源圆 灾燥造援员缘 宰葬造噪藻则圆缘远皂葬皂皂葬则赠早造葬灶凿糟藻造造泽援 [ 运藻赠憎燥则凿泽 ] 摇遭燥灶藻糟葬灶糟藻则责葬蚤灶 ; 则葬贼皂燥凿藻造 ; 贼蚤遭蚤葬 ; 遭则藻葬泽贼灶藻燥责造葬泽皂泽糟藻造造 ; 憎葬造噪鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿责葬蚤灶 ; 则葬凿蚤葬贼蚤燥灶澡藻葬贼鄄葬泽泽燥

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1 灾燥造援员缘晕燥援员云藻遭援圆园园愿 悦澡蚤灶藻泽藻允燥怎则灶葬造燥枣悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则葬责赠 源员 [ 文章编号 ] 摇员园园苑鄄猿愿缘载 ( 圆园园愿 ) 园员鄄园园源员鄄园缘 论著 宰葬造噪藻则圆缘远乳腺癌细胞构建大鼠胫骨骨癌痛模型 员员员源员员圆猿缘李晓青, 孙玉明, 黄章翔, 王妙苗, 吴镜湘, 缪雪蓉, 徐爱民, 朱忠正, 赵志奇, 俞卫锋员 ( 员援第二军医大学东方肝胆外科医院麻醉科, 上海摇圆园园源猿愿 ; 圆援放射科 ; 猿援病理科 ; 源援第二军医大学长征医院肿瘤科, 上海圆园园园员圆 ; 缘援复旦大学脑研究院神经生物痛觉研究室, 上海圆园园园猿圆 ) [ 摘摇要 ] 摇目的 : 探讨以宰葬造噪藻则圆缘远大鼠乳腺癌腹水瘤细胞制备大鼠胫骨骨癌痛模型, 为骨癌痛机制和治疗研究提供有用的工具 方法 : 以宰葬造噪藻则圆缘远乳腺癌细胞接种幼年雌性杂阅鼠腹腔制备腹水瘤细胞, 将员缘 μ 造腹水瘤细胞注入雌性成年杂阅鼠左侧胫骨骨髓腔制备骨癌痛模型 ; 以注射加热灭活瘤细胞的杂阅鼠为假手术对照鼠, 以正常鼠为正常对照鼠 造模后员耀耀耀耀耀耀耀耀源周观察模型鼠自由行走痛评分 辐射热痛觉阈值 [ 缩爪反应潜伏期 ( 责葬憎憎蚤贼澡凿则葬憎葬造造葬贼藻灶糟赠, 孕宰蕴 )] 和机械刺激诱发痛觉阈值 [ 缩爪反应阈值 ( 责葬憎憎蚤贼澡凿则葬憎葬造贼澡则藻泽澡燥造凿, 孕宰栽 )] 改变, 并对痛觉行为改变明显的模型鼠进行影像学检测 结果 : 本方法制备模型的成瘤率为远苑援猿豫 模型鼠在造模后员缘凿自由行走痛评分显著高于正常鼠和假手术鼠 ( 孕约园援园员 ); 模型鼠的模型后肢对热刺激痛觉阈值和对机械刺激诱发痛觉阈值分别在造模后圆员凿和员愿凿明显低于正常鼠和假手术鼠 ( 孕约园援园员 ), 同时也明显低于模型肢对侧后肢 ( 孕约园援园缘 ) 影像学结果显示, 痛行为改变明显的模型鼠模型后肢胫骨骨质结构遭到明显破坏 结论 : 采用宰葬造噪藻则圆缘远乳腺癌腹水瘤细胞可成功制备与人类骨癌痛体症相似的大鼠胫骨骨癌痛模型 [ 关键词 ] 摇骨癌痛 ; 大鼠模型 ; 胫骨 ; 乳腺癌细胞 ; 行走痛 ; 辐射热刺激痛 ; 机械刺激痛 [ 中图分类号 ] 摇砸苑猿愿援员摇摇摇摇 [ 文献标志码 ] 摇粤 粤则葬贼皂燥凿藻造燥枣贼蚤遭蚤葬糟葬灶糟藻则责葬蚤灶责则燥凿怎糟藻凿遭赠宰葬造噪藻则圆缘远皂葬皂皂葬则赠早造葬灶凿糟葬则糟蚤灶燥皂葬糟藻造造泽 员蕴陨载蚤葬燥鄄择蚤灶早 圆皂蚤灶 员, 杂哉晕再怎鄄皂蚤灶早 猿, 在匀哉在澡燥灶早鄄扎澡藻灶早 员, 匀哉粤晕郧在澡葬灶早鄄曾蚤葬灶早 缘, 在匀粤韵在澡蚤鄄择蚤 源员员, 宰粤晕郧酝蚤葬燥鄄皂蚤葬燥, 宰哉允蚤灶早鄄曾蚤葬灶早, 酝陨粤韵载怎藻鄄则燥灶早, 载哉粤蚤鄄, 再哉宰藻蚤鄄枣藻灶早员 ( 员援阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣粤灶藻泽贼澡藻泽蚤燥造燥早赠 ; 圆援阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣砸葬凿蚤燥造燥早赠 ; 猿援阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣孕葬贼澡燥造燥早赠, 耘葬泽贼藻则灶匀藻责葬贼燥遭蚤造蚤葬则赠匀燥泽责蚤贼葬造, 杂藻糟燥灶凿酝蚤造蚤贼葬则赠酝藻凿蚤糟葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠, 杂澡葬灶早澡葬蚤圆园园源猿愿, 悦澡蚤灶葬 ; 源援阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣韵灶糟燥造燥早赠, 悦澡葬灶早扎澡藻灶早匀燥泽责蚤贼葬造, 杂藻糟燥灶凿酝蚤造蚤贼葬则赠酝藻凿蚤糟葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠, 杂澡葬灶早澡葬蚤圆园园园员圆, 悦澡蚤灶葬 ; 缘援阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣晕藻怎则燥遭蚤燥造燥早蚤糟粤造早藻泽贼澡藻泽蚤葬, 月则葬蚤灶砸藻泽藻葬则糟澡陨灶泽贼蚤贼怎贼藻, 云怎凿葬灶哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠, 杂澡葬灶早澡葬蚤圆园园园猿圆, 悦澡蚤灶葬 ) [ 粤遭泽贼则葬糟贼 ] 摇韵遭躁藻糟贼蚤增藻 : 栽燥藻泽贼葬遭造蚤泽澡葬贼蚤遭蚤葬造糟葬灶糟藻则责葬蚤灶皂燥凿藻造憎蚤贼澡宰葬造噪藻则圆缘远皂葬皂皂葬则赠早造葬灶凿糟葬则糟蚤灶燥皂葬糟藻造造造蚤灶藻 ( 悦悦蕴 ), 泽燥葬泽贼燥责则燥增蚤凿藻葬怎泽藻枣怎造贼燥燥造枣燥则枣怎则贼澡藻则泽贼怎凿赠燥枣贼澡藻皂藻糟澡葬灶蚤泽皂泽怎灶凿藻则造赠蚤灶早糟葬灶糟藻则责葬蚤灶葬灶凿蚤贼泽贼则藻葬贼皂藻灶贼援 酝藻贼澡燥凿泽 : 宰葬造噪藻则圆缘远皂葬皂皂葬则赠早造葬灶凿糟葬则糟蚤灶燥皂葬糟藻造造泽憎藻则藻蚤灶躁藻糟贼藻凿蚤灶贼燥贼澡藻糟葬增怎皂葬遭凿燥皂蚤灶蚤泽燥枣蚤灶枣葬灶贼则葬贼泽贼燥责则藻责葬则藻葬泽糟蚤贼蚤糟贼怎皂燥则枣造怎蚤凿援粤贼燥贼葬造燥枣员缘 μ 造葬泽糟蚤贼蚤糟贼怎皂燥则枣造怎蚤凿憎葬泽蚤灶躁藻糟贼藻凿蚤灶贼燥贼澡藻糟葬增怎皂皂藻凿怎造造葬则藻燥泽泽蚤怎皂燥枣造藻枣贼贼蚤遭蚤葬蚤灶葬凿怎造贼杂阅则葬贼泽贼燥藻泽贼葬遭造蚤泽澡贼蚤遭蚤葬造糟葬灶糟藻则责葬蚤灶皂燥凿藻造援栽澡藻则皂燥蚤灶葬糟贼蚤增葬贼藻凿糟藻造造泽憎藻则藻蚤灶躁藻糟贼藻凿蚤灶贼燥贼澡藻葬凿怎造贼杂阅则葬贼泽 ( 泽澡葬皂早则燥怎责 ); 灶燥则皂葬造杂阅则葬贼泽泽藻则增藻凿葬泽灶燥则皂葬造糟燥灶贼则燥造早则燥怎责援韵灶藻贼燥源憎藻藻噪泽葬枣贼藻则蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶, 憎葬造噪鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿责葬蚤灶, 则葬凿蚤葬贼蚤燥灶澡藻葬贼鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿责葬蚤灶贼澡则藻泽澡燥造凿 ( 责葬憎憎蚤贼澡凿则葬憎葬造造葬贼藻灶糟赠, 孕宰蕴 ) 葬灶凿皂藻糟澡葬灶蚤糟葬造责葬蚤灶贼澡则藻泽澡燥造凿 ( 责憎葬憎蚤贼澡凿则葬憎葬造贼澡则藻泽澡鄄燥造凿, 孕宰栽 ) 憎藻则藻葬造造燥遭泽藻则增藻凿援粤灶凿贼澡藻遭燥灶藻凿葬皂葬早藻蚤灶贼澡藻皂燥凿藻造泽憎蚤贼澡责葬蚤灶遭藻澡葬增蚤燥则燥遭增蚤燥怎泽造赠糟澡葬灶早藻凿憎葬泽皂燥灶蚤贼燥则藻凿遭赠则葬凿蚤燥早则葬责澡葬灶葬造赠泽蚤泽援砸藻泽怎造贼泽 : 杂怎糟糟藻泽泽枣怎造贼怎皂燥则枣燥则皂蚤灶早憎葬泽葬糟澡蚤藻增藻凿蚤灶远苑郾猿豫燥枣则葬贼泽援云蚤枣贼藻藻灶凿葬赠泽葬枣贼藻则皂燥凿藻造藻泽贼葬遭造蚤泽澡皂藻灶贼, 憎葬造噪鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿责葬蚤灶泽糟燥则藻燥枣贼澡藻皂燥凿藻造早则燥怎责憎葬泽燥遭增蚤燥怎泽造赠澡蚤早澡藻则贼澡葬灶贼澡葬贼燥枣贼澡藻泽澡葬皂早则燥怎责葬灶凿灶燥则皂葬造糟燥灶贼则燥造早则燥怎责 ( 孕约园援园员 ) 援栽澡藻孕宰蕴葬灶凿孕宰栽燥枣贼澡藻蚤灶躁藻糟贼藻凿贼蚤遭蚤葬蚤灶贼澡藻皂燥凿藻造早则燥怎责憎藻则藻燥遭增蚤燥怎泽造赠造燥憎藻则贼澡葬灶贼澡燥泽藻燥枣贼澡藻灶燥则皂葬造糟燥灶贼则燥造早则燥怎责葬灶凿泽澡葬皂早则燥怎责葬贼圆员凿葬灶凿员愿凿葬枣贼藻则蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶 ( 孕约园援园员 ); 皂藻葬灶憎澡蚤造藻, 贼澡藻赠憎藻则藻葬造泽燥燥遭增蚤燥怎泽造赠造燥憎藻则贼澡葬灶贼澡燥泽藻燥枣贼澡藻澡蚤灶凿造蚤皂遭泽燥枣贼澡藻糟燥灶贼则葬造葬贼藻则葬造泽蚤凿藻蚤灶贼澡藻皂燥凿藻造早则燥怎责 ( 孕约园援园缘 ) 援砸葬凿蚤燥早则葬责澡凿葬贼葬泽澡燥憎藻凿贼澡葬贼贼澡藻蚤灶躁藻糟贼藻凿贼蚤遭蚤葬泽燥枣皂燥凿藻造泽憎蚤贼澡燥遭增蚤燥怎泽造赠糟澡葬灶早藻凿责葬蚤灶遭藻澡葬增蚤燥则憎葬泽燥遭增蚤燥怎泽造赠凿葬皂葬早藻凿援悦燥灶糟造怎鄄泽蚤燥灶 : 栽澡藻则葬贼泽皂燥凿藻造燥枣贼蚤遭蚤葬造糟葬灶糟藻则责葬蚤灶, 泽蚤皂蚤造葬则贼燥贼澡藻澡怎皂葬灶遭燥灶藻糟葬灶糟藻则责葬蚤灶, 糟葬灶遭藻泽怎糟糟藻泽泽枣怎造造赠藻泽贼葬遭造蚤泽澡藻凿遭赠 [ 基金项目 ] 摇国家自然科学基金资助项目 ( 晕燥援猿园远园园缘愿源 ) 援杂怎责责燥则贼藻凿遭赠贼澡藻晕葬贼蚤燥灶葬造晕葬贼怎则葬造杂糟蚤藻灶糟藻云燥怎灶凿葬贼蚤燥灶燥枣悦澡蚤灶葬 ( 晕燥援猿园远园园缘愿源 ) [ 作者简介 ] 摇李晓青 ( 员怨苑源鄄 ), 男, 山西省大同市人, 硕士, 主治医师, 主要从事癌症痛机制方面的研究 悦燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早葬怎贼澡燥则援耘鄄皂葬蚤造 : 赠憎枣愿园愿岳泽燥澡怎援糟燥皂

2 源圆 灾燥造援员缘 宰葬造噪藻则圆缘远皂葬皂皂葬则赠早造葬灶凿糟藻造造泽援 [ 运藻赠憎燥则凿泽 ] 摇遭燥灶藻糟葬灶糟藻则责葬蚤灶 ; 则葬贼皂燥凿藻造 ; 贼蚤遭蚤葬 ; 遭则藻葬泽贼灶藻燥责造葬泽皂泽糟藻造造 ; 憎葬造噪鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿责葬蚤灶 ; 则葬凿蚤葬贼蚤燥灶澡藻葬贼鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿责葬蚤灶 ; 皂藻糟澡葬灶蚤糟葬造责葬蚤灶 [ 悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则, 圆园园愿, 员缘 ( 员 ): 源员鄄源缘 ] 摇摇 摇摇癌痛是慢性疼痛中的一类, 全球每年有怨园园多万人患各种类型肿瘤, 每天有员缘园园万患者在经受 [ 员鄄圆癌痛的折磨 ] 癌痛常见于发生骨转移的肿瘤患 [ 猿者 ], 尤其以肺癌 乳腺癌 前列腺癌和卵巢癌等为 [ 源多见, 常常累及胸 腰椎和骨盆等部位 ] 由于机 [ 缘鄄苑制不明, 骨癌痛尚难以完全控制 ] 长期以来, 缺少合适的动物模型是骨癌痛研究的最大障碍 宰葬造噪藻则圆缘远大鼠乳腺癌细胞系由宰葬造噪藻则在员怨圆愿年 [ 愿培育出, 因其良好的致瘤性得到广泛应用 ] 本课题利用该细胞成功构建大鼠胫骨骨癌痛模型, 并对其痛觉行为学 骨影像学变化进行了分析 员摇 员援员摇 材料与方法 细胞与实验动物 宰葬造噪藻则圆缘远大鼠乳腺癌细胞系由上海医药工业研究院刘全海教授馈赠 成年雌性杂责则葬早怎藻鄄阅葬憎造藻赠 大鼠, 体重圆缘园耀耀耀耀耀耀耀耀猿园园早, 由第二军医大学实验动物中心提供 [ 实验动物合格证号为杂悦载运 ( 沪 ) 圆园园圆鄄园园园远 ], 大鼠饲养在恒温 通风良好的环境中, 供以充足的食物和水 每次行为实验前均进行环境适应性训练, 以排除应激干扰 所有实验均严格按照国际实验动物使用准则对动物进行处理 随机分猿 组 : 模型大鼠缘圆只, 假手术组圆园只, 正常组员园只 员援圆摇 宰葬造噪藻则圆缘远乳腺癌细胞大鼠腹水瘤的制备 取出宰葬造噪藻则圆缘远细胞冻存管, 放入猿苑益水浴锅中快速解冻 吸出细胞悬液, 加孕月杂使细胞悬浮 员缘园园伊早离心缘皂蚤灶, 弃上清, 重复漂洗员次, 加适量 苑孕月杂, 调整密度为员伊员园个辕皂造 选远园耀耀耀耀耀耀耀耀愿园早的杂阅 幼年雌性大鼠, 抽园援缘皂造肿瘤细胞接种幼鼠腹腔中 远耀耀耀耀耀耀耀耀苑凿后待幼鼠出现腹水症时, 抽取含肿瘤细胞的腹水 将收集到的腹水瘤细胞在员圆园园伊早下离心猿皂蚤灶, 弃上清 用孕月杂冲洗后再以员圆园园伊早 猿离心猿皂蚤灶 然后用孕月杂调整细胞密度为缘伊员园 个辕 μ 造以作接种使用 假接种手术组中, 取腹水瘤细胞水浴煮猿园皂蚤灶将细胞灭活, 以同样密度植入 员援猿摇 大鼠胫骨骨癌痛模型的制备 员园豫水合氯醛 ( 猿园园皂早辕噪早 ) 腹腔注射麻醉后, 以大鼠脚趾对有齿镊钳夹无反应为麻醉满意指标 消毒其左侧胫骨下员辕猿皮肤, 切开皮肤, 分离肌肉, 暴露胫骨骨面 用直径为员皂皂的不锈钢手动钻子 ( 第二军医大学生理学教研室文文博士提供 ) 垂直于骨表面钻孔后, 用圆缘 μ 造微量进样器深刺入骨髓腔, 缓慢注入员缘 μ 造含有宰葬造噪藻则圆缘远大鼠乳腺癌细胞的腹水混合液, 用无菌骨蜡封孔并逐层消毒缝合 术后将动物放置于猿苑益热板上复温, 待其复苏后送回笼中继续饲养 整个手术过程和相关手术器械均严格按照无菌手术要求执行 假手术动物经微量进样器注射加热灭活后的死细胞 员援源摇模型大鼠制备后体重观察分别在接种瘤细胞后天数 ( 责燥泽贼鄄糟葬灶糟藻则糟藻造造蚤皂鄄责造葬灶贼葬贼蚤燥灶凿葬赠, 孕陨阅 ) 为园 猿 远 怨 员圆 员缘 员愿 圆员 圆源 圆苑 猿园凿称体重 假手术鼠处理方法同模型组 员援缘摇模型大鼠的行为学观察员援缘援员摇自由行走痛行为评分摇选择孕陨阅为园 猿 远 怨 员圆 员缘 员愿 圆员 圆源 圆苑 猿园凿作行走痛行为评分 固定时间将大鼠置于一透明光滑平底塑料盒内 ( 缘园糟皂伊缘园糟皂伊源园糟皂 ), 大鼠可在盒内自由走动, 待其适应猿园皂蚤灶后观察 按如下标准进行痛行为学评分 : 园分, 行动正常, 模型侧和对照侧后肢的动作相同 ; 员分, 模型侧后肢轻度跛行 ; 圆分, 模型侧后肢跛行的程度在员分和猿分之间 ; 猿分, 模型侧后肢有严重的跛行 ; 源分, 模型侧后肢完全不能动作, 不能着地 员援缘援圆摇辐射热痛觉阈值的测定摇采用猿猿远型辐射热测痛仪测定大鼠对辐射热刺激反应的阈值 用大鼠的缩爪反应潜伏期 ( 责葬憎憎蚤贼澡凿则葬憎葬造造葬贼藻灶糟赠, 孕宰蕴 ) 时间表示大鼠热刺激痛觉阈值 在孕陨阅的园 猿 远 怨 员圆 员缘 员愿 圆员 圆源 圆苑 猿园凿, 固定时间将大鼠置于半透明的有机玻璃笼中, 适应猿园皂蚤灶后, 测定左 右脚掌辐射热刺激痛觉阈值, 圆次测试间隔期为员园皂蚤灶, 以源耀耀耀耀耀耀耀耀缘次测定的平均值为检测值 在测值过程中尽量保持大鼠处在相同状态 为避免辐射热灼伤大鼠皮肤, 预先设定热刺激时间上限为圆园泽 员援缘援猿摇机械刺激痛觉阈值的测定摇采用增燥灶云则藻赠系列纤毛测定大鼠对机械刺激反应的阈值 用大鼠的缩爪反应阈值 ( 责葬憎憎蚤贼澡凿则葬憎葬造贼澡则藻泽澡燥造凿, 孕宰栽 ) 表示大鼠机械刺激痛阈 在孕陨阅的园 猿 远 怨 员圆 员缘 员愿 圆员 圆源 圆苑 猿园凿, 固定时间将大鼠置于半透明有机玻璃笼中, 网笼架置于铁丝网板上以便实验操作和观察 铁丝网板厚约缘皂皂, 小孔直径员援缘皂皂

3 晕燥援员 李晓青, 等援宰葬造噪藻则圆缘远乳腺癌细胞构建大鼠胫骨骨癌痛模型 源猿 适应猿园皂蚤灶后, 将增燥灶云则藻赠丝由下向上垂直刺激大鼠模型侧后肢足爪底中外侧皮肤表面, 以纤毛稍稍弯曲作为完全受力的标准 按照递增的顺序依次施加增燥灶云则藻赠纤毛 ( 员 员援源 圆 源 远 愿 员园 员缘 圆远早 ), 每次刺激持续圆泽, 间隔员缘泽, 连续缘次 若猿次不抬腿, 换用更高克数的纤毛 ; 如缘次中有猿次抬腿, 则返回低一级克数的纤毛, 直到每缘次测试中有猿次抬腿 能够引起猿辕缘次抬腿的最低增燥灶云则藻赠纤毛的克数被定义为孕宰栽值 同样方法测定另一侧后爪 员援远摇 模型大鼠胫骨骨质破坏的影像学观察 在大鼠胫骨接种肿瘤细胞制备模型后, 为了确定肿瘤生长对骨质的破坏, 孕陨阅的缘 员苑 圆远凿分别对大鼠模型侧和对侧后肢进行了载线检测 水合氯醛 ( 猿园园皂早辕噪早, 腹腔注射 ) 麻醉后, 将大鼠置于载射线机 ( 柯达, 意大利 ) 前, 暴露在猿园噪灾强度的载射线下员皂蚤灶, 然后底片在显影剂 ( 运燥灶蚤糟葬杂砸载鄄员园员 ) 下 [ 怨 ] 显影 根据匀燥灶燥则藻等制订的骨质破坏标准, 对放射学影像进行评分 : 园分, 正常骨结构, 没有任何破坏 ; 员分, 有骨破坏的小坑 ( 员耀耀耀耀耀耀耀耀猿个 ); 圆分, 骨破坏小坑增加 ( 源耀耀耀耀耀耀耀耀远个 ), 并且骨髓质有缺失 ; 猿分, 骨髓质有缺失并且骨皮质有侵蚀和糜烂 ; 源分, 非骨皮质的全层缺损 ; 缘分, 非骨皮质的全层缺损和出现移位的骨折 员援苑摇 统计学处理 数据用珋曾依泽表示, 均值间差异的显著性检验用 杂蚤早皂葬泽贼葬贼藻统计软件进行, 处理前后行为学反应的时间过程采用双因素方差分析 ( 贼憎燥憎葬赠粤晕韵灾粤 ), 并定义孕约园援园缘为显著性界值 后, 模型组的体重增长慢于假手术组, 之后差距更明显 ( 孕约园援园缘或孕约园援园员 ) 图员摇模型组与假手术组大鼠术后体重的变化云蚤早援员摇悦澡葬灶早藻泽燥枣则葬贼遭燥凿赠皂葬泽泽燥枣皂燥凿藻造早则燥怎责葬灶凿泽澡葬皂早则燥怎责葬枣贼藻则燥责藻则葬贼蚤燥灶 孕约园援园缘, 孕约园援园员增泽泽澡葬皂早则燥怎责圆援圆摇模型大鼠痛觉行为的改变圆援圆援员摇自由行走痛觉的改变摇整个测试观察期内, 正常组和假手术组大鼠后肢行走痛行为评分均无变化, 均为园 ; 模型组大鼠和上述两组相比差异有显著的统计学意义, 且随着肿瘤细胞的生长, 局部组织肿胀日益明显, 员缘凿后痛行为评分越来越高 ( 孕约园郾园缘, 孕约园郾园员, 图圆 ) 圆摇结摇果 圆援员摇模型大鼠的一般情况接种宰葬造噪藻则圆缘远乳腺癌细胞的模型鼠共计缘圆只, 其中有肿瘤细胞生长的共猿缘只, 成瘤率为远苑郾猿豫 ; 苑只大鼠实验过程中死亡, 最终纳入研究的共圆愿只, 占总数的缘猿援愿豫 模型鼠术后圆周内生长状态良好, 其中圆源只 ( 占愿缘豫 ) 从术后员缘耀耀耀耀耀耀耀耀员愿凿开始, 陆续出现模型侧后肢不能负重, 表现为足外翻 ; 另源只 ( 占员缘豫 ) 术后员怨耀耀耀耀耀耀耀耀圆员凿出现模型肢足外翻 足外翻后不久, 接种部位肿胀, 其后源耀耀耀耀耀耀耀耀远凿出现轻度恶病质, 随着恶病质体征加重, 最终导致全身衰竭或盆腔 腹腔广泛转移而死亡 圆缘只模型鼠 ( 占怨园豫 ) 从出现痛敏到死亡的时间为远耀耀耀耀耀耀耀耀怨凿, 猿只模型鼠 ( 占员园豫 ) 为员园耀耀耀耀耀耀耀耀员圆凿 假手术组大鼠存活良好, 活动如常 模型组和假手术组大鼠术后体重变化如图员所示 : 初期两组体重无差异, 孕陨阅员缘凿 图圆摇模型大鼠自由行走痛行为评分的改变云蚤早援圆摇悦澡葬灶早藻泽燥枣憎葬造噪鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿责葬蚤灶泽糟燥则藻蚤灶皂燥凿藻造早则燥怎责, 泽澡葬皂早则燥怎责葬灶凿灶燥则皂葬造糟燥灶贼则燥造早则燥怎责 孕约园援园缘, 孕约园援园员增泽泽澡葬皂早则燥怎责燥则灶燥则皂葬造早则燥怎责 圆援圆援圆摇辐射热痛觉阈值的改变摇正常组和假手术组大鼠术后各时间点组内比较, 双侧后肢对辐射热痛觉阈值孕宰蕴均无明显改变 模型组大鼠虽在早期 ( 前员缘凿 ) 模型侧与对侧后肢孕宰蕴值无统计学差异, 但模型侧后肢负重力下降 ; 大约孕陨阅圆员凿开始, 表现为辐射热痛觉过敏期, 持续约圆耀耀耀耀耀耀耀耀猿凿, 该时期组间热痛觉阈值相比差异显著 ( 孕约园援园员, 图猿粤 ); 过敏期后, 模型侧孕宰蕴热痛觉阈值略有上升, 但仍低

4 源源 灾燥造援员缘 于基础值 ( 孕约园援园缘 ) 圆援圆援猿摇机械刺激痛觉阈值的改变摇假手术组和正常组对机械刺激的孕宰栽值在术后各时间点组内比较无显著性差异 模型侧后肢机械痛过敏出现时间与辐射热痛敏相似, 时间短, 持续圆耀耀耀耀耀耀耀耀猿凿 ( 图猿月 ), 组间机械痛觉阈值比较有统计学意义 ( 孕约园郾园员 ) 的部位是胸椎 腰椎和骨盆 所以, 临床中胸椎 腰椎是晚期肺癌 乳腺癌的高发转移部位 ; 骨盆是前列 [ 员园鄄员圆腺癌的高发转移部位 ] 图源摇模型大鼠模型侧胫骨和对侧胫骨的载线影像对比云蚤早援源摇砸葬凿蚤燥早则葬责澡蚤皂葬早藻糟燥灶贼则葬泽贼憎蚤贼澡皂燥凿藻造泽蚤凿藻葬灶凿糟燥灶贼则燥造葬贼藻则葬造泽蚤凿藻燥枣皂燥凿藻造则葬贼粤鄄悦 : 砸葬凿蚤燥早则葬责澡泽燥枣皂燥凿藻造泽蚤凿藻燥灶缘, 员苑葬灶凿圆远凿葬赠泽葬枣贼藻则贼怎皂燥则糟藻造造泽蚤灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶 ; 阅 : 砸葬凿蚤燥早则葬责澡燥枣皂燥凿藻造燥灶贼澡藻糟燥灶贼则燥造葬贼藻则葬造泽蚤凿藻 ; 葬原凿 : 砸葬凿蚤燥早则葬责澡泽燥枣粤鄄阅葬贼葬澡蚤早澡藻则皂葬早灶蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 图猿摇模型大鼠后肢对辐射热刺激痛引起的缩腿反应潜伏期 [ 孕宰蕴 ( 粤 )] 和机械性刺激痛引发的抬腿阈值 [ 孕宰栽 ( 月 )] 的改变云蚤早援猿摇悦澡葬灶早藻泽燥枣责葬憎憎蚤贼澡凿则葬憎葬造造葬贼藻灶糟赠 ( 粤 ) 贼燥澡藻葬贼鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿责葬蚤灶葬灶凿责葬憎憎蚤贼澡凿则葬憎葬造贼澡则藻泽澡燥造凿泽 ( 月 ) 贼燥皂藻糟澡葬灶蚤糟葬造责葬蚤灶燥枣皂燥凿藻造则葬贼泽 孕约园援园缘, 孕约园援园员增泽灶燥则皂葬造早则燥怎责燥则泽澡葬皂早则燥怎责圆援猿摇模型大鼠胫骨的骨质破坏影像学资料显示 : 孕陨阅的缘凿, 模型组和假手术组均未发现骨破坏, 评分均为园分 ; 孕陨阅的员苑凿, 模型组出现明显的骨皮质破坏征象, 评分为 ( 员援缘依园郾缘 ) 分 ; 孕陨阅圆远凿, 模型组整个骨结构发生严重破坏, 表现为多处骨皮质缺失, 平均为 ( 源依园援缘 ) 分, 假手术组全过程一直为园分 ( 图源 ) 猿摇讨摇论目前研究癌痛机制主要以骨癌痛模型为主 在实际临床病例观察中, 肿瘤细胞转移到骨或原发肿瘤在骨内, 都会出现剧烈的疼痛 ; 并且随着骨质的破坏, 疼痛程度加剧 一般易发生骨转移的肿瘤有肺癌 乳腺癌 前列腺癌和卵巢癌等 最易发生骨转移 摇摇一般而言, 动物模型应和临床征象保持一致才能更好揭示病理现象产生的机制 因此, 构建稳定 有效的动物模型是目前癌痛研究的首要任务 近年来, 国内外学者已做了大量工作 最早有学者将 宰葬造噪藻则圆缘远细胞通过静脉注入大鼠血管里, 但是因为个体免疫状态的差异, 致瘤的部位无法固定, 且待研究大鼠的生命状态极不稳定, 无法系统地长时间 [ 员猿 ] 进行观察 员怨怨怨年, 美国酝葬灶赠贼澡教授等率先在小鼠股骨建立骨癌痛模型, 随后展开了一系列的行 [ 员源鄄员苑为学 形态学和药理学研究 ] 圆园园圆年英国的 [ 员愿 ] 酝藻凿澡怎则泽贼等运用酝砸酝栽鄄员大鼠乳腺癌细胞构建大鼠胫骨癌痛模型, 并迅速在美国 日本和韩国得到 [ 员怨了复制 ] 圆园园缘年, 美国科研人员用大鼠前列腺癌细胞构建成功大鼠胫骨骨癌痛模型, 但上述肿瘤 [ 圆园细胞在国内不易得到 ] 本课题实验了好几种品系的大鼠肿瘤细胞, 最终选择宰葬造噪藻则圆缘远大鼠乳腺癌腹水瘤细胞, 原因为其稳定的成瘤率, 能表现出许多与人类骨癌痛相似的体征, 如自发痛 触发痛及痛觉过敏等 本研究结果显示, 模型鼠模型侧后肢在植入瘤细胞员圆凿后出现自由行走疼痛, 员缘凿痛行为评分非常显著高于正常鼠和假手术鼠 ( 孕约园援园员 ); 同时, 模型鼠模型侧后肢对热刺激反应痛觉阈值和对机械刺激痛觉阈值分别在造模圆员凿和员愿凿后明显低于正常鼠和假手术鼠 ( 孕约园援园员 ), 也明显低于

5 晕燥援员 李晓青, 等援宰葬造噪藻则圆缘远乳腺癌细胞构建大鼠胫骨骨癌痛模型 源缘 模型肢对侧后肢 ( 孕约园援园缘 ) 同时显示, 该模型大鼠的热痛觉阈值和机械痛觉阈值测定容易, 模型大鼠自由行走痛行为学评分易于筛选, 这些都表明用宰葬造噪藻则圆缘远乳腺癌腹水瘤细胞可以成功构建大鼠胫骨骨癌痛模型 总之, 该模型有以下特点 :( 员 ) 表现出与人类骨癌痛相似的痛觉行为 ;( 圆 ) 疼痛程度定量指标检测容易, 定量较精确 ;( 猿 ) 模型制备成功率较高, 制备过程比较容易, 有较好的实用性 在建模过程中, 本实验总结了以下几条重要经验 :( 员 ) 应选用棕黄色的宰葬造噪藻则圆缘远肿瘤细胞腹水, 避免使用血性腹水, 否则会增加造模动物的死亡率, 这可能与血型腹水中的肿瘤细胞致死率较高有关 ( 圆 ) 切不可在皮下组织或肌肉过多的部位钻孔, 要尽量减少钻孔和探查骨髓腔, 以减少对正常骨结构的破坏, 确保骨髓腔通畅 ; 肿瘤细胞注入后, 须用骨腊封口, 并用酒精杀死遗留在骨外的肿瘤细胞, 避免肿瘤在骨外生长产生假阳性结果 ; 同时注意预防感染 ( 猿 ) 严格控制注入的肿瘤细胞数量 根据预实验观察, 大鼠胫骨骨髓腔容积约为员缘 μ 造, 因此将注入瘤细胞量也定为员缘 μ 造 注入后看到反流现象是肿瘤细胞进入骨髓腔的确切指标 ( 源 ) 实验中每只大鼠接种肿瘤细胞后出现痛敏现象的时间各不相同, 可能与个体免疫差异有关 ; 约愿缘豫出现在孕陨阅的员缘耀耀耀耀耀耀耀耀员愿凿, 另员缘豫出现在员怨耀耀耀耀耀耀耀耀圆员凿 虽然每只大鼠骨痛过敏出现的窗口期不一, 但一旦出现, 其后的生长情况都比较类似 : 怨园豫的模型鼠从出现窗口期到死亡的时间为远耀耀耀耀耀耀耀耀怨凿, 员园豫的为员园耀耀耀耀耀耀耀耀员圆凿 ; 怨园豫的模型鼠在终末期, 处于不吃不动的状态, 反应迟钝, 新环境下也无探索行为 提示在今后的实验中只能以某一段时间作为参考点 综上所述, 采用宰葬造噪藻则圆缘远乳腺癌腹水瘤细胞可成功构建大鼠胫骨骨癌痛模型, 该模型的建立将为癌痛机制及治疗的研究提供新的工具 [ 参考文献 ] [ 员 ] 摇悦造藻藻造葬灶凿悦杂援栽澡藻皂藻葬泽怎则藻皂藻灶贼燥枣责葬蚤灶枣则燥皂皂藻贼葬泽贼葬贼蚤糟遭燥灶藻凿蚤泽藻葬泽藻 : 糟葬责贼怎则蚤灶早贼澡藻责葬贼蚤藻灶贼鸳泽藻曾责藻则蚤藻灶糟藻 [ 允 ] 援悦造蚤灶悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园园远, 员圆 ( 圆园孕贼圆 ): 泽远圆猿远鄄泽远圆源圆援 [ 圆 ] 摇运葬泽葬蚤再, 哉糟澡蚤凿葬粤援匝怎葬造蚤贼赠燥枣造蚤枣藻蚤灶责葬贼蚤藻灶贼泽憎蚤贼澡皂藻贼葬泽贼葬贼蚤糟泽责蚤灶葬造贼怎皂燥则泽 [ 允 ] 援悦造蚤灶悦葬造糟蚤怎皂, 圆园园远, 员远 ( 源 ): 缘怨愿鄄远园猿援 [ 猿 ] 摇栽澡俟则造蚤皂葬灶灶月, 凿藻杂贼燥怎贼扎晕阅援悦葬怎泽藻泽葬灶凿贼则藻葬贼皂藻灶贼燥枣遭燥灶藻责葬蚤灶燥枣皂葬造蚤早灶葬灶贼燥则蚤早蚤灶 [ 允 ] 援阅则怎早泽, 员怨怨远, 缘员 ( 猿 ): 猿愿猿鄄猿怨愿援 [ 源 ] 摇酝藻则糟葬凿葬灶贼藻杂, 粤则糟怎则蚤耘援月则藻葬噪贼澡则燥怎早澡责葬蚤灶蚤灶糟葬灶糟藻则责葬贼蚤藻灶贼泽 : 责葬贼澡燥责澡赠泽蚤燥造燥早赠葬灶凿贼则藻葬贼皂藻灶贼 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则栽则藻葬贼砸藻增, 员怨怨愿, 圆源 ( 远 ): 源圆缘鄄源猿圆援 [ 缘 ] 摇酝葬灶贼赠澡孕宰, 悦造燥澡蚤泽赠阅砸, 运燥造贼扎藻灶遭怎则早酝, 藻贼葬造援酝燥造藻糟怎造葬则 皂藻糟澡葬鄄灶蚤泽皂泽燥枣糟葬灶糟藻则责葬蚤灶 [ 允 ] 援晕葬贼砸藻增悦葬灶糟藻则, 圆园园圆, 圆 ( 猿 ): 圆园员鄄圆园怨援 [ 远 ] 摇杂葬葬凿云, 孕藻则则燥贼贼藻孕, 月佴灶葬则凿云, 藻贼葬造援月燥灶藻澡藻葬造贼澡蚤灶皂藻灶憎蚤贼澡责则燥泽贼葬贼藻糟葬灶糟藻则 : 凿蚤葬早灶燥泽贼蚤糟葬灶凿贼澡藻则葬责藻怎贼蚤糟糟燥灶泽蚤凿藻则葬贼蚤燥灶泽 [ 允 ] 援悦葬灶允哉则燥造, 圆园园缘, 员圆 ( 杂怎责责造圆 ): 怨鄄员缘援 [ 苑 ] 摇粤澡灶匀, 酝燥怎泽葬增蚤孕, 砸燥贼澡杂, 藻贼葬造援杂贼葬遭蚤造蚤贼赠燥枣贼澡藻皂藻贼葬泽贼葬贼蚤糟泽责蚤灶藻责则藻葬灶凿责燥泽贼增藻则贼藻遭则燥责造葬泽贼赠 [ 允 ] 援允杂责蚤灶葬造阅蚤泽燥则凿栽藻糟澡, 圆园园远, 员怨 ( 猿 ): 员苑愿鄄员愿圆援 [ 愿 ] 摇杂蚤皂责噪蚤灶泽匀, 蕴藻澡皂葬灶允酝, 酝葬扎怎则噪蚤藻憎蚤糟扎允耘, 藻贼葬造援粤皂燥则责澡燥造燥早蚤鄄糟葬造葬灶凿责澡藻灶燥贼赠责蚤糟葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣宰葬造噪藻则圆缘远糟藻造造泽 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则砸藻泽, 员怨怨员, 缘员 ( 源 ): 员猿猿源鄄员猿猿愿援 [ 怨 ] 摇匀燥灶燥则藻孕, 砸燥早藻则泽杂阅, 杂糟澡憎藻蚤酝允, 藻贼葬造援酝怎则蚤灶藻皂燥凿藻造泽燥枣蚤灶枣造葬皂皂葬贼燥则赠, 灶藻怎则燥责葬贼澡蚤糟葬灶凿糟葬灶糟藻则责葬蚤灶藻葬糟澡早藻灶藻则葬贼藻泽葬怎灶蚤择怎藻泽藻贼燥枣灶藻怎则燥糟澡藻皂蚤糟葬造糟澡葬灶早藻泽蚤灶贼澡藻泽责蚤灶葬造糟燥则凿葬灶凿泽藻灶泽燥则赠灶藻怎则燥灶泽 [ 允 ] 援晕藻怎则燥泽糟蚤藻灶糟藻, 圆园园园, 怨愿 ( 猿 ): 缘愿缘鄄缘怨愿援 [ 员园 ] 酝糟月则蚤凿藻宰匀援孕澡藻灶燥贼赠责藻葬灶凿枣怎灶糟贼蚤燥灶泽燥枣蚤灶贼则葬贼怎皂燥则葬造皂葬糟则燥责澡葬早藻泽 [ 允 ] 援月蚤燥糟澡蚤皂月蚤燥责澡赠泽粤糟贼葬, 员怨愿远, 愿远缘 ( 员 ): 圆苑鄄源员援 [ 员员 ] 在澡葬灶早云, 蕴怎宰, 阅燥灶早在援栽怎皂燥则鄄蚤灶枣蚤造贼则葬贼蚤灶早皂葬糟则燥责澡葬早藻泽葬则藻蚤灶增燥造增藻凿蚤灶泽怎责责则藻泽泽蚤灶早早则燥憎贼澡葬灶凿皂藻贼葬泽贼葬泽蚤泽燥枣澡怎皂葬灶责则燥泽贼葬贼藻糟葬灶糟藻则糟藻造造泽遭赠陨晕云鄄遭藻贼葬早藻灶藻贼澡藻则葬责赠蚤灶灶怎凿藻皂蚤糟藻 [ 允 ] 援悦造蚤灶悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园园圆, 愿 ( 怨 ): 圆怨源圆鄄圆怨缘员援 [ 员圆 ] 悦造葬则藻悦, 砸燥赠造藻阅, 杂葬澡葬则蚤葬运, 藻贼葬造援孕葬蚤灶枣怎造遭燥灶藻皂藻贼葬泽贼葬泽藻泽 : 葬责则燥泽责藻糟贼蚤增藻燥遭泽藻则增葬贼蚤燥灶葬造糟燥澡燥则贼泽贼怎凿赠 [ 允 ] 援孕葬造造蚤葬贼酝藻凿, 圆园园缘, 员怨 ( 苑 ): 缘圆员鄄缘圆缘援 [ 员猿 ] 杂糟澡憎藻蚤酝允, 匀燥灶燥则藻孕, 砸燥早藻则泽杂阅, 藻贼葬造援晕藻怎则燥糟澡藻皂蚤糟葬造葬灶凿糟藻造造怎造葬则则藻燥则早葬灶蚤扎葬贼蚤燥灶燥枣贼澡藻泽责蚤灶葬造糟燥则凿蚤灶葬皂怎则蚤灶藻皂燥凿藻造燥枣遭燥灶藻糟葬灶糟藻则责葬蚤灶 [ 允 ] 援允晕藻怎则燥泽糟蚤, 员怨怨怨, 员怨 ( 圆源 ): 员园愿愿远鄄员园愿怨苑援 [ 员源 ] 杂葬蚤贼燥韵, 粤燥藻栽, 再葬皂葬皂燥贼燥栽援粤灶葬造早藻泽蚤糟藻枣枣藻糟贼泽燥枣灶燥灶泽贼藻则燥蚤凿葬造葬灶贼蚤蚤灶枣造葬皂皂葬贼燥则赠凿则怎早泽, 葬糟藻贼葬皂蚤灶燥责澡藻灶, 葬灶凿皂燥则责澡蚤灶藻蚤灶葬皂燥怎泽藻皂燥凿藻造燥枣遭燥灶藻糟葬灶糟藻则责葬蚤灶 [ 允 ] 援允粤灶藻泽贼澡, 圆园园缘, 员怨 ( 猿 ): 圆员愿鄄圆圆源援 [ 员缘 ] 阅燥灶燥增葬灶鄄砸燥凿则蚤早怎藻扎栽, 阅蚤糟噪藻灶泽燥灶粤匀, 哉则糟澡悦耘援郧葬遭葬责藻灶贼蚤灶灶燥则鄄皂葬造蚤扎藻泽泽责蚤灶葬造灶藻怎则燥灶葬造则藻泽责燥灶泽藻泽贼澡葬贼糟燥则则藻造葬贼藻憎蚤贼澡遭藻澡葬增蚤燥则蚤灶葬则葬贼皂燥凿藻造燥枣糟葬灶糟藻则鄄蚤灶凿怎糟藻凿遭燥灶藻责葬蚤灶 [ 允 ] 援粤灶藻泽贼澡藻泽蚤燥造燥早赠, 圆园园缘, 员园圆 ( 员 ): 员猿圆鄄员源园援 [ 员远 ] 郧澡蚤造葬则凿蚤允砸, 砸觟澡则蚤糟澡匀, 蕴蚤灶凿泽葬赠栽匀, 藻贼葬造援杂藻造藻糟贼蚤增藻遭造燥糟噪葬凿藻燥枣贼澡藻糟葬责泽葬蚤糟蚤灶则藻糟藻责贼燥则栽砸孕灾员葬贼贼藻灶怎葬贼藻泽遭燥灶藻糟葬灶糟藻则责葬蚤灶 [ 允 ] 援允晕藻怎则燥泽糟蚤, 圆园园缘, 圆缘 ( 员圆 ): 猿员圆远鄄猿员猿员援 [ 员苑 ] 杂蚤灶早造藻贼燥灶孕粤, 蕴蚤灶早藻灶酝宰, 云藻噪藻贼藻酝允, 藻贼葬造援酝藻贼澡赠造灶葬造贼则藻曾燥灶藻蚤灶澡蚤遭蚤贼泽燥责蚤葬贼藻葬灶凿灾耘郧云鄄蚤灶凿怎糟藻凿葬灶早蚤燥早藻灶藻泽蚤泽 : 则燥造藻燥枣则藻糟藻责贼燥则贼则葬灶泽葬糟贼蚤增葬贼蚤燥灶 [ 允 ] 援酝蚤糟则燥增葬泽糟砸藻泽, 圆园园远, 苑圆 ( 员鄄圆 ): 猿鄄员员援 [ 员愿 ] 酝藻凿澡怎则泽贼杂允, 宰葬造噪藻则运, 月燥憎藻泽酝, 藻贼葬造援粤则葬贼皂燥凿藻造燥枣遭燥灶藻糟葬灶糟藻则责葬蚤灶 [ 允 ] 援孕葬蚤灶, 圆园园圆, 怨远 ( 员鄄圆 ): 员圆怨鄄员源园援 [ 员怨 ] 蕴藻藻月匀, 杂藻燥灶早允, 运蚤皂哉允, 藻贼葬造援月藻澡葬增蚤燥则葬造糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽燥枣葬皂燥怎泽藻皂燥凿藻造燥枣糟葬灶糟藻则责葬蚤灶 [ 允 ] 援再燥灶泽藻蚤酝藻凿允, 圆园园缘, 源远 ( 圆 ): 圆缘圆鄄圆缘怨援 [ 圆园 ] 在澡葬灶早砸载, 蕴蚤怎月, 宰葬灶早蕴, 藻贼葬造援杂责蚤灶葬造早造蚤葬造葬糟贼蚤增葬贼蚤燥灶蚤灶葬灶藻憎则葬贼皂燥凿藻造燥枣遭燥灶藻糟葬灶糟藻则责葬蚤灶责则燥凿怎糟藻凿遭赠责则燥泽贼葬贼藻糟葬灶糟藻则糟藻造造蚤灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶燥枣贼澡藻贼蚤遭蚤葬 [ 允 ] 援孕葬蚤灶, 圆园园缘, 员员愿 ( 员鄄圆 ): 员圆缘鄄员猿远援 [ 收稿日期 ] 摇圆园园苑原员圆原圆员 [ 修回日期 ] 摇圆园园愿原园员原园缘 [ 本文编辑 ] 摇郁晓路