼蚤糟则藻枣藻则藻灶糟藻 责燥责怎造葬贼蚤燥灶咱允暂援郧藻灶藻贼蚤糟泽圆园员员袁员怨园渊圆冤院猿愿怨原源园圆援 咱圆愿暂摇 允燥泽造赠灶郧袁悦葬则造泽燥灶酝袁栽澡造蚤增藻则蚤泽粤袁藻贼葬造援 陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣 凿藻造藻贼蚤燥灶皂怎贼葬贼蚤燥灶泽葬灶凿贼澡则藻藻灶藻憎早藻灶藻泽葬贼贼澡藻枣葬皂蚤造蚤葬造责燥造赠责燥泽蚤泽咱允暂援悦藻造造员怨怨员袁远远院远园员原远员猿援 咱圆怨暂摇运藻葬灶藻栽酝袁郧燥燥凿泽贼葬凿贼蕴袁阅葬灶藻糟藻噪孕袁藻贼葬造援酝燥怎泽藻早藻灶燥皂蚤糟 增葬则蚤葬贼蚤燥灶葬灶凿蚤贼泽藻枣枣藻糟贼燥灶责澡藻灶燥贼赠责藻泽葬灶凿早藻灶藻则藻早怎造葬贼蚤燥灶咱允暂援晕葬贼怎则藻圆园员员袁员源渊源苑苑冤院圆愿怨原圆怨源援 咱猿园暂摇运藻造葬凿葬杂晕袁粤赠造燥则阅蕴袁孕藻糟噪月悦袁藻贼葬造援郧藻灶藻贼蚤糟葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣 澡藻皂葬贼燥造燥早蚤糟葬造责葬则葬皂藻贼藻则泽蚤灶蚤灶糟蚤责蚤藻灶贼造蚤灶藻泽燥枣贼澡藻糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽咱允暂援郧猿渊月藻贼澡藻泽凿葬冤袁圆园员圆袁圆渊圆冤院员缘苑原员远缘援咱猿员暂摇运蚤灶扎造藻则运宰袁晕蚤造遭藻则贼酝悦袁杂怎蕴运袁藻贼葬造援陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣云粤孕造燥糟怎泽早藻灶藻泽枣则燥皂糟澡则燥皂燥泽燥皂藻缘择圆员咱允暂援杂糟蚤藻灶糟藻袁员怨怨员袁圆缘猿院远远员原远远缘援 咱猿圆暂摇运造燥责燥糟噪蚤耘袁匀藻灶灶蚤早月孕袁阅葬贼澡藻运袁藻贼葬造援阅藻造藻贼蚤燥灶葬灶凿责燥蚤灶贼 皂怎贼葬贼蚤燥灶泽燥枣孕栽匀蕴匀糟葬怎泽藻遭则葬糟澡赠凿葬糟贼赠造赠贼赠责藻耘咱允暂援粤皂允匀怎皂郧藻灶藻贼援圆园员园袁愿远渊猿冤院源猿源原源猿怨援咱猿猿暂摇运燥增葬糟泽粤袁月藻灶鄄允葬糟燥遭晕袁栽葬赠藻皂匀袁藻贼葬造援郧藻灶燥贼赠责藻蚤泽葬泽贼则燥灶早藻则凿藻贼藻则皂蚤灶葬灶贼贼澡葬灶泽藻曾燥枣贼澡藻皂燥怎泽藻早怎贼皂蚤糟则燥遭蚤燥贼葬咱允暂援酝蚤糟则燥遭耘糟燥造袁圆园员员袁远员渊圆冤院源圆猿原源圆愿援 咱猿源暂摇蕴葬贼早佴允孕援粤泽责藻则早蚤造造怎泽枣怎皂蚤早葬贼怎泽葬灶凿葬泽责藻则早蚤造造燥泽蚤泽咱允暂援悦造蚤灶 酝蚤糟则燥遭蚤燥造砸藻增袁员怨怨怨袁员圆渊圆冤院猿员园原猿缘园援咱猿缘暂摇蕴葬憎则藻灶糟藻运晕袁杂澡藻凿造燥增泽噪赠粤袁月蚤藻澡造月杂袁藻贼葬造援陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣酝燥皂苑袁葬灶燥增藻造皂燥凿蚤枣蚤藻则燥枣粤孕悦皂蚤灶辕垣燥灶皂燥怎泽藻糟澡则燥皂燥泽燥皂藻员愿咱允暂援郧藻灶藻贼蚤糟泽圆园园苑袁员苑远院员圆猿苑原员圆源源援咱猿远暂摇蕴藻增赠酝酝袁云蚤灶噪酝孕袁酝葬则泽澡葬造造允悦袁藻贼葬造援圆园园员悦悦酝辕耘杂陨悦酝辕粤悦悦孕辕粤栽杂辕杂陨杂陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造杂藻责泽蚤泽阅藻枣蚤灶蚤贼蚤燥灶泽悦燥灶枣藻则藻灶糟藻咱允暂援悦则蚤贼悦葬则藻酝藻凿袁圆园园猿袁猿员渊源冤院员圆缘园 员圆缘远援咱猿苑暂摇蕴藻增赠砸袁酝燥贼贼砸云袁陨则葬择蚤云粤袁藻贼葬造援悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽皂蚤糟藻蚤灶葬早藻灶藻贼蚤糟葬泽泽燥糟蚤葬贼蚤燥灶泽贼怎凿赠则藻增藻葬造灶藻憎糟葬灶凿蚤凿葬贼藻早藻灶藻泽枣燥则遭燥灶藻皂蚤糟则燥葬则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻咱允暂援月酝悦郧藻灶燥皂蚤糟泽圆园员缘袁员远渊员冤院员园员猿援咱猿愿暂摇蕴燥则侉晕陨袁陨则葬择蚤云粤袁月则葬早燥灶扎蚤粤援匀燥泽贼早藻灶藻贼蚤糟凿蚤增藻则泽蚤贼赠蚤灶枣造怎藻灶糟藻泽贼澡藻泽藻增藻则蚤贼赠燥枣孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽葬藻则怎早蚤灶燥泽葬责灶藻怎皂燥灶蚤葬蚤灶贼澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂蚤糟藻咱允暂援月酝悦郧藻灶藻贼袁圆园员缘袁员远院员园远援咱猿怨暂摇酝葬贼贼泽泽燥灶耘袁灾藻则澡葬早藻蕴袁砸燥造造燥枣允袁藻贼葬造援孕藻责贼蚤凿燥早造赠糟葬灶葬灶凿贼藻蚤糟澡燥蚤糟葬糟蚤凿枣则燥皂杂贼葬责澡赠造燥糟燥糟糟怎泽耘责蚤凿藻则皂蚤凿蚤泽泽贼蚤皂怎造葬贼藻澡怎皂葬灶皂燥灶燥糟赠贼藻泽贼燥则藻造藻葬泽藻贼怎皂燥怎则灶藻糟则燥泽蚤泽枣葬糟贼燥则鄄葬造责澡葬袁蚤灶贼藻则造藻怎噪蚤灶原员遭藻贼葬葬灶凿蚤灶贼藻则造藻怎噪蚤灶原远咱允暂援云耘酝杂陨皂皂怎灶燥造酝藻凿酝蚤糟则燥遭蚤燥造袁员怨怨猿袁苑渊猿冤院圆愿员原圆愿苑援咱源园暂摇酝葬贼澡藻泽宰云袁粤赠造燥则阅蕴袁酝蚤造造藻则阅砸袁藻贼葬造援粤则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻燥枣藻灶藻则早赠遭葬造葬灶糟藻贼则葬蚤贼泽蚤灶藻皂藻则早蚤灶早造蚤灶藻泽燥枣贼澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽咱允暂援粤皂允孕澡赠泽蚤燥造耘灶凿燥糟则蚤灶燥造酝藻贼葬遭袁圆园员员袁猿园园渊远冤院耘员员圆源原员员猿源援 咱源员暂摇酝燥则蚤灶孕允袁杂责葬则噪泽粤月袁运燥则蚤灶藻噪灾袁藻贼葬造援粤糟贼蚤增葬贼蚤燥灶燥枣茁原 糟葬贼藻灶蚤灶鄄栽糟枣泽蚤早灶葬造蚤灶早蚤灶糟燥造燥灶糟葬灶糟藻则遭赠皂怎贼葬贼蚤燥灶泽蚤灶茁原糟葬贼藻灶蚤灶燥则粤孕悦咱允暂援杂糟蚤藻灶糟藻袁员怨怨苑袁圆苑缘院员苑愿苑原员苑怨园援 咱源圆暂摇酝燥泽藻则粤砸袁阅燥增藻宰云袁砸燥贼澡运粤袁藻贼葬造援栽澡藻酝蚤灶渊皂怎造贼蚤责造藻 蚤灶贼藻泽贼蚤灶葬造灶藻燥责造葬泽蚤葬冤皂怎贼葬贼蚤燥灶院蚤贼泽藻枣枣藻糟贼燥灶早怎贼藻责蚤贼澡藻造蚤葬造糟藻造造凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶葬灶凿蚤灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶憎蚤贼澡葬皂燥凿蚤枣蚤藻则泽赠泽贼藻皂咱允暂援允悦藻造造月蚤燥造袁员怨怨圆袁苑员远院员缘员苑原员缘圆远援咱源猿暂摇酝燥泽藻则粤砸袁酝葬贼贼藻泽耘酝袁阅燥增藻宰云袁藻贼葬造援粤责糟酝蚤灶袁葬皂怎贼葬贼蚤燥灶蚤灶贼澡藻皂怎则蚤灶藻粤责糟早藻灶藻袁责则藻凿蚤泽责燥泽藻泽贼燥皂葬皂皂葬则赠糟葬则糟蚤灶燥皂葬泽葬灶凿 枣燥糟葬造葬造增藻燥造葬则澡赠责藻则责造葬泽蚤葬泽咱允暂援孕则燥糟晕葬贼造粤糟葬凿杂糟蚤哉杂粤袁员怨怨猿袁怨园院愿怨苑苑原愿怨愿员援咱源源暂摇酝燥贼贼砸袁栽葬造遭燥贼悦允袁栽怎则则蚤酝郧袁藻贼葬造援粤皂藻贼澡燥凿枣燥则枣蚤灶藻皂葬责责蚤灶早择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻贼则葬蚤贼造燥糟蚤蚤灶燥怎贼遭则藻凿葬灶蚤皂葬造泽贼燥糟噪泽咱允暂援孕则燥糟晕葬贼造

22 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 员怨 粤糟葬凿杂糟蚤哉杂粤袁圆园园园袁圆猿渊苑冤院员圆远源怨原员圆远缘源援咱源缘暂摇晕早怎赠藻灶阅袁杂蚤灶早澡孕运援耘增燥造增蚤灶早泽贼藻葬造贼澡院郧藻灶藻贼蚤糟葬凿葬责贼葬贼蚤燥灶燥枣孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽葬藻则怎早蚤灶燥泽葬凿怎则蚤灶早糟赠泽贼蚤糟枣蚤遭则燥泽蚤泽蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶泽咱允暂援孕则燥糟晕葬贼造粤糟葬凿杂糟蚤哉杂粤袁圆园园远袁员园猿渊圆圆冤院愿猿园缘原愿猿园远援咱源远暂摇韵蚤噪葬则蚤灶藻灶赠杂陨袁悦造藻增藻造葬灶凿粤郧袁悦燥则噪运酝袁藻贼葬造援郧藻灶藻贼蚤糟皂葬责责蚤灶早燥枣酝燥皂缘袁葬灶燥增藻造皂燥凿蚤枣蚤藻则燥枣粤责糟酝蚤灶鄄蚤灶凿怎糟藻凿蚤灶贼藻泽贼蚤灶葬造贼怎皂燥则蚤早藻灶藻泽蚤泽咱允暂援悦葬则糟蚤灶燥早藻灶藻泽蚤泽袁圆园园怨袁猿园院员缘怨员原员缘怨远援咱源苑暂摇孕澡蚤造蚤责灾酝袁杂燥噪燥造燥枣枣郧袁粤糟噪藻则贼鄄月蚤糟噪灶藻造造悦蕴袁藻贼葬造援郧藻灶藻贼蚤糟葬灶葬造赠泽蚤泽蚤灶贼澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽遭则藻藻凿蚤灶早责燥责怎造葬贼蚤燥灶咱允暂援郧藻灶燥皂藻砸藻泽袁圆园员员袁圆员院员圆圆猿原猿愿援咱源愿暂摇孕澡蚤造造蚤责责蚤允袁载蚤藻再袁酝蚤造造藻则阅砸袁月藻造造栽粤袁在澡葬灶早在援藻贼葬造援哉泽蚤灶早贼澡藻藻皂藻则早蚤灶早悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽贼燥责则燥遭藻贼澡藻蚤皂皂怎灶藻泽赠泽贼藻皂援郧藻灶藻泽陨皂皂怎灶袁圆园员源袁员缘渊员冤院猿愿原源远援咱源怨暂摇孕燥造葬噪阅袁宰蚤造藻灶泽噪赠粤袁杂澡葬责蚤则葬蕴袁藻贼葬造援酝燥怎泽藻皂燥凿藻造燥枣藻曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造责藻则蚤燥凿燥灶贼蚤贼蚤泽蚤灶凿怎糟藻凿遭赠孕燥则责澡赠则燥皂燥灶葬泽早蚤灶早蚤增葬造蚤泽辕云怎泽燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂灶怎糟造藻葬贼怎皂蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶院遭燥灶藻造燥泽泽葬灶凿澡燥泽贼则藻泽责燥灶泽藻咱允暂援允悦造蚤灶孕藻则蚤燥凿燥灶贼燥造袁圆园园怨袁猿远渊缘冤院源园远原源员园援咱缘园暂摇砸葬皂砸袁酝藻澡贼葬酝袁月葬造皂藻则蕴袁藻贼葬造援砸葬责蚤凿蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣皂葬躁燥则鄄藻枣枣藻糟贼早藻灶藻泽怎泽蚤灶早贼澡藻糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽咱允暂援郧藻灶藻贼蚤糟泽袁圆园员源袁员怨愿渊员冤院苑缘原愿远援咱缘员暂摇砸葬灶噪蚤灶藻灶栽袁在怎遭藻则蚤粤袁悦澡葬早灶燥灶再悦袁藻贼葬造援栽澡藻澡怎皂葬灶燥遭藻泽蚤贼赠早藻灶藻皂葬责院贼澡藻圆园园缘怎责凿葬贼藻咱允暂援韵遭藻泽蚤贼赠渊杂蚤造增藻则杂责则蚤灶早冤袁圆园园远袁员源渊源冤院缘圆怨原远源源援咱缘圆暂摇砸燥遭藻则贼泽粤袁灾蚤造造藻灶葬云孕袁宰葬灶早宰袁藻贼葬造援栽澡藻责燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂葬则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻燥枣皂燥怎泽藻早藻灶藻贼蚤糟则藻泽燥怎则糟藻泽藻造怎糟蚤凿葬贼藻凿怎泽蚤灶早早藻灶燥皂藻鄄憎蚤凿藻则藻泽藻择怎藻灶糟蚤灶早凿葬贼葬咱允暂援酝葬皂皂葬造蚤葬灶郧藻灶燥皂藻袁圆园园苑袁员愿渊远冤院源苑猿原源愿员援咱缘猿暂摇砸燥早葬造葬粤砸袁酝燥则早葬灶粤孕袁悦澡则蚤泽贼藻灶泽藻灶粤酝袁藻贼葬造援栽澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽葬泽葬则藻泽燥怎则糟藻枣燥则皂燥凿藻造蚤灶早澡怎皂葬灶凿蚤泽藻葬泽藻院悦悦园员员辕哉灶糟袁葬灶藻憎皂燥怎泽藻皂燥凿藻造枣燥则泽责燥灶贼葬灶藻燥怎泽糟燥造蚤贼蚤泽咱允暂援酝葬皂皂郧藻灶燥皂藻援圆园员源袁圆缘渊猿原源冤院怨缘原员园愿援咱缘源暂摇砸怎遭蚤灶枣藻造凿月袁杂燥怎扎葬月袁粤造遭藻则贼陨援粤泽泽燥糟蚤葬贼蚤燥灶燥枣贼澡藻粤孕悦早藻灶藻责则燥凿怎糟贼憎蚤贼澡遭藻贼葬糟葬贼藻灶蚤灶咱允暂援杂糟蚤藻灶糟藻袁员怨怨猿袁圆远圆院员苑猿员原员苑猿源援咱缘缘暂摇杂澡藻灶早允匝袁悦怎蚤宰允袁云怎蕴袁藻贼葬造援粤孕悦早藻灶藻皂怎贼葬贼蚤燥灶蚤灶悦澡蚤灶藻泽藻枣葬皂蚤造蚤葬造葬凿藻灶燥皂葬贼燥怎泽责燥造赠责燥泽蚤泽责葬贼蚤藻灶贼泽咱允暂援宰燥则造凿允郧葬泽贼则燥藻灶贼藻则燥造袁圆园员园袁员远院员缘圆圆原员缘圆远援咱缘远暂摇杂澡怎泽贼藻则皂葬灶粤袁杂葬造赠皂葬澡再袁晕葬泽澡藻枣粤袁藻贼葬造援郧藻灶燥贼赠责藻蚤泽葬灶蚤皂责燥则贼葬灶贼凿藻贼藻则皂蚤灶葬灶贼枣葬糟贼燥则燥枣澡燥泽贼泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥责藻则蚤燥凿燥灶贼蚤贼蚤泽蚤灶贼澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽葬灶凿蚤灶遭则藻凿皂燥怎泽藻责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽咱允暂援月酝悦郧藻灶藻贼蚤糟泽袁圆园员猿袁员源院远愿原苑怨援咱缘苑暂摇杂蚤造增藻则皂葬灶运粤袁运燥则葬贼噪葬则砸粤袁杂蚤则葬糟怎泽葬蕴阅援藻贼葬造援陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣贼澡藻皂燥凿蚤枣蚤藻则燥枣酝蚤灶圆渊酝燥皂圆冤造燥糟怎泽袁葬灶藻憎皂怎贼葬贼蚤燥灶贼澡葬贼蚤灶枣造怎藻灶糟藻泽粤责糟鄄蚤灶凿怎糟藻凿蚤灶贼藻泽贼蚤灶葬造灶藻燥责造葬泽蚤葬咱允暂援郧藻灶燥皂藻砸藻泽袁圆园园圆袁员圆院愿愿原怨苑援 咱缘愿暂摇杂蚤造增藻则皂葬灶运粤袁运燥则葬贼噪葬则砸粤袁杂蚤则葬糟怎泽葬蕴阅袁藻贼葬造援耘曾糟造怎泽蚤燥灶燥枣酝葬凿澡圆袁酝葬凿澡源袁葬灶凿酝葬凿澡苑葬泽糟葬灶凿蚤凿葬贼藻泽枣燥则贼澡藻皂燥凿蚤枣蚤藻则燥枣酝蚤灶圆渊酝燥皂圆冤造燥糟怎泽咱允暂援酝葬皂皂援郧藻灶燥皂藻砸藻泽袁圆园园猿袁员源院员员怨原员圆怨援咱缘怨暂摇杂燥怎遭葬灶蚤粤韵袁悦澡葬灶凿则葬泽藻噪葬则孕匀援栽澡藻糟造蚤灶蚤糟葬造泽责藻糟贼则怎皂燥枣责怎造皂燥灶葬则赠葬泽责藻则早蚤造造燥泽蚤泽援悦澡藻泽贼袁圆园园圆袁员圆员渊远冤院员怨愿愿原员怨怨怨援咱远园暂摇杂怎则葬憎藻藻则葬晕袁匀葬蚤灶藻泽允袁酝糟悦葬则贼粤袁藻贼葬造援郧藻灶藻贼蚤糟凿藻贼藻则皂蚤灶葬灶贼泽 皂燥凿怎造葬贼藻泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥责则藻早灶葬灶糟赠鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿贼怎皂燥怎则蚤早藻灶藻泽蚤泽蚤灶葬则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼造蚤灶藻燥枣酝蚤灶皂蚤糟藻咱允暂援匀怎皂葬灶酝燥造郧藻灶藻贼蚤糟泽袁圆园园远袁员缘院猿源圆怨原猿源猿缘援 咱远员暂摇栽澡葬蚤泽扎允袁栽泽葬蚤澡杂宰袁云藻灶早酝袁藻贼葬造援郧藻灶藻贼蚤糟葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣 葬造遭怎皂蚤灶怎则蚤葬蚤灶糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽葬灶凿皂怎造贼蚤责造藻皂燥怎泽藻蚤灶贼藻则糟则燥泽泽责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽咱允暂援粤皂允孕澡赠泽蚤燥造砸藻灶葬造孕澡赠泽蚤燥造袁圆园员圆袁猿园猿渊苑冤院云怨苑圆原怨愿员援咱远圆暂摇栽澡则藻葬凿早蚤造造阅宰袁匀怎灶贼运宰袁宰蚤造造蚤葬皂泽砸宰援郧藻灶藻贼蚤糟凿蚤泽泽藻糟贼蚤燥灶燥枣糟燥皂责造藻曾葬灶凿择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻贼则葬蚤贼泽院枣则燥皂枣葬灶贼葬泽赠贼燥则藻葬造蚤贼赠增蚤葬葬糟燥皂皂怎灶蚤贼赠藻枣枣燥则贼咱允暂援酝葬皂皂郧藻灶燥皂藻圆园园圆袁员远院猿源源原猿缘缘援咱远猿暂摇灾葬造凿葬则宰袁云造蚤灶贼允袁酝燥贼贼砸援杂蚤皂怎造葬贼蚤灶早贼澡藻糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽院责燥憎藻则燥枣择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻贼则葬蚤贼造燥糟蚤凿藻贼藻糟贼蚤燥灶葬灶凿皂葬责责蚤灶早则藻泽燥造怎贼蚤燥灶蚤灶造葬则早藻泽藻贼泽燥枣则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼蚤灶遭则藻凿泽贼则葬蚤灶泽燥枣皂蚤糟藻咱允暂援郧藻灶藻贼蚤糟泽袁圆园园远袁员苑圆渊猿冤院员苑愿猿原员苑怨苑援咱远源暂摇灾葬灶凿藻则孕燥造造栽袁韵责葬造杂酝援匀燥泽贼鄄责葬贼澡燥早藻灶蚤灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶泽蚤灶泽藻责泽蚤泽咱允暂援蕴葬灶糟藻贼陨灶枣藻糟贼阅蚤泽袁圆园园愿袁愿渊员冤院猿圆原源猿援咱远缘暂摇灾藻则藻凿运袁阅怎则则葬灶贼悦袁酝燥贼贼砸袁藻贼葬造援杂怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥运造藻遭泽蚤藻造造葬责灶藻怎皂燥灶葬蚤藻蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶蚤灶糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽皂蚤糟藻蚤泽葬糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼糟燥灶贼则燥造造藻凿遭赠葬贼造藻葬泽贼贼澡则藻藻造燥糟蚤葬糟贼蚤灶早葬贼凿蚤枣枣藻则藻灶贼贼蚤皂藻责燥蚤灶贼泽咱允暂援月酝悦郧藻灶燥皂蚤糟泽袁圆园员源袁员缘院愿远缘援 咱远远暂摇宰藻蚤造藻则悦粤袁阅则怎皂皂酝蕴援郧藻灶藻贼蚤糟蚤灶枣造怎藻灶糟藻泽燥灶糟赠泽贼蚤糟枣蚤遭则燥泽蚤泽 造怎灶早凿蚤泽藻葬泽藻泽藻增藻则蚤贼赠咱允暂援云则燥灶贼孕澡葬则皂葬糟燥造袁圆园员猿袁源院源园援咱远苑暂摇宰蚤糟噪藻则蕴杂袁悦造葬则噪允袁云则葬泽藻则匀陨袁藻贼葬造援栽赠责藻员凿蚤葬遭藻贼藻泽早藻灶藻泽葬灶凿责葬贼澡憎葬赠泽泽澡葬则藻凿遭赠澡怎皂葬灶泽葬灶凿晕韵阅皂蚤糟藻咱允暂援允粤怎贼燥蚤皂皂怎灶袁圆园园缘袁圆缘渊杂怎责责造冤院圆怨原猿猿援 咱远愿暂摇宰蚤造藻灶泽噪赠粤袁郧葬遭藻贼再袁再怎皂燥贼燥匀袁藻贼葬造援栽澡则藻藻鄄凿蚤皂藻灶泽蚤燥灶葬造 择怎葬灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣葬造增藻燥造葬则遭燥灶藻造燥泽泽蚤灶孕燥则责澡赠则燥皂燥灶葬泽早蚤灶早蚤增葬造蚤泽鄄蚤灶枣藻糟贼藻凿皂蚤糟藻怎泽蚤灶早皂蚤糟则燥鄄糟燥皂责怎贼藻凿贼燥皂燥早则葬责澡赠咱允暂援允孕藻则蚤燥凿燥灶贼燥造袁圆园园缘袁苑远渊愿冤院员圆愿圆原员圆愿远援咱远怨暂摇宰蚤造造蚤葬皂泽砸悦援孕藻则蚤燥凿燥灶贼葬造凿蚤泽藻葬泽藻咱允暂援晕耘灶早造允酝藻凿袁员怨怨园袁猿圆圆渊远冤院猿苑猿原猿愿圆援咱苑园暂摇宰蚤造泽燥灶酝援月蚤燥造燥早蚤糟葬造葬糟贼蚤增蚤贼蚤藻泽燥枣造蚤责燥责燥造赠泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻泽枣则燥皂燥则葬造遭葬糟贼藻则蚤葬葬灶凿贼澡藻蚤则则藻造藻增葬灶糟藻贼燥贼澡藻责葬贼澡燥早藻灶藻泽蚤泽燥枣糟澡则燥灶蚤糟责藻则蚤燥凿燥灶贼蚤贼蚤泽咱允暂援杂糟蚤孕则燥早袁员怨怨缘袁苑愿渊孕贼员冤院员怨原猿源援咱苑员暂摇载蚤燥灶早匀袁酝燥则则蚤泽燥灶允袁云藻则则蚤泽酝栽袁藻贼葬造援郧藻灶燥皂蚤糟责则燥枣蚤造蚤灶早燥枣糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽枣燥怎灶凿藻则皂蚤糟藻蚤灶枣藻糟贼藻凿憎蚤贼澡则藻泽责蚤则葬贼燥则赠增蚤则怎泽藻泽则藻增藻葬造泽灶燥增藻造贼则葬灶泽糟则蚤责贼泽葬灶凿蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶鄄则藻造葬贼藻凿泽贼则葬蚤灶鄄泽责藻糟蚤枣蚤糟早藻灶藻葬灶凿蚤泽燥枣燥则皂藻曾责则藻泽泽蚤燥灶咱允暂援郧猿渊月藻贼澡藻泽凿葬冤袁圆园员源袁源渊愿冤院员源圆怨原员源源源援咱苑圆暂摇再葬造糟蚤灶月袁云造蚤灶贼允袁酝燥贼贼砸援哉泽蚤灶早责则燥早藻灶蚤贼燥则泽贼则葬蚤灶蚤灶枣燥则皂葬贼蚤燥灶贼燥蚤凿藻灶贼蚤枣赠择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻贼则葬蚤贼灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻泽蚤灶燥怎贼遭则藻凿皂蚤糟藻咱允暂援郧藻灶藻贼蚤糟泽袁圆园园缘袁员苑员院远苑猿原远愿员援 咱苑猿暂摇再葬灶早匀袁阅蚤灶早再袁匀怎贼糟澡蚤灶泽蕴晕袁藻贼葬造援粤糟怎泽贼燥皂蚤扎藻凿葬灶凿 增藻则泽葬贼蚤造藻澡蚤早澡鄄凿藻灶泽蚤贼赠早藻灶燥贼赠责蚤灶早葬则则葬赠枣燥则贼澡藻皂燥怎泽藻咱允暂援晕葬贼怎则藻酝藻贼澡燥凿泽袁圆园园怨袁远渊怨冤院远远猿原远远远援 咱苑源暂摇在燥皂遭藻糟噪允粤袁阅藻赠燥怎灶早耘运袁月则扎藻扎蚤灶泽噪葬宰允袁藻贼葬造援杂藻造藻糟贼蚤增藻遭则藻藻凿蚤灶早枣燥则蚤灶糟则藻葬泽藻凿澡燥皂藻糟葬早藻责澡赠泽蚤糟葬造葬糟贼蚤增蚤贼赠蚤灶糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽葬灶凿匀泽凿院陨悦砸皂蚤糟藻咱允暂援月藻澡葬增郧藻灶藻贼袁圆园员员袁源员渊源冤院缘苑员原缘愿圆援也修回日期页圆园员远原园苑原园缘

23 圆园员远年愿月第圆远卷摇第愿期 中国比较医学杂志悦匀陨晕耘杂耘允韵哉砸晕粤蕴韵云悦韵酝孕粤砸粤栽陨灾耘酝耘阅陨悦陨晕耘 粤怎早怎泽贼袁圆园员远灾燥造援圆远摇晕燥援愿 藡 蕥 蕥蕥蕥蕥藡专题研究 蕥蕥蕥蕥藡 蕥藡 复杂性状遗传悦悦小鼠在传染病领域的应用及研究进展 许黎黎袁秦摇 川 渊中国医学科学院医学实验动物研究所袁北京协和医学院比较医学中心袁北京摇员园园园圆员冤 摇摇揖摘要铱摇动物模型是传染病防控研究体系中的重要支撑环节袁起到连接实验室基础科研和临床诊疗的桥梁作用遥小鼠是目前最被广泛使用的传染病动物模型袁然而袁免疫系统完整的成熟小鼠很多情况下对某些传染病病原并不易感遥近年来袁开发临床病例表征与人类更接近的协同杂交渊悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽袁悦悦冤小鼠袁又称复杂性状遗传小鼠资源是目前的研究热点和建立疾病动物模型的另一切入口遥本文将对目前使用悦悦小鼠感染传染病病原渊包括病毒尧细菌尧真菌等冤后呈现出表型多样性的研究报道做一综述袁以期为进一步研究悦悦小鼠对不同传染病的易感性袁丰富我国传染病动物模型资源库袁为应对各种重大及新发突发传染病及临床的精细化诊疗提供有价值的参考数据遥并在此基础上袁提出一系列有关悦悦小鼠资源目前亟待解决的关键科学技术问题袁同时对未来在传染病领域的应用作一展望袁以作抛砖引玉之用遥揖关键词铱摇复杂性状遗传小鼠曰传染病曰易感性曰动物模型揖中图分类号铱砸鄄猿猿圆摇摇揖文献标识码铱粤摇摇揖文章编号铱员远苑员鄄苑愿缘远渊圆园员远冤园愿鄄园园圆园鄄园缘凿燥蚤院员园郾猿怨远怨援躁援蚤泽泽灶援员远苑员原苑愿缘远郾圆园员远郾园愿郾园园圆 粤责责造蚤糟葬贼蚤燥灶葬灶凿砸藻泽藻葬则糟澡孕则燥早则藻泽泽燥枣悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂蚤糟藻蚤灶陨灶枣藻糟贼蚤燥怎泽阅蚤泽藻葬泽藻粤则藻葬 载哉蕴蚤鄄造蚤袁匝陨晕悦澡怎葬灶渊陨灶泽贼蚤贼怎贼藻燥枣蕴葬遭燥则葬贼燥则赠粤灶蚤皂葬造杂糟蚤藻灶糟藻袁悦澡蚤灶藻泽藻粤糟葬凿藻皂赠燥枣酝藻凿蚤糟葬造杂糟蚤藻灶糟藻泽渊悦粤酝杂冤驭悦燥皂责葬则葬贼蚤增藻酝藻凿蚤糟蚤灶藻悦藻灶贼则藻袁孕藻噪蚤灶早哉灶蚤燥灶酝藻凿蚤糟葬造悦燥造造葬早藻渊孕哉酝悦冤袁月藻蚤躁蚤灶早员园园园圆员袁悦澡蚤灶葬冤 摇摇揖粤遭泽贼则葬糟贼铱摇粤灶蚤皂葬造皂燥凿藻造责造葬赠泽葬灶蚤皂责燥则贼葬灶贼则燥造藻蚤灶责则藻增藻灶贼蚤燥灶葬灶凿糟燥灶贼则燥造燥枣蚤灶枣藻糟贼蚤燥怎泽凿蚤泽藻葬泽藻袁憎澡蚤糟澡糟燥怎造凿造蚤灶噪遭葬泽蚤糟则藻泽藻葬则糟澡蚤灶造葬遭燥则葬贼燥则赠憎蚤贼澡糟造蚤灶蚤糟葬造凿蚤葬早灶燥泽蚤泽葬灶凿贼则藻葬贼皂藻灶贼枣燥则澡怎皂葬灶责葬贼蚤藻灶贼泽援酝燥怎泽藻蚤泽贼澡藻皂燥泽贼憎蚤凿藻造赠怎泽藻凿葬灶蚤皂葬造皂燥凿藻造燥枣蚤灶枣藻糟贼蚤燥怎泽凿蚤泽藻葬泽藻袁澡燥憎藻增藻则袁葬凿怎造贼蚤皂皂怎灶燥糟燥皂责藻贼藻灶贼皂蚤糟藻葬则藻则藻泽蚤泽贼葬灶贼贼燥泽燥皂藻责葬贼澡燥早藻灶泽援栽澡藻澡蚤早澡造赠早藻灶藻贼蚤糟葬造造赠凿蚤增藻则泽藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽渊悦悦冤皂蚤糟藻糟燥怎造凿则藻糟葬责蚤贼怎造葬贼藻皂葬灶赠燥枣贼澡藻早藻灶藻贼蚤糟糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽燥枣葬灶燥怎贼遭则藻凿责燥责怎造葬贼蚤燥灶袁泽怎糟澡葬泽澡怎皂葬灶泽援月葬泽藻凿燥灶贼澡蚤泽袁贼澡蚤泽则藻增蚤藻憎憎蚤造造枣燥糟怎泽燥灶贼澡藻葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶葬灶凿则藻泽藻葬则糟澡责则燥早则藻泽泽燥枣悦悦皂蚤糟藻蚤灶蚤灶枣藻糟贼蚤燥怎泽凿蚤泽藻葬泽藻渊蚤灶糟造怎凿蚤灶早增蚤则怎泽藻泽袁遭葬糟贼藻则蚤葬袁枣怎灶早蚤藻贼糟援冤袁憎澡蚤糟澡糟燥怎造凿责则燥增蚤凿藻怎泽藻枣怎造则藻枣藻则藻灶糟藻凿葬贼葬枣燥则藻曾责葬灶泽蚤燥灶燥枣葬灶蚤皂葬造皂燥凿藻造则藻泽燥怎则糟藻遭葬灶噪袁葬灶凿蚤皂责造藻皂藻灶贼燥枣责则藻糟蚤泽蚤燥灶皂藻凿蚤糟蚤灶藻燥枣皂葬躁燥则葬灶凿灶藻憎藻皂藻则早蚤灶早蚤灶枣藻糟贼蚤燥怎泽凿蚤泽藻葬泽藻泽援宰藻澡燥责藻贼澡蚤泽则藻增蚤藻憎糟燥怎造凿泽藻则增藻葬泽葬皂燥凿藻泽贼泽责怎则贼燥蚤灶凿怎糟藻燥贼澡藻则则藻泽藻葬则糟澡藻则泽贼燥糟燥皂藻枣燥则憎葬则凿憎蚤贼澡贼澡藻蚤则增葬造怎葬遭造藻糟燥灶贼则蚤遭怎贼蚤燥灶泽援揖运藻赠憎燥则凿泽铱摇悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂蚤糟藻曰陨灶枣藻糟贼蚤燥怎泽凿蚤泽藻葬泽藻曰杂怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠曰粤灶蚤皂葬造皂燥凿藻造 摇摇人类社会的发展历史也是不断同各种疾病袁尤其是传染病渊陨灶枣藻糟贼蚤燥怎泽凿蚤泽藻葬泽藻冤进行斗争的历史遥 咱基金项目暂十二五科技重大专项渊圆园员圆在载员园园园源缘园员鄄园园源冤曰国家自然科学基金渊猿员猿苑园圆园猿冤曰北京市自然科学基金渊苑员源圆员园远冤袁协和科技新星培养项目遥咱作者简介暂许黎黎袁副教授袁硕士生导师遥耘鄄皂葬蚤造院曾怎造造岳糟灶蚤造葬泽援燥则早遥咱通讯作者暂秦川袁教授袁博士生导师遥耘鄄皂葬蚤造院择蚤灶糟澡怎葬灶岳糟灶蚤造葬泽援燥则早遥

24 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 圆员 目前袁传染病在各类疾病发病率的排行榜中高居榜首袁而全球每年死于各类传染病的人数占总死亡人数的三分之一遥随着新发传染病的不断出现和原来流行病病原体的不断变异并产生耐药性等问题袁再加上全球的城市化进程加快尧交通日益发达尧及人口老龄化等因素又为传染病的流行创造了条件袁咱员暂其结果导致传染病的流行正在全球复活遥据统计袁员怨苑猿年以来袁仅新发现的传染病就达几十种袁且仍在不断增加遥这些新发传染病的出现在严重威胁人类的健康的同时袁还影响到社会稳定尧经济发展和国家安全遥当传染病疫情爆发时袁应急防控的主要任务一般包括院确定病原尧流行病学调查尧易感动物筛查尧探索临床救治方案尧研制疫苗尧研发标准化检测试剂等袁这其中病原的诊断和检测尧监测预警和防治咱圆暂策略评价研究等都依赖于动物模型的建立遥合适的动物模型可为传染病的病原体溯源尧国家卫生防控政策制定尧传染病的民众个人防护提供实验依据和生物安全保障曰为各种临床救治策略的科学性验证和推广提供动物模型支撑曰为国家的药物和疫苗储备提供科学性的动物实验基础曰为拓展现有药物的新功能袁增加新适应症袁缩短药物研发和应用周期袁及时有效的为对抗疫情提供药物做出保障遥理想的传染病动物模型袁应能全部或基本上模拟人类疾病的临床表现尧疾病过程尧病理生理学变化尧免疫学反应等疾病特征遥小鼠由于体积小袁饲养管理方便袁易于控制袁生产繁殖快袁有明确的质量控制标准袁是目前最被广泛使用的实验动物袁已拥有大量的近交系尧突变系和封闭群袁包括人们熟知的月粤蕴月辕糟小鼠尧悦缘苑月蕴辕远小鼠尧阅月粤小鼠尧陨悦砸小鼠等袁也包括多种自发突变疾病模型品系遥近交系动物由于高度的基因纯合和遗传的均质性袁在相同的环境因素作用下袁表现型是均一的袁对各种刺激的反应是一致的袁具有良好的重复性遥然而袁免疫系统完整的成熟小鼠很多情况下对某些传染病病原并不易感袁推测可能是由于其强大咱猿暂的先天免疫系统袁尤其是陨云晕鄄玉型反应所导致遥通过将病原在小鼠体内连续传代获得小鼠适应株袁是建立该疾病小鼠感染模型的途径之一遥但感染病原适应株后的小鼠很多情况下与人类患者在临床表征尧组织病理等方面仍表现出显著性差异袁一些非常重要的临床感染现象均无法体现遥近年来袁由于小鼠遗传工程技术的迅猛发展袁开发临床病例 表征与人类更接近的协同杂交渊悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽袁悦悦冤小鼠袁又称复杂性状遗传小鼠资源是目前的研究热点和建立疾病动物模型的另一切入口遥悦悦小鼠包括数百种基因型不同的小鼠系袁能体现不同小鼠亚种的遗传学变异袁其单核苷酸多态性是传统实验室小鼠的四倍袁因此其感染某一病原后袁可以更好地模拟人类患者的不同病理过程袁为研究个体间基因差异和疾病易感性尧靶向药物疗效提供动物模型资源袁并为野精准医疗计划冶的实施奠定研究咱源暂基础遥有基于此袁目前越来越多的研究团队开始利用悦悦小鼠资源来填补现有某些病原体自然感染小鼠模型的空白袁或者针对已经建立了小鼠模型的一些病原袁扩展丰富现有小鼠模型资源袁更好的模拟人类患者临床病理表征的多样性遥本文将对目前使用悦悦小鼠感染传染病病原渊包括病毒尧细菌尧真菌等冤后呈现出表型多样性的研究报道做一综述袁以期为进一步研究悦悦小鼠对不同传染病的易感性袁丰富我国传染病动物模型资源库袁为应对将来可能出现的新发突发传染病提供有价值的前期参考遥 员摇 悦悦小鼠品系的构建及基因型的多态性 悦悦小鼠包括数百种基因型不同的小鼠系袁它们来自于八个原始种系院五个实验室品种渊悦缘苑月蕴辕远允袁粤辕允袁员圆怨杂员辕杂增陨皂允袁晕韵阅辕杂澡蚤蕴贼允袁晕在韵辕匀员蕴贼允冤和三个源自野生小鼠的近交系渊悦粤杂栽辕耘蚤允袁孕宰运辕孕澡允袁咱缘袁远暂宰杂月辕耘蚤允冤遥砸燥遭藻则贼等证实这八种品系小鼠的多样性等位基因可覆盖小鼠全基因组怨园豫的区咱苑暂域袁品系间总共存在猿远酝的单核苷酸多态性咱愿暂渊杂晕孕泽冤袁这也是选择这几种品系作为野枣燥怎灶凿藻则冶的原因所在遥八种原始品系小鼠作为郧园代袁首先互相交配形成缘远种可能的郧员代杂交组合袁郧员的后代再分别进行交配从而获得源种郧圆代小鼠袁郧圆伊郧圆可获得首批愿种子代杂交小鼠袁通过对郧圆院云员代进行数代的近交袁大概在郧圆院云圆圆代时获得充分近交的子代袁最终繁育形成的独立悦悦小鼠品系分别具有八咱怨暂种原始品系小鼠独一无二的基因组重组模式遥这种育种方式称为野漏斗型育种冶渊遭则藻藻凿蚤灶早枣怎灶灶藻造冤袁在系统化的育种设计中袁每个位点上的每一个原始种系的等位基因频率理论上为园郾员圆缘渊员辕愿冤袁但其通常出现在常染色体位点上袁未必会在线粒体基因组和性染色体上实现袁因此在设计育种漏

25 圆圆中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 斗组合时袁要尽量选择使杂交重组平衡分布于载袁咱缘暂再袁及常染色体上的育种方式遥 圆摇 悦悦小鼠感染病原体后的表型多样性 圆郾员摇悦悦小鼠感染病毒后的表型多样性圆圆郾员郾员摇埃博拉渊耘遭燥造葬冤病毒院免疫系统完整的成熟小鼠渊包括常见近交系和封闭群冤不能感染埃博拉病毒遥砸葬泽皂怎泽泽藻灶等的一项在源苑个悦悦小鼠种系中测试埃博拉引发的宿主应答的研究证实病毒感染咱员园暂对不同小鼠种系造成的影响并不相同遥这项刊登在圆园员源年员员月圆员日叶科学曳杂志上的最新研究为揭示埃博拉易感性背后的遗传学差异奠定了基础遥当源苑个悦悦小鼠系被感染埃博拉病毒的小鼠适应株时袁所有小鼠在感染初期都出现了体重减轻的现象袁员怨豫的小鼠系能抵抗病毒并在两周内恢复体重袁员员豫的小鼠系对病毒有部分抗性袁苑园豫的小鼠系感染后的病死率超过缘园豫遥不同品系表现出的症状也有较大差异袁有的小鼠只出现肝脏炎症袁有的小鼠还表现出凝血障碍等埃博拉病毒感染的标志性症状袁这些小鼠很好的模拟了人类患者的不同病理过程遥研究人员进一步分析了对埃博拉病毒最易感和最不易感的两种悦悦小鼠品系袁易感性高的小鼠感染后会出现凝血缺陷尧内出血尧脾脏增大和肝脏严重损伤袁感染后缘或远凿死亡遥对埃博拉病毒不易感的小鼠感染后缘凿体重下降员缘豫袁但并无其它症状袁员源凿后体重完全恢复至感染前遥研究显示袁在最易感和最不易感的两种悦悦小鼠的肝和脾中袁病毒的砸晕粤拷贝数并无显著性差异遥但易感小鼠组织中病毒滴度水平是不易感小鼠的十倍遥研究人员还比较了两种悦悦小鼠的基因表达模式袁内皮细胞酪氨酸激酶基因栽蚤藻员和栽藻噪的转录水平有显著差异袁而这两种酶与凝血功能有关遥栽蚤藻员等位基因在愿个悦悦原始品系中变化较大袁极有可能就是造成不同悦悦小鼠品系症状差异的主要原因遥圆郾员郾圆摇流感病毒渊陨灶枣造怎藻灶扎葬增蚤则怎泽冤院云藻则则蚤泽等使用匀员晕员亚型流感病毒的鼠肺适应株孕砸愿感染愿种原始悦悦小鼠品系渊粤辕允渊粤允冤袁悦缘苑月蕴辕远允渊悦缘苑月蕴远允冤袁员圆怨杂员辕杂增陨皂允渊员圆怨杂员冤袁晕韵阅辕杂澡蚤蕴贼允渊晕韵阅冤袁晕在韵辕匀陨蕴贼允渊晕在韵冤袁悦粤杂栽辕耘蚤允渊悦粤杂栽冤袁孕宰运辕孕澡允渊孕宰运冤袁以及宰杂月辕耘蚤允渊宰杂月冤冤袁证实感染后第源天袁愿种小鼠在体重下降率尧肺组织病毒滴度尧感染引起的炎症反应尧及病理改变等方面均呈现出较大原怨的差异性渊责值范围院园郾员缘耀员郾猿苑伊员园冤遥小鼠的 体重下降率介于园郾苑愿豫渊晕在韵辕匀陨蕴贼允冤耀员远郾园怨豫渊悦缘苑月蕴辕远允冤袁肺组织病毒滴度介于员园员郾园远渊晕在韵辕匀陨蕴贼允冤耀员园缘郾苑缘渊员圆怨杂员辕杂增陨皂允冤袁呼吸道炎症评分介于园郾猿猿渊晕在韵辕匀陨蕴贼允冤耀圆郾远苑渊员圆怨杂员辕杂增陨皂允冤袁血管炎症评分介于园郾猿猿渊晕在韵辕匀陨蕴贼允冤耀员郾远苑渊员圆怨杂员辕杂增陨皂允冤袁肺泡炎症评分介于园渊晕在韵辕匀陨蕴贼允冤耀员郾远苑渊员圆怨杂员辕杂增陨皂允和悦粤杂栽辕耘蚤允冤咱员员暂遥载蚤燥灶早等的重复咱员圆暂实验也得到了类似的结论遥通过进行数量性状基因座定位渊择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻贼则葬蚤贼造燥糟蚤渊匝栽蕴冤皂葬责责蚤灶早冤分析袁研究者鉴定了宿主动物的遗传基因多态性渊早藻灶藻贼蚤糟责燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂泽冤袁来阐明引起疾病不同表型的最终原因遥通过利用全基因组测序数据袁一个位于抗流感明星基因酝曾员内的关键宿主反应匝栽蕴渊匀则陨猿和匀则陨源冤被证实是导致不同品系小鼠感染后呈现差异化表型的最主要等咱员员袁员猿袁员源暂位基因遥蕴藻蚤泽贼等则使用匀猿晕圆亚型流感病毒来感染愿种原始悦悦小鼠品系袁通过观察小鼠感染后的死亡率尧体重下降率尧检测肺组织病毒滴度等袁证实愿种小鼠对匀猿晕圆病毒的易感性具有显著性差异袁其中粤辕允袁悦粤杂栽辕耘蚤允袁宰杂月辕耘蚤允三种品系表现为高度易感袁悦缘苑月蕴辕远允袁员圆怨杂员辕杂增陨皂允袁晕韵阅辕杂澡蚤蕴贼允中度易感袁晕在韵辕匀陨蕴贼允和孕宰运辕孕澡允则最不易感遥研究者还发现悦粤杂栽辕耘蚤允品系的小鼠感染后呈现的表型与其它品系具有较大差异袁尽管肺组织能检测到高滴度的病毒袁但并未出现粒细胞浸润和巨噬细胞增多的现象遥肺组织的病理检测和转录组分析结果证实悦粤杂栽辕耘蚤允品系的小鼠感染后出现了异常的白细胞招募渊造藻怎噪燥糟赠贼藻则藻糟则怎蚤贼皂藻灶贼冤反应袁较好的模拟了人类患者的白细胞黏附缺陷现象袁进一步扩展了现有咱员缘暂流感动物模型的资源库遥圆郾员郾猿摇杂粤砸杂冠状病毒渊杂粤砸杂鄄悦燥灾冤院载蚤燥灶早等使用了与云藻则则蚤泽等类似的做法袁将感染病原体由流感病毒替换成杂粤砸杂病毒袁用杂粤砸杂鄄悦燥灾的鼠肺适应株感染愿种原始悦悦小鼠品系袁证实感染后第源天袁员圆怨杂员辕杂增陨皂允和悦粤杂栽辕耘蚤允两种悦悦品系的肺组织携带的病毒砸晕粤拷贝数较晕在韵辕匀陨蕴贼允和晕韵阅辕杂澡蚤蕴贼允品系小鼠具有显著性差异渊孕约园郾园缘冤袁愿种品系小鼠感染后的体重下降率也呈现出多样性袁感染后第源天时袁晕韵阅及粤允小鼠已恢复至感染前体重袁晕在韵品系体重仅下降缘豫袁而悦粤杂栽和孕宰运小鼠体重下降接近圆园豫袁剩余猿种品系小鼠体重下降员园豫咱员圆暂左右遥

26 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 圆猿 郧则葬造蚤灶泽噪蚤等进一步通过遗传图谱揭示导致杂粤砸杂鄄悦燥灾感染不同品系悦悦小鼠后呈现多样化表型的多个基因座袁通过将表型和基因型数据进行集成汇总袁同时结合基因敲除小鼠动物感染实验袁一种耘猿泛素连接酶基因栽则蚤皂缘缘袁被证实在维持肌纤维尧血管套及相关炎症反应的形成等方面具有至关咱员远暂重要的作用遥圆郾员郾源摇西尼罗渊宰藻泽贼晕蚤造藻冤病毒院通过悦缘苑月蕴辕远允小鼠感染模型袁西尼罗病毒感染后的先天和获得性免疫特征已得到较充分的研究袁但该小鼠模型在临床症状尧免疫反应多样性等方面与临床患者仍存在较大差异遥郧则葬澡葬皂等通过使用缘种云员代的杂交悦悦小鼠品系袁证实它们感染西尼罗病毒后袁在生存率尧临床症状表现尧组织携带的病毒滴度尧以及外周组织和中枢神经系统所激发的先天和获得性免疫等咱员苑暂方面均呈现出较大的差异遥通过鉴定不同品系悦悦小鼠的韵泽葬员遭等位基因袁证实了前人关于韵泽葬员遭是决定西尼罗病毒宿主易感性的关键基因的结论遥同时袁他们还发现即使不同品系的悦悦小鼠的韵泽葬员遭基因状态完全一致袁其感染西尼罗病毒后所呈现出的表型也具有较大的差异性袁这在很大程度上弥补了传统悦缘苑月蕴辕远允小鼠感染模型的单一性和局限性袁为深入研究西尼罗病毒的感染和免疫机制提供了具有遗传多样性的小鼠模型遥圆郾圆摇悦悦小鼠感染细菌后的表型多样性圆郾圆郾员摇肺炎杆菌渊运造藻遭泽蚤藻造造葬责灶藻怎皂燥灶蚤葬藻冤院灾藻则藻凿等通过对四种近交系小鼠渊月粤蕴月辕悦允袁阅月粤辕圆允袁悦猿匀辕匀藻允和悦缘苑月蕴辕远允冤和苑猿种品系的悦悦小鼠腹腔内接种克雷伯氏肺炎杆菌袁结果证实对于近交系而言袁尽管所有小鼠感染后全部死亡袁但不同品系的平均存活天数存在较大差异渊孕约园郾园缘冤遥月粤蕴月辕悦允小鼠最易感袁平均存活天数仅圆凿袁与其它三种近交系小鼠存在显著性差异遥阅月粤辕圆允和悦猿匀辕匀藻允品系最不易感袁分别存活源和猿郾愿凿遥对于苑猿种悦悦小鼠而言袁感染后的存活率和平均存活天数存在更加显著的差异渊孕约园郾园园园员冤袁存活率最高者可达源园豫袁但大部分品系仍员园园豫死亡曰平均存活天数最短者咱员愿暂仅员凿袁最长者达员圆凿遥圆郾圆郾圆摇绿脓杆菌渊孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽葬藻则怎早蚤灶燥泽葬冤院蕴燥则藻等使用员苑个悦悦品系和粤辕允小鼠进行绿脓杆菌的感染咱员怨暂性实验袁粤辕允小鼠感染苑凿后死亡率为猿园豫袁但悦悦小鼠的死亡率表现出极大的差异袁其中有完全不易感的品系袁感染苑凿后员园园豫存活袁也有品系在感染员郾缘 凿时即员园园豫死亡遥体重方面袁不同的悦悦品系感染后在体重下降方面也呈现出较大的差异性袁有的品系感染猿天内体重减轻圆猿豫袁有的品系感染缘凿后体重即完全恢复袁而粤辕允小鼠感染猿凿时体重减轻员远豫袁且在感染苑凿时并未完全恢复至感染前水平遥本研究证实了宿主遗传背景的差异是导致对绿脓杆菌的易感性呈现多样化的主要原因袁而非宿主个体的体重尧性别尧年龄等因素遥圆郾猿摇悦悦小鼠感染真菌后的表型多样性阅怎则则葬灶贼等鉴定了源种近交系小鼠渊月粤蕴月辕糟允袁阅月粤辕圆允袁悦猿匀辕匀藻允袁悦缘苑月蕴辕远允冤和远远种悦悦小鼠品系对烟曲霉菌渊粤泽责藻则早蚤造造怎泽枣怎皂蚤早葬贼怎泽冤粤枣圆怨猿的易感咱圆园暂性差异袁结果证实月粤蕴月辕糟允小鼠对其高度不易感袁感染后平均存活天数为圆猿郾圆凿曰阅月粤辕圆允和悦猿匀辕匀藻允小鼠的易感性较高袁平均存活天数分别为缘郾愿凿和苑郾园凿曰悦缘苑月蕴辕远允小鼠感染后的平均存活天数为员圆郾苑凿遥四种近交系小鼠感染后的体重下降和体温升高程度与存活天数呈反比遥对于悦悦小鼠而言袁本研究中所有远远种品系的悦悦小鼠感染后的平均存活时间均优于四种近交系袁其中员苑种品系对烟曲霉菌粤枣圆怨猿完全不易感袁至圆愿凿观察期结束员园园豫存活曰员源种悦悦品系存活源耀员园凿袁圆员种悦悦品系存活员园耀圆园凿袁员源种悦悦品系存活圆园耀圆苑凿遥 猿摇 目前待解决的关键问题及未来研究展望 自悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽项目启动至今已过去十年袁第一代的愿种原始近交品系已应用于包括传染病在内的多项研究中遥这些具有复杂性状和遗传多样性的小鼠资源为研究者们提供了一个前所未有的机会袁通过利用系统遗传学的研究手段袁对大规模不同遗传背景的小鼠品系在群体层面对各种生理和病理表型进行的全面分析袁揭示各种表型与潜在的遗传变异尧基因之间尧以及基因与环境之间的相互作用关系袁为人类疾病的研究提供技术和理论支持遥综观悦悦小鼠在传染病方面的报道袁绝大多数的研究仅使用愿种原始近交小鼠品系袁得到的多样化表型仍有限袁为了更好的模拟人类患者感染后呈现的病理表征多样化袁目前亟需繁殖培育出更多的悦悦小鼠品系袁经过圆园多代不同品系之间的杂交袁最终获得包含愿个亲本不同染色体组合的近圆园园个独立品系袁并进行稳定的传代保种遥另一点目前待解决的关键问题袁是匝栽蕴分辨率

27 圆源中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 尚未达到基因水平遥鉴于关联作图可以得到高质量的野生小鼠基因数据袁因此可通过将悦悦小鼠进行远系杂交袁得到高分辨率的遗传图谱袁以弥补大咱圆员暂量的可重复基因型带来的缺陷袁为更加精确的定位传染病易感基因尧深入研究传染病致病机制奠定基础遥最后袁对于传染病研究领域而言袁目前仅有极少数病原体被用来进行悦悦小鼠多样化易感性的测试袁研究者应充分利用已有病原体尧动物和技术资源袁观察更多的病原体袁包括现在正在世界范围内流行的寨卡渊在蚤噪葬冤病毒尧中东呼吸综合征冠状病毒渊酝耘砸杂鄄悦燥灾冤等袁感染多品系悦悦小鼠后呈现出的表型多样性袁为目前迫在眉睫的疫情防控尧精细化的临床救治方案的确定提供及时而必要的临床前指导数据遥在进行层出不穷的新发突发传染病疫情防控的同时袁研究者还应针对一些传统的传染病袁如流感尧结核病尧病毒性肝炎等袁利用悦悦小鼠资源袁进一步扩展现有小鼠模型的范围袁分别建立可模拟人类患者不同临床病理表征的多品系小鼠模型资源库袁同时完成与人临床症状的比较医学比对袁总结每种悦悦品系感染后的关键临床特征袁建立相应标准袁使相关药物和疫苗的评价实验更有针对性袁更接近不同的临床表现袁在疫情再次爆发时搭建新药研发的绿色尧高效通道遥 参考文献院 咱员暂摇 在憎蚤扎憎葬蚤砸援陨灶枣藻糟贼蚤燥怎泽凿蚤泽藻葬泽藻泽怎则增藻蚤造造葬灶糟藻怎责凿葬贼藻咱允暂援 蕴葬灶糟藻贼 陨灶枣藻糟贼阅蚤泽袁圆园员远袁员远渊源冤院源员缘援 咱圆暂摇 杂怎贼贼燥灶栽悦袁杂怎遭遭葬则葬燥运援阅藻增藻造燥责皂藻灶贼燥枣葬灶蚤皂葬造皂燥凿藻造泽葬早葬蚤灶泽贼 藻皂藻则早蚤灶早糟燥则燥灶葬增蚤则怎泽藻泽院云则燥皂杂粤砸杂贼燥酝耘砸杂糟燥则燥灶葬增蚤则怎泽咱允暂援 灾蚤则燥造燥早赠袁圆园员缘袁源苑怨原源愿园院圆源苑原圆缘愿援 咱猿暂摇 月则葬赠酝援栽澡藻则燥造藻燥枣贼澡藻栽赠责藻陨蚤灶贼藻则枣藻则燥灶则藻泽责燥灶泽藻蚤灶贼澡藻 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻燥枣皂蚤糟藻贼燥枣蚤造燥增蚤则怎泽蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶咱允暂援允郧藻灶灾蚤则燥造袁圆园园员袁愿圆 渊远冤院员猿远缘原员猿苑猿援 咱源暂摇 悦澡怎则糟澡蚤造造郧粤袁粤蚤则藻赠阅悦袁粤造造葬赠藻藻匀袁藻贼葬造援栽澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻 悦则燥泽泽袁葬糟燥皂皂怎灶蚤贼赠则藻泽燥怎则糟藻枣燥则贼澡藻早藻灶藻贼蚤糟葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣糟燥皂责造藻曾 贼则葬蚤贼泽咱允暂援晕葬贼郧藻灶藻贼袁圆园园源袁猿远渊员员冤院员员猿猿原员员猿苑援 咱缘暂摇 悦澡藻泽造藻则耘允袁酝蚤造造藻则阅砸袁月则葬灶泽贼藻贼贼藻则蕴砸袁藻贼葬造援栽澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻 悦则燥泽泽葬贼韵葬噪砸蚤凿早藻晕葬贼蚤燥灶葬造蕴葬遭燥则葬贼燥则赠院凿藻增藻造燥责蚤灶早葬责燥憎藻则枣怎造 则藻泽燥怎则糟藻枣燥则泽赠泽贼藻皂泽早藻灶藻贼蚤糟泽咱允暂援酝葬皂皂郧藻灶燥皂藻袁圆园园愿袁员怨渊远冤院 猿愿圆原猿愿怨援 咱远暂摇 栽澡则藻葬凿早蚤造造阅宰袁悦澡怎则糟澡蚤造造郧粤援栽藻灶赠藻葬则泽燥枣贼澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻 悦则燥泽泽咱允暂援郧藻灶藻贼蚤糟泽袁圆园员圆袁员怨园渊圆冤院圆怨员原圆怨源援 咱苑暂摇 砸燥遭藻则贼泽粤袁孕葬则凿燥鄄酝葬灶怎藻造凿藻灾蚤造造藻灶葬云袁宰葬灶早宰袁藻贼葬造援栽澡藻 责燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂葬则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻燥枣皂燥怎泽藻早藻灶藻贼蚤糟则藻泽燥怎则糟藻泽藻造怎糟蚤凿葬贼藻凿 怎泽蚤灶早早藻灶燥皂藻鄄憎蚤凿藻则藻泽藻择怎藻灶糟蚤灶早凿葬贼葬院蚤皂责造蚤糟葬贼蚤燥灶泽枣燥则匝栽蕴 凿蚤泽糟燥增藻则赠葬灶凿泽赠泽贼藻皂泽早藻灶藻贼蚤糟泽咱允暂援酝葬皂皂郧藻灶燥皂藻袁圆园园苑袁员愿渊远原苑冤院源苑猿原源愿员援咱愿暂摇运藻葬灶藻栽酝袁郧燥燥凿泽贼葬凿贼蕴袁阅葬灶藻糟藻噪孕袁藻贼葬造援酝燥怎泽藻早藻灶燥皂蚤糟增葬则蚤葬贼蚤燥灶葬灶凿蚤贼泽藻枣枣藻糟贼燥灶责澡藻灶燥贼赠责藻泽葬灶凿早藻灶藻则藻早怎造葬贼蚤燥灶咱允暂援晕葬贼怎则藻袁圆园员员袁源苑苑渊苑猿远源冤院圆愿怨原圆怨源援咱怨暂摇月则燥皂葬灶运宰援栽澡藻早藻灶燥皂藻泽燥枣则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼蚤灶遭则藻凿造蚤灶藻泽咱允暂援郧藻灶藻贼蚤糟泽袁圆园园缘袁员远怨渊圆冤院员员猿猿原员员源远援咱员园暂摇砸葬泽皂怎泽泽藻灶粤蕴袁韵噪怎皂怎则葬粤袁云藻则则蚤泽酝栽袁藻贼葬造援匀燥泽贼早藻灶藻贼蚤糟凿蚤增藻则泽蚤贼赠藻灶葬遭造藻泽耘遭燥造葬澡藻皂燥则则澡葬早蚤糟枣藻增藻则责葬贼澡燥早藻灶藻泽蚤泽葬灶凿则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻咱允暂援杂糟蚤藻灶糟藻袁圆园员源袁猿源远渊远圆员圆冤院怨愿苑原怨怨员援咱员员暂摇云藻则则蚤泽酝栽袁粤赠造燥则阅蕴袁月燥贼贼燥皂造赠阅袁藻贼葬造援酝燥凿藻造蚤灶早澡燥泽贼早藻灶藻贼蚤糟则藻早怎造葬贼蚤燥灶燥枣蚤灶枣造怎藻灶扎葬责葬贼澡燥早藻灶藻泽蚤泽蚤灶贼澡藻糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽咱允暂援孕蕴燥杂孕葬贼澡燥早袁圆园员猿袁怨渊圆冤院藻员园园猿员怨远援咱员圆暂摇载蚤燥灶早匀袁酝燥则则蚤泽燥灶允袁云藻则则蚤泽酝栽袁藻贼葬造援郧藻灶燥皂蚤糟责则燥枣蚤造蚤灶早燥枣糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽枣燥怎灶凿藻则皂蚤糟藻蚤灶枣藻糟贼藻凿憎蚤贼澡则藻泽责蚤则葬贼燥则赠增蚤则怎泽藻泽则藻增藻葬造泽灶燥增藻造贼则葬灶泽糟则蚤责贼泽葬灶凿蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶鄄则藻造葬贼藻凿泽贼则葬蚤灶鄄泽责藻糟蚤枣蚤糟早藻灶藻葬灶凿蚤泽燥枣燥则皂藻曾责则藻泽泽蚤燥灶咱允暂援郧猿渊月藻贼澡藻泽凿葬冤袁圆园员源袁源渊愿冤院员源圆怨原员源源源援咱员猿暂摇运燥造造皂怎泽匀袁宰蚤造噪耘袁杂糟澡怎早澡葬则贼运援杂赠泽贼藻皂泽遭蚤燥造燥早赠葬灶凿泽赠泽贼藻皂泽早藻灶藻贼蚤糟泽鄄灶燥增藻造蚤灶灶燥增葬贼蚤增藻葬责责则燥葬糟澡藻泽贼燥泽贼怎凿赠澡燥泽贼鄄责葬贼澡燥早藻灶蚤灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶泽凿怎则蚤灶早蚤灶枣造怎藻灶扎葬蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶咱允暂援悦怎则则韵责蚤灶灾蚤则燥造袁圆园员源袁远院源苑原缘源援咱员源暂摇月燥贼贼燥皂造赠阅袁云藻则则蚤泽酝栽袁粤蚤糟澡藻则蕴阅袁藻贼葬造援耘曾责则藻泽泽蚤燥灶择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻贼则葬蚤贼蕴燥糟蚤枣燥则藻曾贼则藻皂藻澡燥泽贼则藻泽责燥灶泽藻贼燥蚤灶枣造怎藻灶扎葬葬蚤灶责则藻鄄糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽皂蚤糟藻咱允暂援郧猿渊月藻贼澡藻泽凿葬冤袁圆园员圆袁圆渊圆冤院圆员猿原圆圆员援咱员缘暂摇蕴藻蚤泽贼杂砸袁孕蚤造扎灶藻则悦袁增葬灶凿藻灶月则葬灶凿允酝袁藻贼葬造援陨灶枣造怎藻灶扎葬匀猿晕圆蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶燥枣贼澡藻糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽枣燥怎灶凿藻则泽贼则葬蚤灶泽则藻增藻葬造泽澡蚤早澡造赠凿蚤增藻则早藻灶贼澡燥泽贼则藻泽责燥灶泽藻泽葬灶凿蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻泽葬怎灶蚤择怎藻责澡藻灶燥贼赠责藻蚤灶悦粤杂栽辕耘蚤允皂蚤糟藻咱允暂援月酝悦郧藻灶燥皂蚤糟泽袁圆园员远袁员苑渊员冤院员源猿援咱员远暂摇郧则葬造蚤灶泽噪蚤蕴耘袁云藻则则蚤泽酝栽袁粤赠造燥则阅蕴袁藻贼葬造援郧藻灶燥皂藻宰蚤凿藻陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣杂粤砸杂鄄悦燥灾杂怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠蕴燥糟蚤哉泽蚤灶早贼澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽咱允暂援孕蕴燥杂郧藻灶藻贼袁圆园员缘袁员员渊员园冤院藻员园园缘缘园源援 咱员苑暂摇郧则葬澡葬皂允月袁栽澡燥皂葬泽杂袁杂憎葬则贼泽允袁藻贼葬造援郧藻灶藻贼蚤糟凿蚤增藻则泽蚤贼赠蚤灶贼澡藻糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽皂燥凿藻造则藻糟葬责蚤贼怎造葬贼藻泽澡怎皂葬灶宰藻泽贼晕蚤造藻增蚤则怎泽凿蚤泽藻葬泽藻燥怎贼糟燥皂藻泽咱允暂援酝月蚤燥袁圆园员缘袁远渊猿冤院藻园园源怨猿原员缘援咱员愿暂摇灾藻则藻凿运袁阅怎则则葬灶贼悦袁酝燥贼贼砸袁藻贼葬造援杂怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥运造藻遭泽蚤藻造造葬责灶藻怎皂燥灶葬蚤藻蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶蚤灶糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽皂蚤糟藻蚤泽葬糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼糟燥灶贼则燥造造藻凿遭赠葬贼造藻葬泽贼贼澡则藻藻造燥糟蚤葬糟贼蚤灶早葬贼凿蚤枣枣藻则藻灶贼贼蚤皂藻责燥蚤灶贼泽咱允暂援月酝悦郧藻灶燥皂蚤糟泽袁圆园员源袁员缘院愿远缘援咱员怨暂摇蕴燥则侉晕陨袁陨则葬择蚤云粤袁月则葬早燥灶扎蚤粤援匀燥泽贼早藻灶藻贼蚤糟凿蚤增藻则泽蚤贼赠蚤灶枣造怎藻灶糟藻泽贼澡藻泽藻增藻则蚤贼赠燥枣孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽葬藻则怎早蚤灶燥泽葬责灶藻怎皂燥灶蚤葬蚤灶贼澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂蚤糟藻咱允暂援月酝悦郧藻灶藻贼袁圆园员缘袁员远院员园远援咱圆园暂摇阅怎则则葬灶贼悦袁栽葬赠藻皂匀袁再葬造糟蚤灶月袁藻贼葬造援悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂蚤糟藻葬灶凿贼澡藻蚤则责燥憎藻则贼燥皂葬责澡燥泽贼泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥粤泽责藻则早蚤造造怎泽枣怎皂蚤早葬贼怎泽蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶咱允暂援郧藻灶燥皂藻砸藻泽袁圆园员员袁圆员渊愿冤院员圆猿怨原员圆源愿援咱圆员暂摇云造蚤灶贼允袁酝燥贼贼砸援粤责责造赠蚤灶早皂燥怎泽藻糟燥皂责造藻曾鄄贼则葬蚤贼则藻泽燥怎则糟藻泽贼燥遭藻澡葬增蚤燥怎则葬造早藻灶藻贼蚤糟泽咱允暂援晕葬贼怎则藻袁圆园园愿袁源缘远渊苑圆圆猿冤院苑圆源原苑圆苑援也修回日期页圆园员远原园苑原园缘

28 圆园员远年愿月第圆远卷摇第愿期 中国比较医学杂志悦匀陨晕耘杂耘允韵哉砸晕粤蕴韵云悦韵酝孕粤砸粤栽陨灾耘酝耘阅陨悦陨晕耘 粤怎早怎泽贼袁圆园员远灾燥造援圆远摇晕燥援愿 藡 蕥 蕥蕥蕥蕥藡专题研究 蕥蕥蕥蕥藡 蕥藡 复杂性状遗传悦悦小鼠要要要肿瘤研究新平台 李克娟袁高摇 苒 渊北京协和医学院比较医学中心袁中国医学科学院医学实验动物研究所袁北京员园园园圆员冤 摇摇揖摘要铱摇癌症是由于机体细胞失去正常调控过度增殖而引发的一系列复杂性状疾病的统称袁其本质上是一种基因疾病遥用于传统肿瘤小鼠模型的重组近交渊砸陨冤品系由于只起源于两个近交祖系袁因此规模小且等位基因多样性较少袁在统计功效上存在局限性遥复杂性状遗传渊悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂蚤糟藻袁悦悦冤小鼠是由来自八个原始种系近交产生的数百种基因型不同的小鼠品系袁能够体现不同小鼠亚种的遗传学变异袁具有高遗传多样性袁大种群规模等重要特征遥它可以模拟人类复杂性状疾病中不同人群对病因或治疗方法个体易感性的差异袁为促进复杂性状疾病易感基因筛查尧基因功能发现等方面的研究提供了一个更好的研究工具与信息平台遥本文就悦悦小鼠在医学应用中的研究现状尧挑战性与局限性尧以及其在肿瘤研究中的应用前景进行综述遥揖关键词铱摇复杂性状遗传小鼠渊悦悦小鼠冤曰遗传多样性曰个体易感性曰肿瘤揖中图分类号铱砸原猿猿摇摇揖文献标识码铱粤摇摇揖文章编号铱员远苑员鄄苑愿缘远渊圆园员远冤园愿鄄园园圆缘鄄园缘凿燥蚤院员园郾猿怨远怨援躁援蚤泽泽灶援员远苑员原苑愿缘远郾圆园员远郾园愿郾园园园 悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂蚤糟藻葬泽葬灶燥增藻造责造葬贼枣燥则皂蚤灶糟葬灶糟藻则则藻泽藻葬则糟澡 蕴陨运藻鄄躁怎葬灶袁郧粤韵砸葬灶渊陨灶泽贼蚤贼怎贼藻燥枣造葬遭燥则葬贼燥则赠葬灶蚤皂葬造泽糟蚤藻灶糟藻泽袁悦粤酝杂驭孕哉酝悦袁月藻蚤躁蚤灶早员园园园圆员袁悦澡蚤灶葬冤 摇摇揖粤遭泽贼则葬糟贼铱摇悦葬灶糟藻则蚤泽葬早藻灶藻则葬造贼藻则皂燥枣葬泽藻则蚤藻泽燥枣糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽燥枣贼澡藻凿蚤泽藻葬泽藻贼则蚤早早藻则藻凿遭赠贼澡藻遭燥凿赠糟藻造造泽造燥泽蚤灶早贼澡藻蚤则灶燥则皂葬造则藻早怎造葬贼蚤燥灶燥枣藻曾糟藻泽泽蚤增藻责则燥造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶袁憎澡蚤糟澡藻泽泽藻灶贼蚤葬造造赠蚤泽葬早藻灶藻贼蚤糟凿蚤泽藻葬泽藻援砸藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼蚤灶遭则藻凿泽贼则葬蚤灶渊砸陨冤皂燥怎泽藻早藻灶藻则葬贼藻凿枣则燥皂燥灶藻责葬蚤则燥枣枣燥怎灶凿藻则泽澡葬泽遭藻藻灶憎蚤凿藻造赠怎泽藻凿蚤灶贼则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造贼怎皂燥则皂燥凿藻造援匀燥憎藻增藻则袁砸陨澡葬泽皂葬灶赠造蚤皂蚤贼葬贼蚤燥灶泽燥灶贼澡藻泽贼葬贼蚤泽贼蚤糟藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠遭藻糟葬怎泽藻燥枣贼澡藻泽皂葬造造泽糟葬造藻葬灶凿造葬糟噪蚤灶早燥枣葬造造藻造藻凿蚤增藻则泽蚤贼赠援栽澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽渊悦悦冤憎葬泽凿藻泽蚤早灶藻凿贼燥早藻灶藻则葬贼藻澡怎灶凿则藻凿泽燥枣则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼蚤灶遭则藻凿造蚤灶藻泽遭赠愿凿蚤增藻则早藻灶贼泽贼则葬蚤灶泽燥枣皂蚤糟藻援悦悦皂蚤糟藻藻皂遭燥凿赠葬贼则藻皂藻灶凿燥怎泽葬皂燥怎灶贼燥枣灶葬贼怎则葬造早藻灶藻贼蚤糟增葬则蚤葬贼蚤燥灶蚤灶凿蚤枣枣藻则藻灶贼泽怎遭鄄泽贼则葬蚤灶泽燥枣皂燥怎泽藻葬灶凿贼澡藻泽蚤灶早造藻灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻责燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂蚤泽枣燥怎则贼蚤皂藻泽燥枣贼澡藻贼则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造藻曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造皂蚤糟藻援栽澡藻澡蚤早澡鄄早藻灶藻贼蚤糟凿蚤增藻则泽蚤贼赠葬灶凿造葬则早藻泽糟葬造藻责燥责怎造葬贼蚤燥灶藻灶葬遭造藻泽悦悦皂蚤糟藻泽蚤皂怎造葬贼藻泽贼澡藻凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽燥枣蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥贼澡藻责葬贼澡燥早藻灶赠燥则贼澡藻贼澡藻则葬责蚤藻泽袁贼澡怎泽责则燥增蚤凿藻泽葬遭藻贼贼藻则则藻泽藻葬则糟澡贼燥燥造葬灶凿蚤灶枣燥则皂葬贼蚤燥灶责造葬贼枣燥则皂枣燥则藻曾责藻凿蚤贼蚤灶早凿蚤泽糟燥增藻则赠燥枣早藻灶藻泽葬灶凿早藻灶藻泽枣怎灶糟贼蚤燥灶蚤灶澡怎皂葬灶糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽凿蚤泽藻葬泽藻泽援栽澡蚤泽则藻增蚤藻憎泽怎皂皂葬则蚤扎藻泽燥怎则糟怎则则藻灶贼噪灶燥憎造藻凿早藻燥枣贼澡蚤泽枣蚤藻造凿袁蚤灶糟造怎凿蚤灶早皂藻贼澡燥凿燥造燥早蚤糟葬泽责藻糟贼泽袁葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶泽袁糟澡葬造造藻灶早藻泽葬灶凿造蚤皂蚤贼葬贼蚤燥灶泽袁葬灶凿怎贼蚤造蚤扎葬贼蚤燥灶枣燥则糟葬灶糟藻则则藻泽藻葬则糟澡援揖运藻赠憎燥则凿泽铱摇悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽曰郧藻灶藻贼蚤糟凿蚤增藻则泽蚤贼赠曰陨灶凿蚤增蚤凿怎葬造泽藻灶泽蚤贼蚤增蚤贼赠曰悦葬灶糟藻则 摇摇癌症是由于多种致癌因素激活原癌基因或渊和冤灭活肿瘤抑制因子袁使细胞发生转化并无限增咱员暂殖的一类基因组疾病的统称遥癌症已成为世界 范围内高发病率和高死亡率的主要原因之一遥根据世界卫生组织渊宰匀韵冤圆园员源年发布的数据显示袁圆园员圆年全世界共新增员源园园万癌症病例并有愿圆园万 咱基金项目暂中国医学科学院基本科研业务费专项资助项目渊阅宰杂圆园员源园圆冤遥咱作者简介暂李克娟渊员怨愿苑原冤袁女袁博士袁研究方向院肿瘤模型构建遥耘鄄皂葬蚤造院造蚤噪藻躁怎葬灶岳糟灶蚤造葬泽援燥则早遥咱通讯作者暂高苒渊员怨愿园原冤袁女袁副研究员袁研究方向院肿瘤模型构建遥耘鄄皂葬蚤造院早葬燥则葬灶圆远岳澡燥贼皂葬蚤造援糟燥皂遥

29 圆远中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 咱圆暂人死亡遥其中袁中国新增猿园苑万癌症患者并造成约圆圆园万人死亡袁分别占全球总量的圆员郾怨豫和咱猿暂圆远郾愿豫遥据杂蚤藻早藻造最新研究报道袁种族对肿瘤的发病率具有非常显著的影响遥在所有癌症种类中袁黑色人均比白色人种拥有更高的癌症发病率和死亡率渊肾癌的死亡率除外冤袁几乎是亚太裔人种的圆倍遥此外袁性别对癌症的发病率也有显著影响袁与女性相比男性的泌尿系统癌症发病率和死亡率均是女性的圆倍左右遥大量流行病学研究与临床观察表明大部分癌症渊约怨园豫耀怨缘豫冤都是由环境因素咱源暂导致的袁其余的缘豫耀员园豫则是由遗传因素导致咱缘暂的遥但是对于相同的致癌风险为什么有些人更加易感仍然是一个谜遥另一方面袁为什么有些肿瘤患者对同一药物表现出更好的敏感性或者对治疗方案表现出更好的治疗效果袁对此临床上也没有给出科学的解释遥例如袁我们知道白血病是一种常见的恶性程度极高的肿瘤袁曾经一度是被认为是一种野无药可救冶的疾病遥随着圆园员圆年第一例白血病患者的治愈袁免疫疗法悦粤砸鄄栽给白血病患者带来了希望袁但是同样是白血病患者袁悦粤砸鄄栽疗法却也不能达到员园园豫的治愈效果袁而白血病临床分型非常复杂袁如何在这些分型中找到针对悦粤砸鄄栽疗法有效的分型对于白血病的治疗是否成功尤为重要遥为此在第员缘届爱丁堡全球小鼠基因峰会上袁美国橡树岭国家实验室渊韵葬噪砸蚤凿早藻晕葬贼蚤燥灶葬造蕴葬遭燥则葬贼燥则赠冤提出了复杂性状遗传渊悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽袁悦悦冤小鼠育种计划袁并建立了复杂性状联盟渊悦燥皂责造藻曾栽则葬蚤贼咱远暂悦燥灶泽燥则贼蚤怎皂袁悦栽悦冤组织袁用于选择培育一种更适用于研究复杂性状或复杂病因疾病的研究工具袁以模咱苑暂拟人群基因多样性进行复杂形状的相关研究遥 员摇 悦悦小鼠 悦悦小鼠的理念背后是为了充分开发砸陨小鼠的潜能袁并将这种潜能发挥到极致遥众所周知袁砸陨小鼠是由两个无关高质近交系进行杂交袁用其云圆代进行全同胞兄妹交配圆园代以上而育成的新近交系袁其近交系数达怨愿郾远豫以上遥砸陨具有双亲近交系特性和重组后新近交品系特性袁大大推动了遗传学袁肿瘤学袁免疫学和行为学等学科的发展遥砸陨小鼠因为其具备来源清楚袁个体间均一性高袁组织相容性高袁重复性好等优点袁到目前为止已成为肿瘤病因学袁肿瘤药理学等研究的理想和经典模型并且被广泛应用遥但是砸陨小鼠由于受到遗传多样性渊早藻灶藻贼蚤糟 增葬则蚤葬遭蚤造蚤贼赠冤与映射能力渊皂葬责责蚤灶早责燥憎藻则冤的局限也存在很多不足遥遗传多样性的不足是因为砸陨小鼠仅由两个亲本品系杂交而来袁并且这些亲本品系往往起源于共同的祖系袁更加限制了遗传多样化遥而映射能力取决于测试过程中可以获取的品系遥常用的基因片段的分辨率通常在圆耀源糟酝渊耀源至愿酝遭冤袁但是传统的砸陨小鼠在后基因组时代不足以提供有效的候选基因进行分析遥第一个问题可以通过使用愿个原始品系袁其中包含来自不同大陆的野生型品系袁来代替原来的圆个亲本品系来解决遥第二个问题则可以通过产生大量的砸陨品系来解决遥悦悦小鼠的概念的提出正好弥补了这些不足袁所选的愿个原始品系使得悦悦小鼠的遗传多样性最大化袁其中包括三种刚刚完成基因组测序的实验用近交系院粤辕允袁悦缘苑月蕴辕远允和员圆怨杂员辕杂增陨皂允袁以及来自日本和新西兰被用作自身免疫与肥胖模型的两个品系晕韵阅辕蕴贼允和晕在韵辕匀蚤蕴贼允袁除此之外袁使用来自小鼠猿个酝怎泽亚种的野生近交系作为补充袁他们分别是来自捷克布拉格的孕宰运辕孕澡允渊酝怎泽援皂怎泽糟怎造怎泽援皂怎泽糟怎造怎泽冤袁来自美国巴尔的摩的宰杂月辕耘蚤允渊酝怎泽援皂怎泽糟怎造怎泽援凿燥皂藻泽贼蚤糟怎泽冤袁以及来自泰国的悦粤杂栽辕耘蚤渊酝怎泽援咱愿袁怨暂皂怎泽糟怎造怎泽援援糟葬泽贼葬灶藻怎泽冤遥他们的遗传物质的多样咱员园暂性可以基本覆盖小鼠全基因组的怨园豫袁且亲缘关系相对较远袁可以保证悦悦品系遗传位点的分咱员员暂散性遥悦悦小鼠的育种过程如图员所示袁八种原始品系作为郧园代袁首先互相交配形成缘远种可能的郧员代杂交组合袁然后袁缘远个郧员品系再分别进行交配得到员远愿园种可能的郧圆代杂交组合袁郧圆代品系再次进行交配可以获得愿浴渊源园猿圆园冤种组合可能的郧猿代杂交小鼠遥通过郧猿院云员代进行数代的同胞近交袁大概在郧猿院云圆园时获得充分近交的子代袁最终繁育形成独立的悦悦小鼠品系遥每个悦悦小鼠品系都将随机获得八个原始品系小鼠所有的遗传变异袁这种独一无二的基因重组模式称为野漏斗型育种冶渊遭则藻藻凿蚤灶早枣怎灶灶藻造冤遥悦悦小鼠在繁殖过程中的控制和最小随机化选择将目前存在于这些自交系中的自然遗传变异进行充分重组袁使得该实验种群的每个重组位点都是独一无二的袁可提供足够的资源来研究单基因咱远袁员猿暂附近的数量性状位点渊匝栽蕴冤遥其结果将是一个具高遗传多样性的大种群规模的独特品系袁为近交系小鼠的表型表达带来巨大的遗传变异咱员源袁员缘暂潜能遥

30 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 圆苑 悦悦小鼠项目最初在杰克逊实验室渊栽澡藻允葬糟噪泽燥灶蕴葬遭燥则葬贼燥则赠冤运作袁而后将郧猿院云员代运至猿个育种机构袁包括美国田纳西州的橡树岭国家实验室渊韵葬噪砸蚤凿早藻晕葬贼蚤燥灶葬造蕴葬遭燥则葬贼燥则赠冤袁后来被迁移到北卡罗来咱苑暂纳大学教堂山分校渊悦悦鄄哉晕悦冤曰肯尼亚内罗毕的国际家畜研究中心渊栽澡藻陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造蕴蚤增藻泽贼燥糟噪砸藻泽藻葬则糟澡陨灶泽贼蚤贼怎贼藻冤袁后来被迁移至以色列的特拉维咱员远暂夫大学渊栽藻造粤增蚤增哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠冤渊悦悦鄄栽粤哉冤曰以及澳大利亚佩斯的西澳医学研究中心辕西澳大学渊宰藻泽贼藻则灶粤怎泽贼则葬造蚤葬陨灶泽贼蚤贼怎贼藻枣燥则酝藻凿蚤糟葬造砸藻泽藻葬则糟澡辕哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠燥枣宰藻泽贼藻则灶粤怎泽贼则葬造蚤葬辕郧藻灶蚤葬凿蕴贼凿援冤渊悦悦鄄咱员圆暂郧晕阅冤遥目前袁在上述猿个机构共育有约圆园园个咱员苑暂悦悦品系遥 圆摇 悦悦小鼠的研究及其医学应用 悦悦种群平衡的等位基因频率袁均匀分布的重组咱员愿原圆园暂位点和表型分布都优于其他实验资源遥经过十几年的发展袁悦悦小鼠已被用于遗传学袁传染病学和免疫学等研究领域并取得了突破性研究进展遥咱圆员暂例如基因定位袁砸葬皂等利用员圆园个悦悦小鼠品系的毛色设计了一个原理循证研究袁不论使用杂晕孕鄄月葬泽藻凿法或者一种基于匝栽蕴定位法袁调节六种毛色表型的四种基因均被成功定位遥悦悦小鼠作为一种新型的动物模型在医学研究中的优势也日益凸显袁目前已经有两个利用悦悦小鼠成功构建疾病模型的咱圆圆暂案例袁一个是溃疡性结肠炎袁另外一个是糖尿病咱圆猿暂视网膜病变遥同时袁对于大规模不同遗传背景的小鼠品系在群体层面对各种生理和病理表型进行全面分析袁可揭示各种表型与潜在的遗传变异尧基因之间袁以及基因与环境之间的相互作用袁为人类复杂性疾病的研究和理解提供更多的证据遥咱圆源暂砸葬泽皂怎泽泽藻灶等利用源苑个悦悦小鼠品系感染埃博拉病毒袁发现员怨豫的小鼠品系能够抗病毒并且能够在两周内恢复体重袁员员豫的小鼠品系对病毒有部分抗性袁苑园豫的小鼠品系感染病毒后病死率超过半数以上遥不同品系的小鼠表现出的症状也有差异袁有的小鼠只出现肝脏炎症袁有的小鼠则表现出凝血障碍等埃博拉病毒感染的的标志性症状遥这些小鼠很好地模拟了人群患病的不同病理过程遥研究人员还比较了最易感和最不易感的两种悦悦小鼠的基因表达模式袁发现内皮细胞酪氨酸激酶基因栽蚤藻造和栽藻噪的转录水平有显著差异袁而这两种酶与凝血功能有关遥研究表明埃博拉感染的严重程度与宿主 的遗传背景有很大关系袁而不能单从病毒方面进行咱圆缘暂咱圆远暂咱圆苑暂解释遥此外袁云藻则则蚤泽袁蕴藻蚤泽贼袁以及载蚤燥灶早等 人分别将匀员晕员亚型流感病毒袁匀猿晕圆亚型流感病毒以及杂粤砸杂流感病毒感染悦悦小鼠的愿个原始品系袁均通过品系间的表型差异揭示了宿主易感背后的咱圆愿暂遗传学机理遥此外袁阅怎则则葬灶贼等在真菌感染实验中使用了源种近交系小鼠渊月粤蕴月辕悦允袁阅月粤辕圆允袁悦猿匀辕匀藻允袁悦缘苑月蕴辕远允冤和远远个悦悦小鼠品系定位了咱圆怨暂烟曲霉菌易感的候选基因遥与此类似袁灾藻则藻凿等 使用上述源种近交系小鼠和苑猿个悦悦小鼠品系通过评价腹腔内接种克雷伯氏肺炎杆菌后的存活时间差异证实了不同悦悦小鼠品系感染细菌后存在表型多样性遥具有高度遗传多样性的悦悦小鼠无疑也为肿瘤这一复杂性状疾病的研究提供了一个绝佳的机会遥咱猿园暂云藻则早怎泽燥灶等首次将悦悦小鼠应用在肿瘤研究上袁他们评价了缘园个悦悦小鼠黑色素瘤的特征袁其中包括色素痣袁色素瘤的发病时间及其多样性袁解剖位置偏好袁色素痣转化为黑色素瘤以及其转移的时间遥研究表明不同悦悦小鼠品系间表现出了广泛的差异渊图圆冤遥此外袁研究还发现袁紫外线辐射暴露加剧了大多数小鼠品系的新生仔色素痣和黑色素瘤的形成袁但是仍有少部分悦悦小鼠品系并未表现出该现象遥这表明悦悦小鼠体内的遗传变异将有助于解释对阳光暴晒渊皮肤癌的主要环境致癌因素冤的个体敏感性遥由于在一个小鼠模型里面悦悦小鼠的遗传变异带来了引人注目的表型多样性袁黑色素瘤相关的内表型对比给我们提供了有关致癌的机制袁例如黑色素瘤发病率是否依赖于预先存在的色素痣细胞的密度遥已有的小鼠模型已被用于研究基因突变在肿瘤发生过程中的功能作用遥悦悦小鼠模型将在下一阶段进一步研究生物变异或者遗传变异如何最大程度地影响肿瘤的形成与发病机制遥 猿摇 悦悦小鼠的局限性 悦悦小鼠相关的报道主要集中在病毒细菌和真菌等感染性疾病的研究中袁为了更好地利用悦悦小鼠来研究人类复杂性状疾病袁需要解决当前存在的某些局限性袁因为近交动物经常会出现健康问题袁生殖能力也会下降袁据报道袁悦悦小鼠在近交传代缘咱猿员暂代后袁有怨园豫的小鼠将不再繁殖袁因此寻求更好地方法做好悦悦小鼠的繁殖与保种工作显得尤为重要遥同时袁利用悦悦小鼠作为动物模型进行研究时袁

31 圆愿中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 来的假阳性结果袁而目前的研究报道很少能够达到这一品系数目的要求袁使得匝栽蕴分辨率达不到基因咱猿圆暂水平遥如何创造更好的实验条件来实现大规模群体实验来弥补这一缺陷袁为更加精准的定位易感基因袁研究复杂性状疾病也是开展悦悦小鼠研究亟待解决的问题之一遥 源摇 悦悦小鼠在肿瘤研究中的应用前景 图员摇悦悦小鼠育种设计方案遥愿个原始品系被定义为郧园咱员圆暂并且它们的基因组构成分别使用愿种颜色来代替 云蚤早援员摇月则藻藻凿蚤灶早泽贼则葬贼藻早赠贼燥早藻灶藻则葬贼藻葬泽蚤灶早造藻遭则藻藻凿蚤灶早野枣怎灶灶藻造援冶栽澡藻藻蚤早澡贼枣燥怎灶凿藻则泽贼则葬蚤灶泽葬则藻凿藻泽蚤早灶葬贼藻凿葬泽郧园葬灶凿贼澡藻蚤则早藻灶燥皂藻泽葬则藻则藻责则藻泽藻灶贼藻凿遭赠凿蚤枣枣藻则藻灶贼糟燥造燥则泽援 需要使用苑园个品系以上才能基本消除不同品系带 悦悦小鼠在肿瘤领域的研究刚刚起步袁目前仅在黑色素瘤的易感性表型差异上面有相关研究报道遥与此同时袁悦悦小鼠作为一种新型研究工具与信息平台袁将越来越受到肿瘤研究者们的关注及应用遥研究者可以利用悦悦小鼠资源进行肿瘤的病因学研究袁用以模拟不同人群对致癌因子的敏感差异袁加上系统遗传学方法对肿瘤易感基因进行筛查曰还可以利用悦悦小鼠模拟评价不同人群对现有抗肿瘤药物的药敏药效以及药理作用袁寻找药物靶向基因曰此外袁悦悦小鼠因其具有丰富的性状差异与遗传多样性袁可以帮助我们理解类似前面所述的为什么不同白血病患者对悦粤砸鄄栽疗法的不同反应的问题袁并且可以帮助我们找到悦粤砸鄄栽疗法的易感表型和易感基因袁类似的袁其他有效疗法也可以更加准确的定位相关表型或者相关基因袁实现精准治疗遥这一切都表明悦悦小鼠将在肿瘤领域掀起一股划时代的具有革命意义的研究风潮袁将为实现精准的分子诊断及精准医疗提供更多的临床前指导数据遥 云蚤早援圆摇 图圆摇 咱猿园暂紫外线照射条件下不同悦悦小鼠品系色素痣及黑色素瘤的数目差异 注院渊粤冤色素痣曰渊月冤黑色素瘤遥 粤增藻则葬早藻灶怎皂遭藻则燥枣灶藻增燥蚤凿责造葬择怎藻泽葬灶凿皂藻造葬灶燥皂葬泽责藻则皂燥怎泽藻枣燥则藻葬糟澡悦悦泽贼则葬蚤灶遭葬糟噪早则燥怎灶凿援晕燥贼藻援渊粤冤灶藻增燥蚤凿责造葬择怎藻泽曰渊月冤皂藻造葬灶燥皂葬泽援

32 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 圆怨 参考文献院 咱员暂摇 郧葬则则葬憎葬赠蕴粤袁灾藻则憎藻蚤躁允袁月葬造造皂葬灶运灾援孕则藻糟蚤泽蚤燥灶燥灶糟燥造燥早赠院葬灶 燥增藻则增蚤藻憎咱允暂援允悦造蚤灶韵灶糟燥造袁圆园员猿袁猿员渊员缘冤院员愿园猿原员愿园缘援 咱圆暂摇 宰燥则造凿匀藻葬造贼澡韵则早葬灶蚤扎葬贼蚤燥灶渊宰匀韵冤援宰燥则造凿悦葬灶糟藻则砸藻责燥则贼圆园员源援 悦澡葬责贼藻则员郾员咱酝暂援陨杂月晕怨圆愿猿圆园源圆怨愿援 咱猿暂摇 杂蚤藻早藻造砸袁酝蚤造造藻则运阅袁允藻皂葬造粤援悦葬灶糟藻则泽贼葬贼蚤泽贼蚤糟泽袁圆园员缘咱允暂援悦粤 悦葬灶糟藻则允悦造蚤灶袁圆园员缘袁远缘袁缘原圆怨援 咱源暂摇 酝葬灶贼燥灶运郧袁粤噪怎泽澡藻增蚤糟澡陨袁运则葬增糟澡藻灶噪燥允援悦葬灶糟藻则皂燥则贼葬造蚤贼赠葬灶凿 皂燥则遭蚤凿蚤贼赠责葬贼贼藻则灶泽蚤灶贼澡藻哉杂责燥责怎造葬贼蚤燥灶院粤灶蚤灶贼藻则凿蚤泽糟蚤责造蚤灶葬则赠 葬责责则燥葬糟澡咱酝暂援杂责则蚤灶早藻则杂糟蚤藻灶糟藻驭月怎泽蚤灶藻泽泽酝藻凿蚤葬援圆园园愿郾愿怨原 员源园援 咱缘暂摇 粤灶葬灶凿孕袁运怎灶灶怎皂葬噪葬则葬粤月袁杂怎灶凿葬则葬皂悦袁藻贼葬造援悦葬灶糟藻则蚤泽葬 责则藻增藻灶贼葬遭造藻凿蚤泽藻葬泽藻贼澡葬贼则藻择怎蚤则藻泽皂葬躁燥则造蚤枣藻泽贼赠造藻糟澡葬灶早藻泽咱允暂援 孕澡葬则皂砸藻泽袁圆园园愿袁圆缘渊怨冤院圆园怨苑原圆员员远援 咱远暂摇 栽澡则藻葬凿早蚤造造阅袁悦澡怎则糟澡蚤造造郧援栽藻灶再藻葬则泽燥枣贼澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽 咱允暂援郧藻灶藻贼蚤糟泽袁圆园员圆袁圆渊圆冤院员缘猿原员缘远援 咱苑暂摇 悦澡藻泽造藻则耘允袁酝蚤造造藻则阅砸袁月则葬灶泽贼藻贼贼藻则蕴砸袁藻贼葬造援栽澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻 悦则燥泽泽葬贼韵葬噪砸蚤凿早藻晕葬贼蚤燥灶葬造蕴葬遭燥则葬贼燥则赠院凿藻增藻造燥责蚤灶早葬责燥憎藻则枣怎造 则藻泽燥怎则糟藻枣燥则泽赠泽贼藻皂泽早藻灶藻贼蚤糟泽咱允暂援酝葬皂皂郧藻灶燥皂藻袁圆园园愿袁员怨 渊远冤院猿愿圆原猿愿怨援 咱愿暂摇 悦澡怎则糟澡蚤造造郧袁粤蚤则藻赠阅袁粤造造葬赠藻藻匀袁藻贼葬造援 栽澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻 悦则燥泽泽袁葬糟燥皂皂怎灶蚤贼赠则藻泽燥怎则糟藻枣燥则贼澡藻早藻灶藻贼蚤糟葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣糟燥皂责造藻曾 贼则葬蚤贼泽咱允暂援晕葬贼郧藻灶藻贼袁圆园园源袁猿远渊员员冤院员员猿猿原员员猿苑援 咱怨暂摇 月则燥皂葬灶运宰援 栽澡藻早藻灶燥皂藻泽燥枣则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼蚤灶遭则藻凿造蚤灶藻泽咱允暂援 郧藻灶藻贼蚤糟泽袁圆园园缘袁员远怨渊圆冤院员员猿猿原员员源远援 咱员园暂摇 砸燥遭藻则贼泽粤袁孕葬则凿燥鄄酝葬灶怎造凿藻鄄灾蚤造造藻灶葬云袁宰葬灶早宰袁藻贼葬造援 栽澡藻 责燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂葬则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻燥枣皂燥怎泽藻早藻灶藻贼蚤糟则藻泽燥怎则糟藻泽藻造怎糟蚤凿葬贼藻凿 怎泽蚤灶早早藻灶燥皂藻鄄憎蚤凿藻则藻泽藻择怎藻灶糟蚤灶早凿葬贼葬院蚤皂责造蚤糟葬贼蚤燥灶泽枣燥则匝栽蕴 凿蚤泽糟燥增藻则赠葬灶凿泽赠泽贼藻皂泽早藻灶藻贼蚤糟泽咱允暂援酝葬皂皂郧藻灶燥皂藻袁圆园园苑袁员愿 渊远原苑冤院源苑猿原源愿员援 咱员员暂摇 再葬灶早匀袁宰葬灶早允砸袁阅蚤凿蚤燥灶允孕袁藻贼葬造援杂怎遭泽责藻糟蚤枣蚤糟燥则蚤早蚤灶葬灶凿 澡葬责造燥贼赠责藻凿蚤增藻则泽蚤贼赠蚤灶贼澡藻造葬遭燥则葬贼燥则赠皂燥怎泽藻咱允暂援 晕葬贼郧藻灶藻贼袁 圆园员员袁源猿渊苑冤院远源愿原远缘缘援 咱员圆暂摇 酝燥则葬澡葬灶郧袁月葬造皂藻则蕴袁酝燥灶造藻赠阅援耘泽贼葬遭造蚤泽澡皂藻灶贼燥枣耶耶栽澡藻郧藻灶藻 酝蚤灶藻耶爷院葬则藻泽燥怎则糟藻枣燥则则葬责蚤凿蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼早藻灶藻泽 咱允暂援酝葬皂皂郧藻灶燥皂藻袁圆园园愿袁员怨渊远冤院猿怨园 猿怨猿援 咱员猿暂摇栽澡则藻葬凿早蚤造造阅宰袁匀怎灶贼藻则运宰袁宰蚤造造蚤葬皂泽砸宰援郧藻灶藻贼蚤糟凿蚤泽泽藻糟贼蚤燥灶燥枣糟燥皂责造藻曾葬灶凿择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻贼则葬蚤贼泽院枣则燥皂枣葬灶贼葬泽赠贼燥则藻葬造蚤贼赠增蚤葬葬糟燥皂皂怎灶蚤贼赠藻枣枣燥则贼咱允暂援酝葬皂皂郧藻灶燥皂藻袁圆园园圆袁员猿渊源冤院员苑缘原员苑愿援咱员源暂摇蕴葬灶凿藻则耘杂袁杂糟澡燥则噪晕允援郧藻灶藻贼蚤糟凿蚤泽泽藻糟贼蚤燥灶燥枣糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽咱允暂援杂糟蚤藻灶糟藻员怨怨源袁圆远缘院圆园猿苑原圆园源愿援咱员缘暂摇孕葬贼藻则泽燥灶粤匀援酝燥造藻糟怎造葬则凿蚤泽泽藻糟贼蚤燥灶燥枣择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻贼则葬蚤贼泽院责则燥早则藻泽泽葬灶凿责则燥泽责藻糟贼泽咱允暂援郧藻灶燥皂藻砸藻泽袁员怨怨缘袁缘渊源冤院猿圆员原猿猿猿援咱员远暂摇陨则葬择蚤云粤袁悦澡怎则糟澡蚤造造郧袁酝燥贼贼砸援栽澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽袁凿藻增藻造燥责蚤灶早葬则藻泽燥怎则糟藻枣燥则皂葬皂皂葬造蚤葬灶泽赠泽贼藻皂泽早藻灶藻贼蚤糟泽院葬泽贼葬贼怎泽则藻责燥则贼燥枣贼澡藻宰藻造造糟燥皂藻栽则怎泽贼糟燥澡燥则贼咱允暂援酝葬皂皂郧藻灶燥皂藻袁圆园园愿袁员怨院猿苑怨 猿愿员援咱员苑暂摇酝燥则早葬灶粤孕袁宰藻造泽澡悦耘援陨灶枣燥则皂葬贼蚤糟泽则藻泽燥怎则糟藻泽枣燥则贼澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽葬灶凿则藻造葬贼藻凿皂燥怎泽藻责燥责怎造葬贼蚤燥灶咱允暂援酝葬皂皂郧藻灶燥皂藻袁圆园员缘袁圆远渊怨原员园冤院缘圆员原缘猿怨援咱员愿暂摇杂燥造造藻则酝袁陨则葬择蚤云粤援栽澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽 粤灶藻曾贼早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 皂燥怎泽藻早藻灶藻贼蚤糟则藻泽燥怎则糟藻责燥责怎造葬贼蚤燥灶枣燥则澡蚤早澡则藻泽燥造怎贼蚤燥灶早藻灶燥皂蚤糟葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽咱允暂援蕴蚤增藻泽贼燥糟噪杂糟蚤藻灶糟藻袁圆园员源袁员远远渊源冤院员怨原圆缘援咱员怨暂摇粤赠造燥则阅蕴袁灾葬造凿葬藻宰袁云燥怎造凿泽鄄酝葬贼澡藻泽宰袁藻贼葬造援郧藻灶藻贼蚤糟葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽蚤灶贼澡藻藻皂藻则早蚤灶早糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽咱允暂援郧藻灶燥皂藻砸藻泽袁圆园员员袁圆员渊愿冤院员圆员猿原员圆圆圆援 咱圆园暂摇孕澡蚤造蚤责灾酝袁杂燥噪燥造燥枣枣郧袁粤糟噪藻则贼鄄月蚤糟噪灶藻造造悦蕴袁藻贼葬造援郧藻灶藻贼蚤糟 葬灶葬造赠泽蚤泽蚤灶贼澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽遭则藻藻凿蚤灶早责燥责怎造葬贼蚤燥灶咱允暂援郧藻灶燥皂藻砸藻泽袁圆园员员袁圆员渊愿冤院员圆圆猿原员圆猿愿援 咱圆员暂摇砸葬皂砸袁酝藻澡贼葬酝援月葬造皂藻则蕴袁藻贼葬造援砸葬责蚤凿蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣 皂葬躁燥则鄄藻枣枣藻糟贼早藻灶藻泽怎泽蚤灶早贼澡藻糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽咱允暂援郧藻灶藻贼蚤糟泽袁圆园员源袁员怨愿渊员冤院苑缘原愿远援 咱圆圆暂摇砸燥早葬造葬粤砸袁酝燥则早葬灶粤孕袁悦澡则蚤泽贼藻灶泽藻灶粤酝袁藻贼葬造援栽澡藻 糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽葬泽葬则藻泽燥怎则糟藻枣燥则皂燥凿藻造蚤灶早澡怎皂葬灶凿蚤泽藻葬泽藻院悦悦园员员辕哉灶糟袁葬灶藻憎皂燥怎泽藻皂燥凿藻造枣燥则泽责燥灶贼葬灶藻燥怎泽糟燥造蚤贼蚤泽咱允暂援酝葬皂皂郧藻灶燥皂藻袁圆园员源袁圆缘渊猿原源冤院怨缘原员园愿援咱圆猿暂摇宰藻藻则葬泽藻噪藻则葬蕴再袁月葬造皂藻则蕴粤袁砸葬皂砸袁藻贼葬造援悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶燥枣则藻贼蚤灶葬造增葬泽糟怎造葬则葬灶凿灶藻怎则葬造凿葬皂葬早藻蚤灶葬灶燥增藻造皂燥凿藻造燥枣凿蚤葬遭藻贼蚤糟则藻贼蚤灶燥责葬贼澡赠咱允暂援陨灶增藻泽贼韵责澡贼澡葬造皂燥造灾蚤泽杂糟蚤袁圆园员缘袁缘远渊远冤院猿苑圆员原猿苑猿园援 咱圆源暂摇砸葬泽皂怎泽泽藻灶粤蕴袁韵噪怎皂怎则葬粤袁云藻则则蚤泽酝栽袁藻贼葬造援匀燥泽贼早藻灶藻贼蚤糟 凿蚤增藻则泽蚤贼赠藻灶葬遭造藻泽耘遭燥造葬澡藻皂燥则则澡葬早蚤糟枣藻增藻则责葬贼澡燥早藻灶藻泽蚤泽葬灶凿则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻咱允暂援杂糟蚤藻灶糟藻袁圆园员源袁猿源远渊远圆员圆冤院怨愿苑原怨怨员援咱圆缘暂摇云藻则则蚤泽酝栽袁粤赠造燥则阅蕴袁月燥贼贼燥皂造赠阅袁藻贼葬造援酝燥凿藻造蚤灶早澡燥泽贼早藻灶藻贼蚤糟则藻早怎造葬贼蚤燥灶燥枣蚤灶枣造怎藻灶扎葬责葬贼澡燥早藻灶藻泽蚤泽蚤灶贼澡藻糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽咱允暂援孕蕴燥杂孕葬贼澡燥早袁圆园员猿袁怨渊圆冤院藻员园园猿员怨远援咱圆远暂摇蕴藻蚤泽贼杂砸袁孕蚤造扎灶藻则悦袁增葬灶凿藻灶月则葬灶凿允酝袁藻贼葬造援陨灶枣造怎藻灶扎葬匀猿晕圆蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶燥枣贼澡藻糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽枣燥怎灶凿藻则泽贼则葬蚤灶泽则藻增藻葬造泽澡蚤早澡造赠凿蚤增藻则早藻灶贼澡燥泽贼则藻泽责燥灶泽藻泽葬灶凿蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻泽怎灶蚤择怎藻责澡藻灶燥贼赠责藻蚤灶悦粤杂栽辕耘蚤允皂蚤糟藻咱允暂援月酝悦郧藻灶燥皂蚤糟泽袁圆园员远袁员苑渊员冤院员源猿援咱圆苑暂摇载蚤燥灶早匀袁酝燥则则蚤泽燥灶允袁云藻则则蚤泽酝栽袁藻贼葬造援郧藻灶燥皂蚤糟责则燥枣蚤造蚤灶早燥枣糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽枣燥怎灶凿藻则皂蚤糟藻蚤灶枣藻糟贼藻凿憎蚤贼澡则藻泽责蚤则葬贼燥则赠增蚤则怎泽藻泽则藻增藻葬造泽灶燥增藻造贼则葬灶泽糟则蚤责贼泽葬灶凿蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶鄄泽责藻糟蚤枣蚤糟早藻灶藻葬灶凿蚤泽燥枣燥则皂藻曾责则藻泽泽蚤燥灶咱允暂援郧猿渊月藻贼澡藻泽凿葬冤援圆园员源袁源渊愿冤院员源圆怨原员源源源援咱圆愿暂摇阅怎则则葬灶贼悦袁栽葬赠藻皂匀袁再葬造糟蚤灶月袁藻贼葬造援悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂蚤糟藻葬灶凿贼澡藻蚤则责燥憎藻则贼燥皂葬责澡燥泽贼泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥粤泽责藻则早蚤造造怎泽枣怎皂蚤早葬贼怎泽蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶咱允暂援郧藻灶燥皂藻砸藻泽袁圆园员员袁圆员渊愿冤院员圆猿怨原员圆源愿援咱圆怨暂摇灾藻则藻凿运袁阅怎则则葬灶贼悦袁酝燥贼贼砸袁藻贼葬造援杂怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥运造藻遭泽蚤藻造造葬孕灶藻怎皂燥灶葬蚤藻蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶蚤灶糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽皂蚤糟藻蚤泽葬糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼糟燥灶贼则燥造造藻凿遭赠葬贼造藻葬泽贼贼澡则藻藻造燥糟蚤葬糟贼蚤灶早葬贼凿蚤枣枣藻则藻灶贼贼蚤皂藻责燥蚤灶贼泽咱允暂援月酝悦郧藻灶燥皂蚤糟泽袁圆园员源袁员缘院愿远缘援 咱猿园暂摇 云藻则早怎泽燥灶 月袁 砸葬皂 砸袁 匀葬灶凿燥噪燥 匀再袁 藻贼 葬造援 酝藻造葬灶燥皂葬 泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠葬泽葬糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼院早藻灶藻贼蚤糟增葬则蚤葬贼蚤燥灶糟燥灶贼则燥造泽葬造造 泽贼葬早藻泽燥枣贼怎皂燥则责则燥早则藻泽泽蚤燥灶咱允暂援韵灶糟燥早藻灶藻袁圆园员缘袁猿源渊圆圆冤院 圆愿苑怨 圆愿愿远援 咱猿员暂摇 杂糟澡皂蚤凿贼悦宰援 阅蚤增藻则泽蚤贼赠燥怎贼遭则藻凿院葬灶藻憎早藻灶藻则葬贼蚤燥灶燥枣皂燥怎泽藻 皂燥凿藻造咱允暂援 耘灶增蚤则燥灶匀藻葬造贼澡孕藻则泽责藻糟贼袁圆园员缘袁员圆猿渊猿冤院粤远源 原远苑援 咱猿圆暂摇 云造蚤灶贼允袁酝燥贼贼砸援 粤责责造赠蚤灶早皂燥怎泽藻糟燥皂责造藻曾鄄贼则葬蚤贼则藻泽燥怎则糟藻泽贼燥 遭藻澡葬增蚤燥怎则葬造早藻灶藻贼蚤糟泽咱允暂援 晕葬贼怎则藻袁圆园园愿袁源缘远渊苑圆圆猿冤院苑圆源 原苑圆苑援 也修回日期页圆园员远原园苑原园缘

33 圆园员远年愿月第圆远卷摇第愿期 中国比较医学杂志悦匀陨晕耘杂耘允韵哉砸晕粤蕴韵云悦韵酝孕粤砸粤栽陨灾耘酝耘阅陨悦陨晕耘 粤怎早怎泽贼袁圆园员远灾燥造援圆远摇晕燥援愿 藡 蕥 蕥蕥蕥蕥藡专题研究 蕥蕥蕥蕥藡 蕥藡 复杂性状遗传悦悦小鼠与精准医学研究 杜摇 朋袁陈孟毅袁李程程袁樊飞跃袁孟爱民 渊中国医学科学院医学实验动物研究所袁北京摇员园园园圆员冤 摇摇揖摘要铱摇生物组学技术在生物学尧医学上的转化应用袁为精准的个体化预防尧诊断尧治疗提供了关键性的技术体系袁精准医学模式应运而生遥实验动物学研究是疾病发病机制研究转化到临床不可或缺的手段遥为应对目前严重危害人类疾病的复杂性尧多样性特点袁圆园园圆年国际复杂性状联盟渊悦燥皂责造藻曾栽则葬蚤贼悦燥灶泽燥则贼蚤怎皂袁悦栽悦冤倡议研发建立新的小鼠遗传资源库曰通过不同纯系小鼠品系间的杂交创建小鼠复杂性状遗传资源库渊悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂蚤糟藻袁悦悦小鼠冤遥随着原始亲本小鼠渊枣燥怎灶凿藻则冤选定尧杂交品系的繁殖袁悦悦小鼠在检测小鼠表型尧疾病易感性尧疾病发生发展及预后与遗传因素的关系方面进行了系列的尝试遥文中将就悦悦小鼠在疾病发生发展及药物评价个体化研究中的应用做一简要介绍遥揖关键词铱摇精准医学曰悦悦小鼠曰数量性状定位揖中图分类号铱砸原猿猿摇摇揖文献标识码铱粤摇摇揖文章编号铱员远苑员鄄苑愿缘远渊圆园员远冤园愿鄄园园猿园鄄园远凿燥蚤院员园郾猿怨远怨援躁援蚤泽泽灶援员远苑员原苑愿缘远郾圆园员远郾园愿郾园园源 悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂蚤糟藻葬灶凿责则藻糟蚤泽蚤燥灶皂藻凿蚤糟蚤灶藻 阅哉孕藻灶早袁悦匀耘晕酝藻灶早鄄赠蚤袁蕴陨悦澡藻灶早鄄糟澡藻灶早袁云粤晕云藻蚤鄄赠怎藻袁酝耘晕郧粤蚤鄄皂蚤灶渊陨灶泽贼蚤贼怎贼藻燥枣蕴葬遭燥则葬贼燥则赠粤灶蚤皂葬造杂糟蚤藻灶糟藻泽袁悦澡蚤灶藻泽藻粤糟葬凿藻皂赠燥枣酝藻凿蚤糟葬造杂糟蚤藻灶糟藻驭孕藻噪蚤灶早哉灶蚤燥灶酝藻凿蚤糟葬造悦燥造造藻早藻袁月藻蚤躁蚤灶早员园园园圆员袁悦澡蚤灶葬冤 摇摇揖粤遭泽贼则葬糟贼铱摇栽澡藻蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造增葬则蚤葬遭蚤造蚤贼赠泽澡燥怎造凿遭藻糟燥灶泽蚤凿藻则藻凿蚤灶责则藻糟蚤泽蚤燥灶皂藻凿蚤糟蚤灶藻鄄责则藻增藻灶贼蚤燥灶葬灶凿贼则藻葬贼皂藻灶贼泽贼则葬贼藻早蚤藻泽援酝藻凿蚤糟葬造则藻泽藻葬则糟澡怎泽蚤灶早早藻灶燥皂蚤糟泽袁责则燥贼藻燥皂蚤糟泽袁皂藻贼葬遭燥造燥皂蚤糟泽袁泽赠泽贼藻皂泽葬灶葬造赠泽藻泽袁葬灶凿燥贼澡藻则皂燥凿藻则灶贼燥燥造泽澡葬泽皂葬凿藻遭蚤早责则燥早则藻泽泽援陨灶圆园园圆袁贼澡藻皂藻皂遭藻则泽燥枣贼澡藻悦燥皂责造藻曾鄄栽则葬蚤贼悦燥灶泽燥则贼蚤怎皂责则燥责燥泽藻凿贼燥凿藻增藻造燥责葬灶藻憎皂燥怎泽藻早藻灶藻贼蚤糟泽则藻泽燥怎则糟藻糟葬造造藻凿贼澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽渊悦悦冤援栽澡藻悦悦蚤泽葬早藻灶藻贼蚤糟则藻枣藻则藻灶糟藻责葬灶藻造燥枣则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼蚤灶遭则藻凿造蚤灶藻泽燥枣皂蚤糟藻袁凿藻泽蚤早灶藻凿枣燥则贼澡藻凿蚤泽泽藻糟贼蚤燥灶燥枣糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽葬灶凿早藻灶藻灶藻贼憎燥则噪泽援陨贼憎蚤造造责则燥增蚤凿藻葬责燥憎藻则枣怎造皂藻葬泽怎则藻枣燥则枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造泽贼怎凿蚤藻泽燥枣遭蚤燥造燥早蚤糟葬造灶藻贼憎燥则噪泽袁憎澡蚤糟澡憎蚤造造遭藻藻泽泽藻灶贼蚤葬造贼燥怎灶凿藻则泽贼葬灶凿贼澡藻蚤灶贼则蚤糟葬糟蚤藻泽燥枣凿蚤泽藻葬泽藻责则燥糟藻泽泽藻泽援揖运藻赠憎燥则凿泽铱摇孕则藻糟蚤泽蚤燥灶皂藻凿蚤糟蚤灶藻曰栽澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽曰匝怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻贼则葬蚤贼造燥糟怎泽渊匝栽蕴冤 摇摇员怨缘猿年沃森和克里克发现阅晕粤双螺旋结构开启了分子生物学时代遥缘园年后的圆园园猿年野人类基因组计划冶宣布完成遥从基因序列分析到各种组学技术的发展袁分子生物学技术在医学研究中的应用对探讨疾病病因尧发病机制及诊断技术更新尧治疗方案制定产生了深远的影响遥在此基础上近年来 精准医学不断地被提出袁尤其是美国总统奥巴马在圆园员缘年国情咨文演讲中提出了精准医学计划袁推动个体基因组学的研究袁引起世界关注遥圆园员远年我们国家将精准医学纳入国家重点研发计划遥精准医学的目的是精确找到疾病的原因和治疗靶点袁为患者提供更具针对性和有效性的治疗措施袁提高疾病 咱基金项目暂国家自然科学基金渊愿员缘苑猿园怨源袁愿员猿苑圆怨圆愿冤曰中央科研院所基本业务费渊圆园员远在载猿员园园源圆冤遥咱作者简介暂杜朋袁男袁硕士研究生袁研究方向院放射医学遥耘皂葬蚤造院凿责苑猿缘缘岳员远猿援糟燥皂遥咱通讯作者暂樊飞跃袁男袁研究员袁研究方向院辐射致癌机制及其干预遥耘鄄皂葬蚤造院枣葬蚤贼澡赠枣葬灶岳赠葬澡燥燥援糟燥皂曰孟爱民渊员怨远猿原冤袁女袁研究员袁研究方向院成体干细胞损伤机制及干预遥耘鄄皂葬蚤造院葬蚤赃皂蚤灶赃皂藻灶早岳员圆远援糟燥皂遥

34 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 猿员 诊治与预防效益遥因此袁精准医学研究应关注技术成果转化应用袁最终能实现对于疾病进行个性化精准治疗遥动物实验在人类疾病发病机制研究和药物研发的有效性尧安全性评价中起着不可替代的作用遥肿瘤尧传染性疾病尧糖尿病尧心脑血管疾病等慢性复杂性疾病是严重危害人类健康的常见疾病袁是目前预防诊疗研究的重点遥为了能够更好地研究个体遗传因素对复杂性疾病发生发展尧诊断及治疗反应性的影响袁圆园园圆年袁国际复杂性状联盟渊悦燥皂责造藻曾栽则葬蚤贼悦燥灶泽燥则贼蚤怎皂袁悦栽悦冤针对复杂疾病的遗传多样性袁倡议研发建立新的小鼠遗传资源库袁通过不同纯系小鼠品系间的杂交创建小鼠复杂性状遗传资源咱员暂库渊悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂蚤糟藻袁悦悦小鼠冤遥随着原始亲本小鼠渊枣燥怎灶凿藻则冤选定尧杂交品系的繁殖袁不同传代次数的悦悦小鼠在检测小鼠表型尧疾病易感性尧疾病发生发展及预后与遗传因素的关系方面进行了系列的系统遗传学方法的尝试遥下面将就悦悦小鼠在疾病发生发展及药物评价个体化研究中的应用做一简要介绍遥 员摇 精准医学为个体化医疗目标实现提供新的途径 精准医学是应用现代遗传技术尧分子影像技术尧生物信息技术袁结合患者生活环境和临床数据袁实现精准的疾病分类及诊断袁制定具有个性化的疾病预防和治疗方案遥精准医学得以实施的核心科学问题袁是要根据每一个个体的分子特征渊基因突变冤的差异袁准确了解病因袁从而进行更为精准的医疗预防尧诊断和个性化治疗袁是一种个体定制的尧因人因病而异的医疗模式袁是卫生与健康保障的新概念遥我们国家有关精准医学的任务包括新一代生命组学技术研发袁大规模人群队列研究袁精准医学大数据的资源整合尧存储尧利用与共享平台建设袁疾病预防诊断治疗方案的精准化研究袁精准医疗集成应用示范体系建设遥精准医学涵盖了疾病三级预防里的各项内容袁包括风险预测尧早期诊断尧分类诊断尧机制描述尧疗效评估尧预后预测尧方案制定等遥其中疾病防诊治方案的精准化研究包括基于组学特征谱的疾病分子分型研究袁基于分子影像技术的疾病精准治疗方案的研究袁药物个性化应用评价与临床应用研究袁罕见病精准诊疗技术研究袁疾病诊疗规范及应用方案的精准化研究袁精准医疗临床决 策支持系统研发和个体化治疗靶标发现与新技术咱圆暂研发遥精准医学概念为基础研究及转化尧临床诊疗模式带来了革命性的变化遥围绕着个性化诊疗这个核心袁对影响疾病发生发展的各种环境因素和个体因素的判断及评价具有重要的意义遥人类疾病一般是多基因改变和环境因素共同作用引起袁病因尧临床表现及治疗反应性都非常复杂遥癌症尧糖尿病尧心脏和肺脏疾病都属于这类疾病遥复杂性状疾病袁即多基因病袁是指由多个基因位点共同参与袁且和环境因素相互作用决定表型的遗传病遥复杂疾病遗传因素分析的主要目标之一是找出其易感基咱猿暂因遥为了达到这一目标袁迄今为止袁大致经历了猿个阶段遥第员阶段院候选基因研究渊糟葬灶凿蚤凿葬贼藻早藻灶藻则藻泽藻葬则糟澡冤曰第圆阶段院基因组连锁扫描渊憎澡燥造藻鄄早藻灶燥皂藻造蚤灶噪葬早藻泽糟葬灶灶蚤灶早冤曰第猿阶段院基因组关联研究渊早藻灶燥皂藻鄄憎蚤凿藻葬泽泽燥糟蚤葬贼蚤燥灶泽贼怎凿蚤藻泽袁郧宰粤杂冤遥因为复杂疾病在遗传学上具有某些独特的复杂特点袁致使各种遗传分析的效力不够高遥目前所有遗传分析就其结果来看袁主要存在猿个问题院分析效力低曰可重复性不强曰验证工作不够曰对目的易感基因的性质尧功能和作用机制知之甚少遥我国于圆园园怨年开始在愿远猿计划重点项目中特别就肺癌尧食管癌尧高血压尧糖尿病和精神分裂症等缘种复杂疾病的郧宰粤杂进行招标袁这对于推动我国在复杂疾病的遗传学研究向前发展具有重要意义遥在此基础上圆园员远年野精准医学研究冶列为国家优先启动的重点专项之一袁并正式进入实施阶段遥其中构建百万人以上的自然人群国家大型健康队列尧重大疾病专病队列和罕见病临床队列是其重要的研究内容遥重大疾病专病队列包括心血管疾病袁脑血管疾病袁呼吸系统疾病袁代谢性疾病袁乳腺癌袁食管癌等遥实验动物科学在此基础上也作了相应的准备遥如建立各种动物资源库袁为探讨疾病发生机制研究及诊断尧治疗手段的研发提供工具遥悦悦小鼠资源就是其中之一遥 圆摇 复杂性状遗传悦悦小鼠的建立和应用特点 相对人群研究袁实验动物具有寿命短尧可操作性强等优势遥为了更好地利用动物模型研究复杂性状疾病袁圆园园圆年袁国际复杂性状联盟渊悦燥皂责造藻曾栽则葬蚤贼悦燥灶泽燥则贼蚤怎皂袁悦栽悦冤针对复杂疾病的遗传多样性袁

35 猿圆中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 启动了复杂性状遗传悦悦小鼠渊悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂蚤糟藻袁悦悦冤项目遥悦悦项目的目标是为数量性状定位渊择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻贼则葬蚤贼造燥糟怎泽袁匝栽蕴冤及系统遗传学研究提供小鼠种群资源袁希望最终建立员园园园个重组纯系小咱源暂鼠渊砸藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼陨灶遭则藻凿袁砸陨冤遥圆园园圆年经过广泛的讨论悦栽悦确定了愿种小鼠作为悦悦小鼠的原始亲本小鼠渊枣燥怎灶凿藻则冤院粤辕允袁悦缘苑月蕴辕远允尧员圆怨杂员杂增辕陨皂允尧晕韵阅辕杂澡蚤蕴贼允尧晕在韵辕匀员蕴贼允尧悦粤杂栽辕耘蚤允尧孕宰运辕孕澡允和宰杂月辕耘蚤允遥其中前缘个品系是实验室常用的纯系小鼠袁后猿个来自野生型小鼠遥遗传学分析结果显示这愿种小鼠覆盖了怨园豫的小鼠遗传变异遥目前悦悦小鼠种群可用的有圆园园余个小鼠品系遥与以往进行遗传易感性研究需要繁殖云员代尧回交等手段袁实验非常繁琐尧耗时长遥悦悦小鼠进行遗传易感性分析具有以下优势院渊员冤悦悦小鼠具有遗传多样性曰由于杂交设计袁每个品系的悦悦小鼠都携带有愿个原始亲本的遗传信息袁比以往常用实验室小鼠品系更具备遗传多样性遥渊圆冤悦悦小鼠遗传背景清晰曰有完整的各种遗传序列尧转录因子序列数据库提供应用遥渊猿冤实验设计简单袁实验步骤简便曰与经典的遗传学分析比较袁利用悦悦小鼠进行遗传易感性分析具有明显的优势遥如在进行各种性状的遗传分析研究中袁只需根据性状影响因素多少选择一定数量的悦悦小鼠品系袁观察不同品系之间的性状表型差异遥将表型检测数据输入数据库袁进行匝栽蕴及杂晕孕位点的分析袁省略了取材尧提取阅晕粤尧砸晕粤进行分子生物学实验的步骤遥渊源冤可以利用悦悦小鼠进行生物和疾病表型的多基因位点分析袁可以通过增加检测品系减少假阳性结果曰例如单基因疾病需要筛选圆园耀猿园个悦悦小鼠品系袁猿个影响基因则可以选择缘园耀愿园个悦悦小鼠品系袁甚至更多遥利用悦悦小鼠筛选研究成果袁可以发现疾病易感小鼠和辕或抵抗小鼠袁建立非基因修饰的易感渊抵抗冤小鼠模型袁有助于疾病机制研究及药物评价转化曰有助于发现疾病易感基因及其调节机制曰可以利用系统遗传学方法进行多因素分析袁有助于阐明复杂性疾病的发病机制及疾病转归遥目前利用悦悦小鼠进行传染性疾病尧肿瘤尧糖尿病的复杂性疾病的患病易感性尧治疗敏感性及预后预测开展了广泛的研究遥这些研究将为临床研究在病因尧诊断尧治疗效果判定等生物学标志的研究提供重要的提示和补充遥 猿摇复杂性状遗传悦悦小鼠在疾病易感性和诊治方面的应用 摇摇利用小鼠可以快速鉴定多基因控制性状的主效应基因袁寻找疾病易感基因以及治疗反应差异性的遗传位点袁了解药物产生毒副作用的遗传学基础袁为精准医学中个体治疗的生物学指标提供参考袁为疾病的早期诊断和监测提供依据遥猿郾员摇快速鉴定多基因控制性状的主效应基因为探讨利用悦悦小鼠寻找多基因控制性状位点袁酝燥则葬澡葬灶郧实验室应用员员园个悦悦小鼠品系袁通过皂藻贼葬酝哉郧粤数据库将悦悦小鼠与云燥怎灶凿藻则小鼠杂晕孕位点比对袁进行单体型重建渊匀葬责造燥贼赠责藻则藻糟燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶冤袁候选基因定位袁回归分析各种被毛颜色的候选基因位点袁并且探讨了检测猿个基因座位的联合效应袁并在文中详细介绍了悦悦小鼠使用尧咱缘暂数据分析步骤遥外周血细胞计数在临床上疾病诊疗检测中应用非常广泛袁各种计数值受到严格的遗传学调控袁关键基因的突变会有严重的临床表型袁如对疟疾的易感性差异遥外周血参数的变异呈现线性改变袁推测应该是受多个基因影响袁产生微咱远暂弱的表型效应遥悦燥造造蚤灶泽云实验室应用愿个枣燥怎灶凿藻则及员猿员个责则藻鄄悦悦小鼠品系袁进行杂晕孕扫描及数量性状位点作图渊匝栽蕴冤袁发现了影响平均红细胞压积渊酝悦灾冤尧白细胞渊宰月悦冤尧单核细胞渊酝韵冤尧中性粒细胞渊晕耘冤遗传基因的基因位点遥苑号染色体上的酝糟增择源对酝悦灾产生极大的影响曰宰月悦与员愿号染色体上的宰遭糟择苑有关曰晕耘与员员号染色体上责糟贼择员相关曰酝韵受员号染色体上的酝燥择员的影响遥而砸月悦尧匀遭尧砸阅宰尧孕蕴栽以及平均血小板体积的基因则不能用匝栽蕴定位区分遥骨小梁微观结构是一个复合性状袁由多基因复杂相互作用进行调控遥确定这些遗传因素有助于预测骨质疏松及其相关风险遥悦悦小鼠匝栽蕴可以在咱苑暂相对较小的群体中有高的检出率遥蕴藻增赠砸等通过员园滋皂分辨率微悦栽设备扫描股骨远端干骺端获得骨小梁性状指标遥评估性状指标包括骨小梁体积分数渊渊月灾辕栽灾冤尧数目渊栽遭援晕冤尧厚度渊栽遭援栽澡冤和联接密度渊栽遭援晕冤遥对猿员个悦悦品系小鼠进行包含苑苑愿园愿个杂晕孕的全基因组单倍型作图遥根据悦悦小鼠序列变异分离数据库进行单倍型扫描的优化袁发现潜在的候选基因遥分析结果显示这些性状的遗传遗传力从园郾远到园郾苑遥除栽遭援栽澡外各种骨骼微结构性状有显著的性别效应遥单倍型扫描结果显示

36 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 猿猿 有远个匝栽蕴袁月灾辕栽灾和栽遭援栽澡指标圆号和苑号染色体分别有两个非常接近的位点遥栽遭援晕和悦燥灶灶援阅分别在愿号和员源号染色体各有一个位点遥研究者利用之前报道的骨形成功能相关基因确定了候选基因遥在文献基础上袁在这些基因当中排名特别高的那些被验证是正确的袁包括粤增责袁韵曾贼袁月圆皂袁孕糟泽噪远袁砸早皂葬袁砸遭员和悦责遭圆遥其他候选基因有杂早糟扎袁云早枣圆园和悦澡凿圆遥研究者首次展示了在几个遗传位点和骨小梁结构参数间的全基因组关联性袁也筛选出了几个与骨骼性状有关新的候选基因遥猿郾圆摇复杂性疾病遗传病因研究慢性非传染性疾病渊简称野慢病冶或野慢性病冶冤是目前威胁我国民众健康最主要的一大类疾病遥根据国务院发布的叶中国居民营养与慢性病状况报告渊圆园员缘年冤曳袁圆园员圆年我国居民慢性病死亡率达缘猿猿辕员园万袁慢病导致的死亡占总死亡人数的愿远郾远豫遥其中袁心脑血管疾病尧恶性肿瘤尧慢性阻塞性肺疾病渊慢阻肺冤尧糖尿病和神经精神疾病等重大慢病为主要死因袁且增长迅猛遥这几大类疾病占总死亡的比例从员怨怨园年的远缘郾缘豫增至圆园员园年苑怨郾源豫遥更为严峻的是袁由于生活方式改变及人口老龄化的影响袁预计未来员园耀员缘年袁我国慢病仍呈快速增长态势遥圆园员远年我们国家启动的野重大慢性非传染性疾病防控研究冶重点专项正式进入实施阶段遥其中发病机制及慢病并发症危险因素预警技术的研究也是其重要内容袁这对慢病的群体防治和个体化治疗均具有重要作用遥目前常见的慢性疾病多数受多基因遗传控制遥陨陨型糖尿病占糖尿病患者怨园豫以上遥多种证据显示糖尿病发病过程及胰岛素抵抗受到多基因控制遥咱愿暂陨则葬择蚤云实验室用了圆员个品系悦悦小鼠共远愿猿只袁其中圆远缘只给予高脂饮食渊源圆豫脂肪冤袁猿愿源只小鼠给予标准饲料渊员愿豫脂肪冤遥愿周小鼠喂饲不同饲料持续圆园周袁定期测定体重渊月宰冤尧体长渊月蕴冤尧腰围渊宰悦冤尧及体质指数渊月酝陨冤遥因为小鼠性别与饲料因素相互影响袁因此将性别分开进行分析遥结果发现袁高脂饮食两种性别均出现肥胖及糖耐量升高的悦悦小鼠有远种品系曰易感性相似但有性别差异的雌性有圆种袁雄性有源种袁只有圆种雌性对高脂饮食有抵抗遥糖耐量下降不肥胖的两种性别均出现的小鼠有源株袁仅雄性小鼠出现的有猿种袁仅雌性小鼠出现的有猿株遥高脂饮食体重增加分两个阶段袁开始远周悦悦小鼠各株两种性别体重均有升高遥接下来 远周大部分雄性小鼠体重仍在增加袁雌性小鼠表现出现了分化袁有些体重下降袁有些保持体重袁有些升高遥今后在代谢性疾病研究中需引起注意遥一般饲料喂养袁两种性别小鼠均没有表现出糖 耐量异常遥高脂饮食可导致明显的个体差异遥进行计算得出广义遗传力系数在园郾缘左右渊月则燥葬凿泽藻灶泽藻澡藻则蚤贼葬遭蚤造蚤贼赠糟燥藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼泽袁月澡糟冤袁提示遗传因素和环境因素具有相互作用遥悦悦小鼠各种系之间的遗传系数渊匀藻则蚤贼葬遭蚤造蚤贼赠糟燥藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼泽袁匀糟冤很高袁提示种系之间的差异主要是遗传因素发挥主要作用遥研究结果验证了陨陨型糖尿病是复杂性状遗传袁受到多基因调节和性别控制遥糖尿病视网膜病渊阅蚤葬遭藻贼蚤糟则藻贼蚤灶蚤贼蚤泽袁阅砸冤是致盲的主要因素遥应用合适的非基因修饰的小鼠模型能够反映人类疾病特征有助于阐明潜在的发病机咱怨暂制遥酝燥则葬澡葬灶郧实验室选择了远源种悦悦品系小鼠袁每种小鼠至少员园只袁通过静脉注射四氧嘧啶或链脲佐菌素诱发糖尿病袁筛选阅砸特征性病变袁同时进行全视网膜铺片和组织切片观察视网膜损伤情况遥最终筛选到和人发病特征最接近的小鼠袁命名为云韵栽赃云月遥进而对云韵栽赃云月开展更深入的研究袁在发生糖尿病后在多个时间点检查视网膜血管组织学和神经结构来研究阅砸的发展进程曰通过芯片技术比较对照组和糖尿病组的视网膜变化遥结果显示一些小鼠苑凿就出现阅砸特征性变化袁如周细胞退化尧无细胞毛细血管形成尧小血管增生尧穆勒细胞增生尧神经节细胞丢失遥随着时间延长这些损伤更为显著遥引发糖尿病圆员凿后袁严重的血管增生尧微血管瘤尧视网膜前损伤尧穆勒细胞增生和视网膜外层损伤都很明显遥基因芯片结果显示发现许多与阅砸相关已知的基因表达呈显著差异袁并发现晶状体蛋白基因渊悦则赠遭葬员冤表达上调袁这个基因在阅砸发病中的作用还需进一步验证遥发现云韵栽赃云月品系为研究阅砸发病和开发危害视力疾病治疗手段提供了有用的模型袁悦悦小鼠为阅砸易感性基因筛选及靶向治疗提供了数据遥过敏性哮喘是以气道粒细胞浸润为特征的复杂性疾病遥除了嗜酸性粒细胞之外袁在严重哮喘袁中性粒细胞渊孕酝晕冤在局部也明显增加遥砸怎贼造藻凿早藻匀咱员园暂等利用居室尘螨诱导的哮喘小鼠模型寻找中性粒细胞炎症的遗传决定因子遥小鼠采用了愿个枣燥怎灶凿藻则品系尧员缘员个前悦悦品系渊责则藻悦悦冤遥肺灌洗液中孕酝晕计数和中性粒细胞标志趋化因子悦载悦蕴员浓

37 猿源中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 度测定发现在责则藻悦悦中这两者高度相关遥匝栽蕴作图确定了三个影响孕酝晕的变异区遥其中一个和悦载悦蕴员在苑号染色体的匝栽蕴共定位遥研究者利用肺藻匝栽蕴数据发现在枣责猿园基因有一个变异区与悦载悦蕴员辕孕酝晕应答有关遥这些遗传变异通过改变在枣责猿园表达调节悦载悦蕴员和孕酝晕遥研究者建立匝栽蕴和这三个内表型间关系的结构分析模型遥在枣责猿园表达于正常小鼠肺气管上皮细胞袁在体外在枣责猿园表达改变影响了悦载悦蕴员针对免疫刺激的应答遥该研究发现在枣责猿园是一个新的中性粒细胞气管炎症调节因子曰过敏性哮喘中性粒细胞浸润受猿个基因位点调控袁孕酝晕表型由悦载悦蕴员和在枣责猿园介导遥内质网应激渊耘砸泽贼则藻泽泽冤发生于错误折叠蛋白在内质网中累积遥细胞对耘砸泽贼则藻泽泽的应答对细胞的生存很重要袁涉及复杂的转录和翻译水平的变化遥耘砸泽贼则藻泽泽是许多人类疾病的首要诱发和调节因子遥了解耘砸泽贼则藻泽泽应答怎样影响人类疾病的第一步就是判定耘砸泽贼则藻泽泽应答如何在转录水平上存在个体咱员员暂差异遥悦澡燥憎悦再等用一种通常用于诱导耘砸泽贼则藻泽泽的药物衣霉素袁在枣燥怎灶凿藻则小鼠的胚胎成纤维细胞中诱导产生耘砸泽贼则藻泽泽袁分析其转录反应发现有数百个耘砸泽贼则藻泽泽应答不同基因遥值得注意的是袁炎症反应基因在这些品系中区别最大曰而主要的经典耘砸泽贼则藻泽泽应答基因未表现出变化遥为了揭示在这些品系在耘砸泽贼则藻泽泽应答的基因结构袁研究者评估了来源于悦悦枣燥怎灶凿藻则小鼠间云员代酝耘云的转录应答遥超过愿园豫的基因调节差异来源于顺式调节差异遥研究表明耘砸泽贼则藻泽泽转录应答在品系之间是高度多样性的袁这源自在个体下游应答基因而不是主要信号转录因子的遗传多样性遥这些结论对于理解遗传多样性如何影响耘砸泽贼则藻泽泽应答有重要意义遥上述研究结果提示利用悦悦小鼠可以对复杂性疾病尧复杂性疾病的严重表型以及发病分子机制进行遗传影响因素的研究袁为研究结果的临床转化提供生物学标志遥利用悦悦小鼠进行疾病易感基因以及治疗反应差异性的遗传位点分析在其他方面也有应用遥比较多的是有关传染病和肿瘤的遗传易感性分析袁如咱员圆暂咱员猿暂肿瘤发生发展渊黑色素瘤冤尧细菌渊绿脓杆菌尧咱员源暂咱员缘暂肺炎杆菌冤尧病毒渊杂粤砸杂病毒性冤尧霉菌渊烟曲咱员远暂霉菌冤感染的易感性多基因定位研究等遥猿郾猿摇药物产生毒副作用的遗传学基础研究由于个体差异袁患者应用药物后不仅疗效会有 较大差异袁药物的毒副作用也表现不同遥探讨这种差异产生的遗传学机制袁筛选监测的生物学指标袁对这种个体差异进行预测和评价袁是个体化精准治疗的重要内容遥悦悦小鼠的建立袁为这部分工作提供研究手段遥博来霉素对人和小鼠均有引起肺纤维化的副咱员苑暂作用袁但是存在有易感性差异袁郧藻造蚤灶葬泽砸等利用不同品系的悦悦小鼠研究表型与遗传的关系遥随机选源园个品系尧远耀愿周的雄性悦悦小鼠袁分别在员尧源尧愿尧员员尧员缘尧员愿尧圆圆尧圆缘凿愿次腹腔注射博来霉素袁剂量园郾园猿缘哉辕早袁在第猿猿天袁小鼠安乐死袁收集血液中血浆测皂蚤砸晕粤曰右肺检测可溶性胶原含量袁左肺固定做病理检测袁进行肺纤维化半定量曰小鼠尾部阅晕粤高密度基因分型遥通过对数据进行分析发现袁由博来霉素引起的肺纤维化表型袁一个动物受影响其兄弟姐妹也会有相应的反应曰可溶性胶原检测显示相同的结果曰但皂蚤砸晕粤的结果与之不一致遥肺纤维化易感或不易感袁是与遗传相关的袁和人一样袁悦悦小鼠会产生基因突变来应对药物反应曰具有遗传多样性的悦悦小鼠也许能够揭示药物反应规律遥氟哌啶醇是治疗精神疾病的有效药物袁但由于部分患者会产生运动障碍导致患者依从性下降袁限咱员愿暂制了药物应用遥灾葬造凿葬则实验室应用愿个枣燥怎灶凿藻则小鼠及其缘源个双杂交一代渊云员袁有圆株不能生育冤小鼠进行药物和安慰剂双杂交研究袁检测遗传尧性别尧双亲来源以及杂交对氟哌啶醇反应性的影响遥每个杂交系列至少源只小鼠袁药物组雌雄各员只曰安慰剂组雌雄各员只袁共圆苑园只小鼠袁包括员猿苑只雌性渊远愿只药物组袁远怨只安慰剂组冤尧雄性员猿猿只渊远远只药物组袁远苑只安慰剂组冤遥对两种性别药物安慰剂配对小鼠观察神经行为学指标渊旷场实验尧倾斜屏实验尧口部空嚼运动尧惊吓试验冤袁血浆和脑内药物水平袁以及体重变化遥为阐明氟哌啶醇治疗反应性的遗传特点袁在晕藻赠皂葬灶鄄砸怎遭蚤灶责燥贼藻灶贼蚤葬造燥怎贼糟燥皂藻泽枣则葬皂藻憎燥则噪的野凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻燥枣皂燥凿藻造泽野及月葬赠藻泽蚤葬灶澡蚤藻则葬则糟澡蚤糟葬造皂燥凿藻造基础上建立新的预测模型野凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻燥枣皂燥凿藻造泽冶尧寓皂怎造贼蚤责造藻鄄蚤皂责怎贼藻皂葬贼糟澡藻凿责葬蚤则泽寓进行药物治疗反应与遗传变异关系分析遥结果发现药物长期作用诱发的肌肉强直主要与加性遗传效应渊占圆愿豫冤和双亲晕在韵辕匀陨蕴贼允和员圆怨杂员辕杂增造皂允小鼠来源效应渊占员源郾愿豫冤有关曰自主活动增加则主要受小鼠特异性株系交配繁殖的影响渊员圆郾愿豫冤遥用药后行为学的表现为双重性袁有加性

38 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 猿缘 遗传效应渊员园郾圆豫耀缘猿郾圆豫冤袁同时上位遗传效应也很明显渊员园郾远源豫耀圆缘郾圆豫冤遥惊反射的前脉冲抑制试验显示加性效应和上位效应占相同的比例遥治疗前活动与肌肉强直呈现单向上位效应遥结果揭示了小鼠氟哌啶醇治疗反应性的遗传特征袁提示小鼠对药物反应性的差异主要与遗传加性效应尧双亲来源尧交配方式有关遥实验动物学研究在疾病发病机制研究中起到重要作用袁也是临床转化不可或缺的手段遥复杂性状遗传悦悦小鼠对疾病发生机制研究袁诊断及治疗反应性各种表型进行系统生物学研究袁研究成果会提供各种生物学标志物袁并在资源多样性小鼠尧基因敲除小鼠尧人源化小鼠等动物模型进行验证袁将会为人群队列研究数据的收集和分析提供线索和佐证遥悦悦小鼠作为一种新的资源袁在实验设计尧数据分析尧应用领域等方面的探索需要各学科交叉袁才能充分发挥在个体化诊治中的作用遥参考文献院 咱员暂摇悦澡怎则糟澡蚤造造郧粤袁粤蚤则藻赠阅悦袁粤造造葬赠藻藻匀袁藻贼葬造援栽澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽袁葬糟燥皂皂怎灶蚤贼赠则藻泽燥怎则糟藻枣燥则贼澡藻早藻灶藻贼蚤糟葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼泽援晕葬贼怎则藻郧藻灶藻贼蚤糟泽咱允暂援圆园园源袁猿远渊员员冤院员员猿猿原员员猿苑援咱圆暂摇悦赠则葬灶燥泽噪蚤阅援悦澡蚤灶葬藻皂遭则葬糟藻泽责则藻糟蚤泽蚤燥灶皂藻凿蚤糟蚤灶藻燥灶葬皂葬泽泽蚤增藻泽糟葬造藻咱允暂援晕葬贼怎则藻晕藻憎泽袁圆园员远郾缘圆怨渊苑缘愿源冤怨原员园援咱猿暂摇方福德袁复杂疾病遗传分析的现状尧问题和展望咱允暂援中国医学科学院学报袁圆园园怨袁猿员渊远冤院远远员原远远猿援咱源暂摇栽澡则藻葬凿早蚤造造阅宰袁悦澡怎则糟澡蚤造造郧粤援栽藻灶赠藻葬则泽燥枣贼澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽咱允暂援郧藻灶藻贼蚤糟泽袁圆园员圆袁员怨园渊圆冤院圆怨员原圆怨源援咱缘暂摇砸葬皂砸袁酝藻澡贼葬酝袁月葬造皂藻则蕴袁藻贼葬造援砸葬责蚤凿蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣皂葬躁燥则鄄藻枣枣藻糟贼早藻灶藻泽怎泽蚤灶早贼澡藻糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽咱允暂援郧藻灶藻贼蚤糟泽袁圆园员源袁员怨愿渊员冤院苑缘原愿远援咱远暂摇运藻造葬凿葬杂晕袁粤赠造燥则阅蕴袁孕藻糟噪月悦袁藻贼葬造援郧藻灶藻贼蚤糟葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣澡藻皂葬贼燥造燥早蚤糟葬造责葬则葬皂藻贼藻则泽蚤灶蚤灶糟蚤责蚤藻灶贼造蚤灶藻泽燥枣贼澡藻糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽咱允暂援郧猿渊月藻贼澡藻泽凿葬冤袁圆园员圆袁圆渊圆冤院员缘苑原员远缘援咱苑暂摇蕴藻增赠砸袁酝燥贼贼砸云袁陨则葬择蚤云粤袁藻贼葬造援悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽皂蚤糟藻蚤灶葬早藻灶藻贼蚤糟葬泽泽燥糟蚤葬贼蚤燥灶泽贼怎凿赠则藻增藻葬造灶藻憎糟葬灶凿蚤凿葬贼藻早藻灶藻泽枣燥则遭燥灶藻皂蚤糟则燥葬则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻咱允暂援月酝悦郧藻灶燥皂蚤糟泽袁圆园员缘袁员远渊员冤院员园员猿援咱愿暂摇粤贼葬皂灶蚤匀允袁酝燥贼贼砸袁杂燥造造藻则酝袁藻贼葬造援匀蚤早澡鄄枣葬贼鄄凿蚤藻贼蚤灶凿怎糟藻凿 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼燥枣蚤灶糟则藻葬泽藻凿枣葬泽贼蚤灶早早造怎糟燥泽藻造藻增藻造泽葬灶凿蚤皂责葬蚤则藻凿则藻泽责燥灶泽藻贼燥蚤灶贼则葬责藻则蚤贼燥灶藻葬造早造怎糟燥泽藻糟澡葬造造藻灶早藻蚤灶贼澡藻糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽皂燥怎泽藻早藻灶藻贼蚤糟则藻枣藻则藻灶糟藻责燥责怎造葬贼蚤燥灶咱允暂援月酝悦郧藻灶藻贼袁圆园员远袁员苑院员园援咱怨暂摇宰藻藻则葬泽藻噪藻则葬蕴再袁月葬造皂藻则蕴粤袁砸葬皂砸袁藻贼葬造援悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶燥枣砸藻贼蚤灶葬造灾葬泽糟怎造葬则葬灶凿晕藻怎则葬造阅葬皂葬早藻蚤灶葬晕燥增藻造酝燥凿藻造燥枣阅蚤葬遭藻贼蚤糟砸藻贼蚤灶燥责葬贼澡赠咱允暂援陨灶增藻泽贼蚤早葬贼蚤增藻韵责澡贼澡葬造皂燥造燥早赠驭灾蚤泽怎葬造杂糟蚤藻灶糟藻袁圆园员缘袁缘远渊远冤院猿苑圆员原猿苑猿园援咱员园暂摇砸怎贼造藻凿早藻匀袁粤赠造燥则阅蕴袁悦葬则责藻灶贼藻则阅耘袁藻贼葬造援郧藻灶藻贼蚤糟则藻早怎造葬贼蚤燥灶燥枣在枣责猿园袁悦载悦蕴员袁葬灶凿灶藻怎贼则燥责澡蚤造蚤糟蚤灶枣造葬皂皂葬贼蚤燥灶蚤灶皂怎则蚤灶藻造怎灶早咱允暂援郧藻灶藻贼蚤糟泽袁圆园员源袁员怨愿渊圆冤院苑猿缘原苑源缘援咱员员暂摇悦澡燥憎悦再袁宰葬灶早载袁砸蚤糟糟葬则凿蚤阅袁藻贼葬造援栽澡藻早藻灶藻贼蚤糟葬则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻燥枣贼澡藻早藻灶燥皂藻鄄憎蚤凿藻贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶葬造则藻泽责燥灶泽藻贼燥耘砸泽贼则藻泽泽蚤灶贼澡藻皂燥怎泽藻咱允暂援孕造燥泽郧藻灶藻贼蚤糟泽袁圆园员缘袁员员渊圆冤院藻员园园源怨圆源援援咱员圆暂摇云藻则早怎泽燥灶月袁砸葬皂砸袁匀葬灶凿燥噪燥匀再袁藻贼葬造援酝藻造葬灶燥皂葬泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠葬泽葬糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼院早藻灶藻贼蚤糟增葬则蚤葬贼蚤燥灶糟燥灶贼则燥造泽葬造造泽贼葬早藻泽燥枣贼怎皂燥则责则燥早则藻泽泽蚤燥灶咱允暂援韵灶糟燥早藻灶藻袁圆园员缘袁猿源渊圆圆冤院圆愿苑怨原圆愿愿远援咱员猿暂摇蕴燥则藻晕陨袁陨则葬择蚤云粤袁月则葬早燥灶扎蚤粤援匀燥泽贼早藻灶藻贼蚤糟凿蚤增藻则泽蚤贼赠蚤灶枣造怎藻灶糟藻泽贼澡藻泽藻增藻则蚤贼赠燥枣孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽葬藻则怎早蚤灶燥泽葬责灶藻怎皂燥灶蚤葬蚤灶贼澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂蚤糟藻咱允暂援月酝悦郧藻灶藻贼袁圆园员缘袁员远院员园远援咱员源暂摇灾藻则藻凿运袁阅怎则则葬灶贼悦袁酝燥贼贼砸袁藻贼葬造援杂怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥噪造藻遭泽蚤藻造造葬责灶藻怎皂燥灶葬蚤藻蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶蚤灶糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽皂蚤糟藻蚤泽葬 糟燥皂责造藻曾贼则葬蚤贼糟燥灶贼则燥造造藻凿遭赠葬贼造藻葬泽贼贼澡则藻藻造燥糟蚤葬糟贼蚤灶早葬贼凿蚤枣枣藻则藻灶贼贼蚤皂藻责燥蚤灶贼泽咱允暂援月皂糟郧藻灶燥皂蚤糟泽袁圆园员源袁员缘渊员冤院圆缘原源远援咱员缘暂摇郧则葬造蚤灶泽噪蚤蕴耘袁云藻则则蚤泽酝栽袁粤赠造燥则阅蕴袁藻贼葬造援郧藻灶燥皂藻宰蚤凿藻陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣杂粤砸杂鄄悦燥灾杂怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠蕴燥糟蚤哉泽蚤灶早贼澡藻悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽咱允暂援孕造燥泽郧藻灶藻贼蚤糟泽袁圆园员缘袁员员渊员园冤院藻员园园缘缘园源援咱员远暂摇阅怎则则葬灶贼悦袁栽葬赠藻皂匀袁再葬造糟蚤灶月袁藻贼葬造援悦燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻悦则燥泽泽皂蚤糟藻葬灶凿贼澡藻蚤则责燥憎藻则贼燥皂葬责澡燥泽贼泽怎泽糟藻责贼蚤遭蚤造蚤贼赠贼燥蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶援圆园员员咱允暂援郧藻灶藻贼蚤糟泽袁圆园员圆袁员怨园渊圆冤院猿愿怨原源园员援咱员苑暂摇郧藻造蚤灶葬泽砸援袁悦澡藻泽造藻则耘允袁灾葬泽糟燥灶糟藻造燥泽阅袁藻贼葬造援粤早藻灶藻贼蚤糟葬责责则燥葬糟澡贼燥贼澡藻责则藻凿蚤糟贼蚤燥灶燥枣凿则怎早泽蚤凿藻藻枣枣藻糟贼泽院遭造藻燥皂赠糟蚤灶蚤灶凿怎糟藻泽糟燥灶糟燥则凿葬灶贼责澡藻灶燥贼赠责藻泽蚤灶皂蚤糟藻燥枣贼澡藻糟燥造造葬遭燥则葬贼蚤增藻糟则燥泽泽咱允暂援孕澡葬则皂葬糟燥早藻灶燥皂蚤糟泽驭孕藻则泽燥灶葬造蚤扎藻凿酝藻凿蚤糟蚤灶藻袁圆园员员袁源院猿缘原源缘援咱员愿暂摇悦则燥憎造藻赠允允袁运蚤皂再袁蕴藻灶葬则糟蚤糟粤月袁藻贼葬造援郧藻灶藻贼蚤糟泽燥枣葬凿增藻则泽藻则藻葬糟贼蚤燥灶泽贼燥澡葬造燥责藻则蚤凿燥造蚤灶葬皂燥怎泽藻凿蚤葬造造藻造院葬凿则怎早鄄责造葬糟藻遭燥藻曾责藻则蚤皂藻灶贼葬灶凿月葬赠藻泽蚤葬灶糟葬怎泽葬造葬灶葬造赠泽蚤泽咱允暂援郧藻灶藻贼蚤糟泽袁圆园员猿袁员怨远渊员冤院猿圆员原猿源苑援也修回日期页圆园员远原园苑原园缘

39 圆园员远年愿月第圆远卷摇第愿期 中国比较医学杂志悦匀陨晕耘杂耘允韵哉砸晕粤蕴韵云悦韵酝孕粤砸粤栽陨灾耘酝耘阅陨悦陨晕耘 粤怎早怎泽贼袁圆园员远灾燥造援圆远摇晕燥援愿 藡 蕥 蕥蕥蕥蕥藡研究报告 蕥蕥蕥蕥藡 蕥藡 巴贝西虫感染黑线仓鼠生物学特性的变化 叶摇 员莉袁马摇 圆员袁猿员袁猿员员帅袁王昱佳袁郑珺文袁王冬平袁李桂军袁 员员源员范君文袁时彦胜袁张小飞袁白杰英 渊员援军事医学科学院实验动物中心袁北京摇员园园园苑员曰圆援北京农业质量标准与检测技术研究中心袁北京摇员园园园怨苑曰猿援首都师范大学生物系袁北京摇员园园园源愿曰源援北京市兽药监察所袁北京摇员园圆远园园冤 摇摇揖摘要铱摇目的摇建立巴贝西虫感染的黑线仓鼠模型袁明确感染后黑线仓鼠生物学特性的变化规律袁为巴贝西虫病的检测与防治提供基础数据资料遥方法摇腹腔注射含巴贝西虫的血液感染黑线仓鼠袁感染的第园尧圆尧源尧远尧愿尧员园尧员圆尧员源尧员远尧圆猿尧猿园尧猿苑天每次取缘只动物采集抗凝血和全血袁制备血涂片袁通过吉姆萨染色检测虫体繁殖情况曰分离血液总阅晕粤袁用砸耘粤蕴鄄栽陨酝耘孕悦砸检测巴贝西虫的在宿主体内的繁殖规律曰用全自动生理生化检测仪测定血液生理生化指标曰处死动物后分别采集心尧肝尧脾尧肺尧肾等器官袁称重测定脏器系数曰用耘蕴陨杂粤法检测感染动物血清中陨蕴鄄圆浓度遥结果摇感染后第源天黑线仓鼠体内的巴贝西虫数量最多袁之后整体呈下降趋势袁在第员圆天有一个短暂升高遥感染动物的脏器系数变化最大的属于肝脏和脾脏袁心尧肺和肾脏系数在整个感染期内稍有波袁均在正常值范围内遥感染动物的血细胞均有波动袁在第员园尧圆猿天两次达峰值袁其中白细胞变化最为剧烈曰检测到变化的血液生化指标在第员圆天达峰值遥感染动物血清中的陨蕴鄄圆在第员园天达峰值袁之后连续下降遥结论摇感染巴贝西虫的黑线仓鼠具有典型的蜱传寄生虫病特点袁病原侵入一周内达繁殖顶峰袁且病原可在宿主体内长期潜伏遥宿主免疫响应在第圆周达到峰值袁与免疫相关的脏器及血细胞有明显的应激反应遥据此袁可有针对性的开展巴贝西虫病的诊断与防治遥揖关键词铱摇巴贝西虫曰黑线仓鼠曰脏器系数曰细胞因子揖中图分类号铱砸鄄猿猿摇摇揖文献标识码铱粤摇摇揖文章编号铱员远苑员鄄苑愿缘远渊圆园员远冤园愿鄄园园猿远鄄园远凿燥蚤院员园郾猿怨远怨援躁援蚤泽泽灶援员远苑员原苑愿缘远郾圆园员远郾园愿郾园园缘 月蚤燥造燥早蚤糟葬造糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽燥枣悦澡蚤灶藻泽藻澡葬皂泽贼藻则蚤灶枣藻糟贼藻凿憎蚤贼澡月葬遭藻泽蚤葬 员圆员袁猿员袁猿员再耘蕴蚤袁酝粤杂澡怎葬蚤袁宰粤晕郧再蚤鄄躁蚤葬袁在匀耘晕郧允怎灶鄄憎藻灶袁宰粤晕郧阅燥灶早鄄责蚤灶早袁员员员源员蕴陨郧怎蚤鄄躁怎灶袁云粤晕允怎灶鄄憎藻灶袁杂匀陨再葬灶鄄泽澡藻灶早袁在匀粤晕郧载蚤葬燥鄄枣藻蚤袁月粤陨允蚤藻鄄赠蚤灶早渊员援蕴葬遭燥则葬贼燥则赠粤灶蚤皂葬造悦藻灶贼藻则袁粤糟葬凿藻皂赠燥枣酝蚤造蚤贼葬则赠酝藻凿蚤糟葬造杂糟蚤藻灶糟藻泽袁月藻蚤躁蚤灶早员园园园苑员袁悦澡蚤灶葬曰圆援月藻蚤躁蚤灶早砸藻泽藻葬则糟澡悦藻灶贼藻则枣燥则粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造杂贼葬灶凿葬则凿泽葬灶凿栽藻泽贼蚤灶早袁月藻蚤躁蚤灶早员园园园怨苑曰猿援悦葬责蚤贼葬造晕燥则皂葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁月藻蚤躁蚤灶早员园园园源愿曰源援月藻蚤躁蚤灶早陨灶泽贼蚤贼怎贼藻燥枣灾藻贼藻则蚤灶葬则赠阅则怎早悦燥灶贼则燥造袁月藻蚤躁蚤灶早员园圆远园园冤 摇摇揖粤遭泽贼则葬糟贼铱摇韵遭躁藻糟贼蚤增藻摇栽燥藻泽贼葬遭造蚤泽澡葬悦澡蚤灶藻泽藻澡葬皂泽贼藻则皂燥凿藻造燥枣遭葬遭藻泽蚤葬蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶袁贼燥枣蚤灶凿贼澡藻糟澡葬灶早蚤灶早责葬贼贼藻则灶燥枣燥则早葬灶泽葬灶凿遭蚤燥糟澡藻皂蚤糟葬造责葬则葬皂藻贼藻则泽蚤灶悦澡蚤灶藻泽藻澡葬皂泽贼藻则蚤灶枣藻糟贼藻凿憎蚤贼澡月葬遭藻泽蚤葬袁葬灶凿贼燥责则燥皂燥贼藻贼澡藻凿藻贼藻糟贼蚤燥灶葬灶凿贼则藻葬贼皂藻灶贼燥枣 咱基金项目暂国家自然科学基金面上项目渊猿员圆苑圆猿愿缘冤曰野十二五冶重大专项渊圆园员员在载允园怨圆园员原园猿员冤曰北京市自然科学基金面上项目渊缘员缘圆园圆猿冤曰病原微生物生物安全国家重点实验室开放课题渊杂运蕴孕月杂员源猿缘冤曰军事医学科学院创新基金渊圆园员圆悦载允允园圆圆冤曰后勤野十二五冶面上项目渊悦宰杂员员允园怨圆冤遥咱作者简介暂叶渊员怨愿愿原冤袁女袁研究实习员袁研究方向院人兽共患疾病模型袁耘鄄皂葬蚤造院员愿园远远园源缘缘猿圆岳员远猿援糟燥皂曰马帅渊员怨怨园原冤袁女袁助理研究员袁耘鄄皂葬蚤造院皂葬泽澡怎葬蚤员怨愿怨园怨圆远岳员圆远援糟燥皂遥叶莉和马帅为本文共同第一作者遥咱通讯作者暂张小飞渊员怨苑愿原冤袁女袁副研究员袁研究方向院兽药安全与检测袁耘鄄皂葬蚤造院憎葬灶早赠蚤扎曾枣岳员远猿援糟燥皂曰白杰英渊员怨苑苑原冤袁男袁袁副研究员袁硕士生导师袁研究方向院人兽共患感染性疾病致病机理袁耘鄄皂葬蚤造院遭葬蚤躁蚤藻赠蚤灶早岳员圆远援糟燥皂遥

40 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 猿苑 遭葬遭藻泽蚤燥泽蚤泽援酝藻贼澡燥凿泽摇匀藻葬造贼澡赠缘鄄憎藻藻噪燥造凿悦澡蚤灶藻泽藻澡葬皂泽贼藻则泽憎藻则藻蚤灶枣藻糟贼藻凿遭赠蚤灶贼则葬责藻则蚤贼燥灶藻葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶燥枣遭造燥燥凿糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早月葬遭藻泽蚤葬援月造燥燥凿泽葬皂责造藻泽憎藻则藻糟燥造造藻糟贼藻凿葬贼园袁圆袁源袁远袁愿袁员园袁员圆袁员源袁员远袁圆猿袁猿园袁葬灶凿猿苑凿葬赠泽葬枣贼藻则蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶枣则燥皂缘澡葬皂泽贼藻则泽葬贼藻葬糟澡贼蚤皂藻责燥蚤灶贼援月造燥燥凿泽皂藻葬则泽憎藻则藻责则藻责葬则藻凿贼燥凿藻贼藻糟贼贼澡藻责葬则葬泽蚤贼藻泽怎泽蚤灶早郧蚤藻皂泽葬泽贼葬蚤灶蚤灶早援耘蕴陨杂粤葬泽泽葬赠憎葬泽藻皂责造燥赠藻凿贼燥贼藻泽贼贼澡藻陨蕴鄄圆糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶援栽澡藻遭造燥燥凿遭蚤燥糟澡藻皂蚤糟葬造蚤灶凿藻曾藻泽憎藻则藻凿藻贼藻糟贼藻凿怎泽蚤灶早葬灶葬怎贼燥皂葬贼蚤糟遭蚤燥糟澡藻皂蚤糟葬造葬灶葬造赠扎藻则援阅晕粤憎葬泽藻曾贼则葬糟贼藻凿枣则燥皂贼澡藻憎澡燥造藻遭造燥燥凿葬灶凿砸耘粤蕴鄄栽陨酝耘砸悦砸憎葬泽责藻则枣燥则皂藻凿贼燥凿藻贼藻则皂蚤灶藻贼澡藻则藻责则燥凿怎糟贼蚤燥灶燥枣月葬遭藻泽蚤葬援粤枣贼藻则贼贼澡藻葬灶蚤皂葬造泽憎藻则藻泽葬糟则蚤枣蚤糟藻凿袁贼澡藻澡藻葬则贼袁造怎灶早袁泽责造藻藻灶袁造蚤增藻则袁葬灶凿噪蚤凿灶藻赠憎藻则藻贼葬噪藻灶贼燥葬灶葬造赠扎藻贼澡藻糟澡葬灶早藻泽燥枣燥则早葬灶糟燥藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼泽援砸藻泽怎造贼泽摇栽澡藻澡蚤早澡藻泽贼造藻增藻造燥枣月葬遭藻泽蚤葬蚤灶贼澡藻澡葬皂泽贼藻则泽燥糟糟怎则则藻凿燥灶凿葬赠源葬枣贼藻则贼澡藻月葬遭藻泽蚤葬蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶袁贼澡葬灶凿贼澡藻灶泽澡燥憎蚤灶早葬凿藻糟则藻葬泽蚤灶早贼藻灶凿藻灶糟赠援匀燥憎藻增藻则袁贼澡藻则藻憎葬泽葬贼则葬灶泽蚤藻灶贼蚤灶糟则藻葬泽藻燥灶贼澡藻员圆凿葬赠葬枣贼藻则蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶援栽澡藻造蚤增藻则葬灶凿泽责造藻藻灶凿蚤泽责造葬赠藻凿皂燥泽贼藻曾贼藻灶泽蚤增藻则藻泽责燥灶泽藻贼燥贼澡藻蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶泽澡燥憎蚤灶早澡藻责葬贼燥皂藻早葬造赠葬灶凿泽责造藻灶燥皂藻早葬造赠袁遭怎贼贼澡藻增葬则蚤葬贼蚤燥灶燥枣澡藻葬则贼葬灶凿噪蚤凿灶藻赠泽糟燥藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼泽憎葬泽憎蚤贼澡蚤灶贼澡藻灶燥则皂援栽澡藻则藻憎藻则藻责则燥皂蚤灶藻灶贼糟澡葬灶早藻泽燥枣遭造燥燥凿糟藻造造泽袁藻泽责藻糟蚤葬造造赠造藻怎糟燥糟赠贼藻泽袁憎蚤贼澡贼憎燥责藻葬噪泽葬贼凿葬赠员园葬灶凿圆猿葬枣贼藻则贼澡藻月葬遭藻泽蚤葬蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶援栽澡藻责藻葬噪糟澡葬灶早藻泽燥枣遭造燥燥凿遭蚤燥糟澡藻皂蚤糟葬造蚤灶凿藻曾藻泽燥糟糟怎则则藻凿葬贼凿葬赠员圆葬枣贼藻则蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶援栽澡藻糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶燥枣泽藻则怎皂陨蕴鄄圆则藻葬糟澡藻凿葬责藻葬噪燥灶贼澡藻员园贼澡凿葬赠葬枣贼藻则蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶援悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶泽摇栽澡藻悦澡蚤灶藻泽藻澡葬皂泽贼藻则泽凿蚤泽责造葬赠贼赠责蚤糟葬造糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽燥枣贼蚤糟噪鄄遭燥则灶藻凿蚤泽藻葬泽藻泽泽怎糟澡葬泽澡藻责葬贼燥皂藻早葬造赠葬灶凿泽责造藻灶燥皂藻早葬造赠援栽澡藻蚤皂皂怎灶燥造燥早蚤糟葬造泽赠泽贼藻皂蚤泽葬糟贼蚤增葬贼藻凿葬造燥灶早憎蚤贼澡贼澡藻蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶葬灶凿则藻葬糟澡藻泽葬澡蚤早澡藻泽贼泽贼葬早藻蚤灶贼澡藻泽藻糟燥灶凿憎藻藻噪援粤枣贼藻则憎葬则凿泽贼澡藻月葬遭藻泽蚤葬糟葬灶造蚤增藻蚤灶贼澡藻澡葬皂泽贼藻则遭燥凿赠枣燥则葬造燥灶早责藻则蚤燥凿燥枣贼蚤皂藻援栽澡藻则藻泽怎造贼泽燥枣贼澡蚤泽泽贼怎凿赠责则燥增蚤凿藻怎泽藻枣怎造蚤灶枣燥则皂葬贼蚤燥灶泽怎责责燥则贼蚤灶早枣怎则贼澡藻则泽贼怎凿蚤藻泽燥灶贼澡藻凿藻贼藻糟贼蚤燥灶袁贼则藻葬贼皂藻灶贼葬灶凿责则藻增藻灶贼蚤燥灶燥枣月葬遭藻泽蚤燥泽蚤泽援揖运藻赠憎燥则凿泽铱摇月葬遭藻泽蚤葬曰月葬遭藻泽蚤燥泽蚤泽曰悦澡蚤灶藻泽藻澡葬皂泽贼藻则曰韵则早葬灶糟燥藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼泽曰月造燥燥凿遭蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠曰陨造鄄圆 摇摇近年来袁随着杂粤砸杂尧禽流感尧酝耘砸杂及在陨运粤等各种新发或再发的人兽共患感染性疾病不断危害公众健康袁对于病原微生物的研究再次成为科学研究热点袁这其中也包括对于巴贝西虫等原虫类寄生虫的研究遥巴贝西虫是一类寄生于宿主红细胞内咱员暂的原虫袁一般经蜱虫叮咬传播袁属于蜱传寄生虫遥巴贝西虫病具有典型的寄生虫病症状袁常见虫种包括双芽巴贝西虫渊月援遭蚤早藻皂蚤灶葬冤尧牛巴贝西虫渊月援遭燥增蚤泽冤尧马巴贝西虫渊月援藻择怎蚤冤尧鼠巴贝西虫渊月援咱圆袁猿暂皂蚤糟则燥贼蚤冤和犬巴贝西虫渊月援糟葬灶蚤泽冤等袁该类寄生虫可引起马尧牛尧羊尧猪和犬等多种动物的巴贝西虫病遥个别虫种可引起人的感染袁人感染巴贝西虫后的症状主要表现为发热尧寒战尧溶血性贫血尧头痛尧咽痛尧肌肉痛尧关节痛和脾肿大等遥免疫力低下的人和动物更易感染巴贝西虫袁而且会表现出较严重咱源暂的症状袁且长时间不能自愈袁甚至危及生命遥巴贝西虫感染动物模型的创制已有相关报道袁卢艳等渊圆园员圆年冤建立了田鼠巴贝西虫感染的小鼠模型袁比较和分析了感染田鼠巴贝西虫的雌性月粤蕴月辕糟小鼠尧免疫抑制月粤蕴月辕糟小鼠尧雄性杂悦陨阅小鼠和晕韵阅鄄杂悦陨阅小鼠的感染率和虫体分布等数咱缘暂据遥但用免疫抑制或者缺陷动物作为模型袁对于病原与机体相互作用的研究有诸多不足袁因此袁筛选正常动物创制寄生虫感染模型是一件非常重要的工作遥本研究拟以黑线仓鼠为目标动物开展巴贝西虫感染研究遥作者单位具有自主培育的黑线仓鼠及其白化突变系袁课题组前期对黑线仓鼠的生 咱远暂理生化指示及其特性进行了详细的比较分析曰开展旋毛虫感染黑线仓鼠的实验研究袁确定黑线仓鼠是良好的寄生虫感染模型袁在动物模型的制备和免咱苑暂疫响应方面都优于同类动物遥本研究拟建立巴贝西虫感染的黑线仓鼠模型袁重点分析黑线仓鼠感染巴贝西虫后生物学特性的变化袁免疫应答启动的过程及反应程度袁从而深入了解巴贝西虫感染后宿主免疫应答响应机制遥 员摇 材料和方法 员郾员摇实验动物清洁级黑线仓鼠圆园园只袁缘周龄袁雌雄各半袁由军事医学科学院实验动物中心提供咱杂悦载运鄄渊军冤圆园员圆鄄园园园源暂袁动物饲养与实验在军事医学科学院实验动物中心动物实验室完成咱杂再载运鄄渊军冤圆园员圆鄄园园圆员暂遥实验过程中对动物的处置符合科技部颁布的叶关于善待实验动物的指导性意见曳要求袁按猿砸原则给予人道关怀遥员郾圆摇仪器和材料陨蕴鄄圆耘蕴陨杂粤噪蚤贼渊上海西唐冤曰杂再月砸孕则藻皂蚤曾耘曾栽葬择栽酝陨陨渊匝蚤葬早藻灶冤曰阅晕粤皂葬则噪藻则渊康为世纪冤曰血液阅晕粤提取试剂盒渊天根生物冤曰血液生理生化与血细胞检测试剂渊月葬糟噪皂葬灶冤遥一次性注射器尧离心管尧枪头尧摄子尧手术钳等耗材均从军事医学科学院科技部条件处器材供应站领取遥仪器主要有二氧化碳培养箱渊匀藻葬造枣燥则糟藻冤尧显微镜渊晕蚤噪燥灶冤尧酶标仪渊砸葬赠贼燥冤尧微量核酸蛋白测定仪渊晕阅圆园园园冤尧电子天秤

41 猿愿中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 渊杂葬则贼燥则蚤怎泽冤和则藻葬造鄄贼蚤皂藻孕悦砸扩增仪渊月蚤燥鄄砸葬凿冤尧全自动血液生理生化分析仪渊月葬糟噪皂葬灶冤遥巴贝西虫获赠于军事医学院微生物流行病研究所刘玮研究员袁虫体保存在经血液感染的杂悦陨阅鼠中袁每两周经皮下注射感染血液传代员次遥员郾猿摇实验方法员郾猿郾员摇巴贝西虫感染黑线仓鼠院检测感染巴贝西虫的杂悦陨阅种鼠袁其红细胞巴贝西虫感染率大于缘园豫时渊约远缘豫冤袁用乙醚麻醉后立刻打开胸腔袁用员皂蕴注射器直接抽取心脏血袁注入含乙二胺四乙酸钠渊耘阅栽粤鄄晕葬冤的离心管中遥按员院员比例与园郾怨豫生理盐水混合后袁立刻腹腔注射黑线仓鼠袁每只动物注射圆园园滋蕴抗凝血辕生理盐水混合物遥动物接种当天记为第园天渊第园天冤袁接种次日开始观察记为第员天渊阅员冤袁依次记为阅圆尧阅猿尧阅源尧阅缘噎噎遥员郾猿郾圆摇巴贝西虫感染率的测定院眼球采血制备血涂片袁用吉姆萨染色法进行镜检袁确定受试动物体内寄生虫的存在遥同时袁用则藻葬造鄄贼蚤皂藻孕悦砸法检测巴贝西虫的感染率遥取抗凝血园郾员皂蕴袁提取基因组阅晕粤作为模板遥根据郧藻灶遭葬灶噪上巴贝西虫员愿杂则砸晕粤的序列设计引物袁内参为茁鄄葬糟贼蚤灶遥巴贝西虫的上下游引物序列分别为院缘鄄悦栽栽粤郧栽粤栽粤粤郧悦栽栽栽栽粤栽粤悦粤郧悦鄄猿和缘鄄粤栽粤郧郧栽悦粤郧粤粤粤悦栽栽郧粤粤栽郧粤栽粤悦粤鄄猿曰茁鄄葬糟贼蚤灶上下游引物序列分别为缘鄄粤郧栽郧栽悦悦悦粤粤悦粤栽悦悦悦粤郧悦鄄猿和缘鄄郧栽郧粤悦粤悦悦郧栽悦悦悦悦粤郧粤粤栽鄄猿袁扩增产物长度圆猿愿遭责遥反应条件院预变性怨缘益员皂蚤灶袁变性怨源益源园泽袁退火缘苑益源园泽袁循环源园次曰溶解曲线院怨缘益员皂蚤灶袁缘苑益员皂蚤灶袁循环员员怨次渊每隔园郾猿益采集员次荧光信号冤袁至怨源郾远益渊表员冤遥使用仪器自身携带的软件收集分析所有样品袁都在同一块板中做猿次重复袁数值以軃曾依泽表示遥表员摇荧光定量孕悦砸反应体系栽葬遭援员摇砸藻葬糟贼蚤燥灶泽赠泽贼藻皂燥枣贼澡藻则藻葬造鄄贼蚤皂藻枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻孕悦砸孕悦砸组分体积灾燥造怎皂藻圆营杂再月砸孕则藻皂蚤曾苑郾缘滋蕴上游引物员滋蕴下游引物员滋蕴 早阅晕粤模板 员滋蕴 砸晕葬泽藻枣则藻藻匀圆韵 源郾缘滋蕴 合计栽燥贼葬造 员缘滋蕴 员郾猿郾猿摇感染动物脏器系数的计算院处死动物后袁采取其心尧肝尧脾尧肺尧肾等相应脏器袁用园郾员豫孕月杂缓冲液冲洗掉血渍袁在吸水纸上轻轻吸干残余水渍袁放到电子天秤上称量遥脏器系数越脏器重量辕动物 体重遥 员郾猿郾源摇 血液生理生化值的测定院取全血约园郾圆皂蕴袁 室温员缘园园则辕皂蚤灶离心员园皂蚤灶袁取上清液即血清袁用 于测定血液生理生化值曰另取全血园郾圆皂蕴用全自动 血细胞分析仪测定实验动物的血细胞的变化袁对照 参数为地鼠专用数据遥 员郾猿郾缘摇 细胞因子变化分析院将抗小鼠陨蕴鄄圆单抗包 被于酶标板上袁标准品和样品中的陨蕴鄄圆与单抗相结 合袁加入生物素化的抗小鼠陨蕴鄄圆袁形成免疫复合连接 在板上袁辣根过氧化物酶标记的杂贼则藻责贼葬增蚤凿蚤灶与生物 素相结合袁加入底物工作液后显蓝色袁最后加终止 液袁测定源缘园灶皂粤值袁绘制标准曲线计算标本中陨蕴鄄 圆的浓度遥 圆摇 圆郾员摇 圆郾员郾员摇 结果分析 巴贝西虫感染情况检测 镜检院感染第圆天起袁用显微镜观察到血涂 片上细胞中的巴贝西虫渊图员冤袁虫体呈半月形或者 弯钩形袁个别呈梨形环遥 图员摇镜检发现黑线仓鼠红细胞中的巴贝西虫员园园伊云蚤早援员摇月葬遭藻泽蚤葬蚤灶贼澡藻藻则赠贼澡则燥糟赠贼藻泽燥枣悦澡蚤灶藻泽藻澡葬皂泽贼藻则燥遭泽藻则增藻凿怎灶凿藻则贼澡藻皂蚤糟则燥泽糟燥责藻援粤则则燥憎泽蚤灶凿蚤糟葬贼藻贼澡藻责葬则葬泽蚤贼藻泽蚤灶藻则赠贼澡则燥糟赠贼藻泽援员园园伊圆郾员郾圆摇砸藻葬造鄄贼蚤皂藻孕悦砸检测院提取的阅晕粤用 晕阅圆园园园微量核酸蛋白测定仪测定粤圆远园辕粤圆愿园值袁 各组样品粤圆远园辕粤圆愿园的值在员郾愿耀圆郾园之间袁纯度较好遥巴贝西虫与茁鄄葬糟贼蚤灶的扩增曲线均较为平滑袁没有出现非正常的数值偏移袁二者融解曲线分别愿圆益和愿远益时有单一峰出现袁判断为目的峰渊图圆冤遥通过公式计算可以看出袁巴贝西虫在感染后的第圆天即可达到较高感染率袁在第源天达到整个感

42 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 猿怨 染期的峰值渊图猿冤遥在感染的前两周内都保持较高 的感染率袁自第猿周开始急剧下降遥 粤院样品阅圆鄄阅猿苑的扩增曲线遥月院样品阅圆鄄阅猿苑的融解曲线图圆摇巴贝西虫与茁鄄葬糟贼蚤灶的则藻葬造鄄贼蚤皂藻孕悦砸扩增与融解曲线粤院粤皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣贼澡藻泽葬皂责造藻阅圆鄄阅猿苑援月院阅蚤泽泽燥糟蚤葬贼蚤燥灶糟怎则增藻泽燥枣贼澡藻泽葬皂责造藻阅圆鄄阅猿苑援云蚤早援圆摇粤皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶葬灶凿凿蚤泽泽燥糟蚤葬贼蚤燥灶糟怎则增藻泽燥枣月葬遭藻泽蚤泽葬灶凿茁鄄葬糟贼蚤灶蚤灶则藻葬造鄄贼蚤皂藻孕悦砸 感染率越巴贝西虫悦栽平均值辕茁鄄葬糟贼蚤灶悦栽平均值遥图猿摇感染期间巴贝西虫感染率的变化趁势渊则藻葬造鄄贼蚤皂藻孕悦砸结果冤栽澡藻蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶则葬贼藻越葬增藻则葬早藻悦栽增葬造怎藻泽燥枣月葬遭藻泽蚤葬辕葬增藻则葬早藻悦栽增葬造怎藻泽燥枣茁鄄葬糟贼蚤灶援云蚤早援猿摇栽藻灶凿藻灶糟赠燥枣贼澡藻糟澡葬灶早藻泽燥枣蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶则葬贼藻燥枣月葬遭藻泽蚤葬凿藻贼藻糟贼藻凿遭赠则藻葬造鄄贼蚤皂藻孕悦砸圆郾圆摇黑线仓鼠脏器系数的变化黑线仓鼠受巴贝西虫感染后袁其心尧肝尧脾尧肺尧肾等脏器系数均有不同程度的变化遥但是变化最为明显的是肝脏和脾脏遥肝脏在感染的前猿周有猿次波动袁每周都有员个峰值袁自第三周后便开始持续下降渊图源粤冤遥而脾脏系数在第员周相对稳定袁在阅源天稍有升高袁从第圆周开始渊第员园天冤至第猿周渊第员远天冤有两次峰值袁且一次比一次变化大袁在第猿周的第员远天达高大值袁之后便持续下降渊图源月冤遥圆郾猿摇黑线仓鼠血液生理生化值的变化圆郾猿郾员摇血液生化指标的变化院对血液中的总蛋白尧碱性磷酸酶尧胆固醇尧尿酸尧血糖尧淀粉酶尧谷草转氨 酶和甘油三酯等生化指标进行了测定遥其中袁总蛋白尧碱性磷酸酶和胆固醇没有明显变化袁而后面五个生化指标都呈现了相同的变化趋势遥淀粉酶在 第前两周分别有两次升高袁在第猿周渊第员圆天冤达峰值渊图缘冤曰谷草转氨酶在感染后的第圆天即迅速升高袁但随即下降袁在感染后的第猿周渊第员圆天冤达峰值渊图缘冤曰甘油三酯尧血糖和尿酸在感染后无明显变化袁直到第猿周渊第员圆天冤升高至最大值袁之后回复到原来状态渊图缘冤遥从图缘可以看出袁所有呈现变化的血液生化指标均在感染后的第三周渊第员圆天冤上升至最大值袁之后回复原状遥圆郾猿郾圆摇血液生理指标的变化院全自动生理生化测定仪共检测了圆圆项生理指标袁其中有明显变化的共有远个袁包括白细胞尧红细胞尧淋巴细胞尧嗜酸性粒细胞尧血红蛋白和中性粒细胞遥统计分析发现袁白细胞与红细胞的变化趋势相同袁感染后每周的细胞计数都有波动袁第圆周渊第员园天冤达到峰值渊图远冤曰而淋巴细胞尧嗜酸性粒细胞尧血红蛋白和中性粒细胞则有多次波动袁在第圆周渊第愿天冤达峰值渊图远冤遥圆郾源摇感染动物细胞因子的变化巴贝西虫感染黑线仓鼠血清陨蕴鄄圆含量的变化如图苑所示遥感染后第圆天陨蕴鄄圆便升高袁之后持续升高袁第圆周渊第员园天冤达峰值袁自第猿周后便恢复到正常状态遥 猿摇 讨论 巴贝西虫是一类微小的寄生虫袁直径约员耀缘咱愿暂滋皂袁主要侵袭宿主的红细胞遥已知此类寄生虫在生命周期中有两个宿主院蜱和各种脊椎动物遥其中

43 源园中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 粤院心尧肝尧脾尧肺和肾脏系数变化趋势曰月院肾脏系数变化趋势遥图源摇巴贝西虫感染黑线仓鼠脏器系数变化图粤院栽藻灶凿藻灶糟赠燥枣贼澡藻糟澡葬灶早藻泽燥枣澡藻葬则贼袁造蚤增藻则袁泽责造藻藻灶袁造怎灶早葬灶凿噪蚤凿灶藻赠糟燥藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼泽援月院栽藻灶凿藻灶糟赠燥枣贼澡藻糟澡葬灶早藻泽燥枣噪蚤凿灶藻赠糟燥藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼援云蚤早援源摇悦澡葬灶早藻泽燥枣燥则早葬灶糟燥藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼泽蚤灶贼澡藻悦澡蚤灶藻泽藻澡葬皂泽贼藻则蚤灶枣藻糟贼藻凿憎蚤澡月葬遭藻泽蚤葬 图缘摇巴贝西虫感染黑线仓鼠生化指标变化趋势图云蚤早援缘摇栽藻灶凿藻灶糟赠燥枣贼澡藻糟澡葬灶早藻泽燥枣遭蚤燥糟澡藻皂蚤糟葬造糟燥皂责燥灶藻灶贼泽蚤灶贼澡藻悦澡蚤灶藻泽藻澡葬皂泽贼藻则蚤灶枣藻糟贼藻凿憎蚤贼澡月葬遭藻泽蚤葬 图远摇巴贝西虫感染黑线仓鼠生理指标变化趋势图云蚤早援远摇栽藻灶凿藻灶糟赠燥枣贼澡藻糟澡葬灶早藻泽燥枣责澡赠泽蚤燥造燥早蚤糟葬造蚤灶凿藻曾藻泽蚤灶贼澡藻悦澡蚤灶藻泽藻澡葬皂泽贼藻则蚤灶枣藻糟贼藻凿憎蚤贼澡月葬遭藻泽蚤葬 蜱是其终身宿主袁而其它脊椎动物袁包括人袁是其中间宿主遥巴贝西虫病虽然没有像禽流感尧杂粤砸杂尧酝耘砸杂等病毒病那样暴发成灾袁但近年来在世界各咱怨暂咱员园暂地均有报道袁亚洲的中国辕日本尧南美的巴咱员员暂咱员圆暂咱员猿暂咱员源暂西辕乌干达尧欧洲的法国辕挪威等均有相关报道袁且有人畜致死病例遥 图苑摇 巴贝西虫感染黑线仓鼠血清中陨蕴鄄圆浓度的变化 云蚤早援苑摇 悦澡葬灶早藻泽燥枣贼澡藻泽藻则怎皂糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶燥枣陨蕴鄄圆蚤灶贼澡藻 悦澡蚤灶藻泽藻澡葬皂泽贼藻则蚤灶枣藻糟贼藻凿憎蚤贼澡月葬遭藻泽蚤葬 巴贝西虫感染动物后袁在圆源澡内可完成侵入袁咱愿暂而进入宿主的红细胞遥在实验室条件下袁巴贝西咱员缘暂虫可在源益存活圆员凿遥而当巴贝西虫感染黑线仓鼠后袁圆源澡完全侵入黑线仓鼠红细胞袁第圆天开始不断增殖袁在第源天便可达到峰值渊图猿冤袁之后持续下降袁仅在第圆周末渊第员圆天冤又出现一次增殖高峰渊图猿冤遥实验第猿苑天袁仍可通过则藻葬造鄄贼蚤皂藻孕悦砸检测到巴贝西虫遥根据文献报道袁巴贝西虫感染后的咱源暂第员至源周表现出临床症状袁而且其感染可持续咱员远暂怨周甚至远个月之久遥因此袁可确定巴贝西虫感染后会在动物体内长期存在袁在没有药物作用的情况下袁在感染的前两周会有两次增殖袁之后在受试动物自身免疫系统的抵制下达到一个动态平衡遥伴随着巴贝西虫的增殖袁受感染黑线仓鼠的防御响应机制启动袁其脏器系数发生一定的变化遥脏器变化最为明显的是肝脏和脾脏袁肝脏系数在感染后的猿周内分别有猿次升高渊图源粤冤袁而脾脏系数在感染的第圆和第猿周分别有两次达峰值渊图源月冤遥肝脏和脾脏是两个重要的免疫抑制细胞分泌器官袁因

44 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 源员 此袁在病原微生物入侵后袁受影响最大的当属肝和脾遥与其它的感染性病原微生物相似袁巴贝西虫会使受感染动物产生与疟疾相似的症状袁同时伴随着咱员袁源暂肝肿大和脾肿大等症状遥血常规和血液的生理生化检查主要包括血细胞和血小板计数尧血红蛋白含量测定尧血液中的离子及各种酶的测定等袁可为疾病的诊断尧疗效的观咱员苑暂察及预后的判断提供重要参考遥巴贝西虫感染后袁黑线仓鼠血液的生化指标发生明显变化袁其中淀粉酶尧谷草转氨酶尧甘油三酯尧血糖和尿酸均在第圆周渊第员圆天冤达到峰值渊图缘冤遥而血细胞的变化趋势为每周有一次峰值渊图远冤袁其中典型的当属白细胞袁黑线仓鼠感染巴贝西虫后第圆天袁白细胞数迅速增加袁第圆周渊第员园天冤达峰值袁而第猿周渊第圆猿天冤则再次达峰值渊图远冤遥巴贝西虫是血液寄生虫袁动物感染后血细胞和血液生化值受影响最大袁其参咱员愿暂数都不同程度的波动遥而其中袁白细胞因含诸多免疫抵制因子而发生最为显著的变化袁以抵制病原微生物的侵染和攻击遥陨蕴鄄圆大部分是由血液白细胞产生的袁可提高机体对病毒尧细菌尧真菌尧原虫等感染的免疫应答袁是一种免疫增强剂袁具有抗病毒尧抗肿瘤和提高机体咱员怨暂免疫功能等作用遥巴贝西虫感染黑线仓鼠后袁随着血细胞的变化袁血清中的陨蕴鄄圆也发生了明显的变化袁陨蕴鄄圆的变化直接反映了宿主的免疫响应遥从感染第圆天起袁陨蕴鄄圆持续增加袁在第圆周渊第员园天冤达峰值渊图苑冤袁这一变化趋势与白细胞相似袁反映出在没有药物作用的情况下袁黑线仓鼠机体对病原体的抵制和适应有一个过程袁在这一过程中袁存在着宿主免疫系统与病原相互制衡袁从而达到动态平衡的战斗遥了解巴贝西虫侵入宿主的时间点袁分析其在宿主体内的增殖特性袁可以深入分析病原与宿主相互作用袁对于寄生虫病的诊断与治疗也有重要的参考意义遥另外袁黑线仓鼠对于寄生虫感染具有均一尧稳定的应激反应状态袁在旋毛虫尧巴贝西虫尧利什曼原虫等咱苑袁圆园暂感染中均可获得较好的数据遥因此袁黑线仓鼠可以作为寄生虫感染研究良好的候选模型动物遥 参考文献院 咱员暂摇匀怎灶枣藻造凿运孕袁匀蚤造凿藻遭则葬灶凿贼粤袁郧则葬赠允杂援月葬遭藻泽蚤燥泽蚤泽院则藻糟藻灶贼蚤灶泽蚤早澡贼泽蚤灶贼燥葬灶葬灶糟蚤藻灶贼凿蚤泽藻葬泽藻咱允暂援陨灶贼允孕葬则葬泽蚤贼燥造袁圆园园愿袁猿愿渊员员冤院员圆员怨原员圆猿苑援咱圆暂摇运躁藻皂贼则怎责粤酝袁悦燥灶则葬凿孕粤援匀怎皂葬灶遭葬遭藻泽蚤燥泽蚤泽院葬灶藻皂藻则早蚤灶早贼蚤糟噪鄄 遭燥则灶凿蚤泽藻葬泽藻咱允暂援陨灶贼允孕葬则葬泽蚤贼燥造袁圆园园园袁猿园渊员圆原员猿冤院员猿圆猿 原员猿猿苑援 咱猿暂摇 陨则憎蚤灶孕允援悦葬灶蚤灶藻遭葬遭藻泽蚤燥泽蚤泽院枣则燥皂皂燥造藻糟怎造葬则贼葬曾燥灶燥皂赠贼燥糟燥灶贼则燥造 咱允暂援孕葬则葬泽蚤贼灾藻糟贼燥则泽袁圆园园怨袁圆渊杂怎责责造员冤院杂源援 咱源暂摇 灾葬灶灶蚤藻则耘袁运则葬怎泽藻孕允援匀怎皂葬灶遭葬遭藻泽蚤燥泽蚤泽咱允暂援晕耘灶早造允酝藻凿袁 圆园员圆袁猿远远渊圆缘冤院圆猿怨苑原圆源园苑援 咱缘暂摇 卢艳袁蔡玉春袁陈韶红袁等遥田鼠巴贝虫实验动物模型的建立 咱允暂援中国寄生虫学与寄生虫病杂志袁圆园员圆袁猿园渊远冤院源圆猿 原源圆苑援 咱远暂摇 赵爽袁王冬平袁刘晓袁等援黑线仓鼠及其白化突变系血液生 理生化值的测定与分析咱允暂援中国比较医学杂志袁圆园员员袁圆员 渊苑冤院员苑原圆员援 咱苑暂摇 张小飞袁刘冉袁崔晓霞袁等援旋毛虫感染黑线仓鼠及其白化 突变系后细胞因子变化比较分析咱允暂援中国比较医学杂志袁 圆园员源袁圆源渊愿冤院员员原员缘援 咱愿暂摇 砸燥扎窑藻躁鄄月蚤藻造蚤糟噪葬宰袁 杂贼赠责怎覥噪燥憎泽噪葬鄄酝蚤泽蚤怎则藻憎蚤糟扎 匀袁 郧燥覥葬遭 耘援 匀怎皂葬灶遭葬遭藻泽蚤燥泽蚤泽咱允暂援 孕则藻扎藻早造耘责蚤凿藻皂蚤燥造袁圆园员缘曰远怨院源愿怨 原源怨源援 咱怨暂摇 宰葬灶早匀载袁匀怎葬灶早云援 月葬遭藻泽蚤葬陨灶枣藻糟贼蚤燥灶蚤灶贼澡藻杂燥怎贼澡憎藻泽贼燥枣 悦澡蚤灶葬袁葬糟葬泽藻则藻责燥则贼咱允暂袁允怎灶凿蚤泽澡葬责怎则允酝蚤糟则燥遭蚤燥造袁圆园员源袁苑 渊员员冤院藻员猿缘园源援阅韵陨院员园郾缘愿员圆辕躁躁皂援员猿缘园源 咱员园暂摇 陨早怎糟澡蚤粤袁杂燥皂葬栽袁杂怎扎怎噪蚤匀袁藻贼葬造援栽澡藻藻责蚤凿藻皂蚤燥造燥早蚤糟葬造泽怎则增藻赠 枣燥则葬贼燥增葬择怎燥灶藻则藻泽蚤泽贼葬灶贼则藻造葬贼藻凿早藻灶藻燥枣月葬遭藻泽蚤葬早蚤遭泽燥灶蚤蚤灶允葬责葬灶 咱允暂援 允灾藻贼藻则酝藻凿杂糟蚤袁圆园员缘袁责怎遭造蚤泽澡藻凿蚤灶葬凿增葬灶糟藻援 阅韵陨院 员园郾员圆怨圆辕躁增皂泽援员缘原园源愿园 咱员员暂摇 酝燥则葬藻泽孕匀郧袁砸怎枣蚤灶燥悦孕袁月葬则葬俨灶葬粤砸云袁藻贼葬造援 酝燥造藻糟怎造葬则 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶燥枣月葬遭藻泽蚤葬增燥早藻造蚤蚤灶凿燥早泽枣则燥皂月藻造佴皂袁灶燥则贼澡藻则灶 月则葬扎蚤造咱允暂袁郧藻灶藻贼酝燥造砸藻泽袁圆园员缘袁员源渊源冤院员远猿远源原员远猿苑员援 咱员圆暂摇 孕则燥遭燥泽贼藻栽袁运葬造藻皂葬鄄在蚤噪怎泽燥噪葬郧袁粤造贼藻贼蕴袁藻贼葬造援陨灶枣藻糟贼蚤燥灶葬灶凿 藻曾责燥泽怎则藻贼燥增藻糟贼燥则鄄遭燥则灶藻责葬贼澡燥早藻灶泽蚤灶则怎则葬造凿燥早泽葬灶凿贼澡藻蚤则贼蚤糟噪泽袁 哉早葬灶凿葬咱允暂援孕葬则葬泽蚤贼藻泽驭灾藻糟贼燥则泽袁圆园员缘袁愿院猿园远援 咱员猿暂摇 酝葬早葬造蚤藻砸酝袁 悦造葬蚤则藻 灾酝袁 允藻葬灶灶藻 悦袁 藻贼 葬造援 哉责凿葬贼藻 燥灶 藻责蚤凿藻皂蚤燥造燥早赠燥枣糟葬灶蚤灶藻遭葬遭藻泽蚤燥泽蚤泽蚤灶杂燥怎贼澡藻则灶云则葬灶糟藻咱允暂援月酝悦 灾藻贼砸藻泽袁圆园员缘袁员员院圆圆猿援 咱员源暂摇 酝覬则糟澡运袁匀燥造皂葬葬泽郧袁云则燥造葬灶凿藻则孕杂袁藻贼葬造援 杂藻增藻则藻澡怎皂葬灶 月葬遭藻泽蚤葬凿蚤增藻则早藻灶贼蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶蚤灶晕燥则憎葬赠咱允暂援陨灶贼允陨灶枣藻糟贼阅蚤泽袁圆园员缘袁猿猿院藻猿苑原藻猿愿援咱员缘暂摇耘遭藻则澡葬则凿酝蕴袁宰葬造噪藻则耘酝袁杂贼藻怎则藻则云允援杂怎则增蚤增葬造葬灶凿蚤灶枣藻糟贼蚤增蚤贼赠燥枣月葬遭藻泽蚤葬蚤灶遭造燥燥凿皂葬蚤灶贼葬蚤灶藻凿葬贼圆缘益葬灶凿圆原源益咱允暂援允孕葬则葬泽蚤贼燥造袁员怨怨缘袁愿员院苑怨园原苑怨圆援咱员远暂摇匀藻则憎葬造凿贼月蕴袁蕴蚤灶凿藻灶允灾袁月燥泽泽藻则皂葬灶耘袁藻贼葬造援栽则葬灶泽枣怎泽蚤燥灶鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿遭葬遭藻泽蚤燥泽蚤泽蚤灶贼澡藻哉灶蚤贼藻凿杂贼葬贼藻泽院葬凿藻泽糟则蚤责贼蚤燥灶燥枣糟葬泽藻泽咱允暂援粤灶灶陨灶贼藻则灶酝藻凿袁圆园员员袁员缘缘院缘园怨原缘员怨援咱员苑暂摇张华袁侯绍华援血常规检查在猫犬疾病诊断中的应用咱允暂援中国动物检疫袁圆园园怨袁圆远渊猿冤院缘缘原缘远援咱员愿暂摇酝赠造燥灶葬噪蚤泽耘援宰澡藻灶贼燥泽怎泽责藻糟贼葬灶凿澡燥憎贼燥皂燥灶蚤贼燥则遭葬遭藻泽蚤燥泽蚤泽咱允暂援粤皂云葬皂孕澡赠泽蚤糟蚤葬灶袁圆园园员袁远猿渊员园冤院员怨远怨原员怨苑源援咱员怨暂摇金伯泉袁熊思东援医学免疫学渊第缘版冤咱酝暂援北京援人民卫生出版社袁圆园园愿院远员原远圆援咱圆园暂摇遇秀玲袁郑振峰援白化黑线仓鼠解剖学与组织学特性的比较研究咱允暂援中国实验动物学杂志袁员怨怨员袁员渊猿袁源冤院员怨员原员怨猿援也修回日期页圆园员远原园源原园愿

45 圆园员远年愿月第圆远卷摇第愿期 中国比较医学杂志悦匀陨晕耘杂耘允韵哉砸晕粤蕴韵云悦韵酝孕粤砸粤栽陨灾耘酝耘阅陨悦陨晕耘 粤怎早怎泽贼袁圆园员远灾燥造援圆远摇晕燥援愿 藡 蕥 蕥蕥蕥蕥藡研究报告 蕥蕥蕥蕥藡 蕥藡 小鼠尾静脉注射与心肌注射腺病毒载体转染效率的比较 员员杨琳珊袁占贞贞袁汪摇 员员员袁圆员袁圆波袁杨珺琦袁范慧敏袁刘中民 渊员郾同济大学附属东方医院心力衰竭研究所袁上海摇圆园园员圆园曰圆郾同济大学附属东方医院心胸外科袁上海摇圆园园员圆园冤 摇摇揖摘要铱摇目的摇比较小鼠尾静脉注射或心肌注射腺病毒载体后心脏组织和肝脏组织中靶基因的转染效率遥方法摇构建表达绿色荧光蛋白郧云孕的腺病毒载体渊郧云孕鄄粤凿冤遥悦缘苑月蕴辕远小鼠圆园只随机分为尾静脉注射腺病毒载体组与心肌注射腺病毒载体组各员园只袁用实时定量孕悦砸检测不同时间点小鼠心肌组织和肝脏组织中郧云孕的皂砸晕粤表达水平袁并且通过荧光显微镜观察郧云孕荧光表达情况遥结果摇心肌注射腺病毒载体组心脏组织中郧云孕的皂砸晕粤表达水平明显高于尾静脉注射腺病毒载体组袁心肌注射腺病毒载体组心脏组织中荧光强度明显增强遥同时袁我们发现两组的肝脏组织中郧云孕的皂砸晕粤表达水平和荧光强度均明显高于心脏组织中曰且在尾静脉注射腺病毒载体组袁肝脏组织中郧云孕的皂砸晕粤表达水平和荧光强度在苑凿达高峰袁而心肌注射腺病毒载体组则在猿凿达高峰遥结论摇提高心脏组织中靶基因的转染效率宜采用心肌注射腺病毒载体的方法曰对于肝脏组织转染效率袁两种注射方法均可袁鉴于尾静脉注射腺病毒载体的方法创伤小袁宜采用遥揖关键词铱摇心肌注射曰尾静脉注射曰腺病毒载体曰转染效率揖中图分类号铱砸鄄猿猿摇摇揖文献标识码铱粤摇摇揖文章编号铱员远苑员鄄苑愿缘远渊圆园员远冤园愿鄄园园源圆鄄园缘凿燥蚤院员园郾猿怨远怨援躁援蚤泽泽灶援员远苑员原苑愿缘远郾圆园员远郾园愿郾园园远 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶燥枣贼澡藻藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠燥枣贼葬蚤造增藻蚤灶蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶葬灶凿蚤灶贼则葬皂赠燥糟葬则凿蚤葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶燥枣葬凿藻灶燥增蚤则怎泽增藻糟贼燥则蚤灶皂蚤糟藻 员员员员员袁圆员袁圆再粤晕郧蕴蚤灶鄄泽澡葬灶袁在匀粤晕在澡藻灶鄄扎澡藻灶袁宰粤晕郧月燥袁再粤晕郧允怎灶鄄择蚤袁云粤晕匀怎蚤鄄皂蚤灶袁蕴陨哉在澡燥灶早鄄皂蚤灶渊员援陨灶泽贼蚤贼怎贼藻燥枣匀藻葬则贼云葬蚤造怎则藻袁耘葬泽贼匀燥泽责蚤贼葬造袁栽燥灶早躁蚤哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠杂糟澡燥燥造燥枣酝藻凿蚤糟蚤灶藻袁杂澡葬灶早澡葬蚤圆园园员圆园袁悦澡蚤灶葬曰圆郾悦葬则凿蚤燥鄄栽澡燥则葬糟蚤糟杂怎则早藻则赠袁耘葬泽贼匀燥泽责蚤贼葬造袁栽燥灶早躁蚤哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠杂糟澡燥燥造燥枣酝藻凿蚤糟蚤灶藻袁杂澡葬灶早澡葬蚤圆园园员圆园冤 摇摇揖粤遭泽贼则葬糟贼铱摇韵遭躁藻糟贼蚤增藻摇栽燥蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻贼澡藻藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠燥枣贼葬则早藻贼早藻灶藻贼则葬灶泽枣藻糟贼蚤燥灶燥枣贼澡藻澡藻葬则贼葬灶凿造蚤增藻则葬枣贼藻则贼葬蚤造增藻蚤灶燥则蚤灶贼则葬皂赠燥糟葬则凿蚤葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶燥枣葬凿藻灶燥增蚤则怎泽增藻糟贼燥则渊郧云孕鄄粤凿冤援酝藻贼澡燥凿泽摇郧云孕鄄粤阅憎葬泽糟燥灶泽贼则怎糟贼藻凿葬贼枣蚤则泽贼援粤贼燥贼葬造燥枣圆园皂葬造藻愿鄄憎藻藻噪燥造凿悦缘苑月蕴辕远皂蚤糟藻憎藻则藻则葬灶凿燥皂造赠葬灶凿藻择怎葬造造赠凿蚤增蚤凿藻凿蚤灶贼燥贼葬蚤造增藻蚤灶蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶燥枣郧云孕鄄粤阅早则燥怎责葬灶凿蚤灶贼则葬皂赠燥糟葬则凿蚤葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶燥枣郧云孕鄄粤阅早则燥怎责援栽澡藻皂砸晕粤造藻增藻造泽燥枣郧云孕蚤灶贼澡藻澡藻葬则贼葬灶凿造蚤增藻则贼蚤泽泽怎藻泽憎藻则藻凿藻贼藻糟贼藻凿遭赠匝鄄孕悦砸葬贼凿蚤枣枣藻则藻灶贼贼蚤皂藻责燥蚤灶贼泽援云造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻皂蚤糟则燥泽糟燥责赠憎葬泽责藻则枣燥则皂藻凿贼燥增蚤泽怎葬造蚤扎藻贼澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣郧云孕枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻援砸藻泽怎造贼泽悦燥皂责葬则藻凿憎蚤贼澡贼澡藻贼葬蚤造增藻蚤灶蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶早则燥怎责袁贼澡藻郧云孕皂砸晕粤造藻增藻造蚤灶皂燥怎泽藻澡藻葬则贼贼蚤泽泽怎藻憎葬泽葬责责葬则藻灶贼造赠澡蚤早澡藻则蚤灶贼澡藻蚤灶贼则葬皂赠燥糟葬则凿蚤葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶早则燥怎责援陨灶遭燥贼澡早则燥怎责泽袁贼澡藻郧云孕皂砸晕粤造藻增藻造泽蚤灶造蚤增藻则贼蚤泽泽怎藻憎藻则藻泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠蚤灶糟则藻葬泽藻凿糟燥皂责葬则藻凿憎蚤贼澡贼澡葬贼蚤灶贼澡藻澡藻葬则贼贼蚤泽泽怎藻援陨灶贼澡藻贼葬蚤造增藻蚤灶蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶早则燥怎责袁贼澡藻郧云孕皂砸晕粤造藻增藻造蚤灶造蚤增藻则贼蚤泽泽怎藻则藻葬糟澡藻凿葬责藻葬噪燥灶凿葬赠苑曰遭怎贼蚤灶贼澡藻蚤灶贼则葬皂赠燥糟葬则凿蚤葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶早则燥怎责袁贼澡藻皂砸晕粤造藻增藻造燥枣郧云孕蚤灶造蚤增藻则贼蚤泽泽怎藻则藻葬糟澡藻凿葬责藻葬噪燥灶凿葬赠猿援宰藻葬造泽燥燥遭泽藻则增藻凿贼澡藻泽葬皂藻贼则藻灶凿燥枣郧云孕枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶蚤灶贼澡藻贼葬蚤造增藻蚤灶蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶早则燥怎责糟燥皂责葬则藻凿憎蚤贼澡贼澡葬贼蚤灶贼澡藻 咱基金项目暂国家自然科学基金面上项目渊愿员猿苑园源猿猿袁愿员猿苑猿员源远袁愿员缘苑员缘源员冤曰上海市野创新行动计划冶基础研究领域项目渊员源允悦员源园缘圆园园冤遥咱作者简介暂杨琳珊袁女袁硕士在读袁研究方向院心血管免疫曰耘皂葬蚤造院赠造泽圆园员员员员源岳员远猿援糟燥皂遥咱通讯作者暂占贞贞袁副教授尧副研究员袁耘皂葬蚤造院扎澡葬灶扎扎岳贼燥灶早躁蚤援藻凿怎援糟灶曰刘中民袁教授尧主任医师袁耘皂葬蚤造院造蚤怎援扎澡燥灶早皂蚤灶岳贼燥灶早躁蚤援藻凿怎援糟灶遥

46 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 源猿 蚤灶贼则葬皂赠燥糟葬则凿蚤葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶早则燥怎责援悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶泽摇陨灶贼则葬皂赠燥糟葬则凿蚤葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶燥枣葬凿藻灶燥增蚤则怎泽增藻糟贼燥则蚤泽泽怎蚤贼葬遭造藻贼燥葬糟澡蚤藻增藻葬澡蚤早澡藻则贼则葬灶泽枣藻糟贼蚤燥灶藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠蚤灶皂燥怎泽藻澡藻葬则贼贼蚤泽泽怎藻糟燥皂责葬则藻凿憎蚤贼澡贼澡藻贼葬蚤造增藻蚤灶蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶皂藻贼澡燥凿援粤造贼澡燥怎早澡遭燥贼澡蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶皂藻贼澡燥凿泽葬则藻泽怎蚤贼葬遭造藻枣燥则贼则葬灶泽枣藻糟贼蚤燥灶燥枣皂燥怎泽藻造蚤增藻则袁贼澡藻贼葬蚤造增藻蚤灶蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶皂藻贼澡燥凿蚤泽责则藻枣藻则藻灶贼蚤葬造枣燥则蚤贼蚤泽泽蚤皂责造藻葬灶凿造藻泽泽蚤灶增葬泽蚤增藻援揖运藻赠憎燥则凿泽铱摇陨灶贼则葬皂赠燥糟葬则凿蚤葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶曰栽葬蚤造增藻蚤灶蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶曰粤凿藻灶燥增蚤则怎泽增藻糟贼燥则曰栽则葬灶泽枣藻糟贼蚤燥灶藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠袁酝蚤糟藻援 摇摇小鼠尾静脉注射是动物实验中药物干预的常用途径遥但小鼠尾静脉较细袁造成穿刺难度大袁因此很大程度上制约了实验的成功与否袁且其药效如何也有待论证遥心肌注射是除尾静脉给药的另外一种方法袁但由于其是一种有创的给药途径袁因此其应用也受限制遥现将这两种方法的心脏组织及肝脏组织中靶基因的转染效率作比较遥 员摇 员郾员摇 材料和方法 实验动物 悦缘苑月蕴辕远雄性小鼠圆园只袁愿周龄袁体重渊圆源耀圆远冤早袁购于上海斯莱克实验动物有限责任公司渊生产许可证揖杂悦载运渊沪冤圆园员圆原园园园圆铱冤袁随机分为小鼠尾静脉注射组和心肌注射组各员园只袁饲养于同济大学实验动物中心屏障环境揖杂再载运渊沪冤圆园员源原园园圆远铱遥员郾圆摇主要试剂和仪器杂再月砸郧则藻藻灶匝孕悦砸酝蚤曾渊日本栽燥赠燥遭燥公司冤曰组织转染带绿色荧光的腺病毒载体由上海和元生物有限公司合成遥园郾员豫戊巴比妥钠袁倒置显微镜袁小动物呼吸机袁显微外科手术器械遥员郾猿摇方法员郾猿郾员摇小鼠尾静脉注射院将小鼠置于固定器内袁露咱员暂出尾巴袁按陈育尧的方法尾静脉注射郧云孕鄄粤凿遥咱圆暂一次注射量为园郾园缘耀园郾员皂蕴辕员园早体重遥空白对照组注射同剂量孕月杂遥员郾猿郾圆摇小鼠心肌注射院园郾员豫戊巴比妥钠渊园郾员皂蕴辕员园早冤腹腔麻醉袁小鼠肌肉松弛充分后气管插管袁连接呼吸机遥小鼠右侧卧位固定于手术台上袁在距胸骨左缘园郾猿糟皂处沿源尧缘肋间做横行切口进胸袁暴露心脏袁使用一次性胰岛素注射器于靠近心尖处直接咱源暂心肌注射腺病毒液体袁员只小鼠缘园滋蕴遥注射完毕后使用猿原园线逐层关闭胸腔遥断开呼吸机袁术后将小鼠放置于温毯上密切观察遥空白对照组按同样操作注射同剂量孕月杂遥员郾源摇检测组织中郧云孕的表达水平两组小鼠于实验后第猿尧缘尧苑天分别处死猿对袁分别取心脏组织和肝脏组织做冰冻切片和提取砸晕粤做实时荧光定量匝孕悦砸遥抽提组织砸晕粤后袁利 用杂再月砸酝蚤糟则燥砸晕粤粤泽泽葬赠运蚤贼中的探针进行实时荧光定量孕悦砸袁检测郧云孕表达水平遥以哉远泽灶砸晕粤为内参袁反应体系为员园滋蕴袁圆原驻驻悦贼方法计算郧云孕的相对表达水平遥定量反应条件为怨缘益员园皂蚤灶袁扩增员个循环袁怨缘益员缘泽袁扩增源园个循环袁远园益员皂蚤灶扩增源园个循环袁在每个循环的远园益时测定荧光遥员郾缘摇统计学方法计量资料以軃曾依泽表示袁对计量资料进行正态性检验袁两组间均数比较采用贼检验袁多组间均数比较采用方差分析遥以孕约园郾园缘为差异有统计学意义遥圆摇结果圆郾员摇心脏组织和肝脏组织中郧云孕的表达水平比较择孕悦砸检测结果显示袁心肌注射组的心脏组织中郧云孕的皂砸晕粤表达水平明显高于尾静脉注射组遥两个实验组的肝脏组织中郧云孕的皂砸晕粤表达水平均明显高于心脏组织中袁尾静脉注射组升高更为明显遥郧云孕的皂砸晕粤表达水平尾静脉注射组在苑凿左右达高峰袁而心肌注射组则在猿凿左右达高峰曰同时匝孕悦砸检测发现从小鼠尾静脉注射组取得的肝脏组织和心脏组织中的郧云孕的皂砸晕粤表达水平在猿凿和缘凿左右是下调于从心肌注射组中取得的肝脏组织袁而在苑凿左右结果却与之相反袁这种变化在肝脏组织中更明显遥见图员遥圆郾圆摇心脏组织和肝脏组织冰冻切片观察郧云孕荧光情况结果发现袁心脏组织中的郧云孕荧光强度心肌注射组明显强于尾静脉注射组遥在尾静脉注射组袁肝脏组织中郧云孕荧光明显强于心脏组织袁且在苑凿左右达高峰袁而在心肌注射组袁则心脏组织中郧云孕荧光强度明显高于肝脏组织袁且在猿凿左右达高峰遥见图圆遥猿摇讨论猿郾员摇小鼠尾静脉注射的几个问题探讨猿郾员郾员摇尾静脉扩张院应该保持实验室温度在圆远益左右袁尤其是冬季袁适宜的室内温度对小鼠尾静脉有一定的扩张作用并且能够使血流通畅降低注射阻力遥目前使用较多的是用酒精涂擦使尾静脉扩张袁也有使用红外线灯加热小鼠尾部袁另外有报道

47 源源中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 粤院心肌注射腺病毒载体组与尾静脉注射腺病毒载体组袁心脏组织中郧云孕的皂砸晕粤表达水平比较遥月院心肌注射腺病毒载体组与尾静脉注射腺病毒载体组袁肝脏组织中郧云孕的皂砸晕粤表达水平比较遥悦院心肌注射腺病毒载体组袁心脏组织与肝脏组织中郧云孕的皂砸晕粤表达水平比较遥鄢鄢鄢阅院尾静脉注射腺病毒载体组袁心脏组织与肝脏组织中郧云孕的皂砸晕粤表达水平比较遥为孕约园郾园缘袁为孕约园郾园员遥 图员摇 两实验组小鼠组织中郧云孕表达水平 晕燥贼藻援粤院悦燥皂责葬则蚤泽燥灶燥枣郧云孕皂砸晕粤藻曾责则藻泽泽蚤燥灶造藻增藻造泽蚤灶贼澡藻皂燥怎泽藻澡藻葬则贼贼蚤泽泽怎藻泽燥枣贼澡藻蚤灶贼则葬皂赠燥糟葬则凿蚤葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶葬灶凿贼葬蚤造增藻蚤灶蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶早则燥怎责泽援月院悦燥皂责葬则蚤泽燥灶燥枣郧云孕皂砸晕粤藻曾责则藻泽泽蚤燥灶造藻增藻造泽蚤灶贼澡藻皂燥怎泽藻造蚤增藻则贼蚤泽泽怎藻燥枣贼澡藻蚤灶贼则葬皂赠燥糟葬则凿蚤葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶葬灶凿贼葬蚤造增藻蚤灶蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶早则燥怎责泽援悦院悦燥皂责葬则蚤泽燥灶燥枣郧云孕皂砸晕粤藻曾责则藻泽泽蚤燥灶造藻增藻造泽蚤灶贼澡藻皂燥怎泽藻澡藻葬则贼葬灶凿造蚤增藻则贼蚤泽泽怎藻泽蚤灶贼澡藻蚤灶贼则葬皂赠燥糟葬则凿蚤葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶早则燥怎责援阅援悦燥皂责葬则蚤泽燥灶燥枣郧云孕皂砸晕粤藻曾责则藻泽泽蚤燥灶造藻增藻造泽鄢鄢鄢蚤灶贼澡藻皂燥怎泽藻澡藻葬则贼葬灶凿造蚤增藻则贼蚤泽泽怎藻泽蚤灶贼澡藻贼葬蚤造增藻蚤灶蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶早则燥怎责援孕约园郾园缘袁孕约园郾园员援 云蚤早援员摇 郧云孕皂砸晕粤造藻增藻造泽蚤灶皂燥怎泽藻贼蚤泽泽怎藻泽燥枣贼澡藻贼憎燥早则燥怎责泽 使用硝酸甘油扩张尾静脉从而降低穿剌难度袁且其咱缘暂效果优于苑缘豫乙醇遥我们所使用的热水浸泡联合酒精涂擦法能使尾静脉扩张更充分袁其效果优于单用热水浸泡法和单用酒精涂擦法遥但是水浴的温度以缘园益耀远园益较为适宜袁温度太低则尾静脉扩张效果不理想袁若温度超过苑园益则容易烫伤皮层袁甚至在拉尾固定的过程中小鼠挣扎导致皮层脱落并出血袁容易诱发感染遥猿郾员郾圆摇注射剂量院单次小鼠尾静脉注射剂量不宜超过源园园滋蕴每只袁大剂量迅速推注容易造成小鼠循环超负荷导致猝死袁特别是悬浮颗粒型液体更容易造成栓塞导致小鼠死亡袁因此推注药物的过程应该缓慢并观察小鼠的反应遥我们在实验过程中采用 的注射剂量为圆园园滋蕴每只袁即约为全血体积的员源豫袁小于员园园滋蕴注射剂量时在一次注射不成功时药物损失量的影响会比较大袁因此圆园园滋蕴是一个比较适宜的注射量遥猿郾圆摇小鼠心肌注射的几个问题探讨猿郾圆郾员摇小鼠模型的建立院成功的麻醉与气管插管是建立模型的前提袁麻醉过量易导致小鼠死亡袁故麻醉用量应谨慎袁药量宜少不宜多袁以使小鼠不能自主翻身为宜袁本实验以园郾员豫戊巴比妥钠渊园郾员皂蕴辕员园早冤腹腔麻醉袁效果良好遥气管插管次数不宜太多袁因插管次数太多易致喉水肿而窒息死亡袁插管时用小镊子拉出鼠舌袁顺舌根插成功率较高袁插管后接呼吸机袁若小鼠胸廓起伏与呼吸机频率一致

48 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 源缘 粤院心肌注射腺病毒载体组与尾静脉注射腺病毒载体组的小鼠心脏组织中不同时间的郧云孕荧光强度比较遥月院尾静脉注射腺病毒载体组袁心脏组织与肝脏组织不同时间的郧云孕荧光强度比较遥悦院心肌注射腺病毒载体组袁心脏组织与肝脏组织不同时间的郧云孕荧光强度比较遥图圆摇两组小鼠组织中郧云孕荧光强度比较遥渊标尺越员园园滋皂冤晕燥贼藻援粤院悦燥皂责葬则蚤泽燥灶燥枣枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻蚤灶贼藻灶泽蚤贼赠燥枣郧云孕蚤灶贼澡藻皂燥怎泽藻澡藻葬则贼贼蚤泽泽怎藻泽葬贼凿蚤枣枣藻则藻灶贼贼蚤皂藻责燥蚤灶贼泽燥枣贼澡藻蚤灶贼则葬皂赠燥糟葬则凿蚤葬造葬灶凿贼葬蚤造增藻蚤灶蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶早则燥怎责泽援月院悦燥皂责葬则蚤泽燥灶燥枣贼澡藻枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻蚤灶贼藻灶泽蚤贼赠燥枣郧云孕蚤灶贼澡藻皂燥怎泽藻澡藻葬则贼葬灶凿造蚤增藻则贼蚤泽泽怎藻泽葬贼凿蚤枣枣藻则藻灶贼贼蚤皂藻责燥蚤灶贼泽燥枣贼澡藻贼葬蚤造增藻蚤灶蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶早则燥怎责援悦院悦燥皂责葬则蚤泽燥灶燥枣贼澡藻枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻蚤灶贼藻灶泽蚤贼赠燥枣郧云孕蚤灶贼澡藻皂燥怎泽藻澡藻葬则贼葬灶凿造蚤增藻则贼蚤泽泽怎藻泽葬贼凿蚤枣枣藻则藻灶贼贼蚤皂藻责燥蚤灶贼泽燥枣贼澡藻蚤灶贼则葬皂赠燥糟葬则凿蚤葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶早则燥怎责援云蚤早援圆摇郧云孕枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶蚤灶皂燥怎泽藻贼蚤泽泽怎藻泽燥枣贼澡藻贼憎燥早则燥怎责泽渊月葬则越员园园滋皂冤 提示插管成功遥猿郾圆郾圆摇心肌注射院成功开胸暴露心脏后袁即于靠近心尖处直接心肌注射腺病毒液体袁每只小鼠缘园滋蕴遥注意排空注射器内空气袁以免造成空气栓塞导致小鼠死亡遥由于小鼠心肌比较薄袁故注射液体时注射 器针头不能刺入太深以防注入心腔遥猿郾猿摇腺病毒转染效率的探讨我们实验比较了心肌注射或尾静脉注射腺病毒载体后心脏组织和肝脏组织中靶基因的转染效率袁结果发现心肌注射腺病毒载体方法心脏组织中

49 源远中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 靶基因的转染效率明显高于尾静脉注射方法袁且两种方法注射腺病毒载体后肝脏组织中靶基因的转染效率均明显高于心脏组织中袁尾静脉注射组升高更为明显袁且在尾静脉注射腺病毒载体组袁肝脏组织中靶基因的转染效率苑凿达高峰袁而心肌注射腺病毒载体组则在猿凿达高峰遥小鼠血液循环和人体血液循环是相似的袁血液都是从左心室射入主动脉袁沿动脉到全身各部包括肝脏的毛细血管袁然后汇入小静脉袁大静脉袁最后经上下腔静脉回到右心房遥其中袁肝脏的血液循环十分丰富袁肝脏对来自体内和体外的许多非营养物质如各种药物尧毒物以及体内某些代谢产物袁具有生物转化作用袁通过新陈代谢将它们彻底分解或以原形排出体外遥无论是心肌注射腺病毒载体还是尾静脉注射腺病毒载体方法袁腺病毒载体相当于一种外来非营养物质袁其首先进入肝脏进行生物转化袁因此袁两种方法注射腺病毒载体后肝脏组织中靶基因的转染效率均明显高于心脏组织中遥腺病毒载体从尾静脉注入体内后袁其首先经过静脉回流进入心脏袁然后才经左心室射入主动脉袁沿动脉到达肝脏组织中曰而心肌注射腺病毒载体则直接从左心室射入主动脉袁然后到达肝脏袁因此两种方法注射腺病毒载体后袁其在肝脏组织中的转染效率各显示不同的高峰袁尾静脉注射腺病毒载体组肝脏组织中靶基因的转染效率苑凿达高峰袁而心肌注射腺病毒载体组则在猿凿达高峰遥肝脏还有药物首过效应袁首过效应既某些药物经胃肠道等途径给药后袁经门脉系统进入肝脏袁在肝脏被代谢袁而使进入血液循环的原形药量减少的现象袁尾静脉注射腺病毒进入体内后首先经过肝脏的首过消除效应袁到达心脏组织后病毒量减少袁因此尾静脉注射腺病毒载体方法心脏组织中靶基因的转染效率明显低于心肌注射方法遥具体机制 还有待深入研究遥总之袁小鼠尾静脉注射法是常用的药物干预途径袁传统的方法是采用员皂蕴注射器渊园郾缘号针头冤在回抽见血后予以注射袁但是由于注射过程中小鼠挣扎尾部摆动易使针头移位袁导致注射失败袁且难以估算注射液有效入量袁影响最终的实验结果遥采用我们自制的这种方法进行尾静脉注射可以准确的估算注射液有效入量袁但是由于其操作繁琐袁耗时较久袁且药物经过肝脏的首过消除到达心脏后其疗效有所下降袁因此如果是研究肝脏方面的疾病袁采用尾静脉注射效果优于心肌注射遥采用心肌注射法袁药物没有肝脏的首过消除效应袁心脏组织中腺病毒转染效率明显增加袁因此用于研究心脏方面疾病此法效果更好曰且小鼠开胸可用于做心梗模型袁利于后续方面的研究遥参考文献院 咱员暂摇陈育尧袁黄雪玲援小鼠尾静脉注射法咱允暂援毒理学杂志袁圆园园愿袁圆圆渊源冤院猿员员原猿员圆援咱圆暂摇蔡陈之袁陈凯援小鼠尾静脉注射的几点体会咱允暂援科技向导袁渊圆园员园冤袁渊远冤院源援咱猿暂摇韵造藻早栽葬则灶葬增泽噪蚤允砸酝援袁杂糟澡蚤灶噪藻酝袁晕蚤藻匝袁藻贼葬造援酝燥怎泽藻糟葬则凿蚤葬糟泽怎则早藻则赠糟燥皂责则藻澡藻灶泽蚤增藻贼藻糟澡灶蚤择怎藻泽枣燥则贼澡藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶燥枣澡怎皂葬灶凿蚤泽藻葬泽藻泽葬灶凿贼澡藻蚤则葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶枣燥则早藻灶燥皂蚤糟泽贼怎凿蚤藻泽咱允暂援孕澡赠泽蚤燥造郧藻灶燥皂蚤糟泽袁圆园园源袁员远渊猿冤院猿源怨原远园援咱源暂摇杂增藻灶泽泽燥灶耘悦袁酝援袁酝葬则泽澡葬造造阅允袁宰燥燥凿葬则凿运袁藻贼葬造援耘枣枣蚤糟蚤藻灶贼葬灶凿泽贼葬遭造藻贼则葬灶泽凿怎糟贼蚤燥灶燥枣糟葬则凿蚤燥皂赠燥糟赠贼藻泽葬枣贼藻则蚤灶贼则葬皂赠燥糟葬则凿蚤葬造蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶燥则蚤灶贼则葬糟燥则燥灶葬则赠责藻则枣怎泽蚤燥灶憎蚤贼澡则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼葬凿藻灶燥鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿增蚤则怎泽增藻糟贼燥则泽咱允暂援悦蚤则糟怎造葬贼蚤燥灶袁员怨怨怨袁怨怨院圆园员原圆园缘援咱缘暂摇蒋兰兰袁冯俊涛袁罗百灵袁等援硝酸甘油干预法对小鼠尾静脉穿刺效果的影响咱允暂援中国医学工程袁圆园园源袁员圆渊源冤院怨圆原怨猿援也修回日期页圆园员远原园源原圆远

50 圆园员远年愿月第圆远卷摇第愿期 中国比较医学杂志悦匀陨晕耘杂耘允韵哉砸晕粤蕴韵云悦韵酝孕粤砸粤栽陨灾耘酝耘阅陨悦陨晕耘 粤怎早怎泽贼袁圆园员远灾燥造援圆远摇晕燥援愿 藡 蕥 蕥蕥蕥蕥藡研究报告 蕥蕥蕥蕥藡 蕥藡 遥测方法对比传统安全药理学方法的优势及应用 孙晶晶袁周摇 泉袁齐珍珍袁郭秋平 渊广州医药研究总院有限公司药物非临床评价研究中心袁广州摇缘员园圆源园冤 摇摇揖摘要铱摇目的摇对比传统安全药理研究方法袁论证遥测方法的优势遥方法摇分别使用传统安全药理方法和遥测技术对月藻葬早造藻犬进行连续的心率尧呼吸频率尧血压和心电等生理指征监测袁分析对比麻醉状态尧清醒状态和采食前后月藻葬早造藻犬的生理指标的变化遥结果摇维持麻醉会造成动物的心率尧呼吸频率尧血压和心电匝栽间期等出现显著变化曰清醒动物圆源澡的生理指标变化不明显袁并呈现出一定的生物节律曰相对清醒动物袁麻醉动物的心率显著升高尧血压显著升高尧心电匝砸杂渊匝砸杂段冤和匝栽糟枣渊匝栽糟枣间期冤显著延长尧呼吸频率降低曰采食后动物心率显著升高袁匝栽糟枣极显著延长遥结论摇传统安全药理研究方法会影响动物心率尧血压尧呼吸频率和匝栽间期等生理指标袁影响药物评价的客观性袁通过遥测技术使用清醒动物进行安全药理研究能够减少误差袁但在具体应用时需尽量排除外界干扰遥揖关键词铱摇月藻葬早造藻犬曰遥测曰安全药理揖中图分类号铱砸鄄猿猿摇摇揖文献标识码铱粤摇摇揖文章编号铱员远苑员鄄苑愿缘远渊圆园员远冤园愿鄄园园源苑鄄园远凿燥蚤院员园郾猿怨远怨援躁援蚤泽泽灶援员远苑员原苑愿缘远郾圆园员远郾园愿郾园园苑 粤凿增葬灶贼葬早藻泽葬灶凿葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣贼藻造藻皂藻贼则赠糟燥皂责葬则藻凿憎蚤贼澡贼澡藻贼则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造皂藻贼澡燥凿泽蚤灶泽葬枣藻贼赠责澡葬则皂葬糟燥造燥早赠 杂哉晕允蚤灶早鄄躁蚤灶早袁在匀韵哉匝怎葬灶袁匝陨在澡藻灶鄄扎澡藻灶袁郧哉韵匝蚤怎鄄责蚤灶早渊悦藻灶贼藻则枣燥则阅则怎早晕燥灶鄄悦造蚤灶蚤糟葬造耘增葬造怎葬贼蚤燥灶葬灶凿砸藻泽藻葬则糟澡袁郧怎葬灶早扎澡燥怎孕澡葬则皂葬糟藻怎贼蚤糟葬造砸藻泽藻葬则糟澡陨灶泽贼蚤贼怎贼藻悦燥援蕴贼凿袁郧怎葬灶早扎澡燥怎缘员园圆源园袁悦澡蚤灶葬冤 摇摇揖粤遭泽贼则葬糟贼铱摇韵遭躁藻糟贼蚤增藻摇栽燥责则燥增藻贼澡藻葬凿增葬灶贼葬早藻泽燥枣贼藻造藻皂藻贼则赠遭赠糟燥皂责葬则蚤灶早憎蚤贼澡贼澡藻贼则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造皂藻贼澡燥凿泽蚤灶泽葬枣藻贼赠责澡葬则皂葬糟燥造燥早赠援酝藻贼澡燥凿泽摇栽燥皂燥灶蚤贼燥则糟燥灶贼蚤灶怎燥怎泽造赠贼澡藻澡藻葬则贼则葬贼藻袁则藻泽责蚤则葬贼燥则赠则葬贼藻袁遭造燥燥凿责则藻泽泽怎则藻葬灶凿耘悦郧燥枣月藻葬早造藻凿燥早泽遭赠贼则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造葬灶凿贼藻造藻皂藻贼则赠皂藻贼澡燥凿泽则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠袁葬灶葬造赠扎藻葬灶凿糟燥皂责葬则藻贼澡藻糟澡葬灶早藻泽遭藻贼憎藻藻灶葬灶藻泽贼澡藻贼蚤扎藻凿葬灶凿糟燥灶泽糟蚤燥怎泽凿燥早泽遭藻枣燥则藻葬灶凿葬枣贼藻则枣藻藻凿蚤灶早援砸藻泽怎造贼泽摇酝葬蚤灶贼藻灶葬灶糟藻燥枣葬灶藻泽贼澡藻泽蚤葬糟澡葬灶早藻凿泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠贼澡藻澡藻葬则贼则葬贼藻袁则藻泽责蚤则葬贼燥则赠则葬贼藻袁遭造燥燥凿责则藻泽泽怎则藻葬灶凿匝栽蚤灶贼藻则增葬造蚤灶贼澡藻耘悦郧燥枣葬灶蚤皂葬造泽援栽澡藻糟澡葬灶早藻泽燥枣责澡赠泽蚤燥造燥早蚤糟葬造蚤灶凿蚤糟葬贼燥则泽蚤灶圆源澡蚤泽灶燥贼燥遭增蚤燥怎泽蚤灶糟燥灶泽糟蚤燥怎泽葬灶蚤皂葬造泽袁葬灶凿泽澡燥憎藻凿葬糟藻则贼葬蚤灶遭蚤燥则澡赠贼澡皂援悦燥皂责葬则藻凿憎蚤贼澡贼澡藻糟燥灶泽糟蚤燥怎泽葬灶蚤皂葬造泽袁贼澡藻葬灶藻泽贼澡藻贼蚤扎藻凿凿燥早泽爷澡藻葬则贼则葬贼藻憎葬泽泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠澡蚤早澡藻则袁遭造燥燥凿责则藻泽泽怎则藻蚤灶糟则藻葬泽藻凿泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠袁匝砸杂葬灶凿匝栽糟枣蚤灶贼藻则增葬造责则燥造燥灶早藻凿泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠袁则藻泽责蚤则葬贼燥则赠枣则藻择怎藻灶糟赠凿藻糟则藻葬泽藻凿袁澡藻葬则贼则葬贼藻蚤灶糟则藻葬泽藻凿泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠葬枣贼藻则枣藻藻凿蚤灶早袁葬灶凿匝栽糟枣蚤灶贼藻则增葬造藻曾贼藻灶凿藻凿增藻则赠泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠援悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶泽摇栽则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造皂藻贼澡燥凿泽蚤灶泽葬枣藻贼赠责澡葬则皂葬糟燥造燥早赠葬枣枣藻糟贼葬灶蚤皂葬造责澡赠泽蚤燥造燥早蚤糟葬造蚤灶凿蚤糟葬贼燥则泽泽怎糟澡葬泽澡藻葬则贼则葬贼藻袁遭造燥燥凿责则藻泽泽怎则藻袁则藻泽责蚤则葬贼燥则赠则葬贼藻葬灶凿匝栽蚤灶贼藻则增葬造袁憎澡蚤糟澡葬枣枣藻糟贼贼澡藻燥遭躁藻糟贼蚤增蚤贼赠燥枣凿则怎早藻增葬造怎葬贼蚤燥灶援哉泽蚤灶早糟燥灶泽糟蚤燥怎泽葬灶蚤皂葬造泽遭赠贼藻造藻皂藻贼则赠糟葬灶则藻凿怎糟藻贼澡藻泽藻藻则则燥则泽袁澡燥憎藻增藻则袁贼澡藻蚤灶贼藻则枣藻则藻灶糟藻枣则燥皂燥怎贼泽蚤凿藻泽澡燥怎造凿遭藻藻造蚤皂蚤灶葬贼藻凿援揖运藻赠憎燥则凿泽铱摇月藻葬早造藻凿燥早曰栽藻造藻皂藻贼则赠曰杂葬枣藻贼赠责澡葬则皂葬糟燥造燥早赠 咱基金项目暂广州市科信局市科研条件建设渊编号院穗科条咱圆园园怨暂缘原员员袁穗科条咱圆园员猿暂圆苑苑原员冤曰广州市科信局生物产业重大专项渊编号院圆园员猿园园园园园园缘猿冤遥咱作者简介暂孙晶晶渊员怨苑愿原冤袁女袁研究方向院新药研发遥耘鄄皂葬蚤造院泽躁蚤灶早躁蚤灶早猿岳泽蚤灶葬援糟燥皂遥咱通讯作者暂郭秋平渊员怨苑愿原冤袁女袁研究方向院新药研发遥耘鄄皂葬蚤造院员猿源圆苑缘怨缘园圆猿岳员远猿援糟燥皂遥

51 源愿中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 摇摇安全药理学渊泽葬枣藻贼赠责澡葬则皂葬糟燥造燥早赠冤主要是研究药物在治疗范围内或以上的剂量时袁潜在的不期望出现的对生理功能的不良影响袁即观察药物对中枢咱员暂神经系统尧心血管系统和呼吸系统的影响遥其中心血管系统实验主要在犬或猴等大动物上进行袁建议采用清醒动物遥相对传统的使用麻醉动物进行的安全药理学实验方法袁借助遥测技术使用清醒动物可排除麻醉尧创伤应激及动物活动受限等因素的干扰袁同时增加受试物对动物匝栽间期尧血压尧呼吸尧心率等安全药理学研究参数影响的检测灵敏咱圆袁猿暂度袁因而实验结果更客观尧准确袁更为接近临床遥测得的生理信号更能反映动物在正常且自然的状态下的生理状况遥在安全药理实验中袁使用遥测技术的优势显而易见院实验设计更为科学曰可长时间连续监测曰所得咱源暂数据更接近真实值曰符合野猿砸冶国际原则等遥目前国内已有遥测技术应用在月藻葬早造藻犬尧食蟹猴尧巴马咱缘原苑暂小型猪等动物的成功案例袁也据此进行过安全咱愿暂咱怨暂药理研究遥刘雁在同时使用麻醉动物和清醒动物进行化合物粤的安全药理评价时发现袁因麻醉剂对动物反射功能的抑制袁可导致清醒动物的心率降低的化合物粤会同时降低麻醉动物的心率和血压袁证明使用麻醉动物会影响某些药物的评价效果袁但遥测技术相对于传统安全药理研究方法的优势并未得到全面的论证袁本实验以月藻葬早造藻犬为例袁探讨遥测方法相对于传统安全药理学实验方法的优势以及实际应用中需要注意的问题遥 员摇 材料和方法 员郾员摇实验动物及实验环境普通级月藻葬早造藻犬袁愿耀员圆月龄袁愿耀员圆噪早袁购自广州医药研究总院有限公司实验动物研究开发中心渊杂悦载运渊粤冤圆园员猿原园园园苑冤遥动物单笼饲养于普通级动物房渊杂再载运渊粤冤圆园员猿原园园园猿冤袁动物房环境符合国标要求遥员郾圆摇药品尧试剂和溶剂缘园圆园园麻醉机渊杂贼燥藻造贼蚤灶早公司冤袁用于动物维持麻醉曰遥测生理信号采集系统渊阅葬贼葬杂糟蚤藻灶糟藻泽陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造公司冤袁用于麻醉动物生理信号采集曰酝孕员缘园十六道生理记录仪渊美国月蚤燥责葬糟冤袁用于清醒动物生理信号采集遥注射用青霉素钠渊华北制药股份有限公司袁批号院云猿员员圆员猿园冤袁布洛芬缓释片渊惠州大亚制药股份 有限公司袁批号院员源园源园缘冤袁丙泊酚注射液渊西安力邦制药有限公司袁批号院员源员园圆猿员冤袁异氟烷渊宝龄富锦生物股份有限公司袁批号院源怨园园原员圆园员冤袁肝素钠注射液渊江苏万邦生化医药股份有限公司袁批号院员源园员员园远冤袁园郾怨豫氯化钠注射液渊广东科伦药业有限公司袁批号院阅员猿员员园愿园远原圆冤遥员郾猿摇动物实验员郾猿郾员摇麻醉动物的生理数据采集院动物采用静脉注射丙泊酚注射液诱导麻醉后行气管插管袁使用园郾缘豫耀员豫异氟烷进行维持麻醉遥将动物仰卧保定于恒温手术台上袁对其颈部进行除毛和常规消毒袁在无菌条件下切开颈部皮肤进行单侧颈总动脉插管渊动脉插管内充满员圆缘哉辕皂蕴肝素钠溶液冤遥使用十六道生理记录仪记录动物的呼吸尧血压和心电遥员郾猿郾圆摇清醒动物的生理数据采集院动物使用丙泊酚注射液诱导麻醉后使用员郾缘豫耀猿豫异氟烷进行维持麻醉袁在无菌条件下行阅苑园鄄孕悦栽砸植入子植入手术遥术前和术后猿凿袁每天经口饲喂布洛芬缓释片镇痛袁术后缘凿袁每天肌内注射青霉素钠消炎袁并据恢复状况进行创口常规消毒袁待动物痊愈后使用阅杂陨遥测系统进行生理数据采集遥员郾源摇数据获取及分析选取远只月藻葬早造藻犬袁在麻醉稳定状态下使用酝孕员缘园十六道生理记录仪采集连续远澡的呼吸尧血压和心电袁另取猿只雄性月藻葬早造藻犬采用阅杂陨阅葬贼葬择怎藻泽贼粤援砸援栽软件连续获取圆源澡的呼吸尧血压和心电袁并用粤糟择噪灶燥憎造藻凿早藻猿郾愿郾员软件进行数据处原理遥所有数据使用曾依泽表示袁采用杂孕杂杂圆园郾园软件进行统计学处理袁差异显著性采用配对贼检验和单因子方差分析袁孕约园郾园缘为差异有统计学意义遥 圆摇 结果 圆郾员摇麻醉动物以麻醉稳定时为园皂蚤灶袁分别取园尧缘尧员缘尧猿园尧远园尧员圆园尧员愿园尧圆源园尧猿园园尧猿远园皂蚤灶的数据渊取相应时间点附近稳定的远园泽数据的均值冤进行分析统计袁统计结果见表员尧表圆袁其中匝栽糟枣间期为匝栽间期的校正值袁员辕猿匝栽糟枣越匝栽辕渊砸砸冤遥随麻醉维持时间的延长袁动物的心率尧呼吸频率尧血压均有下降趋势袁且相比园皂蚤灶袁心率在缘尧员缘尧远园皂蚤灶及之后有显著渊或极显著冤降低袁呼吸频率在员愿园尧圆源园皂蚤灶有显著降低袁匝栽间期在缘尧员缘尧远园皂蚤灶及之后有显著延长袁匝栽糟枣间期在缘尧远园皂蚤灶及之后有

52 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 源怨 显著延长遥圆郾圆摇清醒动物清醒动物取指定段中间附近生理信号稳定的远园泽的均值袁且避开动物采食后远园皂蚤灶渊每天愿院园园尧员远院园园饲喂冤袁采集猿只清醒动物全天的数据见表猿尧 时间点渊皂蚤灶冤栽蚤皂藻责燥蚤灶贼泽渊皂蚤灶冤 栽葬遭援员摇 表源遥全天动物心率尧呼吸频率尧血压和匝栽糟枣间期在员园院园园耀员员院园园较高袁且心率和匝栽糟枣间期比缘院园园耀远院园园显著升高袁其它指标的变化均无统计学意义遥 原表员摇麻醉月藻葬早造藻犬心率呼吸血压渊曾依泽袁灶越远冤匀藻葬则贼则葬贼藻袁则藻泽责蚤则葬贼燥则赠则葬贼藻葬灶凿皂藻葬灶遭造燥燥凿责则藻泽泽怎则藻燥枣贼澡藻葬灶藻泽贼澡藻贼蚤扎藻凿月藻葬早造藻凿燥早泽 心率匀藻葬则贼则葬贼藻渊遭责皂冤 呼吸频率砸藻泽责蚤则葬贼燥则赠则葬贼藻渊遭责皂冤 平均压酝藻葬灶遭造燥燥凿责则藻泽泽怎则藻渊皂皂匀早冤 园 员远远郾圆依员愿郾园 员园郾怨依苑郾园 员圆源郾缘依远郾猿 缘 鄢员缘愿郾园依员缘郾园 员员郾园依苑郾远 员圆猿郾源依缘郾愿 员缘 鄢员缘苑郾苑依员源郾苑 员园郾猿依苑郾源 员圆缘郾员依源郾源 猿园 员远园郾缘依员猿郾源 员圆郾园依员园郾猿 员圆缘郾源依源郾缘 远园 鄢员缘源郾缘依员怨郾猿 员园郾源依怨郾缘 员圆源郾愿依缘郾怨 员圆园 鄢员缘圆郾猿依圆园郾员 怨郾员依苑郾圆 员圆猿郾源依苑郾圆 员愿园 鄢鄢员源源郾怨依员猿郾园 鄢苑郾缘依远郾园 员员愿郾园依远郾猿 圆源园 鄢鄢员源员郾园依员猿郾远 鄢远郾远依缘郾源 员员远郾缘依苑郾愿 猿园园 鄢鄢员猿怨郾源依员园郾园 苑郾园依源郾源 员员猿郾愿依愿郾怨 猿远园 鄢员源园郾缘依员园郾缘 远郾怨依猿郾远 员员园郾圆依员猿郾缘 鄢鄢鄢注院表示与园皂蚤灶比较袁孕约园郾园缘袁表示与园皂蚤灶比较袁孕约园郾园员遥鄢鄢鄢晕燥贼藻援悦燥皂责葬则藻凿憎蚤贼澡园皂蚤灶袁皂藻葬灶泽孕约园郾园缘葬灶凿皂藻葬灶泽孕约园郾园员援 时间点渊皂蚤灶冤栽蚤皂藻责燥蚤灶贼泽渊皂蚤灶冤 原表圆摇麻醉月藻葬早造藻犬心电图指标渊曾依泽袁灶越远冤栽葬遭援圆摇悦葬则凿蚤燥早则葬责澡蚤糟责葬则葬皂藻贼藻则泽燥枣贼澡藻葬灶藻泽贼澡藻贼蚤扎藻凿月藻葬早造藻凿燥早泽 孕砸间期孕砸渊泽冤 匝栽间期匝栽渊泽冤 匝砸杂段匝砸杂渊泽冤 匝栽糟枣间期匝栽糟枣渊泽冤 园 园郾园苑源依园郾园员员 园郾圆员怨依园郾园员愿 园郾园苑源依园郾园园愿 园郾猿园缘依园郾园员苑 缘 园郾园苑源依园郾园员员 鄢鄢园郾圆猿员依园郾园员苑 园郾园苑缘依园郾园园怨 鄢园郾猿员苑依园郾园员远 员缘 园郾园苑缘依园郾园员员 鄢园郾圆圆怨依园郾园员猿 园郾园苑源依园郾园园愿 园郾猿员员依园郾园员源 猿园 园郾园苑猿依园郾园园愿 园郾圆圆苑依园郾园员员 园郾园苑猿依园郾园园怨 园郾猿员源依园郾园员源 远园 园郾园苑源依园郾园员员 鄢鄢园郾圆猿员依园郾园员远 园郾园苑源依园郾园园苑 鄢园郾猿员远依园郾园员源 员圆园园郾园苑缘依园郾园员园园郾圆猿远依园郾园员远鄢鄢园郾园苑源依园郾园园怨园郾猿圆圆依园郾园员苑鄢 员愿园园郾园苑缘依园郾园园愿园郾圆源圆依园郾园员源鄢鄢园郾园苑远依园郾园园愿园郾猿圆愿依园郾园员苑鄢 圆源园园郾园苑缘依园郾园员园园郾圆源远依园郾园员远鄢鄢园郾园苑缘依园郾园园怨园郾猿猿猿依园郾园员怨鄢 猿园园园郾园苑远依园郾园员园园郾圆源远依园郾园员源鄢鄢园郾园苑远依园郾园员园园郾猿猿员依园郾园员远鄢 猿远园园郾园苑苑依园郾园园怨园郾圆源源依园郾园员缘鄢园郾园苑缘依园郾园园怨园郾猿猿圆依园郾园员愿鄢 鄢鄢鄢注院表示与园皂蚤灶比较袁孕约园郾园缘袁表示与园皂蚤灶比较袁孕约园郾园员遥鄢鄢鄢晕燥贼藻援悦燥皂责葬则藻凿憎蚤贼澡园皂蚤灶袁皂藻葬灶泽孕约园郾园缘葬灶凿皂藻葬灶泽孕约园郾园员援 时间点栽蚤皂藻责燥蚤灶贼泽 栽葬遭援猿摇 原表猿摇清醒月藻葬早造藻犬心率呼吸血压渊曾依泽袁灶越猿冤匀藻葬则贼则葬贼藻袁则藻泽责蚤则葬贼燥则赠则葬贼藻葬灶凿皂藻葬灶遭造燥燥凿责则藻泽泽怎则藻燥枣猿糟燥灶泽糟蚤燥怎泽月藻葬早造藻凿燥早泽 心率匀藻葬则贼则葬贼藻渊遭责皂冤 呼吸频率砸藻泽责蚤则葬贼燥则赠则葬贼藻渊遭责皂冤 平均压酝藻葬灶遭造燥燥凿责则藻泽泽怎则藻渊皂皂匀早冤 怨院园园耀员园院园园 葬遭愿苑郾猿依远郾园 圆源郾园依圆郾怨 员园怨郾怨依员员郾怨 员园院园园耀员员院园园 怨园郾圆依苑郾苑葬 圆猿郾缘依圆郾员 员员缘郾远依员圆郾远 员员院园园耀员圆院园园 葬遭愿苑郾远依怨郾远 圆猿郾缘依猿郾猿 员员圆郾远依员远郾园 员猿院园园耀员源院园园 葬遭苑猿郾苑依愿郾愿 圆猿郾源依源郾园 员园怨郾缘依员园郾圆 员源院园园耀员缘院园园 葬遭苑圆郾愿依员苑郾苑 员怨郾愿依圆郾怨 员员源郾远依远郾苑 员苑院园园耀员愿院园园 葬遭苑员郾缘依缘郾远 员怨郾园依猿郾员 员员圆郾愿依远郾猿 圆圆院园园耀圆猿院园园 葬遭苑愿郾猿依愿郾猿 员苑郾愿依源郾怨 怨远郾怨依源郾愿 员院园园耀圆院园园 葬遭苑愿郾愿依员苑郾缘 员怨郾源依源郾圆 员园圆郾圆依源郾员 缘院园园耀远院园园 遭远愿郾远依猿郾苑 员愿郾圆依源郾员 员员员郾远依员圆郾员 注院具有同样字母角标表示差异无显著性渊孕逸园郾园缘冤袁不同角标表示差异有显著性渊孕约园郾园缘冤遥晕燥贼藻援栽澡藻泽葬皂藻造藻贼贼藻则泽怎责藻则泽糟则蚤责贼泽皂藻葬灶灶燥泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻渊孕逸园郾园缘冤袁凿蚤枣枣藻则藻灶贼造藻贼贼藻则泽怎责藻则泽糟则蚤责贼泽皂藻葬灶泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻渊孕约园郾园缘冤援

53 缘园中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 时间点栽蚤皂藻责燥蚤灶贼泽 原表源摇清醒月藻葬早造藻犬心电图指标渊曾依泽袁灶越猿冤栽葬遭援源摇悦葬则凿蚤燥早则葬责澡蚤糟责葬则葬皂藻贼藻则泽燥枣猿糟燥灶泽糟蚤燥怎泽月藻葬早造藻凿燥早泽 匝砸杂段匝砸杂渊泽冤 匝栽间期匝栽渊泽冤 匝栽糟枣间期匝栽糟枣间期渊泽冤 杂栽段杂栽渊泽冤 怨院园园耀员园院园园 园郾园缘苑依园郾园员源 园郾圆猿园依园郾园员愿 葬遭园郾圆远员依园郾园圆远 园郾员怨员依园郾园员员 员园院园园耀员员院园园 园郾园缘苑依园郾园园缘 园郾圆猿猿依园郾园园远 葬园郾圆远远依园郾园园怨 园郾员怨圆依园郾园园苑 员员院园园耀员圆院园园 园郾园缘缘依园郾园园圆 园郾圆猿员依园郾园员园 葬遭园郾圆远圆依园郾园园远 园郾员怨猿依园郾园员怨 员猿院园园耀员源院园园 园郾园缘缘依园郾园园员 园郾圆猿怨依园郾园园远 葬遭园郾圆缘缘依园郾园员苑 园郾员怨怨依园郾园园怨 员源院园园耀员缘院园园 园郾园缘苑依园郾园园远 园郾圆猿圆依园郾园员园 葬遭园郾圆源远依园郾园园怨 园郾员怨园依园郾园员员 员苑院园园耀员愿院园园 园郾园源怨依园郾园园猿 园郾圆源猿依园郾园员源 葬遭园郾圆缘苑依园郾园园愿 园郾圆园园依园郾园员员 圆圆院园园耀圆猿院园园 园郾园缘源依园郾园员园 园郾圆猿怨依园郾园园圆 葬遭园郾圆远员依园郾园园苑 园郾员怨远依园郾园园缘 员院园园耀圆院园园 园郾园缘缘依园郾园园源 园郾圆源员依园郾园园怨 葬遭园郾圆远猿依园郾园员圆 园郾员怨愿依园郾园园愿 缘院园园耀远院园园 园郾园缘员依园郾园园源 园郾圆圆苑依园郾园员愿 遭园郾圆猿苑依园郾园圆园 园郾员怨员依园郾园员苑 注院具有同样字母角标表示差异无显著性渊孕逸园郾园缘冤袁不同角标表示差异有显著性渊孕约园郾园缘冤遥晕燥贼藻援栽澡藻泽葬皂藻造藻贼贼藻则泽怎责藻则泽糟则蚤责贼皂藻葬灶泽灶燥泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻渊孕逸园郾园缘冤袁凿蚤枣枣藻则藻灶贼造藻贼贼藻则泽怎责藻则泽糟则蚤责贼皂藻葬灶泽泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻渊孕约园郾园缘冤援 时间点栽蚤皂藻责燥蚤灶贼泽 麻醉粤灶藻泽贼澡藻贼蚤扎藻凿 上午酝燥则灶蚤灶早 下午粤枣贼藻则灶燥燥灶 夜间晕蚤早澡贼 栽葬遭援缘摇 心率匀藻葬则贼则葬贼藻渊遭责皂冤 原表缘摇麻醉动物和清醒动物的生理指标对比渊曾依泽袁灶越怨冤悦燥皂责葬则蚤泽燥灶燥枣责澡赠泽蚤燥造燥早蚤糟葬造责葬则葬皂藻贼藻则泽蚤灶葬灶藻泽贼澡藻贼蚤扎藻凿葬灶凿糟燥灶泽糟蚤燥怎泽月藻葬早造藻凿燥早泽 呼吸频率砸藻泽责蚤则葬贼燥则赠则葬贼藻渊遭责皂冤 平均压酝藻葬灶遭造燥燥凿责则藻泽泽怎则藻渊皂皂匀早冤 匝砸杂段匝砸杂渊泽冤 匝栽间期匝栽渊泽冤 匝栽糟枣间期匝栽糟枣渊泽冤 员缘怨郾缘依员苑郾圆葬员源郾怨依怨郾愿遭员圆圆郾猿依源郾缘葬园郾园苑猿依园郾园园源葬园郾圆圆远依园郾园园怨遭园郾猿员园依园郾园园怨葬 愿愿郾源依园郾怨遭圆猿郾苑依猿郾猿葬员员圆郾苑依员员郾怨遭园郾园缘远依园郾园源猿遭园郾圆猿员依园郾园园猿葬遭园郾圆远猿依园郾园员源遭 糟苑圆郾苑依员园郾猿 糟苑缘郾圆依员员郾园 葬遭圆园郾苑依猿郾缘 葬遭员愿郾缘依猿郾怨 遭员员圆郾猿依苑郾圆 糟员园猿郾远依怨郾源 遭园郾园缘源依园郾园园缘 遭园郾园缘源依园郾园园远 葬园郾圆猿愿依园郾园员园 葬遭园郾圆猿远依园郾园员圆 遭园郾圆缘猿依园郾园员圆 遭园郾圆缘源依园郾园员苑 注院具有同样字母角标表示差异无显著性渊孕逸园郾园缘冤袁不同角标表示差异有显著性渊孕约园郾园缘冤遥晕燥贼藻援栽澡藻泽葬皂藻造藻贼贼藻则泽怎责藻则泽糟则蚤责贼皂藻葬灶泽灶燥泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻渊孕逸园郾园缘冤袁凿蚤枣枣藻则藻灶贼造藻贼贼藻则泽怎责藻则泽糟则蚤责贼泽皂藻葬灶泽泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻渊孕约园郾园缘冤援 栽葬遭援远摇 原表远摇采食前后动物的生理指标对比渊曾依泽袁灶越远冤悦燥皂责葬则蚤泽燥灶燥枣责澡赠泽蚤燥造燥早蚤糟葬造责葬则葬皂藻贼藻则泽蚤灶贼澡藻凿燥早泽遭藻枣燥则藻葬灶凿葬枣贼藻则枣藻藻凿蚤灶早 时间点栽蚤皂藻责燥蚤灶贼泽 心率匀藻葬则贼则葬贼藻渊遭责皂冤 呼吸频率砸藻泽责蚤则葬贼燥则赠则葬贼藻渊遭责皂冤 平均压酝藻葬灶遭造燥燥凿责则藻泽泽怎则藻渊皂皂匀早冤 匝砸杂段匝砸杂渊泽冤 匝栽间期匝栽渊泽冤 匝栽糟枣间期匝栽糟枣渊泽冤 采食前月藻枣燥则藻 苑园郾苑依员员郾苑 员怨郾园依猿郾猿 员员猿郾员依愿郾怨 园郾园缘源依园郾园园远 园郾圆圆怨依园郾园员猿 园郾圆源愿依园郾园员怨 采食后粤枣贼藻则 鄢员园愿郾怨依员愿郾远 圆园郾苑依圆郾怨 员园怨郾愿依缘郾远 园郾园缘缘依园郾园园苑 园郾圆员怨依园郾园员苑 鄢鄢园郾圆怨源依园郾园圆圆 鄢注院表示与采食前比较袁孕约园郾园缘袁鄢鄢表示与采食前比较袁孕约园郾园员遥 鄢鄢鄢晕燥贼藻援悦燥皂责葬则藻凿憎蚤贼澡贼澡葬贼遭藻枣燥则藻枣藻藻凿蚤灶早袁皂藻葬灶泽孕约园郾园缘葬灶凿皂藻葬灶泽孕约园郾园员援 圆郾猿摇麻醉动物和不同时间段的清醒动物对比考虑到随麻醉维持时间延长动物的生理指标会出现的变化袁取猿只雄性麻醉动物园尧缘尧员缘皂蚤灶的数据作为麻醉动物数据遥因正常动物全天的生理指标存在生物节律袁故将清醒动物数据按照上午渊苑院园园耀员圆院园园冤尧下午渊员猿院园园耀员愿院园园冤尧夜间渊圆圆院园园耀远院园园冤统计袁与麻醉动物比较袁结果见表缘遥对比清醒状态袁麻醉状态的动物心率显著升高袁血压显著升高袁匝砸杂段和匝栽糟枣间期显著延长袁呼吸频率有所降低遥 对于清醒动物袁上午的心率尧呼吸频率和血压最高袁心率较下午尧夜间显著升高袁夜间的血压显著低于白天遥圆郾源摇动物采食前后比较采用清醒动物进行安全药理实验时袁可避免绝大多数人为干扰袁但动物仍需定时饲喂袁本实验考察了动物在采食前后的生理指征变化遥动物分别在愿院园园和员远院园园进行喂食袁将其愿院猿园耀怨院园园以及员远院猿园耀员苑院园园的生理数据视为采食后袁缘院园园耀远院园园以及员源院园园耀员缘院园园视为采食袁结果见表远遥

54 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 缘员 采食后动物心率显著升高袁匝栽糟枣间期极显著延长遥 猿摇 讨论 猿郾员摇传统的安全药理实验方法传统安全药理研究方法中药物对月藻葬早造藻犬的呼吸尧心血管系统的影响常采用气体麻醉的动物进行袁其呼吸尧心血管系统的指标与麻醉密切相关袁且动物保定尧手术引起的创伤应激和其它实验条件也可致动物生理指征变化遥本实验模拟麻醉动物的安全药理实验方法袁记录分析麻醉稳定远澡的月藻葬早造藻犬的生理信号遥与麻醉稳定园皂蚤灶相比袁随麻醉维持时间的延长袁动物的呼吸尧心率和血压有降低趋势袁且在部分咱员园暂时间点有显著降低袁与王青秀等的研究相符遥随麻醉时间延长袁匝栽间期和匝栽糟枣间期有延长趋势袁且在大多数时间点发生显著延长遥异氟烷麻醉会造成动物不同程度的呼吸抑制袁有减弱心脏收缩力的副作用袁通过抑制心肌或渊和冤扩张血管袁引起不同程度的动脉血压下降袁并可通过直接作用于心肌细咱员员暂胞及通过神经体液因素间接影响心肌遥另外袁动物在麻醉维持过程中袁因能量消耗未能及时补充也会导致机体变化遥证明传统安全药理实验方法会对动物的呼吸尧心血管系统指标等产生不同程度的影响袁影响实验研究结果遥猿郾圆摇清醒动物现行指导原则建议采用清醒动物进行安全药理实验袁在本实验室条件下袁通过外科手术袁在月藻葬早造藻犬体内埋植阅苑园鄄孕悦栽砸遥测植入子袁待动物恢复袁以阅杂陨遥测生理信号采集系统连续记录并分析月藻葬早造藻犬圆源澡的生理信号遥动物房采用员圆澡渊苑院园园耀员怨院园园冤的照明袁清醒动物心率为远愿郾远耀怨园郾圆遭责皂袁呼吸频率为员苑郾愿耀圆源郾园遭责皂袁平均动脉压为怨远郾怨耀员员缘郾远皂皂匀早袁其全天的心率尧呼吸频率尧血压存在一定波动袁呈现出野白天高尧夜间低冶的趋势袁但除心率尧匝栽糟枣间期在员园院园园耀员员院园园较缘院园园耀远院园园有明显升高外袁其它指标的变化均无统计学意义遥上午的心率尧呼吸频率和血压最高袁心率较下午尧夜间显著升高袁白天的血压较夜间显著升高遥全天的基础数据和呈现出咱员圆暂的生物节律与李娜等的研究相符遥动物在笼中进行数据采集袁数据采集期间禁止除饲养员外所有人员进出动物房袁且采集点避开了 饲喂后远园皂蚤灶内的时间袁消除了人为影响和动物采食的影响遥证明全天的动物状况相对稳定袁干扰因素较少且容易控制袁同时也能体现出类似人体昼夜咱员猿暂节律的生物节律袁证明所得数据的客观有效遥通过遥测技术采用清醒动物进行安全药理实验可以排除干扰袁减小误差袁利于客观反映实验结果遥在使用遥测方法进行的安全药理研究中袁可采用拉丁方设计方法袁能减少使用动物数量袁且试验精确性比传统的随机单位组高袁试验结果分析咱员源暂简便遥猿郾猿摇麻醉动物和清醒动物对比为规避麻醉时间延长对动物造成的影响袁本实验取动物麻醉稳定园耀员缘皂蚤灶的生理指标与清醒动物上午尧下午和夜间进行对比袁可以看出对比清醒状态袁麻醉状态的动物心率尧血压显著升高袁匝砸杂段尧匝栽糟枣间期明显延长袁呼吸较上午时显著降低遥动物在丙泊酚诱导麻醉后采用异氟烷渊园郾缘豫耀员郾缘豫冤进行维持麻醉袁麻醉水平处在浅麻醉和适度麻醉之间袁符合呼吸员圆耀圆园次袁心率大于怨园次辕咱员缘暂皂蚤灶的特征袁其呼吸频率低于清醒动物袁血压和心率显著高于清醒动物袁其血压升高尧呼吸频率降咱员园暂低的结果与王青秀等的研究相符遥匝栽糟枣间期较清醒动物显著延长袁证明对比清醒状态袁麻醉动物的多项生理指征均出现不同程度的变化袁在安全药理研究中袁这些因麻醉引起的变化都可能掩盖所评价药物的效果或毒性遥猿郾源摇动物采食影响对比采食前袁动物采食后代谢增加袁因此心率显著升高袁匝栽糟枣间期极显著延长遥实际应用中袁动物采食后一定时间段渊本实验为远园皂蚤灶冤的数据需要摒弃袁减少其对实验结果的干扰遥有研究表明袁定时饲喂的月藻葬早造藻犬在饲喂前缘皂蚤灶心率以及血流咱员远暂动力学指标迅速上升袁且动物在饲喂过程中同样呈现较高的兴奋状态遥结合本实验结果袁在使用遥测方法进行安全药理实验时袁数据采集应尽量避免饲喂前后的时间遥 源摇 结论 传统安全药理实验方法中袁动物生理指征会因麻醉出现较大变化袁且随麻醉维持时间延长有一定波动袁会产生系统误差袁其实验结果不能完全反映所评价药物的情况遥采用遥测技术开展安全药理实验袁使用清醒动物袁减少了因实验条件产生的系

55 缘圆中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 统误差袁并采用拉丁方设计实验方案袁不同组别同时给药袁降低了实验操作过程中的随机误差袁可更客观真实的反映所评价药物的情况遥使用遥测方法进行安全药理研究时袁除需消除人为干扰外袁数据采集时还应避开饲喂前后的时间遥进行数据分析时袁还需考虑因生物节律导致的全天生理指标变化遥参考文献院 咱员暂摇叶中药尧天然药物和化学药物研究技术指导原则曳课题研究组援中药尧天然药物和化学药物研究技术指导原则咱杂暂援国家食品药品监督管理局袁圆园员源院员援咱圆暂摇陨悦匀郧怎蚤凿葬灶糟藻枣燥则陨灶凿怎泽贼则赠陨悦匀杂苑粤院杂葬枣藻贼赠孕澡葬则皂葬糟燥造燥早赠杂贼怎凿蚤藻泽枣燥则匀怎皂葬灶孕澡葬则皂葬糟藻怎贼蚤糟葬造泽咱杂暂院猿援澡贼贼责院辕辕憎憎憎援蚤糟澡援燥则早辕枣蚤造藻葬凿皂蚤灶辕孕怎遭造蚤糟赃宰藻遭赃杂蚤贼藻辕陨悦匀赃孕则燥凿怎糟贼泽辕郧怎蚤凿藻造蚤灶藻泽辕杂葬枣藻贼赠辕杂苑粤辕杂贼藻责源辕杂苑粤赃郧怎蚤凿藻造蚤灶藻援责凿枣援圆园园园郾圆园员缘郾园怨郾园员援澡贼贼责院辕辕憎憎憎援蚤糟澡援燥则早辕枣蚤造藻葬凿皂蚤灶辕孕怎遭造蚤糟赃宰藻遭赃杂蚤贼藻辕陨悦匀赃孕则燥凿怎糟贼泽辕郧怎蚤凿藻造蚤灶藻泽辕杂葬枣藻贼赠辕杂苑粤辕杂贼藻责源辕杂苑粤赃郧怎蚤凿藻造蚤灶藻援责凿枣咱猿暂摇陨悦匀援陨悦匀郧怎蚤凿葬灶糟藻枣燥则陨灶凿怎泽贼则赠陨悦匀杂苑月院杂葬枣藻贼赠孕澡葬则皂葬糟燥造燥早赠杂贼怎凿蚤藻泽枣燥则粤泽泽藻泽泽蚤灶早贼澡藻孕燥贼藻灶贼蚤葬造枣燥则阅藻造葬赠藻凿灾藻灶贼则蚤糟怎造葬则砸藻责燥造葬则蚤扎葬贼蚤燥灶渊匝栽陨灶贼藻则增葬造孕则燥造燥灶早葬贼蚤燥灶冤遭赠匀怎皂葬灶孕澡葬则皂葬糟藻怎贼蚤糟葬造泽咱杂暂院缘援澡贼贼责院辕辕憎憎憎援蚤糟澡援燥则早辕枣蚤造藻葬凿皂蚤灶辕孕怎遭造蚤糟赃宰藻遭赃杂蚤贼藻辕陨悦匀赃孕则燥凿怎糟贼泽辕郧怎蚤凿藻造蚤灶藻泽辕杂葬枣藻贼赠辕杂苑月辕杂贼藻责源辕杂苑月赃郧怎蚤凿藻造蚤灶藻援责凿枣援圆园园缘郾圆园员缘郾园怨郾园员援咱源暂摇阳海鹰袁王青秀袁刘雁袁等援双压力导管植入体比格犬体内植入手术的实施及在安全药理学研究中的应用咱允暂援军事医学袁圆园员员袁猿缘渊远冤院源远缘原源远愿援咱缘暂摇李娜袁丁双双袁王文誉袁等援比格犬生理遥测系统的建立咱允暂援上海交通大学学报渊农业科学版冤袁圆园员员袁圆怨渊员冤院员远原圆员援咱远暂摇孙伟袁安田仁袁杨小平援食蟹猴无线遥测系统的方法的建立 咱苑暂摇咱愿暂摇咱怨暂摇咱员园暂摇咱员员暂摇咱员圆暂摇咱员猿暂摇咱员源暂摇咱员缘暂摇咱员远暂摇 和技术要点咱粤暂援首届中国药物毒理学年会渊圆园员员年冤暨国际药物非临床安全性评价研究论坛论文集咱悦暂援圆园员员院员怨园原员怨员援陈亮袁潘永明袁朱科燕袁等援基于遥测技术对巴马小型猪部分生理指标的观测咱允暂援中国比较医学杂志袁圆园员源袁圆源渊苑冤院猿园原猿远援张颖丽袁孙立袁王三龙袁等援清醒月藻葬早造藻犬口服月栽粤心血管遥测安全药理研究咱允暂援中国药理学与毒理学杂志袁圆园员猿袁圆苑渊猿冤院远园苑援刘雁援云韵月和植入式遥测系统的建立与应用咱阅暂援北京院中国人民解放军军事医学科学院袁圆园员员院员员园原员员源援王青秀袁刘雁袁王国强袁等援月藻葬早造藻犬在清醒遥测尧麻醉和束缚状态下的生物学特性比较浅析咱粤暂援中国毒理学会第三届中青年学者科技论坛暨圆园员员年全国前列腺病理毒理学研讨会论文摘要咱悦暂袁圆园员员院员猿员援王洪斌援现代兽医麻醉学咱酝暂援北京院中国农业出版社袁圆园员园院苑猿原苑愿援李娜袁王文誉袁奚剑飞援生物遥测法检测清醒状态下月藻葬早造藻犬的心电生理特性咱粤暂援第九届中国实验动物科学年会论文集咱悦暂援圆园员园院猿怨远原源园圆援赵瑛援人体昼夜节律和健康咱允暂援生物学通报袁员怨怨怨袁猿源渊愿冤院员愿原圆园援车爱萍援匀砸园怨园缘尧普拉格雷与盐酸普拉格雷安全药理学研究及遥测系统验证咱阅暂援上海院第二军医大学袁圆园员员院愿缘援李林袁赵玉军渊译冤援小动物外科手术护理技术与概念咱酝暂援沈阳院辽宁科学技术出版社袁圆园员园院员园远援晕葬噪早葬憎葬运袁酝蚤赠葬早葬憎葬再袁栽葬噪藻皂怎则葬晕袁藻贼葬造援耘枣枣藻糟贼燥枣凿蚤藻贼燥灶贼澡藻糟葬则凿蚤燥增葬泽糟怎造葬则泽赠泽贼藻皂蚤灶澡藻葬造贼澡赠遭藻葬早造藻凿燥早泽咱允暂援允灾藻贼酝藻凿杂糟蚤袁圆园员园袁苑圆渊缘冤院远员缘原远员怨援也修回日期页圆园员远原园猿原猿园

56 圆园员远年愿月第圆远卷摇第愿期 中国比较医学杂志悦匀陨晕耘杂耘允韵哉砸晕粤蕴韵云悦韵酝孕粤砸粤栽陨灾耘酝耘阅陨悦陨晕耘 粤怎早怎泽贼袁圆园员远灾燥造援圆远摇晕燥援愿 藡 蕥 蕥蕥蕥蕥藡研究报告 蕥蕥蕥蕥藡 蕥藡 金属硫蛋白表达在悦缘苑月蕴辕远允小鼠肝细胞癌发生中的变化及意义 易摇 员旭袁龙摇 圆圆黎袁程明亮 渊员援贵阳中医学院第二附属医院中心实验室袁贵州贵阳摇缘缘园园园圆曰圆援贵州医科大学附属医院感染科袁贵州贵阳摇缘缘园园园源冤 摇摇揖摘要铱摇目的摇了解金属硫蛋白渊酝栽泽冤基因表达水平在小鼠肝细胞癌渊匀悦悦冤发生过程中的动态变化及其规律袁探讨酝栽泽在匀悦悦发生中的重要意义遥方法摇将员圆缘只缘耀愿周龄雄性悦缘苑月蕴辕远允小鼠随机分为正常对照组和匀悦悦模型组遥模型组小鼠于第员尧圆周分别腹腔注射一次二乙基亚硝胺渊员园园皂早辕噪早袁缘园皂早辕噪早冤袁第猿周起灌胃给予乙醇渊缘猿豫袁缘皂蕴辕噪早袁缘凿辕周冤袁直至猿缘周曰正常组始终给予等量灭菌自来水灌胃遥分别于实验员尧猿尧怨尧员猿尧圆源及猿缘周末处死小鼠袁收集肝组织样本并计算肝脏指数遥采用组织病理学匀耘尧酝葬泽泽燥灶及网状纤维染色检测肝组织损伤及匀悦悦发生情况袁采用酶联免疫吸附法检测肝组织匀浆丙二醛渊酝阅粤冤的活性曰采用实时荧光定量孕悦砸分析酝栽泽转录水平遥结果摇模型组小鼠可见进行性的肝脏病变袁猿缘周末时袁肝脏质地显著变硬袁表面可见大小不等结节形成袁约缘园豫小鼠可见肝细胞异常核分裂像和异常的肝板结构等匀悦悦发生病理改变袁具有显著增加的肝脏指数曰不同时段均表现出增加的酝阅粤活性曰实验员猿周前各时段具有显著增加的酝栽泽皂砸晕粤水平袁圆源周后可见陨陨陨级纤维化形成袁且酝栽泽皂砸晕粤水平显著下降袁甚至低于正常水平遥结论摇小鼠肝组织酝栽泽皂砸晕粤水平从损伤初期的显著增加直至显著纤维化后的低表达变化袁表明酝栽泽表达下调与匀悦悦发生有关遥揖关键词铱摇肝细胞癌曰金属硫蛋白曰基因表达曰小鼠揖中图分类号铱砸鄄猿猿摇摇揖文献标识码铱粤摇摇揖文章编号铱员远苑员鄄苑愿缘远渊圆园员远冤园愿鄄园园缘猿鄄园远凿燥蚤院员园郾猿怨远怨援躁援蚤泽泽灶援员远苑员原苑愿缘远郾圆园员远郾园愿郾园园愿 悦澡葬灶早藻泽葬灶凿泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶糟藻燥枣皂藻贼葬造造燥贼澡蚤燥灶藻蚤灶藻曾责则藻泽泽蚤燥灶凿怎则蚤灶早澡藻责葬贼燥糟葬则糟蚤灶燥早藻灶藻泽蚤泽蚤灶悦缘苑月蕴辕远允皂蚤糟藻 员圆圆再陨载怎袁蕴韵晕郧蕴蚤袁悦匀耘晕郧酝蚤灶早鄄造蚤葬灶早 渊员援悦藻灶贼则葬造蕴葬遭燥则葬贼燥则赠袁杂藻糟燥灶凿匀燥泽责蚤贼葬造粤枣枣蚤造蚤葬贼藻凿贼燥郧怎蚤赠葬灶早悦燥造造藻早藻燥枣栽则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造悦澡蚤灶藻泽藻酝藻凿蚤糟蚤灶藻袁郧怎蚤赠葬灶早缘缘园园园圆袁悦澡蚤灶葬曰圆援阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣陨灶枣藻糟贼蚤燥怎泽阅蚤泽藻葬泽藻泽袁粤枣枣蚤造蚤葬贼藻凿匀燥泽责蚤贼葬造燥枣郧怎蚤扎澡燥怎酝藻凿蚤糟葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁郧怎蚤赠葬灶早缘缘园园园源袁悦澡蚤灶葬冤 摇摇揖粤遭泽贼则葬糟贼铱摇韵遭躁藻糟贼蚤增藻摇栽燥蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻贼澡藻凿赠灶葬皂蚤糟糟澡葬灶早藻泽燥枣皂藻贼葬造造燥贼澡蚤燥灶藻蚤灶渊酝栽泽冤早藻灶藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶葬灶凿藻曾责造燥则藻贼澡藻蚤皂责燥则贼葬灶贼泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶糟藻燥枣酝栽泽凿怎则蚤灶早澡藻责葬贼燥糟葬则糟蚤灶燥早藻灶藻泽蚤泽援酝藻贼澡燥凿泽摇韵灶藻澡怎灶凿则藻凿葬灶凿贼憎藻灶贼赠鄄枣蚤增藻杂孕云缘原愿鄄憎藻藻噪燥造凿皂葬造藻悦缘苑月蕴辕远允皂蚤糟藻憎藻则藻则葬灶凿燥皂造赠凿蚤增蚤凿藻凿蚤灶贼燥糟燥灶贼则燥造早则燥怎责葬灶凿皂燥凿藻造早则燥怎责援阅蚤藻贼澡赠造灶蚤贼则燥泽葬皂蚤灶藻渊阅耘晕冤憎葬泽早蚤增藻灶贼燥贼澡藻皂蚤糟藻葬贼葬凿燥泽藻燥枣员园园皂早辕噪早袁蚤责袁葬灶凿缘园皂早辕噪早袁蚤责袁蚤灶贼澡藻枣蚤则泽贼葬灶凿灶藻曾贼憎藻藻噪袁则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援栽澡藻皂蚤糟藻憎藻则藻早蚤增藻灶藻贼澡葬灶燥造渊缘猿豫袁缘皂蕴辕噪早辕凿葬赠袁缘凿葬赠泽辕憎藻藻噪冤枣则燥皂贼澡藻贼澡蚤则凿憎藻藻噪燥枣藻曾责藻则蚤皂藻灶贼贼蚤造造猿缘憎藻藻噪泽援粤贼员袁猿袁怨袁员猿袁圆源葬灶凿猿缘憎藻藻噪泽燥枣贼澡藻藻曾责藻则蚤皂藻灶贼袁造蚤增藻则泽葬皂责造藻泽憎藻则藻贼葬噪藻灶枣燥则澡蚤泽贼燥责葬贼澡燥造燥早蚤糟葬造藻曾葬皂蚤灶葬贼蚤燥灶燥枣造蚤增藻则凿葬皂葬早藻泽葬灶凿蚤灶糟蚤凿藻灶糟藻燥枣匀悦悦援栽澡藻造蚤增藻则蚤灶凿藻曾葬灶凿皂葬造燥灶凿蚤葬造凿藻澡赠凿藻渊酝阅粤冤燥枣造蚤增藻则澡燥皂燥早藻灶葬贼藻憎藻则藻凿藻贼藻则皂蚤灶藻凿援粤造造造蚤增藻则贼蚤泽泽怎藻泽葬皂责造藻泽憎藻则藻藻曾葬皂蚤灶藻凿遭赠澡蚤泽贼燥责葬贼澡燥造燥早赠怎泽蚤灶早澡藻皂葬贼燥曾赠造蚤灶葬灶凿藻燥泽蚤灶渊匀耘冤袁酝葬泽泽燥灶葬灶凿则藻贼蚤糟怎造葬则枣蚤遭藻则泽贼葬蚤灶蚤灶早援砸藻葬造鄄贼蚤皂藻砸栽鄄孕悦砸憎葬泽怎泽藻凿贼燥葬灶葬造赠扎藻贼澡藻皂砸晕粤藻曾责则藻泽泽蚤燥灶造藻增藻造燥枣造蚤增藻则皂藻贼葬造造燥贼澡蚤燥灶藻蚤灶鄄员辕圆渊酝栽鄄员辕圆冤蚤灶凿蚤枣枣藻则藻灶贼责藻则蚤燥凿泽援砸藻泽怎造贼泽摇孕则燥早则藻泽泽蚤增藻造蚤增藻则 咱基金项目暂国家重点基础研究发展计划渊怨苑猿计划前期专项冤渊圆园员员悦月缘员圆员员源冤遥咱作者简介暂易旭渊员怨苑远原冤袁女袁研究方向院肝病的基础研究遥耘鄄皂葬蚤造院赠蚤曾怎圆园员猿岳赠藻葬澡援灶藻贼遥咱通讯作者暂程明亮渊员怨缘远原冤袁男袁研究方向院肝病的防治基础与临床研究袁耘鄄皂葬蚤造院皂造糟澡藻灶早岳赠藻葬澡援灶藻贼遥

57 缘源中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 凿葬皂葬早藻泽蚤灶皂燥凿藻造早则燥怎责皂蚤糟藻憎藻则藻蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿蚤灶凿蚤枣枣藻则藻灶贼责藻则蚤燥凿泽援匀藻责葬贼燥糟赠贼藻泽葬遭灶燥则皂葬造贼蚤泽泽蚤燥灶葬灶凿葬遭灶燥则皂葬造造蚤增藻则责造葬贼藻泽贼则怎糟贼怎则藻袁葬则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻燥枣贼藻灶糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟燥枣匀悦悦糟燥怎造凿遭藻泽藻藻灶蚤灶葬责责则燥曾蚤皂葬贼藻造赠缘园豫燥枣皂蚤糟藻葬贼猿缘憎藻藻噪泽援陨灶葬凿凿蚤贼蚤燥灶贼燥贼澡藻泽藻袁葬澡蚤早澡藻则造蚤增藻则蚤灶凿藻曾葬造泽燥憎藻则藻泽藻藻灶葬贼猿缘憎藻藻噪泽援陨灶糟则藻葬泽藻凿酝阅粤造藻增藻造泽蚤灶贼澡藻皂燥怎泽藻造蚤增藻则贼蚤泽泽怎藻泽憎藻则藻燥遭泽藻则增藻凿蚤灶藻葬糟澡泽贼葬早藻援砸藻葬造鄄贼蚤皂藻砸栽鄄孕悦砸葬灶葬造赠泽蚤泽泽澡燥憎藻凿贼澡葬贼泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠蚤灶糟则藻葬泽藻凿贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶燥枣酝栽鄄员葬灶凿酝栽鄄圆葬贼员袁猿葬灶凿怨憎藻藻噪泽袁贼澡藻灶早则葬凿怎葬造造赠凿藻糟造蚤灶藻凿葬灶凿藻增藻灶遭藻造燥憎贼澡藻灶燥则皂葬造造藻增藻造援悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶泽摇酝栽泽早藻灶藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶造藻增藻造泽蚤灶皂燥怎泽藻造蚤增藻则贼蚤泽泽怎藻泽葬则藻糟澡葬灶早藻凿枣则燥皂泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠蚤灶糟则藻葬泽藻凿蚤灶贼澡藻藻葬则造赠泽贼葬早藻燥枣蚤灶躁怎则赠贼燥凿藻糟则藻葬泽藻凿藻曾责则藻泽泽蚤燥灶糟燥皂遭蚤灶藻凿憎蚤贼澡凿蚤泽贼蚤灶糟贼枣蚤遭则燥泽蚤泽援韵怎则枣蚤灶凿蚤灶早泽枣怎则贼澡藻则凿藻皂燥灶泽贼则葬贼藻贼澡葬贼贼澡藻凿燥憎灶鄄则藻早怎造葬贼蚤燥灶燥枣酝栽泽造藻增藻造蚤泽糟造燥泽藻造赠糟燥则则藻造葬贼藻凿憎蚤贼澡澡藻责葬贼燥糟葬则糟蚤灶燥早藻灶藻泽蚤泽援揖运藻赠憎燥则凿泽铱摇匀藻责葬贼燥糟藻造造怎造葬则糟葬则糟蚤灶燥皂葬曰悦葬则糟蚤灶燥早藻灶藻泽蚤泽曰酝藻贼葬造造燥贼澡蚤燥灶藻蚤灶曰郧藻灶藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶曰酝蚤糟藻 摇摇金属硫蛋白渊皂藻贼葬造造燥贼澡蚤燥灶藻蚤灶泽袁酝栽泽冤是一小分子量尧富含半胱氨酸的重金属结合蛋白袁其抗氧化能力在动脉粥样硬化尧心肌保护尧脑缺血再灌注损伤及肝毒性等多种生理及病理过程中具有重要意咱员原猿暂义遥研究认为袁酝栽泽在包括上皮及叶间来源的多种肿瘤中呈现上调表达袁且与肿瘤的侵袭能力及较差的预后密切相关袁但在胃肠道肿瘤和肝细胞癌渊匀悦悦冤中的研究数据却得出相反的结论袁即具有下咱源原远暂调的袁甚至低于正常水平的酝栽泽水平遥由于大量研究表明了氧化应激和匀悦悦恶性转化的相关咱苑暂性袁因此袁为了进一步明确肝脏酝栽泽这一重要抗氧化剂的表达水平与匀悦悦发生的关系袁本文参考文献咱愿暂袁以遗传毒物二乙基亚硝胺为引发剂袁乙醇为促进剂制备悦缘苑月蕴辕远允雄性小鼠匀悦悦发生模型袁在不同处理时段动态检测肝组织酝栽泽基因表达水平袁探讨其变化规律袁以期为匀悦悦的防治提供有意义的实验室依据遥现报告如下院 员摇 材料和方法 员郾员摇实验动物选择杂孕云级雄性悦缘苑月蕴辕远允小鼠员圆缘只袁缘耀愿周袁体重渊圆员依圆冤早袁由北京华阜康生物科技股份有限公司提供渊动物质量许可证号院杂悦载运渊京冤圆园园怨原园园园源冤遥饲养于贵州医科大学实验动物中心带有陨灾悦系统的饲养房内袁使用许可证号为杂再载运渊黔冤圆园员圆原园园园员袁杂孕云级小鼠用饲料喂养袁自由饮用灭菌自来水袁恒温渊圆园耀圆猿冤益遥员郾圆摇试剂二乙基亚硝胺渊凿蚤藻贼澡赠造灶蚤贼则燥泽葬皂蚤灶藻袁美国杂蚤早皂葬袁晕园苑缘远冤曰无水乙醇渊圆园员员园苑员源袁国药集团化学试剂有限公司袁分析纯粤砸冤曰丙二醛耘蕴陨杂粤试剂盒渊允运员园员远苑袁美国月阅冤曰离心柱型总砸晕粤提取试剂盒渊蕴员员圆远袁北京天根冤曰离心柱型砸晕粤纯化试剂盒渊运园园员员袁北京天根冤曰逆转录试剂盒渊园园员猿缘猿怨苑袁美国 栽澡藻则皂燥杂糟蚤藻灶贼蚤枣蚤糟冤曰圆伊杂再月砸郧则藻藻灶酝蚤曾渊员圆员园袁美国月蚤燥皂蚤早葬冤曰茁鄄葬糟贼蚤灶尧酝栽鄄员及酝栽鄄圆引物由上海基康生物技术有限公司合成曰员郾猿摇实验动物分组及处理健康雄性悦缘苑月蕴辕远允小鼠员圆缘只袁适应性喂养苑凿后袁将小鼠随机分成正常对照组渊远园只冤和模型组渊远缘只冤遥模型组小鼠于实验第员尧圆周分别腹腔注射一次二乙基亚硝胺渊员园园皂早辕噪早袁缘园皂早辕噪早冤袁第猿周起灌胃给予乙醇渊缘猿豫袁缘皂蕴辕噪早袁缘凿辕周冤袁直至猿缘周遥正常对照组小鼠始终灌胃给予灭菌自来水遥员郾源摇检测指标和检测方法员郾源郾员摇标本采集与组织病理学检测院小鼠经戊巴比妥钠麻醉后袁分别于实验员尧猿尧怨尧员猿尧圆源及猿缘周末观察尧收集肝组织样本并计算肝脏指数渊肝脏指数越肝脏湿重辕体重伊员园园豫冤曰病理学检测用肝组织置于源豫中性甲醛内固定圆源耀源愿澡后袁常规石蜡包埋袁制成源滋皂切片袁行匀耘尧酝葬泽泽燥灶及网状纤维染色袁镜下观察肝组织病理学变化渊匀悦悦发生组织学判断以国际癌咱怨暂症研究机构出版的啮齿类动物肿瘤标准进行袁由贵州医科大学病理学教研室协助完成冤遥员郾源郾圆摇肝组织匀浆丙二醛的含量渊灶皂燥造辕皂早冤测定院分别制备各阶段两组小鼠肝组织混合样本园郾缘耀园郾愿早袁置于预冷的员皂蕴生理盐水中袁玻璃匀浆器手工匀浆袁源园园园则辕皂蚤灶袁离心员园耀员缘皂蚤灶袁取上清液袁稀释员园园倍后参考试剂盒说明书以双抗体夹心法检测匀浆中丙二醛的活性遥员郾源郾猿摇肝组织酝栽鄄员尧酝栽鄄圆基因皂砸晕粤水平院提取尧纯化各时段小鼠肝组织总砸晕粤袁运用变性琼脂糖凝胶电泳和紫外吸收测定法对砸晕粤质量进行检测曰以员滋早总砸晕粤于员园滋蕴逆转录体系中进行逆转录曰糟阅晕粤产物源倍稀释后进行实时荧光定量孕悦砸检测袁设置实时定量孕悦砸程序院缘园益圆皂蚤灶渊员个循环冤袁怨缘益员园皂蚤灶渊员个循环冤袁怨缘益员缘泽袁远园益员皂蚤灶渊源园个循环冤遥目的基因悦贼值经同一样本的

58 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 缘缘 驻驻内参基因校正后计算各组间每个基因的悦贼袁通过原驻驻悦贼圆计算组间对应基因的表达差异遥茁鄄葬糟贼蚤灶尧酝栽鄄员及酝栽鄄圆基因引物序列如下院酝栽鄄员云缘忆鄄粤粤栽郧栽郧悦悦悦粤郧郧郧悦栽郧栽郧栽鄄猿忆袁砸缘忆鄄郧悦栽郧郧郧栽栽郧郧栽悦悦郧粤栽粤悦栽粤栽栽鄄猿忆曰酝栽鄄圆云缘忆鄄栽郧栽郧悦悦栽悦悦郧粤栽郧郧粤栽悦悦栽鄄猿忆袁砸缘忆鄄郧悦粤郧悦悦悦栽郧郧郧粤郧悦粤悦栽栽鄄猿忆曰茁鄄葬糟贼蚤灶云缘忆鄄郧郧悦悦粤粤悦悦郧栽郧粤粤粤粤郧粤栽郧粤鄄猿忆袁砸缘忆鄄悦粤郧悦悦栽郧郧粤栽郧郧悦栽粤悦郧栽粤悦粤鄄猿忆遥员郾缘摇统计学方法采用杂孕杂杂员怨郾园统计学软件进行数据处理袁数据以軃曾依泽表示袁两组间不同时段数据的比较采用重复测量的方差分析袁以孕约园郾园缘显示差异具有显著性遥 圆摇 结果 圆郾员摇小鼠肝脏解剖与镜下病理学观察猿缘周后袁正常组小鼠无肉眼可见的病理改变遥模型组小鼠肝脏外观呈黄褐色袁肿胀尧质地变硬且 表面形成大小不等结节渊最大直径可达到园郾缘耀员郾园糟皂冤渊图员冤遥运用匀驭耘尧酝葬泽泽燥灶和网状纤维染色镜检发现袁实验员周后袁肝细胞明显水肿袁猿周后可见较多点灶状坏死袁炎性细胞浸润渊图圆粤袁月冤曰怨周后可见肝细胞气球样变尧脂肪变性袁部分肝组织可见轻度渊陨级冤的纤维化形成渊图圆悦冤曰员猿周后可见明显的碎片状坏死袁陨陨级纤维化形成渊图圆阅冤曰圆源周时见显著的桥接坏死尧亚大块坏死与密集的非典型增生袁陨陨陨级纤维化形成渊图圆耘冤曰猿缘周末可见异常核分裂像尧异常的肝板结构渊肝板数量增加逸猿层冤等肝细胞癌病理改变袁伴有大量炎性细胞浸润尧纤维间隔及假小叶形成渊图圆云冤遥圆郾圆摇肝脏指数及肝组织匀浆酝阅粤水平处理猿缘周后袁与正常组比较袁模型组小鼠肝脏显示显著增加的肝脏指数渊孕约园郾园员冤曰在观察的远个时段袁模型组均呈现比正常组显著增加的肝组织酝阅粤水平渊孕约园郾园员冤渊表员冤遥 时间渊周冤宰藻藻噪泽 表员摇不同时段肝组织匀浆酝阅粤含量及肝脏指数渊軃曾依泽冤栽葬遭援员摇酝阅粤蚤灶贼澡藻造蚤增藻则澡燥皂燥早藻灶葬贼藻葬灶凿贼澡藻造蚤增藻则蚤灶凿藻曾葬贼凿蚤枣枣藻则藻灶贼责藻则蚤燥凿泽 正常组悦燥灶贼则燥造早则燥怎责 小鼠数量渊只冤栽燥贼葬造灶怎皂遭藻则燥枣皂蚤糟藻 模型组酝燥凿藻造早则燥怎责 丙二醛酝阅粤灶皂燥造辕皂早 正常组悦燥灶贼则燥造早则燥怎责 肝脏指数蕴蚤增藻则蚤灶凿藻曾 丙二醛酝阅粤灶皂燥造辕皂早 模型组酝燥凿藻造早则燥怎责 肝脏指数蕴蚤增藻则蚤灶凿藻曾 员员园员园愿郾员圆依园郾猿猿源郾苑圆依园郾源园员圆郾远怨依园郾员园葬源郾猿猿依园郾员苑 猿 员园 员园 苑郾远员依园郾圆圆 源郾源员依园郾缘猿 葬员猿郾猿圆依园郾员园 源郾园依园郾源园 怨 员园 员园 苑郾远猿依园郾员源 缘郾远苑依园郾苑愿 葬员源郾苑远依园郾圆愿 源郾远苑依园郾源愿 员猿 员园 员园 苑郾愿源依园郾源员 源郾圆猿依园郾猿远 葬员缘郾源圆依园郾缘园 缘郾园远依园郾圆园 圆源 员园 员园 愿郾员猿依园郾圆员 源郾源远依园郾源圆 葬员缘郾员远依园郾猿园 远郾缘猿依园郾愿缘 猿缘 员园 员缘 苑郾怨猿依园郾员猿 源郾苑苑依园郾苑员 葬员缘郾愿圆依园郾缘源 葬怨郾员源依员郾愿园 注院与正常组比较袁葬孕约园郾园员遥葬晕燥贼藻援孕约园郾园员袁糟燥皂责葬则藻凿憎蚤贼澡贼澡藻糟燥灶贼则燥造早则燥怎责援 云蚤早援员摇 注院粤院正常组曰月院模型组图员摇猿缘周末正常组与模型组小鼠肝脏大体观渊箭头示肿瘤结节冤晕燥贼藻援粤院悦燥灶贼则燥造早则燥怎责曰月院酝燥凿藻造早则燥怎责砸藻责则藻泽藻灶贼葬贼蚤增藻蚤皂葬早藻泽燥枣贼澡藻皂燥怎泽藻造蚤增藻则泽葬贼猿缘鄄憎藻藻噪渊葬则则燥憎泽蚤灶凿蚤糟葬贼藻贼澡藻贼怎皂燥则灶燥凿怎造藻泽冤

59 缘远中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 注院粤尧月尧悦尧阅尧耘尧云尧分别为处理员尧猿尧怨尧员猿尧圆源及猿缘周末时肝组织镜下观渊箭头示肝组织病理改变冤遥图圆摇不同时段小鼠肝组织匀驭耘尧酝葬泽泽燥灶及网状纤维染色镜下观渊标尺越员园园滋皂辕缘园滋皂冤晕燥贼藻援粤鄄云院蕴蚤早澡贼皂蚤糟则燥泽糟燥责赠燥枣皂蚤糟藻造蚤增藻则葬贼员袁猿袁怨袁员猿袁圆源葬灶凿猿缘憎藻藻噪泽袁则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠渊葬则则燥憎泽蚤灶凿蚤糟葬贼藻贼澡藻责葬贼澡燥造燥早蚤糟葬造糟澡葬灶早藻泽燥枣造蚤增藻则冤援云蚤早援圆摇孕葬贼澡燥造燥早蚤糟葬造糟澡葬灶早藻泽燥枣贼澡藻造蚤增藻则蚤灶皂蚤糟藻援匀驭耘袁酝葬泽泽燥灶葬灶凿则藻贼蚤糟怎造葬则枣蚤遭藻则泽贼葬蚤灶蚤灶早援渊月葬则越员园园滋皂辕缘园滋皂冤 圆郾猿摇肝组织酝栽鄄员尧酝栽鄄圆皂砸晕粤水平正常组小鼠在不同时段间具有相似的肝组织酝栽鄄员或酝栽鄄圆皂砸晕粤表达水平曰实验员尧猿尧怨及员猿周 末袁模型组小鼠均显示比正常组显著增加的酝栽鄄员皂砸晕粤表达水平渊孕约园郾园员冤袁且随病程进展逐渐降低曰实验圆源及猿缘周末袁模型组小鼠肝组织酝栽鄄员的

60 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 缘苑 摇摇摇表圆摇不同时段小鼠肝组织酝栽鄄员尧酝栽鄄圆皂砸晕粤表达水平分析栽葬遭援圆摇粤灶葬造赠泽蚤泽燥枣酝栽鄄员辕酝栽鄄圆皂砸晕粤造藻增藻造泽蚤灶贼澡藻皂燥怎泽藻造蚤增藻则葬贼凿蚤枣枣藻则藻灶贼责藻则蚤燥凿泽 时间渊周冤宰藻藻噪泽 小鼠数量渊只冤栽燥贼葬造灶怎皂遭藻则燥枣澡藻皂蚤糟藻 正常组悦燥灶贼则燥造早则燥怎责 模型组酝燥凿藻造早则燥怎责 正常组悦燥灶贼则燥造早则燥怎责 模型组酝燥凿藻造早则燥怎责 酝栽鄄员酝栽鄄圆酝栽鄄员酝栽鄄圆 员 员园 员园 园郾员缘依园郾园缘 园郾员圆依园 葬缘郾苑园依园郾园苑 葬员郾苑远依园郾园苑 猿 员园 员园 园郾员员依园 园郾园怨依园 葬员郾缘园依园郾园源 葬员郾圆愿依园郾园圆 怨 员园 员园 园郾员圆依园 园郾员员依园 葬园郾怨愿依园郾园圆 葬园郾远愿依园郾园源 员猿 员园 员园 园郾员员依园 园郾员猿依园 葬园郾缘苑依园郾园圆 园郾员苑依园郾园员 圆源 员园 员园 园郾员员依园 园郾员员依园 葬园郾园圆依园 葬园郾园员依园 猿缘 员园 员缘 园郾员圆依园 园郾员依园 葬园郾园员依园 葬园郾园员依园 葬注院与正常组比较袁孕约园郾园员葬晕燥贼藻援孕约园郾园员袁糟燥皂责葬则藻凿憎蚤贼澡贼澡藻糟燥灶贼则燥造早则燥怎责援 皂砸晕粤水平均显著低于正常组小鼠渊孕约园郾园员冤曰酝栽鄄圆皂砸晕粤表达水平于实验员猿周末时与正常组相似袁圆源周后也显著低于正常组小鼠渊表圆冤遥 猿摇 讨论 肝细胞癌渊匀悦悦冤是世界范围内第缘位最常见和第猿位引起癌症相关死亡的恶性肿瘤袁治疗选择咱员园暂非常局限遥许多研究证实了人类多种肿瘤中同时具有增加的酝栽泽表达袁如乳腺癌尧肾癌尧肺癌尧鼻咽癌尧卵巢癌尧前列腺癌尧唾液腺癌尧睾丸癌和膀胱咱远暂癌等袁但也发现酝栽泽的表达并不常见于所有人类咱猿袁源暂肿瘤袁如匀悦悦遥运用阅耘晕诱导的悦缘苑月蕴辕远允小咱缘暂鼠匀悦悦模型袁允澡葬则灶葬阅等发现酝栽的表达在匀悦悦组织中显著减少甚至缺乏袁一致地袁运用匀悦悦临床样本袁发现癌组织中酝栽表达亦显著低于相应的邻咱员员暂近正常肝组织遥孕葬则噪再等也发现袁酝栽鄄员尧酝栽鄄圆人匀悦悦癌组织细胞核和细胞质酝栽鄄员尧酝栽鄄圆表达的丢失比邻近癌旁组织显著袁多元变量分析揭示酝栽鄄员尧酝栽鄄圆表达的减弱是无复发生存和总生存率的独立咱员圆暂预后不良因素遥研究表明袁酝栽泽敲除鼠渊酝栽运韵鼠冤显示了更高的超氧化物阴离子水平袁酝栽泽的缺失通过活化晕云鄄资月靶基因促进阅耘晕诱导的肝癌形成遥上述研究结果均提示酝栽泽下调可能与肝癌的发生密切相关袁因此袁有必要了解匀悦悦发生过程中酝栽泽表达水平的变化袁进一步证实其与匀悦悦发生的相关性遥基于上述研究设想袁本文通过制备匀悦悦发生动态小鼠动物模型袁了解了不同时段肝组织酝栽泽基因的转录水平遥基于酒精相关性肝癌形成的机制及匀悦悦化学咱愿暂诱导模型制备的原理袁本文参考文献方法袁采用化学诱导二步法制备小鼠匀悦悦发生模型袁以遗传毒物二乙基亚硝胺渊阅耘晕冤为引发剂袁乙醇为促进剂遥该诱导方法的优势在于对肝脏的损伤鄄纤维化鄄恶性 咱员猿暂转变周期同人类匀悦悦的发生高度相似遥研究表明袁匀悦悦的发生除与诱导剂及浓度有关外袁还与性咱缘暂别尧年龄和鼠种类有关遥月则葬灶凿燥灶鄄宰葬则灶藻则等研究了乙醇对匀悦悦发生的影响袁发现慢性乙醇喂养能协咱员源暂同阅耘晕明显增加雄性小鼠肿瘤的发生遥基于上述研究背景袁本文选择雄性悦缘苑月蕴辕远允小鼠作为实验用动物遥结果发现袁乙醇垣阅耘晕处理猿缘周袁显著诱导了小鼠肉眼可见的肝脏病变及镜下进行性的肝脏损伤尧癌前病变甚至典型的匀悦悦发生等病理改变曰同时袁通过对不同时段肝组织脂质过氧化物的检测也揭示了模型组小鼠始终增加的肝脏丙二醛含量遥基于氧化应激在阅耘晕及酒精相关性肝细胞癌形成中的重要作用袁以及过多自由基形成和酝栽泽缺咱苑袁员缘袁员远暂失或减弱促进肝癌形成的理论基础袁从抗氧化应激角度探讨酝栽泽水平动态变化与匀悦悦发生的相关性具有重要的毒理学与临床意义遥在哺乳动物中袁酝栽泽包括源种亚型渊酝栽员鄄酝栽源冤袁其中酝栽鄄员和酝栽鄄圆几乎存在于所有类型软组织袁能够被多种刺激袁包括金属离子尧细胞因子尧生长因子和氧化应激等活化袁呈数倍增加袁从而保护细胞抗细胞毒性尧辐咱员苑袁员愿暂咱员怨暂射和阅晕粤损伤遥运造葬葬泽泽藻灶等认为袁肝脏酝栽泽的诱导是一影响对肝脏毒性结果发生发展的重要适应性机制遥运用酝栽泽过表达的转染鼠或酝栽泽裸鼠的研究也强有力地显示了不同氧化应激条件下酝栽泽的抗氧化损伤保护袁如阿霉素心脏毒性尧缺咱员暂血鄄再灌注尧糖尿病和酒精消费等遥本文对不同时段小鼠肝组织酝栽鄄员尧酝栽鄄圆基因转录水平的分析发现袁在诱导早期袁即出现肝细胞坏死尧急性炎症病理表现时袁小鼠产生非常显著的酝栽泽转录水平袁尤其酝栽鄄员遥随着诱导的进行袁肝脏出现中重度纤维化袁此时肝组织酝栽泽表达水平亦显著下降袁甚至低于正常水平遥结果显示小鼠肝组织酝栽泽基因表达水平

61 缘愿中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 呈现一定的变化与规律性袁总的趋势表现为与肝脏损伤程度呈负相关袁即从损伤初期的显著增加直至纤维化形成后的低表达遥表明随着肝脏损伤因素的持续袁肝组织应激性增加酝栽泽转录的能力逐渐减弱甚至丧失袁从而失去了其对肝脏损伤的保护遥因此袁本文结果进一步提示酝栽泽在不同病理时段的表达差异性表明了其在肝细胞恶性转化中的潜在作用遥由于大量的研究认为增加抗氧化剂的运用可咱圆园暂降低癌症的发生率袁故设想若早期刺激肝组织中酝栽泽合成或外源补充酝栽泽也许是阻止匀悦悦发生发展的一个重要策略遥综合目前国内外的研究袁尚未有关不同病因所致匀悦悦过程中酝栽表达情况的报道袁因此袁本文也是首先初步探讨了酝栽表达动态变化与酒精相关性肝癌发生的相关性袁对于其他病因所致的匀悦悦袁尤其是乙型肝炎病毒辕丙型肝炎病毒相关性匀悦悦袁其发生过程中酝栽表达的变化将是我们下一步努力探讨的方向遥 参考文献院 咱员暂摇砸怎贼贼噪葬赠鄄晕藻凿藻糟噪赠月袁晕藻躁凿造蕴袁郧怎皂怎造藻糟允袁藻贼葬造援栽澡藻则燥造藻燥枣皂藻贼葬造造燥贼澡蚤燥灶藻蚤灶蚤灶燥曾蚤凿葬贼蚤增藻泽贼则藻泽泽咱允暂援陨灶贼允酝燥造杂糟蚤袁圆园员猿袁员源渊猿冤院远园源源原远园远远援咱圆暂摇朱中生袁王海燕袁王登峰袁等援金属硫蛋白对粤责燥耘基因缺陷小鼠血脂尧动脉粥样硬化及主动脉杂砸鄄粤玉表达的影响咱允暂援山东医药袁圆园员猿袁缘猿渊员源冤院猿园原猿猿援咱猿暂摇郭家彬袁冯敏袁张丽袁等援金属硫蛋白在缺血性脑损伤过程中的调控作用咱允暂援中国药理学与毒理学杂志袁圆园员源袁圆愿渊远冤院愿怨愿原怨园猿援咱源暂摇悦澡藻则蚤葬灶酝郧袁允葬赠葬泽怎则赠葬粤袁月葬赠月匀援酝藻贼葬造造燥贼澡蚤燥灶藻蚤灶泽蚤灶澡怎皂葬灶贼怎皂燥则泽葬灶凿责燥贼藻灶贼蚤葬造则燥造藻泽蚤灶糟葬则糟蚤灶燥早藻灶藻泽蚤泽咱允暂援酝怎贼葬贼砸藻泽袁圆园园猿袁缘猿猿渊员原圆冤院圆园员原圆园怨援咱缘暂摇阅葬贼贼葬允袁酝葬躁怎皂凿藻则杂袁运怎贼葬赠匀袁藻贼葬造援酝藻贼葬造造燥贼澡蚤燥灶藻蚤灶藻曾责则藻泽泽蚤燥灶蚤泽泽怎责责则藻泽泽藻凿蚤灶责则蚤皂葬则赠澡怎皂葬灶澡藻责葬贼燥糟藻造造怎造葬则糟葬则糟蚤灶燥皂葬葬灶凿蚤泽皂藻凿蚤葬贼藻凿贼澡则燥怎早澡蚤灶葬糟贼蚤增葬贼蚤燥灶燥枣悦悦粤粤栽辕藻灶澡葬灶糟藻则遭蚤灶凿蚤灶早责则燥贼藻蚤灶葬造责澡葬遭赠责澡燥泽责澡葬贼蚤凿赠造蚤灶燥泽蚤贼燥造猿鄄噪蚤灶葬泽藻泽蚤早灶葬造蚤灶早糟葬泽糟葬凿藻咱允暂援悦葬灶糟藻则砸藻泽袁圆园园苑袁远苑渊远冤院圆苑猿远原圆苑源远援咱远暂摇鹿晓麟袁娄长杰袁张艳桥援金属硫蛋白在癌症中的研究进展咱允暂援中国肿瘤袁圆园员源袁圆猿渊猿冤院圆员愿原圆圆猿援咱苑暂摇灾葬造噪燥酝袁砸澡燥凿藻泽悦允袁酝燥灶糟燥造允袁藻贼葬造援云则藻藻则葬凿蚤糟葬造泽袁皂藻贼葬造泽葬灶凿葬灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼泽蚤灶燥曾蚤凿葬贼蚤增藻泽贼则藻泽泽鄄蚤灶凿怎糟藻凿糟葬灶糟藻则咱允暂援悦澡藻皂月蚤燥造陨灶贼藻则葬糟贼袁圆园园远袁员远园渊员冤院员原源园援咱愿暂摇匀藻蚤灶凿则赠糟噪曾云袁悦燥造造藻陨袁灾葬灶灾造蚤藻则遭藻则早澡藻匀援耘曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造皂燥怎泽藻皂燥凿藻造泽枣燥则澡藻责葬贼燥糟藻造造怎造葬则糟葬则糟蚤灶燥皂葬则藻泽藻葬则糟澡咱允暂援陨灶贼允耘曾责 孕葬贼澡燥造袁圆园园怨袁怨园渊源冤院猿远苑原愿远援 咱怨暂摇 酝燥澡则哉援陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造悦造葬泽泽蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣砸燥凿藻灶贼栽怎皂燥则泽孕葬则贼陨要 栽澡藻砸葬贼援员园援阅蚤早藻泽贼蚤增藻杂赠泽贼藻皂咱酝暂援陨灶院酝燥澡则哉袁渊藻凿冤援陨砸粤悦 杂糟蚤藻灶贼蚤枣蚤糟 孕怎遭造蚤糟葬贼蚤燥灶泽 晕燥援 员圆圆援 陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造 粤早藻灶糟赠 枣燥则 砸藻泽藻葬则糟澡燥灶悦葬灶糟藻则袁宰匀韵曰蕴赠燥灶援员怨怨苑援 咱员园暂摇 运藻憎酝悦援 匀藻责葬贼燥糟藻造造怎造葬则糟葬则糟蚤灶燥皂葬蚤灶凿藻增藻造燥责蚤灶早糟燥怎灶贼则蚤藻泽院 孕则藻增藻灶贼蚤燥灶袁凿蚤葬早灶燥泽蚤泽葬灶凿贼则藻葬贼皂藻灶贼咱允暂援 宰燥则造凿允匀藻责葬贼燥造袁 圆园员圆袁源渊猿冤院怨怨原员园源援 咱员员暂摇 孕葬则噪 再袁 再怎 耘援 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 皂藻贼葬造造燥贼澡蚤燥灶藻蚤灶鄄员 葬灶凿 皂藻贼葬造造燥贼澡蚤燥灶藻蚤灶鄄圆 葬泽 葬 责则燥早灶燥泽贼蚤糟 皂葬则噪藻则 蚤灶 澡藻责葬贼燥糟藻造造怎造葬则 糟葬则糟蚤灶燥皂葬咱允暂援允郧葬泽贼则燥藻灶贼藻则燥造匀藻责葬贼燥造袁圆园员猿袁圆愿渊怨冤院员缘远缘原 员缘苑圆援 咱员圆暂摇 悦澡葬葬遭葬灶藻宰袁哉泽藻则杂阅袁耘造鄄郧葬扎扎葬澡酝袁藻贼葬造援 粤怎贼燥责澡葬早赠袁 葬责燥责贼燥泽蚤泽袁皂蚤贼燥责贼燥泽蚤泽葬灶凿灶藻糟则燥泽蚤泽院陨灶贼藻则凿藻责藻灶凿藻灶糟藻遭藻贼憎藻藻灶 贼澡燥泽藻责葬贼澡憎葬赠泽葬灶凿藻枣枣藻糟贼泽燥灶糟葬灶糟藻则咱允暂援粤则糟澡陨皂皂怎灶燥造栽澡藻则 耘曾责袁圆园员猿袁远员渊员冤院源猿原缘愿援 咱员猿暂摇 赵彤袁李柏援二乙基亚硝胺在小鼠诱发性肝癌模型中的应用 咱允暂援中国比较医学杂志袁圆园员远袁圆远渊员冤院苑远原愿园援 咱员源暂摇 月则葬灶凿燥灶鄄宰葬则灶藻则耘袁宰葬造造蚤灶早栽蕴袁杂糟澡则怎皂蕴宰袁藻贼葬造援 悦澡则燥灶蚤糟 藻贼澡葬灶燥造枣藻藻凿蚤灶早葬糟糟藻造藻则葬贼藻泽澡藻责葬贼燥糟藻造造怎造葬则糟葬则糟蚤灶燥皂葬责则燥早则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶 葬 泽藻曾鄄凿藻责藻灶凿藻灶贼 皂葬灶灶藻则 蚤灶 葬 皂燥怎泽藻 皂燥凿藻造 燥枣 澡藻责葬贼燥糟葬则糟蚤灶燥早藻灶藻泽蚤泽咱允暂援 粤造糟燥澡燥造悦造蚤灶耘曾责砸藻泽袁圆园员圆袁猿远 渊源冤院远源员原远缘猿援 咱员缘暂摇 匝蚤再袁悦澡藻灶载袁悦澡葬灶悦再袁藻贼葬造援栽憎燥鄄凿蚤皂藻灶泽蚤燥灶葬造凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造早藻造 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽辕葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 凿蚤藻贼澡赠造灶蚤贼则燥泽葬皂蚤灶藻 蚤灶凿怎糟藻凿 则葬贼 澡藻责葬贼燥糟藻造造怎造葬则糟葬则糟蚤灶燥皂葬咱允暂援陨灶贼允悦葬灶糟藻则袁圆园园愿袁员圆圆渊员圆冤院 圆远愿圆原圆远愿愿援 咱员远暂摇 酝葬躁怎皂凿藻则 杂袁 砸燥赠 杂袁 运葬枣枣藻灶遭藻则早藻则 栽袁 藻贼 葬造援 蕴燥泽泽 燥枣 皂藻贼葬造造燥贼澡蚤燥灶藻蚤灶责则藻凿蚤泽责燥泽藻泽皂蚤糟藻贼燥凿蚤藻贼澡赠造灶蚤贼则燥泽葬皂蚤灶藻鄄蚤灶凿怎糟藻凿 澡藻责葬贼燥糟葬则糟蚤灶燥早藻灶藻泽蚤泽遭赠葬糟贼蚤增葬贼蚤灶早晕云鄄运月贼葬则早藻贼早藻灶藻泽咱允暂援 悦葬灶糟藻则砸藻泽袁圆园员园袁苑园渊圆源冤院员园圆远缘原员园圆苑远援 咱员苑暂摇 肖定福袁张彬袁李忠义袁等援不同应激因子对小鼠肝脏金属 硫蛋白诱导合成的影响咱允暂援中国实验动物学报袁圆园园怨袁员苑 渊圆冤院怨园原怨远援 咱员愿暂摇 栽澡蚤则怎皂燥燥则贼澡赠晕袁酝葬灶蚤泽藻灶贼澡蚤造运怎皂葬则运栽袁杂澡赠葬皂杂怎灶凿葬则粤袁藻贼 葬造援酝藻贼葬造造燥贼澡蚤燥灶藻蚤灶院粤灶燥增藻则增蚤藻憎咱允暂援宰燥则造凿允郧葬泽贼则燥藻灶贼藻则燥造袁 圆园园苑袁员猿渊苑冤院怨怨猿原怨怨远援 咱员怨暂摇 运造葬葬泽泽藻灶悦阅袁蕴蚤怎允援陨灶凿怎糟贼蚤燥灶燥枣皂藻贼葬造造燥贼澡蚤燥灶藻蚤灶葬泽葬灶葬凿葬责贼蚤增藻 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂 葬枣枣藻糟贼蚤灶早 贼澡藻 皂葬早灶蚤贼怎凿藻 葬灶凿 责则燥早则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 贼燥曾蚤糟燥造燥早蚤糟葬造蚤灶躁怎则赠咱允暂援耘灶增蚤则燥灶匀藻葬造贼澡孕藻则泽责藻糟贼袁员怨怨愿袁员园远 渊员冤院圆怨苑原猿园园援 咱圆园暂摇杂藻蚤枣则蚤藻凿匀耘袁酝糟阅燥灶葬造凿杂杂袁粤灶凿藻则泽燥灶阅耘袁藻贼葬造援栽澡藻葬灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼糟燥灶怎灶凿则怎皂蚤灶糟葬灶糟藻则咱允暂援悦葬灶糟藻则砸藻泽袁圆园园猿袁远猿渊员缘冤院源圆怨缘原源圆怨愿援也修回日期页圆园员远原园猿原圆愿

62 圆园员远年愿月第圆远卷摇第愿期 中国比较医学杂志悦匀陨晕耘杂耘允韵哉砸晕粤蕴韵云悦韵酝孕粤砸粤栽陨灾耘酝耘阅陨悦陨晕耘 粤怎早怎泽贼袁圆园员远灾燥造援圆远摇晕燥援愿 藡 蕥 蕥蕥蕥蕥藡研究报告 蕥蕥蕥蕥藡 蕥藡 尿通卡克乃其片大鼠长期毒性实验的血液指标变化 员员圆热比姑丽窑伊斯拉木袁阿布都吉力力窑阿布都艾尼袁冷英莉袁王摇 圆静 渊员援新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所袁乌鲁木齐袁新疆摇愿猿园园源怨曰圆援新疆银朵兰维药股份有限公司袁乌鲁木齐袁新疆摇愿猿园园员猿冤 摇摇揖摘要铱摇目的摇探讨尿通卡克乃其片大鼠长期毒性试验血液学指标变化遥方法摇杂阅大鼠员圆园只袁雌雄各半袁随机分为对照组袁尿通卡克乃其片低尧中尧高剂量组遥对照组为灌胃给予园郾缘豫羧甲基纤维素钠混悬液袁低尧中尧高剂量组分别灌胃给予尿通卡克乃其片园郾猿圆早尧员郾远早尧猿郾圆早渊生药冤辕噪早窑凿袁每周远凿袁连续员愿园凿袁分别观察大鼠在给药怨园凿尧员愿园凿及停药后猿园凿一般状况尧血液细胞变化尧血生化变化袁电解质及血凝指标变化遥结果摇在实验期间大鼠未见死亡或无明显毒性反应遥与对照组比较袁在实验期间大鼠红细胞计数渊砸月悦冤尧血红蛋白渊匀郧月冤尧平均红细胞血红蛋白含量渊酝悦匀冤尧平均红细胞血红蛋白浓度渊酝悦匀悦冤尧血小板计数渊孕蕴栽冤尧白细胞计数渊宰月悦冤尧淋巴细胞百分含量渊蕴再酝孕豫冤曰丙氨酸氨基转移酶渊粤蕴栽冤尧天门冬氨酸氨基转移酶渊粤杂栽冤尧碱性磷酸酶渊粤蕴孕冤尧葡萄糖渊郧蕴哉冤尧尿素氮渊月哉晕冤尧白蛋白渊粤蕴月冤尧总胆红素渊栽月陨蕴冤尧肌酐渊悦则藻葬冤尧总胆固醇渊栽悦匀韵冤尧甘油三酯渊栽郧冤尧肌酸磷酸激酶渊悦运冤曰垣垣原钾离子浓度渊运冤尧钠离子浓度渊晕葬冤尧氯离子浓度渊悦造冤尧凝血酶原时间渊孕栽冤袁具有统计学差异渊孕约园郾园缘耀孕约园郾园员冤袁但未见时间尧剂量规律性袁无病理意义遥结论摇园郾猿圆早尧员郾远早尧猿郾圆早渊生药冤辕噪早窑凿剂量下灌胃尿通卡克乃其片原料粉员愿园凿对大鼠血液指标无明显异常袁该药在临床剂量下长期使用是安全的遥揖关键词铱摇尿通卡克乃其片曰大鼠曰长期毒性曰血液指标揖中图分类号铱砸鄄猿猿摇摇揖文献标识码铱粤摇摇揖文章编号铱员远苑员鄄苑愿缘远渊圆园员远冤园愿鄄园园缘怨鄄园苑凿燥蚤院员园郾猿怨远怨援躁援蚤泽泽灶援员远苑员原苑愿缘远郾圆园员远郾园愿郾园园怨 粤造燥灶早鄄贼藻则皂泽贼怎凿赠燥枣贼澡藻贼燥曾蚤糟蚤贼赠燥枣葬灶哉赠早澡怎则皂藻凿蚤糟蚤灶藻袁运怎则泽蚤运葬噪灶葬择袁燥灶澡藻皂葬贼燥造燥早蚤糟葬造责葬则葬皂藻贼藻则泽蚤灶则葬贼泽 员员圆圆砸葬遭蚤早怎造窑陨泽造葬皂袁粤遭凿怎躁蚤造蚤造窑葬遭凿怎早澡藻灶赠袁蕴耘晕郧再蚤灶早鄄造蚤袁宰粤晕郧允蚤灶早 渊员援陨灶泽贼蚤贼怎贼藻燥枣载蚤灶躁蚤葬灶早栽则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造哉赠早澡怎则酝藻凿蚤糟蚤灶藻袁哉则怎皂择蚤愿猿园园源怨袁悦澡蚤灶葬曰圆援载蚤灶躁蚤葬灶早再蚤灶凿怎燥造葬灶哉赠早澡怎则酝藻凿蚤糟蚤灶藻悦燥援蕴贼凿援袁哉则怎皂择蚤愿猿园园员猿冤 摇摇揖粤遭泽贼则葬糟贼铱韵遭躁藻糟贼蚤增藻摇栽燥蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻贼澡藻造燥灶早鄄贼藻则皂贼燥曾蚤糟蚤贼赠燥枣葬灶哉赠澡早怎则皂藻凿蚤糟蚤灶藻袁运怎则泽蚤运葬噪灶葬择袁燥灶澡藻皂葬贼燥造燥早蚤糟葬造责葬则葬皂藻贼藻则泽蚤灶贼澡藻则葬贼泽援酝藻贼澡燥凿泽摇粤贼燥贼葬造燥枣员圆园澡藻葬造贼澡赠杂责则葬早怎藻鄄阅葬憎造藻赠则葬贼泽憎藻则藻则葬灶凿燥皂造赠凿蚤增蚤凿藻凿蚤灶贼燥贼澡藻糟燥灶贼则燥造袁造燥憎凿燥泽藻渊园郾猿圆早辕噪早窑凿冤袁皂燥凿藻则葬贼藻凿燥泽藻渊员郾远早辕噪早窑凿冤葬灶凿澡蚤早澡凿燥泽藻渊猿郾圆早辕噪早窑凿冤运怎则泽蚤运葬噪灶葬择早则燥怎责泽援栽澡藻凿则怎早憎葬泽早蚤增藻灶燥则葬造造赠袁远凿葬赠泽责藻则憎藻藻噪枣燥则员愿园凿葬赠泽援栽澡藻糟燥灶贼则燥造早则燥怎责憎葬泽早蚤增藻灶园郾缘豫泽燥凿蚤怎皂糟葬则遭燥曾赠皂藻贼澡赠造糟藻造造怎造燥泽藻泽怎泽责藻灶泽蚤燥灶援砸藻泽怎造贼泽摇晕燥凿藻葬贼澡憎葬泽则藻糟燥则凿藻凿蚤灶贼澡藻则葬贼泽葬灶凿灶燥燥遭增蚤燥怎泽贼燥曾蚤糟藻增藻灶贼泽憎藻则藻燥遭泽藻则增藻凿凿怎则蚤灶早贼澡藻藻曾责藻则蚤皂藻灶贼援匀藻皂葬贼燥造燥早蚤糟葬造责葬则葬皂藻贼藻则泽蚤灶糟造怎凿蚤灶早砸月悦袁匀郧月袁酝悦匀袁酝悦匀悦袁蕴再酝孕豫袁宰月悦袁葬灶凿孕蕴栽曰遭蚤燥糟澡藻皂蚤糟葬造责葬则葬皂藻贼藻则泽蚤灶糟造怎凿蚤灶早粤蕴栽袁粤杂栽袁粤蕴孕袁郧蕴哉袁月哉晕袁粤蕴月袁栽月陨蕴袁悦则藻葬袁栽悦匀韵袁栽郧袁葬灶凿悦运曰藻造藻糟贼则燥造赠贼藻贼蚤皂藻责葬则葬皂藻贼藻则泽泽怎糟澡葬泽垣垣运袁晕葬袁悦造鄄葬灶凿责则燥贼澡则燥皂遭蚤灶贼蚤皂藻渊孕栽冤泽澡燥憎藻凿泽贼葬贼蚤泽贼蚤糟葬造造赠泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽渊孕约园郾园缘葬灶凿孕约园郾园员冤袁遭怎贼凿蚤凿灶燥贼泽澡燥憎贼蚤皂藻葬灶凿凿燥泽藻藻枣枣藻糟贼则藻早怎造葬则蚤贼赠袁葬灶凿灶燥责葬贼澡燥造燥早蚤糟葬造泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶糟藻援悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶泽摇晕燥燥遭增蚤燥怎泽贼燥曾蚤糟藻枣枣藻糟贼泽燥灶 咱基金项目暂新疆维吾尔自治区专利实施计划项目基金渊编号圆园园怨园园圆冤曰新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市科学技术计划项目基金渊编号悦员员员员员园园园圆冤遥咱作者简介暂热比姑丽窑伊斯拉木渊员怨苑园原冤袁女袁研究方向院维药药理毒理学研究遥耘鄄皂葬蚤造院则葬遭蚤赠葬圆苑圆岳员圆远援糟燥皂遥咱通讯作者暂冷英莉渊员怨苑远原冤袁女袁研究方向院新药开发遥耘鄄皂葬蚤造院苑员怨愿园猿圆猿圆岳择择援糟燥皂遥

63 远园中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 澡藻皂葬贼燥造燥早蚤糟葬造责葬则葬皂藻贼藻则泽葬则藻燥遭泽藻则增藻凿蚤灶贼澡藻杂阅则葬贼泽贼则藻葬贼藻凿憎蚤贼澡运怎则泽蚤运葬噪灶葬择葬贼凿燥泽藻泽燥枣园郾猿圆早袁员郾远早袁燥则猿郾圆早渊糟则怎凿藻凿则怎早冤辕噪早窑凿燥则葬造造赠葬凿皂蚤灶蚤泽贼藻则藻凿枣燥则员愿园凿葬赠泽袁蚤灶凿蚤糟葬贼蚤灶早贼澡葬贼贼澡蚤泽凿则怎早蚤泽泽葬枣藻枣燥则造燥灶早鄄贼藻则皂糟造蚤灶蚤糟葬造怎泽藻援揖运藻赠憎燥则凿泽铱摇运怎则泽蚤运葬噪灶葬择袁哉赠早澡怎则皂藻凿蚤糟蚤灶藻曰砸葬贼泽曰悦澡则燥灶蚤糟栽燥曾蚤糟蚤贼赠袁月造燥燥凿责葬则葬皂藻贼藻则泽 摇摇尿通卡克乃其片是在古代维医秘方的基础上采用现代科学技术研制而成的片剂袁由酸浆尧黄瓜子尧血竭尧西黄耆胶尧阿拉伯胶尧巴旦仁等员园味维吾尔药材组成袁具有镇痛尧利尿的功效遥临床上用于咱员暂治疗尿痛尧尿不尽尧尿血尧尿道流脓等遥本文初步探讨尿通卡克乃其片渊员园园豫处方原药粉冤的大鼠灌胃长期毒性试验血液学指标变化袁对其临床应用安全性进行再评价遥 员摇 材料和方法 员郾员摇实验动物及实验环境杂阅大鼠员源园只袁杂孕云级袁雌雄各半袁体重远园耀怨园早袁由新疆医科大学医学实验动物中心提供袁生产许可证号院杂悦载运渊新冤圆园园猿原园园园员遥实验动物使用许可证号院杂再载运渊新冤圆园园猿原园园园圆遥动物实验经新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所药物安全性评价中心渊郧蕴孕冤审核袁符合动物伦理委员会的管理准则遥实验开始前检疫袁经一般行为观察袁选用符合要求的员圆园只大鼠渊意尧裔各半冤进行长期毒性试验遥员郾圆摇仪器与试剂孕酝源园园园辕猿全自动生化分析仪袁意大利窑罗马曰月悦猿园园全血细胞分析仪袁深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司曰匀运圆园园猿电解质分析仪袁郑州市汇科电子有限公司曰杂在在血凝分析仪袁深圳市鹏瑞佳电子有限公司曰高速冷冻离心机袁栽郧蕴鄄员远郧袁金坛市华峰仪器有限公司遥尿通卡克乃其片渊员园园豫处方原药粉冤由新疆华康药业有限责任公司渊现新疆银朵兰维药股份有限公司冤提供袁批号院园愿园远园员遥红细胞计数渊砸月悦冤尧血红蛋白渊匀郧月冤尧红细胞容积渊匀悦栽冤尧平均红细胞体积渊酝悦灾冤尧平均红细胞血红蛋白含量渊酝悦匀冤尧平均红细胞血红蛋白浓度渊酝悦匀悦冤尧血小板计数渊孕蕴栽冤尧白细胞计数渊宰月悦冤尧淋巴细胞百分含量渊蕴再酝豫冤尧中间细胞百分含量渊酝陨阅豫冤尧粒细胞百分含量渊郧砸粤豫冤尧网织红细胞数渊砸藻贼冤曰丙氨酸氨基转移酶渊粤蕴栽冤尧天门冬氨酸氨基转移酶渊粤杂栽冤尧碱性磷酸酶渊粤蕴孕冤尧葡萄糖渊郧蕴哉冤尧尿素氮渊月哉晕冤尧总蛋白渊栽孕冤尧白蛋白渊粤蕴月冤尧总胆红素渊栽月陨蕴冤尧肌酐渊悦则藻葬冤尧总胆固醇渊栽悦匀韵冤尧甘油三酯渊栽郧冤尧肌酸磷垣酸激酶渊悦运冤曰钾离子浓度渊运冤尧钠离子浓度 垣原渊晕葬冤尧氯离子浓度渊悦造冤尧凝血酶原时间渊孕栽冤袁上述试剂盒均购自中生北控生物科技股份有限公司遥 员郾猿摇 咱圆原源暂动物实验 员郾猿郾员摇动物分组及给药方法院取员圆园只大鼠袁雌雄分别按体质量随机分为源组袁分别为对照组尧尿通卡克乃其片渊原药粉冤低尧中尧高猿个剂量组遥每组猿园只袁雌雄各半遥对照组园郾缘豫悦酝悦鄄晕葬混悬液曰尿通卡克乃其片低剂量组为园郾猿圆早渊生药冤辕噪早袁中剂量组为员郾远早渊生药冤辕噪早袁高剂量组为猿郾圆早渊生药冤辕噪早渊即分别相当于临床成人每日每公斤用的缘尧圆缘尧缘园倍冤遥本实验采用与临床一致的给药途径袁灌胃给药渊员皂蕴辕员园园早窑遭憎冤遥每天给药员次袁每周给药远凿袁连续给药员愿园凿遥分别在给药怨园凿结束时尧给药员愿园凿结束时和停药猿园凿结束时袁每组各处死员园只渊雌雄各半冤遥员郾猿郾圆摇观察指标院员郾猿郾圆郾员摇一般状况观察院每日观察大鼠一般形态外观尧行为活动尧饮食情况尧分泌物尧排泄物等袁同时观察动物中毒反应的症状袁起始时间袁严重程度袁持续时间袁是否可逆袁填写笼旁观察记录表肉眼观察动物遥员郾猿郾圆郾圆摇血细胞指标检测院分别在给药怨园凿结束时渊处死源园只袁雌雄各半冤尧给药员愿园凿结束时渊处死源园只袁雌雄各半冤和停药猿园凿结束时渊处死源园只袁雌雄各半冤袁检查各组大鼠血细胞指标渊砸月悦尧匀郧月尧匀悦栽尧酝悦灾尧酝悦匀尧酝悦匀悦尧孕蕴栽尧宰月悦尧蕴再酝豫尧酝陨阅豫尧郧砸粤豫尧砸藻贼冤员次袁总共猿次遥员郾猿郾圆郾猿摇血生化指标检测院分别在给药怨园凿结束时渊处死源园只袁雌雄各半冤尧给药员愿园凿结束时渊处死源园只袁雌雄各半冤和停药猿园凿结束时渊处死源园只袁雌雄各半冤袁检查各组大鼠血生化指标渊粤蕴栽尧粤杂栽尧粤蕴孕尧郧蕴哉尧月哉晕尧栽孕尧粤蕴月尧栽月陨蕴尧悦则藻葬尧栽悦匀韵尧栽郧尧悦运冤员次袁总共猿次遥员郾猿郾圆郾源摇电解质及血凝检测院分别在给药怨园凿结束时渊处死源园只袁雌雄各半冤尧给药员愿园凿结束时渊处死源园只袁雌雄各半冤和停药猿园凿结束时渊处死源园垣只袁雌雄各半冤袁检查各组大鼠电解质指标渊运尧垣原晕葬尧悦造冤及血凝指标渊孕栽冤员次袁总共猿次遥员郾猿郾猿摇统计学方法院各项数据均以均数依标准差渊軃曾依泽冤表示袁采用杂孕杂杂员苑郾园统计软件进行统计分

64 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 远员 析袁孕约园郾园缘表示差异有统计学意义遥 跃园郾园缘冤遥结果见表猿遥 圆摇 结果 猿摇 讨论 圆郾员摇一般观察摇与对照组比较袁尿通卡克乃其片组渊低尧中尧高剂量冤分别在给药怨园凿结束时尧给药员愿园凿结束时和停药猿园凿结束时袁大鼠未见动物死亡或无明显毒性反应遥圆郾圆摇血细胞指标检测摇与对照组比较袁给药员愿园凿砸月悦渊意院酝冤尧匀郧月渊意院酝尧匀冤降低渊孕约园郾园缘冤袁分别在给药怨园凿和停药后猿园凿均差异无统计学意义渊孕跃园郾园缘冤曰给药怨园凿酝悦匀渊裔院蕴尧匀冤升高渊孕约园郾园缘冤袁分别在给药员愿园凿和停药后猿园凿均差异无统计学意义渊孕跃园郾园缘冤曰酝悦匀悦在给药怨园凿渊裔意院蕴尧酝尧匀冤袁给药员愿园凿渊裔院蕴尧酝袁意院匀冤袁停药猿园凿渊意院蕴尧酝冤差异有统计学意义渊孕约园郾园缘冤曰给药怨园凿宰月悦渊意院酝尧匀冤尧蕴再酝孕豫渊意院蕴冤尧孕蕴栽渊裔院酝冤升高渊孕约园郾园缘冤袁给药员愿园凿均差异无统计学渊孕跃园郾园缘冤袁但停药猿园凿孕蕴栽渊裔院酝冤升高渊孕约园郾园缘冤遥结果见表员遥圆郾猿摇血生化指标检测摇与对照组比较袁粤杂栽渊裔冤在给药怨园凿渊蕴冤尧给药员愿园凿渊匀冤尧停药猿园凿渊匀冤降低渊孕约园郾园缘冤曰给药员愿园凿粤蕴栽渊裔院酝尧匀冤降低尧月哉晕渊意院匀冤升高渊孕约园郾园员冤袁停药猿园凿粤蕴栽渊裔院酝冤尧月哉晕渊裔院酝冤均升高渊孕约园郾园缘冤曰分别在给药员愿园凿和停药猿园凿粤蕴孕渊裔袁匀冤降低袁郧蕴哉渊意袁匀冤升高渊孕约园郾园缘耀孕约园郾园员冤曰给药怨园凿悦运渊裔院蕴冤尧粤蕴月渊意院匀冤尧栽悦匀韵渊意院蕴冤降低渊孕约园郾园缘冤袁分别在给药员愿园凿和停药猿园凿除栽悦匀韵袁裔酝外均差异无统计学意义渊孕跃园郾园缘冤曰停药猿园凿栽月陨蕴渊裔院匀冤降低渊孕约园郾园员冤袁分别在给药怨园凿尧员愿园凿均差异无统计学意义渊孕跃园郾园缘冤曰给药员愿园凿悦则藻葬渊裔院酝冤尧栽郧渊裔院蕴袁酝袁匀冤降低袁分别在给药怨园凿尧停药猿园凿均差异无统计学意义渊孕跃园郾园缘冤遥结果见表圆遥圆郾源摇电解质及血凝检查垣与对照组比较袁给药怨园凿袁运渊裔意院蕴尧酝尧匀冤尧垣晕葬渊裔院蕴袁意院蕴尧酝尧匀冤差异有统计学意义渊孕约园郾园缘耀孕约园郾园员冤袁分别在给药员愿园凿尧停药猿园凿差异原没有统计学意义渊孕跃园郾园缘冤遥给药怨园凿悦造渊裔院蕴袁意院蕴尧酝尧匀冤袁停药猿园凿渊裔院蕴袁匀冤差异有统计学意义渊孕约园郾园缘耀孕约园郾园员冤遥给药员愿园凿孕栽渊裔院蕴冤升高袁给药怨园凿尧停药猿园凿差异没有统计学意义渊孕 尿通卡克乃其片是维吾尔医经典方剂遥药性干寒袁具有生干生寒袁清热消炎袁除腐排脓袁利尿通咱缘暂阻等功效遥同时可作为异常粘液质清除剂袁具有清除异常黏液质袁恢复黏液质的正常状态袁平衡体咱远原愿暂液袁调整气质袁用于治疗疾病遥本文初步探讨尿通卡克乃其片渊员园园豫处方原药粉冤的大鼠灌胃长期毒性试验血液学指标变化袁对其临床应用安全性进行再评价遥血细胞结果表明袁给药员愿园凿砸月悦渊意院酝冤尧匀郧月渊意院酝尧匀冤降低渊孕约园郾园缘冤袁分别在给药怨园凿和停药后猿园凿均差异无统计学意义渊孕跃园郾园缘冤曰说明砸月悦尧匀郧月变动在正常范围内渊一般雌性大鼠正常范围比雄性低冤遥给药怨园凿酝悦匀渊裔院蕴尧匀冤升高渊孕约园郾园缘冤袁分别在给药员愿园凿和停药后猿园凿均差异无统计学意义渊孕跃园郾园缘冤曰说明酝悦匀变化无时间和剂量规律性遥酝悦匀悦在给药怨园凿渊裔意院蕴尧酝尧匀冤袁给药员愿园凿渊裔院蕴尧酝袁意院匀冤袁停药猿园凿渊意院蕴尧酝冤差异有统计学意义渊孕约园郾园缘冤曰此变化无规律性遥给药怨园凿宰月悦渊意院酝尧匀冤尧蕴再酝孕豫渊意院蕴冤尧孕蕴栽渊裔院酝冤升高渊孕约园郾园缘冤袁给药员愿园凿均差异无统计学意义渊孕跃园郾园缘冤袁但停药猿园凿孕蕴栽渊裔院酝冤升高渊孕约园郾园缘冤曰说明此变化无时间尧剂量规律性袁且变动量在正常范围内遥血生化结果表明袁粤杂栽渊裔冤在给药怨园凿渊蕴冤尧给药员愿园凿渊匀冤尧停药猿园凿渊匀冤降低渊孕约园郾园缘冤曰给药怨园凿悦运渊裔院蕴冤尧栽悦匀韵渊意院蕴冤降低曰给药员愿园凿悦则藻葬渊裔院酝冤尧栽郧渊裔院蕴袁酝袁匀冤降低曰停药猿园凿栽月陨蕴渊裔院匀冤降低渊孕约园郾园员冤曰给药员愿园凿和停药猿园凿粤蕴孕渊裔院匀冤降低曰均无病理意义遥给药员愿园凿粤蕴栽渊裔院酝尧匀冤降低袁月哉晕渊意院匀冤尧郧蕴哉渊意院匀冤升高渊孕约园郾园缘耀孕约园郾园员冤曰停药猿园凿粤蕴栽渊裔院酝冤尧月哉晕渊裔院酝冤尧郧蕴哉渊意袁匀冤均升高渊孕约园郾园缘耀孕约园郾园员冤曰说明升高作用无明显剂量规律性袁且变动量在正常范围内遥给药怨园凿粤蕴月渊意院匀冤降低渊孕约园郾园缘冤袁给药员愿园凿和停药猿园凿均差异无统计学意义渊孕跃园郾园缘冤袁说明降低作用无时间规律性袁且变动在正常范围内遥垣电解质与血凝结果表明袁给药怨园凿袁运渊裔意院垣原蕴尧酝尧匀冤尧晕葬渊裔院蕴袁意院蕴尧酝尧匀冤袁给药怨园凿悦造 原渊裔院蕴袁意院蕴尧酝尧匀冤尧停药猿园凿悦造渊裔院蕴袁匀冤袁给

65 远圆中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿

66 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 远猿

67 远源中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿

68 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 远缘 药员愿园凿孕栽渊裔院蕴冤均有差异统计学意义渊孕约园郾园缘耀孕约园郾园员冤袁说明变动在正常范围之内袁无病理意义遥总而言之袁园郾猿圆早尧员郾远早尧猿郾圆早渊生药冤辕噪早窑凿渊相当于拟推荐成人临床剂量的缘尧圆缘尧缘园倍冤剂量下的尿通卡克乃其片原料粉灌胃大鼠员愿园凿袁虽大鼠个别剂量组尧血液个别指标差异有统计学意义渊孕约园郾园缘耀孕约园郾园员冤袁但无剂量尧时间规律性袁均无病理意义遥因此袁尿通卡克乃其片原料粉灌胃大鼠员愿园凿对大鼠血液指标无明显异常袁在临床用剂量下长期使用是安全的遥参考文献院 咱员暂摇中华人民共和国卫生部药品标准要维吾尔药分册渊维文冤咱酝暂援乌鲁木齐院新疆科技卫生出版社袁员怨怨怨院员远怨援咱圆暂摇袁伯俊袁廖明阳援药物毒理学实验方法与技术咱酝暂援北京院化学工业出版社袁圆园园苑院员源员原员源远袁圆园园原圆猿员援 咱猿暂摇魏伟袁吴希美袁李元建援摇药理实验方法学渊第源版冤咱酝暂援北京院人民卫生出版社袁圆园员园院猿怨猿原源园远援咱源暂摇热比姑丽窑伊斯拉木袁尤力都孜窑买买提袁阿布都吉力力窑阿布都艾尼袁等援疆曼陀罗子及其代表制剂镇痛艾比西帕丸的大鼠长期毒性试验咱允暂援中国药理学通报袁圆园员员袁圆苑渊员园冤院员源苑怨原员源愿园援咱缘暂摇艾力阿吉窑库尔班尼亚孜艾米琪遥维吾尔医成药宝库渊维文冤咱酝暂援乌鲁木齐院新疆人民卫生出版社援圆园园苑院员远怨原员苑园援咱远暂摇热比姑丽窑伊斯拉木袁阿娜古丽窑买合木提袁冷英莉袁等援异常黏液质清除剂尿通卡克乃其片的药效学实验研究咱允暂援中国医药导报袁圆园员园袁苑渊员缘冤院缘圆原缘源援咱苑暂摇阿不都热依木窑卡德尔窑阿塔哥援中国新疆维吾尔医药学咱酝暂援乌鲁木齐院新疆人民卫生出版社援圆园员猿院员园园原员园源援咱愿暂摇哈木拉提窑吾甫尔袁阿不都热依木窑玉素甫援维吾尔医气质尧体液论及其现代研究咱酝暂援乌鲁木齐院新疆科学技术出版社袁圆园园猿院源远原源怨援也修回日期页圆园员远原园猿原猿园

69 圆园员远年愿月第圆远卷摇第愿期 中国比较医学杂志悦匀陨晕耘杂耘允韵哉砸晕粤蕴韵云悦韵酝孕粤砸粤栽陨灾耘酝耘阅陨悦陨晕耘 粤怎早怎泽贼袁圆园员远灾燥造援圆远摇晕燥援愿 藡 蕥 蕥蕥蕥蕥藡研究报告 蕥蕥蕥蕥藡 蕥藡 粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶抑制杂匀鄄杂再缘再细胞圆型囊泡单胺转运体的表达 满建梅袁郭军堂袁张代娟袁陈安琪 渊潍坊医学院临床医学院袁潍坊摇圆远员园缘猿冤 摇摇揖摘要铱摇目的摇研究稳定表达粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶对神经母细胞瘤杂匀鄄杂再缘再细胞中圆型囊泡单胺转运体栽酝渊灾酝粤栽圆冤蛋白表达的影响遥方法摇构建粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶真核表达载体袁用脂质体造蚤责燥枣藻糟贼葬皂蚤灶藻圆园园园转染杂匀鄄杂再缘再细胞袁经郧源员愿筛选获得稳定转染单克隆细胞株曰分别采用宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早及阅悦云匀鄄阅粤染色检测细胞系粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶过表达对灾酝粤栽圆蛋白的表达及细胞内活性氧类物质渊砸韵杂冤水平的影响遥结果摇宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早结果显示灾酝粤栽圆的表达在稳定表达粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶的细胞系中明显降低遥阅悦云匀鄄阅粤染色结果显示稳定表达粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶细胞系内阅悦云泽蚤早灶葬造渊缘园苑郾猿依苑郾员冤较对照组渊源员园郾苑依员园郾缘冤明显增多渊孕约园郾园缘冤遥结论摇粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶能够通过抑制灾酝粤栽圆的表达袁增加细胞内的砸韵杂水平袁在帕金森病的发病过程中发挥重要作用遥揖关键词铱摇帕金森氏病曰粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶曰灾酝粤栽圆揖中图分类号铱砸鄄猿猿摇摇揖文献标识码铱粤摇摇揖文章编号铱员远苑员鄄苑愿缘远渊圆园员远冤园愿鄄园园远远鄄园源凿燥蚤院员园郾猿怨远怨援躁援蚤泽泽灶援员远苑员原苑愿缘远郾圆园员远郾园愿郾园员园 粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶凿藻糟则藻葬泽藻泽贼澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣贼赠责藻圆增藻泽蚤糟怎造葬则皂燥灶燥葬皂蚤灶藻贼则葬灶泽责燥则贼藻则蚤灶灶藻怎则燥遭造葬泽贼燥皂葬杂匀鄄杂再缘再糟藻造造泽 酝粤晕允蚤葬灶鄄皂藻蚤袁郧哉韵允怎灶鄄贼葬灶早袁在匀粤晕郧阅葬蚤鄄躁怎葬灶袁悦匀耘晕粤灶鄄择蚤渊杂糟澡燥燥造燥枣悦造蚤灶蚤糟葬造酝藻凿蚤糟蚤灶藻袁宰藻蚤枣葬灶早酝藻凿蚤糟葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁宰藻蚤枣葬灶早圆远员园缘猿袁悦澡蚤灶葬冤 摇摇揖粤遭泽贼则葬糟贼铱摇韵遭躁藻糟贼蚤增藻摇栽燥蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻贼澡藻藻枣枣藻糟贼燥枣粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶燥灶贼澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣贼赠责藻圆增藻泽蚤糟怎造葬则皂燥灶燥葬皂蚤灶藻贼则葬灶泽责燥则贼藻则渊灾酝粤栽圆冤蚤灶灶藻怎则燥灶遭造葬泽贼燥皂葬杂匀鄄杂再缘再糟藻造造泽泽贼葬遭造赠藻曾责则藻泽泽蚤灶早粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶援酝藻贼澡燥凿泽摇栽酝粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶藻怎噪葬则赠燥贼蚤糟责造葬泽皂蚤凿憎葬泽糟燥灶泽贼则怎糟贼藻凿遭赠贼则葬灶泽枣藻糟贼蚤燥灶燥枣贼澡藻杂匀鄄杂再缘再糟藻造造泽怎泽蚤灶早蕴蚤责燥枣藻糟贼葬皂蚤灶藻圆园园园袁葬灶凿葬泽贼葬遭造藻贼则葬灶泽枣藻糟贼藻凿皂燥灶燥糟造燥灶葬造糟藻造造造蚤灶藻憎葬泽泽藻造藻糟贼藻凿遭赠郧源员愿援宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早葬灶凿阅悦云匀鄄阅粤泽贼葬蚤灶蚤灶早憎藻则藻怎泽藻凿贼燥凿藻贼藻糟贼贼澡藻藻枣枣藻糟贼燥枣粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶燥增藻则藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥灶贼澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣灾酝粤栽圆责则燥贼藻蚤灶葬灶凿造藻增藻造燥枣则藻葬糟贼蚤增藻燥曾赠早藻灶泽责藻糟蚤藻泽渊砸韵杂冤援砸藻泽怎造贼泽摇宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早泽澡燥憎藻凿贼澡葬贼糟燥皂责葬则藻凿憎蚤贼澡贼澡藻糟燥灶贼则燥造早则燥怎责袁贼澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣灾酝粤栽圆责则燥贼藻蚤灶憎葬泽泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠凿藻糟则藻葬泽藻凿袁葬灶凿阅悦云匀鄄阅粤泽贼葬蚤灶蚤灶早泽澡燥憎藻凿贼澡葬贼阅悦云泽蚤早灶葬造憎葬泽泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠蚤灶糟则藻葬泽藻凿渊缘园苑郾猿依苑郾员冤贼澡葬灶贼澡葬贼蚤灶贼澡藻糟藻造造造蚤灶藻泽贼葬遭造赠藻曾责则藻泽泽蚤灶早粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶渊源员园郾苑依员园郾缘冤渊孕约园郾园缘冤援悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶泽摇粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶糟葬灶蚤灶糟则藻葬泽藻贼澡藻蚤灶贼则葬糟藻造造怎造葬则砸韵杂造藻增藻造遭赠蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤灶早贼澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣灾酝粤栽圆袁贼澡藻则藻遭赠责造葬赠蚤灶早葬灶蚤皂责燥则贼葬灶贼则燥造藻蚤灶贼澡藻责葬贼澡燥早藻灶藻泽蚤泽燥枣孕葬则噪蚤灶泽燥灶忆泽凿蚤泽藻葬泽藻援揖运藻赠憎燥则凿泽铱摇孕葬则噪蚤灶泽燥灶忆泽凿蚤泽藻葬泽藻曰粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶曰灾酝粤栽圆 咱基金项目暂山东省自然科学基金渊在砸圆园员员匀酝园员源冤曰山东省自然科学基金渊在砸圆园员缘匀蕴员圆远冤遥咱作者简介暂满建梅渊员怨愿怨原冤袁女袁硕士研究生袁专业院病理学与病理生理学遥耘皂葬蚤造院员员怨圆苑源远怨愿源岳择择援糟燥皂遥咱通讯作者暂陈安琪渊员怨愿员原冤袁女遥耘皂葬蚤造院糟澡藻灶葬灶择蚤赃员怨愿员岳员远猿援糟燥皂遥

70 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 远苑 摇摇帕金森氏病渊孕葬则噪蚤灶泽燥灶忆泽凿蚤泽藻葬泽藻袁孕阅冤的主要病理特征是黑质多巴胺能神经元的选择性变性及蕴藻憎赠遭燥凿赠渊蕴月冤的形成袁琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶是蕴月的重要成咱员暂分遥粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶是人们在常染色体显性家咱圆暂族孕阅患者中发现的突变体袁与孕阅的发病密切相关袁但具体机制还不清楚遥研究发现粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶可与灾酝粤栽圆在体外发生特异性分子间相咱猿暂互作用袁提示粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶参与了多巴胺渊阅粤冤的代谢调节过程袁在孕阅的多巴胺神经元选择性变性过程中发挥作用遥本研究目的是建立稳定表达粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶的细胞系袁并研究其对灾酝粤栽圆蛋白表达的影响袁为研究孕阅的发病机制提供新思路遥 员摇 材料和方法 员郾员摇材料神经母细胞瘤杂匀鄄杂再缘再细胞购自中国医学科学院基础所细胞中心曰携带粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶的栽载体及茁鄄半乳糖苷酶的责糟阅晕粤猿郾园鄄蕴葬糟扎真核细胞栽酝表达载体为本室保存曰蕴蚤责燥枣藻糟贼葬皂蚤灶藻圆园园园购自郧蚤遭糟燥月砸蕴曰山羊抗人灾酝粤栽圆多克隆抗体尧小鼠抗人琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶多克隆抗体尧小鼠抗人茁鄄葬糟贼蚤灶单克隆抗体购自杂葬灶贼葬悦则怎扎曰辣根酶渊匀砸孕冤标记陨早郧购自中杉金桥曰载澡燥陨尧匀蚤灶凿陨陨陨尧栽源阅晕粤连接酶尧高保真孕赠则燥遭藻泽贼阅晕粤聚合酶购自大连宝生物曰圆爷鄄苑爷鄄二氯荧光素双醋酸盐渊阅悦云匀鄄阅粤冤尧载鄄早葬造购自杂蚤早皂葬曰郧源员愿购自粤皂藻则泽糟燥曰孕悦砸引物由上海博亚公司合成遥员郾圆摇方法员郾圆郾员摇真核表达载体构建院合成正义引物糟贼贼糟葬贼葬葬早糟贼贼糟早葬糟葬早贼早贼早早贼渊含匀蚤灶凿陨陨陨内切酶位点冤和反义引物贼葬葬早葬贼糟贼糟早葬早早葬葬葬糟贼早早早葬早糟葬葬葬早渊含载澡燥陨内切酶位点冤袁以携带粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶的栽载体为模板进行孕悦砸反应遥条件院怨源益变性员皂蚤灶袁远园益退火猿园泽袁苑圆益延伸猿园泽袁圆缘个循环遥回收的孕悦砸产物与责糟阅晕粤猿郾园分别用匀蚤灶凿陨陨陨和载澡燥陨酶切遥酶切产物纯化后加入栽源连接酶源益连接过夜后转化阅匀缘琢感受态大肠杆菌袁挑取单菌落小量扩增袁提取质粒袁用匀蚤灶凿陨陨陨和载澡燥陨酶切鉴定并进行测序袁测序正确的克隆命名为责糟阅晕粤猿郾园鄄粤缘猿栽遥员郾圆郾圆摇细胞培养及转染院将杂匀鄄杂再缘再接种于高糖阅酝耘酝培养基渊含员园豫胎牛血清袁员园园陨哉辕皂蕴青霉素袁员园园滋早辕皂蕴链霉素冤中袁猿苑益袁缘豫悦韵圆培养曰取对数生长期细胞接种到圆源孔板内袁当细胞密度达到 栽酝缘园豫耀愿园豫时袁按照脂质体蕴蚤责燥枣藻糟贼葬皂蚤灶藻圆园园园渊郧蚤遭糟燥月砸蕴冤说明书进行转染遥圆源澡后加入抗生素含郧源员愿的完全培养基进行持续筛选袁两周后挑选单克隆进行扩大培养并继续保持筛选压力到圆个月以上遥稳定表达粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶的细胞系为实验组袁稳定表达茁鄄半乳糖苷酶的细胞系为对照组遥员郾圆郾猿摇茁鄄半乳糖苷酶活性检测院培养细胞苑圆澡后袁用冰冷的孕月杂洗涤细胞两次袁员园豫甲醛固定液室温固定缘皂蚤灶遥孕月杂洗涤两次后加入载鄄早葬造染色液渊员早辕蕴冤袁猿苑益孵育员圆澡遥显微镜下观察袁蓝染细胞为表达茁鄄半乳糖苷酶阳性细胞遥员郾圆郾源摇宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早检测蛋白表达院胰酶消化细胞后袁员园园园早离心员园皂蚤灶袁孕月杂洗猿次后袁弃上清液袁加入员辕缘体积的远伊杂阅杂蛋白质上样缓冲液袁混匀后员园园益煮沸员园皂蚤灶进行员圆豫杂阅杂鄄孕粤郧耘凝胶电泳袁蛋白转移到孕灾阅云膜后袁用栽月杂栽稀释的缘豫脱脂奶粉室温摇动封闭员澡袁一抗渊灾酝粤栽圆抗体员颐缘园园袁琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶抗体员颐缘园园袁茁鄄葬糟贼蚤灶抗体员颐缘园园冤室温孵育源澡袁员颐缘园园园二抗室温孵育员澡袁耘悦蕴化学发光与曝光遥员郾圆郾缘摇流式细胞仪检测细胞内砸韵杂水平院培养细胞圆源澡后袁用胰酶进行消化曰将细胞重新悬浮于预冷的无血清培养基中袁加入阅悦云匀鄄阅粤渊员园滋皂燥造辕蕴冤袁孵育圆园皂蚤灶后袁离心收集细胞袁孕月杂重新洗涤细胞猿次袁最后重新悬浮于缘园园滋蕴孕月杂袁流式细胞仪渊耘远员缘缘袁月阅云粤悦杂悦葬造蚤遭怎则冤中检测荧光强度袁每次员园园园园个袁重复猿次袁记录平均阅悦云泽蚤早灶葬造遥员郾圆郾远摇统计学方法院数据以均数依标准差渊軃曾依泽冤表示遥统计学方法采用贼检验遥 圆摇 结果 圆郾员摇责糟阅晕粤猿郾园鄄粤缘猿栽真核表达载体的鉴定匀蚤灶凿陨陨陨和载澡燥陨双酶切责糟阅晕粤猿郾园和责糟阅晕粤猿郾园鄄粤缘猿栽袁酶切产物电泳可见员泳道有缘园园遭责左右大小的条带袁与预期结果一致渊见图员冤遥阅晕粤测序结果与郧藻灶遭葬灶噪报道的序列一致遥圆郾圆摇稳定表达茁鄄半乳糖苷酶细胞系的鉴定 真核表达载体责悦酝灾杂再晕鄄粤缘猿栽没有茁鄄半乳糖苷酶基因袁在细胞中无法产生茁鄄半乳糖苷酶袁无法作用于载鄄早葬造中的吲哚环而显蓝色遥想反袁稳定转染茁鄄半乳糖苷酶基因的细胞系能够产生茁鄄半乳糖苷酶袁细胞则有明显的蓝染袁提示茁鄄半乳糖苷酶在细胞系中稳定表达遥如图圆所示遥

71 远愿中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 酝院阅晕粤皂葬则噪藻则曰员院责糟阅晕粤猿郾园鄄粤缘猿栽曰圆院责糟阅晕粤猿郾园图员摇责糟阅晕粤猿郾园鄄粤缘猿栽真核表达载体的酶切鉴定酝院阅晕粤皂葬则噪藻则曰蕴葬灶藻员院责糟阅晕粤猿郾园鄄粤缘猿栽曰蕴葬灶藻圆院责糟阅晕粤猿郾园援云蚤早援员摇陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣藻怎噪葬则赠燥贼蚤糟藻曾责则藻泽泽蚤燥灶增藻糟贼燥则责糟阅晕粤猿郾园鄄粤缘猿栽 圆郾猿摇宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早结果宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早结果显示袁在杂匀鄄杂再缘再细胞中有野生型琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶蛋白的表达袁但琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶蛋白的表达量在稳定转染粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶的细胞系中渊实验组冤较稳定表达茁鄄半乳糖苷酶细胞系渊对照组冤明显增多袁提示细胞系中有粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶的过表达袁而灾酝粤栽圆在实验组中的表达量较实验组明显降低遥如图猿所示遥圆郾源摇细胞内砸韵杂水平的变化如图源所示袁稳定表达粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶细胞系的阅悦云泽蚤早灶葬造渊缘园苑郾猿依苑郾员冤较稳定表达茁鄄半乳糖苷酶细胞系渊源员园郾苑依员园郾缘冤明显增高渊孕约园郾园缘冤袁提示粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶过表达能够明显增加细胞砸韵杂的产生遥 注院粤院稳定表达茁鄄半乳糖苷酶细胞系曰月院稳定表达粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶细胞系图圆摇载鄄早葬造染色检测茁鄄半乳糖苷酶的表达晕燥贼藻援粤院悦藻造造泽泽贼葬遭造赠藻曾责则藻泽泽蚤灶早茁鄄早葬造葬糟贼燥泽蚤凿葬泽藻曰月院悦藻造造泽泽贼葬遭造赠藻曾责则藻泽泽蚤灶早粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶援云蚤早援圆摇栽澡藻凿藻贼藻糟贼蚤燥灶燥枣茁鄄早葬造葬糟贼燥泽蚤凿葬泽藻遭赠载鄄早葬造泽贼葬蚤灶蚤灶早 注院实验组院稳定表达粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶细胞系曰对照组院稳定表达茁鄄半乳糖苷酶细胞系图猿摇宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早检测粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶及灾酝粤栽圆的表达晕燥贼藻援耘曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造早则燥怎责院悦藻造造泽泽贼葬遭造赠藻曾责则藻泽泽蚤灶早粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶援悦燥灶贼则燥造早则燥怎责院悦藻造造泽泽贼葬遭造赠藻曾责则藻泽泽蚤灶早茁鄄早葬造葬糟贼燥泽蚤凿葬泽藻援云蚤早援猿摇耘曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶葬灶凿灾酝粤栽圆凿藻贼藻糟贼藻凿遭赠宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早 图源摇细胞系内砸韵杂水平的变化云蚤早援源摇悦澡葬灶早藻泽燥枣蚤灶贼则葬糟藻造造怎造葬则砸韵杂造藻增藻造猿摇讨论琢鄄杂赠灶怎糟造藻蚤灶是一种具有非茁鄄淀粉样结构渊晕粤悦冤的可溶性蛋白质袁主要分布于中枢神经系统突触前末梢和核周袁在突触囊泡转运尧神经递质的

72 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 远怨 释放及多巴胺的代谢过程中具有重要的调节作咱源袁缘暂用遥琢鄄杂赠灶怎糟造藻蚤灶蛋白正常尧错误折叠及其寡聚化之间存在动态平衡袁失衡后如出现大量错误折叠袁会导致寡聚体及纤维体的形成遥孕藻藻造葬藻则贼泽宰咱远暂等认为纤维态是主要的毒性物质袁它可引起进行性运动功能损害和细胞死亡袁具体的机制尚不清楚遥目前研究认为导致孕阅发病的重要因素可能与阅粤异常代谢产生的砸韵杂有关袁它能够引起神经元咱苑暂细胞的氧化损害遥细胞内的阅粤袁尤其是阅粤的代谢产物能够与琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶相互作用袁促进琢鄄咱愿暂泽赠灶怎糟造藻蚤灶的异常聚集及纤维化袁形成蕴月小体遥生理条件下袁多巴胺一旦在神经元中合成袁立即可以通过灾酝粤栽圆转运到突触囊泡中进行储存袁否则中枢神经系统内的阅粤能够通过自身氧化和酶降解咱怨暂产生砸韵杂遥本研究通过宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早检测显示粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶在杂匀鄄杂再缘再细胞系中稳定高效表达袁为进一步研究孕阅发病机制提供了良好的细胞模型遥在稳定表达粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶细胞系中的灾酝粤栽圆表达水平明显低于对照组袁提示其有抑制灾酝粤栽圆蛋白表达的作用遥为了进一步探讨粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶抑制灾酝粤栽圆表达可能对细胞系产生的影响袁我们通过阅悦云匀鄄阅粤染色检测细胞内砸韵杂水平的变化袁结果显示粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶过表达能够明显的增加细胞内的砸韵杂水平袁这可能与其抑制灾酝粤栽圆的表达有密切的关系遥据此袁我们认为过表达的粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶作用于灾酝粤栽圆袁下调其蛋白表达水平袁打破了细胞内阅粤的平衡袁致使细胞内砸韵杂累积袁 造成对细胞的损害遥粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶如何影响灾酝粤栽圆基因的表达及具体功能有待于进一步研究遥参考文献院 咱员暂摇杂责蚤造造葬灶贼蚤灶蚤酝郧袁杂糟澡皂蚤凿贼酝蕴袁蕴藻藻灾酝袁藻贼葬造援粤造责澡葬鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶蚤灶蕴藻憎赠遭燥凿蚤藻泽咱允暂援晕葬贼怎则藻袁员怨怨苑袁猿愿愿渊远远源缘冤院愿猿怨原愿源园援咱圆暂摇孕燥造赠皂藻则燥责燥怎造燥泽酝匀袁蕴葬增藻凿葬灶悦袁蕴藻则燥赠耘袁藻贼葬造援酝怎贼葬贼蚤燥灶蚤灶贼澡藻葬造责澡葬鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶早藻灶藻蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿蚤灶枣葬皂蚤造蚤藻泽憎蚤贼澡孕葬则噪蚤灶泽燥灶忆泽凿蚤泽藻葬泽藻咱允暂援杂糟蚤藻灶糟藻袁员怨怨苑袁圆苑远渊缘猿圆员冤院圆园源缘原圆园源苑援咱猿暂摇陈安琪袁王建英袁牟青杰袁等援粤缘猿栽琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶与陨陨型单胺囊泡转移体相互作用的鉴定咱允暂援中国临床实用医学袁圆园园愿渊苑冤院源猿原源缘援咱源暂摇蕴葬泽澡怎藻造匀粤员袁韵增藻则噪悦砸袁韵怎藻泽造葬贼蚤粤袁藻贼葬造援栽澡藻皂葬灶赠枣葬糟藻泽燥枣琢原泽赠灶怎糟造藻蚤灶院枣则燥皂泽贼则怎糟贼怎则藻葬灶凿贼燥曾蚤糟蚤贼赠贼燥贼澡藻则葬责藻怎贼蚤糟贼葬则早藻贼咱允暂援晕葬贼砸藻增晕藻怎则燥泽糟蚤袁圆园员猿袁员源渊员冤院猿愿原源愿援咱缘暂摇灾藻灶凿葬蕴蕴员袁悦则葬早早杂允袁月怎糟澡皂葬灶灾蕴袁藻贼葬造援琢鄄杂赠灶怎糟造藻蚤灶葬灶凿凿燥责葬皂蚤灶藻葬贼贼澡藻糟则燥泽泽则燥葬凿泽燥枣孕葬则噪蚤灶泽燥灶忆泽凿蚤泽藻葬泽藻咱允暂援栽则藻灶凿泽晕藻怎则燥泽糟蚤袁圆园员园袁猿猿渊员圆冤院缘缘怨原缘远愿咱远暂摇孕藻藻造葬藻则贼泽宰袁月燥怎泽泽藻贼蕴袁灾葬灶凿藻则孕藻则则藻灶粤袁藻贼葬造援琢鄄杂赠灶怎糟造藻蚤灶泽贼则葬蚤灶泽糟葬怎泽藻凿蚤泽贼蚤灶糟贼泽赠灶怎糟造藻蚤灶燥责葬贼澡蚤藻泽葬枣贼藻则造燥糟葬造葬灶凿泽赠泽贼藻皂蚤糟葬凿皂蚤灶蚤泽贼则葬贼蚤燥灶咱允暂援晕葬贼怎则藻袁圆园员缘袁缘圆圆渊苑缘缘远冤院猿源园原猿源源援咱苑暂摇允藻灶灶藻则孕袁韵造葬灶燥憎悦宰援哉灶凿藻则泽贼葬灶凿蚤灶早糟藻造造凿藻葬贼澡蚤灶孕葬则噪蚤灶泽燥灶忆泽凿蚤泽藻葬泽藻咱允暂援粤灶灶晕藻怎则燥造袁员怨怨愿袁源源渊猿杂怎责责造员冤院杂苑圆原愿源援咱愿暂摇云燥造造皂藻则悦袁砸燥皂觔燥蕴袁耘蚤灶泽蚤藻凿造藻则悦酝袁藻贼葬造援阅燥责葬皂蚤灶藻葬枣枣藻糟贼泽贼澡藻泽贼葬遭蚤造蚤贼赠袁澡赠凿则葬贼蚤燥灶袁葬灶凿责葬糟噪蚤灶早燥枣责则燥贼燥覱遭则蚤造泽葬灶凿覱遭则蚤造泽燥枣贼澡藻憎蚤造凿贼赠责藻葬灶凿增葬则蚤葬灶贼泽燥枣琢鄄泽赠灶怎糟造藻蚤灶咱允暂援月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠袁圆园园苑袁源远渊源冤院源苑圆原源愿圆援咱怨暂摇孕葬则泽燥灶泽杂酝援栽则葬灶泽责燥则贼皂藻糟澡葬灶蚤泽皂泽蚤灶葬糟藻贼赠造糟澡燥造蚤灶藻葬灶凿 皂燥灶燥葬皂蚤灶藻泽贼燥则葬早藻咱允暂援云粤杂耘月允袁圆园园园袁员源渊员缘冤院圆源圆猿原圆源猿源援也修回日期页圆园员远原园猿原园怨

73 圆园员远年愿月第圆远卷摇第愿期 中国比较医学杂志悦匀陨晕耘杂耘允韵哉砸晕粤蕴韵云悦韵酝孕粤砸粤栽陨灾耘酝耘阅陨悦陨晕耘 粤怎早怎泽贼袁圆园员远灾燥造援圆远摇晕燥援愿 藡 蕥 蕥蕥蕥蕥藡研究报告 蕥蕥蕥蕥藡 蕥藡 急性肺损伤大鼠呼吸膜粤匝孕员和粤匝孕缘的表达 岳摇胜袁朱摇平袁岳摇磊袁乔国华 渊郑州大学附属洛阳中心医院急诊科袁河南洛阳摇源苑员园园园冤 摇摇揖摘要铱摇目的摇确定水通道蛋白粤匝孕员及粤匝孕缘是否在大鼠肺泡毛细血管膜渊呼吸膜冤表达袁进而研究急性肺损伤渊粤蕴陨冤大鼠粤匝孕员和粤匝孕缘的表达调节及激素干预的作用遥方法摇采用亲和的抗人粤匝孕员和粤匝孕缘抗体袁应用免疫组化及免疫电镜的方法研究粤匝孕员及粤匝孕缘在呼吸膜的分布遥选用肺泡内灌注脂多糖渊蕴孕杂冤制作大鼠粤蕴陨动物模型袁研究粤蕴陨时呼吸膜粤匝孕员及粤匝孕缘的变化遥结果摇免疫染色显示粤匝孕员主要表达于正常肺组织的微血管内皮袁而粤匝孕缘主要表达于肺泡陨型上皮细胞遥免疫组化分析进一步表明蕴孕杂灌注后源澡耀源愿澡粤匝孕员及粤匝孕缘在呼吸膜的表达均下降曰粤匝孕员蛋白于蕴孕杂灌注后圆源澡及激素干预后有部分恢复渊孕约园郾园缘冤袁而粤匝孕缘无这种恢复现象遥结论摇粤蕴陨时粤匝孕员及粤匝孕缘在呼吸膜的表达减少袁提示粤蕴陨时粤匝孕员和粤匝孕缘的下降表达可能与其液体转运的异常有关遥揖关键词铱摇水通道蛋白员袁水通道蛋白缘袁急性肺损伤袁激素揖中图分类号铱砸鄄猿猿摇摇揖文献标识码铱粤摇摇揖文章编号铱员远苑员鄄苑愿缘远渊圆园员远冤园愿鄄园园苑园鄄园缘凿燥蚤院员园郾猿怨远怨援躁援蚤泽泽灶援员远苑员原苑愿缘远郾圆园员远郾园愿郾园员员 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣粤匝孕员葬灶凿粤匝孕缘蚤泽凿藻糟则藻葬泽藻凿蚤灶贼澡藻葬造增藻燥造葬则鄄糟葬责蚤造造葬则赠皂藻皂遭则葬灶藻蚤灶则葬贼泽憎蚤贼澡葬糟怎贼藻造怎灶早蚤灶躁怎则赠 再哉耘杂澡藻灶早袁在匀哉孕蚤灶早袁再哉耘蕴藻蚤袁匝陨粤韵郧怎燥鄄澡怎葬渊阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣耘皂藻则早藻灶糟赠袁蕴怎燥赠葬灶早悦藻灶贼则葬造匀燥泽责蚤贼葬造袁贼澡藻粤枣枣蚤造蚤葬贼藻凿匀燥泽责蚤贼葬造燥枣在澡藻灶早扎澡燥怎哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁蕴怎燥赠葬灶早袁匀藻灶葬灶源苑员园园园袁悦澡蚤灶葬冤 摇摇揖粤遭泽贼则葬糟贼铱摇韵遭躁藻糟贼蚤增藻摇栽燥凿藻贼藻则皂蚤灶藻蚤枣葬择怎葬责燥则蚤灶员渊粤匝孕员冤葬灶凿葬择怎葬责燥则蚤灶缘渊粤匝孕缘冤葬则藻藻曾责则藻泽泽藻凿蚤灶贼澡藻葬造增藻燥造葬则鄄糟葬责蚤造造葬则赠皂藻皂遭则葬灶藻蚤灶则葬贼泽袁葬灶凿贼燥蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻贼澡藻糟澡葬灶早藻泽燥枣粤匝孕员葬灶凿粤匝孕缘藻曾责则藻泽泽蚤燥灶蚤灶贼澡藻则葬贼憎蚤贼澡葬糟怎贼藻造怎灶早蚤灶躁怎则赠援酝藻贼澡燥凿泽摇栽澡藻凿蚤泽贼则蚤遭怎贼蚤燥灶燥枣粤匝孕员葬灶凿粤匝孕缘蚤灶葬造增藻燥造葬则糟葬责蚤造造葬则赠皂藻皂遭则葬灶藻憎葬泽蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻凿遭赠蚤皂皂怎灶燥澡蚤泽贼燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠葬灶凿蚤皂皂怎灶燥藻造藻糟贼则燥灶皂蚤糟则燥泽糟燥责赠憎蚤贼澡葬枣枣蚤灶蚤贼赠鄄责怎则蚤枣蚤藻凿葬灶贼蚤遭燥凿蚤藻泽贼燥澡怎皂葬灶粤匝孕员葬灶凿粤匝孕缘援栽澡藻责燥泽泽蚤遭蚤造蚤贼赠贼澡葬贼葬造增藻燥造葬则糟葬责蚤造造葬则赠皂藻皂遭则葬灶藻粤匝孕员葬灶凿粤匝孕缘怎灶凿藻则早燥葬造贼藻则藻凿则藻早怎造葬贼蚤燥灶憎葬泽泽贼怎凿蚤藻凿遭赠葬则葬贼皂燥凿藻造藻泽贼葬遭造蚤泽澡藻凿怎泽蚤灶早蚤灶贼则葬鄄贼则葬糟澡藻葬造蚤灶泽贼蚤造造葬贼蚤燥灶燥枣造蚤责燥责燥造赠泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻渊蕴孕杂冤援砸藻泽怎造贼泽摇陨皂皂怎灶燥造葬遭藻造造蚤灶早泽澡燥憎藻凿贼澡葬贼粤匝孕员憎葬泽泽贼葬蚤灶藻凿责则蚤皂葬则蚤造赠蚤灶贼澡藻皂蚤糟则燥增葬泽糟怎造葬则藻灶凿燥贼澡藻造蚤怎皂燥枣灶燥则皂葬造造怎灶早泽袁憎澡蚤造藻粤匝孕缘憎葬泽藻曾责则藻泽泽藻凿蚤灶贼赠责藻陨责灶藻怎皂燥糟赠贼藻泽援陨皂皂怎灶燥澡蚤泽贼燥糟澡藻皂蚤糟葬造葬灶葬造赠泽蚤泽泽澡燥憎藻凿葬泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼凿藻糟则藻葬泽藻蚤灶贼澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣粤匝孕员葬灶凿粤匝孕缘蚤灶蚤灶躁怎则藻凿造怎灶早泽葬贼源原源愿澡葬枣贼藻则蕴孕杂蚤灶泽贼蚤造造葬贼蚤燥灶援粤匝孕员责则燥贼藻蚤灶憎葬泽则藻泽怎皂藻凿责葬则贼造赠葬贼圆源澡葬枣贼藻则蕴孕杂蚤灶泽贼蚤造造葬贼蚤燥灶葬灶凿泽贼藻则燥蚤凿葬凿皂蚤灶蚤泽贼则葬贼蚤燥灶袁憎澡藻则藻葬泽粤匝孕缘憎葬泽怎灶糟澡葬灶早藻凿援悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶泽摇栽澡藻凿藻糟则藻葬泽藻凿藻曾责则藻泽泽蚤燥灶泽燥枣粤匝孕员葬灶凿粤匝孕缘蚤灶蚤灶躁怎则藻凿造怎灶早泽泽怎早早藻泽贼贼澡葬贼遭燥贼澡燥枣贼澡藻皂皂葬赠责造葬赠葬则燥造藻蚤灶葬遭灶燥则皂葬造枣造怎蚤凿贼则葬灶泽责燥则贼葬贼蚤燥灶援揖运藻赠憎燥则凿泽铱摇粤择怎葬责燥则蚤灶员袁粤匝孕员曰粤择怎葬责燥则蚤灶缘袁粤匝孕缘曰粤糟怎贼藻造怎灶早蚤灶躁怎则赠曰云造怎蚤凿贼则葬灶泽责燥则贼葬贼蚤燥灶曰杂贼藻则燥蚤凿曰砸葬贼 摇摇临床中袁肺水肿的形成涉及肺间质和毛细血管的液体转运袁近年来关于肺组织中液体转运的分子 咱通讯作者暂岳胜渊员怨愿园原冤袁男袁主治医师袁研究方向院内毒素诱导急性肺损伤大鼠呼吸膜粤匝孕员及粤匝孕缘表达的实验研究遥

74 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 苑员 机制的研究显示袁水通道蛋白渊葬择怎葬责燥则蚤灶泽袁粤匝孕泽冤是一组在哺乳动物体内表达的水选择通道的分子家族袁它们可以增强浆膜面水通透力的功能袁因而可咱员袁圆暂以提供快速液体转运的通路遥在一些病理条件下袁其可影响和破坏肺组织流体的运输袁造成充血性心力衰竭尧呼吸窘迫综合征尧肺水肿损伤等遥目前袁涉及到水通道蛋白调节急性肺损伤渊葬糟怎贼藻造怎灶早蚤灶躁怎则赠袁粤蕴陨冤的研究还很少遥本研究探讨了水通道蛋白家族成员粤匝孕员和粤匝孕缘在大鼠肺泡毛细血管膜的表达袁并研究内毒素渊蕴孕杂冤诱导的急性肺损伤渊粤蕴陨冤大鼠模型中粤匝孕员和粤匝孕缘的表达调节及激素干预的作用遥 员摇 材料和方法摇 员郾员摇动物雄性杂阅大鼠共源缘只袁均购自上海交通大学动物实验中心渊杂悦载运渊沪冤圆园员猿原园园员猿冤袁体质量渊圆猿园依员缘冤早袁所有大鼠均在郑州大学附属洛阳中心医院动物实验室渊杂再载运渊豫冤圆园员员原园园苑远冤的清洁环境下饲养观察袁普通饲料适应性喂养员周后使用遥员郾圆摇试剂和仪器山羊抗人粤匝孕员多克隆抗体袁大鼠抗人粤匝孕缘单克隆抗体袁小鼠抗人茁原葬糟贼蚤灶单克隆抗体购自美国杂蚤早皂葬公司袁免疫组化杂鄄孕试剂盒袁阅粤月显色试剂盒均购自北京中杉生物技术公司遥砸孕酝陨酝藻凿蚤怎皂员远源园培养基袁宰藻泽贼藻则灶鄄遭造燥贼转印仪袁蛋白电泳仪购自 美国月蚤燥鄄砸葬凿公司遥另备圆源孔板尧韵酝耘酝培养液尧阅酝杂韵尧酶标仪尧漩涡振荡器尧移液枪等遥员郾猿摇急性肺损伤动物模型的制备将杂阅大鼠随机分为猿组袁即晕杂组渊对照组冤渊灶越员园冤袁脂多糖渊蕴孕杂冤组渊灶越圆园冤和激素组渊灶越员缘冤遥将猿组大鼠均用七氟烷麻醉袁暴露气管袁将晕杂对照组渊灶越员园冤按园郾缘皂蕴辕噪早晕杂灌注大鼠气管袁员圆澡后观察其生命体征和肺组织变化遥将蕴孕杂渊耘援糟燥造蚤泽藻则燥贼赠责藻园缘缘院月缘蕴孕杂袁杂蚤早皂葬袁哉杂粤冤按圆园园滋早辕噪早溶于无菌晕杂袁使用圆缘号针头予大鼠园郾缘皂蕴辕噪早气管注射袁观察气管注射蕴孕杂后源澡尧员圆澡尧圆源澡和源愿澡等不同阶段渊灶越缘冤的大鼠肺组织变化袁激素组大鼠给予园郾缘皂蕴辕噪早蕴孕杂渊圆园园滋早辕噪早冤气管内注射袁并同时给予甲基强的松龙渊猿园皂早辕噪早冤尾静脉注射遥观察注射后源澡尧员圆澡尧圆源澡等不同阶段渊灶越缘冤的大鼠肺组织变化遥员郾源摇样本检测 将大鼠腹腔注射戊巴比妥钠渊缘园皂早辕噪早冤袁颈动脉插管监测血压遥将大鼠放血处死袁暴露肺组织和气管遥采用圆郾缘皂蕴的猿苑益无菌无热原的磷酸盐缓冲溶液渊孕月杂冤进行经右主气管进行灌洗肺组织袁共计怨次遥丢弃第员次的灌洗液袁将其他愿个圆郾缘皂蕴灌洗液馏分回收和汇总遥使用标准法计算其总细胞数遥将细胞固定并行匀耘染色遥将月粤蕴在员园园园则辕皂蚤灶离心员园皂蚤灶袁并收集遥月粤蕴中的白蛋白浓缩缘倍并用溴甲酚绿法测定遥右下肺部分用源豫多聚甲醛固定袁石蜡包埋袁每个肺切片常规用苏木精染色处理袁光镜下观察遥对大鼠左上肺行免疫组化研究袁通过电子显微镜和免疫电子显微镜检查袁左肺的其余部分进行称量袁获得肺湿重袁然后将其放置于远园益温箱内干燥脱水缘凿遥待其重量不再变化时称其干重遥员郾缘摇免疫组织化学和免疫电镜观察粤匝孕员和粤匝孕缘在肺组织中的表达院渊员冤免疫组化染色院按试剂盒说明书操作遥抗粤匝孕陨抗体浓度员颐员园园园袁抗粤匝孕缘抗体浓度员颐员园园园遥图像分析测粤匝孕员和粤匝孕缘阳性染色的平均吸光度渊粤冤遥渊圆冤免疫电镜染色院扰粤韵孕缘抗体浓度员颐员园园园遥渊猿冤肺组织胞膜蛋白粤韵孕员及粤匝孕缘分析院免疫印迹法一抗渊抗粤匝孕员抗体员颐员园园园院抗粤匝孕缘抗体袁员颐缘园园冤袁源益过夜孵育袁二抗渊碱性磷酸酶标记袁员颐圆园园园冤孵育后显色遥阳性显色为棕黄色袁经哉灾孕扫描仪扫描成像袁计算曲线下面积的粤值遥员郾远摇免疫组化染色结果判定粤匝孕员和粤匝孕缘在肺组织中的表达强度依阳性细胞数分为四级院渊员冤阴性渊原冤院阳性细胞数约缘豫曰渊圆冤弱阳性渊垣冤院阳性细胞数缘豫耀圆园豫曰渊猿冤阳性渊垣垣冤院阳性细胞数圆园豫耀远园豫曰渊源冤强阳性渊垣垣垣冤院阳性细胞数跃远园豫遥员郾苑摇宰藻泽贼藻则灶鄄遭造燥贼检测各组肺组织中粤匝孕员和粤匝孕缘蛋白含量各组肺组织块称重袁加入蛋白裂解液以及孕酝杂云渊缘园滋蕴孕酝杂云垣猿皂蕴蛋白裂解液冤袁用匀浆器研磨组织曰源益裂解猿园皂蚤灶袁置入源益恒温离心机袁以离心半径员园糟皂尧员圆园园园则辕皂蚤灶离心员缘皂蚤灶遥收集上清液袁月悦粤试剂盒检测蛋白浓度遥将样品蛋白愿滋早在缘豫耀员苑豫十二烷基硫酸钠鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳后袁转孕灾阅云膜袁孕月杂液加园郾园缘豫栽憎藻藻灶鄄圆园渊孕月杂鄄栽冤洗涤袁圆豫脱脂奶粉室温封闭圆澡曰再用

75 苑圆中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 孕月杂鄄栽洗膜袁加粤匝孕员和粤匝孕缘一抗袁源益孵育过夜袁孕月杂鄄栽洗涤袁二抗渊羊抗兔辕鼠陨早郧冤室温孵育圆澡袁孕月杂鄄栽洗膜袁用耘悦蕴方法在暗室显影袁载线片曝光遥采用陨皂葬早藻孕则燥孕造怎泽图像分析软件分析结果遥员郾愿摇统计学方法应用杂孕杂杂员愿郾园软件院计数资料采用贼检验袁计量资料采用方差分析袁孕约园郾园缘差异有统计学意义遥圆摇结果圆郾员摇肺损伤的严重程度猿组中所有大鼠均存活遥蕴孕杂组大鼠呼吸正常袁和晕杂对照组大鼠的平均动脉压怨缘依圆郾远皂皂匀早比较袁蕴孕杂组大鼠的平均动脉压明显降低袁源澡和员圆澡的平均动脉压分别为远愿依远郾远皂皂匀早和苑员依远郾愿皂皂匀早袁其差异具有统计学意义渊孕约园郾园缘冤遥圆源澡和源愿澡大鼠的平均动脉压分别为愿猿依员园郾源皂皂匀早和愿苑依苑郾怨皂皂匀早袁虽有部分恢复袁但和晕杂对照组大鼠相比袁差异仍具有统计学意义渊孕约园郾园缘冤遥蕴孕杂灌注后袁大鼠的肺湿干重比在显著增加源澡和员圆澡时显著增加袁分别为远郾苑猿依园郾远愿和远郾缘园依园郾缘怨袁和晕杂对照组大鼠渊源郾源愿依园郾猿苑冤比较袁差异具有统计学意义渊孕约园郾园缘冤遥和晕杂对照组大鼠渊源郾源愿依园郾猿苑冤比较袁蕴孕杂组大鼠圆源澡和源愿澡时肺湿干重比的差异无统计学意义渊孕跃园郾园缘冤遥圆郾圆摇蕴孕杂组的组织学检查组织学检查显示袁蕴孕杂注入大鼠气管后袁源澡和员圆澡后袁大鼠肺间质水肿袁肺组织明显中性粒细胞浸润遥电镜显示大鼠肺组织玉型肺泡上皮肿胀袁细胞膜突出像是肺泡腔空间的泡沫袁同时袁域型细胞绒毛干枯脱落遥在圆源澡和源愿澡后袁在肺组织中检测 到类似的组织学变化袁在脂多糖灌注后袁肺间质水肿缓解遥电镜观察肺泡毛细管膜尚连续袁但厚度不均匀遥圆郾猿摇粤匝孕员和粤匝孕缘在正常肺组织细胞中的分布在晕杂对照组袁免疫标记法显示粤匝孕员主要分布在肺组织微血管的内皮细胞膜袁以及少部分分布在肺上皮细胞膜渊图员冤遥检测显示粤匝孕缘主要表达在陨型肺泡膜上表达渊图圆冤袁但不在陨陨型肺泡上皮细胞尧血管内皮细胞和间质细胞内分布遥免疫电镜显示粤匝孕员在微血管内皮细胞的顶端和基底膜上袁而粤匝孕缘主要存在于陨型肺泡上皮细胞的顶膜渊图猿冤遥圆郾源摇不同组间粤匝孕员和粤匝孕缘的表达气管内灌注蕴孕杂源澡耀源愿澡后袁免疫组化分析大鼠肺组织中粤匝孕员和粤匝孕缘的表达遥与晕杂对照组比较袁蕴孕杂组粤匝孕员和粤匝孕缘在细胞中表达的位置和特异性染色的细胞类型不变遥但是袁和晕杂对照组比较袁蕴孕杂组各个阶段的粤匝孕员表达均降低渊图员和源冤遥与源澡耀员圆澡阶段的蕴孕杂组大鼠相比袁圆源澡耀源愿澡后袁蕴孕杂组大鼠的粤匝孕员表达部分恢复渊表员冤遥另一方面袁蕴孕杂组大鼠肺组织粤匝孕缘表达源澡耀源愿澡各个阶段均有所降低袁圆源澡耀源愿澡后也没有任何的恢复渊图缘冤遥此外袁结果显示袁和蕴孕杂组相比袁激素组大鼠在气管内灌注蕴孕杂联合甲基强的松龙的注射源澡耀员圆澡后袁大鼠肺组织微血管内皮细胞粤匝孕员的表达增强袁差异有统计学意义渊孕约园郾园缘冤袁但玉型肺泡细胞中粤匝孕缘的表达则不受甲基强的松龙的影响渊表员冤遥此外袁激素组大鼠在注射甲基强的松龙源澡耀员圆澡后袁月粤蕴液中白蛋白浓度和孕酝晕豫显著下降袁证明激素组肺泡毛细血管膜通透性部分恢复遥 栽葬遭援员摇 组别 表员摇 原蕴孕杂组各阶段月粤蕴云中孕酝晕豫和肺组织中粤匝孕员和粤匝孕缘含量渊曾依泽冤 原悦燥灶贼藻灶贼燥枣粤匝孕缘葬灶凿粤匝孕员蚤灶贼澡藻造怎灶早贼蚤泽泽怎藻葬灶凿孕酝晕豫燥枣月粤蕴云燥枣贼澡藻蕴孕杂早则燥怎责葬贼藻葬糟澡泽贼葬早藻渊曾依泽冤 支气管肺泡灌洗液中的清蛋白含量 支气管肺泡灌洗液中中性粒细胞比例 水通道蛋白粤匝孕员灰度值 水通道蛋白粤匝孕缘灰度值 郧则燥怎责泽 粤造遭怎皂蚤灶蚤灶月粤蕴云 孕酝晕豫蚤灶月粤蕴云 粤匝孕员早则葬赠泽糟葬造藻渊粤冤 粤匝孕缘早则葬赠泽糟葬造藻渊粤冤 晕杂对照组渊晕杂糟燥灶贼则燥造早则燥怎责冤 园郾员缘依园郾园猿 苑郾猿依圆郾猿 猿猿郾缘依缘郾猿 圆源郾远依猿郾远鄢 蕴孕杂源澡 鄢园郾缘源依园郾员远 鄢愿怨郾远依苑郾猿 圆园郾愿依猿郾源鄢 圆园郾怨依圆郾缘 员圆澡 鄢园郾缘怨依园郾员缘 鄢愿苑郾怨依远郾怨 圆员郾源依猿郾远鄢 圆园郾源依猿郾愿 圆源澡 裕园郾猿苑依园郾员圆 鄢愿愿郾猿依员园郾苑 裕圆远郾苑依源郾猿 员愿郾猿依员郾怨 源愿澡 裕园郾猿员依园郾员员 裕远源郾圆依愿郾圆 裕圆苑郾远依缘郾员 员愿郾源依圆郾苑 激素组源澡 裕园郾猿圆依园郾员园 裕远园郾缘依苑郾苑 裕圆远郾怨依源郾苑 圆员郾员依圆郾远 渊匀燥则皂燥灶藻早则燥怎责冤员圆澡 裕园郾圆苑依园郾园远 裕远圆郾源依远郾愿 裕圆远郾愿依源郾愿 圆园郾苑依源郾猿 圆源澡 裕园郾圆愿依园郾园苑 裕缘怨郾猿依苑郾圆 裕圆苑郾缘依源郾怨 员愿郾圆依圆郾怨 鄢裕注院孕约园郾园缘袁增泽援晕杂对照组曰孕约园郾园缘袁增泽援蕴孕杂源澡耀员圆澡组援鄢裕晕燥贼藻院孕约园郾园缘袁增泽援贼澡藻晕杂糟燥灶贼则燥造早则燥怎责曰孕约园郾园缘袁增泽援贼澡藻蕴孕杂源原员圆澡早则燥怎责泽援

76 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 苑猿 图员摇晕杂组粤匝孕员主要在肺组织微血管内皮细胞中表达渊箭头示袁杂粤月悦袁伊源园冤云蚤早援员摇栽澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣粤匝孕员蚤灶晕杂早则燥怎责憎葬泽皂葬蚤灶造赠藻曾责则藻泽泽藻凿蚤灶皂蚤糟则燥增葬泽糟怎造葬则藻灶凿燥贼澡藻造蚤葬造糟藻造造泽蚤灶贼澡藻造怎灶早贼蚤泽泽怎藻援粤则则燥憎澡藻葬凿蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽杂粤月悦援伊源园 图圆摇免疫组织化学染色显示粤匝孕缘在玉型肺泡细胞内表达渊箭头示杂粤月悦袁伊员园园冤云蚤早援圆摇陨皂皂怎灶燥澡蚤泽贼燥糟澡藻皂蚤糟葬造泽贼葬蚤灶蚤灶早泽澡燥憎泽贼澡葬贼粤匝孕缘蚤泽藻曾责则藻泽泽藻凿蚤灶贼赠责藻陨葬造增藻燥造葬则糟藻造造泽援粤则则燥憎澡藻葬凿蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽杂粤月悦援伊员园园 图猿摇免疫电镜显示袁陨型肺泡上皮细胞顶膜型中表达粤匝孕缘遥渊箭头示袁杂粤月悦袁标尺越圆园滋皂冤云蚤早援猿摇粤匝孕缘蚤泽藻曾责则藻泽泽藻凿蚤灶贼澡藻葬责蚤糟葬造皂藻皂遭则葬灶藻燥枣贼赠责藻陨葬造增藻燥造葬则藻责蚤贼澡藻造蚤葬造糟藻造造泽袁泽澡燥憎灶遭赠蚤皂皂怎灶燥藻造藻糟贼则燥灶皂蚤糟则燥泽糟燥责赠援粤则则燥憎澡藻葬凿蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽杂粤月悦援月葬则越圆园滋皂图缘摇免疫组化显示院气管内灌注蕴孕杂员圆澡后袁陨型肺泡细胞粤匝孕缘表达降低遥渊箭头示袁杂粤月悦袁伊源园冤云蚤早援缘摇陨皂皂怎灶燥澡蚤泽贼燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠泽澡燥憎泽贼澡葬贼贼澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣粤匝孕缘蚤灶贼赠责藻陨葬造增藻燥造葬则糟藻造造泽蚤泽凿藻糟则藻葬泽藻凿葬贼员圆澡葬枣贼藻则蕴孕杂责藻则枣怎泽蚤燥灶蕴孕杂援粤则则燥憎澡藻葬凿蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽杂粤月悦援伊源园冤 图源摇免疫组织化学显示院气管内灌注蕴孕杂源澡后袁肺组织微血管内皮细胞的粤匝孕员表达显著降低遥渊箭头示袁杂粤月悦袁伊源园冤云蚤早援源摇陨皂皂怎灶燥澡蚤泽贼燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠泽澡燥憎泽贼澡葬贼贼澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣粤匝孕员蚤灶皂蚤糟则燥增葬泽糟怎造葬则藻灶凿燥贼澡藻造蚤葬造糟藻造造泽燥枣造怎灶早贼蚤泽泽怎藻憎葬泽泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠凿藻糟则藻葬泽藻凿葬贼源澡燥怎则泽葬枣贼藻则蕴孕杂责藻则枣怎泽蚤燥灶援粤则则燥憎澡藻葬凿蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽杂粤月悦援伊源园圆郾缘摇宰藻泽贼藻则灶鄄遭造燥贼检测各组大鼠肺组织粤匝孕造和粤匝孕缘蛋白表达蕴孕杂组大鼠经蕴孕杂灌注后源澡袁粤匝孕员蛋白量减少至晕杂对照组的渊源缘郾圆依源郾源冤豫渊孕约园郾园缘冤遥粤匝孕缘降至晕杂对照组的渊远愿郾远依愿郾怨冤豫渊孕约园郾园缘袁灶越缘冤曰圆源澡后粤匝孕陨蛋白量降至晕杂对照组的渊远猿郾源依缘郾怨冤豫袁粤匝孕缘降至晕杂对照组的渊远员郾源依源郾远冤豫袁差异均具有统计学意义渊孕约园郾园缘冤遥 猿摇 讨论 咱猿暂水通道蛋白渊葬择怎葬责燥则蚤灶泽袁粤匝孕泽冤是一种存在生物膜上的分子量为圆愿园园园的具有通透水分功能的内在蛋白遥水通道蛋白通过减小水越膜运动的阻力而使细胞间水分迁移的速率加快遥水通道蛋白

77 苑源中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 的嵌入使生物膜对水的通透能力大大提高袁因此可以通过改变水孔蛋白的活性和调节水孔蛋白在膜咱源暂上的丰度两种途径来调节膜对水的通透能力遥目前在人类细胞中已发现的粤匝孕至少有员圆种袁均具有选择性的让水分子通过的特性遥在动物中如肾脏尧眼尧脑中都存在粤匝孕遥而在肺组织中有远种粤匝孕表达袁其中粤匝孕造主要分布在肺毛细血管内皮细胞袁粤匝孕缘主要分布在肺泡陨型细胞的顶膜面袁这种分布表明粤匝孕陨尧粤匝孕缘与肺水的形成和吸收过程咱缘暂密切相关遥咱远暂栽燥憎灶藻等采用免疫组织化学和免疫荧光染色法测银屑患者的皮肤组织中粤匝孕缘的表达袁发现不同于正常表皮袁粤匝孕缘在银屑病皮损和皮损周围的表皮中表达下降遥使用栽藻憎葬皂藻贼藻则砸栽酝圆员园和悦燥则灶藻燥皂藻贼藻则砸悦酝愿圆园检测银屑病患者皮损及周围的结果显示院栽耘宰蕴增加尧水合作用下降遥研究者们认为袁粤匝孕缘的表达是引起银屑病患者皮损部位的咱苑暂干燥的一个关键因素遥晕葬噪葬噪燥泽澡蚤酝等发现袁皮肤鳞状细胞癌强表达粤匝孕缘蛋白袁以及创伤愈合过程中粤匝孕缘对角质形成细胞起作用等现象袁推进了深入研究粤匝孕缘参与了皮肤肿瘤的过程遥研究发现袁暴露于肿瘤诱导剂袁粤匝孕缘基因敲除鼠未出现皮肤肿瘤袁而野生型小鼠则出现多种肿瘤曰皮肤乳头瘤状细胞强表达粤匝孕缘袁并与增殖标记物运员源共定位袁这一点与皮肤鳞癌类似遥在皮肤肿瘤的发生过程中袁粤匝孕缘基因敲除小鼠对肿瘤诱导剂导致的皮肤咱愿暂肿瘤有明显的抵抗性遥研究显示袁粤匝孕员主要表达于肺泡周围的毛细咱怨暂血管内皮细胞遥本实验结果显示袁在晕杂对照组袁免疫标记法显示粤匝孕员主要分布在肺组织微血管的内皮细胞膜袁以及少部分分布在肺上皮细胞膜遥检测显示粤匝孕缘主要表达在陨型肺泡膜上表达袁但不在陨陨型肺泡上皮细胞尧血管内皮细胞和间质细胞内分布遥免疫电镜显示粤匝孕员在微血管内皮细胞的顶端和基底膜上袁而粤匝孕缘主要存在于陨型肺泡上皮细胞的顶膜遥粤匝孕陨尧粤匝孕缘在呼吸膜不同的表达位咱员园暂置袁推测其可能具有不同的生理功能遥在本研究中袁组织学检查显示袁蕴孕杂注入大鼠气管后袁源澡和员圆澡后袁大鼠肺间质水肿袁肺组织明显中性粒细胞浸润遥电镜显示大鼠肺组织陨型肺泡上皮肿胀袁细胞膜突出像是肺泡腔空间的泡沫袁同时袁陨陨型细胞绒毛干枯脱落遥在圆源澡和源愿澡后袁在肺组织中检测到类似的组织学变化袁在脂多糖灌注后袁 肺间质水肿缓解遥电镜观察肺泡毛细管膜尚连续袁但厚度不均匀遥气管内灌注蕴孕杂源澡耀源愿澡后袁免疫组化分析大鼠肺组织中粤匝孕员和粤匝孕缘的表达遥与晕杂对照组比较袁蕴孕杂组粤匝孕员和粤匝孕缘在细胞中表达的位置和特异性染色的细胞类型不变遥但是袁和晕杂对照组比较袁蕴孕杂组各个阶段的粤匝孕员表达均降低遥与源澡耀员圆澡阶段的蕴孕杂组大鼠相比袁圆源澡耀源愿澡后袁蕴孕杂组大鼠的粤匝孕员表达部分恢复遥另一方面袁蕴孕杂组大鼠肺组织粤匝孕缘表达源澡耀源愿澡各个阶段均有所降低袁圆源澡耀源愿澡后也没有任何的恢复遥此外袁结果显示袁和蕴孕杂组相比袁激素组大鼠在气管内灌注蕴孕杂联合甲基强的松龙的注射源澡耀员圆澡后袁大鼠肺组织微血管内皮细胞粤匝孕员的表达增强袁差异有统计学意义渊孕约园郾园缘冤袁但玉型肺泡细胞中粤匝孕缘的表达则不受甲基强的松龙的影响渊表员冤遥此外袁激素组大鼠在注射甲基强的松龙源澡耀员圆澡后袁月粤蕴液中白蛋白浓度和孕酝晕豫显著下降袁证明激素组肺泡毛细血管膜通透性部分恢复遥综上所述袁粤匝孕员和粤匝孕缘虽然均是粤匝孕的家族成员袁但两者在结构及功能上均有较明显的差异袁根据本研究的结果袁我们推测它们在完成液体转运的过程中可能通过不同的刺激方式发挥不同的作用遥参考文献院 咱员暂摇粤则早藻孕袁孕则藻泽贼燥灶郧酝袁杂皂蚤贼澡月蕴袁藻贼葬造援粤择怎葬责燥则蚤灶悦匀陨孕院贼澡藻葬则糟澡藻贼赠责葬造皂燥造藻糟怎造葬则憎葬贼藻则糟澡葬灶灶藻造咱允暂援粤皂允孕澡赠泽蚤燥造袁员怨怨猿袁圆缘远院云源远猿原云源远苑援咱圆暂摇月燥则早灶蚤葬酝袁晕蚤藻造泽藻灶杂袁耘灶早藻造粤袁藻贼葬造援悦藻造造怎造葬则葬灶凿皂燥造藻糟怎造葬则遭蚤燥造燥早赠燥枣贼澡藻粤择怎葬责燥则蚤灶憎葬贼藻则糟澡葬灶灶藻造援咱允暂粤灶灶怎砸藻增月蚤燥糟澡藻皂袁员怨怨怨袁远愿院源圆缘原源缘愿援咱猿暂摇杨国栋袁姚新民援莨菪类药治疗急性肺损伤的探索和药理学基础咱允暂援中国急救医学袁圆园园源袁源渊源冤院源愿原缘愿援咱源暂摇张惟才袁韩聪译援蛋白质的杂阅杂圆聚丙烯酰胺凝胶电泳咱酝暂援黄培堂袁主译援分子克隆实验指南渊第猿版冤援北京院科学出版社袁圆园园猿院员苑员猿原员苑圆远援咱缘暂摇运蚤灶早蕴杂袁晕蚤藻造泽藻灶杂袁粤早则藻孕援粤择怎葬责燥则蚤灶泽蚤灶糟燥皂责造藻曾贼蚤泽泽怎藻泽援陨援阅藻增藻造燥责皂藻灶贼葬造责葬贼贼藻则灶泽蚤灶则藻泽责蚤则葬贼燥则赠葬灶凿早造葬灶凿怎造葬则贼蚤泽泽怎藻泽燥枣则葬贼咱允暂援粤皂允孕澡赠泽蚤燥造袁员怨怨苑袁圆苑猿渊缘责贼员冤院悦员缘源员原悦员缘源愿援咱远暂摇栽燥憎灶藻允耘袁匀葬则则燥凿运杂袁运则葬灶藻悦酝袁藻贼葬造援阅藻糟则藻葬泽藻凿藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣粤匝孕员葬灶凿粤匝孕缘蚤灶皂燥怎泽藻造怎灶早葬枣贼藻则葬糟怎贼藻增蚤则葬造蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶咱允暂援粤皂允砸藻泽责蚤则悦藻造造酝燥造月蚤燥造袁圆园园园袁圆圆院猿源原源源援咱苑暂摇酝葬栽袁云怎噪怎凿葬晕袁杂燥灶早再袁藻贼葬造援砸燥造藻燥枣粤匝孕缘蚤灶造怎灶早枣造怎蚤凿贼则葬灶泽责燥则贼咱允暂援允悦造蚤灶陨灶增藻泽贼圆园园园院员园缘院怨猿原员园园援咱愿暂摇砸怎贼泽糟澡皂葬灶阅匀袁韵造蚤增藻则葬宰袁杂扎灶葬躁凿藻则允陨援粤糟贼蚤增藻贼则葬灶泽责燥则贼葬灶凿责葬泽泽蚤增藻造蚤择怎蚤凿皂燥增藻皂藻灶贼蚤灶蚤泽燥造葬贼藻凿责藻则枣怎泽藻凿则葬贼造怎灶早泽咱允暂援允 粤责责造孕澡赠泽蚤燥造袁员怨怨猿袁苑缘院员缘苑源原员缘愿园援 渊下转第怨园页冤

78 圆园员远年愿月第圆远卷摇第愿期 中国比较医学杂志悦匀陨晕耘杂耘允韵哉砸晕粤蕴韵云悦韵酝孕粤砸粤栽陨灾耘酝耘阅陨悦陨晕耘 粤怎早怎泽贼袁圆园员远灾燥造援圆远摇晕燥援愿 藡 蕥 蕥蕥蕥蕥藡研究报告 蕥蕥蕥蕥藡 蕥藡 匀则基因敲除小鼠模型的构建和表型分析 员袁圆员圆圆圆朱奎成袁徐存拴袁陈莹莹袁王纯耀袁章金涛 渊员援河南师范大学生命科学学院袁新乡摇源缘猿园园苑曰圆援郑州大学实验动物中心袁郑州摇源缘园园缘圆冤 摇摇揖摘要铱摇目的摇建立基因敲除小鼠以深入研究无毛基因渊澡葬蚤则造藻泽泽袁匀则冤的功能遥方法摇利用类转录激活因子效应因子核酸酶渊贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶葬糟贼蚤增葬贼燥则鄄造蚤噪藻藻枣枣藻糟贼燥则灶怎糟造藻葬泽藻泽袁栽粤蕴耘晕泽冤技术袁制备匀则基因敲除小鼠袁观察基因敲除小鼠毛发生长发育规律袁并取部分皮肤组织石蜡切片袁显微镜下分析结果遥结果摇获得一个在匀则基因编码区愿远耀愿苑位有圆个碱基缺失的首建鼠袁产生了栽郧粤终止密码子遥通过与野生型鼠杂交获得阳性子代袁进行同窝交配袁传至第圆代小鼠员源凿开始脱发袁猿园凿左右毛发脱净袁并终身保持无毛遥皮肤组织学观察发现真皮内形成大小不等的包囊遥研究结果表明成功建立的匀则基因敲除小鼠表现出毛发生长异常遥结论摇证明了无毛基因与毛发生长发育的密切关系袁为研究匀则基因的精确功能提供了良好的动物模型遥揖关键词铱摇无毛基因曰基因敲除曰小鼠曰表型揖中图分类号铱砸鄄猿猿摇摇揖文献标识码铱粤摇摇揖文章编号铱员远苑员鄄苑愿缘远渊圆园员远冤园愿鄄园园苑缘鄄园源凿燥蚤院员园郾猿怨远怨援躁援蚤泽泽灶援员远苑员原苑愿缘远郾圆园员远郾园愿郾园员圆 悦燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶燥枣葬匀则皂怎贼葬灶贼噪灶燥糟噪燥怎贼皂燥怎泽藻皂燥凿藻造葬灶凿责澡藻灶燥贼赠责蚤糟葬灶葬造赠泽蚤泽 员袁圆袁员圆在匀哉运怎蚤鄄糟澡藻灶早袁载哉悦怎灶鄄泽澡怎葬灶袁宰粤晕郧悦澡怎灶鄄赠葬燥袁圆圆悦匀耘晕再蚤灶早鄄赠蚤灶早袁在匀粤晕郧允蚤灶早鄄贼葬燥渊员援悦燥造造藻早藻燥枣蕴蚤枣藻杂糟蚤藻灶糟藻袁匀藻灶葬灶晕燥则皂葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁载蚤灶曾蚤葬灶早源缘猿园园苑袁悦澡蚤灶葬曰圆援蕴葬遭燥则葬贼燥则赠粤灶蚤皂葬造悦藻灶贼藻则燥枣在澡藻灶早扎澡燥怎哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁在澡藻灶早扎澡燥怎源缘园园缘圆冤 摇摇揖粤遭泽贼则葬糟贼铱摇韵遭躁藻糟贼蚤增藻摇栽燥藻泽贼葬遭造蚤泽澡葬匀则皂怎贼葬灶贼噪灶燥糟噪燥怎贼皂燥怎泽藻皂燥凿藻造贼燥泽贼怎凿赠贼澡藻枣怎灶糟贼蚤燥灶燥枣匀则早藻灶藻援酝藻贼澡燥凿泽摇栽则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶葬糟贼蚤增葬贼燥则鄄造蚤噪藻藻枣枣藻糟贼燥则灶怎糟造藻葬泽藻泽渊栽粤蕴耘晕泽冤贼藻糟澡灶蚤择怎藻憎葬泽怎泽藻凿贼燥凿蚤泽则怎责贼贼澡藻皂燥怎泽藻匀则造燥糟怎泽袁糟则藻葬贼蚤灶早澡藻则蚤贼葬遭造藻皂怎贼葬贼蚤燥灶泽贼澡葬贼藻造蚤皂蚤灶葬贼藻匀则枣怎灶糟贼蚤燥灶贼燥藻曾责造燥则藻贼澡藻藻枣枣藻糟贼泽燥枣匀则燥灶澡葬蚤则凿藻增藻造燥责皂藻灶贼葬灶凿责则燥增蚤凿藻葬早燥燥凿皂燥凿藻造贼燥原辕原泽贼怎凿赠贼澡藻枣怎灶糟贼蚤燥灶燥枣匀则早藻灶藻援栽澡藻责澡藻灶燥贼赠责藻燥枣匀则皂蚤糟藻憎葬泽燥遭泽藻则增藻凿葬枣贼藻则遭蚤则贼澡葬灶凿泽噪蚤灶澡蚤泽贼燥造燥早赠燥枣贼澡藻贼则葬灶泽早藻灶蚤糟皂蚤糟藻憎葬泽泽贼怎凿蚤藻凿遭赠造蚤早澡贼皂蚤糟则燥泽糟燥责赠援砸藻泽怎造贼泽摇陨贼憎葬泽泽澡燥憎灶贼澡葬贼葬云园皂燥怎泽藻憎蚤贼澡贼澡藻圆原遭责凿藻造藻贼蚤燥灶蚤灶匀则早藻灶藻则葬灶早蚤灶早枣则燥皂愿远贼燥愿苑遭葬泽藻责葬蚤则泽憎葬泽燥遭贼葬蚤灶藻凿援栽澡藻皂葬造藻皂蚤糟藻憎蚤贼澡糟造藻葬则凿藻造藻贼蚤燥灶燥枣贼澡藻匀则枣则葬早皂藻灶贼葬灶凿憎蚤贼澡燥遭增蚤燥怎泽枣则葬皂藻泽澡蚤枣贼蚤灶早憎藻则藻皂葬贼藻凿憎蚤贼澡憎蚤造凿鄄贼赠责藻枣藻皂葬造藻皂蚤糟藻袁葬灶凿云员皂蚤糟藻憎藻则藻葬糟澡蚤藻增藻凿援栽澡藻澡藻贼藻则燥扎赠早燥怎泽皂葬造藻泽皂葬贼藻凿憎蚤贼澡枣藻皂葬造藻泽贼燥早藻灶藻则葬贼藻原辕原贼澡藻云圆澡燥皂燥扎赠早燥怎泽皂蚤糟藻援栽澡藻枣蚤则泽贼澡葬蚤则糟燥葬贼燥枣匀则皂蚤糟藻凿藻增藻造燥责藻凿灶燥则皂葬造造赠援月藻早蚤灶灶蚤灶早枣则燥皂员源凿葬赠泽葬枣贼藻则遭蚤则贼澡袁澡燥憎藻增藻则袁贼澡藻则藻憎葬泽葬则葬责蚤凿澡葬蚤则造燥泽泽援栽澡藻皂蚤糟藻泽憎藻则藻糟燥皂责造藻贼藻造赠澡葬蚤则造藻泽泽藻曾糟藻责贼枣燥则葬枣藻憎增蚤遭则蚤泽泽葬藻葬贼猿园凿葬赠泽援匀蚤泽贼燥造燥早蚤糟葬造造赠袁贼憎燥糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽贼则怎糟贼怎则藻泽葬责责藻葬则藻凿袁贼澡藻怎贼则蚤糟怎造怎泽葬灶凿凿藻则皂葬造糟赠泽贼援悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶泽摇栽澡藻则藻泽怎造贼泽泽怎早早藻泽贼贼澡葬贼原辕原匀则皂蚤糟藻葬则藻泽怎糟糟藻泽泽枣怎造造赠糟则藻葬贼藻凿怎泽蚤灶早栽粤蕴耘晕泽袁葬灶凿匀则蚤泽蚤皂责燥则贼葬灶贼枣燥则则藻早怎造葬贼蚤灶早澡葬蚤则凿藻增藻造燥责皂藻灶贼袁憎澡蚤糟澡糟燥怎造凿藻曾责造葬蚤灶葬贼造藻葬泽贼蚤灶责葬则贼贼澡藻澡葬蚤则造燥泽泽葬灶凿遭藻葬责责造蚤藻凿贼燥泽贼怎凿赠贼澡藻皂藻糟澡葬灶蚤泽皂燥枣澡葬蚤则早则燥憎贼澡葬灶凿凿藻增藻造燥责皂藻灶贼凿蚤泽燥则凿藻则援揖运藻赠憎燥则凿泽铱摇匀则曰运灶燥糟噪燥怎贼曰皂燥怎泽藻曰孕澡藻灶燥贼赠责藻 咱基金项目暂国家自然科学基金渊编号院猿员猿苑圆圆苑园冤遥咱作者简介暂朱奎成渊员怨苑缘原冤袁男袁在读博士袁副教授遥研究方向院动物学遥耘皂葬蚤造院噪怎蚤糟澡藻灶早员圆猿岳员圆远援糟燥皂遥咱通讯作者暂员援徐存拴渊员怨缘愿原冤袁男袁博士袁教授袁研究方向院细胞分化调控曰圆援章金涛渊员怨远愿原冤袁男袁博士袁教授袁研究方向院遗传学遥

79 苑远中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 摇摇脱发或称秃发是一种常见的人类疾病遥毛发生长和脱落的调节是一个高度复杂的过程袁受到许多基咱员暂因的调控遥寻找影响毛发生长和脱落的重量级因子袁将为阐明毛发生长周期的调控机制袁研发有效治疗脱发性疾病的药物提供新的思路和治疗手段遥无毛小鼠渊澡葬蚤则造藻泽泽皂蚤糟藻冤是一种皮肤和被毛结构发生异常变化的小鼠袁该种小鼠出生后第一次毛发生长正常袁大约在员源凿开始从头部向尾部脱毛袁正常情况下员周内被毛全部脱净袁并终生保持无毛状态袁其表型咱圆暂类似于人的丘疹性无毛症渊责葬责怎造葬则葬贼则蚤糟澡蚤葬冤袁是皮肤病及毛发生长研究的良好实验动物模型袁由于无毛小鼠的无毛表型是因为一个被定位于员源号染色体上咱猿暂的功能基因突变所致袁因此袁该基因被命名为野无毛基因冶渊澡葬蚤则造藻泽泽早藻灶藻袁匀则冤遥近十年来袁有关小鼠匀则基因等位自发突变动物的报道达员远个之多袁这些研究结果揭示了匀则基因突变与多样化表型之间的复杂关咱源原缘暂系袁成为研究毛发生长脱落机制的重要实验材料袁但进展缓慢遥作者认为袁建立遗传突变动物袁进一步分析无毛基因的精确功能和毛囊周期的调控途径有助于探明匀则基因致脱发的发病机制袁并为人的脱发尧斑秃等毛发疾病研究提供重要的新线索遥本研究利用栽粤蕴耘晕泽技术建立了匀则基因敲除的小鼠模型提供基础资料遥 员摇材料和方法 员郾员摇实验动物悦缘苑月蕴辕远允小鼠购于北京维通利华实验动物技术有限公司渊杂悦载运渊粤冤圆园员猿原园园猿圆冤遥饲养于郑州大学实验动物中心杂孕云级动物房袁许可证号院杂再载运渊豫冤圆园员远原园园园圆遥饲料购自郑州大学实验动物中心袁远园经悦燥辐照灭菌遥员郾圆摇栽粤蕴耘晕泽载体的构建和体外转录根据晕悦月陨上匀则基因序列袁利用栽粤蕴耘晕在线设计工具渊澡贼贼责院辕辕扎蚤枣蚤贼援责葬则贼灶藻则泽援燥则早辕在蚤云蚤栽辕辕悦澡燥蚤糟藻酝藻灶怎援葬泽责曾冤设计基因敲除位点遥左右靶点的识别模块经早燥造凿藻灶早葬贼藻方法组装完成后袁克隆到载体上构建成责砸孕咱栽粤蕴耘晕暂鄄匀赠早则燥鄄悦酝灾跃圆圆灶贼赃栽郧栽郧粤粤悦郧郧悦粤栽栽郧栽郧郧郧粤悦粤郧真核表达载体遥线性化后袁在栽苑启动子的作用下体外转录为皂砸晕粤注射到悦缘苑月蕴辕远允的受精卵中袁挑选注射后状态良好的受精卵袁移植到假孕母鼠的输卵管内袁待其自然生下云园代小鼠遥剪取经原核注射产生的员周龄首建鼠的鼠尾组织袁提取基因组阅晕粤袁利用引物扩增目的片段袁孕悦砸上游引物为院缘忆鄄悦栽悦粤栽郧悦栽栽栽郧栽悦悦栽栽粤悦悦悦栽悦悦 粤郧鄄猿忆袁下游引物为院缘忆鄄悦粤悦悦粤郧栽郧粤郧粤郧栽郧栽郧栽悦悦栽栽郧郧郧鄄猿忆袁对扩增出的孕悦砸产物进行测序袁与悦缘苑月蕴辕远允小鼠基因目的序列比对袁分析靶点序列缺失情况遥员郾猿摇基因敲除小鼠繁殖及表型分析显微注射获得云园代小鼠分别与野生型的悦缘苑月蕴辕远允交配袁对交配获得的云员代小鼠进行基因型鉴定袁分别建系遥将来自同一只云园的阳性云员代小鼠同胞交配袁可获得云圆代小鼠袁对云圆代小鼠进行基因型鉴定遥理论上云圆代小鼠中圆缘豫的几率为原辕原匀则纯合子小鼠遥出生后每天观察小鼠被毛及皮肤形态的变化袁详细记录遥皮肤组织学观察院动物颈椎脱臼法处死袁取背部中央皮肤袁体积分数员园豫甲醛溶液固定袁脱水袁石蜡包埋袁切片袁匀耘染色袁显微镜下观察袁拍照遥 圆摇 结果 圆郾员摇匀则敲除小鼠的构建及孕悦砸鉴定根据小鼠匀则核酸序列信息袁针对外显子设计两处相邻的靶序列进行栽粤蕴识别模块构建袁将这两个相邻靶点识别模块融合克隆到云燥噪陨的晕原末端袁形成真核表达载体袁原核注射到悦缘苑月蕴辕远允小鼠的受精卵中袁移植到假孕鼠子宫内袁共出生员猿只幼仔袁剪取苑日龄的鼠尾组织袁提取基因组阅晕粤袁孕悦砸扩增袁测序与悦缘苑月蕴辕远允小鼠基因序列比较袁其中员园裕小鼠在匀则编码区愿远耀愿苑位共圆个碱基的缺失袁产生了栽郧粤终止密码子渊图员冤遥圆郾圆摇基因敲除小鼠繁殖及表型初步分析圆郾圆郾员摇形态观察院基因敲除小鼠出生后被毛生长正常袁与有毛小鼠无法区分遥大约圆周左右袁基因敲除纯合子小鼠开始从背部开始脱毛渊图圆粤冤袁然后延伸至头颈部及尾部遥员月龄时毛发基本脱落殆尽袁仅保留极少分散毛发袁皮肤为肉色偏红袁皮肤薄袁头尧颈部有较细的皮肤皱纹渊图圆月冤袁并随年龄增长袁皮肤变厚袁颜色加深袁更加松弛并终身保持无毛状态遥圆郾圆郾圆摇组织学院员源日龄敲除小鼠皮肤可见毛囊上部的毛管部宽大形成椭圆囊袁毛囊解体袁毛球部和毛乳头滞留于真皮内渊图猿粤冤遥员月龄敲除小鼠皮肤小囊内含一些角化碎屑样物质袁真皮层中见几排大小不等的包囊渊图猿月冤遥员源日龄渊图猿悦冤和员月龄渊图猿阅冤对照小鼠真皮中见多量发育正常的毛囊遥

80 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 苑苑 粤院原示碱基缺失部分曰月院上图为正常悦缘苑月蕴辕远允小鼠袁下图为基因敲除小鼠曰箭头示碱基缺失位点遥图员摇测序结果序列比对图渊粤冤和测序图渊月冤粤院栽澡藻泽澡燥则贼凿燥贼贼藻凿造蚤灶藻泽则藻责则藻泽藻灶贼贼澡藻噪灶燥糟噪燥怎贼遭葬泽藻泽援月院杂藻择怎藻灶糟藻糟燥皂责葬则蚤泽燥灶葬灶凿泽藻择怎藻灶糟藻皂葬责燥枣凿蚤枣枣藻则藻灶贼皂蚤糟藻援栽澡藻憎蚤造凿鄄贼赠责藻泽藻择怎藻灶糟藻蚤泽泽澡燥憎灶葬贼贼澡藻贼燥责援栽澡藻葬则则燥憎泽澡燥憎泽凿藻造藻贼蚤燥灶泽蚤贼藻泽援云蚤早援员摇杂藻择怎藻灶糟藻糟燥皂责葬则蚤泽燥灶葬灶凿泽藻择怎藻灶糟藻皂葬责 粤院员源日龄敲除小鼠全身毛发稀疏曰月院员月龄敲除小鼠毛发基本脱净遥图圆摇转基因小鼠脱毛规律及皮肤表型的变化粤院晕燥贼藻贼澡藻泽责葬则泽藻澡葬蚤则葬贼员源凿葬赠泽燥枣葬早藻援月院匀葬蚤则蚤泽葬造皂燥泽贼糟燥皂责造藻贼藻造赠皂蚤泽泽蚤灶早葬贼燥灶藻皂燥灶贼澡燥枣葬早藻援云蚤早援圆摇匀葬蚤则造燥泽泽蚤灶贼澡藻澡则噪灶燥糟噪燥怎贼皂蚤糟藻葬灶凿糟澡葬灶早藻泽燥枣贼澡藻泽噪蚤灶责澡则灶燥贼赠责藻 猿摇 讨论 无毛基因是一个多效基因袁位点的突变袁不仅造成完全和持久的无毛袁而且还导致免疫与繁殖的异常渊陨早灶葬贼蚤藻增葬藻贼葬造袁员怨愿愿冤尧淋巴瘤易感性的增高渊酝藻蚤藻则藻贼葬造袁员怨远怨冤尧二口恶英毒性敏感性的增加咱远暂等遥到目前为止袁无毛基因已发现了员远个等位基澡则则澡因袁如澡葬蚤则造藻泽泽渊澡则冤突变尧则澡蚤灶燥渊澡则冤突变尧匀则则澡鄄允突变尧匀则则澡鄄砸突变等遥不同等位基因间即具有共同特征袁如程序化的脱毛方式袁皮肤皱褶袁育仔困难袁免咱苑暂疫受损袁真皮包囊出现等遥目前袁通过建立转基 因动物模型来研究基因的生物学功能袁已越来越普咱愿暂遍地被研究者所接受遥基因敲除是证明基因功能不可缺少的逻辑环节袁是研究基因功能最直接有效的方法之一遥栽粤蕴耘晕作为一种高效的基因编辑工具袁当其在基因组上产生双链断裂后袁可以通过咱怨暂晕匀耘允修复方式产生基因敲除遥课题组采用用栽粤蕴耘晕泽技术构建了匀则基因敲除小鼠袁测序发现澡则编码区愿远耀愿苑位共圆个碱基的缺失袁产生了栽郧粤终止密码子遥基因敲除小鼠生长发育观察发现袁小鼠出生后员源凿开始从头颈部尧背部尧尾部开始脱毛袁表现为稀毛特征袁最后全身脱

81 苑愿中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 粤院员源日龄敲除小鼠毛囊上部的毛管部宽大形成椭圆囊遥月院员月龄敲除小鼠真皮深层及皮下组织有几排大小不等的包囊遥悦院员源日龄悦缘苑月蕴辕远允小鼠毛囊遥阅院员月龄悦缘苑月蕴辕远允小鼠毛囊遥图猿摇基因敲除和悦缘苑月蕴辕远允小鼠皮肤组织学观察渊匀耘袁标尺越员园园滋皂冤粤院栽澡藻憎蚤凿藻灶藻凿澡葬蚤则糟葬灶葬造泽燥枣怎责责藻则枣燥造造蚤糟造藻枣燥则皂皂怎造贼蚤责造藻怎贼则蚤糟造藻泽蚤灶葬员源鄄凿葬赠鄄燥造凿匀则噪灶燥糟噪燥怎贼皂蚤糟藻援月院晕燥贼藻贼澡藻泽藻增藻则葬造则燥憎泽燥枣凿藻则皂葬造糟赠泽贼泽蚤灶葬员鄄皂燥灶贼澡鄄燥造凿匀则噪灶燥糟噪燥怎贼皂燥怎泽藻援悦院晕燥则皂葬造澡葬蚤则枣燥造造蚤糟造藻泽蚤灶葬员源鄄凿葬赠燥造凿糟燥灶贼则燥造皂燥怎泽藻援阅院匀葬蚤则枣燥造造蚤糟造藻泽蚤灶葬憎蚤造凿鄄贼赠责藻皂燥怎泽藻凿藻增藻造燥责藻凿灶燥则皂葬造造赠葬贼凿葬赠猿园援云蚤早援猿摇匀蚤泽贼燥造燥早蚤糟葬责责藻葬则葬灶糟藻燥枣泽噪蚤灶蚤灶贼澡藻匀则噪灶燥糟噪燥怎贼皂蚤糟藻渊匀耘袁月葬则越员园园滋皂冤 净袁并终生保持无毛状态遥皮肤组织学观察发现毛发生长缺陷袁皮肤内毛囊瓦解袁并形成许多椭圆囊及真皮包囊袁与无毛基因自发突变研究结果一咱员园暂致遥本研究敲除小鼠的获得说明匀则基因影响了毛囊的正常生长发育袁机理可能在于基因缺失致其基因产物鄄无毛蛋白的丧失袁无毛蛋白是一个匀猿运怨去甲基化酶袁可通过直接控制其靶基因袁调节表皮咱员员暂的内稳态遥利用本试验建立的基因敲除小鼠模型袁对深入了解匀则基因在毛发生长发育中表达调控的分子机制袁鉴别控制毛发生长的关键基因并研究它的作用机制袁可能为最终揭开人类脱发的奥秘袁发展有效治疗药物袁解决毛发再生难题提供了有价值的材料遥 参考文献院 咱员暂摇杂贼藻灶灶运杂袁孕葬怎泽砸援悦燥灶贼则燥造泽燥枣澡葬蚤则枣燥造造蚤糟造藻糟赠糟造蚤灶早咱允暂援孕澡赠泽蚤燥造砸藻增袁圆园园员袁愿员院源源怨原源怨源援咱圆暂摇孕燥则贼藻则砸酝援酝燥怎泽藻皂燥凿藻造泽枣燥则澡怎皂葬灶澡葬蚤则造燥泽泽凿蚤泽燥则凿藻则泽咱允暂援允粤灶葬贼袁圆园园猿袁圆园圆院员圆缘原员猿员援咱猿暂摇允燥灶藻泽允酝袁耘造凿藻则允栽袁杂蚤皂蚤灶运袁藻贼葬造援陨灶泽藻则贼蚤燥灶葬造皂怎贼葬贼蚤燥灶燥枣贼澡藻澡葬蚤则造藻泽泽造燥糟怎泽燥灶皂燥怎泽藻糟澡则燥皂燥泽燥皂藻员源咱允暂援酝葬皂皂郧藻灶燥皂藻袁 员怨怨园袁源渊员员冤院远猿怨原远源猿援咱源暂摇再蚤责蕴袁匀燥则藻增蕴袁杂蚤灶糟造葬蚤则砸袁藻贼葬造援粤贼则蚤糟澡蚤葬憎蚤贼澡责葬责怎造葬则造藻泽蚤燥灶泽院葬则藻责燥则贼燥枣贼澡则藻藻灶燥增藻造澡怎皂葬灶澡葬蚤则造藻泽泽早藻灶藻皂怎贼葬贼蚤燥灶泽葬灶凿葬则藻增蚤泽蚤燥灶燥枣凿蚤葬早灶燥泽贼蚤糟糟则蚤贼藻则蚤葬咱允暂援粤糟贼葬阅藻则皂灾藻灶藻则藻燥造袁圆园园愿袁愿愿院猿源远原猿源怨援咱缘暂摇月藻灶葬增蚤凿藻泽云袁韵遭藻则赠泽扎赠灶栽酝袁灾葬灶月怎泽噪蚤则噪粤酝袁藻贼葬造援栽澡藻澡葬蚤则造藻泽泽皂燥怎泽藻蚤灶泽噪蚤灶则藻泽藻葬则糟澡咱允暂援允阅藻则皂葬贼燥造杂糟蚤袁圆园园怨袁缘猿院员园原员愿援咱远暂摇运蚤皂允耘袁杂燥灶早阅袁运蚤皂允袁藻贼葬造援韵则葬造泽怎责责造藻皂藻灶贼葬贼蚤燥灶憎蚤贼澡糟燥糟燥葬藻曾贼则葬糟贼则藻凿怎糟藻泽哉灾月鄄蚤灶凿怎糟藻凿憎则蚤灶噪造藻泽蚤灶澡葬蚤则造藻泽泽皂燥怎泽藻泽噪蚤灶咱允暂援允陨灶增藻泽贼阅藻则皂葬贼燥造袁圆园员缘袁员员院源缘缘原源缘苑援咱苑暂摇王冬平袁栾蓉晖袁李善如袁等援月粤蕴月辕糟突变无毛小鼠特异性免疫功能的研究咱允暂援中国实验动物学报袁圆园园猿袁员员渊员冤院圆猿原圆缘援咱愿暂摇孙振红袁苗向阳袁朱瑞良袁等援动物转基因新技术研究进展咱允暂援遗传袁圆园员园袁猿圆渊远冤院缘猿怨原缘源苑援咱怨暂摇酝蚤造造藻则允悦袁栽葬灶杂袁匝蚤葬燥郧袁藻贼葬造援粤栽粤蕴耘灶怎糟造藻葬泽藻葬则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻枣燥则藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼早藻灶燥皂藻藻凿蚤贼蚤灶早咱允暂援晕葬贼月蚤燥贼藻糟澡灶燥造袁圆园员员袁圆怨渊圆冤院员源猿原员源愿援咱员园暂摇章金涛袁付淑莉袁王纯耀袁等援无毛小鼠不同年龄皮肤结构的比较研究咱允暂援中国实验动物学报袁员怨怨愿袁远渊员冤院猿苑原源员援咱员员暂摇蕴蚤怎蕴袁运蚤皂匀袁悦葬泽贼葬粤援匀葬蚤则造藻泽泽蚤泽葬澡蚤泽贼燥灶藻匀猿运怨凿藻皂藻贼澡赠造葬泽藻咱允暂援云粤杂耘月允袁圆园员源袁愿院员缘猿源原员缘源圆援也修回日期页圆园员远原园源原园源

82 圆园员远年愿月第圆远卷摇第愿期 中国比较医学杂志悦匀陨晕耘杂耘允韵哉砸晕粤蕴韵云悦韵酝孕粤砸粤栽陨灾耘酝耘阅陨悦陨晕耘 粤怎早怎泽贼袁圆园员远灾燥造援圆远摇晕燥援愿 藡 蕥 蕥蕥蕥蕥藡研究报告 蕥蕥蕥蕥藡 蕥藡 蛋白磷酸酶缘渊孕孕缘冤对小鼠脂肪代谢的影响 王摇 员君袁邱摇 圆彬袁刘摇 圆明袁王摇 圆圆员超袁雍伟东袁谢忠稳 渊员援安徽农业大学袁茶与食品科技学院袁茶树生物学与资源利用国家重点实验室袁安徽袁合肥摇圆猿园园猿远曰圆援中国医学科学院医学实验动物研究所袁基因与发育室袁北京摇员园园园圆员冤 摇摇揖摘要铱摇目的摇利用蛋白磷酸酶缘渊孕孕缘冤基因敲除小鼠袁探究孕孕缘在小鼠脂肪代谢中的作用遥方法摇随机选取远周龄雄性孕孕缘基因敲除渊孕孕缘运韵冤和野生型渊宰栽冤小鼠袁高脂饲养远周后袁应用匀耘染色和油红韵染色技术对小鼠肝脏结构和脂滴积累进行检测袁应用宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早和则藻葬造鄄贼蚤皂藻孕悦砸技术检测肝脏组织中脂代谢相关基因的表达情况遥同时应用孕孕缘运韵和宰栽小鼠成纤维细胞袁在体外观察孕孕缘对脂肪分化的影响遥结果摇与宰栽小鼠相比袁高脂饲养后孕孕缘运韵小鼠体重与宰栽小鼠相比显著减轻袁肝脏中脂滴数量显著较少且脂滴较小遥体外实验发现与宰栽小鼠胚胎成纤维细胞渊皂燥怎泽藻藻皂遭则赠燥灶蚤糟枣蚤遭则燥遭造葬泽贼袁酝耘云冤相比孕孕缘运韵酝耘云细胞脂肪分化显著较弱袁脂滴较小遥此外袁在孕孕缘运韵肝脏组织中脂肪分化标记基因悦阅猿远尧粤孕圆尧孕孕粤砸酌圆和郧造怎贼源的相对表达量显著降低袁而能量代谢相关蛋白糖皮质激素受体渊郧砸冤的磷酸化水平显著增加袁解偶联蛋白员渊哉悦孕员冤表达量也显著升高遥结论摇孕孕缘通过调节郧砸的去磷酸化影响机体脂肪分化和能量代谢调控小鼠脂肪代谢遥揖关键词铱摇蛋白磷酸酶缘曰糖皮质激素受体曰解偶联蛋白员曰脂肪分化曰能量代谢揖中图分类号铱砸鄄猿猿摇摇揖文献标识码铱粤摇摇揖文章编号铱员远苑员鄄苑愿缘远渊圆园员远冤园愿鄄园园苑怨鄄园远凿燥蚤院员园郾猿怨远怨援躁援蚤泽泽灶援员远苑员原苑愿缘远郾圆园员远郾园愿郾园员猿 陨灶枣造怎藻灶糟藻燥枣责则燥贼藻蚤灶责澡燥泽责澡葬贼葬泽藻缘燥灶贼澡藻造蚤责蚤凿皂藻贼葬遭燥造蚤泽皂蚤灶皂蚤糟藻 员圆圆圆宰粤晕郧允怎灶袁匝陨哉月蚤灶袁蕴陨哉酝蚤灶早袁宰粤晕郧悦澡葬燥袁圆员再韵晕郧宰藻蚤鄄凿燥灶早袁载陨耘在澡燥灶早鄄憎藻灶渊员援悦燥造造藻早藻燥枣栽藻葬葬灶凿云燥燥凿杂糟蚤藻灶糟藻泽袁杂贼葬贼藻运藻赠蕴葬遭燥则葬贼燥则赠燥枣栽藻葬孕造葬灶贼月蚤燥造燥早赠葬灶凿哉贼蚤造蚤扎葬贼蚤燥灶袁粤灶澡怎蚤粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁匀藻枣藻蚤圆猿园园猿远袁悦澡蚤灶葬曰圆援蕴葬遭燥则葬贼燥则赠燥枣郧藻灶藻葬灶凿阅藻增藻造燥责皂藻灶贼袁悦澡蚤灶藻泽藻粤糟葬凿藻皂赠燥枣酝藻凿蚤糟葬造杂糟蚤藻灶糟藻泽袁月藻蚤躁蚤灶早员园园园圆员冤 摇摇揖粤遭泽贼则葬糟贼铱摇韵遭躁藻糟贼蚤增藻摇栽燥蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻贼澡藻藻枣枣藻糟贼燥枣责则燥贼藻蚤灶责澡燥泽责澡葬贼葬泽藻缘渊孕孕缘冤燥灶造蚤责蚤凿皂藻贼葬遭燥造蚤泽皂蚤灶贼澡藻孕孕缘噪灶燥糟噪燥怎贼渊运韵冤皂蚤糟藻援酝藻贼澡燥凿泽摇酝葬造藻孕孕缘运韵葬灶凿憎蚤造凿贼赠责藻渊宰栽冤皂蚤糟藻葬贼贼澡藻葬早藻燥枣远憎藻藻噪泽憎藻则藻怎泽藻凿蚤灶贼澡蚤泽泽贼怎凿赠援陨灶燥则凿藻则贼燥泽贼怎凿赠贼澡藻藻枣枣藻糟贼燥枣澡蚤早澡枣葬贼凿蚤藻贼渊匀云阅冤枣藻藻凿蚤灶早袁贼澡藻遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼憎葬泽皂藻葬泽怎则藻凿援栽澡藻造蚤增藻则澡蚤泽贼燥造燥早赠憎葬泽藻曾葬皂蚤灶藻凿遭赠匀耘葬灶凿燥蚤造则藻凿韵泽贼葬蚤灶蚤灶早援栽燥枣怎则贼澡藻则增藻则蚤枣赠孕孕缘枣怎灶糟贼蚤燥灶泽蚤灶贼澡藻葬凿蚤责燥早藻灶藻泽蚤泽袁蚤灶增蚤贼则燥藻曾责藻则蚤皂藻灶贼憎葬泽糟葬则则蚤藻凿燥怎贼怎泽蚤灶早皂燥怎泽藻藻皂遭则赠燥灶蚤糟枣蚤遭则燥遭造葬泽贼泽渊酝耘云冤援宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早葬灶凿则藻葬造鄄贼蚤皂藻孕悦砸憎藻则藻责藻则枣燥则皂藻凿贼燥择怎葬灶贼蚤枣蚤藻凿贼澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣造蚤责蚤凿皂藻贼葬遭燥造蚤泽皂鄄则藻造葬贼藻凿早藻灶藻泽蚤灶贼澡藻造蚤增藻则贼蚤泽泽怎藻泽援砸藻泽怎造贼泽摇悦燥皂责葬则藻凿憎蚤贼澡贼澡藻宰栽皂蚤糟藻袁贼澡藻遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼早葬蚤灶憎葬泽泽造燥憎藻则蚤灶贼澡藻运韵皂蚤糟藻援栽澡藻泽蚤扎藻燥枣贼澡藻造蚤责蚤凿凿则燥责造藻贼泽憎葬泽泽皂葬造造藻则葬灶凿贼澡藻择怎葬灶贼蚤贼赠憎葬泽造藻泽泽蚤灶贼澡藻运韵皂燥怎泽藻造蚤增藻则贼蚤泽泽怎藻援陨灶增蚤贼则燥泽贼怎凿赠则藻增藻葬造藻凿贼澡葬贼贼澡藻运韵皂燥怎泽藻酝耘云糟藻造造泽泽澡燥憎藻凿造藻泽泽凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼藻凿葬凿蚤责燥糟赠贼藻泽憎蚤贼澡泽皂葬造造藻则造蚤责蚤凿凿则燥责造藻贼泽贼澡葬灶贼澡藻宰栽酝耘云糟藻造造泽援栽澡蚤泽燥遭泽藻则增葬贼蚤燥灶憎葬泽枣怎则贼澡藻则糟燥灶枣蚤则皂藻凿遭赠凿藻贼藻糟贼蚤灶早贼澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣葬凿蚤责燥早藻灶藻泽蚤泽鄄则藻造葬贼藻凿早藻灶藻泽蚤灶贼澡藻匀云阅造蚤增藻则援栽澡藻皂葬则噪藻则泽燥枣葬凿蚤责燥糟赠贼藻凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶袁泽怎糟澡葬泽悦阅猿远袁粤孕圆袁孕孕粤砸酌圆袁葬灶凿郧造怎贼源袁憎藻则藻泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠凿藻糟则藻葬泽藻凿袁憎澡蚤造藻藻灶藻则早赠藻曾责藻灶凿蚤贼怎则藻鄄则藻造葬贼藻凿皂葬则噪藻则泽袁泽怎糟澡葬泽责澡燥泽责澡燥则赠造葬贼蚤燥灶燥枣郧砸葬灶凿藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣哉悦孕员袁憎藻则藻 咱基金项目暂国家自然科学基金渊愿员圆苑圆圆苑猿冤尧国家科技重大专项渊圆园员源在载员园园园源园园圆原园园猿原园园员冤资助遥咱作者简介暂王君渊员怨怨员原冤袁女袁硕士研究生袁研究方向院营养与发育生物学遥耘鄄皂葬蚤造院躁怎灶憎葬灶早员猿愿岳泽蚤灶葬援糟燥皂遥咱通讯作者暂谢忠稳袁男袁教授袁研究方向院营养与代谢生物学袁耘皂葬蚤造院扎澡燥灶早憎藻灶曾蚤藻岳葬澡葬怎援藻凿怎援糟灶曰雍伟东袁男袁研究员袁研究方向院生殖与发育生物学袁耘皂葬蚤造院憎赠燥灶早岳糟灶蚤造葬泽援燥则早遥

83 愿园中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠蚤灶糟则藻葬泽藻凿援悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶泽摇孕则燥贼藻蚤灶责澡燥泽责澡葬贼葬泽藻缘皂葬赠责造葬赠葬则藻早怎造葬贼燥则赠则燥造藻蚤灶贼澡藻皂燥怎泽藻造蚤责蚤凿皂藻贼葬遭燥造蚤泽皂贼澡则燥怎早澡则藻早怎造葬贼蚤灶早贼澡藻凿藻鄄责澡燥泽责澡燥则赠造葬贼蚤燥灶燥枣责鄄郧砸葬灶凿藻灶澡葬灶糟蚤灶早贼澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣哉悦孕员援揖运藻赠憎燥则凿泽铱摇孕则燥贼藻蚤灶责澡燥泽责澡葬贼葬泽藻缘曰郧砸曰哉悦孕员曰粤凿蚤责燥糟赠贼藻凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶曰耘灶藻则早赠皂藻贼葬遭燥造蚤泽皂曰酝蚤糟藻 摇摇甾体激素受体是一类参与细胞调控的核受体超家族袁对生物体具有极其重要的作用袁主要包括糖皮质激素受体渊郧砸冤尧雌激素受体渊耘砸冤尧雄激素受体渊粤砸冤尧孕激素受体渊孕砸冤以及盐皮质激素受体渊酝砸冤遥其中糖皮质激素受体在个体中具有广泛表达袁介导糖皮质激素渊郧悦泽冤对机体糖尧脂肪和蛋白质的生物合成和代谢等功能的调节作用遥由于糖皮咱员暂质激素渊郧悦泽冤是全身能量平衡的重要调节因子袁因而郧砸的活性变化将严重影响机体的物质能量代谢功能遥蛋白磷酸酶缘渊孕孕缘冤袁是一种在机体内广泛表达的共伴侣蛋白袁具有丝氨酸辕苏氨酸磷酸酶活性袁在细胞生长尧增殖尧分化尧迁移以及胁迫条件下咱圆袁猿暂的细胞生存等方面都发挥重要作用遥研究表明孕孕缘能够直接与匀杂孕怨园辕郧砸复合体结合袁通过催化咱源暂郧砸的去磷酸化过程袁调节郧砸活性遥另有研究利用体外小鼠成纤维细胞脂肪诱导分化模型发现袁敲咱缘暂除孕孕缘可明显抑制脂肪分化遥这些结果提示孕孕缘可能通过调节郧砸去磷酸化影响脂肪分化袁但目前仍缺乏有力的体内实验证据遥本研究利用孕孕缘基因敲除小鼠和孕孕缘敲除小鼠成纤维细胞袁从体内和体外两方面探讨敲除孕孕缘基因对脂肪代谢的影响及其分子机制遥 员摇 材料和方法 员郾员摇实验动物及实验环境清洁级雄性孕孕缘敲除渊孕孕缘运韵冤小鼠为本实验室保存袁孕孕缘敲除小鼠及其野生型渊宰栽冤对照小鼠饲养繁殖于中国医学科学院医学实验动物研究所袁动物使用合格号为揖杂再载运渊京冤圆园员员原园园圆圆铱遥动物实验方案经中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员会批准袁批准号为陨蕴粤杂鄄孕郧原圆园员源原园员圆遥员郾圆摇实验仪器电子天平渊精度园郾园员早袁上海民桥电子天平厂冤遥酝砸陨渊苑郾园栽皂蚤糟则燥酝砸陨灾袁美国灾葬则蚤葬灶公司冤遥石蜡切片机渊陨灾杂鄄源园员袁日本杂葬噪怎则葬云蚤灶藻贼藻噪公司冤遥冰冻切片机渊悦酝员怨园园袁德国蕴藻糟蚤葬冤遥光学显微镜渊月载缘园袁日本韵造赠皂责怎泽公司冤遥孕悦砸循环仪渊粤责责造蚤藻凿月蚤燥泽赠泽贼藻皂苑缘园园袁美国粤月陨公司冤遥化学发光成像系统渊栽葬灶燥灶缘缘园园袁中国天能公司冤遥 员郾猿摇材料高脂饲料渊远园噪糟葬造豫枣葬贼袁阅员圆源怨圆冤购自美国砸藻泽藻葬则糟澡阅蚤藻贼泽公司遥异氟宁渊上海雅培制药有限公司冤遥高糖阅酝耘酝尧胎牛血清渊云月杂冤尧青霉素鄄链霉素购自美国陨灶增蚤贼则燥早藻灶公司袁用于培养小鼠胚胎成纤维细胞袁使用前按每员园园皂蕴培养液中愿怨豫高糖阅酝耘酝尧员园豫云月杂和员豫青辕链霉素混合均匀后使用遥磷酸酶抑制剂和蛋白酶抑制剂购自美国杂蚤早皂葬公司袁砸陨孕粤裂解液购自中国碧云天生物科技有限公司袁使用砸陨孕粤裂解液员皂蕴辕园郾员早组织尧蛋白酶抑制剂员园滋蕴辕园郾员早组织渊员片溶于员园园皂蕴三蒸水冤尧磷酸酶抑制剂员滋蕴辕园郾员早组织的混合液裂解小鼠肝脏组织遥地塞米松渊阅耘载冤尧陨月酝载和胰岛素购自美国杂蚤早皂葬公司袁使用终浓度为地塞米松员滋皂燥造辕蕴尧陨月酝载缘园园滋皂燥造辕蕴尧胰岛素员园滋皂燥造辕皂蕴与阅酝耘酝的混合液诱导小鼠胚胎成纤维细胞脂肪分化遥栽则蚤扎燥造购自美国陨灶增蚤贼则燥早藻灶公司袁按员皂蕴辕园郾员早组织提取皂砸晕粤遥皂砸晕粤反转使用糟阅晕粤反转录试剂盒和荧光定量孕悦砸试剂盒渊杂再月砸早则藻藻灶法冤购自中国栽葬运葬砸葬公司袁组织蛋白定量使用月悦粤蛋白定量试剂盒购自中国碧云天生物科技有限公司袁宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早检测使用责鄄郧砸抗体购自美国悦藻造造杂蚤早灶葬造蚤灶早栽藻糟澡灶燥造燥早赠公司袁哉悦孕员抗体购自美国粤遭糟葬皂公司袁使用比例均为抗体院稀释液越员院员园园园遥员郾源摇实验方法员郾源郾员摇小鼠高脂饲养和体重测量院随机选取远周龄雄性孕孕缘运韵和宰栽小鼠各远只袁高脂喂养远周袁每周称量并记录小鼠体重员次遥员郾源郾圆摇酝砸陨扫描小鼠体内脂肪院取上述高脂喂养远周后的孕孕缘运韵和宰栽雄鼠各猿只袁圆豫异氟宁辕韵圆渊蕴辕皂蚤灶冤对其进行麻醉后使用酝砸陨进行扫描袁应用陨砸宰软件渊陨灶增藻燥灶砸藻泽藻葬则糟澡宰燥则噪责造葬糟藻袁杂蚤藻皂藻灶泽袁美国冤计算小鼠脂肪体积遥员郾源郾猿摇肝脏组织匀耘染色和油红韵染色院随机选取上述高脂诱导后孕孕缘运韵和宰栽雄鼠各猿只袁脱颈处死袁肝脏以员园豫中性福尔马林固定袁石蜡包埋后以源滋皂厚度切片袁随后进行匀耘染色遥另取员糟皂伊员糟皂伊园郾缘糟皂大小肝脏经冰冻切片后袁进行油红韵染色遥组织切片染色封片后光学显微镜下观察并采集图片遥

84 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 愿员 咱远暂员郾源郾源摇酝耘云细胞诱导脂肪分化院参考文献方法袁缘永生化孕孕缘运韵和宰栽型酝耘云细胞按圆伊员园个辕孔接种于远园皂皂细胞培养皿中袁使用阅酝耘酝培养基渊含员园豫云月杂尧员豫青霉素鄄链霉素冤在猿苑益尧缘豫悦韵圆条件的细胞培养箱中培养遥待细胞密度达愿园豫密度时渊记为凿原圆冤袁继续培养圆天渊记为凿园冤遥在凿园时袁将培养基更换为含有脂肪分化诱导剂的阅酝耘酝培养基渊含员园豫云月杂尧员豫青霉素鄄链霉素尧缘园园滋皂燥造辕蕴陨月酝载尧员滋皂燥造辕蕴阅耘载尧员园滋皂燥造辕皂蕴蚤灶泽怎造蚤灶冤遥圆天后渊凿圆冤将培养基更换为只含有员园豫云月杂和员园滋皂燥造辕皂蕴蚤灶泽怎造蚤灶的阅酝耘酝培养基袁以后每圆凿更换员次阅酝耘酝培养基渊员园豫云月杂尧员豫青霉素鄄链霉素至凿愿遥当细胞诱导分化至第愿天时将细胞取出经油红韵染色后袁在光学显微镜渊月载缘园袁韵造赠皂责怎泽袁日本冤下观察并照像遥员郾源郾缘摇肝脏皂砸晕粤提取及砸藻葬造鄄贼蚤皂藻鄄孕悦砸检测院取高脂诱导后孕孕缘运韵和宰栽雄鼠各猿只袁脱颈处死袁取其肝脏遥以栽砸陨扎燥造法提取小鼠肝脏皂砸晕粤后袁各样本以缘园园灶早皂砸晕粤反转录合成糟阅晕粤袁以郧葬责凿澡作为内参袁使用杂再月砸早则藻藻灶相对定量法进行孕悦砸扩增反应遥实验中用到的引物序列如下表员院员郾源郾远摇宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早检测肝脏蛋白表达院取高脂诱导后孕孕缘运韵和宰栽雄鼠各猿只袁脱颈处死袁取其肝脏在冰上以砸陨孕粤蛋白裂解液渊含员园豫蛋白酶抑制剂尧员豫磷酸酶抑制剂冤提取组织蛋白遥蛋白经月悦粤法定量后以远园滋早上样量进行杂阅杂鄄孕粤郧耘电泳袁转膜封闭后孵育一抗渊哉悦孕员袁员院员园园园曰责鄄郧砸袁员院员园园园冤过夜遥次日孵育二抗渊员院缘园园园冤后以耘悦蕴法使用化学发光成像系统采集荧光信号遥员郾源郾苑摇统计学方法院数据使用平均值依标准误渊軃曾 引物名称悦阅猿远 粤孕圆 孕孕粤砸酌圆 郧造怎贼源 郧砸 哉悦孕员 郧葬责凿澡 表员摇砸藻葬造贼蚤皂藻鄄孕悦砸检测引物栽葬遭援员摇栽澡藻责则蚤皂藻则泽燥枣则藻葬造鄄贼蚤皂藻孕悦砸贼藻泽贼 引物序列 云院缘忆鄄悦悦粤郧粤悦粤粤悦悦粤栽栽郧栽栽栽悦栽郧悦粤悦栽郧鄄猿忆砸院缘忆鄄郧郧粤悦栽栽郧悦粤栽郧栽粤郧郧粤粤粤栽郧栽郧郧粤鄄猿忆 云院缘忆鄄郧悦栽郧郧郧悦粤悦栽郧栽粤郧郧栽悦粤粤栽悦栽悦悦鄄猿忆砸院缘忆鄄郧郧栽悦郧栽栽郧粤悦郧栽郧郧郧粤郧栽粤粤郧郧粤栽原猿忆 云院缘忆鄄郧郧郧栽郧粤粤粤悦栽悦栽郧郧郧粤郧粤栽栽鄄猿忆砸院缘忆鄄粤栽郧悦栽栽栽粤栽悦悦悦悦粤悦粤郧粤悦鄄猿忆 云院缘鄄郧郧悦悦栽郧悦悦悦郧粤粤粤郧粤郧栽悦栽粤粤粤郧鄄猿忆砸院缘鄄郧悦粤粤郧郧粤悦粤栽栽郧郧粤悦郧悦栽悦栽悦栽悦栽鄄猿忆 云院缘忆鄄郧郧粤悦悦粤悦悦栽悦悦悦粤粤粤悦栽悦栽郧鄄猿忆砸院粤郧郧栽粤粤栽栽郧栽郧悦栽郧栽悦悦栽栽悦悦粤鄄猿忆 云院缘忆鄄悦郧郧郧悦粤栽栽悦粤郧粤郧郧悦粤粤粤鄄猿忆砸院缘忆鄄粤悦栽郧粤郧栽悦郧栽粤郧粤郧郧悦悦粤粤栽悦悦鄄猿忆 云院缘忆鄄粤栽悦粤粤悦郧郧郧粤粤郧悦悦悦粤栽悦粤悦鄄猿忆砸院缘忆鄄栽栽郧郧悦栽悦悦粤悦悦悦栽栽悦粤粤郧栽郧鄄猿忆 依泽冤表示袁应用郧则葬责澡孕葬凿孕则蚤泽皂缘郾园软件以栽鄄贼藻泽贼双尾法进行检验分析袁以孕约园郾园缘表示差异有显著性遥 圆摇 结果 圆郾员摇孕孕缘基因敲除小鼠对高脂诱导的体重增加明显抑制孕孕缘运韵小鼠在高脂喂养猿周后袁体重明显轻于野生型小鼠曰高脂诱导缘周后袁野生型小鼠体重达到渊圆愿郾远员依员郾园园冤早袁而孕孕缘基因敲除小鼠体重仅为渊圆猿郾苑园依园郾苑圆冤早袁二者相比具有显著性差异渊孕越园郾园园苑源袁图员冤遥摄食量测定结果显示袁孕孕缘运韵小鼠和宰栽小鼠的摄食量没有差别袁说明敲除孕孕缘并不影响小鼠的摄食量遥以上结果表明孕孕缘基因敲除小鼠能够抵制高脂诱导的体重增加遥 圆郾圆摇敲除孕孕缘基因抑制高脂诱导的小鼠体内脂肪积累通过核磁共振成像仪对高脂喂养远周后的宰栽和运韵小鼠体内脂肪含量进行测定遥图圆粤显示的白色区域表示脂肪组织袁从图中可以看出宰栽小鼠的脂肪含量多于运韵小鼠遥运用陨灶增藻燥灶砸藻泽藻葬则糟澡宰燥则噪责造葬糟藻软件计算白色区域的绝对脂肪面积袁除以体重即是单位体重的绝对脂肪体积袁结果如图圆月所示袁宰栽小鼠的单位体重的绝对脂肪体积显著高于运韵小鼠渊孕越园郾园源苑远冤遥这一结果表明袁孕孕缘运韵小鼠体脂含量显著少于对照组袁未出现肥胖表型袁提示敲除孕孕缘基因能够抑制小鼠体内脂肪积累遥圆郾猿摇敲除孕孕缘基因小鼠肝脏脂肪沉积明显较少高脂饲养远周后袁宰栽小鼠肝脏切片匀耘染色显示有显著的脂肪堆积渊空泡为脂肪组织冤袁而孕孕缘运韵小鼠肝脏切片中脂肪堆积明显少于宰栽袁并且其 鄢鄢鄢注院高脂饲养后小鼠周体重记录袁灶越远遥袁孕约园郾园缘曰袁孕约园郾园员遥 云蚤早援员摇 图员摇 敲除孕孕缘基因对小鼠体重的影响 晕燥贼藻援栽澡藻遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼燥枣皂蚤糟藻枣藻凿憎蚤贼澡澡蚤早澡枣葬贼凿蚤藻贼鄢鄢鄢憎葬泽则藻糟燥则凿藻凿藻增藻则赠憎藻藻噪援灶越远援袁孕约园郾园缘袁袁孕约园郾园员援 栽澡藻藻枣枣藻糟贼燥枣噪灶燥糟噪蚤灶早燥怎贼孕孕缘燥灶遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼燥枣贼澡藻皂蚤糟藻援

85 愿圆中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 脂肪颗粒较小渊图猿粤鄄阅冤遥脂肪特异性油红韵染色法对高脂诱导后的宰栽和孕孕缘运韵小鼠肝脏进行分析袁结果与匀耘染色一致渊图猿耘鄄匀冤袁高脂诱导后宰栽小鼠肝脏切片出现大量的红色脂滴袁脂肪沉积严重袁而孕孕缘运韵小鼠肝脏切片与宰栽相比红色脂滴明显减少袁并且脂滴较小遥这些结果揭示孕孕缘可能通过调节小鼠脂肪细胞的形成或者脂肪分解影响脂代谢遥圆郾源摇敲除孕孕缘基因对小鼠胚胎成纤维细胞脂肪分化的影响小鼠酝耘云细胞体外诱导脂肪分化实验结果显示袁对体外诱导脂肪分化至第愿天的小鼠酝耘云细胞进行油红韵染色袁结果如图源所示袁与宰栽酝耘云细胞相比袁孕孕缘运韵酝耘云细胞在体外诱导脂肪分化后产生的脂滴数量明显较少袁且脂滴大小也小于宰栽酝耘云细胞遥这一结果进一步证实敲除孕孕缘基因脂肪细胞的分化受到抑制遥圆郾缘摇敲除孕孕缘对小鼠肝脏中脂代谢相关基因的影响利用则藻葬造鄄贼蚤皂藻孕悦砸技术检测了高脂诱导后脂肪形成标记基因包括悦阅猿远尧粤孕圆尧孕孕粤砸酌圆尧郧造怎贼源及能量代谢相关基因郧砸和哉悦孕员的表达遥结果渊图缘粤鄄阅冤显示袁与宰栽小鼠相比运韵小鼠肝脏中悦阅猿远尧粤孕圆尧孕孕粤砸酌圆和郧造怎贼源表达显著减少袁郧砸表达没有差异性变化渊图缘耘冤袁但解偶联蛋白员渊哉悦孕员冤表达量却显著性升高渊图缘云冤遥用憎藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早技术检测了责鄄郧砸和哉悦孕员在蛋白水平上的变化遥结果显示渊图远冤袁高脂诱导后孕孕缘运韵小鼠肝脏中责鄄郧砸和哉悦孕员蛋白表达量显著升高遥这些结果表明孕孕缘敲除后小鼠能量代谢增强袁脂肪分化减弱遥 猿摇 讨论 我们前期研究发现在细胞水平敲除孕孕缘可使咱缘暂脂肪分化作用减弱遥本研究利用孕孕缘基因敲除小鼠和孕孕缘敲除小鼠酝耘云细胞袁从体内和体外两方面探讨敲除孕孕缘基因对脂代谢的影响以及参与这一过程的分子机制遥实验结果发现袁高脂诱导后孕孕缘运韵小鼠体重较宰栽小鼠显著减轻袁单位体重脂肪体积显著低于宰栽小鼠遥进一步通过对高脂饲养小鼠肝脏匀耘和油红韵染色证实袁引起上述表型的原因可能是孕孕缘运韵小鼠脂肪分化减少或者脂肪代谢增强导致遥体外诱导酝耘云细胞脂分化实验证实袁敲除孕孕缘基因具有明显降低脂分化的能力遥通过则藻葬造鄄贼蚤皂藻孕悦砸和憎藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早技术分析脂肪代谢相关基因表达袁发现孕孕缘运韵脂肪形成标记基因悦阅猿远尧粤孕圆尧孕孕粤砸酌圆尧郧造怎贼源相对表达量显著降低袁能量代谢相关基因郧砸相对表达量无显著性变化袁但磷酸化郧砸渊责鄄郧砸冤和哉悦孕员的蛋白表达量显著升高遥这些结果表明孕孕缘基因敲除后小鼠能量代谢增强袁脂肪分化减弱遥高脂饮食和运动缺乏的情况下机体会将未能消耗的营养成分转化为脂肪储存在脂肪组织尧肝脏尧肌肉中遥一旦体内能量供应不足时袁郧悦泽就会促进脂肪和蛋白质分解袁为机体提供能量遥而郧砸通过介导郧悦泽实现对机体糖尧脂肪和蛋白质的生物合成和分解代谢等功能的调节作用袁郧悦泽是全身能量咱员暂平衡的重要调节因子袁因而郧砸作为转录因子通过调控脂肪分解基因尧脂肪形成基因袁如悦阅猿远和郧造怎贼源的表达对机体的物质能量代谢起到重要调控作用遥郧砸与热休克蛋白怨园相互结合袁而孕孕缘通过 鄢鄢鄢注院粤援小鼠磁共振图曰月援脂肪体积与小鼠体重比统计图袁灶越猿遥袁孕约园郾园缘曰袁孕约园郾园员遥 图圆摇 敲除孕孕缘对小鼠脂肪含量的影响 晕燥贼藻援粤院酝砸陨责澡燥贼燥早则葬责澡燥枣皂蚤糟藻援月院杂贼葬贼蚤泽贼蚤糟则藻泽怎造贼燥枣枣葬贼增燥造怎皂藻辕遭燥凿赠憎藻蚤早澡贼辕则葬贼蚤燥泽援灶越猿援鄢袁孕约园郾园缘曰鄢鄢袁孕约园郾园员援 云蚤早援圆摇 栽澡藻藻枣枣藻糟贼燥枣噪灶燥糟噪蚤灶早燥怎贼孕孕缘燥灶贼澡藻皂燥怎泽藻憎澡燥造藻遭燥凿赠枣葬贼

86 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 愿猿 摇摇摇 注院粤鄄阅援肝脏石蜡切片匀耘染色曰耘鄄匀援肝脏冰冻切片油红韵染色援图猿摇孕孕缘对小鼠肝脏脂肪的影响渊员园倍袁标尺越圆园园滋皂曰源园倍袁标尺越缘园滋皂冤晕燥贼藻援粤鄄阅院匀耘泽贼葬蚤灶蚤灶早曰耘鄄匀院韵蚤造则藻凿韵泽贼葬蚤灶蚤灶早援云蚤早援猿摇耘枣枣藻糟贼燥枣孕孕缘燥灶贼澡藻皂燥怎泽藻造蚤增藻则枣葬贼援员园贼蚤皂藻泽袁遭葬则越圆园园滋皂曰源园贼蚤皂藻泽袁遭葬则越缘园滋皂援 云蚤早援源摇 注院粤鄄云援诱导分化后宰栽和运韵酝耘云细胞油红韵染色遥图源摇敲除孕孕缘基因抑制酝耘云细胞脂肪分化渊员园倍袁标尺越圆园园滋皂曰源园倍袁标尺越缘园滋皂冤晕燥贼藻院粤鄄云援粤凿蚤责燥糟赠贼藻凿藻枣枣藻则藻灶蚤葬贼蚤燥灶燥枣宰栽葬灶凿运韵皂燥怎泽藻藻皂遭则赠燥灶蚤糟枣蚤遭则燥遭造葬泽贼泽援韵蚤造则藻凿韵泽贼葬蚤灶蚤灶早援运灶燥糟噪蚤灶早燥怎贼孕孕缘责则藻增藻灶贼泽贼澡藻葬凿蚤责燥早藻灶藻泽蚤泽燥枣酝耘云糟藻造造泽渊员园贼蚤皂藻泽袁遭葬则越圆园园滋皂曰源园贼蚤皂藻泽袁遭葬则越缘园滋皂冤 云蚤早援缘摇 鄢鄢鄢注院灶越猿遥袁孕约园郾园缘曰袁孕约园郾园员遥 图缘摇 晕燥贼藻院灶越猿援 肝脏中脂代谢相关基因表达 鄢鄢鄢袁孕约园郾园缘曰袁孕约园郾园员援 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣造蚤责蚤凿皂藻贼葬遭燥造蚤泽皂鄄则藻造葬贼藻凿早藻灶藻泽蚤灶贼澡藻皂燥怎泽藻造蚤增藻则泽援

87 愿源中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 云蚤早援远摇 图远摇 肝脏中哉悦孕员和责鄄郧砸的表达 栽澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣哉悦孕员葬灶凿责鄄郧砸蚤灶贼澡藻造蚤增藻则泽 它的栽孕砸结构域与热休克蛋白怨园结合袁从而与郧砸咱苑暂构成复合物行使转录因子功能遥孕孕缘作为蛋白磷酸酶能够使郧砸去磷酸袁这将增强郧砸的活咱员袁源袁愿暂性遥我们的实验结果表明当孕孕缘敲除后郧砸磷酸化水平升高袁抑制脂肪形成相关基因悦阅猿远尧粤孕圆尧孕孕粤砸酌圆尧郧造怎贼源的表达袁在孕孕缘运韵小鼠体内揭示了孕孕缘对脂肪形成的抑制作用这与已报道的体外实验结果一致袁并且当孕孕缘运韵酝耘云细胞重新获咱缘暂取孕孕缘之后这种抑制作用减弱遥哺乳动物体内的脂肪组织分为白色脂肪和棕色脂肪袁白色脂肪主要以甘油三脂的形式储存能量袁而棕色脂肪则通过氧化分解脂肪为机体提供热咱怨暂量袁这种作用主要通过线粒体膜上的解偶联蛋白咱员园暂员渊哉悦孕员冤完成遥已有研究证实与野生型小鼠相比哉悦孕员缺乏的小鼠对高脂诱导型肥胖更加敏咱员员暂感袁与此相反袁过表达哉悦孕员的小鼠抵抗高脂诱咱员圆暂导型肥胖遥我们实验中发现袁当孕孕缘敲除后小鼠哉悦孕员表达量升高且小鼠表现出对高脂诱导型肥胖的抵抗袁这一现象此前未见报道袁但孕孕缘通过哉悦孕员调控小鼠能量代谢的具体机制尚不清楚袁有待进一步的研究遥由于孕孕缘是一种蛋白磷酶袁目前尚未有关于孕孕缘是否能够影响哉悦孕员磷酸化的报咱员猿暂道袁而糖皮质激素渊郧悦泽冤能够抑制哉悦孕员的表达袁因此我们推断孕孕缘运韵中哉孕悦员的增加是一个间接调控过程袁可能的机理也许是孕孕缘敲除后郧砸活性增强袁大量的郧悦泽与郧砸结合从而对哉悦孕员的抑制减弱袁哉悦孕员的表达量升高进而增强由哉悦孕员介导的脂分解能量代谢遥孕孕缘袁郧砸和哉悦孕员三者之间的关系还有待进一步的深入研究遥 参考文献院 咱员暂摇灾藻早蚤燥责燥怎造燥泽粤袁匀藻则扎蚤早杂援郧造怎糟燥糟燥则贼蚤糟燥蚤凿泽袁皂藻贼葬遭燥造蚤泽皂葬灶凿皂藻贼葬遭燥造蚤糟凿蚤泽藻葬泽藻泽咱允暂援酝燥造悦藻造造耘灶凿燥糟则蚤灶燥造袁圆园园苑袁圆苑缘渊员原圆冤院源猿原远员援 咱圆暂摇 阅藻葬灶阅粤袁哉则遭葬灶郧袁粤则葬早燥灶陨灾袁藻贼葬造援杂藻则蚤灶藻辕贼澡则藻燥灶蚤灶藻责则燥贼藻蚤灶 责澡燥泽责澡葬贼葬泽藻 缘 渊孕孕缘冤 责葬则贼蚤糟蚤责葬贼藻泽 蚤灶 贼澡藻 则藻早怎造葬贼蚤燥灶 燥枣 早造怎糟燥糟燥则贼蚤糟燥蚤凿则藻糟藻责贼燥则灶怎糟造藻燥糟赠贼燥责造葬泽皂蚤糟泽澡怎贼贼造蚤灶早咱允暂援 月酝悦 悦藻造造月蚤燥造袁圆园园员袁圆院远援 咱猿暂摇 郧燥造凿藻灶栽袁杂憎蚤灶早造藻酝袁匀燥灶噪葬灶藻灶砸耘援 栽澡藻则燥造藻燥枣泽藻则蚤灶藻辕 贼澡则藻燥灶蚤灶藻责则燥贼藻蚤灶责澡燥泽责澡葬贼葬泽藻贼赠责藻缘渊孕孕缘冤蚤灶贼澡藻则藻早怎造葬贼蚤燥灶燥枣 泽贼则藻泽泽鄄蚤灶凿怎糟藻凿泽蚤早灶葬造蚤灶早 灶藻贼憎燥则噪泽 葬灶凿 糟葬灶糟藻则咱允暂援 悦葬灶糟藻则 酝藻贼葬泽贼葬泽蚤泽砸藻增袁圆园园愿袁圆苑渊圆冤院员远怨原员苑愿援 咱源暂摇 允葬糟燥遭宰袁砸燥泽藻灶扎憎藻蚤早阅袁灾葬扎择怎藻扎鄄酝葬则贼蚤灶悦袁藻贼葬造援阅藻糟则藻葬泽藻凿 葬凿蚤责燥早藻灶藻泽蚤泽葬灶凿葬凿蚤责燥泽藻贼蚤泽泽怎藻蚤灶皂蚤糟藻憎蚤贼澡蚤灶葬糟贼蚤增葬贼藻凿责则燥贼藻蚤灶 责澡燥泽责澡葬贼葬泽藻缘咱允暂援月蚤燥糟澡藻皂允袁圆园员缘袁源远远渊员冤院员远猿原员苑远援 咱缘暂摇 匀蚤灶凿泽 栽允袁 杂贼藻糟澡泽糟澡怎造贼藻 蕴粤袁 悦葬泽澡 匀粤袁 藻贼 葬造援 孕则燥贼藻蚤灶 责澡燥泽责澡葬贼葬泽藻缘 皂藻凿蚤葬贼藻泽 造蚤责蚤凿 皂藻贼葬遭燥造蚤泽皂 贼澡则燥怎早澡 则藻糟蚤责则燥糟葬造 糟燥灶贼则燥造燥枣早造怎糟燥糟燥则贼蚤糟燥蚤凿则藻糟藻责贼燥则葬灶凿责藻则燥曾蚤泽燥皂藻责则燥造蚤枣藻则葬贼燥则鄄 葬糟贼蚤增葬贼藻凿则藻糟藻责贼燥则鄄早葬皂皂葬渊孕孕粤砸早葬皂皂葬冤咱允暂援 允月蚤燥造悦澡藻皂袁 圆园员员袁圆愿远渊缘园冤院源圆怨员员原源圆怨圆圆援 咱远暂摇 张曼袁邱彬袁曹勇袁等援共伴侣蛋白云运月孕缘员在高脂诱导肥胖 中的作用咱允暂援中国比较医学杂志袁圆园员缘渊园苑冤院缘猿原缘愿援 咱苑暂摇 杂蚤造增藻则泽贼藻蚤灶粤酝袁郧葬造蚤早灶蚤葬灶葬酝阅袁悦澡藻灶酝杂袁藻贼葬造援 孕则燥贼藻蚤灶 责澡燥泽责澡葬贼葬泽藻缘蚤泽葬皂葬躁燥则糟燥皂责燥灶藻灶贼燥枣早造怎糟燥糟燥则贼蚤糟燥蚤凿则藻糟藻责贼燥则援 澡泽责怨园 糟燥皂责造藻曾藻泽 憎蚤贼澡 责则燥责藻则贼蚤藻泽 燥枣 葬灶 云运缘园远鄄遭蚤灶凿蚤灶早 蚤皂皂怎灶燥责澡蚤造蚤灶咱允暂援 允月蚤燥造悦澡藻皂袁员怨怨苑袁圆苑圆渊圆远冤院员远圆圆源 原员远圆猿园援 咱愿暂摇 杂皂葬泽悦酝袁悦澡藻灶蕴袁在澡葬燥蕴袁藻贼葬造援栽则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶葬造则藻责则藻泽泽蚤燥灶燥枣 责则藻枣鄄员 遭赠 早造怎糟燥糟燥则贼蚤糟燥蚤凿泽 责则燥皂燥贼藻泽 猿栽猿鄄蕴员 葬凿蚤责燥糟赠贼藻 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶咱允暂援 允月蚤燥造悦澡藻皂袁员怨怨怨袁圆苑源渊员愿冤院员圆远猿圆 原员圆远源员援 咱怨暂摇 栽泽藻灶早再匀袁悦赠责藻泽泽粤酝袁运葬澡灶悦砸援悦藻造造怎造葬则遭蚤燥藻灶藻则早藻贼蚤糟泽葬泽葬 贼葬则早藻贼枣燥则燥遭藻泽蚤贼赠贼澡藻则葬责赠咱允暂援晕葬贼砸藻增阅则怎早阅蚤泽糟燥增袁圆园员园袁怨 渊远冤院源远缘原源愿圆援 咱员园暂摇 杂糟澡灶藻蚤凿藻则运袁灾葬造凿藻扎允袁晕早怎赠藻灶允袁藻贼葬造援 陨灶糟则藻葬泽藻凿藻灶藻则早赠 藻曾责藻灶凿蚤贼怎则藻袁哉悦孕员藻曾责则藻泽泽蚤燥灶葬灶凿则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻贼燥凿蚤藻贼鄄蚤灶凿怎糟藻凿 燥遭藻泽蚤贼赠 蚤灶 皂蚤糟藻 造葬糟噪蚤灶早 灶怎糟造藻葬则 枣葬糟贼燥则鄄藻则赠贼澡则燥蚤凿鄄圆 则藻造葬贼藻凿 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶枣葬糟贼燥则鄄圆渊晕则枣圆冤咱允暂援 允月蚤燥造悦澡藻皂袁圆园员远援 凿燥蚤院 员园郾员园苑源辕躁遭糟援酝员员缘郾远苑猿苑缘远 咱员员暂摇 云藻造凿皂葬灶灶匀酝袁郧燥造燥扎燥怎遭燥增葬灾袁悦葬灶灶燥灶月袁藻贼葬造援哉悦孕员葬遭造葬贼蚤燥灶 蚤灶凿怎糟藻泽燥遭藻泽蚤贼赠葬灶凿葬遭燥造蚤泽澡藻泽凿蚤藻贼鄄蚤灶凿怎糟藻凿贼澡藻则皂燥早藻灶藻泽蚤泽蚤灶皂蚤糟藻 藻曾藻皂责贼枣则燥皂贼澡藻则皂葬造泽贼则藻泽泽遭赠造蚤增蚤灶早葬贼贼澡藻则皂燥灶藻怎贼则葬造蚤贼赠咱允暂援悦藻造造 酝藻贼葬遭袁圆园园怨袁怨渊圆冤院圆园猿原圆园怨援 咱员圆暂摇 运燥责藻糟噪赠允袁悦造葬则噪藻郧袁耘灶藻则遭葬糟噪杂袁藻贼葬造援 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣贼澡藻 皂蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤葬造怎灶糟燥怎责造蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶 早藻灶藻 枣则燥皂 贼澡藻 葬孕圆 早藻灶藻 责则燥皂燥贼藻则责则藻增藻灶贼泽早藻灶藻贼蚤糟燥遭藻泽蚤贼赠咱允暂援允悦造蚤灶陨灶增藻泽贼袁员怨怨缘袁怨远 渊远冤院圆怨员源原圆怨圆猿援 咱员猿暂摇 杂燥怎皂葬灶燥运袁阅藻泽遭蚤藻灶泽杂袁砸葬遭藻造燥砸袁藻贼葬造援 郧造怎糟燥糟燥则贼蚤糟燥蚤凿泽 蚤灶澡蚤遭蚤贼贼澡藻贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶葬造则藻泽责燥灶泽藻燥枣贼澡藻怎灶糟燥怎责造蚤灶早责则燥贼藻蚤灶鄄员 早藻灶藻贼燥葬凿则藻灶藻则早蚤糟泽贼蚤皂怎造葬贼蚤燥灶蚤灶葬遭则燥憎灶葬凿蚤责燥泽藻糟藻造造造蚤灶藻咱允暂援 酝燥造悦藻造造耘灶凿燥糟则蚤灶燥造袁圆园园园袁员远缘渊员原圆冤院苑原员缘援 也修回日期页圆园员远原园源原员怨

88 圆园员远年愿月第圆远卷摇第愿期 中国比较医学杂志悦匀陨晕耘杂耘允韵哉砸晕粤蕴韵云悦韵酝孕粤砸粤栽陨灾耘酝耘阅陨悦陨晕耘 粤怎早怎泽贼袁圆园员远灾燥造援圆远摇晕燥援愿 藡 蕥 蕥蕥蕥蕥藡研究报告 蕥蕥蕥蕥藡 蕥藡 利用吗啉代寡核苷酸技术下调早期斑马鱼胚胎造皂灶葬基因的初步研究 刘摇 员袁圆员袁圆袁猿员袁圆圆员袁圆袁猿员袁圆袁源丰袁黄慧敏袁王志华袁吴西军袁何志旭袁舒莉萍 渊员援贵州医科大学免疫学教研室袁贵阳袁贵州摇缘缘园园园源曰圆援贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心袁贵阳袁贵州摇缘缘园园园源曰猿援贵州医科大学附属医院儿科学教研室袁贵阳袁贵州摇缘缘园园园源曰源援贵州医科大学实验动物中心袁贵阳袁贵州摇缘缘园园园源冤 摇摇揖摘要铱摇目的摇利用吗啉代寡核苷酸技术建立下调斑马鱼造皂灶葬基因的技术方法遥方法摇在斑马鱼造皂灶葬基因序列中选择靶点袁设计针对斑马鱼造皂灶葬基因的吗啉代寡核苷酸序列渊造皂灶葬鄄酝韵冤袁构建能特异指示造皂灶葬基因表达圆垣的造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄责悦杂重组质粒袁并通过显微注射方式将二者共注射入斑马鱼胚胎中袁通过观察胚胎中绿色荧光表达量反应造皂灶葬基因表达量袁并通过蛋白质印迹法检测胚胎中造葬皂蚤灶蛋白表达量遥结果摇蛋白质印迹法检测斑马鱼体内造葬皂蚤灶蛋白的表达袁分别有大小为远怨运阅和远圆运阅两种蛋白表达遥设计并构建了造皂灶葬鄄酝韵和重组质粒造皂灶葬鄄圆垣圆垣耘郧云孕鄄责悦杂袁单独注射造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄责悦杂质粒后观察到从远澡责枣到怨远澡责枣胚胎均有绿色荧光蛋白表达曰二者共注射后观察到袁与对照组相比袁实验组从远澡责枣至猿园澡责枣胚胎中绿色荧光蛋白表达量均不同程度下降或消失曰蛋白质印迹实验结果显示实验组胚胎内造葬皂蚤灶蛋白表达量明显下降遥表明已成功下调了斑马鱼胚胎造皂灶葬基因表达遥结论圆垣可通过造皂灶葬鄄酝韵和重组质粒造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄责悦杂共注射方法下调斑马鱼造皂灶葬基因表达袁并通过绿色荧光蛋白表达量反映下调效果遥该方法可为深入研究人核纤层病提供良好的动物模型遥揖关键词铱摇斑马鱼曰造皂灶葬曰基因下调曰吗啉代寡核苷酸技术揖中图分类号铱砸鄄猿猿摇摇揖文献标识码铱粤摇摇揖文章编号铱员远苑员鄄苑愿缘远渊圆园员远冤园愿鄄园园愿缘鄄园远凿燥蚤院员园郾猿怨远怨援躁援蚤泽泽灶援员远苑员原苑愿缘远郾圆园员远郾园愿郾园员源 杂贼怎凿赠燥灶贼澡藻造皂灶葬早藻灶藻噪灶燥糟噪凿燥憎灶蚤灶扎藻遭则葬枣蚤泽澡藻皂遭则赠燥憎蚤贼澡皂燥则责澡燥造蚤灶燥燥造蚤早燥灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻泽 员袁圆员袁猿员袁圆蕴陨哉云藻灶早袁匀哉粤晕郧匀怎蚤鄄皂蚤灶袁宰粤晕郧在澡蚤鄄澡怎葬袁圆员袁猿员袁圆袁源宰哉载蚤鄄躁怎灶袁匀耘在澡蚤鄄曾怎袁杂匀哉蕴蚤鄄责蚤灶早渊员援郧怎蚤扎澡燥怎孕则燥增蚤灶糟蚤葬造运藻赠蕴葬遭燥则葬贼燥则赠枣燥则砸藻早藻灶藻则葬贼蚤增藻酝藻凿蚤糟蚤灶藻袁杂贼藻皂悦藻造造葬灶凿栽蚤泽泽怎藻耘灶早蚤灶藻藻则蚤灶早砸藻泽藻葬则糟澡悦藻灶贼藻则葬灶凿杂蚤灶燥鄄哉杂允燥蚤灶贼蕴葬遭燥则葬贼燥则赠枣燥则酝藻凿蚤糟葬造杂糟蚤藻灶糟藻泽袁郧怎蚤扎澡燥怎酝藻凿蚤糟葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁郧怎蚤赠葬灶早缘缘园园园源袁悦澡蚤灶葬曰圆援阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣陨皂皂怎灶燥造燥早赠袁猿援阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣孕藻凿蚤葬贼则蚤糟泽袁源援蕴葬遭燥则葬贼燥则赠粤灶蚤皂葬造悦藻灶贼藻则袁郧怎蚤扎澡燥怎酝藻凿蚤糟葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁郧怎蚤赠葬灶早缘缘园园园源冤 摇摇揖粤遭泽贼则葬糟贼铱摇韵遭躁藻糟贼蚤增藻摇蕴葬皂蚤灶泽葬则藻贼澡藻皂葬躁燥则糟燥皂责燥灶藻灶贼泽燥枣灶怎糟造藻葬则造葬皂蚤灶葬怎灶凿藻则灶藻葬贼澡贼澡藻蚤灶灶藻则灶怎糟造藻葬则皂藻皂遭则葬灶藻渊陨晕酝冤援蕴葬皂蚤灶泽藻曾责则藻泽泽蚤灶皂燥泽贼糟藻造造泽葬灶凿葬则藻蚤灶增燥造增藻凿蚤灶贼澡藻憎澡燥造藻责则燥糟藻泽泽燥枣早则燥憎贼澡袁葬造泽燥责造葬赠葬皂葬躁燥则则燥造藻蚤灶糟藻造造泽贼葬遭蚤造蚤贼赠葬灶凿藻皂遭则赠燥灶蚤糟凿藻增藻造燥责皂藻灶贼援酝怎贼葬灶贼蚤灶澡怎皂葬灶蕴酝晕粤早藻灶藻皂葬赠造藻葬凿贼燥葬泽藻则蚤藻泽燥枣凿蚤泽燥则凿藻则泽袁憎澡蚤糟澡葬则藻泽蚤皂蚤造葬则贼燥 咱基金项目暂国家自然科学基金项目资助渊晕韵援猿员圆远园圆愿源冤遥咱作者简介暂刘丰渊员怨愿怨原冤袁男袁硕士研究生袁研究方向院儿童血液系统和免疫系统疾病遥咱通讯作者暂何志旭袁男袁博士袁教授袁研究方向院儿童血液系统和免疫系统疾病曰舒莉萍袁女袁博士袁副教授袁研究方向院儿童血液系统和免疫系统疾病袁耘鄄皂葬蚤造院早赠泽造责赃源缘远岳员远猿援糟燥皂遥

89 愿远中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 责则燥早藻则蚤葬燥则燥贼澡藻则葬早蚤灶早鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼藻泽赠灶凿则燥皂藻援陨灶贼澡蚤泽泽贼怎凿赠袁憎藻则藻责燥则贼葬灶藻憎造皂灶葬噪灶燥糟噪凿燥憎灶葬灶蚤皂葬造皂燥凿藻造早藻灶藻则葬贼藻凿蚤灶燥怎则造葬遭燥则葬贼燥则赠蚤灶燥则凿藻则贼燥责则燥增蚤凿藻葬怎泽藻枣怎造贼燥燥造枣燥则泽贼怎凿赠蚤灶早造葬皂蚤灶燥责葬贼澡蚤藻泽援酝藻贼澡燥凿泽摇栽憎燥责造葬泽皂蚤凿泽贼葬早早藻凿贼燥扎藻遭则葬枣蚤泽澡造皂灶葬早藻灶藻憎藻则藻凿藻泽蚤早灶藻凿遭葬泽藻凿燥灶皂燥则责澡燥造蚤灶燥燥造蚤早燥灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻泽贼藻糟澡灶燥造燥早赠援悦燥鄄皂蚤糟则燥蚤灶躁藻糟贼藻凿贼澡藻责造葬泽皂蚤凿泽蚤灶贼燥扎藻遭则葬枣蚤泽澡藻皂遭则赠燥泽贼燥噪灶燥糟噪凿燥憎灶造皂灶葬早藻灶藻援陨皂葬早蚤灶蚤灶早葬灶凿憎藻泽贼藻则灶遭造燥贼凿藻贼藻糟贼蚤燥灶憎藻则藻怎泽藻凿贼燥蚤凿藻灶贼蚤枣赠贼澡藻皂怎贼葬灶贼泽援砸藻泽怎造贼泽摇栽憎燥凿蚤枣枣藻则藻灶贼圆垣责则燥贼藻蚤灶泽袁蕴葬皂蚤灶粤辕悦袁憎藻则藻藻曾责则藻泽泽藻凿蚤灶贼澡藻扎藻遭则葬枣蚤泽澡藻皂遭则赠燥泽援栽憎燥责造葬泽皂蚤凿泽造皂灶葬鄄酝韵葬灶凿造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄责悦杂憎藻则藻早藻灶藻则葬贼藻凿葬灶凿糟燥鄄皂蚤糟则燥蚤灶躁藻糟贼藻凿蚤灶贼燥藻皂遭则赠燥泽援栽澡藻则藻泽怎造贼泽燥枣蚤皂葬早蚤灶蚤灶早葬灶凿憎藻泽贼藻则灶遭造燥贼泽澡燥憎藻凿贼澡葬贼贼澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣造皂灶葬早藻灶藻憎葬泽凿燥憎灶则藻早怎造葬贼藻凿蚤灶贼澡藻扎藻遭则葬枣蚤泽澡藻皂遭则赠燥泽援悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶泽摇蕴葬皂蚤灶粤辕悦葬则藻藻曾责则藻泽泽藻凿蚤灶扎藻遭则葬枣蚤泽澡援造皂灶葬早藻灶藻糟葬灶遭藻圆垣噪灶燥糟噪藻凿凿燥憎灶遭赠贼澡藻蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶燥枣造皂灶葬鄄酝韵葬灶凿造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄责悦杂援栽澡蚤泽灶藻憎葬灶蚤皂葬造皂燥凿藻造皂葬赠遭藻葬责燥憎藻则枣怎造贼燥燥造枣燥则泽贼怎凿赠燥灶造葬皂蚤灶燥责葬贼澡蚤藻泽援揖运藻赠憎燥则凿泽铱摇在藻遭则葬枣蚤泽澡曰造皂灶葬曰郧藻灶藻噪灶燥糟噪凿燥憎灶曰酝燥则责澡燥造蚤灶燥燥造蚤早燥灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻泽曰蕴葬皂蚤灶燥责葬贼澡赠 摇摇核纤层蛋白渊造葬皂蚤灶泽冤属于灾型中间纤维蛋白家族渊蚤灶贼藻则皂藻凿蚤葬贼藻枣蚤造葬皂藻灶贼袁陨云冤成员袁它是细胞骨架的重要组成部分袁可维持核膜正常形态袁同时影响咱员袁圆暂阅晕粤复制尧阅晕粤损伤修复和转录遥蕴葬皂蚤灶泽及其相关蛋白的突变可导致人核纤层蛋白病袁由于造葬皂蚤灶粤辕悦几乎表达于所有的细胞和组织袁高度组织特异性和在相同基因不同突变位点导致的疾病的广泛性相对复杂遥尽管国内外已进行大量研究袁核纤层咱猿原远暂蛋白病潜在的分子机制仍亟待解释遥斑马鱼是近年新兴的重要模式生物体袁其具有体外受精袁胚胎透明袁与人类基因高度同源袁繁殖发育迅速袁成熟快袁体积小袁可用于高通量大规模筛选咱苑袁愿暂突变型袁便于建立疾病模型等优点遥目前较前沿的基因下调方法有吗啉代寡核苷酸技术袁该技术稳定且应用广泛袁成本较低袁不会被核酸酶所降解袁水溶性好袁对细胞无毒副作用袁并且不会和人工合成的砸晕粤一样袁激活细胞干扰素的分泌袁激发免疫应答袁特异性好袁是如今广泛应用于斑马鱼的高效咱怨原员园暂基因下调方法之一遥本实验构建有增强绿色荧光蛋白渊耘郧云孕冤标记的斑马鱼造皂灶葬基因的质粒袁并设计靶向斑马鱼造皂灶葬基因的吗啉反义寡核苷酸袁利用吗啉代寡核苷 酸技术下调斑马鱼造皂灶葬基因的表达遥以绿色荧光蛋白表达量作为造皂灶葬表达下调的标志袁从而建立下调造皂灶葬基因表达的斑马鱼动物模型袁为核纤层病的深入研究提供动物模型遥员摇材料和方法员郾员摇吗啉代寡核苷酸序列设计利用吗啉代寡核苷酸技术抑制内源性造皂灶葬基因的表达遥吗啉代寡核苷酸针对基因编码起始位点粤栽郧设计袁作用于皂砸晕粤的翻译起始位点粤哉郧附近或者粤哉郧上游的缘爷非编码区渊怎灶贼则葬灶泽造葬贼蚤燥灶则藻早蚤燥灶袁哉栽砸冤区域袁它与皂砸晕粤的结合阻碍了核糖体的翻译起始复合体向翻译起始位点的移动袁从而导致多肽的合成过程无法起始遥由于粤栽郧对于造皂灶葬基因的起始翻译有着至关重要的作用袁所以设计吗啉代寡核苷酸时避开粤栽郧起始区袁于其缘爷哉栽砸区设计反义的寡核苷酸袁使得外源性皂砸晕粤翻译表达不受影响袁如图员遥造皂灶葬鄄酝韵的靶序列位于造皂灶葬基因的缘爷哉栽砸端袁糟燥灶贼则燥造鄄酝韵的序列由无意的圆缘个碱基序列组成袁结构稳定却不与任何基因的皂砸晕粤结合袁作为实验对照组遥 云蚤早援员摇 图员摇 吗啉代寡核苷酸设计示意图 陨造造怎泽贼则葬贼蚤燥灶燥枣贼澡藻凿藻泽蚤早灶燥枣皂燥则责澡燥造蚤灶燥燥造蚤早燥灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻泽

90 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 愿苑 圆垣员郾圆摇构建造皂灶葬鄄责悦杂质粒圆垣本实验以不含缘爷哉栽砸端序列的造皂灶葬鄄责悦杂质粒为模板袁设计上游引物包括吗啉代寡核苷酸序列前后各加一个碱基渊共圆苑个冤袁后加粤栽郧起始密码圆垣子后的圆园个碱基曰根据责悦杂载体及目的基因选取限制性内切酶袁上游引物的缘爷端选择加月葬皂匀陨酶切位点袁下游引物的缘爷端选择加耘糟燥砸陨酶切位点袁通过孕悦砸法克隆两端含有合适酶切位点的造皂灶葬片圆垣段袁长度为缘园员遭责遥将造皂灶葬片段连入责悦杂载体圆垣中袁构建造皂灶葬鄄责悦杂质粒遥圆垣员郾猿摇构建造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄责悦杂质粒该质粒用于吗啉代寡核苷酸的效能测定袁双酶圆垣切耘郧云孕鄄责悦杂质粒袁获取耘郧云孕片段袁将耘郧云孕片圆垣段连接入造皂灶葬鄄责悦杂重组质粒中袁构建造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄圆垣责悦杂重组质粒遥 圆摇 结果 圆郾员摇蛋白质印迹实验验证斑马鱼中造皂灶葬基因编码蛋白质的表达收集野生型斑马鱼胚胎袁检测造皂灶葬基因表达蛋白袁斑马鱼造皂灶葬基因表达的蛋白有两种袁大小分别为远怨噪阅葬和远圆噪阅葬袁茁鄄葬糟贼蚤灶为内参基因袁大小为源猿噪阅葬袁如图圆所示遥圆垣圆郾圆摇造皂灶葬鄄酝韵及造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄责悦杂重组质粒构建本实验针对造皂灶葬缘忆哉栽砸端的序列设计了一条针对造皂灶葬缘忆哉栽砸的反义寡核苷酸序列袁同时用圆垣糟燥灶贼则燥造鄄酝韵作为对照遥构建造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄责悦杂质粒袁用于造皂灶葬鄄酝韵测效袁检测是否能有效抑制造皂灶葬基因的表达遥构建重组质粒的造皂灶葬片段主要是含有吗啉代寡核苷酸靶向的缘忆哉栽砸序列袁将克隆的造皂灶葬圆垣片段与责悦杂载体通过栽源连接酶进行粘性末端连圆垣接袁构建造皂灶葬鄄责悦杂重组质粒遥将耘郧云孕片段插入圆垣圆垣造皂灶葬鄄责悦杂重组质粒中袁构建造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄责悦杂重组质粒遥利用孕悦砸法克隆造皂灶葬片段袁约缘园员遭责袁如图猿所示遥 圆垣将克隆的造皂灶葬片段与责悦杂载体通过栽源连接圆垣酶进行粘性末端连接袁构建造皂灶葬鄄责悦杂重组质粒袁将重组质粒行测序检测袁测序结果显示重组质粒中含有吗啉代寡核苷酸靶向的缘忆哉栽砸序列袁如图源所示遥圆垣构建造皂灶葬鄄责悦杂重组质粒成功之后袁还需插入耘郧云孕片段遥利用耘糟燥砸陨和载遭葬陨两个限制性内切酶圆垣双酶切耘郧云孕鄄责悦杂重组质粒袁得到耘郧云孕片段大小圆垣约苑员苑遭责袁如图缘所示遥与造皂灶葬鄄责悦杂重组质粒相圆垣连袁构建造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄责悦杂重组质粒遥耘郧云孕片段不含粤栽郧袁连于造皂灶葬后袁使得耘郧云孕特异性表达于造皂灶葬片段之后袁可通过荧光显微下观察绿色荧光蛋白的表达袁即造皂灶葬基因的表达遥圆垣将酶切获得的耘郧云孕片段插入造皂灶葬鄄责悦杂重组质粒中袁栽源连接酶进行粘性末端连接袁构建造皂灶葬鄄圆垣耘郧云孕鄄责悦杂重组质粒袁将重组质粒测序袁结果如图远所示遥 圆郾猿摇野生型斑马鱼胚胎造皂灶葬鄄酝韵及造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄圆垣责悦杂显微注射圆垣显微注射造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄责悦杂质粒入野生型斑马鱼单胚胎期胚胎袁荧光显微镜下观察胚胎表达绿色荧光蛋白袁可见远澡责枣渊澡燥怎则泽责燥泽贼鄄枣藻则贼蚤造蚤扎葬贼蚤燥灶袁受精后小时数冤开始胚胎中有造皂灶葬基因广泛表达袁直至苑圆澡责枣表达量开始下降袁如图苑粤鄄郧所示遥证实该质粒中耘郧云孕能有效示踪造皂灶葬基因的表达袁可用于圆垣造皂灶葬鄄酝韵的效能鉴定遥单独注射造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄责悦杂 图圆摇斑马鱼中造皂灶葬尧茁鄄葬糟贼蚤灶基因编码蛋白质的表达云蚤早援圆摇耘曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣贼澡藻责则燥贼藻蚤灶燥枣造皂灶葬葬灶凿茁鄄葬糟贼蚤灶早藻灶藻蚤灶扎藻遭则葬枣蚤泽澡 渊员院阅晕粤皂葬则噪藻则芋袁圆院造皂灶葬孕悦砸产物袁猿院空白对照冤图猿摇斑马鱼造皂灶葬基因的孕悦砸产物电泳图渊员院阅晕粤皂葬则噪藻则芋曰圆院造皂灶葬孕悦砸责则燥凿怎糟贼曰猿院月造葬灶噪冤云蚤早援猿摇耘造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽则藻泽怎造贼泽燥枣扎藻遭则葬枣蚤泽澡造皂灶葬早藻灶藻孕悦砸责则燥凿怎糟贼泽

91 愿愿中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 图源摇云蚤早援源摇 圆垣造皂灶葬鄄责悦杂重组质粒测序结果 圆垣栽澡藻泽藻择怎藻灶糟蚤灶早则藻泽怎造贼燥枣造皂灶葬鄄责悦杂责造葬泽皂蚤凿 图缘摇 圆垣渊员院阅晕粤皂葬则噪藻则芋曰圆院耘郧云孕鄄责悦杂 圆垣酶切产物曰猿院责悦杂酶切产物冤 双酶切电泳图渊耘糟燥砸陨和载遭葬陨冤 圆垣圆垣渊员院阅晕粤皂葬则噪藻则陨陨陨曰圆院耘郧云孕鄄责悦杂曰猿院责悦杂冤 云蚤早援缘摇栽澡藻藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽泽澡燥憎泽贼澡藻则藻泽怎造贼泽燥枣凿燥怎遭造藻凿蚤早藻泽贼蚤燥灶憎蚤贼澡耘糟燥砸陨葬灶凿载遭葬陨 图苑摇 渊粤鄄郧图分别为不同时相胚胎的白场和荧光图曰圆垣匀鄄运院造皂灶葬鄄酝韵尧造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄责悦杂质粒混合注射组冤 圆垣造皂灶葬鄄酝韵袁造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄责悦杂显微注射后的荧光表达情况 渊粤鄄郧泽澡燥憎贼澡藻憎澡蚤贼藻枣蚤藻造凿葬灶凿枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻责澡燥贼燥泽燥枣垣凿蚤枣枣藻则藻灶贼责澡葬泽藻藻皂遭则赠燥泽曰匀鄄运院造皂灶葬鄄酝韵袁造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄责悦杂圆 云蚤早援苑摇 责造葬泽皂蚤凿糟燥鄄皂蚤糟则燥蚤灶躁藻糟贼藻凿早则燥怎责冤 圆垣栽澡藻枣造怎燥则藻泽糟藻灶贼藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣贼澡藻造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄责悦杂 光蛋白之前的造皂灶葬基因表达被下调袁如图苑匀鄄运所示遥圆郾源摇蛋白质印迹实验检测显示实验组造葬皂蚤灶蛋白表达量下降采用蛋白质印迹实验检测发现对照组野生型斑马鱼胚胎表达两种造葬皂蚤灶蛋白渊即造葬皂蚤灶泽粤辕悦冤遥实验组斑马鱼造皂灶葬基因皂砸晕粤翻译受阻袁蛋白合成出现障碍袁与对照组相较袁造葬皂蚤灶蛋白表达水平明显降低袁如图愿所示遥 图远摇云蚤早援远摇 圆垣造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄责悦杂重组质粒测序结果 圆垣栽澡藻泽藻择怎藻灶糟蚤灶早则藻泽怎造贼泽燥枣造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄责悦杂责造葬泽皂蚤凿 质粒在荧光显微镜下可观察到绿色荧光在不同时期胚胎中泛在表达袁而将造皂灶葬鄄酝韵与造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄圆垣责悦杂质粒共注射入野生型斑马鱼单胚胎期胚胎后袁各时相胚胎中绿色荧光均消失袁即位于绿色荧 图愿摇核纤层蛋白在斑马鱼体内的表达云蚤早援愿摇耘曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣造葬皂蚤灶责则燥贼藻蚤灶蚤灶贼澡藻扎藻遭则葬枣蚤泽澡

92 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 愿怨 猿摇 讨论 核纤层普遍存在于高等动物的真核细胞的细胞核中袁主要成分是核纤层蛋白袁其向外与内层核膜上的蛋白结合袁向内与染色质的特定区段结咱员员袁员圆暂合遥核纤层蛋白除了参与细胞核形状和大小的维持袁还参与阅晕粤的复制尧有丝分裂中染色体的咱员猿暂重组尧细胞信号传导和细胞凋亡等过程遥核纤层蛋白病是由于蕴酝晕粤基因突变所导致的疾病袁目前有员愿园多个蕴酝晕粤突变型被报道袁但具体的发病机咱员源原员远暂制仍不清楚袁还需进一步研究与探讨遥模式生物作为基因功能研究常用对象袁其生长发育过程在长期的进化过程中具有高度的保守性袁是研究人类发育尧系统功能尧疾病发生发展等的重要工具遥目前常用的模式生物有大小鼠尧斑马鱼尧果蝇等袁本实验选用斑马鱼为研究对象袁斑马鱼具有胚胎透明尧体外发育尧体积小尧繁殖率高及鱼种发育遗传背景清晰等优点使其成为研究脊椎动物袁特别是研究人咱员苑原员怨暂类发育和疾病的模式物种之一遥本实验用蛋白质印迹法检测斑马鱼中造葬皂蚤灶蛋白的表达袁检测出两个蛋白条带袁即造葬皂蚤灶粤辕悦遥成圆垣功构建造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄责悦杂质粒用于吗啉代寡核苷酸测效遥造皂灶葬鄄酝韵序列位于造皂灶葬基因缘爷哉栽砸端袁即位于非编码区袁通过砸栽鄄孕悦砸法不可直接克隆针对圆垣缘爷哉栽砸的造皂灶葬片段袁故将造皂灶葬鄄责悦杂质粒为模板袁设计特异性引物袁通过孕悦砸法将缘爷哉栽砸的非编码区片段克隆袁并与耘郧云孕片段相连袁构建造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄圆垣责悦杂质粒袁该耘郧云孕片段不含粤栽郧袁其与造皂灶葬基因片段相连袁通过造皂灶葬基因片段的粤栽郧端编码翻译绿色荧光蛋白袁并利用绿色荧光蛋白监测造皂灶葬基因的表达袁用于吗啉代寡核苷酸测效袁由于造皂灶葬基因和耘郧云孕均由粤栽郧起始密码子驱动表达袁故在注射圆垣后其可在胚胎中泛在表达遥造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄责悦杂质粒显微注射入斑马鱼单细胞期胚胎中袁于荧光显微镜下直接观察绿色荧光表达情况袁荧光表达从远澡责枣在全胚胎广泛表达袁至猿园澡责枣时逐渐减少以致苑圆澡责枣后完全消失袁而共注射组从远澡责枣至猿园澡责枣均无绿色荧光蛋白表达袁与对照组相比表明造皂灶葬鄄酝韵特异下调了斑马鱼胚胎中造皂灶葬基因的表达量曰而苑圆澡责枣之后荧光蛋白表达的减少则可能由于酝韵的活性与重组质粒表达效应随胚胎发育的下降导致袁故造皂灶葬鄄酝韵可特异下调早期斑马鱼胚胎造皂灶葬基因的表达量遥 显微注射法是一种应用于基因功能研究的技术袁通过显微注射相关基因的阅晕粤和皂砸晕粤实现特定基因的过表达遥利用吗啉代寡核苷酸技术建立特定基因下调模型袁吗啉反义寡核苷酸渊责澡燥泽责澡燥则燥凿蚤葬皂蚤凿葬贼藻皂燥则责澡燥造蚤灶燥燥造蚤早燥皂藻则泽袁孕酝韵冤属于第三代反义寡核苷酸袁是逆向遗传学技术的一种遥吗啉代寡核苷酸技术的原理基于砸晕粤的五元核糖骨架被含有氮和氧的六元环替代袁并相连于粤尧栽尧悦尧郧等碱基遥砸晕粤鄄酝韵进入细胞后袁可以和目的基因皂砸晕粤结合袁形成砸晕粤鄄砸晕粤双链袁抑制细胞内正常皂砸晕粤的剪接过程袁从而达到抑制基因表达的目的遥吗啡啉有抑制起始翻译袁减少传统反义寡核苷酸非特异性的效应袁是一种新型反义寡核苷酸袁具有良好的稳定性尧溶解度和细胞渗透性袁因此这种双链结构能稳定存在于生物体内袁抵抗多种核酸酶和蛋白酶袁不易降解袁易溶于水袁能在细胞中存留较长的时间遥吗啉代寡核苷酸可以靶向于目的皂砸晕粤袁编码的蛋白质是多样化的袁包括配体尧跨膜受体尧细胞内的蛋白质和转录因子遥本实验设计的吗啉代寡核苷酸序列与目的基因皂砸晕粤缘爷翻译起始序列附近大小为圆缘个碱基序列互补袁在目的基因皂砸晕粤缘爷端形成稳定的砸晕粤鄄砸晕粤双链袁通过阻碍皂砸晕粤和核糖体的结合而阻断造皂灶葬基因的起始翻圆垣译过程遥将造皂灶葬鄄耘郧云孕鄄责悦杂质粒与特异性的吗啉代寡核苷酸共注射入斑马鱼单细胞期胚胎中袁各时相胚胎中绿色荧光均消失袁即位于绿色荧光蛋白之前的造皂灶葬基因表达被下调袁说明造皂灶葬鄄酝韵可以有效下调造皂灶葬基因的表达遥蛋白质印迹实验结果同样证实了实验组斑马鱼造皂灶葬基因皂砸晕粤翻译受阻袁蛋白合成出现障碍袁与对照组相较袁造皂灶葬蛋白表达水平明显降低遥说明实验组斑马鱼体内造皂灶葬蛋白已被下调遥本实验成功构建了吗啉代寡核苷酸技术下调斑马鱼造皂灶葬基因表达所需的重组质粒造皂灶葬鄄酝韵及可用于特异性指示造皂灶葬基因下调的重组质粒造皂灶葬鄄圆垣耘郧云孕鄄责悦杂遥通过显微注射的方法将两者共注射入野生型斑马鱼单细胞期胚胎中袁通过绿色荧光蛋白表达量反应造皂灶葬基因表达量遥成功建立了下调造皂灶葬基因的斑马鱼模型袁该模型为深入研究人核纤层病提供了良好的动物模型遥 参考文献院 咱员暂摇郧燥则凿燥灶蕴月袁砸燥贼澡皂葬灶云郧袁蕴佼责藻扎鄄韵贼侏灶悦袁藻贼葬造援孕则燥早藻则蚤葬院葬责葬则葬凿蚤早皂枣燥则贼则葬灶泽造葬贼蚤燥灶葬造皂藻凿蚤糟蚤灶藻咱允暂援悦藻造造袁圆园员源袁员缘远渊猿冤院

93 怨园中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 源园园原源园苑援 咱圆暂摇 孕则燥噪燥糟蚤皂藻则酝袁月葬则噪葬灶砸袁郧则怎藻灶遭葬怎皂再援 匀怎贼糟澡蚤灶泽燥灶鄄郧蚤造枣燥则凿 责则燥早藻则蚤葬泽赠灶凿则燥皂藻贼澡则燥怎早澡贼澡藻造藻灶泽燥枣贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶咱允暂援粤早蚤灶早 悦藻造造袁圆园员猿袁员圆渊源冤院缘猿猿原缘源猿援 咱猿暂摇 杂糟葬枣枣蚤凿蚤孕袁郧燥则凿燥灶蕴袁酝蚤泽贼藻造蚤栽援栽澡藻糟藻造造灶怎糟造藻怎泽葬灶凿葬早蚤灶早院 贼葬灶贼葬造蚤扎蚤灶早糟造怎藻泽葬灶凿澡燥责藻枣怎造责则燥皂蚤泽藻泽咱允暂援孕蕴燥杂月蚤燥造袁圆园园缘袁猿 渊员员冤院藻猿怨缘援 咱源暂摇 粤造鄄杂葬葬蚤凿蚤砸袁月则燥泽泽孕援 阅燥造葬皂蚤灶粤葬灶凿造葬皂蚤灶悦澡葬增藻怎灶蚤择怎藻 则燥造藻泽钥咱允暂援悦澡则燥皂燥泽燥皂葬袁圆园员缘员圆源渊员冤院员原员圆援 咱缘暂摇 阅葬增蚤凿泽燥灶孕酝袁蕴葬皂皂藻则凿蚤灶早允援月则燥噪藻灶灶怎糟造藻蚤要造葬皂蚤灶泽袁灶怎糟造藻葬则 皂藻糟澡葬灶蚤糟泽袁葬灶凿凿蚤泽藻葬泽藻咱允暂援栽则藻灶凿泽悦藻造造月蚤燥造袁圆园员源袁圆源渊源冤院 圆源苑原圆缘远援 咱远暂摇 运蚤灶凿允袁增葬灶杂贼藻藻灶泽藻造月援 杂贼燥糟澡葬泽贼蚤糟早藻灶燥皂藻鄄灶怎糟造藻葬则造葬皂蚤灶葬 蚤灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶泽院皂燥凿怎造葬贼蚤灶早则燥造藻泽燥枣蕴葬皂蚤灶粤葬灶凿月粤云咱允暂援 晕怎糟造藻怎泽袁圆园员源袁缘渊圆冤院员圆源原员猿园援 咱苑暂摇 杂澡怎蕴孕袁在澡燥怎在宰袁在澡燥怎栽袁藻贼葬造援耘糟贼燥责蚤糟藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣匀燥曾遭源葬 蚤灶澡藻皂葬灶早蚤燥遭造葬泽贼泽责则燥皂燥贼藻泽澡藻皂葬贼燥责燥蚤藻贼蚤糟凿藻增藻造燥责皂藻灶贼蚤灶藻葬则造赠 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽燥枣扎藻遭则葬枣蚤泽澡咱允暂援悦造蚤灶耘曾责孕澡葬则皂葬糟燥造孕澡赠泽蚤燥造袁 圆园员缘袁源圆渊员圆冤院员圆苑缘原员圆愿远援 咱愿暂摇 刘静袁何嘉玲袁暴国袁等援应用栽粤蕴耘晕技术敲除早葬贼葬源基因 建立斑马鱼先天性心脏病模型咱允暂援中国比较医学杂志袁 圆园员缘袁圆缘渊源冤院员原苑袁员猿 咱怨暂摇 陨遭则葬澡蚤皂 酝载袁 杂葬赠蚤灶 灾陨袁 粤噪怎造葬 酝运袁 藻贼 葬造援 栽葬则早藻贼蚤灶早 蚤泽燥责则藻灶赠造糟赠泽贼藻蚤灶藻皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶葬皂藻造蚤燥则葬贼藻泽凿蚤泽藻葬泽藻蚤灶葬皂燥怎泽藻 皂燥凿藻造燥枣责则燥早藻则蚤葬咱允暂援 杂糟蚤藻灶糟藻袁圆园员猿袁猿源园渊远员猿愿冤院员猿猿园 原员猿猿猿援 咱员园暂摇 蕴蚤怎月袁在澡燥怎在援蕴葬皂蚤灶粤辕悦袁造葬皂蚤灶燥责葬贼澡蚤藻泽葬灶凿责则藻皂葬贼怎则藻葬早藻蚤灶早 咱允暂援匀蚤泽贼燥造匀蚤泽贼燥责葬贼澡燥造援圆园园愿袁圆猿渊远冤院苑源苑原苑远猿援 咱员员暂摇 悦葬皂燥扎扎蚤阅袁悦葬责葬灶灶蚤悦袁悦藻灶灶蚤 灾袁 藻贼 葬造援 阅蚤增藻则泽藻 造葬皂蚤灶鄄 凿藻责藻灶凿藻灶贼皂藻糟澡葬灶蚤泽皂泽蚤灶贼藻则葬糟贼贼燥糟燥灶贼则燥造糟澡则燥皂葬贼蚤灶凿赠灶葬皂蚤糟泽援 云燥糟怎泽燥灶造葬皂蚤灶燥责葬贼澡蚤藻泽咱允暂援晕怎糟造藻怎泽袁圆园员源袁缘渊缘冤院源圆苑原源源园援 咱员圆暂摇 匀蚤则贼造藻鄄蕴藻憎蚤泽酝袁阅藻泽遭蚤藻灶泽运袁砸怎藻造陨袁藻贼葬造援 栽澡藻早藻灶藻贼蚤糟泽燥枣 凿蚤造葬贼藻凿糟葬则凿蚤燥皂赠燥责葬贼澡赠院葬责则蚤燥则蚤贼蚤扎藻凿糟葬灶凿蚤凿葬贼藻早藻灶藻泽贼怎凿赠燥枣 蕴酝晕粤袁栽晕晕栽圆袁栽悦粤孕袁葬灶凿孕蕴晕咱允暂援悦造蚤灶悦葬则凿蚤燥造袁圆园员猿袁猿远 渊员园冤院远圆愿原远猿猿援 咱员猿暂摇 月葬则贼澡佴造佴皂赠云袁晕葬增葬则则燥悦袁云葬赠藻噪砸袁藻贼葬造援栽则怎灶糟葬贼藻凿责则藻造葬皂蚤灶粤 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶蚤灶匀郧孕杂鄄造蚤噪藻责葬贼蚤藻灶贼泽院葬贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶葬造泽贼怎凿赠咱允暂援 耘怎则允匀怎皂郧藻灶藻贼袁圆园员缘袁圆猿渊愿冤院员园缘员原员园远员援 咱员源暂摇 匀葬凿躁鄄砸葬遭蚤葬杂袁酝葬泽澡蚤葬澡允袁砸燥造造孕袁藻贼葬造援 粤灶藻憎造葬皂蚤灶粤 皂怎贼葬贼蚤燥灶葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿憎蚤贼澡葬糟则燥早藻则蚤葬泽赠灶凿则燥皂藻咱允暂援 允陨灶增藻泽贼 阅藻则皂葬贼燥造袁圆园员源袁员猿源渊愿冤院圆圆苑源原圆圆苑苑援 咱员缘暂摇 酝葬造葬泽澡蚤糟澡藻增葬粤袁月燥早凿葬灶燥增葬酝袁在葬遭蚤则灶赠噪粤袁藻贼葬造援 灾葬则蚤燥怎泽 造葬皂蚤灶粤辕悦皂怎贼葬贼蚤燥灶泽葬造贼藻则藻曾责则藻泽泽蚤燥灶责则燥枣蚤造藻燥枣皂藻泽藻灶糟澡赠皂葬造泽贼藻皂 糟藻造造泽蚤灶皂怎贼葬贼蚤燥灶泽责藻糟蚤枣蚤糟皂葬灶灶藻则咱允暂援酝燥造郧藻灶藻贼酝藻栽葬遭袁圆园员缘袁 员员缘渊圆原猿冤院员员愿原员圆苑援 咱员远暂摇 再葬灶早杂匀袁孕则燥糟葬糟糟蚤葬杂袁允怎灶早匀允袁藻贼葬造援 酝蚤糟藻贼澡葬贼藻曾责则藻泽泽 枣葬则灶藻泽赠造葬贼藻凿增藻则泽蚤燥灶泽燥枣责则藻造葬皂蚤灶粤蚤灶灶藻怎则燥灶泽凿藻增藻造燥责葬糟澡葬造葬泽蚤葬 咱允暂援匀怎皂酝燥造郧藻灶藻贼袁圆园员缘袁圆源渊员园冤院圆愿圆远原圆愿源园援 咱员苑暂摇 月藻则皂葬灶允晕袁运葬灶噪蚤允孕袁蕴燥燥噪栽粤援 在藻遭则葬枣蚤泽澡葬泽葬皂燥凿藻造枣燥则 皂赠藻造燥责燥蚤藻泽蚤泽凿怎则蚤灶早藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽咱允暂援耘曾责匀藻皂葬贼燥造袁圆园园缘袁猿猿院怨怨苑原员园园远援咱员愿暂摇阅葬增蚤凿泽燥灶粤允袁在燥灶蕴陨援栽澡藻耶凿藻枣蚤灶蚤贼蚤增藻爷渊葬灶凿耶责则蚤皂蚤贼蚤增藻爷冤早怎蚤凿藻贼燥扎藻遭则葬枣蚤泽澡澡藻皂葬贼燥责燥蚤藻泽蚤泽咱允暂援韵灶糟燥早藻灶藻袁圆园园源袁圆猿渊源猿冤院苑圆猿猿原苑圆源远援咱员怨暂摇舒莉萍袁何志旭袁姚冬静袁等援野生型斑马鱼胚胎中澡燥曾凿猿基因皂砸晕粤的表达谱咱允暂援浙江大学学报渊医学版冤袁圆园员圆袁源员渊员冤院远怨原苑源援也修回日期页圆园员远原园源原员愿 渊上接第苑源页冤 咱怨暂摇月葬蚤悦袁云怎噪怎凿葬晕袁杂燥灶早再袁藻贼葬造援蕴怎灶早枣造怎蚤凿贼则葬灶泽责燥则贼蚤灶葬择怎葬责燥则蚤灶鄄员葬灶凿葬择怎葬责燥则蚤灶鄄源噪灶燥糟噪燥怎贼皂蚤糟藻咱允暂援允悦造蚤灶陨灶增藻泽贼袁员怨怨怨袁员园猿院缘缘缘原缘远员援咱员园暂摇阅藻造糟造葬怎曾悦袁砸藻扎葬蚤早怎蚤葬砸杂袁阅藻造葬糟燥怎则贼悦袁藻贼葬造援粤造增藻燥造葬则 灶藻怎贼则燥责澡蚤造泽蚤灶藻灶凿燥贼燥曾蚤灶鄄蚤灶凿怎糟藻凿葬灶凿遭葬糟贼藻则蚤葬鄄蚤灶凿怎糟藻凿葬糟怎贼藻造怎灶早蚤灶躁怎则赠蚤灶则葬贼泽咱允暂援粤皂允孕澡赠泽蚤燥造袁员怨怨苑曰圆苑猿院蕴员园源原蕴员员圆援 也修回日期页圆园员远原园缘原猿园

94 圆园员远年愿月第圆远卷摇第愿期 中国比较医学杂志悦匀陨晕耘杂耘允韵哉砸晕粤蕴韵云悦韵酝孕粤砸粤栽陨灾耘酝耘阅陨悦陨晕耘 粤怎早怎泽贼袁圆园员远灾燥造援圆远摇晕燥援愿 藡 蕥 蕥蕥蕥蕥藡研究报告 蕥蕥蕥蕥藡 蕥藡 不同来源高度免疫缺陷小鼠微卫星阅晕粤遗传检测的分析 范摇涛袁王摇洪袁魏摇杰袁周舒雅袁岳秉飞袁李保文 渊中国食品药品检定研究院袁北京摇员园园园缘园冤 摇摇揖摘要铱摇目的摇对不同来源的高度免疫缺陷小鼠进行遗传背景的检测分析袁旨在发现经遗传修饰的小鼠遗传背景是否符合近交系遗传特征遥方法摇对收集到的源种不同来源以晕韵阅为背景的高度免疫缺陷小鼠袁选取猿园个微卫星阅晕粤位点进行孕悦砸检测袁通过凝胶电泳结果和杂栽砸扫描确定基因型袁进行遗传分析遥结果摇源组圆园个样本中共有员苑个位点呈现多态性袁粤尧月两组小鼠猿园个微卫星位点表现为纯和袁其他两组小鼠中不同位点均出现杂合个体曰粤尧月两组遗传距离最小袁保持着较高的遗传相似度遥结论摇研究表明袁不同来源高度免疫缺陷小鼠遗传背景有差异遥揖关键词铱摇免疫缺陷小鼠曰微卫星曰遗传质量揖中图分类号铱砸鄄猿猿摇摇揖文献标识码铱粤摇摇揖文章编号铱员远苑员鄄苑愿缘远渊圆园员远冤园愿鄄园园怨员鄄园缘凿燥蚤院员园郾猿怨远怨援躁援蚤泽泽灶援员远苑员原苑愿缘远郾圆园员远郾园愿郾园员缘 郧藻灶藻贼蚤糟皂燥灶蚤贼燥则蚤灶早葬灶凿葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣澡蚤早澡造赠蚤皂皂怎灶燥凿藻枣蚤糟蚤藻灶贼皂蚤糟藻枣则燥皂凿蚤枣枣藻则藻灶贼泽燥怎则糟藻泽遭赠皂蚤糟则燥泽葬贼藻造造蚤贼藻阅晕粤皂葬则噪藻则泽 云粤晕栽葬燥袁宰粤晕郧匀燥灶早袁宰耘陨允蚤藻袁在匀韵哉杂澡怎鄄赠葬袁再哉耘月蚤灶早鄄枣藻蚤袁蕴陨月葬燥鄄憎藻灶援晕葬贼蚤燥灶葬造陨灶泽贼蚤贼怎贼藻泽枣燥则云燥燥凿葬灶凿阅则怎早悦燥灶贼则燥造袁月藻蚤躁蚤灶早员园园园缘园袁悦澡蚤灶葬冤 摇摇揖粤遭泽贼则葬糟贼铱摇韵遭躁藻糟贼蚤增藻摇栽燥贼藻泽贼葬灶凿葬灶葬造赠扎藻贼澡藻早藻灶藻贼蚤糟遭葬糟噪早则燥怎灶凿燥枣澡蚤早澡造赠蚤皂皂怎灶燥凿藻枣蚤糟蚤藻灶贼皂蚤糟藻枣则燥皂凿蚤枣枣藻则藻灶贼泽燥怎则糟藻泽援酝藻贼澡燥凿泽摇云燥怎则澡蚤早澡造赠蚤皂皂怎灶燥凿藻枣蚤糟蚤藻灶贼皂燥怎泽藻泽贼则葬蚤灶泽枣则燥皂凿蚤枣枣藻则藻灶贼泽燥怎则糟藻泽燥枣晕韵阅遭葬糟噪早则燥怎灶凿憎藻则藻糟燥造造藻糟贼藻凿援猿园皂蚤糟则燥泽葬贼藻造造蚤贼藻阅晕粤泽蚤贼藻泽憎藻则藻凿藻贼藻糟贼藻凿袁葬灶凿贼澡藻早藻灶燥贼赠责藻糟葬灶遭藻凿蚤泽责造葬赠藻凿遭赠早藻造藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽葬灶凿杂栽砸泽糟葬灶灶蚤灶早援砸藻泽怎造贼泽摇员苑皂蚤糟则燥泽葬贼藻造造蚤贼藻泽蚤贼藻泽藻曾澡蚤遭蚤贼责燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂蚤灶圆园皂蚤糟藻燥枣贼澡藻枣燥怎则早则燥怎责泽援栽澡藻则藻憎藻则藻猿园澡燥皂燥扎赠早燥怎泽造燥糟蚤蚤灶贼澡藻皂蚤糟藻燥枣早则燥怎责泽粤葬灶凿月袁葬灶凿澡藻贼藻则燥扎赠早燥怎泽蚤灶贼澡藻燥贼澡藻则贼憎燥早则燥怎责泽援栽澡藻早藻灶藻贼蚤糟凿蚤泽贼葬灶糟藻蚤泽皂蚤灶蚤皂怎皂遭藻贼憎藻藻灶早则燥怎责泽粤葬灶凿月袁泽澡燥憎蚤灶早葬澡蚤早澡藻则早藻灶藻贼蚤糟泽蚤皂蚤造葬则蚤贼赠援悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶泽摇栽澡藻早藻灶藻贼蚤糟遭葬糟噪早则燥怎灶凿泽葬则藻凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤灶澡蚤早澡造赠蚤皂皂怎灶燥凿藻枣蚤糟蚤藻灶贼皂蚤糟藻枣则燥皂凿蚤枣枣藻则藻灶贼泽燥怎则糟藻泽援揖运藻赠憎燥则凿泽铱摇陨皂皂怎灶燥凿藻枣蚤糟蚤藻灶贼皂蚤糟藻曰酝蚤糟则燥泽葬贼藻造造蚤贼藻曰郧藻灶藻贼蚤糟择怎葬造蚤贼赠曰酝蚤糟藻 摇摇高度免疫缺陷小鼠野晕杂郧冶是在晕韵阅渊灶燥灶鄄燥遭藻泽藻凿蚤葬遭藻贼蚤糟冤小鼠的背景下袁发生重症联合免疫缺陷泽糟蚤凿孕则噪凿糟渊责则燥贼藻蚤灶噪蚤灶葬泽藻袁阅晕粤葬糟贼蚤增葬贼藻凿袁糟葬贼葬造赠贼蚤糟责燥造赠责藻责贼蚤凿藻袁孕则噪凿糟曰泽藻增藻则藻糟燥皂遭蚤灶藻凿蚤皂皂怎灶藻凿藻枣蚤糟蚤藻灶糟赠袁杂悦陨阅冤和白细胞介素圆受体酌链 渊蚤灶贼藻则造藻怎噪蚤灶圆则藻糟藻责贼燥则早葬皂皂葬糟澡葬蚤灶袁陨造圆则早冤缺失突变产生的遥该小鼠模型表现为成熟栽尧月淋巴细胞尧功能性晕运细胞缺失袁细胞因子信号缺少遥由于其免疫缺陷程度相对于其他品系更高袁能更好地适用于人类造血干细胞尧外周血单核细胞和肿瘤的异种移 咱作者简介暂范涛渊员怨愿猿原冤袁男袁技师袁专业院实验动物保种遥耘鄄皂葬蚤造院糟则增糟澡蚤灶葬枣贼岳员圆远援糟燥皂遥咱通讯作者暂李保文渊员怨远苑原冤袁男袁副主任技师遥耘鄄皂葬蚤造院造蚤遭葬燥憎藻灶圆园园猿岳葬造蚤赠怎灶援糟燥皂遥

95 怨圆中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 植袁而成为一种理想的人源化免疫缺陷小鼠模型遥不同来源的高度免疫缺陷小鼠有不同的建立方法院一种方法是同源导入袁通过回交获得以受体小鼠品系为背景的双基因突变型小鼠曰另一种是利用基因编辑技术直接在背景品系小鼠上进行改造袁更快尧更直接地获得目标动物遥微卫星又称短串联重复序列渊泽澡燥则贼贼葬灶凿燥皂则藻责藻葬贼袁杂栽砸冤袁作为分子标记在实验动物的遗传质量检测中具有良好的适用性袁被广咱员原源暂泛应用遥具有高度多态性的简单重复序列可以用于区分不同近交系小鼠袁而在同品系内不同个体咱缘袁远暂间袁微卫星阅晕粤则呈单态性袁可以用于近交系遗传质量评价遥本实验通过选择猿园个微卫星位点对收集到的源种不同来源袁不同制作方法的野晕杂郧冶小鼠进行遗传检测袁旨在发现这些遗传工程小鼠从制作之初背景品系的选取袁到后期建系保种的过程袁在遗传质量方面是否符合近交系特点遥 员摇 员郾员摇 材料和方法 材料 源种不同来源的野晕杂郧冶小鼠由本单位收集保存并提供袁生产许可证号揖杂悦载运渊京冤圆园员源原园园员猿铱遥源种小鼠中有两种是在背景品系上做的基因敲除袁两种为同源倒入遥每品系缘只袁源耀远周龄袁雌雄在选择时不做限制袁杂孕云级环境饲养袁选择员只月远小鼠作为参照遥员郾圆摇方法员郾圆郾员摇小鼠阅晕粤提取院将源种不同来源高度免疫缺陷小鼠顺序编为粤尧月尧悦尧阅四个组遥剪取小鼠尾尖猿耀缘皂皂放入耘孕管中袁加蛋白酶运缓冲液裂解过夜袁酚辕氯仿法提取阅晕粤袁浓度稀释至缘园耀员园园灶早辕滋蕴袁源益保存遥咱苑暂员郾圆郾圆摇微卫星位点的选择院根据文献报道袁选择猿园个多态性较高的微卫星位点袁覆盖小鼠员耀圆园号染色体袁引物序列详见表员袁引物由英潍捷基渊上海冤贸易有限公司合成遥 员郾圆郾猿摇孕悦砸扩增院反应体系院总反应体系圆园滋蕴袁其中院员园伊孕悦砸遭怎枣枣藻则圆滋蕴袁上尧下游引物各员滋蕴袁凿晕栽孕员郾圆滋蕴袁镁离子员郾缘滋蕴袁栽葬择酶园郾圆滋蕴袁基因组阅晕粤员滋蕴袁纯水员圆郾员滋蕴遥孕悦砸反应条件院怨缘益预变性缘皂蚤灶曰怨源益变性猿园泽曰退火温度渊缘源耀远源益冤猿园泽曰苑圆益延伸猿园泽曰猿缘个循环曰苑圆益延伸愿皂蚤灶曰扩增产物源益保存遥员郾圆郾源摇电泳院圆郾缘豫琼脂糖凝胶袁电泳遥溴化乙锭染色袁用紫外可见分析仪查看结果并记录遥员郾圆郾缘摇杂栽砸扫描院将圆员个样本扩增产物放入杂栽砸扫描仪袁用郧藻灶藻酝葬则噪藻则灾圆郾圆郾园读取各样本在各位点扩增片段的大小遥每个位点按照片段大小顺序记为葬尧遭尧糟尧凿袁根据等位基因分型的不同袁各微卫星位点的基因型以葬葬尧葬遭尧葬糟等方式记录袁基因型全部纯和袁判断为符合近交系特征曰反之出现杂合基因型则不符合近交系遗传特点遥员郾圆郾远摇数据结果院用蕴赠灶糟澡法计算组间相似系数袁同时将数据放入孕燥责郧藻灶员郾猿圆进行统计分析遥圆摇结果圆郾员摇孕悦砸检测分析结果猿园个微卫星位点均能扩增出条带遥根据电泳结果进行初步筛查袁可观察到多态性位点袁以阅缘酝蚤贼源愿位点为例渊图员冤袁悦组员尧圆尧源尧缘号小鼠在该位点上与其他组别个体间有差别袁呈现多态性遥通过与月远孕悦砸结果的比较袁阅苑酝蚤贼员圆尧阅员源酝蚤贼猿尧阅员愿酝蚤贼员怨尧阅员怨酝蚤贼猿尧阅员怨酝蚤贼员远位点两种品系的扩增片段长度一致袁表现为单态性遥圆郾圆摇杂栽砸扫描及结果琼脂糖凝胶电泳用肉眼难以观察区别小于员园遭责的片段袁杂栽砸扫描可以精确检测片段的具体长度袁区分相差员遭责的阅晕粤片段遥根据杂栽砸扫描结果袁可以更准确地判断各位点的多态性袁同时判断位点为纯合还是杂合袁判读方法如图圆所示遥悦组在阅员圆酝蚤贼苑位点出现了两种片段长度袁经扫描袁员尧源尧 云蚤早援员摇 图员摇源组小鼠在阅缘酝蚤贼源愿位点孕悦砸凝胶电泳结果 孕悦砸早藻造藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽葬贼造燥糟蚤阅缘酝蚤贼源愿燥枣皂蚤糟藻蚤灶贼澡藻枣燥怎则早则燥怎责泽

96 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 怨猿 缘号样本出现员园远遭责和员圆圆遭责两个波形袁说明该小鼠在这个位点为杂合状态袁基因型记录为葬遭曰圆号样本和猿号样本各在员圆圆遭责和员园远遭责出现了一个波形袁说明这两只小鼠在该位点为纯和型并表现出多态性袁记录为遭遭尧葬葬袁以此类推遥源组圆园个实验样本判读结果渊表员冤遥根据杂栽砸扫描结果袁参照样本月远所有微卫星位点都为纯合状态曰粤尧月组的员园只小鼠猿园个微卫星位点均为纯合状态曰悦组的缘个样本中在阅圆酝蚤贼员缘尧阅愿酝蚤贼猿猿尧阅怨酝蚤贼圆员尧阅怨酝蚤贼圆猿尧阅员员酝蚤贼源尧阅员圆酝蚤贼苑尧阅员苑晕凿泽猿尧阅员苑酝蚤贼员员尧阅员愿酝蚤贼怨尧阅员怨酝蚤贼员远等员园个位点上袁出现多个杂合型个体曰阅组的样本仅有一只小鼠在阅员怨酝蚤贼远位点上表现为杂合型遥源组圆园个样本中共有员苑个位点呈现出多态性袁包括院阅员酝蚤贼猿远缘尧阅圆酝蚤贼员缘尧阅猿酝蚤贼圆怨尧阅缘酝蚤贼源愿尧阅远酝蚤贼愿尧阅远酝蚤贼员园圆尧阅愿酝蚤贼猿猿尧阅怨酝蚤贼圆员尧阅怨酝蚤贼圆猿尧阅员员酝蚤贼源尧阅员圆酝蚤贼苑尧阅员远酝蚤贼怨尧阅员苑晕凿泽猿尧阅员苑酝蚤贼员员尧阅员愿酝蚤贼怨尧阅员怨酝蚤贼员远尧阅载酝蚤贼员远遥圆郾猿摇源种小鼠相似系数按蕴赠灶糟澡法计算相似系数其结果渊表圆冤遥粤组与月组小鼠相似度最高袁其次是月组与阅组曰悦尧阅两组相似性最低遥悦组与其他三组都有较低的相图圆摇悦组样本在阅员圆酝蚤贼苑位点的微卫星扫描波形云蚤早援圆摇栽澡藻憎葬增藻枣燥则皂泽燥枣造燥糟蚤阅员圆酝蚤贼苑蚤灶杂栽砸泽糟葬灶灶蚤灶早燥枣泽葬皂责造藻泽燥枣贼澡藻早则燥怎责悦 似性遥圆郾源摇源种小鼠遗传距离比较通过孕燥责郧藻灶员郾猿圆软件分析晕藻蚤爷渊员怨苑愿冤遗传距离尧遗传相似度指标结果渊表猿冤遥通过计算可以看出粤组与月组遗传距离最小袁保持着较高的遗传相似度遥 猿摇 讨论 允葬糟噪泽燥灶实验室发布的高度免疫缺陷小鼠是通泽糟蚤凿贼皂员宰躁造过将晕韵阅援悦月员苑鄄孕则噪凿糟辕允与月远郾员圆怨杂源鄄陨造圆则早辕允泽糟蚤凿两品系杂交袁产生同时具备孕则噪凿糟和陨造圆则早基因型泽糟蚤凿的云员代后袁与晕韵阅援悦月员苑鄄孕则噪凿糟辕允回交愿代袁产泽糟蚤凿生的杂合子相互交配得到孕则噪凿糟和陨造圆则早双纯合型渊陨造圆则早是载鄄造蚤灶噪基因袁雄性为半合子冤的晕杂郧小咱愿暂鼠遥国内不少实验室和基因工程公司则使用基因编辑技术袁在晕韵阅或晕韵阅辕杂悦陨阅渊晕韵阅援悦月员苑鄄泽糟蚤凿孕则噪凿糟冤小鼠上进行基因改造而获得同样的动物模型遥不论哪种方式袁最终获得的目标动物都应符合近交系特点遥根据实验结果袁粤尧月两组中所包含的员园只小鼠样本猿园个位点均处于纯和状态袁符合近交系特点曰悦组的缘只小鼠样本中袁在员园个位点上出现多个个体的基因型为杂合袁可以判定其不符合近交系遗传特征遥阅组有一只小鼠在员个位点上出现杂合基因型袁可将其本身及其后代淘汰袁不进入繁育体系遥咱怨暂根据报道袁不同近交系在阅苑酝蚤贼员圆尧阅员怨酝蚤贼猿两个微卫星位点呈单态性袁实验证明晕韵阅小鼠也符合该特点遥不同组别的小鼠在同一位点上也具有多态性遥例如粤组全部样本在阅员酝蚤贼猿远缘位点尧悦组在阅远酝蚤贼愿位点上都出现了与其他三组不一致的阅晕粤片段长度袁但都为纯合的基因型袁这可能是在小鼠模型构建之初选择了不同的亚系而导致的遥又如粤组在阅猿酝蚤贼圆怨尧阅员苑晕凿泽猿两个位点各出现了员只与组内其他源只不同的基因型袁如果该样本处在基础群或核心群中袁可以在日后的繁育管理中将其淘汰袁避免在该位点出现杂合等位基因遥近交系小鼠的遗传质量直接影响着实验结果咱员园袁员员暂的可靠性袁大多数基因工程小鼠都是以近交系为背景进行基因改造而来遥遗传质量的改变可能发生在建立时选用的小鼠自身发生遗传变异袁遗传背景不符合近交系特点曰也可能发生在后续的建系保种过程中袁如回交倒入品系不合格袁回交未超过缘代渊晕缘冤袁未严格按照全同胞兄妹繁殖等遥

97 怨源中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 栽葬遭援员摇 表员摇猿园个微卫星座位的引物序列尧扩增条件及各组基因型结果栽澡藻责则蚤皂藻则泽藻择怎藻灶糟藻葬灶凿燥责贼蚤皂葬造糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣猿园皂蚤糟则燥泽葬贼藻造造蚤贼藻泽造燥糟蚤葬灶凿早藻灶燥贼赠责藻则藻泽怎造贼泽 位点 引物序列渊缘爷原猿爷冤 染色体 退火温度 粤组 月组 悦组 阅组 蕴燥糟怎泽 孕则蚤皂藻则泽藻择怎藻灶糟藻渊缘爷原猿爷冤 悦澡则援 栽藻皂责渊益冤 郧则燥怎责粤 郧则燥怎责月 郧则燥怎责悦 郧则燥怎责阅 阅员酝蚤贼猿远缘 粤栽悦粤悦悦栽郧悦粤粤栽粤郧栽粤悦悦悦悦悦栽栽粤粤栽悦粤郧栽悦粤栽悦粤栽粤郧郧悦栽栽栽栽悦悦 员 缘源 遭遭缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 阅圆酝蚤贼员缘 粤栽郧悦悦栽栽粤郧粤粤郧粤粤栽栽栽郧栽栽悦悦悦葬葬员辕缘圆缘源葬葬缘辕缘葬葬缘辕缘悦栽栽郧粤粤粤粤粤悦粤悦粤栽悦粤粤粤粤栽悦栽郧悦葬遭源辕缘 葬葬缘辕缘 阅猿酝蚤贼圆怨 郧粤栽郧粤郧粤郧粤栽栽悦栽郧粤栽郧栽郧郧粤郧郧葬葬员辕缘葬葬员辕缘猿远源悦悦粤郧悦悦栽悦粤郧栽粤栽悦栽悦粤粤粤粤悦悦遭遭源辕缘遭遭源辕缘 遭遭缘辕缘 葬葬缘辕缘 阅源酝蚤贼圆猿缘 粤郧郧悦悦粤粤粤郧郧栽栽郧郧粤栽栽栽悦栽郧粤郧粤悦栽栽郧粤粤粤栽栽郧粤粤郧悦粤栽栽栽粤郧郧 源 缘缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 阅缘酝蚤贼源愿 郧粤悦栽粤栽悦粤栽悦悦粤粤郧悦悦粤粤郧粤悦悦葬葬员辕缘缘远园葬葬缘辕缘葬葬缘辕缘粤粤粤粤郧粤悦粤悦栽栽栽悦悦悦栽郧粤悦粤栽粤郧悦遭遭源辕缘 葬葬缘辕缘 阅远酝蚤贼员园圆 悦悦粤栽郧栽郧郧粤栽粤栽悦栽栽悦悦悦栽栽郧葬葬员辕缘远缘源遭遭缘辕缘郧栽粤栽粤悦悦悦粤郧栽栽郧栽粤粤粤栽悦栽栽郧栽郧栽郧遭遭源辕缘 遭遭缘辕缘 遭遭缘辕缘 阅远酝蚤贼愿 栽郧悦粤悦粤郧悦粤郧悦栽悦粤栽栽悦栽悦栽郧郧粤粤郧郧粤粤郧郧粤郧栽郧郧郧郧栽粤郧 远 远园 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 遭遭缘辕缘 葬葬缘辕缘 阅远酝蚤贼员缘 悦粤悦栽郧粤悦悦悦栽粤郧悦粤悦粤郧悦粤郧栽悦悦栽郧郧悦栽栽悦悦粤悦粤郧郧栽粤悦栽 远 远园 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 阅苑酝蚤贼圆愿员 栽栽悦悦栽悦栽粤悦悦栽悦悦栽郧粤郧悦悦粤郧悦悦粤悦粤粤郧郧粤粤郧粤悦粤悦悦粤栽栽 苑 远园 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 阅苑酝蚤贼员圆 郧悦栽郧郧郧栽栽栽粤栽栽悦粤栽栽郧悦粤粤栽悦悦粤郧悦栽悦粤栽郧郧郧栽粤郧粤粤郧粤 苑 缘愿 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 阅愿酝蚤贼猿猿 栽栽栽郧粤郧悦粤粤粤郧郧粤悦栽栽郧悦悦栽葬葬圆辕缘愿远园葬葬缘辕缘葬葬缘辕缘栽栽粤栽栽悦栽郧悦悦栽悦粤粤悦粤悦悦粤悦悦葬遭猿辕缘 葬葬缘辕缘 阅愿酝蚤贼员源 栽栽栽栽悦粤悦粤悦栽悦粤悦郧栽郧栽郧悦郧郧栽悦栽悦栽悦悦栽栽悦悦栽郧郧悦郧悦栽郧 愿 远猿 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 阅怨酝蚤贼圆猿 粤粤郧粤粤郧栽栽栽悦悦粤栽郧粤悦粤栽悦粤栽郧粤粤葬葬员辕缘怨远缘葬葬缘辕缘葬葬缘辕缘粤郧粤粤郧粤粤粤粤栽栽悦栽栽郧粤悦粤郧悦栽悦栽郧葬遭源辕缘 葬葬缘辕缘 阅怨酝蚤贼圆员 悦粤郧栽悦悦悦栽郧郧栽栽粤粤栽粤粤悦粤粤悦粤粤悦葬葬员辕缘怨缘怨葬葬缘辕缘葬葬缘辕缘栽粤栽粤郧栽悦悦粤栽栽郧栽郧郧悦粤郧粤郧郧粤郧栽葬遭源辕缘 葬葬缘辕缘 阅员园酝蚤贼员圆 粤栽郧栽悦悦粤粤粤粤悦粤悦悦粤郧悦悦粤郧郧郧粤粤郧栽郧粤栽郧郧粤郧悦栽悦栽郧栽栽 员园 缘源 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 阅员员酝蚤贼源 悦粤郧栽郧郧郧栽悦粤栽悦粤郧栽粤悦粤郧悦粤葬糟源辕缘员员缘源糟糟缘辕缘糟糟缘辕缘粤粤郧悦悦粤郧悦悦悦粤郧栽悦栽栽悦粤栽粤糟糟员辕缘 遭遭缘辕缘 阅员圆酝蚤贼苑 葬葬员辕缘悦悦郧郧郧郧粤栽悦栽粤粤粤粤悦栽粤悦粤栽员圆远园遭遭缘辕缘遭遭缘辕缘遭遭员辕缘栽悦栽粤粤栽悦栽悦粤郧悦悦悦粤粤栽郧郧栽葬遭猿辕缘 遭遭缘辕缘 阅员圆晕凿泽员员 悦粤栽栽栽郧粤郧郧粤悦粤郧栽悦粤郧郧粤栽悦郧郧粤粤悦栽栽栽悦粤栽郧悦粤郧栽粤悦栽粤郧 员圆 缘源 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 阅员猿酝蚤贼猿 栽悦粤郧郧悦栽悦粤栽悦悦悦粤郧粤栽粤悦悦栽栽栽栽郧悦粤郧粤郧粤粤悦粤悦粤悦粤悦悦 员猿 远园 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 阅员源酝蚤贼猿 郧悦粤粤栽栽粤悦粤悦悦栽悦悦栽悦郧郧粤郧悦粤悦粤粤郧郧郧悦粤栽粤栽郧郧栽粤悦悦悦 员源 缘源 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 阅员缘酝蚤贼缘 悦栽栽悦悦栽粤粤栽栽悦悦栽郧栽悦粤粤郧悦粤粤粤栽郧栽栽栽悦粤栽栽郧郧栽悦粤粤栽郧郧粤粤粤悦栽栽粤 员缘 缘源 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 阅员缘酝蚤贼员缘 粤郧悦粤栽粤悦粤悦栽悦栽悦栽栽郧栽栽悦悦栽郧悦栽 员缘 远园 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 阅员远酝蚤贼怨 阅员苑酝蚤贼员员 阅员苑晕凿泽猿 阅员愿酝蚤贼怨 阅员愿酝蚤贼员怨 阅员怨酝蚤贼员远 阅员怨酝蚤贼猿 阅载酝蚤贼员远 粤粤栽粤粤粤栽粤悦悦粤郧粤郧粤粤郧悦粤悦悦郧栽郧栽悦栽栽郧悦栽悦栽郧郧栽粤栽悦粤粤悦栽粤悦粤郧郧悦悦栽悦悦栽栽郧悦悦悦粤郧悦栽粤粤粤悦栽郧粤粤栽栽栽粤栽郧粤郧郧郧郧郧郧栽悦粤栽郧栽悦悦悦粤栽粤栽悦栽悦栽悦栽栽栽粤栽粤悦粤悦粤栽栽悦悦栽郧栽郧郧悦郧郧悦悦栽栽粤栽悦粤郧粤郧粤悦粤粤栽郧郧郧栽粤粤悦粤郧粤郧郧悦粤 粤郧粤郧郧悦粤栽栽郧悦粤悦粤悦粤悦粤粤郧郧悦悦悦悦栽栽郧郧粤郧粤郧栽栽郧郧栽 粤栽栽郧郧郧栽郧栽栽悦粤郧郧栽郧悦粤郧粤栽郧悦粤悦粤粤栽粤郧悦栽悦粤栽粤郧悦栽栽悦栽栽悦栽栽粤郧郧栽粤粤栽悦栽悦悦悦栽栽粤郧郧郧郧栽郧郧栽粤粤粤栽郧栽粤粤粤粤悦栽郧粤粤郧悦粤栽郧悦栽栽悦悦悦悦栽粤悦栽郧悦粤郧栽郧悦栽悦栽栽郧悦粤栽粤郧栽栽郧郧悦悦粤粤粤郧栽郧 悦栽郧悦粤粤栽郧悦悦栽郧悦栽郧栽栽栽栽粤悦悦郧郧粤郧栽粤悦粤粤粤郧郧郧粤郧栽悦粤 员远缘缘遭遭缘辕缘 遭遭源辕缘糟糟员辕缘 员苑缘源遭遭缘辕缘遭遭缘辕缘 员苑 缘愿 遭遭员辕缘糟糟源辕缘 糟糟缘辕缘 员愿远园葬葬缘辕缘葬葬缘辕缘 葬葬缘辕缘 葬遭源辕缘遭遭员辕缘葬糟源辕缘糟糟员辕缘葬葬员辕缘葬遭员辕缘遭遭猿辕缘 葬葬源辕缘糟糟员辕缘 遭遭缘辕缘 糟糟缘辕缘 葬葬缘辕缘 员愿缘缘葬葬缘辕缘葬葬缘辕缘葬葬缘辕缘葬葬缘辕缘遭遭猿辕缘葬遭圆辕缘员怨缘源遭遭缘辕缘遭遭缘辕缘遭糟员辕缘遭遭猿辕缘凿凿员辕缘员怨远园葬葬缘辕缘葬葬缘辕缘葬葬缘辕缘葬葬缘辕缘 载缘愿葬葬缘辕缘遭遭缘辕缘 葬葬员辕缘遭遭员辕缘糟糟猿辕缘 糟糟缘辕缘

98 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 怨缘 表圆摇 任意两组间相同等位基因数量与相似系数 栽葬遭援圆摇 栽澡藻灶怎皂遭藻则燥枣贼澡藻泽葬皂藻葬造造藻造藻泽葬灶凿泽蚤皂蚤造葬则蚤贼赠 蚤灶凿藻曾遭藻贼憎藻藻灶葬灶赠贼憎燥早则燥怎责泽 粤组 月组 悦组 阅组 粤组 要 圆愿 圆园 圆源 月组 园郾怨猿猿 要 员愿 圆远 悦组 园郾远远苑 园郾远园园 要 员苑 阅组 园郾愿园园 园郾愿远苑 园郾缘远苑 要 注院对角线以上部表示两组间相同位点数量袁对角线以下为两组间相似系数遥晕燥贼藻援栽澡藻灶怎皂遭藻则燥枣贼澡藻泽葬皂藻葬造造藻造藻泽渊葬遭燥增藻贼澡藻凿蚤葬早燥灶葬造冤葬灶凿泽蚤皂蚤造葬则蚤贼赠蚤灶凿藻曾渊遭藻造燥憎贼澡藻凿蚤葬早燥灶葬造冤 表猿摇 任意两组间遗传相似度和遗传距离 栽葬遭援猿摇 郧藻灶藻贼蚤糟蚤凿藻灶贼蚤贼赠葬灶凿早藻灶藻贼蚤糟 凿蚤泽贼葬灶糟藻遭藻贼憎藻藻灶葬灶赠贼憎燥早则燥怎责泽 粤组 月组 悦组 阅组 粤组 要 园郾怨圆愿愿 园郾苑怨圆员 园郾愿源源源 月组 园郾园苑猿怨 要 园郾愿猿员员 园郾愿愿缘 悦组 园郾圆猿猿员 园郾员愿缘 要 园郾愿员怨缘 阅组 园郾员远怨圆 园郾员圆圆员 园郾员怨怨员 要 注院对角线以上部表示两组间遗传相似度袁对角线以下为两组间遗传距离遥郧藻灶藻贼蚤糟蚤凿藻灶贼蚤贼赠渊葬遭燥增藻贼澡藻凿蚤葬早燥灶葬造冤葬灶凿早藻灶藻贼蚤糟凿蚤泽贼葬灶糟藻渊遭藻造燥憎贼澡藻凿蚤葬早燥灶葬造冤 微卫星阅晕粤具有位点充足袁遗传稳定袁多态性高袁片段短容易扩增等优势袁非常适合用于近交系的遗传监测遥近交系遗传修饰小鼠在保种尧扩繁的过程中除目的基因的检测外袁定期对基础群和核心群的繁殖个体进行遗传背景的筛查很有必要袁及时发现不合格的个体并不作选留袁可维护整个种群的纯合性遥本文通过微卫星阅晕粤分子标记对不同来源高度免疫缺陷小鼠的遗传质量进行检测袁为近交系小鼠微卫星位点的筛选提供数据支撑袁同时袁对建立动物模型质量评价提供参考遥对于今后的保种和繁殖以及使用的意义和社会价值的重要性进行阐述遥 参考文献院咱员暂摇月葬泽贼葬孕灾袁宰澡蚤贼皂燥则藻杂孕袁月葬泽澡葬皂运月袁藻贼葬造援酝蚤糟则燥泽葬贼藻造造蚤贼藻葬灶葬造赠泽蚤泽蚤灶云灾月辕晕皂蚤糟藻咱允暂援悦燥皂责酝藻凿袁圆园园源袁缘源渊缘冤院缘圆源原缘圆苑援咱圆暂摇运葬贼燥澡匀袁再燥泽澡蚤灶燥杂袁陨灶怎蚤再袁匀燥灶凿葬杂袁藻贼葬造援酝蚤糟则燥泽葬贼藻造造蚤贼藻早藻灶燥贼赠责蚤灶早枣燥则早藻灶藻贼蚤糟择怎葬造蚤贼赠贼藻泽贼蚤灶早怎泽蚤灶早泽责藻则皂糟藻造造泽蚤灶贼澡藻皂燥怎泽藻咱允暂援耘曾责粤灶蚤皂袁圆园园缘袁缘源渊源冤院猿苑猿原猿苑远援咱猿暂摇陈振文袁欧阳兆和袁董罡袁等援用微卫星标记技术对国内月粤蕴月辕糟小鼠遗传质量的分析咱允暂援遗传袁圆园园源袁圆远渊远冤院愿源缘原愿源愿援咱源暂摇李芳芳袁魏杰袁王洪袁等援应用微卫星标记对两个豚鼠封闭群的遗传学研究咱允暂援中国比较医学杂志袁圆园员源袁圆源渊员圆冤院猿猿原猿愿援咱缘暂摇欧阳兆和袁陈振文袁李瑞生袁等援微卫星阅晕粤多态性在十种近交系小鼠遗传监测中的应用研究咱允暂援中国比较医学杂志袁圆园园源袁员源渊圆冤院苑员原苑源援咱远暂摇王纯耀袁杨卫红袁宋国英袁等援微卫星阅晕粤在近交系小鼠遗传监测中的应用咱允暂援中国兽医学报袁圆园园愿袁圆愿渊猿冤院猿猿猿原猿猿缘援咱苑暂摇王洪袁杜小燕袁徐平袁等援上海运酝小鼠种子群体遗传状况分析咱允暂援中国比较医学杂志袁圆园员源袁圆源渊员圆冤院圆苑原猿圆援咱愿暂摇允粤载酝蚤糟藻袁允粤载酝蚤糟藻驭杂藻则增蚤糟藻泽袁栽澡藻允葬糟噪泽燥灶蕴葬遭燥则葬贼燥则赠袁月葬则匀葬则遭燥则袁酝耘援宰燥则造凿宰蚤凿藻宰藻遭渊澡贼贼责院辕辕憎憎憎援躁葬曾援燥则早辕泽贼则葬蚤灶辕园园缘缘缘苑冤咱怨暂摇刘先菊袁王艳蓉袁高子琪袁等援近交系小鼠微卫星阅晕粤引物的筛选和栽皂值优化研究咱允暂援实验动物科学袁圆园员圆袁圆怨渊员冤院怨原员猿援 咱员园暂摇张树辉袁魏泓袁史景泉援近交系小鼠微卫星阅晕粤多态性的研究咱允暂援遗传袁圆园园园袁圆圆渊远冤院猿苑缘原猿苑愿援咱员员暂摇刘先菊袁王艳蓉袁张丽芳袁等援常用近交系小鼠微卫星阅晕粤多态性的分析研究咱允暂援实验动物科学袁圆园员园袁圆苑渊缘冤院员原源援也修回日期页圆园员远原园源原圆愿

99 圆园员远年愿月第圆远卷摇第愿期 中国比较医学杂志悦匀陨晕耘杂耘允韵哉砸晕粤蕴韵云悦韵酝孕粤砸粤栽陨灾耘酝耘阅陨悦陨晕耘 粤怎早怎泽贼袁圆园员远灾燥造援圆远摇晕燥援愿 藡 蕥 蕥蕥蕥蕥藡研究报告 蕥蕥蕥蕥藡 蕥藡 应用员远杂则砸晕粤高通量测序法比较人与常用实验动物口腔菌群的异同 员员顾东曙袁陈傍柱袁江摇 员圆猿源霞袁刘海月袁那顺巴雅尔袁周宏伟袁顾为望 渊员援南方医科大学实验动物中心袁广州摇缘员园缘员缘曰圆援南方医科大学公共卫生与热带医学学院袁广州摇缘员园缘员缘曰猿援广东医科大学袁东莞摇缘圆猿愿园愿曰源援南方医科大学珠江医院检验医学部袁广州摇缘员园圆愿圆冤 摇摇揖摘要铱摇目的摇应用员远杂则砸晕粤高通量测序法测定几种常用实验动物渊西藏小型猪尧比格犬尧猕猴尧新西兰兔尧宰蚤泽贼葬则大鼠冤的口腔菌群袁并和人的口腔菌群进行对比分析袁为口腔微生态的动物模型研究提供基础性资料遥方法摇用一次性棉拭子采集西藏小型猪尧比格犬尧猕猴尧新西兰兔尧宰蚤泽贼葬则大鼠和人的口腔菌群标本袁提取样品总阅晕粤袁使用带标签的通用引物扩增员远杂则砸晕粤灾源区片段袁陨造造怎皂蚤灶葬测序袁经月陨孕耘杂以及匝陨陨酝耘分析比较菌群多样性及结构遥结果摇人与缘种常用实验动物口腔菌群的丰富度均差异显著渊孕约园郾园缘冤袁不同种类动物有其各自独特的口腔菌群袁但猴的口腔菌群与人最为相似遥结论摇根据与人口腔某类菌群的相似程度袁缘种动物中袁猴口腔的梭菌属渊云怎泽燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂冤尧卟啉菌属渊孕燥则责澡赠则燥皂燥灶葬泽冤水平与人最相似袁提示猴可能是研究人口腔菌群较适宜的模型动物遥从特定菌门角度袁西藏小型猪可能是研究与变形菌门渊孕则燥贼藻燥遭葬糟贼藻则蚤葬冤相关疾病的较适宜模型动物曰比格犬可能是研究与螺旋体门渊杂责蚤则燥糟澡葬藻贼藻泽冤相关疾病的较适宜模型动物遥揖关键词铱摇实验动物曰口腔菌群曰员远杂则砸晕粤曰西藏小型猪曰比格犬曰猕猴曰新西兰兔曰宰蚤泽贼葬则大鼠揖中图分类号铱砸鄄猿猿摇摇揖文献标识码铱粤摇摇揖文章编号铱员远苑员鄄苑愿缘远渊圆园员远冤园愿鄄园园怨远鄄园苑凿燥蚤院员园郾猿怨远怨援躁援蚤泽泽灶援员远苑员原苑愿缘远郾圆园员远郾园愿郾园员远 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶燥枣澡怎皂葬灶葬灶凿葬灶蚤皂葬造燥则葬造皂蚤糟则燥遭蚤燥贼葬遭赠陨造造怎皂蚤灶葬泽藻择怎藻灶糟蚤灶早燥枣员远杂则砸晕粤贼葬早泽 员员员圆郧哉阅燥灶早鄄泽澡怎袁悦匀耘晕月葬灶早鄄扎澡怎袁允陨粤晕郧载蚤葬袁蕴陨哉匀葬蚤鄄赠怎藻袁猿源员晕葬泽澡怎灶月葬赠葬藻则袁在匀韵哉匀燥灶早鄄憎藻蚤袁郧哉宰藻蚤鄄憎葬灶早渊员援蕴葬遭燥则葬贼燥则赠粤灶蚤皂葬造悦藻灶贼藻则燥枣杂燥怎贼澡藻则灶酝藻凿蚤糟葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁郧怎葬灶早扎澡燥怎缘员园缘员缘袁悦澡蚤灶葬曰圆援阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣耘灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造匀藻葬造贼澡袁杂糟澡燥燥造燥枣孕怎遭造蚤糟匀藻葬造贼澡葬灶凿栽则燥责蚤糟葬造酝藻凿蚤糟蚤灶藻袁杂燥怎贼澡藻则灶酝藻凿蚤糟葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁郧怎葬灶早扎澡燥怎缘员园缘员缘曰猿援郧怎葬灶早凿燥灶早酝藻凿蚤糟葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁阅燥灶早早怎葬灶缘圆猿愿园愿曰源援阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣蕴葬遭燥则葬贼燥则赠酝藻凿蚤糟蚤灶藻燥枣在澡怎躁蚤葬灶早匀燥泽责蚤贼葬造袁杂燥怎贼澡藻则灶酝藻凿蚤糟葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁郧怎葬灶早扎澡燥怎缘员园圆愿圆冤 摇摇揖粤遭泽贼则葬糟贼铱摇韵遭躁藻糟贼蚤增藻栽燥责则燥增蚤凿藻燥则蚤早蚤灶葬造则藻枣藻则藻灶糟藻凿葬贼葬枣燥则燥则葬造藻糟燥泽赠泽贼藻皂则藻泽藻葬则糟澡袁栽蚤遭藻贼皂蚤灶蚤责蚤早泽袁遭藻葬早造藻凿燥早泽袁则澡藻泽怎泽皂燥灶噪藻赠袁晕藻憎在藻葬造葬灶凿憎澡蚤贼藻则葬遭遭蚤贼泽葬灶凿宰蚤泽贼葬则则葬贼泽憎藻则藻泽藻造藻糟贼藻凿贼燥泽贼怎凿赠贼澡藻蚤则则藻泽责藻糟贼蚤增藻糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽燥枣燥则葬造皂蚤糟则燥遭蚤葬造皂皂怎灶蚤贼蚤藻泽葬灶凿糟燥皂责葬则藻凿憎蚤贼澡灶燥则皂葬造凿葬贼葬燥枣澡怎皂葬灶泽援酝藻贼澡燥凿泽摇栽燥贼葬造阅晕粤憎葬泽藻曾贼则葬糟贼藻凿枣则燥皂贼澡藻泽责藻糟蚤皂藻灶泽燥枣燥则葬造皂蚤糟则燥遭蚤葬造糟燥皂皂怎灶蚤贼蚤藻泽燥枣栽蚤遭藻贼皂蚤灶蚤责蚤早泽袁遭藻葬早造藻凿燥早泽袁则澡藻泽怎泽皂燥灶噪藻赠袁晕藻憎在藻葬造葬灶凿憎澡蚤贼藻则葬遭遭蚤贼泽葬灶凿宰蚤泽贼葬则则葬贼泽袁葬灶凿怎泽藻凿贼燥葬皂责造蚤枣赠员远杂则砸晕粤灾源枣则葬早皂藻灶贼泽憎蚤贼澡造葬遭藻造藻凿怎灶蚤增藻则泽葬造责则蚤皂藻则泽援栽澡藻凿蚤增藻则泽蚤贼赠葬灶凿泽贼则怎糟贼怎则藻燥枣皂蚤糟则燥遭蚤葬造 咱基金项目暂广东省科技计划项目渊编号院圆园员猿月园猿园猿园园园源园袁圆园员缘粤园猿园猿园圆园苑远冤曰东莞松山湖高新区生物医药外包服务基地建设渊编号院圆园员圆月园员员园园园园园源冤遥咱作者简介暂顾东曙渊员怨苑怨原冤袁女袁硕士袁专业院动物学遥耘皂葬蚤造院圆园缘怨缘源员员岳择择援糟燥皂遥咱通讯作者暂顾为望渊员怨缘远原冤袁男袁教授袁研究方向院实验动物培育尧人类疾病动物模型制备与比较医学遥耘皂葬蚤造院早怎憎憎员园园岳员远猿援糟燥皂遥

100 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 怨苑 糟燥皂皂怎灶蚤贼蚤藻泽枣则燥皂贼澡燥泽藻葬灶蚤皂葬造泽憎藻则藻糟燥皂责葬则藻凿憎蚤贼澡贼澡葬贼燥枣澡怎皂葬灶泽怎泽蚤灶早月陨孕耘杂葬灶凿匝陨陨酝耘葬灶葬造赠泽蚤泽葬枣贼藻则陨造造怎皂蚤灶葬泽藻择怎藻灶糟蚤灶早燥枣员远杂则砸晕粤灾源枣则葬早皂藻灶贼泽援砸藻泽怎造贼泽摇栽澡藻则蚤糟澡灶藻泽泽燥枣贼澡藻燥则葬造皂蚤糟则燥遭蚤葬造糟燥皂皂怎灶蚤贼蚤藻泽燥枣澡怎皂葬灶泽葬灶凿贼澡藻枣蚤增藻泽责藻糟蚤藻泽燥枣造葬遭燥则葬贼燥则赠葬灶蚤皂葬造泽憎葬泽泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠凿蚤枣枣藻则藻灶贼渊孕约园郾园缘冤援阅蚤枣枣藻则藻灶贼泽责藻糟蚤藻泽燥枣葬灶蚤皂葬造泽澡葬增藻贼澡藻蚤则燥憎灶怎灶蚤择怎藻燥则葬造枣造燥则葬袁葬皂燥灶早憎澡蚤糟澡贼澡藻燥则葬造枣造燥则葬燥枣贼澡藻皂燥灶噪藻赠蚤泽贼澡藻皂燥泽贼泽蚤皂蚤造葬则贼燥贼澡葬贼燥枣澡怎皂葬灶泽援悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶泽摇粤皂燥灶早贼澡藻枣蚤增藻泽责藻糟蚤藻泽燥枣造葬遭燥则葬贼燥则赠葬灶蚤皂葬造泽袁贼澡藻燥则葬造皂蚤糟则燥遭蚤葬造糟燥皂皂怎灶蚤贼蚤藻泽燥枣则澡藻泽怎泽皂燥灶噪藻赠泽葬灶凿澡怎皂葬灶泽澡葬增藻澡蚤早澡藻泽贼泽蚤皂蚤造葬则蚤贼赠援杂责藻糟蚤枣蚤糟葬造造赠袁贼澡藻云怎泽燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂葬灶凿孕燥则责澡赠则燥皂燥灶葬泽造藻增藻造泽燥枣则澡藻泽怎泽皂燥灶噪藻赠泽蚤泽皂燥泽贼泽蚤皂蚤造葬则贼燥贼澡燥泽藻燥枣澡怎皂葬灶泽援韵怎则枣蚤灶凿蚤灶早泽蚤灶凿蚤糟葬贼藻贼澡葬贼则澡藻泽怎泽皂燥灶噪藻赠泽皂葬赠遭藻泽怎蚤贼葬遭造藻葬灶蚤皂葬造皂燥凿藻造枣燥则泽贼怎凿蚤藻泽燥枣澡怎皂葬灶燥则葬造皂蚤糟则燥遭蚤葬造糟燥皂皂怎灶蚤贼蚤藻泽援栽蚤遭藻贼皂蚤灶蚤责蚤早泽皂葬赠遭藻泽怎蚤贼葬遭造藻葬灶蚤皂葬造皂燥凿藻造枣燥则孕则燥贼藻燥遭葬糟贼藻则蚤葬泽贼怎凿蚤藻泽袁憎澡蚤造藻遭藻葬早造藻凿燥早泽皂葬赠遭藻葬责责则燥责则蚤葬贼藻枣燥则皂燥凿藻造蚤灶早燥枣凿蚤泽藻葬泽藻泽则藻造葬贼藻凿贼燥杂责蚤则燥糟澡葬藻贼藻泽援揖运藻赠憎燥则凿泽铱摇蕴葬遭燥则葬贼燥则赠葬灶蚤皂葬造曰栽蚤遭藻贼皂蚤灶蚤责蚤早曰月藻葬早造藻凿燥早曰砸澡藻泽怎泽皂燥灶噪藻赠曰晕藻憎在藻葬造葬灶凿憎澡蚤贼藻则葬遭遭蚤贼曰宰蚤泽贼葬则则葬贼曰韵则葬造皂蚤糟则燥遭蚤燥贼葬曰员远杂则砸晕粤 摇摇口腔菌群是由大量口腔微生物组成的复杂生态体系袁口腔内适宜的温度尧湿度尧丰富的营养来源以及复杂的结构袁为口腔内各种微生物的生长尧繁殖和定居提供了便利条件袁形成了口腔微生物的多咱员暂样性遥口腔内微生物的多样性有利于维持口腔健康袁抵御外界不良因素对机体的侵袭遥一旦微生物群落失调袁则可导致龋病尧牙周病以及口腔溃疡咱圆暂等口腔疾病遥微生物的多样性及结构研究是进行复杂微生态系分析的基础袁通过分析口腔中微生物丰度与结构的变化袁能够揭示口腔疾病发生与微生物群落之间的关系袁从而为预防和治疗口腔疾病咱猿袁源暂提供合理的理论依据遥细菌员远杂则砸晕粤基因在所有细菌的基因组中存在袁是编码则砸晕粤相对应的阅晕粤序列袁在长时间的进化过程中袁则砸晕粤分子有些部位的序列变化非常缓慢袁具有高度的保守性袁基于这些序列的高度保守性可以检测细菌种系上的深远关系曰同时袁员远杂则砸晕粤又具有怨个高度可变区袁灾员至灾怨可变区渊本研究中选择了灾源可变区冤袁可变区序列因细菌不同而异袁保守区和可变区交错排列遥通常基于保守区序列设计引物袁孕悦砸扩增袁得到员远杂则砸晕粤扩增片段袁再利用可变区序列的差异实现对细菌种属的分类尧鉴定遥运用高通量测序技术测序袁将高通量测序序列与基因数据库渊或特定序列冤进行比对袁将一定相似度的菌属归为某种特定菌属袁可实现对菌属快速尧准确地分类鉴定袁目前这种方法是研究口腔微生物多样性最为广泛袁最为有效的手段之一遥本研究通过课题组前期基于员远杂咱源袁缘暂则砸晕粤建立的陨造造怎皂蚤灶葬双末端测序法渊月陨孕耘杂冤袁并采用匝陨陨酝耘比较分析几种常用实验动物与人的口腔菌群结构袁为口腔疾病模型动物的选择提供数据基础遥 员摇材料和方法员郾员摇耗材一次性棉拭子渊苏州康健医疗器械有限公司冤尧各种型号耘孕管等耗材渊上海杂葬灶早燥灶公司冤尧口腔拭子基因组阅晕粤快速提取试剂盒渊北京百泰克生物技术有限公司冤尧耘曾鄄贼葬择酶渊宝生物工程大连有限公司冤遥员郾圆摇实验动物成年普通级西藏小型猪渊简称野猪冶冤院东莞松山湖明珠实验动物科技有限公司提供渊许可证号院杂悦载运渊粤冤圆园员圆原园猿园冤曰成年普通级猕猴渊简称野猴冶冤院南方医科大学实验动物中心提供渊许可证号院杂悦载运渊粤冤圆园员源原园园圆缘冤曰成年普通级比格犬渊简称野犬冶冤院西安市迪乐普生物资源开发有限公司提供渊许可证号院杂悦载运渊陕冤圆园员源原园园员冤曰成年杂孕云级新西兰大白兔渊简称野兔冶冤院南方医科大学实验动物中心提供渊杂悦载运渊粤冤圆园员员原园园员缘冤曰成年杂孕云级宰蚤泽贼葬则大鼠渊简称大鼠冤院南方医科大学实验动物中心提供渊杂悦载运渊粤冤圆园员员原园园员缘冤遥员郾猿摇方法员郾猿郾员摇样品采集院一次性棉拭子采集成年猪尧犬尧猴尧兔尧大鼠口腔菌群样品袁每个品种源只袁雄性员只袁雌性猿只曰源园耀远园岁健康人群口腔样本员园个袁男性缘个袁女性缘个遥所有样品原圆园益保存遥员郾猿郾圆摇样品总阅晕粤提取院按照北京百泰克生物技术有限公司口腔拭子基因组阅晕粤快速提取试剂盒说明书提取样品总阅晕粤袁置于原圆园益保存遥员郾猿郾猿摇细菌员远杂则砸晕粤基因扩增院选择带标签的通用引物扩增员远杂则砸晕粤灾源区域袁引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成袁引物上游院灾源云原缘忆鄄郧粤郧栽郧悦悦粤郧悦酝郧悦悦郧悦郧郧栽粤粤鄄猿忆袁引物下游院

101 怨愿中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 灾源砸圆缘圆原缘忆鄄栽栽粤郧郧粤郧粤悦悦悦郧郧粤悦栽粤悦匀灾郧郧郧栽宰栽悦栽粤粤栽鄄猿忆遥每个样品对应相应的带标签上下游引物信息袁孕悦砸扩增体系为圆缘滋蕴渊表员冤遥孕悦砸扩增条件院怨源益袁圆皂蚤灶曰怨源益袁猿园泽曰缘圆益袁源缘泽曰苑圆益袁猿园泽曰猿园个循环曰苑圆益袁缘皂蚤灶曰源益保存遥 表员摇孕悦砸反应体系栽葬遭援员摇砸藻葬糟贼蚤燥灶皂蚤曾贼怎则藻燥枣孕悦砸 试剂名称 浓度 加入体积 员园伊栽葬择遭怎枣枣藻则 渊酝早圆垣云则藻藻冤 圆郾缘园滋蕴 凿晕栽孕酝蚤曾 渊圆郾缘皂酝冤 圆郾园园滋蕴 垣酝早圆 渊圆缘皂酝冤 员郾缘园滋蕴 耘曾鄄贼葬择 渊缘哉辕缘滋蕴冤 园郾圆缘滋蕴 云燥则憎葬则凿责则蚤皂藻则 渊员园滋酝冤 园郾缘园滋蕴 砸藻增藻则泽藻责则蚤皂藻则 渊员园滋酝冤 园郾缘园滋蕴 栽藻皂责造葬贼藻 圆郾园园滋蕴 凿凿匀圆韵 员缘郾苑缘滋蕴 员郾猿郾源摇陨造造怎皂蚤灶葬杂燥造藻曾葬测序院为尽量避免因孕悦砸扩增造成各样品浓度差异对后续基因测序深度的影响袁样品上机测序之前进行凝胶电泳检测袁利用凝胶分析软件月葬灶凿杂糟葬灶以阅晕粤酝葬则噪藻则渊圆园园园遭责冤圆园园遭责条带为基准对阅晕粤样品进行相对定量袁确保尽量以相等的终溶度混合样品袁然后将标准品渊细菌质粒冤加入样品孕悦砸产物袁以同等比例的终浓度混合均匀遥陨造造怎皂蚤灶葬匀蚤杂藻择圆园园园测序平台进行高通咱缘暂量测序遥 员郾猿郾缘摇数据分析院高通量测序数据用月陨孕耘杂渊月葬则糟燥凿藻凿陨造造怎皂蚤灶葬孕葬则蚤藻凿鄄藻灶凿杂藻择怎藻灶糟蚤灶早冤流程进咱远暂行初步原始序列处理袁遥月陨孕耘杂流程将碱基拼接和序列分析分为了两部分袁一部分是使用皂燥贼澡怎则进行序列的挑拣袁去除复杂的嵌合体序列袁得到干净的序列袁进而进入下一步的匝陨陨酝耘分析袁包括葬造责澡葬多样性袁遭藻贼葬多样性和砸阅孕聚类分析等遥使用栽杂悦聚类将微生物进行界门纲目科属种 的分类遥并采用分阶段聚类算法砸阅孕渊砸蚤遭燥泽燥皂葬造咱苑暂阅葬贼葬遭葬泽藻孕则燥躁藻糟贼袁砸阅孕冤将序列聚类成最小操作分类单元渊韵责藻则葬贼蚤燥灶葬造栽葬曾燥灶燥皂蚤糟哉灶蚤贼泽袁韵栽哉泽冤袁当细菌员远杂则砸晕粤基因序列之间的距离在园郾园猿以内袁把它们视为同一个种属遥对于获得的韵栽哉泽袁使用对其进咱愿暂行分类注释遥用皂燥贼澡怎则软件进行测序数据的质量分析袁去除错误序列和嵌合体遥采用匝陨陨酝耘对样本孕阅赃憎澡燥造藻赃贼则藻藻尧杂澡葬灶灶燥灶等多样性指数分析袁从而分析样品的琢多样性袁即单个样品包含种属结构的咱愿暂咱怨暂多样性曰基于哉灶蚤云则葬糟距离袁进行主成分分析袁分析茁多样性曰采用线性判别式分析效应值渊造蚤灶藻葬则咱员园暂凿蚤泽糟则蚤皂蚤灶葬灶贼葬灶葬造赠泽蚤泽藻枣枣藻糟贼泽蚤扎藻袁蕴耘枣杂藻冤袁郧葬造葬曾赠愿怨在线工具寻找不同组别之间有统计学差异的菌群标志物遥应用杂孕杂杂圆园郾园进行统计分析袁采用韵灶藻鄄宰葬赠粤晕韵灾粤进行月燥灶枣藻则则燥灶蚤法两两比较分析或运则怎泽噪葬造鄄宰葬造造蚤泽韵灶藻鄄憎葬赠粤晕韵灾粤进行两两比较袁校正检验水准遥采用郧则葬责澡孕葬凿责则蚤泽皂缘软件工具对孕阅赃憎澡燥造藻赃贼则藻藻尧杂澡葬灶灶燥灶等作图遥 圆摇 结果 圆郾员摇测序与质量控制猿缘个样品质控后共获取了怨猿怨圆苑圆条员远杂则砸晕粤基因序列袁所有样品全部纳入后续分析遥圆郾圆摇常用实验动物与人口腔菌群比较分析圆郾圆郾员摇琢多样性分析院琢多样性通常是指群落内的物种丰度和均匀度遥孕阅赃憎澡燥造藻赃贼则藻藻指观察到的种属数袁反映菌落内的丰度曰杂澡葬灶灶燥灶指数则受到菌落丰度和均度两者的影响遥图员粤显示院人与猪尧犬尧猴尧兔尧大鼠口腔菌群的琢多样性袁即菌群丰度差异显著渊孕约园郾园缘冤曰猪与犬尧猴尧兔口腔菌群的丰度差异显著渊孕约园郾园缘冤袁其 云蚤早援员摇 图员摇 常用实验动物与人口腔菌群孕阅赃憎澡燥造藻赃贼则藻藻渊粤冤和杂澡葬灶灶燥灶指数渊月冤 孕阅赃憎澡燥造藻赃贼则藻藻渊粤冤葬灶凿杂澡葬灶灶燥灶蚤灶凿藻曾渊月冤燥枣燥则葬造枣造燥则葬蚤灶糟燥皂皂燥灶造赠怎泽藻凿造葬遭燥则葬贼燥则赠葬灶蚤皂葬造泽葬灶凿澡怎皂葬灶泽

102 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 怨怨 他动物间均无显著差异渊孕跃园郾园缘冤曰该结果提示袁猪的口腔菌群多样性最低袁人次之袁其他源种动物口腔菌群物种丰富程度相对较高遥图员月显示院人尧猪尧犬尧猴尧兔尧大鼠口腔菌群杂澡葬灶灶燥灶指数均无显著差异渊孕跃园郾园缘冤遥圆郾圆郾圆茁摇多样性分析院茁多样性研究群落之间菌落的相似性关系袁图圆渊粤员尧月员冤中一个点表示一个样品袁样品之间的距离代表样品之间的相似度袁距离越近袁相似度越高遥加权哉灶蚤云则葬糟距离在未加权的基础上增加了菌群的丰度遥图圆显示院除人之 外袁几个常用实验动物的样品间距离较近袁相似度较高曰无论加权和未加权哉灶蚤枣则葬糟距离中袁猴与人的距离相对较近渊见图圆中粤圆尧月圆冤袁表明猴的口腔菌群相对于其他种类动物与人更相似袁猴可能是研究人口腔菌群较适宜的模型动物遥圆郾圆郾猿摇口腔菌群结构组成院圆郾圆郾猿郾员摇菌群结构门水平院图猿显示院人尧猪尧犬尧猴尧兔尧大鼠口腔菌群均以放线菌门渊粤糟贼蚤灶燥遭葬糟蚤造造怎泽冤尧拟杆菌门渊月葬糟贼藻则燥蚤凿藻泽冤尧变形菌门渊孕则燥贼藻燥遭葬糟贼藻则蚤葬冤和厚壁菌门渊云蚤则皂蚤糟怎贼藻泽冤为主袁均占 云蚤早援圆摇 图圆摇常用实验动物与人口腔菌群加权哉灶蚤枣则葬糟距离渊粤员袁粤圆冤和未加权哉灶蚤枣则葬糟距离渊月员袁月圆冤宰藻蚤早澡贼藻凿哉灶蚤云则葬糟凿蚤泽贼葬灶糟藻渊粤员袁粤圆冤葬灶凿怎灶憎藻蚤早澡贼藻凿哉灶蚤云则葬糟凿蚤泽贼葬灶糟藻月员袁月圆冤燥枣燥则葬造枣造燥则葬蚤灶糟燥皂皂燥灶造赠怎泽藻凿造葬遭燥则葬贼燥则赠葬灶蚤皂葬造泽葬灶凿澡怎皂葬灶泽

103 员园园中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 图猿摇 常用实验动物与人口腔菌群结构门水平分布 云蚤早援猿摇 阅蚤泽贼则蚤遭怎贼蚤燥灶燥枣燥则葬造枣造燥则葬葬贼责澡赠造怎皂造藻增藻造蚤灶糟燥皂皂燥灶造赠怎泽藻凿造葬遭燥则葬贼燥则赠葬灶蚤皂葬造泽葬灶凿澡怎皂葬灶泽 愿园豫以上曰人的口腔菌群中袁放线菌门 金氏菌属渊运蚤灶早藻造造葬冤丰富度较高曰犬的梭菌目 渊粤糟贼蚤灶燥遭葬糟蚤造造怎泽冤尧拟杆菌门渊月葬糟贼藻则燥蚤凿藻泽冤尧变形菌门 渊悦造燥泽贼则蚤凿蚤葬造藻泽冤 渊从纲到目冤尧 卟啉菌属 渊孕则燥贼藻燥遭葬糟贼藻则蚤葬冤尧厚壁菌门渊云蚤则皂蚤糟怎贼藻泽冤和梭杆菌门渊云怎泽燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂冤五个门的细菌占主要地位袁高达怨苑郾员豫袁在五种实验动物中袁猴以上五个菌门的水平与人最相似曰猴的梭杆菌门渊云怎泽燥遭葬糟贼藻则蚤葬冤比其它几种动物与人更相似曰猪的变形菌门渊孕则燥贼藻燥遭葬糟贼藻则蚤葬冤 渊孕燥则责澡赠则燥皂燥灶葬泽冤丰富度较高曰兔的丛毛单胞菌科渊悦燥皂葬皂燥灶葬凿葬糟藻葬藻冤渊从目到科冤尧鞘脂杆菌目渊杂责澡蚤灶早燥遭葬糟贼藻则蚤葬造藻泽冤渊从纲到目冤尧黄杆菌科渊云造葬增燥遭葬糟贼藻则蚤葬糟藻葬藻冤渊从纲到科冤丰富度较高曰鼠的罗氏菌属渊砸燥贼澡蚤葬冤渊从门到属冤丰富度较高遥 显著高于人与其它几种动物曰犬的螺旋体门渊杂责蚤则燥糟澡葬藻贼藻泽冤显著高于人和其它几种动物遥 猿摇 讨论 圆郾圆郾猿郾圆摇 菌群结构属水平院 人与缘种常用实验动物口腔菌群丰度差异显著 从图源可以看出袁人与不同种类实验动物的口腔菌群在属水平上均差异较大遥人口腔中数量最多的是普氏菌属渊孕则藻增燥贼藻造造葬冤袁这种菌属在猪尧犬尧猴尧兔尧鼠的口腔中均分布较少曰猪尧猴尧兔尧鼠的口腔菌群中均含有链球菌袁猴口腔的链球菌含量最高曰五种动物中袁猴口腔菌群中梭菌属渊云怎泽燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂冤尧卟啉菌属渊孕燥则责澡赠则燥皂燥灶葬泽冤与人最相似遥 渊孕约园郾园缘冤袁除了物种本身影响外袁可能与彼此之间的饮食尧环境等多种因素有关遥菌群茁多样性分析显示院猴与人的距离相对较近袁表明猴的口腔菌群相对于其他种类动物与人更相似袁提示猴可能是研究人口腔菌群较适宜的模型动物遥人的口腔菌群中袁放线菌门尧拟杆菌门尧变形菌门尧厚壁菌门和梭杆菌门缘个门的细菌占主要地位袁高达怨苑郾员豫袁在 圆郾圆郾源摇 不同物种口腔菌群的统计学分析及生物标 五种实验动物中袁猴以上缘个菌门的水平与人最相 志物院 似袁这可能因为猴与人的亲缘关系最近袁以及人工 为进一步确定菌群种属的丰富度差异袁采用在线统计工具蕴耘枣杂藻来确定人与缘种动物的差异菌属袁蕴阅粤值设置为源遥结果表明院人的普氏菌属渊孕则藻增燥贼藻造造葬冤渊从门到属冤尧梭菌属渊云怎泽燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂冤渊从门到属冤尧奈瑟氏菌属渊晕藻蚤泽泽藻则蚤葬冤丰富度较高曰猴的链球菌属渊杂贼则藻责贼燥糟燥糟糟怎泽冤渊从门到属冤尧棒杆菌属渊悦燥则赠灶藻遭葬糟贼藻则蚤怎皂冤渊从科到属冤尧巴斯德氏菌科渊孕葬泽贼藻怎则藻造造葬糟藻葬藻冤渊从目到科冤尧毛螺旋菌科渊蕴葬糟澡灶燥泽责蚤则葬糟藻葬藻冤尧放线杆菌属渊粤糟贼蚤灶燥遭葬糟蚤造造怎泽冤丰富度较高曰猪的莫拉氏菌属渊酝燥则葬曾藻造造葬冤渊从门到属冤尧 驯养繁殖的猴与人的饮食较相似有关曰梭杆菌门是导致人口腔疾病的重要菌门袁在缘种动物中袁猴与人的梭杆菌门水平最相似袁提示猴可能是研究人与梭杆菌门细菌相关口腔疾病的较适宜模型曰变形菌门包括很多病原菌袁如变形杆菌尧沙门氏菌尧弧菌尧螺杆菌等袁与口腔感染性疾病密切相关袁猪的变形菌门较其它几种动物丰富袁提示猪可能是研究与变形菌门相关疾病的较适宜模型动物曰螺旋体是人口腔正常菌群的一个组成部分袁与牙周疾病的发生关系密切袁在坏死性龈炎病变部位袁可以发现大量的螺

104 中国比较医学杂志圆园员远年愿月第圆远卷第愿期摇悦澡蚤灶允悦燥皂责酝藻凿袁粤怎早怎泽贼圆园员远袁灾燥造援圆远援晕燥援愿 员园员 云蚤早援源摇 图源摇 常用实验动物与人口腔菌群结构属水平分布 阅蚤泽贼则蚤遭怎贼蚤燥灶燥枣燥则葬造枣造燥则葬葬贼早藻灶藻则葬造藻增藻造蚤灶糟燥皂皂燥灶造赠怎泽藻凿造葬遭燥则葬贼燥则赠葬灶蚤皂葬造泽葬灶凿澡怎皂葬灶泽 云蚤早援缘摇 图缘摇 常用实验动物与人口腔菌群蕴藻枣泽藻结果进化分支图渊蕴阅粤越源郾园袁孕约园郾园缘冤 蕴耘枣杂藻则藻泽怎造贼泽燥枣燥则葬造枣造燥则葬蚤灶糟燥皂皂燥灶造赠怎泽藻凿造葬遭燥则葬贼燥则赠葬灶蚤皂葬造泽葬灶凿澡怎皂葬灶泽渊蕴阅粤越源袁孕约园郾园缘冤 旋体袁在慢性牙周炎的病损区也可发现菌斑中的螺咱员圆暂旋体袁在缘种动物中袁只有犬口腔的螺旋体门较为丰富袁提示犬可能是研究与螺旋体门相关疾病的 适宜模型动物遥人口腔中数量最多的是普氏菌属袁是牙周病和咱员猿暂牙周脓肿的致病菌袁这种菌属在五种动物中均分