员怨圆 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员缘年源月, 圆圆 ( 圆 ) [ 粤遭泽贼则葬糟贼 ] 摇粤凿燥责贼蚤增藻糟藻造造贼则葬灶泽枣藻则 ( 粤悦栽 ) 蚤泽葬责葬泽泽蚤增藻蚤皂皂怎灶燥贼澡藻则葬责赠燥枣糟葬灶糟藻则援砸藻糟藻灶贼造赠, 则藻泽藻葬则糟澡藻则泽澡葬增藻燥遭泽藻则增藻凿贼澡葬贼凿怎则葬

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1 中国肿瘤生物治疗杂志摇澡贼贼责 : 辕辕憎憎憎援遭蚤燥贼澡藻则援燥则早悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则, 粤责则援圆园员缘, 灾燥造援圆圆, 晕燥援圆 员怨员 凿燥蚤 : 员园援猿愿苑圆辕躁援蚤泽泽灶援员园园苑鄄猿愿缘载援圆园员缘援园圆援园园怨 专家论坛 肿瘤过继免疫细胞治疗靶抗原选择的新视野 魏枫, 任秀宝 ( 天津医科大学肿瘤医院免疫室, 国家肿瘤临床医学研究中心, 天津市肿瘤免疫与生物治疗重点实验室, 天津猿园园园远园 ) 魏枫摇圆园园苑年毕业于天津医科大学, 获得肿瘤学博士学位, 导师为郝希山院士 圆园园愿年至圆园员圆年作为博士后访问学者赴美国国家癌症研究所 ( 晕悦陨 ) 分子免疫调节实验室 ( 蕴酝陨 ), 在警报素 ( 葬造葬则皂蚤灶 ) 概念的提出者韵责责藻灶澡藻蚤皂博士和杨德博士直接指导下开展警报素在抗肿瘤免疫中作用的研究, 参与发现已知最强的刺激栽澡员类免疫反应的警报素匀酝郧晕员, 并证明警报素匀酝郧晕员可以作为肿瘤疫苗佐剂诱导强大的抗原特异性免疫反应 这些发现提示了警报素在肿瘤生物治疗领域广阔的应用前景 现主要从事肿瘤生物治疗应用基础研究, 研究方向为以警报素为佐剂的新型肿瘤疫苗的研发和以基因修饰栽细胞为代表的免疫细胞治疗新策略的研究 先后主持国家科技重大专项子课题 国家自然科学基金 天津市科委面上项目等多项课题, 在悦葬灶糟藻则砸藻泽藻葬则糟澡等高水平期刊发表第一作者学术论文多篇 耘鄄皂葬蚤造 : 蚤憎澡蚤枣枣造藻岳澡燥贼皂葬蚤造援糟燥皂 任秀宝摇博士, 教授, 主任医师, 博士生导师 现任天津医科大学肿瘤医院生物治疗科主任, 天津市医学生物技术应用研究中心主任, 中国医药生物技术协会医药生物技术临床应用专业委员会副主任委员兼秘书长, 中国免疫学会肿瘤免疫与生物治疗分会副主任委员, 中国抗癌协会肿瘤生物治疗专业委员会常委, 天津市抗癌协会肺癌专业委员会常委 多年来从事肿瘤生物治疗和肿瘤免疫方面的临床与应用基础研究, 先后主持国家科技攻关计划 国家怨苑猿专项课题 国家自然科学基金 天津市科委重点项目等十余项 近缘年发表学术论文缘园余篇, 其中杂悦陨收录论文猿园余篇 ; 获得省部级科研奖励猿项 ; 获得 国家特支计划 百千万工程领军人才等荣誉称号 耘鄄皂葬蚤造 : 则憎扎蚤赠蚤岳赠葬澡燥燥援糟燥皂 [ 摘摇要 ] 摇过继免疫细胞输注 ( 葬凿燥责贼蚤增藻糟藻造造贼则葬灶泽枣藻则, 粤悦栽 ) 属于肿瘤的被动免疫疗法 转移性黑素瘤患者在接受了粤悦栽治疗后, 部分患者肿瘤出现了持久的完全消退, 显示了粤悦栽在肿瘤治疗中的强大潜力 基因修饰淋巴细胞技术进一步为我们打开了肿瘤粤悦栽治疗新领域的大门 肿瘤粤悦栽治疗成功的关键在于如何鉴定出肿瘤细胞上合适的具有免疫原性的靶点, 从而使得肿瘤浸润淋巴细胞 ( 贼怎皂燥则蚤灶枣蚤造贼则葬贼蚤灶早造赠皂责澡燥糟赠贼藻, 栽陨蕴 ) 或基因修饰淋巴细胞只攻击肿瘤细胞而不损伤正常组织 肿瘤组织过表达的分化抗原 共有非突变的肿瘤抗原以及肿瘤间质来源的抗原等大多在正常组织上有低水平表达, 并非肿瘤粤悦栽治疗的合适靶点 相反, 共有突变的肿瘤特异性抗原 病毒癌基因编码的抗原以及个体肿瘤的独特驱动性突变产物有望成为肿瘤粤悦栽治疗的理想靶点 越来越多的证据显示, 未来肿瘤免疫治疗的进展很可能来自于免疫靶向个体肿瘤的独特的突变抗原, 尤其是对肿瘤致癌性至关重要的基因的突变产物 [ 关键词 ] 摇肿瘤 ; 抗原 ; 过继性细胞 ; 突变 [ 中图分类号 ] 摇砸苑猿园援缘源 ; 砸猿怨圆援员圆 ; 匝苑愿摇摇摇 [ 文献标志码 ] 摇粤摇摇摇摇 [ 文章编号 ] 摇员园园苑鄄猿愿缘载 ( 圆园员缘 ) 园圆鄄园员怨员鄄园远 晕藻憎澡燥则蚤扎燥灶泽蚤灶贼葬则早藻贼葬灶贼蚤早藻灶泽藻造藻糟贼蚤燥灶蚤灶葬凿燥责贼蚤增藻糟藻造造贼澡藻则葬责赠燥枣糟葬灶糟藻则 宰藻蚤云藻灶早, 砸藻灶载蚤怎遭葬燥 ( 阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣陨皂皂怎灶燥造燥早赠, 栽蚤葬灶躁蚤灶酝藻凿蚤糟葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠悦葬灶糟藻则陨灶泽贼蚤贼怎贼藻葬灶凿匀燥泽责蚤贼葬造 ; 晕葬贼蚤燥灶葬造悦造蚤灶蚤糟葬造砸藻泽藻葬则糟澡悦藻灶贼藻则枣燥则悦葬灶糟藻则 ; 栽蚤葬灶躁蚤灶运藻赠蕴葬遭燥则葬贼燥则赠燥枣悦葬灶糟藻则陨皂皂怎灶燥造燥早赠葬灶凿月蚤燥贼澡藻则葬责赠, 栽蚤葬灶躁蚤灶猿园园园远园, 悦澡蚤灶葬 ) [ 基金项目 ] 摇国家科技支撑计划资助项目 ( 晕燥援圆园员缘月粤陨员圆月员圆 ); 天津市应用基础与前沿技术研究计划资助项目 ( 晕燥援员猿允悦再月允悦源员源园园, 晕燥援员源允悦栽孕允悦园园源苑远 ) 孕则燥躁藻糟贼泽怎责责燥则贼藻凿遭赠贼澡藻运藻赠栽藻糟澡灶燥造燥早蚤藻泽砸驭阅孕则燥早则葬皂燥枣悦澡蚤灶葬 ( 晕燥援圆园员缘月粤陨员圆月员圆 ), 葬灶凿贼澡藻栽蚤葬灶躁蚤灶粤责责造蚤糟葬贼蚤燥灶云燥怎灶凿葬贼蚤燥灶葬灶凿粤凿增葬灶糟藻凿栽藻糟澡灶燥造燥早赠砸藻泽藻葬则糟澡孕则早则葬皂 ( 晕燥援员猿允悦再月允悦源员源园园, 晕燥援员源允悦栽孕允悦园园源苑远 )

2 员怨圆 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员缘年源月, 圆圆 ( 圆 ) [ 粤遭泽贼则葬糟贼 ] 摇粤凿燥责贼蚤增藻糟藻造造贼则葬灶泽枣藻则 ( 粤悦栽 ) 蚤泽葬责葬泽泽蚤增藻蚤皂皂怎灶燥贼澡藻则葬责赠燥枣糟葬灶糟藻则援砸藻糟藻灶贼造赠, 则藻泽藻葬则糟澡藻则泽澡葬增藻燥遭泽藻则增藻凿贼澡葬贼凿怎则葬遭造藻糟燥皂责造藻贼藻糟葬灶糟藻则则藻早则藻泽泽蚤燥灶泽糟葬灶遭藻葬糟澡蚤藻增藻凿蚤灶责葬贼蚤藻灶贼泽憎蚤贼澡皂藻贼葬泽贼葬贼蚤糟皂藻造葬灶燥皂葬葬枣贼藻则粤悦栽, 藻灶糟燥怎则葬早蚤灶早造赠泽怎早早藻泽贼蚤灶早葬早则藻葬贼责燥贼藻灶贼蚤葬造枣燥则粤悦栽蚤灶贼澡藻贼则藻葬贼皂藻灶贼燥枣糟葬灶糟藻则蚤灶糟造蚤灶蚤糟葬造泽藻贼贼蚤灶早泽援栽澡蚤泽责燥贼藻灶贼蚤葬造糟葬灶遭藻枣怎则贼澡藻则藻灶澡葬灶糟藻凿憎澡藻灶早藻灶藻贼蚤糟皂燥凿蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣造赠皂责澡燥糟赠贼藻泽蚤泽责藻则枣燥则皂藻凿援栽澡藻噪藻赠贼燥贼澡藻泽怎糟糟藻泽泽燥枣葬凿燥责贼蚤增藻糟藻造造贼澡藻则葬责赠蚤泽贼澡藻蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣泽怎蚤贼葬遭造藻蚤皂皂怎灶燥造燥早蚤糟贼葬则早藻贼泽燥灶糟葬灶糟藻则糟藻造造泽贼澡葬贼糟葬灶遭藻葬贼贼葬糟噪藻凿遭赠贼怎皂燥则蚤灶枣蚤造贼则葬贼蚤灶早造赠皂责澡燥糟赠贼藻泽 ( 栽陨蕴 ) 燥则早藻灶藻贼蚤糟葬造造赠皂燥凿蚤枣蚤藻凿造赠皂责澡燥糟赠贼藻泽憎蚤贼澡燥怎贼凿葬皂葬早蚤灶早灶燥则皂葬造贼蚤泽泽怎藻泽援阅蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶葬灶贼蚤早藻灶泽燥增藻则藻曾责则藻泽泽藻凿燥灶糟葬灶糟藻则泽, 泽澡葬则藻凿灶燥灶原皂怎贼葬贼藻凿葬灶贼蚤早藻灶泽燥枣糟葬灶糟藻则泽, 葬灶凿葬灶贼蚤早藻灶泽枣则燥皂贼怎皂燥则泽贼则燥皂葬葬则藻灶燥贼泽怎蚤贼葬遭造藻贼葬则早藻贼泽燥枣粤悦栽凿怎藻贼燥贼澡藻蚤则造燥憎造藻增藻造藻曾责则藻泽鄄泽蚤燥灶蚤灶灶燥则皂葬造贼蚤泽泽怎藻泽援韵灶贼澡藻糟燥灶贼则葬则赠, 葬灶贼蚤早藻灶泽藻灶糟燥凿藻凿遭赠泽澡葬则藻凿皂怎贼葬贼蚤燥灶泽, 增蚤则葬造燥灶糟燥早藻灶藻泽, 燥则怎灶蚤择怎藻凿则蚤增藻则皂怎贼葬鄄贼蚤燥灶泽皂葬赠泽藻则增藻葬泽蚤凿藻葬造贼葬则早藻贼泽燥枣粤悦栽援云怎则贼澡藻则凿藻增藻造燥责皂藻灶贼燥枣粤悦栽憎蚤造造则藻泽怎造贼枣则燥皂灶藻憎葬凿燥责贼蚤增藻糟藻造造蚤皂皂怎灶燥贼澡藻则葬责赠泽贼则葬贼藻早蚤藻泽憎蚤贼澡造赠皂责澡燥糟赠贼藻泽贼澡葬贼则藻糟燥早灶蚤扎藻皂怎贼葬贼藻凿葬灶贼蚤早藻灶泽, 蚤灶责葬则贼蚤糟怎造葬则贼澡燥泽藻凿藻则蚤增藻凿枣则燥皂早藻灶藻责则燥凿怎糟贼泽贼澡葬贼葬则藻蚤灶鄄增燥造增藻凿蚤灶糟葬则糟蚤灶燥早藻灶藻泽蚤泽援 [ 运藻赠憎燥则凿泽 ] 摇贼怎皂燥则 ; 葬灶贼蚤早藻灶 ; 葬凿燥责贼蚤增藻糟藻造造贼则葬灶泽枣藻则 ( 粤悦栽 ); 皂怎贼葬贼蚤燥灶 [ 悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则, 圆园员缘, 圆圆 ( 圆 ): 员怨员鄄员怨远 ] 摇摇 摇摇过继免疫细胞输注 ( 葬凿燥责贼蚤增藻糟藻造造贼则葬灶泽枣藻则, 粤悦栽 ) 属于肿瘤的被动免疫疗法, 指的是分离肿瘤患者自体肿瘤浸润淋巴细胞 ( 贼怎皂燥则鄄蚤灶枣蚤造贼则葬贼蚤灶早造赠皂责澡燥糟赠贼藻, 栽陨蕴 ) 或者外周血淋巴细胞, 在体外加以分选 扩增 活化, 并回输至患者体内 该过程通常还包括非清髓性预处理和免疫刺激剂的应用, 有的方案还包括在扩增前对淋巴细胞进行基因修饰, 使其靶向特定抗原并表达内源性免疫刺激分子或回输后持续存在更长时间 肿瘤抗原特异性的粤悦栽治疗是当前国内外研究的热点, 其成功的关键在于选择肿瘤细胞上合适的免疫原性的靶点, 从而使得输注的免疫细胞只攻击肿瘤细胞而不损伤正常组织 本文将围绕这一关键问题, 结合最新研究进展对肿瘤粤悦栽治疗常见靶点及相应治疗策略进行分析, 并在此基础上探讨肿瘤粤悦栽治疗的发展方向 员摇过继性细胞治疗热点和共性问题栽陨蕴治疗是最早的肿瘤抗原特异性粤悦栽治疗方法, 该方法是圆园世纪愿园年代美国国立卫生研究院 ( 晕葬贼蚤燥灶葬造陨灶泽贼蚤贼怎贼藻泽燥枣匀藻葬造贼澡, 晕陨匀 ) 国立癌症研究所 ( 晕葬贼蚤燥灶葬造悦葬灶糟藻则陨灶泽贼蚤贼怎贼藻, 晕悦陨 ) 的砸燥泽藻灶遭藻则早等研发的 栽陨蕴是肿瘤患者体内天然存在的具有抗肿瘤活性的淋巴细胞, 分离后在白细胞介素圆 ( 蚤灶贼藻则造藻怎噪蚤灶鄄圆, 陨蕴鄄圆 ) 等因子作用下可以进行体外扩增, 然后回 [ 员鄄猿输到患者体内发挥抗肿瘤作用 ] 临床上, 对于恶性黑素瘤和肾细胞癌, 栽陨蕴治疗是最常用的粤悦栽治疗 近期进行的一系列临床试验中, 常规治疗难治的转移性黑素瘤患者, 经非清髓性预处理后, 使用自体栽陨蕴联合陨蕴鄄圆治疗, 总有效率接近缘园豫, 甚至可 [ 源鄄远以有圆园豫至源园豫的患者获得持久的肿瘤消退 ], 显示了粤悦栽在肿瘤治疗中的强大潜力 然而, 对栽陨蕴的研究现阶段大多集中于黑素瘤, 这主要是因为黑素瘤的栽陨蕴较易获取 实际上, 临床上很多情况下是无法应用栽陨蕴的, 比如有的患者缺乏肿瘤标本, 还有的患者肿瘤或转移灶中淋巴细胞浸润很少 在这种情况下, 粤悦栽就要使用外周血淋巴细胞了 所幸, 随着生物技术的迅猛发展, 尤其是基因工程技术的进步, 基因修饰的方法能够将识别肿瘤抗原的栽细胞受体 ( 栽糟藻造造则藻糟藻责贼燥则, 栽悦砸 ) 或嵌合抗原受体 ( 糟澡蚤皂藻则蚤糟葬灶贼蚤早藻灶则藻糟藻责贼燥则, 悦粤砸 ) 基因导入淋巴细胞, 使之成为栽悦砸基因修饰栽淋巴细胞或悦粤砸鄄栽细胞, 从而人工赋予这些淋巴细胞对肿瘤 [ 苑鄄愿抗原的靶向识别能力 ] 这一进步使得研究者能够获得大量抗原特异性的栽淋巴细胞, 从而克服了黑素瘤之外的其他类型肿瘤难以获取具有抗肿瘤活性的淋巴细胞的问题, 大大推动了以免疫细胞为基础的肿瘤靶向治疗的发展, 打开了肿瘤粤悦栽治疗新领域的大门 栽悦砸是栽细胞表面能够识别和结合蛋白质抗原的特异性受体 栽悦砸基因修饰栽淋巴细胞技术出现较早, 但栽悦砸具有主要组织相容性复合体 ( 皂葬鄄躁燥则澡蚤泽贼燥糟燥皂责葬贼蚤遭蚤造蚤贼赠糟燥皂责造藻曾, 酝匀悦 ) 限制性, 而且许多肿瘤细胞还能够通过下调或突变其酝匀悦分子以逃避免疫监视, 从而使得栽悦砸基因修饰的栽淋巴细 [ 怨胞的临床应用具有一定局限性 ] 悦粤砸分子在结构和功能上与栽悦砸辕悦阅猿复合物十分类似, 是表达在细胞膜外的单链抗体 ( 泽蚤灶早造藻鄄糟澡葬蚤灶枣则葬早皂藻灶贼燥枣增葬则蚤葬遭造藻则藻早蚤燥灶, 泽糟云增 ) 通过胞外铰链区和跨膜区与胞内的栽细胞活化序列组成的融 [ 员园鄄员员合蛋白 ] 第一代悦粤砸鄄栽细胞只具有单一的活化信号 ( 常用悦阅猿分子 ζ 链 ), 体内存留时间短, 很快出现失能 为此, 第二代悦粤砸在胞内部分增加了

3 魏枫, 等援肿瘤过继免疫细胞治疗靶抗原选择的新视野 共刺激分子 ( 最常用的是悦阅圆愿 ) 信号结构域, 在提供活化信号的同时也提供了共刺激信号 第三代 悦粤砸的主要标志为胞内区采用了不止一个共刺激分子信号结构域 悦粤砸对肿瘤细胞的识别是通过 泽糟云增介导的, 不受酝匀悦限制, 其靶标分子可以不限于蛋白辕多肽抗原 而共刺激分子信号结构域的引入则有效地克服了肿瘤通过下调共刺激分子造成的免疫逃逸, 进一步增强了悦粤砸鄄栽细胞的活化能力和 [ 员圆鄄员猿在患者体内持续存在的时间 ] 栽悦砸基因修饰栽淋巴细胞和悦粤砸鄄栽细胞在临 [ 员源鄄员缘床试验中都取得了一定的成功 ], 但大多数的此类临床试验中都观察到了不同程度的毒性反应, 甚至包括一些致命的并发症 这些与基因修饰栽细胞粤悦栽治疗相关的毒性作用主要分为两大类 : 正常组织毒性 ( 所谓燥灶鄄贼葬则早藻贼贼燥曾蚤糟蚤贼赠 ) 和脱靶毒性 ( 燥枣枣鄄贼葬则早藻贼贼燥曾蚤糟蚤贼赠 ) 前者指的是基因修饰栽细胞对同样表达其靶点的正常组织的毒性, 这种毒性很常见 ; 后者则指对不表达这些靶分子的正常组织或器官的毒性, 其发生有一定的概率, 预防较为困难 基因修饰栽细胞对正常组织的毒性是肿瘤 粤悦栽治疗面临的共性问题, 一直妨碍着这些研究真正从实验室走向临床 如何鉴定出肿瘤细胞上合适的免疫原性的靶点, 从而使得基因修饰栽细胞只攻击肿瘤细胞而不损伤正常组织, 是肿瘤粤悦栽治疗成功与否的关键 圆摇 粤悦栽靶抗原分类和抗原选择策略 在肿瘤粤悦栽治疗的实践中常见的抗原根据其 [ 员远来源 表达部位以及突变与否可以分为七类 ] 圆援员摇 过表达于肿瘤的分化抗原 靶向肿瘤组织过表达而正常组织表达量很低的分化抗原曾经是肿瘤免疫治疗研究的热点 栽陨蕴治疗在转移性黑素瘤患者中所取得的成功最初也被归功于这些栽陨蕴细胞所普遍表达的识别黑素瘤辕黑色 [ 员苑 ] [ 员愿素细胞分化抗原 ( 如酝粤砸栽鄄员和早责鄄员园园 ] ) 的 [ 员怨 ] 栽悦砸, 但现在看来似乎没有这么简单 有研究者 使用特异性靶向酝粤砸栽鄄员或早责鄄员园园的高亲合力 栽悦砸基因修饰的栽细胞治疗转移性黑素瘤, 意外地观察到了对眼 耳等正常表达黑色素组织的严重毒性反应, 包括前房浸润 虹膜扩张 听力下降等 而在栽陨蕴治疗有效的转移性黑素瘤患者中却极少观察 [ 缘到这种毒性 ], 提示栽陨蕴其实是通过靶向其他的抗原发挥抗肿瘤活性的 癌胚抗原 ( 糟葬则糟蚤灶燥藻皂遭则赠燥灶蚤糟葬灶贼蚤早藻灶, 悦耘粤 ) 是胃肠道肿瘤过表达的另一个分化抗原, 在靶向悦耘粤的粤悦栽治疗中也发生了类似的 [ 圆园 ] 情况 有研究者报道, 靶向悦耘粤的高亲合力 栽悦砸可以导致严重的结肠炎 这些毒性在很大程度上妨碍了靶向分化抗原的粤悦栽治疗的临床应用 此外, 还有若干使用悦粤砸鄄栽靶向此类分化抗原的研究正在进行中 前面提到过, 第二 三代悦粤砸鄄栽具有更强的活化能力和在患者体内更长的持续时间, 但也正因为如此, 悦粤砸鄄栽的靶点选择必须更加谨慎, 否则其对正常组织的毒性会更严重 例如, 曾有 [ 圆员 ] 研究者使用携带悦阅圆愿和源鄄员月月共刺激结构域的靶向人表皮生长因子受体圆 ( 澡怎皂葬灶藻责蚤凿藻则皂葬造早则燥憎贼澡枣葬糟贼燥则则藻糟藻责贼燥则鄄圆, 匀藻则鄄圆 ) 的悦粤砸鄄栽细胞治疗了一位结肠癌肝肺转移的患者, 该患者在接受悦粤砸鄄栽细胞输注后员缘皂蚤灶出现呼吸窘迫和严重的肺浸 [ 圆员鄄圆圆 ] 润, 最终出现心脏骤停而死亡 研究者认为, 这一毒性反应的根源在于肺上皮细胞低水平表达 匀藻则鄄圆, 结果导致大量悦粤砸鄄栽细胞浸润到肺并引发了悦粤砸鄄栽常见的副反应细胞因子释放综合征 ( 糟赠贼燥鄄噪蚤灶藻则藻造藻葬泽藻泽赠灶凿则燥皂藻, 悦砸杂 ), 其又称细胞因子风暴 ( 糟赠贼燥噪蚤灶藻泽贼燥则皂 ) 圆援圆摇 仅表达于肿瘤和非关键的正常组织的抗原 靶向过表达于肿瘤组织的分化抗原的尝试受困于对正常组织的毒性, 那么能不能靶向仅表达于肿瘤和非关键的正常组织的抗原呢? 毕竟如果能够清除恶性肿瘤的话, 付出某些非关键的正常组织受损的代价也是可以承受的 这方面一个相当成功的例子就是通过靶向悦阅员怨这一表达于正常月细胞的抗 [ 圆猿鄄圆源 ] 原来治疗白血病和淋巴瘤 圆园员园年, 研究者首次报告靶向悦阅员怨的粤悦栽治疗晚期白血病和淋巴瘤获得成功, 虽然在此过程中正常月细胞也同样被清除, 但通过使用免疫球蛋白可以很大程度上克服这一毒性 圆园员源年员园月员远日的 新英格兰医学杂志 报道悦阅员怨鄄悦粤砸鄄栽治疗猿园例复发 难治的急性淋巴细胞白血病患者, 完全缓解率达到怨园豫, 缓解 [ 圆缘时间最长者达圆源个月 ], 这一结果是十分令人鼓舞的 当前, 已有多个靶向悦阅员怨的悦粤砸鄄栽疗法正在进行临床试验, 诺华公司和允怎灶燥公司的悦阅员怨鄄悦粤砸鄄栽已分别于圆园员源年苑月和员员月获得美国食品药品监督管理局 ( 哉援杂援云燥燥凿葬灶凿阅则怎早粤凿皂蚤灶蚤泽贼则葬鄄贼蚤燥灶, 云阅粤 ) 突破性疗法认定 可惜的是, 除悦阅员怨 外, 此类抗原尚未见其他成功的例子 圆援猿摇 共有非突变的肿瘤抗原 员怨猿 癌鄄睾丸抗原 ( 糟葬灶糟藻则鄄贼藻泽贼藻泽葬灶贼蚤早藻灶泽, 悦栽粤 ) 是此类抗原的代表, 这类蛋白在胚胎时期表达, 而在成年后的正常组织中通常处于表观沉默状态, 但在约 员园豫至愿园豫的常见上皮性肿瘤中重新表达 这些

4 员怨源 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员缘年源月, 圆圆 ( 圆 ) 肿瘤包括膀胱癌 肺癌 肝癌等 此类抗原中比较突出的一个是晕再鄄耘杂韵鄄员, 现认为它仅表达于肿瘤 通过晕再鄄耘杂韵鄄员高亲合力栽悦砸基因修饰的自体淋巴细胞治疗, 研究者成功地使转移性滑膜肉瘤和转移性 [ 圆远黑素瘤患者体内的肿瘤大幅消退 ] 应用这一方案治疗其他晕再鄄耘杂韵鄄员阳性实体瘤的研究正在进行中 必须要引起研究者足够重视的是, 总数超过 员园园种的悦栽粤中, 大部分在正常组织上有低水平的 [ 员远表达, 而这同样可能成为严重毒性反应的源泉 ] 此外, 脱靶效应也不得不防, 比如, 虽然人黑素瘤相关抗原猿 ( 皂藻造葬灶燥皂葬葬灶贼蚤早藻灶枣葬皂蚤造赠粤猿, 酝粤郧耘鄄粤猿 ) 不表达于正常组织, 但靶向酝粤郧耘鄄粤猿的一个匀蕴粤鄄粤圆限制性表位的粤悦栽治疗却意外地导致了严重的 [ 圆苑 ] 神经系统毒性 研究者最终发现, 这是因为该 酝粤郧耘鄄粤猿表位与表达于脑的酝粤郧耘鄄粤员圆的一个表位非常相似 圆援源摇 共有突变的肿瘤特异性抗原 此类抗原指的是不表达于正常组织而又为某一类型肿瘤所共有的突变, 这些突变是基因修饰淋巴细胞靶抗原的理想来源, 表皮生长因子受体 Ⅲ 型突变体 ( 藻责蚤凿藻则皂葬造早则燥憎贼澡枣葬糟贼燥则则藻糟藻责贼燥则增 Ⅲ, 耘郧云砸增 Ⅲ) 是这类靶点的代表 [ 圆愿 ] 耘郧云砸增 Ⅲ 表达于约 源园豫的高分化级别胶质瘤细胞表面, 该突变来自于 耘郧云砸第圆至第苑外显子的框内缺失 ( 蚤灶鄄枣则葬皂藻凿藻造藻鄄贼蚤燥灶 ), 并导致耘郧云砸组成性活化, 可以在没有配体结合的情况下激活酪氨酸激酶, 启动下游信号转导, 进而使含有此突变的细胞的增殖 侵袭能力以及运动能力增强, 最终导致肿瘤的发生 耘郧云砸增 Ⅲ 鄄悦粤砸在小鼠脑胶质瘤模型中已经取得了成功, 用于人的 耘郧云砸增 Ⅲ 鄄悦粤砸正在研发中 [ 圆怨 ] 圆援缘摇 病毒编码的抗原 参与肿瘤发生的病毒经常会导致外源病毒蛋白在肿瘤细胞上的表达, 而正常组织则通常无此蛋白表达, 因此, 这些病毒编码的抗原也是理想的粤悦栽 靶点 此类备选的靶点包括人乳头瘤病毒 ( 责葬责蚤造造燥鄄皂葬增蚤则怎泽, 匀孕灾 ) 耘远 耘苑蛋白以及耘月病毒 ( 耘责泽贼藻蚤灶鄄月葬则则增蚤则怎泽, 耘月灾 ) 潜伏膜蛋白员 ( 造葬贼藻灶贼皂藻皂遭则葬灶藻责则燥鄄贼藻蚤灶员, 蕴酝孕员 ) 和蕴酝孕圆等, 这些抗原均不在正常组 [ 猿园织表达 ] 筛选此类抗原时有一点需要注意, 作为 粤悦栽治疗的靶点, 该蛋白应是被感染的细胞恶性转化所必须的关键分子 例如, 现已上市的匀孕灾预防性疫苗是根据匀孕灾的衣壳蛋白蕴员设计的, 而在宫颈癌进展过程中蕴员可能丢失, 并不适于作为粤悦栽 [ 猿员 ] 治疗靶点 研究显示, 匀孕灾病毒癌基因产物耘远 耘苑等蛋白通过影响细胞内的责缘猿 砸遭等信号通路导 致癌变, 而且耘远 耘苑蛋白在宫颈癌及癌前病变中持续表达, 与癌变密切相关, 很少发生抗原丢失及免疫逃逸 因此, 对匀孕灾所致宫颈癌和癌前病变的粤悦栽 治疗, 选择耘远 耘苑作为靶点比蕴员更为适当 圆援远摇 肿瘤间质的重要组分 肿瘤细胞仅是瘤体的一部分, 肿瘤间质的某些关键成分也可能成为理想的肿瘤免疫治疗靶点 血管内皮生长因子受体鄄圆 ( 增葬泽糟怎造葬则藻灶凿燥贼澡藻造蚤葬造早则燥憎贼澡枣葬糟贼燥则则藻糟藻责贼燥则鄄圆, 灾耘郧云砸鄄圆 ) 在肿瘤血管过表达, 成纤维细胞活化蛋白 ( 枣蚤遭则燥遭造葬泽贼葬糟贼蚤增葬贼蚤燥灶责则燥贼藻蚤灶, 云粤孕 ) 在肿瘤间质的活化成纤维细胞过表达, 它们都可能成为粤悦栽治疗的靶点, 但需注意的是, 这两个分子在正常组织也有低水平表达, 以它们为靶点的 [ 猿圆鄄猿猿治疗可能导致一定的毒性 ] 圆援苑摇 个体肿瘤的独特突变 基因突变是恶性肿瘤中的一个普遍现象, 同时基因突变本身也是细胞恶性转化的动因之一, 未来肿瘤免疫治疗的进展很可能来自于免疫靶向这些突 [ 员远, 猿源变蛋白 ] 黑素瘤含有非常多的突变, 这可能源于紫外线对皮肤的致突变作用 本文开头就提到, 部分转移性黑素瘤患者在接受了栽陨蕴治疗后, 出现持久的肿瘤完全消退 但也由此提出了一个问题, 这些栽陨蕴细胞的抗原靶点到底是什么? 毕竟, 并非是所有的接受上述治疗的患者都达到了长期缓解 对此一个可能的解释为 : 黑素瘤含有的突变包括两类, 一类是驱动性的, 另一类是随机的 靶向突变基因产物的栽陨蕴大部分识别的是随机突变的产物, 而对于肿瘤来说这些随机突变的产物并非是维持致瘤性所必需的 因此肿瘤细胞可以通过突变 下调 甚至基因缺失来逃避这些栽陨蕴的杀伤 相反, 一旦栽陨蕴 靶向肿瘤细胞某些不可丢弃的突变基因产物, 亦即与致瘤性密切相关的驱动性突变的产物, 就可能获得更好的疗效, 甚至达到长期缓解 前面提到的 耘郧云砸增 Ⅲ 本质上就是一种驱动性突变的产物 这一科学假设现已得到证实, 近期, 砸燥泽藻灶遭藻则早的研究团 [ 猿缘鄄猿远 ] 队对经栽陨蕴治疗后获得长期缓解的恶性黑素瘤患者的肿瘤进行了全外显子组测序和生物信息学分析, 成功发现了这些患者体内栽陨蕴细胞的新的突变靶点 其结果表明, 黑素瘤栽陨蕴细胞造成持久的肿瘤完全消退的独特能力正是来自于其对个体肿瘤的独特突变的特异性识别 尤其值得注意的是, 这些研究者最新发表的一份报告揭示, 这些新发现的 栽陨蕴靶点都来自于与细胞增殖相关的重要基因的突 [ 猿远变 ]

5 魏枫, 等援肿瘤过继免疫细胞治疗靶抗原选择的新视野猿摇结语与展望通过对上述七类肿瘤粤悦栽治疗常见靶点的分析可以看出, 肿瘤组织过表达的分化抗原 以悦栽粤为代表的共有非突变的肿瘤抗原以及肿瘤间质来源的抗原都面临着在正常组织上低水平表达的问题, 缺乏足够的特异性, 毒副作用难以避免 而悦阅员怨的成功模式又尚不能在其他类型肿瘤中复制 相反, 共有突变的肿瘤特异性抗原 病毒癌基因编码的抗原以及个体肿瘤的独特驱动性突变产物则是肿瘤粤悦栽治疗靶点的理想来源 究其原因, 这些与致瘤性密切相关的驱动性突变的产物是恶性肿瘤发生发展和维持致瘤性所必需的, 肿瘤细胞逃避免疫细胞杀伤的许多拿手好戏无法在这些关键抗原上施展 遗憾的是, 这三类理想抗原中, 前两类已发现的靶点数量十分有限 因此, 个体肿瘤的独特驱动性突变就更值得我们重视 栽陨蕴在靶向黑素瘤独特突变中取得的成功提示我们, 识别其他肿瘤的独特突变的栽陨蕴或者基因修饰淋巴细胞很可能同样成为有效的治疗手段 然而, 大部分其他类型实体瘤的突变数量仅为黑素瘤的五分之一乃至十分之一, 如何成功靶向这些突变 [ 员远可能会成为一个棘手的问题 ] 在大部分肿瘤中, 与驱动性的或随机的突变起反应的栽细胞很可能十分稀少, 但鉴定个体肿瘤的独特外显子突变并获得靶向这些突变的栽细胞的方法正在积极研发 [ 猿苑鄄源园中 ] 圆园员源年员圆月员怨日出版的杂糟蚤藻灶糟藻杂志将肿瘤的联合免疫治疗列为圆园员缘年值得关注的四大科学领域之一, 并特别强调了各种免疫疗法之间或免疫 [ 源员疗法与其他疗法的联合应用 ] 免疫检查点( 蚤皂鄄皂怎灶藻糟澡藻糟噪责燥蚤灶贼 ) 是当前免疫治疗研究的热点之一, 过去的几个月内, 已有多个研究显示免疫检查点抑制剂可以增强突变抗原特异性的栽细胞的抗肿瘤 [ 源圆鄄源源活性 ] 这提示我们, 免疫检查点抑制剂与靶向个体肿瘤独特突变的粤悦栽的联合免疫治疗也是一个非常有希望的发展方向 在不久的将来, 有望使用适当的基因筛选方法来分析每个肿瘤, 找到对该肿瘤致癌性至关重要的基因突变, 进而分离纯化出靶向该突变基因产物的栽淋巴细胞, 在体外对其加以培养扩增用于粤悦栽治疗 甚至更进一步, 分离纯化出这些栽细胞后, 还可以获取其栽悦砸编码基因, 以逆转录病毒 慢病毒等为载体, 用该栽悦砸基因修饰患者外周血栽淋巴细胞, 获得大量特异性靶向驱动性突变基因产物的淋 员怨缘 [ 猿怨巴细胞, 显著增强粤悦栽的疗效 ] 这些突变抗原特异性的栽淋巴细胞, 与免疫检查点抑制剂 携带突变抗原的肿瘤疫苗等, 将组成肿瘤的个体化免疫治疗的主力军, 在肿瘤的个体化综合治疗中, 发挥更为积极的作用 [ 参考文献 ] [ 员 ] 摇砸燥泽藻灶遭藻则早杂粤援悦藻造造贼则葬灶泽枣藻则蚤皂皂怎灶燥贼澡藻则葬责赠枣燥则皂藻贼葬泽贼葬贼蚤糟泽燥造蚤凿糟葬灶糟藻则鄄鄄憎澡葬贼糟造蚤灶蚤糟蚤葬灶泽灶藻藻凿贼燥噪灶燥憎 [ 允 ] 援晕葬贼砸藻增悦造蚤灶韵灶糟燥造, 圆园员员, 愿 ( 员园 ): 缘苑苑鄄缘愿缘援 [ 圆 ] 摇孕澡葬灶郧匝, 砸燥泽藻灶遭藻则早杂粤援粤凿燥责贼蚤增藻糟藻造造贼则葬灶泽枣藻则枣燥则责葬贼蚤藻灶贼泽憎蚤贼澡皂藻贼葬泽贼葬贼蚤糟皂藻造葬灶燥皂葬 : 栽澡藻责燥贼藻灶贼蚤葬造葬灶凿责则燥皂蚤泽藻燥枣糟葬灶糟藻则蚤皂皂怎鄄灶燥贼澡藻则葬责赠 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则悦燥灶贼则燥造, 圆园员猿, 圆园 ( 源 ): 圆愿怨鄄圆怨苑援 [ 猿 ] 摇陨贼扎澡葬噪蚤韵, 蕴藻增赠阅, 在蚤噪蚤糟澡阅, 藻贼葬造援粤凿燥责贼蚤增藻栽鄄糟藻造造贼则葬灶泽枣藻则蚤灶皂藻造葬灶燥皂葬 [ 允 ] 援陨皂皂怎灶燥贼澡藻则葬责赠, 圆园员猿, 缘 ( 员 ): 苑怨鄄怨园援 [ 源 ] 摇砸葬凿增葬灶赠蚤蕴郧, 月藻则灶葬贼糟澡藻扎悦, 在澡葬灶早酝, 藻贼葬造援杂责藻糟蚤枣蚤糟造赠皂责澡燥糟赠贼藻泽怎遭泽藻贼泽责则藻凿蚤糟贼则藻泽责燥灶泽藻贼燥葬凿燥责贼蚤增藻糟藻造造贼澡藻则葬责赠怎泽蚤灶早藻曾责葬灶凿藻凿葬怎贼燥造燥早燥怎泽贼怎皂燥则鄄蚤灶枣蚤造贼则葬贼蚤灶早造赠皂责澡燥糟赠贼藻泽蚤灶皂藻贼葬泽贼葬贼蚤糟皂藻造葬灶燥皂葬责葬贼蚤藻灶贼泽 [ 允 ] 援悦造蚤灶悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园员圆, 员愿 ( 圆源 ): 远苑缘愿鄄远苑苑园援 [ 缘 ] 摇砸燥泽藻灶遭藻则早杂粤, 再葬灶早允悦, 杂澡藻则则赠砸酝, 藻贼葬造援阅怎则葬遭造藻糟燥皂责造藻贼藻则藻鄄泽责燥灶泽藻泽蚤灶澡藻葬增蚤造赠责则藻贼则藻葬贼藻凿责葬贼蚤藻灶贼泽憎蚤贼澡皂藻贼葬泽贼葬贼蚤糟皂藻造葬灶燥皂葬怎泽蚤灶早栽鄄糟藻造造贼则葬灶泽枣藻则蚤皂皂怎灶燥贼澡藻则葬责赠 [ 允 ] 援悦造蚤灶悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园员员, 员苑 ( 员猿 ): 源缘缘园鄄源缘缘苑援 [ 远 ] 摇陨贼扎澡葬噪蚤韵, 匀燥增葬增耘, 在蚤责燥则藻灶再, 藻贼葬造援耘泽贼葬遭造蚤泽澡皂藻灶贼葬灶凿造葬则早藻鄄泽糟葬造藻藻曾责葬灶泽蚤燥灶燥枣皂蚤灶蚤皂葬造造赠糟怎造贼怎则藻凿 赠燥怎灶早 贼怎皂燥则蚤灶枣蚤造贼则葬贼蚤灶早造赠皂责澡燥糟赠贼藻泽枣燥则葬凿燥责贼蚤增藻贼则葬灶泽枣藻则贼澡藻则葬责赠 [ 允 ] 援允陨皂皂怎灶燥贼澡藻则, 圆园员员, 猿源 ( 圆 ): 圆员圆鄄圆圆园援 [ 苑 ] 摇允怎灶藻悦匀, 酝葬怎泽酝灾, 孕造藻泽葬郧, 藻贼葬造援耘灶早蚤灶藻藻则藻凿栽糟藻造造泽枣燥则糟葬灶糟藻则贼澡藻则葬责赠 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则陨皂皂怎灶燥造陨皂皂怎灶燥贼澡藻则, 圆园员源, 远猿 ( 怨 ): 怨远怨鄄怨苑缘援 [ 愿 ] 摇月葬则则藻贼贼阅酝, 杂蚤灶早澡晕, 孕燥则贼藻则阅蕴, 藻贼葬造援悦澡蚤皂藻则蚤糟葬灶贼蚤早藻灶则藻糟藻责贼燥则贼澡藻则葬责赠枣燥则糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援粤灶灶怎砸藻增酝藻凿, 圆园员源, 远缘 : 猿猿猿鄄猿源苑援 [ 怨 ] 摇在燥藻贼藻灾, 陨则增蚤灶早酝, 云藻则遭藻则酝, 藻贼葬造援杂贼则怎糟贼怎则藻鄄遭葬泽藻凿, 则葬贼蚤燥灶葬造凿藻鄄泽蚤早灶燥枣栽糟藻造造则藻糟藻责贼燥则泽 [ 允 ] 援云则燥灶贼陨皂皂怎灶燥造, 圆园员猿, 源 : 圆远愿援 [ 员园 ] 匀怎凿藻糟藻噪酝, 杂燥皂皂藻则皂藻赠藻则阅, 运燥泽葬泽蚤澡孕蕴, 藻贼葬造援栽澡藻灶燥灶鄄泽蚤早灶葬鄄造蚤灶早藻曾贼则葬糟藻造造怎造葬则泽责葬糟藻则凿燥皂葬蚤灶燥枣糟澡蚤皂藻则蚤糟葬灶贼蚤早藻灶则藻糟藻责贼燥则泽蚤泽凿藻糟蚤泽蚤增藻枣燥则蚤灶增蚤增燥葬灶贼蚤贼怎皂燥则葬糟贼蚤增蚤贼赠 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则陨皂皂怎灶燥造砸藻泽, 圆园员缘, 猿 ( 圆 ): 员圆缘鄄员猿缘援 [ 员员 ] 允藻灶泽藻灶酝悦, 砸蚤凿凿藻造造杂砸援阅藻泽蚤早灶葬灶凿蚤皂责造藻皂藻灶贼葬贼蚤燥灶燥枣葬凿燥责贼蚤增藻贼澡藻则葬责赠憎蚤贼澡糟澡蚤皂藻则蚤糟葬灶贼蚤早藻灶则藻糟藻责贼燥则鄄皂燥凿蚤枣蚤藻凿栽糟藻造造泽 [ 允 ] 援陨皂鄄皂怎灶燥造砸藻增, 圆园员源, 圆缘苑 ( 员 ): 员圆苑鄄员源源援 [ 员圆 ] 杂澡蚤则葬泽怎晕, 运怎则燥噪蚤酝援云怎灶糟贼蚤燥灶葬造凿藻泽蚤早灶燥枣糟澡蚤皂藻则蚤糟栽鄄糟藻造造葬灶贼蚤早藻灶则藻糟藻责贼燥则泽枣燥则葬凿燥责贼蚤增藻蚤皂皂怎灶燥贼澡藻则葬责赠燥枣糟葬灶糟藻则 : 粤则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻葬灶凿燥怎贼糟燥皂藻泽 [ 允 ] 援粤灶贼蚤糟葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园员圆, 猿圆 ( 远 ): 圆猿苑苑鄄圆猿愿猿援 [ 员猿 ] 杂葬凿藻造葬蚤灶酝, 月则藻灶贼躁藻灶泽砸, 砸蚤增蚤藻则藻陨援栽澡藻遭葬泽蚤糟责则蚤灶糟蚤责造藻泽燥枣糟澡蚤皂藻鄄则蚤糟葬灶贼蚤早藻灶则藻糟藻责贼燥则凿藻泽蚤早灶 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则阅蚤泽糟燥增, 圆园员猿, 猿 ( 源 ): 猿愿愿鄄猿怨愿援 [ 员源 ] 粤则葬灶凿葬云, 灾葬糟糟澡藻造造蚤耘, 韵遭则蚤泽贼云, 藻贼葬造援栽则蚤葬造憎葬贼糟澡 : 粤凿燥责贼蚤增藻糟藻造造贼则葬灶泽枣藻则枣燥则葬灶贼蚤糟葬灶糟藻则蚤皂皂怎灶燥贼澡藻则葬责赠 [ 允 ] 援韵灶糟燥蚤皂皂怎灶燥造燥早赠, 圆园员源, 猿 : 藻圆愿猿源源援 [ 员缘 ] 匀蚤灶则蚤糟澡泽悦杂, 砸燥泽藻灶遭藻则早杂粤援耘曾责造燥蚤贼蚤灶早贼澡藻糟怎则葬贼蚤增藻责燥贼藻灶贼蚤葬造燥枣葬鄄凿燥责贼蚤增藻栽鄄糟藻造造贼澡藻则葬责赠枣燥则糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援陨皂皂怎灶燥造砸藻增, 圆园员源, 圆缘苑

6 员怨远 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员缘年源月, 圆圆 ( 圆 ) ( 员 ): 缘远鄄苑员援 [ 员远 ] 砸燥泽藻灶遭藻则早杂粤援云蚤灶凿蚤灶早泽怎蚤贼葬遭造藻贼葬则早藻贼泽蚤泽贼澡藻皂葬躁燥则燥遭泽贼葬糟造藻贼燥糟葬灶糟藻则早藻灶藻贼澡藻则葬责赠 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则郧藻灶藻栽澡藻则, 圆园员源, 圆员 ( 圆 ): 源缘鄄源苑援 [ 员苑 ] 运葬憎葬噪葬皂蚤再, 耘造蚤赠葬澡怎杂, 阅藻造早葬凿燥悦匀, 藻贼葬造援悦造燥灶蚤灶早燥枣贼澡藻早藻灶藻糟燥凿蚤灶早枣燥则葬泽澡葬则藻凿澡怎皂葬灶皂藻造葬灶燥皂葬葬灶贼蚤早藻灶则藻糟燥早灶蚤扎藻凿遭赠葬怎贼燥造燥鄄早燥怎泽栽糟藻造造泽蚤灶枣蚤造贼则葬贼蚤灶早蚤灶贼燥贼怎皂燥则 [ 允 ] 援孕则燥糟晕葬贼造粤糟葬凿杂糟蚤哉杂粤, 员怨怨源, 怨员 ( 怨 ): 猿缘员缘鄄猿缘员怨援 [ 员愿 ] 运葬憎葬噪葬皂蚤再, 耘造蚤赠葬澡怎杂, 阅藻造早葬凿燥悦匀, 藻贼葬造援陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣葬澡怎皂葬灶皂藻造葬灶燥皂葬葬灶贼蚤早藻灶则藻糟燥早灶蚤扎藻凿遭赠贼怎皂燥则鄄蚤灶枣蚤造贼则葬贼蚤灶早造赠皂责澡燥鄄糟赠贼藻泽葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿憎蚤贼澡蚤灶增蚤增燥贼怎皂燥则则藻躁藻糟贼蚤燥灶 [ 允 ] 援孕则燥糟晕葬贼造粤糟葬凿杂糟蚤哉杂粤, 员怨怨源, 怨员 ( 员源 ): 远源缘愿鄄远源远圆援 [ 员怨 ] 允燥澡灶泽燥灶蕴粤, 酝燥则早葬灶砸粤, 阅怎凿造藻赠酝耘, 藻贼葬造援郧藻灶藻贼澡藻则葬责赠憎蚤贼澡澡怎皂葬灶葬灶凿皂燥怎泽藻栽鄄糟藻造造则藻糟藻责贼燥则泽皂藻凿蚤葬贼藻泽糟葬灶糟藻则则藻早则藻泽泽蚤燥灶葬灶凿贼葬则早藻贼泽灶燥则皂葬造贼蚤泽泽怎藻泽藻曾责则藻泽泽蚤灶早糟燥早灶葬贼藻葬灶贼蚤早藻灶 [ 允 ] 援月造燥燥凿, 圆园园怨, 员员源 ( 猿 ): 缘猿缘鄄缘源远援 [ 圆园 ] 孕葬则噪澡怎则泽贼酝砸, 再葬灶早允悦, 蕴葬灶早葬灶砸悦, 藻贼葬造援栽糟藻造造泽贼葬则早藻贼蚤灶早糟葬则鄄糟蚤灶燥藻皂遭则赠燥灶蚤糟葬灶贼蚤早藻灶糟葬灶皂藻凿蚤葬贼藻则藻早则藻泽泽蚤燥灶燥枣皂藻贼葬泽贼葬贼蚤糟糟燥造燥则鄄藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则遭怎贼蚤灶凿怎糟藻泽藻增藻则藻贼则葬灶泽蚤藻灶贼糟燥造蚤贼蚤泽 [ 允 ] 援酝燥造栽澡藻则, 圆园员员, 员怨 ( 猿 ): 远圆园鄄远圆远援 [ 圆员 ] 酝燥则早葬灶砸粤, 再葬灶早允悦, 运蚤贼葬灶燥酝, 藻贼葬造援悦葬泽藻则藻责燥则贼燥枣葬泽藻则蚤燥怎泽葬凿增藻则泽藻藻增藻灶贼枣燥造造燥憎蚤灶早贼澡藻葬凿皂蚤灶蚤泽贼则葬贼蚤燥灶燥枣栽糟藻造造泽贼则葬灶泽凿怎糟藻凿憎蚤贼澡葬糟澡蚤皂藻则蚤糟葬灶贼蚤早藻灶则藻糟藻责贼燥则则藻糟燥早灶蚤扎蚤灶早耘砸月月圆 [ 允 ] 援酝燥造栽澡藻则, 圆园员园, 员愿 ( 源 ): 愿源猿鄄愿缘员援 [ 圆圆 ] 载怎载允, 栽葬灶早再酝援悦赠贼燥噪蚤灶藻则藻造藻葬泽藻泽赠灶凿则燥皂藻蚤灶糟葬灶糟藻则蚤皂皂怎灶燥鄄贼澡藻则葬责赠憎蚤贼澡糟澡蚤皂藻则蚤糟葬灶贼蚤早藻灶则藻糟藻责贼燥则藻灶早蚤灶藻藻则藻凿栽糟藻造造泽 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则蕴藻贼贼, 圆园员源, 猿源猿 ( 圆 ): 员苑圆鄄员苑愿援 [ 圆猿 ] 运燥糟澡藻灶凿藻则枣藻则允晕, 宰蚤造泽燥灶宰匀, 允葬灶蚤噪允耘, 藻贼葬造援耘则葬凿蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣月鄄造蚤灶藻葬早藻糟藻造造泽葬灶凿则藻早则藻泽泽蚤燥灶燥枣造赠皂责澡燥皂葬蚤灶葬责葬贼蚤藻灶贼贼则藻葬贼藻凿憎蚤贼澡葬怎贼燥造燥早燥怎泽栽糟藻造造泽早藻灶藻贼蚤糟葬造造赠藻灶早蚤灶藻藻则藻凿贼燥则藻糟燥早灶蚤扎藻悦阅员怨 [ 允 ] 援月造燥燥凿, 圆园员园, 员员远 ( 圆园 ): 源园怨怨鄄源员园圆援 [ 圆源 ] 运燥糟澡藻灶凿藻则枣藻则允晕, 砸燥泽藻灶遭藻则早杂粤援栽则藻葬贼蚤灶早月鄄糟藻造造糟葬灶糟藻则憎蚤贼澡栽糟藻造造泽藻曾责则藻泽泽蚤灶早葬灶贼蚤鄄悦阅员怨糟澡蚤皂藻则蚤糟葬灶贼蚤早藻灶则藻糟藻责贼燥则泽 [ 允 ] 援晕葬贼砸藻增悦造蚤灶韵灶糟燥造, 圆园员猿, 员园 ( 缘 ): 圆远苑鄄圆苑远援 [ 圆缘 ] 酝葬怎凿藻杂蕴, 云则藻赠晕, 杂澡葬憎孕粤, 藻贼葬造援悦澡蚤皂藻则蚤糟葬灶贼蚤早藻灶则藻糟藻责贼燥则栽糟藻造造泽枣燥则泽怎泽贼葬蚤灶藻凿则藻皂蚤泽泽蚤燥灶泽蚤灶造藻怎噪藻皂蚤葬 [ 允 ] 援晕耘灶早造允酝藻凿, 圆园员源, 猿苑员 ( 员远 ): 员缘园苑鄄员缘员苑援 [ 圆远 ] 砸燥遭遭蚤灶泽孕云, 酝燥则早葬灶砸粤, 云藻造凿皂葬灶杂粤, 藻贼葬造援栽怎皂燥则则藻早则藻泽泽蚤燥灶蚤灶责葬贼蚤藻灶贼泽憎蚤贼澡皂藻贼葬泽贼葬贼蚤糟泽赠灶燥增蚤葬造糟藻造造泽葬则糟燥皂葬葬灶凿皂藻造葬灶燥皂葬怎泽蚤灶早早藻灶藻贼蚤糟葬造造赠藻灶早蚤灶藻藻则藻凿造赠皂责澡燥糟赠贼藻泽则藻葬糟贼蚤增藻憎蚤贼澡晕再鄄耘杂韵鄄员 [ 允 ] 援允悦造蚤灶韵灶糟燥造, 圆园员员, 圆怨 ( 苑 ): 怨员苑鄄怨圆源援 [ 圆苑 ] 酝燥则早葬灶砸粤, 悦澡蚤灶灶葬泽葬皂赠晕, 粤遭葬贼藻鄄阅葬早葬阅, 藻贼葬造援悦葬灶糟藻则则藻早则藻泽鄄泽蚤燥灶葬灶凿灶藻怎则燥造燥早蚤糟葬造贼燥曾蚤糟蚤贼赠枣燥造造燥憎蚤灶早葬灶贼蚤鄄酝粤郧耘鄄粤猿栽悦砸早藻灶藻贼澡藻则葬责赠 [ 允 ] 援允陨皂皂怎灶燥贼澡藻则, 圆园员猿, 猿远 ( 圆 ): 员猿猿鄄员缘员援 [ 圆愿 ] 酝燥则早葬灶砸粤, 允燥澡灶泽燥灶蕴粤, 阅葬增蚤泽允蕴, 藻贼葬造援砸藻糟燥早灶蚤贼蚤燥灶燥枣早造蚤燥皂葬泽贼藻皂糟藻造造泽遭赠早藻灶藻贼蚤糟葬造造赠皂燥凿蚤枣蚤藻凿栽糟藻造造泽贼葬则早藻贼蚤灶早耘郧云砸增 Ⅲ 葬灶凿凿藻增藻造燥责皂藻灶贼燥枣葬凿燥责贼蚤增藻糟藻造造贼澡藻则葬责赠枣燥则早造蚤燥皂葬 [ 允 ] 援匀怎皂郧藻灶藻栽澡藻则, 圆园员圆, 圆猿 ( 员园 ): 员园源猿鄄员园缘猿援 [ 圆怨 ] 杂葬皂责泽燥灶允匀, 悦澡燥蚤月阅, 杂葬灶糟澡藻扎鄄孕藻则藻扎蕴, 藻贼葬造援耘郧云砸增 Ⅲ 皂悦粤砸鄄皂燥凿蚤枣蚤藻凿栽鄄糟藻造造贼澡藻则葬责赠糟怎则藻泽皂蚤糟藻憎蚤贼澡藻泽贼葬遭造蚤泽澡藻凿蚤灶贼则葬糟藻则藻遭则葬造早造蚤燥皂葬葬灶凿早藻灶藻则葬贼藻泽澡燥泽贼蚤皂皂怎灶蚤贼赠葬早葬蚤灶泽贼贼怎皂燥则鄄葬灶贼蚤早藻灶造燥泽泽 [ 允 ] 援悦造蚤灶悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园员源, 圆园 ( 源 ): 怨苑圆鄄怨愿源援 [ 猿园 ] 月燥造造葬则凿悦酝, 郧燥贼贼泽糟澡葬造噪杂, 栽燥则则葬灶燥灾, 藻贼葬造援杂怎泽贼葬蚤灶藻凿糟燥皂责造藻贼藻则藻泽责燥灶泽藻泽蚤灶责葬贼蚤藻灶贼泽憎蚤贼澡造赠皂责澡燥皂葬则藻糟藻蚤增蚤灶早葬怎贼燥造燥早燥怎泽糟赠贼燥贼燥曾蚤糟栽造赠皂责澡燥糟赠贼藻泽贼葬则早藻贼蚤灶早耘责泽贼藻蚤灶鄄月葬则则增蚤则怎泽造葬贼藻灶贼皂藻皂遭则葬灶藻责则燥鄄贼藻蚤灶泽 [ 允 ] 援允悦造蚤灶韵灶糟燥造, 圆园员源, 猿圆 ( 愿 ): 苑怨愿鄄愿园愿援 [ 猿员 ] 栽躁葬造皂葬宰粤葬灶凿阅藻责怎赠凿贼悦耘援悦藻则增蚤糟葬造糟葬灶糟藻则泽糟则藻藻灶蚤灶早 : 宰澡蚤糟澡匀孕灾贼藻泽贼泽澡燥怎造凿遭藻怎泽藻凿鄄鄄蕴员燥则耘远辕耘苑?[ 允 ] 援耘怎则允韵遭泽贼藻贼郧赠灶藻鄄糟燥造砸藻责则燥凿月蚤燥造, 圆园员猿, 员苑园 ( 员 ): 源缘鄄源远援 [ 猿圆 ] 悦澡蚤灶灶葬泽葬皂赠阅, 再怎在, 栽澡藻燥则藻贼酝砸, 藻贼葬造援郧藻灶藻贼澡藻则葬责赠怎泽蚤灶早早藻鄄灶藻贼蚤糟葬造造赠皂燥凿蚤枣蚤藻凿造赠皂责澡燥糟赠贼藻泽贼葬则早藻贼蚤灶早灾耘郧云砸鄄圆蚤灶澡蚤遭蚤贼泽贼澡藻早则燥憎贼澡燥枣增葬泽糟怎造葬则蚤扎藻凿泽赠灶早藻灶蚤糟贼怎皂燥则泽蚤灶皂蚤糟藻 [ 允 ] 援允悦造蚤灶陨灶鄄增藻泽贼, 圆园员园, 员圆园 ( 员员 ): 猿怨缘猿鄄猿怨远愿援 [ 猿猿 ] 栽则葬灶耘, 悦澡蚤灶灶葬泽葬皂赠阅, 再怎在, 藻贼葬造援陨皂皂怎灶藻贼葬则早藻贼蚤灶早燥枣枣蚤遭则燥鄄遭造葬泽贼葬糟贼蚤增葬贼蚤燥灶责则燥贼藻蚤灶贼则蚤早早藻则泽则藻糟燥早灶蚤贼蚤燥灶燥枣皂怎造贼蚤责燥贼藻灶贼遭燥灶藻皂葬则则燥憎泽贼则燥皂葬造糟藻造造泽葬灶凿糟葬糟澡藻曾蚤葬 [ 允 ] 援允耘曾责酝藻凿, 圆园员猿, 圆员园 ( 远 ): 员员圆缘鄄员员猿缘援 [ 猿源 ] 灾燥早藻造泽贼藻蚤灶月, 孕葬责葬凿燥责燥怎造燥泽晕, 灾藻造糟怎造藻泽糟怎灾耘, 藻贼葬造援悦葬灶糟藻则早藻鄄灶燥皂藻造葬灶凿泽糟葬责藻泽 [ 允 ] 援杂糟蚤藻灶糟藻, 圆园员猿, 猿猿怨 ( 远员圆苑 ): 员缘源远鄄员缘缘愿援 [ 猿缘 ] 砸燥遭遭蚤灶泽孕云, 蕴怎再悦, 耘造鄄郧葬皂蚤造酝, 藻贼葬造援酝蚤灶蚤灶早藻曾燥皂蚤糟泽藻择怎藻灶鄄糟蚤灶早凿葬贼葬贼燥蚤凿藻灶贼蚤枣赠皂怎贼葬贼藻凿葬灶贼蚤早藻灶泽则藻糟燥早灶蚤扎藻凿遭赠葬凿燥责贼蚤增藻造赠贼则葬灶泽枣藻则则藻凿贼怎皂燥则鄄则藻葬糟贼蚤增藻栽糟藻造造泽 [ 允 ] 援晕葬贼酝藻凿, 圆园员猿, 员怨 ( 远 ): 苑源苑鄄苑缘圆援 [ 猿远 ] 蕴怎再悦, 再葬燥载, 悦则赠泽贼葬造允杂, 藻贼葬造援耘枣枣蚤糟蚤藻灶贼蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣皂怎贼葬鄄贼藻凿糟葬灶糟藻则葬灶贼蚤早藻灶泽则藻糟燥早灶蚤扎藻凿遭赠栽糟藻造造泽葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿憎蚤贼澡凿怎则葬遭造藻贼怎皂燥则则藻早则藻泽泽蚤燥灶泽 [ 允 ] 援悦造蚤灶悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园员源, 圆园 ( 员猿 ): 猿源园员鄄猿源员园援 [ 猿苑 ] 郧怎遭蚤灶酝酝, 在澡葬灶早载, 杂糟澡怎泽贼藻则匀, 藻贼葬造援悦澡藻糟噪责燥蚤灶贼遭造燥糟噪葬凿藻糟葬灶糟藻则蚤皂皂怎灶燥贼澡藻则葬责赠贼葬则早藻贼泽贼怎皂燥怎则鄄泽责藻糟蚤枣蚤糟皂怎贼葬灶贼葬灶贼蚤早藻灶泽 [ 允 ] 援晕葬贼怎则藻, 圆园员源, 缘员缘 ( 苑缘圆愿 ): 缘苑苑鄄缘愿员援 [ 猿愿 ] 再葬凿葬增酝, 允澡怎灶躁澡怎灶憎葬造葬杂, 孕澡怎灶早匝栽, 藻贼葬造援孕则藻凿蚤糟贼蚤灶早蚤皂皂怎灶燥鄄早藻灶蚤糟贼怎皂燥怎则皂怎贼葬贼蚤燥灶泽遭赠糟燥皂遭蚤灶蚤灶早皂葬泽泽泽责藻糟贼则燥皂藻贼则赠葬灶凿藻曾鄄燥皂藻泽藻择怎藻灶糟蚤灶早 [ 允 ] 援晕葬贼怎则藻, 圆园员源, 缘员缘 ( 苑缘圆愿 ): 缘苑圆鄄缘苑远援 [ 猿怨 ] 月造葬灶噪藻灶泽贼藻蚤灶栽, 蕴藻蚤泽藻早葬灶早酝, 哉糟噪藻则贼宰, 藻贼葬造援栽葬则早藻贼蚤灶早糟葬灶糟藻则鄄泽责藻糟蚤枣蚤糟皂怎贼葬贼蚤燥灶泽遭赠栽糟藻造造则藻糟藻责贼燥则早藻灶藻贼澡藻则葬责赠 [ 允 ] 援悦怎则则韵责蚤灶陨皂皂怎灶燥造, 圆园员缘, 猿猿悦 : 员员圆鄄员员怨援 [ 源园 ] 蕴蚤灶灶藻皂葬灶灶悦, 增葬灶月怎怎则藻灶酝酝, 月蚤藻泽蕴, 藻贼葬造援匀蚤早澡鄄贼澡则燥怎早澡责怎贼藻责蚤贼燥责藻凿蚤泽糟燥增藻则赠则藻增藻葬造泽枣则藻择怎藻灶贼则藻糟燥早灶蚤贼蚤燥灶燥枣灶藻燥鄄葬灶贼蚤早藻灶泽遭赠垣悦阅源栽糟藻造造泽蚤灶澡怎皂葬灶皂藻造葬灶燥皂葬 [ 允 ] 援晕葬贼酝藻凿, 圆园员缘, 圆员 ( 员 ): 愿员鄄愿缘援 [ 源员 ] 粤则藻葬泽贼燥憎葬贼糟澡蚤灶圆园员缘 [ 允 ] 援杂糟蚤藻灶糟藻, 圆园员源, 猿源远 ( 远圆员远 ): 员源缘园援 [ 源圆 ] 杂灶赠凿藻则粤, 酝葬噪葬则燥增灾, 酝藻则早澡燥怎遭栽, 藻贼葬造援郧藻灶藻贼蚤糟遭葬泽蚤泽枣燥则糟造蚤灶蚤鄄糟葬造则藻泽责燥灶泽藻贼燥悦栽蕴粤鄄源遭造燥糟噪葬凿藻蚤灶皂藻造葬灶燥皂葬 [ 允 ] 援晕耘灶早造允酝藻凿, 圆园员源, 猿苑员 ( 圆猿 ): 圆员愿怨鄄圆员怨怨援 [ 源猿 ] 月藻则则蚤藻灶鄄耘造造蚤燥贼贼酝酝, 再怎葬灶允, 杂憎蚤藻则蕴耘, 藻贼葬造援悦澡藻糟噪责燥蚤灶贼遭造燥糟噪鄄葬凿藻蚤皂皂怎灶燥贼澡藻则葬责赠则藻造蚤藻泽燥灶栽鄄遭藻贼遭怎贼灶燥贼藻燥皂藻泽贼燥陨灶凿怎糟藻藻枣枣藻糟鄄垣贼燥则枣怎灶糟贼蚤燥灶蚤灶贼怎皂燥则鄄蚤灶枣蚤造贼则葬贼蚤灶早悦阅愿栽糟藻造造泽 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则陨皂鄄皂怎灶燥造砸藻泽, 圆园员缘, 猿 ( 圆 ): 员员远鄄员圆源援 [ 源源 ] 砸蚤扎增蚤晕粤, 匀藻造造皂葬灶灶酝阅, 杂灶赠凿藻则粤, 藻贼葬造援酝怎贼葬贼蚤燥灶葬造造葬灶凿泽糟葬责藻凿藻贼藻则皂蚤灶藻泽泽藻灶泽蚤贼蚤增蚤贼赠贼燥孕阅鄄员遭造燥糟噪葬凿藻蚤灶灶燥灶鄄泽皂葬造造糟藻造造造怎灶早糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援杂糟蚤藻灶糟藻, 圆园员缘援 [ 耘责怎遭葬澡藻葬凿燥枣责则蚤灶贼 ] 援 [ 收稿日期 ] 摇圆园员缘原园猿原员怨 [ 修回日期 ] 摇圆园员缘原园猿原圆远 [ 本文编辑 ] 摇黄静怡