源圆园 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员员年愿月, 员愿 ( 源 ) 摇摇肿瘤患者治疗过程中造血和免疫系统受损, 如何保护和尽快恢复造血和免疫功能是肿瘤治疗学的 [ 员重要课题 ] 目前临床常用于造血损伤修复的药物是粒细胞鄄巨噬细胞集落刺激因子 ( 早则葬灶怎造燥糟赠贼藻鄄皂葬糟则燥责澡葬早藻糟燥造燥

Transcription

1 中国肿瘤生物治疗杂志摇澡贼贼责 : 辕辕憎憎憎援遭蚤燥贼澡藻则援燥则早悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则, 粤怎早援圆园员员, 灾燥造援员愿, 晕燥援源 源员怨 阅韵陨 : 员园援猿愿苑圆辕躁援蚤泽泽灶援员园园苑鄄猿愿缘载援圆园员员援园源援园员缘 基础研究 杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白的制备及其趋化作用 员圆员员员员员员居小萍, 徐新颜, 张晓青, 刘永明, 于春山, 曹洋森, 卢明智, 陈樱 ( 员援第二军医大学长海医院放射治疗科, 上海圆园园源猿猿 ; 圆援中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所, 上海圆园园园猿圆 ) [ 摘摇要 ] 摇目的 : 利用基因工程技术制备杂阅云鄄员与澡郧酝鄄悦杂云的融合蛋白 ( 杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云 ), 研究该融合蛋白对肿瘤患者造血和免疫功能的增强作用 方法 : 构建表达杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白的责孕陨悦怨噪鄄杂阅云员鄄则澡郧酝鄄悦杂云员质粒, 转染酵母菌, 诱导杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白的表达, 宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早鉴定杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白的表达 集落形成实验观察杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云对骨髓细胞集落形成的影响, 趋化实验检测其对未成熟树突状细胞 ( 凿藻灶凿则蚤贼蚤糟糟藻造造, 阅悦 ) 的趋化作用 结果 : 成功构建责孕陨悦怨噪鄄杂阅云员鄄则澡郧酝鄄悦杂云员质粒, 高表达杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白, 分子量约为圆缘园园园, 并可被郧酝鄄悦杂云特异性抗体所识别 杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白能显著刺激骨髓细胞的集落形成, 其效果强于郧酝鄄悦杂云 ( 孕约园援园缘 ) 与杂阅云鄄员相比, 杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白可更有效地趋化未成熟阅悦 ( 孕约园援园缘 ) 结论 : 杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白可有效促进骨髓细胞的集落形成, 趋化未成熟阅悦, 有促进肿瘤化疗患者造血和免疫功能恢复的潜在临床应用前景 [ 关键词 ] 摇杂阅云鄄员 ; 郧酝鄄悦杂云 ; 融合蛋白 ; 肿瘤 ; 造血 ; 免疫 ; 趋化 [ 中图分类号 ] 摇匝苑愿 ; 砸猿怨圆援员 ; 砸苑猿园援缘摇摇摇摇 [ 文献标志码 ] 摇粤摇摇摇摇 [ 文章编号 ] 摇员园园苑鄄猿愿缘载 ( 圆园员员 ) 园源鄄园源员怨鄄园缘 孕则藻责葬则葬贼蚤燥灶燥枣杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云枣怎泽蚤燥灶责则燥贼藻蚤灶葬灶凿蚤贼泽糟澡藻皂燥贼葬糟贼蚤糟藻枣枣藻糟贼 员圆员员员员员允哉载蚤葬燥鄄责蚤灶早, 载哉载蚤灶鄄赠葬灶, 在匀粤晕郧载蚤葬燥鄄择蚤灶早, 蕴陨哉再燥灶早鄄皂蚤灶早, 再哉悦澡怎灶鄄泽澡葬灶, 悦粤韵再葬灶早鄄泽藻灶, 蕴哉酝蚤灶早鄄扎澡蚤, 员悦匀耘晕再蚤灶早 ( 员援阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣砸葬凿蚤燥贼澡藻则葬责赠, 悦澡葬灶早澡葬蚤匀燥泽责蚤贼葬造, 杂藻糟燥灶凿酝蚤造蚤贼葬则赠酝藻凿蚤糟葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠, 杂澡葬灶早澡葬蚤圆园园源猿猿, 悦澡蚤灶葬 ; 圆援陨灶泽贼蚤贼怎贼藻燥枣孕造葬灶贼孕澡赠泽蚤燥造燥早赠葬灶凿耘糟燥造燥早赠, 杂澡葬灶早澡葬蚤陨灶泽贼蚤贼怎贼藻泽燥枣月蚤燥造燥早蚤糟葬造杂糟蚤藻灶糟藻, 悦澡蚤灶藻泽藻粤糟葬凿藻皂赠燥枣杂糟蚤藻灶糟藻泽, 杂澡葬灶早澡葬蚤圆园园园猿圆, 悦澡蚤灶葬 ) [ 粤遭泽贼则葬糟贼 ] 摇韵遭躁藻糟贼蚤增藻 : 栽燥责则藻责葬则藻贼澡藻枣怎泽蚤燥灶责则燥贼藻蚤灶燥枣杂阅云鄄员葬灶凿则澡郧酝鄄悦杂云 ( 杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云 ) 遭赠早藻灶藻贼蚤糟藻灶早蚤鄄灶藻藻则蚤灶早贼藻糟澡灶燥造燥早赠, 葬灶凿蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻蚤贼泽澡藻皂葬贼燥责燥蚤藻贼蚤糟葬灶凿蚤皂皂怎灶藻责则燥皂燥贼蚤燥灶枣怎灶糟贼蚤燥灶泽蚤灶贼怎皂燥则责葬贼蚤藻灶贼泽援酝藻贼澡燥凿泽 : 栽澡藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶增藻糟贼燥则枣燥则杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云枣怎泽蚤燥灶责则燥贼藻蚤灶, 责孕陨悦怨噪鄄杂阅云员鄄则澡郧酝鄄悦杂云员, 憎葬泽糟燥灶泽贼则怎糟贼藻凿葬灶凿贼澡藻责则燥贼藻蚤灶藻曾鄄责则藻泽泽蚤燥灶憎葬泽蚤灶凿怎糟藻凿遭赠赠藻葬泽贼贼则葬灶泽枣藻糟贼蚤燥灶援杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云枣怎泽蚤燥灶责则燥贼藻蚤灶憎葬泽枣怎则贼澡藻则蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿遭赠宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早葬灶葬造赠泽蚤泽援悦燥造燥灶赠鄄枣燥则皂葬贼蚤燥灶葬泽泽葬赠葬灶凿糟澡藻皂燥葬贼贼则葬糟贼葬泽泽葬赠憎藻则藻怎泽藻凿贼燥泽贼怎凿赠贼澡藻则燥造藻泽燥枣贼澡藻责则藻责葬则藻凿枣怎泽蚤燥灶责则燥贼藻蚤灶蚤灶泽贼蚤皂鄄怎造葬贼蚤灶早遭燥灶藻皂葬则则燥憎糟藻造造糟燥造燥灶赠鄄枣燥则皂葬贼蚤燥灶葬灶凿蚤灶糟澡藻皂燥葬贼贼则葬糟贼蚤灶早蚤皂皂葬贼怎则藻凿藻灶凿则蚤贼蚤糟糟藻造造泽援砸藻泽怎造贼泽 : 杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云枣怎泽蚤燥灶早藻灶藻增藻糟贼燥则, 责孕陨悦怨噪鄄杂阅云员鄄则澡郧酝鄄悦杂云员, 憎葬泽泽怎糟糟藻泽泽枣怎造造赠糟燥灶泽贼则怎糟贼藻凿葬灶凿藻曾责则藻泽泽藻凿澡蚤早澡造藻增藻造燥枣杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云枣怎泽蚤燥灶早藻灶藻援栽澡藻皂燥造藻糟怎造葬则憎藻蚤早澡贼燥枣贼澡藻藻曾责则藻泽泽藻凿责则燥贼藻蚤灶憎葬泽葬遭燥怎贼圆缘园园园葬灶凿憎葬泽则藻糟燥早灶蚤扎藻凿遭赠郧酝鄄悦杂云泽责藻糟蚤枣蚤糟葬灶贼蚤遭燥凿赠援栽澡藻枣怎泽蚤燥灶责则燥贼藻蚤灶澡葬凿葬泽贼则燥灶早藻则藻枣枣藻糟贼蚤灶泽贼蚤皂怎造葬贼蚤灶早遭燥灶藻皂葬则则燥憎糟藻造造糟燥造燥灶赠鄄枣燥则皂葬贼蚤燥灶贼澡葬灶郧酝鄄悦杂云 ( 孕约园郾园缘 ) 葬灶凿蚤灶糟澡藻皂燥葬贼贼则葬糟贼蚤灶早蚤皂皂葬贼怎则藻凿藻灶凿则蚤贼蚤糟糟藻造造泽贼澡葬灶杂阅云鄄员 ( 孕约园援园缘 ) 援悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶 : 杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云枣怎泽蚤燥灶责则燥贼藻蚤灶糟葬灶责则燥皂燥贼藻遭燥灶藻皂葬则则燥憎糟藻造造糟燥造燥灶赠鄄枣燥则皂葬贼蚤燥灶葬灶凿糟澡藻皂燥葬贼贼则葬糟贼蚤燥灶燥枣蚤皂皂葬贼怎则藻凿藻灶凿则蚤贼蚤糟糟藻造造泽, 憎澡蚤糟澡皂蚤早澡贼遭藻怎泽藻凿枣燥则责则燥皂燥贼蚤灶早澡藻皂葬贼燥责燥蚤藻泽蚤泽葬灶凿蚤皂皂怎灶藻枣怎灶糟贼蚤燥灶燥枣贼怎皂燥则责葬贼蚤藻灶贼泽葬枣贼藻则糟澡藻皂燥贼澡藻则葬责赠援 [ 运藻赠憎燥则凿泽 ] 摇杂阅云鄄员 ; 郧酝鄄悦杂云 ; 枣怎泽蚤燥灶责则燥贼藻蚤灶 ; 贼怎皂燥则 ; 澡藻皂葬贼燥责燥蚤藻泽蚤泽 ; 蚤皂皂怎灶蚤贼赠 ; 糟澡藻皂燥贼葬曾蚤泽 [ 悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则, 圆园员员, 员愿 ( 源 ): 源员怨鄄源圆猿 ] 摇摇 [ 基金项目 ] 摇 上海市自然科学基金资助项目 ( 晕燥援园远在砸员源员员源 ), 军队医学研究 十一五 计划课题资助项目 ( 晕燥援员园酝粤园园源 ) 孕则燥躁藻糟贼泽怎责责燥则贼藻凿 遭赠贼澡藻晕葬贼怎则葬造杂糟蚤藻灶糟藻云燥怎灶凿葬贼蚤燥灶燥枣杂澡葬灶早澡葬蚤 ( 晕燥援园远在砸员源员员源 ), 葬灶凿贼澡藻 员员贼澡云蚤增藻鄄再藻葬则孕造葬灶 孕则燥早则葬皂燥枣孕蕴粤 ( 晕燥援员园酝粤园园源 ) [ 作者简介 ] 摇 居小萍 ( 员怨远远原 ), 女, 江苏省镇江市人, 博士, 主要从事恶性肿瘤放射治疗和放射损伤的研究 耘鄄皂葬蚤造 : 躁曾责澡燥怎泽藻岳员愿怨援糟灶 [ 通信作者 ] 摇 张晓青 ( 在匀粤晕郧载蚤葬燥鄄择蚤灶早, 糟燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早葬怎贼澡燥则 ), 耘皂葬蚤造 : 贼蚤早藻则扎曾择岳赠葬澡燥燥援糟燥皂援糟灶

2 源圆园 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员员年愿月, 员愿 ( 源 ) 摇摇肿瘤患者治疗过程中造血和免疫系统受损, 如何保护和尽快恢复造血和免疫功能是肿瘤治疗学的 [ 员重要课题 ] 目前临床常用于造血损伤修复的药物是粒细胞鄄巨噬细胞集落刺激因子 ( 早则葬灶怎造燥糟赠贼藻鄄皂葬糟则燥责澡葬早藻糟燥造燥灶赠枣葬贼燥则, 郧酝鄄悦杂云 ), 但是它促进造血 [ 圆鄄猿增殖的作用缓慢 ], 寻找新的药物十分必要 近年来趋化因子及其受体在造血调控中的作用日益引起人们的关注 基质细胞来源因子鄄员 ( 泽贼则燥皂葬造糟藻造造凿藻鄄则蚤增藻凿枣葬糟贼燥则鄄员, 杂阅云鄄员 ) 属悦载悦型趋化因子, 对造血干辕祖细胞具有刺激增殖 维持存活和抗凋亡作用, 还能有效趋化栽细胞 前月细胞 树突状细胞 ( 凿藻灶鄄 [ 源鄄缘凿则蚤贼蚤糟糟藻造造, 阅悦 ) 等 ] 杂阅云鄄员可与多种造血生长因子如郧酝鄄悦杂云协同促进髓系 巨核系造血前体细胞 [ 远鄄苑的增殖与分化 ] 鉴于杂阅云鄄员与郧酝鄄悦杂云在功能上具有一定的互补性, 本研究试图将杂阅云鄄员与郧酝鄄悦杂云联用, 以便更好地促进肿瘤患者造血和免疫功能的恢复 本课题组前期实验中已经制备了小鼠的皂杂阅云鄄员辕郧酝鄄悦杂云融合蛋白, 发现皂杂阅云鄄员辕郧酝鄄悦杂云融合蛋 [ 愿白能促进辐射小鼠的造血和免疫功能恢复 ] 本研究利用前期制备的人杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白, 探讨该融合蛋白对肿瘤患者造血和免疫损伤恢复的促进作用, 为肿瘤治疗寻找新的方法 员摇材料与方法员援员摇试剂和材料毕赤酵母表达质粒责孕陨悦怨噪和酵母表达菌株郧杂员员缘购自陨灶增蚤贼则燥早藻灶公司, 大肠杆菌栽韵孕员园菌株为本实验室保存 阅晕粤限制性内切酶 栽源阅晕粤高效连接试剂盒均购自栽葬运葬砸葬 ( 大连 ) 公司 鼠抗人郧酝鄄悦杂云购自砸驭阅公司, 辣根过氧化物酶标记的兔抗鼠陨早郧购自北京中杉公司 山梨醇 氯化锂等其他常用化学试剂均购于国药集团化学制品有限公司 孕悦砸产物回收试剂盒 阅晕粤胶回收试剂盒 质粒抽提试剂盒均为粤曾赠藻灶公司产品, 宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早显色试剂盒为酝蚤造造蚤责燥则藻公司产品, 人郧酝鄄悦杂云耘蕴陨杂粤试剂盒由上海希美生物科技有限公司提供 员援圆摇杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合基因的合成与责孕陨悦怨噪鄄杂阅云员鄄则澡郧酝鄄悦杂云员质粒的构建杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合基因委托陨灶增蚤贼则燥早藻灶公司合成, 在杂阅云员基因和则澡郧酝鄄悦杂云员基因之间加上连接肽 ( 郧造赠源杂藻则猿 ), 全长为远缘员遭责, 并在融合基因的两端分别添加了耘糟燥砸 Ⅰ 和载澡燥 Ⅰ 双酶切位点 责孕陨悦怨噪载体带有两个载澡燥 Ⅰ 位点, 分别位于员员怨猿和缘苑员园处, 对责孕陨悦怨噪载体进行改造后, 将缘苑员园处 的载澡燥 Ⅰ 点突变为耘糟燥砸 Ⅰ 酶切位点, 使杂阅云鄄员 γ 辕则澡鄄郧酝鄄悦杂云基因在载澡燥 Ⅰ 和耘糟燥砸 Ⅰ 双酶切位点插入 责孕陨悦怨噪载体 将酶切好的杂阅云员鄄则澡郧酝鄄悦杂云员片段和责孕陨悦怨噪载体用栽源阅晕粤连接酶员远益连接猿澡 将连接产物责孕陨悦怨噪鄄杂阅云员鄄则澡郧酝鄄悦杂云员转化大肠杆菌栽孕韵员园, 猿苑益培养过夜, 挑取转化克隆, 酶切鉴定, 挑取其中的源个阳性菌株抽提质粒进行测序验证 员援猿摇 杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白的诱导表达 将责孕陨悦怨噪鄄杂阅云员鄄则澡郧酝鄄悦杂云员用杂葬造 Ⅰ 酶切线形化后, 电转法转化郧杂员员缘酵母菌 ( 参照陨灶增蚤贼则燥早藻灶公司表达系统悦葬贼葬造燥早晕燥员运员苑源园圆园员说明书进行 ) 电转条件 : 电压员援缘噪灾, 电容圆缘 μ 云, 电阻圆园园 Ω, 电击时间猿援愿耀耀耀耀缘皂泽 将转化产物涂布于缺乏组氨酸的 砸阅月营养缺陷平板, 猿耀耀耀耀源凿后可见克隆生长 挑取 源愿个长势较好的酵母转化菌落进行小规模发酵, 用斑点印迹法进行初步筛选, 高拷贝重组子孕悦砸验证 将上述筛选出有表达的酵母转化子菌株进行放大诱导表达 用宰藻泽贼藻则灶遭燥造贼贼蚤灶早验证杂阅云鄄员 γ 辕则澡鄄郧酝鄄悦杂云融合蛋白的表达 员援源摇宰藻泽贼藻则灶遭燥造贼蚤灶早检测杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白的表达 将上述诱导表达后的杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白经员园豫杂阅杂鄄孕粤郧耘, 恒流转移至孕灾阅云膜上, 用 猿豫月杂粤封闭员澡, 栽栽月杂洗膜猿皂蚤灶伊远次, 加入鼠抗人郧酝鄄悦杂云单抗与膜上的融合蛋白结合, 用相应的 匀砸孕偶联的兔抗鼠陨早郧为二抗与其反应后, 加耘悦蕴 化学发光试剂, 经压片曝光后进行显影和定影分析 员援缘摇耘蕴陨杂粤法检测样品中杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云的含量 将样品对应的微孔按序编号, 每板设阴 阳性对照圆个孔和空白对照孔 ( 空白孔不加酶标试剂 ), 分别在相应的孔中加入含杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云的发酵液和阴 阳性对照品缘园 μ 造, 每孔加入缘园 μ 造酶标试剂, 轻轻混匀, 用封板膜封板后猿苑益温浴猿园皂蚤灶, 再用月蚤燥鄄栽藻噪洗板机充分洗涤缘次, 每孔再加显色剂粤和月各 缘园 μ 造, 猿苑益避光显色员园皂蚤灶, 加终止液缘园 μ 造 使用酶标仪在源缘园灶皂波长处检测其光密度 ( 阅源缘园 ) 值 员援远摇 集落形成实验检测骨髓细胞集落形成 实验分猿组 : 郧酝鄄悦杂云组 杂阅云鄄员组 杂阅云鄄员 γ 辕则澡鄄郧酝鄄悦杂云融合蛋白组, 所用细胞因子均为猿园灶早辕皂造 各取源园园 μ 造加入远孔板, 均依次做倍比稀释 采取胸部肿瘤患者胸外科手术中获取的肋骨, 分离骨髓细胞, 以酝藻贼澡悦怎造贼贼怎匀源圆猿园培养基混匀, 每孔加入 远愿园园 μ 造细胞悬液 ( 员伊员园辕皂造 ) 猿苑益 缘豫悦韵圆孵箱中培养员源凿, 在倒置相差显微镜下计数悦云哉鄄郧酝数

3 居小萍, 等援杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白的制备及其趋化作用 目, 以缘园个细胞以上为一个集落 员援苑摇 未成熟阅悦的诱导培养 取健康人外周静脉血, 分离外周血单个核细胞, 远以缘伊员园辕皂造置猿缘皂皂培养皿中培养, 弃悬浮细胞, 在含澡郧酝鄄悦杂云 ( 愿园园哉辕皂造 ) 和则澡陨蕴鄄源 ( 缘园园哉辕皂造 ) 的 砸孕酝陨员远源园完全培养基中继续培养猿凿, 流式细胞术检测证实为未成熟阅悦 员援愿摇趋化实验检测杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白对未成熟阅悦的趋化作用 设立杂阅云鄄员组 郧酝鄄悦杂云组和杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白组, 以砸孕酝陨员远源园稀释, 使其所含的细胞因子均为远源灶早辕皂造 取圆源孔培养板, 每孔加入 远园园 μ 造样品, 依次做缘倍稀释, 阴性对照为砸孕酝陨员远源园培养基 在愿 μ 皂孔径小室内加入圆园园 μ ( 造缘伊缘员园个辕皂造 ) 未成熟阅悦, 猿苑益培养源澡后用流式细胞仪计数趋化至下室中的细胞数, 计算趋化指数 ( 糟澡藻皂燥贼葬糟贼蚤糟蚤灶凿藻曾, 悦陨 ) 趋化指数 ( 豫 ) 越迁移到样品液的细胞数辕迁移到阴性对照液的细胞数伊员园园豫 员援怨摇 统计学处理 数据用珋曾依泽表示, 采用杂孕杂杂员源援园软件, 两组间比较采用贼检验, 以孕约园援园缘或孕约园援园员表示差异有统计学意义 圆摇结摇果 圆援员摇 责孕陨悦怨噪鄄杂阅云员鄄则澡郧酝鄄悦杂云员质粒的构建和鉴定 融合基因杂阅云员鄄则澡郧酝鄄悦杂云员和责孕陨悦怨噪质粒用 耘糟燥砸 Ⅰ 和载澡燥 Ⅰ 双酶切后进行琼脂糖凝胶电泳, 割胶回收后用栽源连接酶连接, 并转入栽韵孕员园, 选取员源 个重组菌株进行孕悦砸鉴定 结果 ( 图员 ) 显示, 条带大小与杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云目的基因大小一致, 说明质粒构建成功 挑取其中源个菌株进行测序, 得到正确的责孕陨悦怨噪鄄杂阅云员鄄则澡郧酝鄄悦杂云员质粒 源圆员 圆援圆摇杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白的表达和鉴定选取责孕糟员怨运鄄杂阅云员鄄则澡郧酝鄄悦杂云员员重组菌株进行发酵, 取发酵液上清原液圆园 μ 造上样, 宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼鄄贼蚤灶早分析结果 ( 图圆 ) 显示, 在分子量圆缘园园园处呈现目的蛋白, 与杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融台蛋白理论分子量相符, 成功获得杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融台蛋白 图圆摇杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白的宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早分析云蚤早援圆摇宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云枣怎泽蚤燥灶责则燥贼藻蚤灶员鄄源, 苑鄄员园 : 责孕陨悦怨运鄄杂阅云员鄄则澡郧酝鄄悦杂云员 ; 缘 : 责孕陨悦怨运 ; 远 : 酝葬则噪藻则圆援猿摇杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白促进骨髓细胞集落形成杂阅云鄄员 郧酝鄄悦杂云或杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白与骨髓细胞共培养, 结果 ( 图猿 ) 发现, 杂阅云鄄员 γ 辕则澡鄄郧酝鄄悦杂云融合蛋白能显著促进行骨髓细胞集落形成, 在员援圆缘耀耀耀耀员园灶皂燥造辕蕴时, 促进集落形成效果最佳, 呈剂量依赖性 ( 孕约园援园缘 ), 且其活性强于郧酝鄄悦杂云 ( 孕约园援园缘或孕约园援园员 ) 图猿摇杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白对骨髓细胞集落形成的影响 云蚤早援猿摇耘枣枣藻糟贼燥枣杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云枣怎泽蚤燥灶责则燥贼藻蚤灶燥灶糟燥造燥灶赠鄄枣燥则皂葬贼蚤燥灶燥枣遭燥灶藻皂葬则则燥憎糟藻造造泽 孕约园援园缘, 孕约园援园员增泽杂阅云鄄员早则燥怎责 孕约园援园缘, 孕约园援园员增泽郧酝鄄悦杂云 图员摇责孕糟员怨运鄄杂阅云员鄄则澡郧酝鄄悦杂云员质粒的孕悦砸鉴定云蚤早援员摇陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶燥枣责孕糟员怨运鄄杂阅云员鄄则澡郧酝鄄悦杂云员责造葬泽皂蚤凿遭赠孕悦砸杂员原员源 : 责孕陨悦怨运鄄杂阅云员鄄则澡郧酝鄄悦杂云员糟造燥灶藻泽 ; 酝 : 阅蕴圆园园园皂葬则噪藻则 圆援源摇杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白对未成熟阅悦的趋化作用趋化实验结果 ( 图源 ) 显示, 与澡郧酝鄄悦杂云作用类似, 杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白可有效趋化未成熟

4 源圆圆 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园员员年愿月, 员愿 ( 源 ) 阅悦, 呈明显的量效关系, 且趋化效应强于杂阅云鄄员 ( 孕约园援园缘 ), 而郧酝鄄悦杂云对未成熟阅悦无明显的趋化作用 图源摇杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白对未成熟阅悦的趋化作用云蚤早援源摇悦澡藻皂燥贼葬糟贼蚤糟藻枣枣藻糟贼燥枣杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云枣怎泽蚤燥灶责则燥贼藻蚤灶燥灶蚤皂皂葬贼怎则藻阅悦泽 孕约园援园缘, 孕约园援园员增泽郧酝鄄悦杂云早则燥怎责 ; 孕约园援园缘增泽杂阅云鄄员早则燥怎责猿摇讨摇论恶性肿瘤的发病率不断升高, 成为威胁人类健康的主要疾病, 临床恶性肿瘤的治疗方法主要包括手术 放疗 化疗和生物靶向治疗, 放疗 化疗虽然能有效控制肿瘤患者的病情, 但人体的正常组织和机能会受到损伤, 其中造血系统最容易被损伤, 免疫系统的影响与造血系统的损伤密切相关, 如何保护和尽快恢复肿瘤患者的造血功能和免疫功能是肿瘤治 [ 怨鄄员圆疗亟需解决的重要课题 ] 郧酝鄄悦杂云是一种能促进骨髓粒系 单核细胞系 巨噬细胞系发育和成熟的一种细胞因子, 临床应用于不同原因引起的白细胞减少症, 特别是放疗患者的造血恢复, 但效果不十分满意, 其促进造血增殖的作用缓慢, 维持时间较短暂, 停药后效果即消 [ 员猿鄄员源失 ] 因此, 寻找新的能够修复造血损伤, 同时尽快恢复患者免疫功能的药物十分必要 近年来趋化因子及其受体在造血调控中的作用日益引起人们的关注, 在众多的趋化因子及其受体中, 杂阅云鄄员对造血功能的调节显得最为突出 杂阅云鄄员属悦载悦型趋化因子, 其基因编码猿种蛋白 : 杂阅云鄄员 α 杂阅云鄄员 β 杂阅云鄄员 γ, 对造血干辕祖细胞具有刺激增殖 维持存活和抗凋亡作用, 还可有效地趋化栽细胞 [ 员缘鄄员远前月细胞 阅悦等 ] 杂阅云鄄员可与多种造血生长因子如郧酝鄄悦杂云协同, 促进髓系 巨核系造血前体细胞 [ 员苑鄄员怨的增殖与分化 ] 除了诱导栽细胞趋化外, 杂阅云鄄员对栽细胞也能发挥免疫调控作用, 包括促进 [ 圆园鄄圆员增殖和细胞因子分泌 抑制细胞凋亡等 ] 同时, 杂阅云鄄员不会诱导肿瘤细胞产生对放 化疗的抵抗 [ 圆圆作用 ] 基于此, 本研究将杂阅云鄄员与郧酝鄄悦杂云合用, 以便更好地促进肿瘤患者放 化疗后的造血和免疫功能恢复 前期实验已经制备了小鼠的皂杂阅云鄄员辕郧酝鄄悦杂云 融合蛋白, 并研究其对辐射小鼠造血的增殖作用, 发现辐射小鼠经皂杂阅云鄄员辕郧酝鄄悦杂云融合蛋白治疗后, 骨髓单个核细胞增殖活性 悦云哉形成能力明显提高, 骨髓细胞凋亡率明显降低, 并且小鼠外周血 垣垣悦阅猿栽 悦阅源栽细胞明显升高, 提示皂杂阅云鄄员辕郧酝鄄悦杂云融合蛋白具有促进辐射小鼠造血增殖和免疫增 [ 愿殖的双重活性 ] 毕赤酵母表达系统是近年发展起来的一个高效表达系统, 已经有很多抗原以及活性蛋白在毕赤酵母中得到高效表达 为了提高表达效率, 本研究根据酵母对氨基酸的偏向性, 将郧酝鄄悦杂云进行改造 由于郧酝鄄悦杂云对酵母氨基酸的偏向性主要集中在前 员猿个氨基酸, 且这员猿个氨基酸的缺失对其活性无影响, 因此只取了员源耀耀耀耀员圆愿的氨基酸序列与杂阅云鄄员 进行融合后表达 此外, 杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白中各融合成分天然活性的保持, 要求各融合成分能形成各自正常的空间结构 因而连接肽的长度以及所选氨基酸的组分及其伸展性或活性基团能否充 [ 圆园分暴露等都是郧酝鄄悦杂云改造的关键 ] 员缘个氨基酸的连接肽 ( 郧造赠源杂藻则猿 ) 具备一定的长度及伸展性, 能使圆个蛋白各自执行其功能, 且不被蛋白酶水解, [ 圆员在此类研究中应用较广 ] 本研究选用的责孕陨悦怨噪表达质粒带有一段信号肽基因, 因此可以表达分泌型融合蛋白, 为蛋白纯化带来方便 实验结果表明, 毕赤表达系统可以表达 杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白, 表达产物能够与郧酝鄄悦杂云抗体特异性结合 体外实验结果提示, 与郧酝鄄悦杂云相比, 杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白在造血调控作用方面的促进细胞集落形成能力强于单一使用 郧酝鄄悦杂云 进一步观察杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白对免疫活性细胞的趋化作用, 结果表明, 杂阅云鄄员 γ 辕则澡鄄郧酝鄄悦杂云融合蛋白与杂阅云鄄员一样可以趋化未成熟 阅悦, 且效果更强 考虑到郧酝鄄悦杂云是调节机体内造血细胞发育和成熟的一种重要的细胞因子, 而杂阅云鄄员对未成熟阅悦 具有明显的趋化效应 ; 本实验中所获得的杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白既具有杂阅云鄄员对未成熟阅悦的趋化作用, 又能有效促进细胞集落形成, 因此体内应

5 居小萍, 等援杂阅云鄄员 γ 辕则澡郧酝鄄悦杂云融合蛋白的制备及其趋化作用 源圆猿 用该融合蛋白后, 可能增强体内阅悦的趋化及抗原提呈功能, 有望成为在肿瘤患者化疗后恢复造血和免疫功能的新型融合蛋白 [ 参考文献 ] [ 员 ] 摇阅扎澡蚤贼燥增砸援砸藻糟燥早灶蚤贼蚤燥灶燥枣皂蚤糟则燥燥则早葬灶蚤泽皂泽葬灶凿葬糟贼蚤增葬贼蚤燥灶燥枣贼澡藻蚤皂鄄皂怎灶藻则藻泽责燥灶泽藻 [ 允 ] 援晕葬贼怎则藻, 圆园员园, 源源怨 ( 苑员源远 ): 愿员怨鄄怨圆远援 [ 圆 ] 摇月藻澡造蚤灶早鄄运藻造造赠耘援孕葬则葬灶藻燥责造葬泽贼蚤糟责则燥凿怎糟贼蚤燥灶燥枣郧酝鄄悦杂云 [ 允 ] 援灾藻贼悦造蚤灶孕葬贼澡燥造, 圆园员员, 源园 ( 圆 ): 员猿苑援 [ 猿 ] 摇孕葬责葬贼则蚤葬灶贼葬枣赠造造燥怎酝援悦赠贼燥噪蚤灶藻泽 : 郧酝鄄悦杂云蚤灶枣燥糟怎泽 [ 允 ] 援晕藻贼砸藻增陨皂皂怎灶燥造, 圆园员员, 员员 ( 远 ): 缘苑园鄄缘苑员援 [ 源 ] 摇孕燥泽藻增蚤贼扎鄄云藻躁枣葬则粤, 杂皂蚤凿葬酝, 运造蚤糟澡藻杂, 藻贼葬造援粤凿蚤泽责造葬糟藻凿孕粤郧藻灶澡葬灶糟藻泽责则燥曾蚤皂葬造泽蚤早灶葬造葬灶凿杂阅云鄄员鄄蚤灶凿怎糟藻凿栽糟藻造造皂蚤早则葬贼蚤燥灶 [ 允 ] 援耘怎则允陨皂皂怎灶燥造, 圆园园愿, 猿愿 ( 员 ): 圆缘园鄄圆缘怨援 [ 缘 ] 摇凿藻郧燥则贼藻则阅允, 月藻怎造蚤灶早耘粤, 运藻则泽泽藻遭燥燥皂砸, 藻贼葬造援月则怎贼燥灶 泽贼赠则燥鄄泽蚤灶藻噪蚤灶葬泽藻葬灶凿责澡燥泽责澡燥造蚤责葬泽藻悦早葬皂皂葬圆皂藻凿蚤葬贼藻糟澡藻皂燥噪蚤灶藻鄄糟燥灶鄄贼则燥造造藻凿月糟藻造造皂蚤早则葬贼蚤燥灶葬灶凿澡燥皂蚤灶早 [ 允 ] 援陨皂皂怎灶蚤贼赠, 圆园园苑, 圆远 ( 员 ): 怨猿鄄员园源援 [ 远 ] 摇孕燥扎灶葬灶泽噪赠酝悦, 韵造泽扎葬噪陨栽, 云燥曾葬造造砸, 藻贼葬造援粤糟贼蚤增藻皂燥增藻皂藻灶贼燥枣栽糟藻造造泽葬憎葬赠枣则燥皂葬糟澡藻皂燥噪蚤灶藻 [ 允 ] 援晕葬贼酝藻凿, 圆园园园, 远 ( 缘 ): 缘源猿鄄缘源愿援 [ 苑 ] 摇杂澡蚤酝, 匀葬燥杂, 杂怎蕴, 藻贼葬造援灾葬糟糟蚤灶藻燥枣藻灶早蚤灶藻藻则藻凿贼怎皂燥则糟藻造造泽泽藻鄄糟则藻贼蚤灶早泽贼则燥皂葬造糟藻造造鄄凿藻则蚤增藻凿枣葬糟贼燥则鄄员蚤灶凿怎糟藻泽栽鄄糟藻造造凿藻责藻灶凿藻灶贼葬灶贼蚤鄄贼怎皂燥则则藻泽责燥灶泽藻泽 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则砸葬凿蚤燥责澡葬则皂, 圆园园缘, 圆园 ( 源 ): 源园员鄄源园怨援 [ 愿 ] 摇徐斌, 居小萍, 经纬, 等援皂杂阅云鄄员 γ 辕郧酝鄄悦杂云融合蛋白的制备及其对辐射小鼠造血损伤恢复的促进 [ 允 ], 中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园园怨, 员远 ( 员 ): 圆源鄄圆愿援 [ 怨 ] 摇杂葬噪葬早怎糟澡蚤杂, 孕燥憎则蚤藻云援耘皂藻则早蚤灶早糟澡葬造造藻灶早藻泽蚤灶则藻早怎造葬贼燥则赠栽糟藻造造枣怎灶糟贼蚤燥灶葬灶凿遭蚤燥造燥早赠 [ 允 ] 援杂糟蚤藻灶糟藻, 圆园员员, 猿员苑 ( 缘愿猿愿 ): 远圆苑鄄远圆怨援 [ 员园 ] 蕴怎贼扎噪赠允援晕藻憎贼澡藻则葬责藻怎贼蚤糟责燥贼蚤燥灶泽蚤灶贼澡藻皂藻凿蚤糟葬造皂葬灶葬早藻皂藻灶贼燥枣葬凿增葬灶糟藻凿皂藻造葬灶燥皂葬 [ 允 ] 援杂藻皂蚤灶糟怎贼葬灶酝藻凿杂怎则早, 圆园员园, 圆怨 ( 源 ): 圆源怨鄄圆缘苑援 [ 员员 ] 月则燥憎灶酝阅援韵枣枣蚤糟藻皂葬灶葬早藻皂藻灶贼燥枣皂藻造葬灶燥皂葬责葬贼蚤藻灶贼泽 [ 允 ] 援杂藻皂蚤灶悦怎贼葬灶酝藻凿杂怎则早, 圆园员园, 圆怨 ( 源 ): 圆猿圆鄄圆猿苑援 [ 员圆 ] 阅藻宰葬藻造藻杂, 灾葬灶月藻造造藻杂援悦葬灶糟藻则鄄则藻造葬贼藻凿枣葬贼蚤早怎藻 [ 允 ] 援粤糟贼葬悦造蚤灶月藻造赠, 圆园员园, 远缘 ( 远 ): 猿苑愿鄄猿愿缘援 [ 员猿 ] 酝糟郧藻葬糟澡赠酝允援郧酝鄄悦杂云 : 栽澡藻泽藻糟则藻贼憎藻葬责燥灶蚤灶贼澡藻栽 ( 匀 ) 员苑葬则泽藻鄄灶葬造 [ 允 ] 援晕葬贼陨皂皂怎灶燥造, 圆园员员, 员圆 ( 远 ): 缘圆员鄄缘圆圆援 [ 员源 ] 宰蚤造造蚤葬皂泽孕, 郧葬造蚤责藻葬怎允援郧酝鄄悦杂云遭葬泽藻凿枣怎泽蚤燥灶糟赠贼燥噪蚤灶藻泽葬泽造蚤早葬灶凿泽枣燥则蚤皂皂怎灶藻皂燥凿怎造葬贼蚤燥灶 [ 允 ] 援允陨皂皂怎灶燥造, 圆园员员, 员愿远 ( 员园 ): 缘缘圆苑鄄缘缘猿圆援 [ 员缘 ] 杂澡葬则皂葬酝, 粤枣则蚤灶云, 杂葬贼蚤允粤, 藻贼葬造援杂贼则燥皂葬造鄄凿藻则蚤增藻凿枣葬糟贼燥则鄄员辕悦载鄄悦砸源泽蚤早灶葬造 : 陨灶凿蚤泽责藻灶泽葬遭造藻则燥造藻蚤灶澡燥皂蚤灶早葬灶凿藻灶早则葬枣贼皂藻灶贼燥枣澡藻皂鄄葬贼燥责燥蚤藻贼蚤糟泽贼藻皂糟藻造造泽蚤灶遭燥灶藻皂葬则则燥憎 [ 允 ] 援杂贼藻皂悦藻造造泽, 圆园员员, 圆园 ( 远 ): 怨猿猿鄄怨源远援 [ 员远 ] 在澡燥怎再, 在澡葬灶早匀云, 蕴蚤载蕴, 藻贼葬造援陨灶糟则藻葬泽藻凿泽贼则燥皂葬造鄄糟藻造造鄄凿藻则蚤增藻凿枣葬糟贼燥则员藻灶澡葬灶糟藻泽贼澡藻澡燥皂蚤灶早燥枣遭燥灶藻皂葬则则燥憎凿藻则蚤增藻凿皂藻泽藻灶糟澡赠皂葬造泽贼藻皂糟藻造造泽蚤灶凿蚤造葬贼藻凿糟葬则凿蚤燥皂赠燥责葬贼澡赠蚤灶则葬贼泽 [ 允 ] 援悦澡蚤灶酝藻凿允 ( 耘灶鄄早造 ), 圆园员园, 员圆猿 ( 圆圆 ): 猿圆愿圆鄄猿圆愿苑援 [ 员苑 ] 粤灶贼燥灶泽泽燥灶月, 阅藻造赠泽孕, 阅藻糟澡葬增葬灶灶藻灾, 藻贼葬造援陨灶增蚤增燥责则燥糟藻泽泽蚤灶早燥枣悦载悦蕴员圆 α 辕杂阅云鄄员 α 葬枣贼藻则蚤灶贼则葬增藻灶燥怎泽葬灶凿泽怎遭糟怎贼葬灶藻燥怎泽葬凿皂蚤灶蚤泽贼则葬鄄贼蚤燥灶贼燥皂蚤糟藻 [ 允 ] 援孕则燥贼藻燥皂蚤糟藻泽, 圆园员园, 员园 ( 圆源 ): 源猿源圆鄄源猿缘员援 [ 员愿 ] 陨陨澡葬灶粤, 晕葬遭燥噪蚤噪澡粤, 酝葬躁酝, 藻贼葬造援悦载悦蕴员圆辕杂阅云鄄员燥增藻则藻曾责则藻泽鄄泽蚤燥灶蚤灶澡怎皂葬灶蚤灶泽怎造蚤灶燥皂葬泽葬灶凿蚤贼泽遭蚤燥造燥早蚤糟葬造则藻造藻增葬灶糟藻 [ 允 ] 援酝燥造悦藻造造耘灶凿燥糟则蚤灶燥造, 圆园园怨, 圆怨愿 ( 员 ): 员鄄员园援 [ 员怨 ] 孕藻贼贼赠允酝, 蕴藻灶燥曾悦悦, 宰藻蚤泽泽阅允, 藻贼葬造援悦则燥泽泽贼葬造噪遭藻贼憎藻藻灶悦载悦砸源辕泽贼则燥皂葬造凿藻则蚤增藻凿枣葬糟贼燥则鄄员葬灶凿灾蕴粤鄄源辕灾悦粤酝鄄员责葬贼澡憎葬赠泽则藻早怎造葬贼藻泽灶藻怎贼则燥责澡蚤造则藻贼藻灶贼蚤燥灶蚤灶贼澡藻遭燥灶藻皂葬则则燥憎 [ 允 ] 援允陨皂皂怎灶燥造, 圆园园怨, 员愿圆 ( 员 ): 远园源鄄远员圆援 [ 圆园 ] 运葬贼泽怎皂燥贼燥栽砸, 阅怎凿葬允, 运蚤皂粤, 藻贼葬造援郧则葬灶怎造燥糟赠贼藻辕皂葬糟则燥责澡葬早藻糟燥造燥灶赠鄄泽贼蚤皂怎造葬贼蚤灶早枣葬糟贼燥则葬灶凿葬糟糟藻泽泽燥则赠糟藻造造泽皂燥凿怎造葬贼藻则葬凿蚤燥责则燥贼藻糟鄄贼蚤燥灶遭赠责怎则蚤枣蚤藻凿澡藻皂葬贼燥责燥蚤藻贼蚤糟糟藻造造泽 [ 允 ] 援允耘曾责酝藻凿, 圆园园缘, 圆园员 ( 远 ): 愿缘猿鄄愿缘愿援 [ 圆员 ] 孕燥扎灶葬灶泽噪赠酝悦, 韵造泽扎葬噪陨栽, 云燥曾葬造造砸, 藻贼葬造援粤糟贼蚤增藻皂燥增藻皂藻灶贼燥枣栽糟藻造造泽葬憎葬赠枣则燥皂葬糟澡藻皂燥噪蚤灶藻 [ 允 ] 援晕葬贼酝藻凿, 圆园园园, 远 ( 缘 ): 缘源猿鄄缘源愿援 [ 圆圆 ] 允葬灶噪燥憎泽噪蚤运, 运怎糟蚤葬酝, 宰赠泽燥糟扎赠灶泽噪蚤酝, 藻贼葬造援月燥贼澡澡藻责葬贼燥糟赠贼藻早则燥憎贼澡枣葬糟贼燥则 ( 匀郧云 ) 葬灶凿泽贼则燥皂葬造鄄凿藻则蚤增藻凿枣葬糟贼燥则鄄员则藻早怎造葬贼藻贼澡藻皂藻鄄贼葬泽贼葬贼蚤糟遭藻澡葬增蚤燥则燥枣澡怎皂葬灶则澡葬遭凿燥皂赠燥泽葬则糟燥皂葬糟藻造造泽, 遭怎贼燥灶造赠匀郧云藻灶澡葬灶糟藻泽贼澡藻蚤则则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻贼燥则葬凿蚤燥糟澡藻皂燥贼澡藻则葬责赠 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园园猿, 远猿 ( 圆圆 ): 苑怨圆远鄄苑怨猿缘援 [ 收稿日期 ] 摇圆园员员原园源原员园 [ 修回日期 ] 摇圆园员员原园远原员园 [ 本文编辑 ] 摇王摇莹 檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿 更正声明 造燥憎垣摇摇本刊圆园员员年员愿卷第猿期刊登董龙宝 厉倩 徐根林 田振华 谭龙益等撰写的论文 喉鳞癌患者外周血悦阅源缘悦阅猿源 垣运阅砸内皮祖细胞的检测及临床意义, 由于多种原因的疏漏, 原第猿作者徐根林 ( 载哉郧藻灶鄄造蚤灶 ) 署名有误 现将第猿作者更正为徐林根 ( 载哉蕴蚤灶鄄早藻灶 ) 特此声明! 中国肿瘤生物治疗杂志 编辑部