中国肿瘤生物治疗杂志摇圆园园猿酝葬则 ; 员园 ( 员 ) 源猿 员援员摇 细胞系及腺病毒 栽匀悦鄄愿怨园愿细胞为天津市肿瘤医院肿瘤研究所建立的人高分化腺癌细胞系, 存在责缘猿等位基因缺失 ( 员苑孕员猿末端缺失 ); 匀栽鄄圆怨存在突变型责缘猿基因和蕴燥鄄增燥存在野生型责缘猿等位基因细胞引自浙江医

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1 源圆 中国肿瘤生物治疗杂志摇圆园园猿酝葬则 ; 员园 ( 员 ): 源圆耀耀耀耀耀源苑悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则 [ 文章编号 ] 摇员园园苑鄄猿愿缘载 ( 圆园园猿 ) 园员鄄园园源圆鄄园远 粤凿鄄憎贼责缘猿对责缘猿状态不同结直肠癌细胞生长的影响 阎摇昭, 李摇雯, 牛瑞芳, 史玉荣, 郝希山 ( 天津医科大学肿瘤医院, 天津摇猿园园园远园 ) [ 摘要 ] 目的 : 探索重组腺病毒介导的外源性野生型责缘猿糟阅晕粤 ( 粤凿鄄憎贼责缘猿 ) 对内源性责缘猿基因状态不同结直肠癌细胞的抑制作用是否存在差异, 研究责缘猿基因抑制肿瘤细胞增殖的机制 方法 : 采用酝栽栽法选择粤凿鄄憎贼责缘猿的最佳转染滴度, 分别感染内源性责缘猿基因缺失 突变和正常的猿种结直肠癌细胞株, 观察比较它们的生长抑制作用 结果 : 粤凿鄄憎贼责缘猿在员园园园酝韵陨时表现出最强的细胞抑制作用, 责缘猿缺失细胞株 ( 栽匀悦鄄愿怨园愿 ) 的抑制效应最明显, 猿种细胞转染后均发生郧园辕郧员期阻滞, 并对不同 责缘猿状态细胞郧圆鄄酝期具有不同的调控作用 结论 : 外源性野生型责缘猿糟阅晕粤导入可显著抑制结直肠癌细胞生长, 使细胞周期停滞于郧园辕郧员期 ; 同时对内源性责缘猿状态不同细胞的生长抑制强度和郧圆鄄酝期调控作用不同 [ 关键词 ] 摇基因治疗 ; 责缘猿基因 ; 腺病毒载体 ; 结直肠癌 垣 [ 中图分类号 ] 摇砸苑猿缘援猿源摇摇摇摇 [ 文献标识码 ] 摇粤 栽澡藻耘枣枣藻糟贼泽燥枣砸藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼粤凿藻灶燥增蚤则怎泽鄄酝藻凿蚤葬贼藻凿宰蚤造凿栽赠责藻责缘猿糟阅晕粤燥灶匀怎皂葬灶悦燥造燥则藻糟贼葬造悦葬灶糟藻则悦藻造造蕴蚤灶藻泽憎蚤贼澡阅蚤枣枣藻则藻灶贼责缘猿杂贼葬贼怎泽 再粤晕在澡葬燥, 蕴陨宰藻灶, 晕陨哉砸怎蚤鄄枣葬灶早, 杂匀陨再怎鄄则燥灶早, 匀粤韵载蚤鄄泽澡葬灶 ( 悦葬灶糟藻则匀燥泽责蚤贼葬造燥枣栽蚤葬灶躁蚤灶酝藻凿蚤糟葬造哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠, 栽蚤葬灶躁蚤灶猿园园园远园 ) [ 粤遭泽贼则葬糟贼 ] 摇韵遭躁藻糟贼蚤增藻 : 栽燥藻曾责造燥则藻贼澡藻蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶藻枣枣藻糟贼泽燥枣藻糟贼燥早藻灶蚤糟憎蚤造凿鄄贼赠责藻责缘猿糟阅晕粤 ( 粤凿鄄憎贼责缘猿 ) 燥灶糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬则鄄糟蚤灶燥皂葬糟藻造造造蚤灶藻泽憎蚤贼澡凿蚤枣枣藻则藻灶贼责缘猿早藻灶藻泽贼葬贼怎泽葬灶凿泽藻葬则糟澡枣燥则贼澡藻则燥造藻燥枣憎蚤造凿贼赠责藻责缘猿贼怎皂燥则泽怎责责则藻泽泽燥则早藻灶藻蚤灶燥糟糟怎则则藻灶糟葬灶凿责则燥早则藻泽泽燥枣皂葬造蚤早灶葬灶贼贼怎皂燥则援酝藻贼澡燥凿泽 : 酝栽栽责则燥糟藻泽泽憎葬泽贼葬噪藻灶贼燥糟澡燥燥泽藻燥责贼蚤皂葬造贼则葬灶泽枣藻糟贼蚤燥灶贼蚤贼则藻援栽澡则藻藻噪蚤灶凿泽燥枣糟藻造造造蚤灶藻泽 ( 责缘猿早藻灶藻凿藻造藻贼蚤燥灶, 皂怎贼葬贼蚤燥灶葬灶凿灶燥皂葬造 ) 憎藻则藻贼则葬灶泽枣藻则则藻凿遭赠粤凿鄄憎贼责缘猿蚤灶燥责贼蚤皂葬造贼蚤贼则藻援栽澡藻蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶藻枣枣藻糟贼泽燥枣贼澡藻泽藻糟藻造造造蚤灶藻泽憎藻则藻燥遭泽藻则增藻凿葬灶凿糟燥皂责葬则藻凿援砸藻泽怎造贼泽 : 栽澡藻遭藻泽贼贼蚤贼则藻蚤泽员园园园酝韵陨葬灶凿责缘猿早藻灶藻凿藻造藻贼蚤燥灶糟藻造造造蚤灶藻 ( 栽匀悦鄄愿怨园愿 ) 泽澡藻憎贼澡藻澡蚤早澡藻泽贼泽藻灶泽蚤贼蚤增蚤贼赠援郧员鄄杂贼则葬灶泽蚤贼蚤燥灶责藻则蚤燥凿遭造燥糟噪蚤灶早藻枣枣藻糟贼泽燥糟糟怎则则藻凿蚤灶葬造造糟藻造造造蚤灶藻泽葬灶凿郧圆鄄酝责澡葬泽藻则藻早怎造葬贼蚤燥灶藻枣枣藻糟贼泽憎藻则藻灶燥贼糟燥蚤灶糟蚤凿藻灶糟藻蚤灶贼澡则藻藻糟燥造燥则藻糟贼葬造糟藻造造造蚤灶藻泽援悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶泽 : 砸藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼葬凿藻灶燥增蚤则怎泽鄄皂藻凿蚤葬贼藻凿憎蚤造凿贼赠责藻责缘猿早藻灶藻燥遭泽藻则增葬遭造赠蚤灶澡蚤遭蚤贼藻凿糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬则糟蚤灶燥皂葬糟藻造造造蚤灶藻泽早则燥憎贼澡葬灶凿责则燥造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶, 遭造燥糟噪藻凿糟藻造造糟赠鄄糟造藻蚤灶郧园辕郧员责澡葬泽藻葬灶凿凿蚤泽责造葬赠藻凿燥遭增蚤燥怎泽凿蚤枣枣藻则藻灶贼葬糟贼蚤燥灶泽燥灶郧圆鄄酝责澡葬泽藻葬皂燥灶早糟藻造造造蚤灶藻泽憎蚤贼澡凿蚤枣枣藻则藻灶贼责缘猿泽贼葬贼怎泽援 [ 运藻赠憎燥则凿泽 ] 早藻灶藻贼澡藻则葬责赠 ; 责缘猿早藻灶藻 ; 葬凿藻灶燥增蚤则怎泽增藻糟贼燥则 ; 糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬则糟蚤灶燥皂葬 摇 人们对肿瘤发病机制的认知经历了一个漫长的过程, 而正是通过对结肠癌的研究使人们认识到肿瘤的发生是一个多因素 多阶段 累积渐进的过程 作为肿瘤发生发展的一个环节, 责缘猿基因发挥着重要的作用, 它是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因, 人类约缘园豫以上的肿瘤与责缘猿基因变化有关 含野生型 责缘猿的细胞, 在阅晕粤受损时可使细胞停止于郧员期, 在 阅晕粤开始合成前对损伤进行修复 ; 而缺乏野生型责缘猿 功能的细胞则不能停止在郧员期以修复损伤的阅晕粤, 突变型责缘猿则具有癌基因的特性, 可促进正常细胞恶性转化 另一方面, 一些含有内源性野生性责缘猿等位基因的肿瘤细胞 ( 如乳腺癌细胞系酝悦云鄄苑 ), 显然存在着 非责缘猿途径的肿瘤发生机制, 提醒我们责缘猿基因缺失和突变并非所有肿瘤发生的必要条件 本研究试图选择不同责缘猿状态 ( 正常 缺失和突变 ) 的结直肠癌细胞株, 通过导入外源性野生型责缘猿基因, 比较以责缘猿为靶点的基因治疗对它们的影响是否存在差异, 进而探讨外源性责缘猿导入对肿瘤细胞生长抑制作用与肿瘤细胞内源性责缘猿状态之间的关系, 为个体化基因靶向治疗提供实验依据 员摇材料与方法 [ 作者简介 ] 摇阎昭 ( 员怨苑猿鄄 ), 男, 硕士, 主管药师, 主要从事肿瘤临摇摇摇摇床药理研究工作

2 中国肿瘤生物治疗杂志摇圆园园猿酝葬则 ; 员园 ( 员 ) 源猿 员援员摇 细胞系及腺病毒 栽匀悦鄄愿怨园愿细胞为天津市肿瘤医院肿瘤研究所建立的人高分化腺癌细胞系, 存在责缘猿等位基因缺失 ( 员苑孕员猿末端缺失 ); 匀栽鄄圆怨存在突变型责缘猿基因和蕴燥鄄增燥存在野生型责缘猿等位基因细胞引自浙江医科大学肿 [ 员鄄猿瘤研究所 ] 摇摇重组腺病毒介导的野生型责缘猿糟阅晕粤 ( 粤凿鄄憎贼责缘猿 ) 由深圳赛百诺生物技术有限公司惠赠, 含野生型 责缘猿糟阅晕粤 ( 员援愿运月 ) 复制缺陷的缘型腺病毒空载体 ( 粤凿缘鄄造葬糟在 ): 由天津医科大学微生物教研室惠赠 员援圆摇 主要试剂 阅晕粤提取试剂盒购自美国韵皂藻早葬月蚤燥鄄贼藻噪公司, 孕悦砸试剂盒购自宝生物工程 ( 大连 ) 有限公司, 腺病毒载体阅晕粤引物 ( 上游 : 缘忆鄄栽悦郧栽栽栽悦栽悦粤郧悦粤郧悦栽郧栽栽郧鄄猿忆, 下游 : 缘忆鄄悦粤栽悦栽郧粤粤悦栽悦粤粤粤郧悦郧栽郧郧鄄猿忆 ) 由宝生物工程 ( 大连 ) 有限公司合成鼠抗人孕缘猿蛋白单抗免疫组化染色试剂盒购自北京中山生物技术有限公司 员援猿摇定 粤凿鄄憎贼责缘猿转染猿种结直肠癌细胞最佳滴度的确 猿个细胞株均取对数生长期细胞, 园援圆缘豫胰酶消缘化, 配成员伊员园细胞辕皂造, 分别取员园园 μ 造辕孔, 加入怨远孔板中, 置于缘豫悦韵圆培养箱中培养圆源澡 待细胞贴壁后, 分别以员, 员园, 员园园, 员园园园和员园园园园酝韵陨 ( 皂怎造贼蚤责造蚤糟蚤贼蚤藻泽燥枣蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶 ) 的粤凿鄄憎贼责缘猿和粤凿鄄蕴葬糟在感染细胞, 并以非感染细胞作对照 每圆源小时取猿孔细胞, 酝栽栽法检测, 计算抑制率, 确定半数抑制浓度和最大抑制浓度 员援源摇转染细胞中外源性腺病毒载体阅晕粤的检测收集以最佳滴度粤凿鄄憎贼责缘猿转染的猿种细胞及非苑转染细胞 ( 员园细胞 ), 提取阅晕粤 ( 参照阅晕粤提取试剂盒说明 ) 孕悦砸扩增 ( 参照孕悦砸试剂盒说明 ), 反应结束后, 于圆豫琼脂糖凝胶电泳进行结果检测 员援缘摇 免疫细胞化学法检测外源性孕缘猿蛋白表达 收集以最佳滴度粤凿鄄憎贼责缘猿转染的猿种细胞, 爬片, 固定 以非转染细胞作对照, 按免疫组化染色试剂盒说明书染色, 用孕月杂代替鼠抗人责缘猿单抗工作液作为阴性对照 镜下计阳性细胞数, 计算孕缘猿蛋白阳性表达率 员援远摇转染粤凿鄄憎贼责缘猿后猿个结直肠癌细胞形态学变化以最佳转染滴度粤凿鄄憎贼责缘猿转染猿种细胞后苑圆澡 观察活细胞形态和固定染色细胞形态, 并与非感染细胞形态做比较 员援苑摇生长曲线每种细胞设空白对照 粤凿缘鄄造葬糟在转染和粤凿鄄憎贼责缘猿 源转染猿组, 分别取对数生长期细胞, 圆伊员园细胞辕孔接种于无菌圆源孔板内, 置于缘豫悦韵圆, 猿苑益培养箱中培养 圆源澡, 以最佳感染强度加入粤凿缘鄄造葬糟在和粤凿鄄憎贼责缘猿, 圆源澡 计数员次, 每次计数猿孔, 连续计数缘凿, 绘制生长曲线 员援愿摇集落形成实验每种细胞设空腺病毒 ( 粤凿缘鄄造葬糟在 ) 转染和粤凿鄄憎贼责缘猿 转染圆组, 分别取对数生长期细胞, 员园园园个细胞辕孔接种于无菌远孔板内, 置于缘豫悦韵圆, 猿苑益培养箱中培养 圆源澡, 待细胞贴壁后, 用空腺病毒转染和粤凿鄄憎贼责缘猿, 以最佳感染强度的效靶比感染细胞, 培养圆源澡后换液, 培养员园耀耀耀耀耀员源凿, 郧蚤藻皂泽葬染色, 韵蕴再酝孕哉杂陨载苑园型倒置显微镜观察 照相, 计算集落形成率 员援怨摇流式细胞仪检测细胞周期变化以最佳感染强度的粤凿憎贼责缘猿感染细胞, 培养苑圆澡 远后收集细胞 ( 员耀耀耀耀耀缘 ) 伊员园个, 用员皂造孕陨染液, 源益避光, 染色猿园皂蚤灶 ; 流式细胞仪检测分析 圆摇结摇果 圆援员摇 酝栽栽法检测粤凿鄄憎贼责缘猿最佳转染滴度 猿种细胞生长抑制程度随感染强度增大而增强 ( 见图员 ), 同时未转染组细胞数在苑圆澡达到最大值然 云蚤早援员 图员不同感染滴度粤凿鄄憎贼责缘猿对猿种结直肠癌细胞生长的抑制作用陨灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶藻枣枣藻糟贼泽燥枣凿蚤枣枣藻则藻灶贼粤凿鄄憎贼责缘猿贼蚤贼则藻泽燥灶贼澡则藻藻糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则糟藻造造造蚤灶藻泽粤 : 栽匀悦鄄愿怨园愿 ; 月 : 蕴燥增燥 ; 悦 : 匀栽鄄圆怨

3 源源 中国肿瘤生物治疗杂志摇圆园园猿酝葬则 ; 员园 ( 员 ) 后逐渐渐少 以转染苑圆澡的时间点计算, 猿种细胞的粤凿鄄憎贼责缘猿转染强度在员园酝韵陨时, 可达半数最大抑制 ; 在员园园园和员园园园园酝韵陨时, 抑制程度不再明显随感染滴度增加, 最佳感染强度应为员园园园酝韵陨 圆援圆摇孕悦砸法检测转染细胞中腺病毒载体阅晕粤提取转染粤凿鄄憎贼责缘猿 ( 员园园园酝韵陨 ) 后猿种细胞的阅晕粤并以未转染组细胞阅晕粤作对照, 经孕悦砸扩增腺病毒载体阅晕粤特定片段, 圆豫琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物, 结果转染组猿种细胞均在愿远园遭责处存在阅晕粤片段条带, 而未转染组没有出现阅晕粤条带 ( 见图圆 ), 证明腺病毒介导的野生型责缘猿基因确实转入猿种细胞的细胞核内 圆援猿摇免疫细胞化学法检测外源性责缘猿基因表达栽匀悦鄄愿怨园愿细胞转染粤凿鄄憎贼责缘猿后细胞核内孕缘猿蛋白表达由转染前阴性转为阳性 ( 图猿粤鄄月 ), 阳性率圆圆郾怨豫, 细胞浆内无染色, 表明野生型责缘猿基因成功转入细胞核并有蛋白表达 蕴燥增燥细胞和匀栽鄄圆怨细胞转染后细胞核由转染前黄褐色变成棕褐色 ( 图猿悦鄄云 ), 提示转染后细胞核孕缘猿蛋白表达强度较转染前提高, 表达阳性率分别为缘缘援员豫和圆愿援园豫 圆援源摇粤凿鄄憎贼责缘猿对猿种细胞增殖生长的影响圆援源援员摇细胞形态观察固定细胞可见猿种细胞转染粤凿鄄憎贼责缘猿后均发生变圆 细胞膜不完整, 细胞生长受到显著抑制 ( 图猿 ) 相差显微镜下观察活细胞形态可见, 正常生长的 猿种细胞, 排列紧密, 胞浆丰富, 核膜 核仁轮廓清晰, 生长状态良好 粤凿憎贼责缘猿转染后猿种细胞排列松散, 细胞之间空隙加大, 形态变得不规则, 有的细胞变圆 相互融合而失去原有特点, 但细胞膜完整 图圆粤凿鄄憎贼责缘猿转染后猿种细胞核内腺病毒载体阅晕粤检测 云蚤早援圆阅藻贼藻糟贼蚤燥灶燥枣葬凿藻灶燥增蚤则怎泽阅晕粤蚤灶贼澡则藻藻贼则葬灶泽枣藻糟贼藻凿糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则糟藻造造造蚤灶藻泽酝 : 酝葬则噪藻则 ; 员 : 哉灶贼则葬灶泽枣藻糟贼藻凿栽匀悦鄄愿怨园愿 ; 圆 : 哉灶贼则葬灶泽枣藻糟贼藻凿蕴燥增燥 ; 猿 : 哉灶贼则葬灶泽枣藻糟贼藻凿匀栽鄄圆怨 ; 源 : 栽则葬灶泽枣藻糟贼藻凿栽匀悦鄄愿怨园愿 ; 缘 : 栽则葬灶泽枣藻糟贼藻凿蕴燥增燥 ; 远 : 栽则葬灶泽枣藻糟贼藻凿匀栽鄄圆怨 图猿摇转染粤凿鄄憎贼责缘猿前后猿种细胞孕缘猿蛋白表达云蚤早援猿摇阅藻贼藻糟贼蚤燥灶燥枣孕缘猿责则燥贼藻蚤灶藻曾责则藻泽泽蚤燥灶蚤灶贼则葬灶泽枣藻糟贼藻凿葬灶凿怎灶贼则葬灶泽枣藻糟贼藻凿糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则糟藻造造造蚤灶藻泽粤 : 栽匀悦鄄愿怨园愿 ( 怎灶贼则葬灶泽枣藻糟贼藻凿 ); 月 : 栽匀悦鄄愿怨园愿 ( 贼则葬灶泽枣藻糟贼藻凿 ); 悦 : 蕴燥增燥 ( 怎灶贼则葬灶泽枣藻糟贼藻凿 ); 阅 : 蕴燥增燥 ( 贼则葬灶泽枣藻糟贼藻凿 ); 耘 : 匀栽鄄圆怨 ( 怎灶贼则葬灶泽枣藻糟贼藻凿 ); 云 : 匀栽鄄圆怨 ( 贼则葬灶泽枣藻糟贼藻凿 )

4 中国肿瘤生物治疗杂志摇圆园园猿酝葬则 ; 员园 ( 员 ) 源缘 圆援源援圆摇生长曲线猿种细胞未转染组均在怨远孔板中培养苑圆澡左右达到最大细胞数, 而后细胞数逐渐减少, 其中栽匀悦鄄愿怨园愿细胞生长最旺盛 ; 粤凿鄄蕴葬糟在转染组细胞与空白对照组细胞生长曲线的变化趋势基本一致, 没有明显的细胞抑制作用 ; 粤凿鄄憎贼责缘猿转染组的生长曲线均从起始点开始下落直至最低点, 表现出强烈得抑制作用, 其中又以栽匀悦鄄愿怨园愿细胞表现得最为敏感 ( 见图源 ) 转染 苑圆澡猿种细胞生长抑制率分别为 : 栽匀悦鄄愿怨园愿愿怨援园怨豫, 圆蕴燥增燥远缘援圆圆豫, 匀栽鄄圆怨远缘援怨员豫 经 Χ 检验三者间存在显著性差异 ( 孕越园援园园员,α 越园援园缘 ), 按月燥灶枣藻则则燥灶蚤校正方法进行两两比较, 表明栽匀悦鄄愿怨园愿细胞生长抑制率高于蕴燥增燥和匀栽鄄圆怨细胞 ( 孕栽 : 蕴越园援园园员, 孕栽 : 匀越园援园园员,α 越园援园员圆缘 ), 而后两者之间抑制率无统计学差异 ( 孕蕴 : 匀越园援缘源源,α 越园援园员圆缘 ) 图源 粤凿鄄憎贼责缘猿和粤凿鄄蕴葬糟在在员园园园酝韵陨感染强度时对猿种细胞的生长抑制曲线 云蚤早援源 栽澡藻早则燥憎贼澡泽怎责责则藻泽泽蚤燥灶糟怎则增藻泽燥枣贼澡则藻藻糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则糟藻造造造蚤灶藻泽贼则葬灶泽枣藻糟贼藻凿遭赠 粤凿鄄憎贼责缘猿葬灶凿粤凿鄄蕴葬糟在蚤灶员园园园酝韵陨 圆援源援猿摇集落形成率猿种细胞经粤凿鄄蕴葬糟在和粤凿鄄憎贼责缘猿转染后集落形成试验结果见表员, 这些结果说明粤凿鄄蕴葬糟在对猿种细胞的 细胞活力和增殖能力没有明显影响, 粤凿鄄憎贼责缘猿转染则抑制了这猿种结直肠癌细胞的活力和增殖能力, 并以 栽匀悦鄄愿怨园愿细胞最为敏感 栽葬遭援员摇 表员 粤凿鄄憎贼责缘猿和粤凿鄄蕴葬糟在转染栽匀悦鄄愿怨园愿, 蕴燥增燥及匀栽鄄圆怨细胞集落形成率分析 悦燥造燥灶赠枣燥则皂蚤灶早藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣贼澡则藻藻糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则糟藻造造造蚤灶藻泽贼则葬灶泽枣藻糟贼藻凿遭赠粤凿鄄憎贼责缘猿葬灶凿粤凿鄄蕴葬糟在 悦藻造造造蚤灶藻泽郧则燥怎责泽皂藻葬灶泽 泽贼葬灶凿葬则凿凿藻增蚤葬贼蚤燥灶 糟燥造燥灶赠枣燥则皂蚤灶早藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠 ( 豫 ) Χ 圆孕 栽匀悦鄄愿怨园愿 粤凿鄄蕴葬糟在 圆圆苑援苑愿 员园援猿员 圆圆援愿 圆缘苑援猿远远 园援园园员 粤凿鄄憎贼责缘猿 ( 粤 ) 园援园园 园援园园 园援园 蕴燥增燥 粤凿鄄蕴葬糟在 员猿愿援园园 员愿援缘园 员猿援愿 缘苑援苑猿员 园援园园员 粤凿鄄憎贼责缘猿 ( 月 ) 源员援圆圆 源援缘园 源援员 匀栽鄄圆怨 粤凿鄄蕴葬糟在 员缘圆援猿猿 员圆援怨园 员缘援圆 源苑援园员猿 园援园园员 粤凿鄄憎贼责缘猿 ( 悦 ) 缘愿援园园 员员援园园 缘援愿 粤, 月, 悦 缘缘援苑员苑 园援园园员 葬粤葬灶凿月 源员援愿缘愿 园援园园员 遭粤葬灶凿悦 缘怨援苑园苑 园援园园员 糟月葬灶凿悦 猿援园苑员 园援园愿园 摇 摇 圆葬, 遭, 糟 : 月藻灶枣藻则则燥灶蚤糟燥则则藻糟贼藻凿 Χ(α 越园援园员圆缘 ) 圆援缘摇细胞周期分析猿种细胞未转染组和转染粤凿鄄憎贼责缘猿组的细胞周期变化情况见表圆, 结果显示猿种结直肠癌细胞均具有典 型的恶性肿瘤的生物学特性, 且栽匀悦鄄愿怨园愿细胞在猿种细胞中恶性度最高 转染粤凿鄄憎贼责缘猿后, 猿种结直肠癌细胞郧园辕郧员期比例均高于非转染组 ( 孕约园援园园员 ), 其中

5 源远 中国肿瘤生物治疗杂志摇圆园园猿酝葬则 ; 员园 ( 员 ) 蕴燥增燥和栽匀悦鄄愿怨园愿细胞更为明显 另外, 猿种细胞转染 粤凿鄄憎贼责缘猿后, 杂期和郧圆鄄酝期比例也发生变化, 栽匀悦鄄愿怨园愿细胞杂期比例明显升高 郧圆鄄酝期比例则显著下 降 ; 蕴燥增燥细胞则相反, 表现为郧圆鄄酝期比例的升高和杂 期比例的显著下降 ; 匀栽鄄圆怨细胞则介于前两者之间, 表现为郧圆鄄酝期比例略有下降, 而杂期比例变化不明显 栽葬遭援圆摇 表圆摇 粤凿鄄憎贼责缘猿转染和非转染的栽匀悦鄄愿怨园愿, 蕴燥增燥及匀栽鄄圆怨细胞周期分析 悦藻造造糟赠糟造藻葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣粤凿鄄憎贼责缘猿贼则葬灶泽枣藻糟贼藻凿葬灶凿怎灶贼则葬灶泽枣藻糟贼藻凿糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则糟藻造造造蚤灶藻泽 阅蚤泽贼则蚤遭怎贼蚤燥灶则葬贼藻蚤灶糟藻造造糟赠糟造藻 ( 豫 ) 悦藻造造糟赠糟造藻 郧则燥怎责泽 晕燥皂葬造遭造燥燥凿糟藻造造泽 栽匀悦鄄愿怨园愿 蕴燥增燥 匀栽鄄圆怨 郧园辕郧员 怎灶贼则葬灶泽枣藻糟贼藻凿 怨苑援怨 猿怨援愿 源怨援缘 源愿援猿 粤凿鄄憎贼责缘猿 原 源苑援怨 远猿援缘 缘员援苑 杂 怎灶贼则葬灶泽枣藻糟贼藻凿 园援圆 圆愿援员 猿怨援苑 源员援愿 粤凿鄄憎贼责缘猿 原 源愿援园 员苑援愿 源员援源 郧圆鄄酝 怎灶贼则葬灶泽枣藻糟贼藻凿 员援愿 猿圆援员 员园援苑 怨援怨 粤凿鄄憎贼责缘猿 原 源援员 员愿援苑 远援怨 猿摇讨论 癌基因和抑癌基因的发现及其功能的逐步明确是恶性肿瘤研究进程中一个重要的里程碑, 至今已有一百多种癌基因和二十多种抑癌基因被鉴定或克隆, 但人们对这些基因与肿瘤发生发展关系的认识仍很局限, 因此深入研究众多肿瘤相关基因在肿瘤发生发展中的相互关系和角色显得尤为重要 我们通过研究比较外源性野生型责缘猿基因的导入对不同责缘猿状态的结直肠癌细胞生长抑制 细胞周期调控等方面的作用, 初步探讨对于责缘猿途径或非责缘猿途径恶性转化的结直肠癌细胞给予责缘猿基因靶向性治疗的意义 野生型责缘猿基因的主要生物学功能包括 :1 抑制 [ 源鄄缘细胞分化与增殖 ] [ 远 ;2 诱导细胞凋亡 ] 在抑制肿瘤细胞分化 增殖方面责缘猿基因可以通过两条途径发挥作用 一条途径是, 在阅晕粤遭到破坏时, 憎贼鄄责缘猿可与细胞核内特异的阅晕粤部位结合, 通过氨基酸的酸性激活区激活临近基因的启动子而促进其表达, 如可活化 宰粤云员辕悦陨孕员责圆员基因的转录, 其产物可抑制悦阅运 ( 细胞周期依赖性蛋白激酶 ) 活性, 使阅晕粤合成有关的基因不能 [ 苑表达, 阅晕粤合成终止, 细胞生长停止在郧员期 ] 另一条途径是, 不通过阅晕粤特异结合部位而直接对某些与细胞增殖有关基因的启动子起负调控作用, 从而抑制 [ 愿肿瘤细胞增殖 ] 我们在研究中发现粤凿鄄憎贼责缘猿转染猿种结直肠癌细胞并发挥细胞生长抑制作用的强度与转染滴度在一定范围内呈正相关, 并存在天花板效应, 一味增加粤凿鄄憎贼责缘猿的转染滴度并不能提高其对肿瘤细胞生长的抑制作用 同时, 猿种结直肠癌细胞具有不同的恶性增殖能力, 并在导入外源性憎贼鄄责缘猿糟阅晕粤后表现出不同的 受抑制程度 我们考虑 : 栽匀悦鄄愿怨园愿细胞责缘猿圆条等位基因缺, 孕缘猿蛋白不能合成, 从而完全失去内源性野生型责缘猿基因的功能, 使其表现出很强的恶性增殖能力 ; 当导入外源性野生型责缘猿基因后, 细胞内正常孕缘猿蛋白功能重新建立, 表现出对细胞恶性生长的显著抑制作用 匀栽鄄圆怨细胞存在责缘猿基因缘, 远外显子突变, 表达的突变蛋白结合阅晕粤特殊部位使激活邻近相关基因的功能丧失 ; 我们的实验中, 未转染组匀栽鄄圆怨细胞恶性生长程度低于栽匀悦鄄愿怨园愿细胞, 转染憎贼鄄责缘猿糟阅晕粤的 匀栽鄄圆怨细胞受抑制程度也不如栽匀悦鄄愿怨园愿细胞明显, 这可能为匀栽鄄圆怨细胞内源性憎贼鄄责缘猿尚存并受皂贼鄄责缘猿所拮抗, 以及外源性憎贼鄄责缘猿导入被内源性皂贼鄄责缘猿部分抵消的结果 蕴燥增燥细胞含有内源性野生型责缘猿等位基因, 孕缘猿蛋白表达阳性 ; 我们推测蕴燥增燥细胞恶性转化的机制至少存在两个可能 孕缘猿蛋白结合位点上的氨基酸发生突变或通过非责缘猿基因途径使细胞发生转 [ 怨 ] 化 悦葬泽藻赠等将野生型责缘猿基因转入酝悦云苑细胞 ( 含有内源性野生型责缘猿等位基因 ), 结果细胞的生长未能得到抑制, 其肿瘤生物学特性与未转染的细胞间也无明显差异 我们的实验结果则表明导入外源性憎贼鄄责缘猿 基因的蕴燥增燥细胞表现虽不如栽匀悦鄄愿怨园愿那样敏感, 但对其仍具有相当的抑制作用, 我们考虑在恶性肿瘤错综复杂的发生机理中责缘猿基因的突变并非所有肿瘤发生的必要条件, 但增加憎贼鄄责缘猿蛋白在肿瘤细胞内的表达量仍有可能抑制其增殖 另外, 从细胞周期分析结果中我们发现, 非转染组中栽匀悦鄄愿怨园愿细胞的杂期和郧圆鄄酝期细胞比例不同于另外圆种细胞, 前者郧圆鄄酝期比例高于杂期, 而后两者则相反, 表现为较低的郧圆鄄酝和较高的杂期比例 更为有趣的现象是, 转染粤凿鄄憎贼责缘猿后, 杂期和郧圆鄄酝

6 中国肿瘤生物治疗杂志摇圆园园猿酝葬则 ; 员园 ( 员 ) 源苑 期的比例在栽匀悦鄄愿怨园愿细胞和蕴燥增燥细胞间发生了完全相反的变化 : 栽匀悦鄄愿怨园愿细胞杂期比例提高而郧圆鄄酝 期比例下降, 蕴燥增燥细胞则正好相反 匀栽鄄圆怨细胞此时与非转染组比较则变化不大 我们推测这些现象与 猿种细胞内源性责缘猿状态有关 因此, 更广泛深入地探讨分子间相互作用和基因表达调控机制的工作显得尤为艰巨和必要 [ 参考文献 ] [ 员 ] 摇孕藻贼藻则泽郧允, 增葬灶栽则蚤藻泽贼月, 月葬糟噪怎泽匀匀, 藻贼葬造援酝燥造藻糟怎造葬则凿燥憎灶泽贼则藻葬皂藻增藻灶贼泽葬灶凿蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶燥枣贼澡赠皂蚤凿赠造葬贼藻泽赠灶贼澡葬泽藻蚤灶皂怎贼葬灶贼葬灶凿憎蚤造凿鄄贼赠责藻责缘猿糟燥造燥灶糟葬灶糟藻则糟藻造造造蚤灶藻泽葬枣贼藻则贼则藻葬贼皂藻灶贼憎蚤贼澡缘鄄枣造怎燥则燥怎则葬糟蚤造葬灶凿贼澡藻贼澡赠皂蚤凿赠造葬贼藻泽赠灶贼澡葬泽藻蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则则葬造贼蚤贼则藻曾藻凿 [ 允 ] 援耘怎则允悦葬灶糟鄄藻则, 圆园园园, 猿远 ( 苑 ): 怨员远鄄怨圆源援 [ 圆 ] 摇杂澡葬燥砸郧, 悦葬燥悦载, 晕蚤藻增藻泽鄄晕藻蚤则葬, 藻贼葬造援粤糟贼蚤增葬贼蚤燥灶燥枣贼澡藻云葬泽责葬贼澡憎葬赠蚤灶凿藻责藻灶凿藻灶贼造赠燥枣云葬泽造蚤早葬灶凿凿怎则蚤灶早葬责燥责贼燥泽蚤泽蚤灶凿怎糟藻凿遭赠糟葬皂责贼燥贼澡藻糟蚤灶蚤灶责缘猿皂怎贼葬灶贼澡怎皂葬灶糟燥造燥灶糟葬则糟蚤灶燥皂葬糟藻造造泽 [ 允 ] 援韵灶鄄糟燥早藻灶藻, 圆园园员, 圆园 ( 员缘 ): 员愿缘圆鄄员愿缘怨援 [ 猿 ] 摇杂糟澡怎皂葬糟澡藻则哉, 粤凿葬皂耘, 云藻造凿澡葬怎泽杂, 藻贼葬造援悦藻造造凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶葬灶凿糟澡藻皂燥贼澡藻则葬责赠蚤灶枣造怎藻灶糟藻责缘猿葬灶凿酝凿皂圆蚤皂皂怎灶燥则藻葬糟贼蚤增蚤贼赠蚤灶澡怎皂葬灶匀栽圆怨糟燥造燥灶糟葬灶糟藻则糟藻造造泽早则燥憎灶蚤灶泽糟蚤凿皂蚤糟藻 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则蕴藻贼贼, 圆园园员, 员远远 ( 圆 ): 圆员缘鄄圆员 [ 源 ] 摇匀怎灶贼藻则栽援月则葬噪蚤灶早贼澡藻糟赠糟造藻 [ 允 ] 援悦藻造造, 员怨怨猿, 苑缘 : 愿猿怨鄄愿源员援 [ 缘 ] 摇张克强, 杨靖清, 侯春梅, 等援责缘猿抗原肽及月苑重组痘苗病毒抗肿瘤的研究 [ 允 ] 援中国肿瘤生物治疗杂志, 圆园园园, 苑 ( 源 ): 圆远员鄄圆远源援 [ 远 ] 摇悦造葬则噪藻粤砸, 砸怎则凿蚤藻悦粤, 匀葬则则蚤泽燥灶阅允, 藻贼葬造援栽澡赠皂燥糟赠贼藻葬责燥责贼燥泽蚤泽蚤灶凿怎糟藻凿遭赠责缘猿鄄凿藻责藻灶凿藻灶贼葬灶凿蚤灶凿藻责藻灶凿藻灶贼责葬贼澡憎葬赠泽 [ 允 ] 援晕葬鄄贼怎则藻, 员怨怨猿, 猿远圆 ( 远源圆猿 ): 愿源怨鄄愿缘圆援 [ 苑 ] 摇耘造鄄阅藻蚤则赠宰杂, 栽燥噪蚤灶燥栽, 灾藻造糟怎造藻泽糟怎灾耘, 藻贼葬造援宰粤云员, 葬责燥贼藻灶鄄贼蚤葬造皂藻凿蚤葬贼燥则燥枣责缘猿贼怎皂燥则泽怎责责则藻泽泽蚤燥灶 [ 允 ] 援悦藻造造, 员怨怨猿, 苑缘 ( 源 ): 愿员苑鄄愿圆缘援 [ 愿 ] 摇酝藻则糟藻则宰耘援悦澡藻糟噪蚤灶早燥灶贼澡藻糟藻造造糟赠糟造藻 [ 允 ] 援允悦藻造造月蚤燥糟澡藻皂, 员怨怨愿, 猿园鄄猿员 : 缘园鄄缘源 ( 杂怎责责造 ) 援 [ 怨 ] 摇悦葬泽藻赠郧, 蕴燥鄄再匀泽怎糟澡酝, 蕴燥责藻扎酝耘, 藻贼葬造援郧则燥憎贼澡泽怎责责则藻泽泽蚤燥灶燥枣澡怎皂葬灶遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则糟藻造造泽遭赠贼澡藻蚤灶贼则燥凿怎糟贼蚤燥灶燥枣憎蚤造凿鄄贼赠责藻责缘猿早藻灶藻援韵灶糟燥早藻灶藻, 员怨怨员, 远 ( 员园 ): 员苑怨员鄄员苑怨苑 [ 收稿日期 ] 摇圆园园圆原园愿原圆缘 [ 修回日期 ] 摇圆园园圆原员园原猿园 檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿 圆园园猿年全国环境 基因与健康学术论坛第一轮征文通知 摇摇由中国环境诱变剂学会主办的第员员届学术会议 ( 环境 基因与健康学术论坛 ) 将于圆园园猿年员园月在四川省成都市 ( 具体时间 地点第二轮再通知 ) 召开 现将有关征文事宜通知如下 : 员援大会主题 : 环境 基因与健康圆援大会专题 :1 圆员世纪遗传病理学与疾病预防 ;2 基因组学与环境医学的发展 ;3 环境因素与肿瘤等疾病的交互作用 ; 4 系统生物学与癌变 畸变 突变 ;5 生物工程产品的安全评价 猿援征文要求来稿请按 癌变 畸变 突变 圆园园猿年第员期的 稿约 格式撰写, 字数控制在源园园园字以内, 需附猿园园耀耀耀耀耀源园园字的中 英摘要, 全文及摘要各一份 ; 或交缘园园耀耀耀耀耀愿园园字的大摘要一份 ; 首页加盖章位公章, 来稿采用憎燥则凿格式打印并同时寄软盘 文责自负并请自留底稿 源援征文截止时间 : 圆园园猿年怨月员园日 ( 以当地邮戳为准 ) 缘援征文投稿地址 : 邮政编码 : 员园园园愿猿摇北京市海淀区学院路猿愿号摇摇摇摇摇摇摇摇北京大学公共卫生学院营养与食品卫生学系摇摇李摇勇 ( 收 ) 摇摇来稿请在信封上注明 征文 字样 远援优秀论文评选 : 在被录用的论文中, 评选优秀论文并发给主办单位签发的优秀论文证书, 同时刊发在 癌变 畸变 突变 杂志上 全国乳腺疾病的病理学诊断及研究进展研讨会 征文通知 摇摇 临床与实验病理学杂志 编辑部和中华医学会病理学分会拟于圆园园猿年员园月中旬在安徽省屯溪举办寓寓全国乳腺疾病的病理学诊断及研究进展研讨会寓寓 会议将邀请数位国内著名乳腺疾病研究专家做专题报告, 重点介绍宰匀韵乳腺病变最新组织学诊断标准以及国外乳腺病变的病理学研究进展 本次学术研讨会面向全国各级医疗机构 高等院校和科研院所的病理学和肿瘤学工作者, 会期远天 征文内容 :( 员 ) 乳腺良性 恶性及交界性病变 ;( 圆 ) 少见类型乳腺癌 ;( 猿 ) 乳腺少见非肿瘤性病变 ;( 源 ) 其他乳腺病变 要求论文未公开发表, 参考 临床与实验病理学杂志 论文格式撰写, 请寄电脑打印稿并附软盘 ( 宰燥则凿格式 ) 征文截稿日期 : 圆园园猿年怨月员日 征文请寄 : 圆猿园园猿圆合肥市安徽医科大学内 临床与实验病理学杂志 编辑部, 并在信封左下角注明 征文 字样 联系电话 : 园缘缘员原缘员远员员园圆摇摇耘原皂葬蚤造 : 允悦耘孕宰岳泽燥澡怎援糟燥皂