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1 上海中医药大学药剂教研室

2 目录 1. 前言 实验一银黄口服液的制备 实验二丹皮酚注射液的制备 实验三罗布麻叶冲剂的制备 小结 附录

3 前言 综合性实验的教学是通过中药制剂的全过程 ( 原药材质量检查 炮制 有效成分提取 制剂原料 ( 半成品 ) 的含量测定 制剂的制备 成品的质量检查 ) 学会应用所学的中药鉴定学 中药炮制学 中药化学 中药药剂学 药物分析等学科的理论知识指导制药实际, 从而提高分析问题和解决问题的综合能力 实验须知 1. 实验前应认真预习, 做好预习笔记, 明确实验目的, 掌握实验原理, 搞清实验步骤, 安排好试验计划 2. 实验时要按照操作要求, 认真操作, 正确使用各种仪器, 正确掌握基本操作技术, 培养实事求是的作风和严格认真的科学态度, 杜绝差错 事故 3. 认真做好实验记录, 记录内容包括实验环境 ( 包括天气 温度 相对湿度 ) 实验仪器与药品试剂 实验操作过程 实验过程中观察到的现象 药品试剂称重的重量和量取的体积 质量检查的方法条件及所得到的数据等 4. 实验后要认真分析实验结果, 做出正确的结论, 写出实验报告, 呈交产品 ( 制剂 ) 必要时还须进一步学习和查阅文献对尚未搞清的问题进行探讨 5. 实验结束后要立即清洗玻璃仪器, 并派值日生负责整理公用仪器 药品 试剂, 倒药渣 垃圾, 检查水 电 煤气, 关好门窗 6. 实验时严防火灾 烧伤和化学灼伤事故发生 2

4 实验一银黄口服液的制备 实验目的 1. 掌握中药口服液制备的全过程 [ 原药材的质量检查 炮制 有效成分提取 制剂原料 ( 半成品 ) 的含量测定, 制剂的制备 成品的质量检查 ] 2. 通过正交设计法对黄芩苷提取工艺条件进行优选, 了解制剂制备工艺研究的一般方法 3. 了解复方制剂含量测定的特殊性, 掌握双波长紫外分光光度法进行含量测定的一般方法 实验内容 一 原药材质量检查 1. 金银花 (FLOS LONICERAE JAPONICAE) 本品为忍冬科植物忍冬 Lonicera japonica Thunb. 的干燥花蕾或带初开的花 夏初花开放前采收, 干燥 性状 本品呈棒状, 上粗下细, 略弯曲, 长 2~3 cm, 上部直径约 3 mm, 下部直径约 1.5 mm 表面黄白色或绿白色( 贮久色渐深 ), 密被短柔毛 偶见叶状苞片 花萼绿色, 先端 5 裂, 裂片有毛, 长约 2 mm 开放者花冠筒状, 先端二唇形 ; 雄蕊 5 个, 附于筒壁, 黄色 ; 雌蕊 1 个, 子房无毛 气清香, 味淡 微苦 ( 见图 1-1) 图 1-1 金银花原植物 ( 左 ) 及金银花药材 ( 右 ) 3

5 薄层层析鉴别 方法一 : (1) 取金银花剪碎, 称取 0.2 g, 加乙醇 5 ml, 超声波处理 20 min, 滤过, 滤液浓缩为 1mL, 作供试品溶液, 备用 (2) 另取绿原酸对照品, 加乙醇制成 1 mg ml -1 溶液, 作对照品溶液 (3) 吸取上述两种溶液各 4 μl, 分别点于同一聚酰胺层析薄膜上, 以 36 % 醋酸展开剂, 展开 取出 晾干, 在紫外灯 (365 nm) 下检视 供试品色谱中, 在与对照品色谱相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点 方法二 (2005 版药典收录 ): (1) 取本品粉末 0.2 g, 加甲醇 5 ml, 放置 12 h, 滤过, 滤液作为供试品溶液 另取绿原酸对照品, 加甲醇制成每 1 ml 含 1 mg 的溶液, 作对照品溶液 (2) 按照薄层色谱法 (2005 版药典附录 Ⅵ B) 试验, 吸取供试品溶液 μl, 对照品溶液 10 μl, 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶 H 薄层板上, 以醋酸丁酯 - 甲酸 - 水 (7:2.5:2.5) 的上层溶液位展开剂, 展开 取出 晾干, 在紫外灯 (365 nm) 下检视 供试品色谱中, 在与对照品色谱相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点 检查 水分照水分测定法 (2005 版药典附录 Ⅸ H 第二法 ) 测定, 不得过 12.0 % 总灰分不得过 10.0 %(2005 版药典附录 Ⅸ K) 酸不溶性灰分不得过 3.0 % (2005 版药典附录 Ⅸ K) 重金属及有害元素照铅 镉 砷 汞 铜测定法 (2005 版药典附录 Ⅸ B 原子吸收分光光度法或附录 Ⅺ D 电感耦合等离子体质谱法 ) 测定, 铅不得过百万分之五 ; 镉不得过千万分之三 ; 砷不得过百万分之二 ; 汞不得过千万分之二 ; 铜不得过百万分之二十 2. 黄芩 (RADIX SCUTELLARIAE) 本品为唇形科植物黄芩 Scutellaria baicalensis Georgi. 的干燥根 春 秋二季采挖, 除去须根及泥沙, 晒后撞去粗皮, 晒干 性状 本品呈圆锥形, 扭曲, 长 8~25 cm, 直径 1~3 cm 表面棕黄色或深黄色, 有稀疏的疣状细根痕, 上部较粗糙, 有扭曲的纵皱或不规则的网纹, 下部有顺 4

6 纹和细皱 质硬而脆, 易折断, 断面黄色, 中间红棕色 ; 老根中心枯朽状或中空, 呈暗棕色或棕黑色 气微, 味苦 栽培品较细长, 多有分枝 表面浅黄棕色, 外皮紧贴, 纵皱纹较细腻 断面黄色或浅黄色, 略呈角质样 味微苦 ( 见图 1-2) 图 1-2 黄芩原植物 ( 左 ) 及黄芩药材 ( 右 ) 鉴别 (1) 理化鉴别取黄芩研碎 ( 研船 ), 取粉末 1 g, 加乙醇 10 ml, 超 声波处理 20 min, 滤过, 滤液浓缩至 2 ml, 平分于二个小试管中 1 一支试管加醋酸铅试液 2~3 滴, 即产生橘黄色的沉淀 ;2 一支试管加镁粉少量与盐酸 3~4 滴, 显红色 ( 实验中注意观察现象 ) (2) 薄层层析鉴别 (05 版药典收录 ) 取本品粉末 1 g, 加乙酸乙酯 - 甲醇 (3: 1) 的混合溶液 30 ml, 加热回流 30 min, 放冷, 滤过, 滤液蒸干, 残渣加甲醇 5 ml 使溶解, 取上清液作为供试品溶液 另取黄芩对照药材 1 g, 同法制成对照药材溶液 再取黄芩苷对照品 黄芩素对照品 汉黄芩素对照品, 加甲醇制成每 1 ml 含 1 mg 0.5 mg 0.5 mg 的对照品溶液 照薄层色谱法 (2005 版药典附录 Ⅵ B) 试验, 吸取上述供试品溶液 对照药材溶液各 2 μl 以及上述三种对照品溶液各 1 μl, 分别点于同一聚酰胺薄膜上, 以甲苯 - 乙酸乙酯 - 甲醇 - 甲酸 (10:3:1:2) 为展开剂, 预饱和 30 min, 展开, 取出, 晾干, 置紫外光灯 (365 nm) 下检视 供试品色谱中, 在与对照药材色谱相应的位置上, 显相同颜色的斑点 ; 在与对照品色谱相应的位置上, 显三个相同的暗绿色斑点 检查 水分不得过 12.0 %(2005 版药典附录 Ⅸ H) 总灰分不得过 6.0 % (2005 版药典附录 Ⅸ K) 5

7 含量测定 本品按干燥品计算, 含黄芩苷 (C 21 H 18 O 11 ) 不得少于 9.0 % 1. 紫外分光光度法取黄芩粗粉约 1 g, 精密称定, 装入滤纸筒内, 置索氏提取器中, 用 95% 乙醇 85 ml 回流提取至无色, 提取液移至 100 ml 量瓶中, 用少量 95 % 乙醇分次洗涤回流瓶, 洗涤液合并至盛提取液的量瓶中,95 % 乙醇定容, 摇匀, 滤过 吸取续滤液 0.3 ml, 置 50 ml 量瓶中, 加 95 % 乙醇稀释至刻度, 摇匀 ( 或取 2 ml 定容至 5 ml, 再从中取 1.5 ml 定容至 10 ml) 置 1 cm 比色杯中, 以 95 % 乙醇作空白, 用分光光度计在 276 nm 波长处测定吸收度, 将吸收值代入标准曲线或 Beer-Lambert 定律, 计算即得 2. 高效液相色谱法 ( 照 2005 版药典附录 Ⅵ D 操作测定 ) 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ; 甲醇 - 水 - 磷酸 (47:53:0.2) 为流动相 ; 检测波长为 280 nm 理论板数按黄芩苷峰计算应不低于 2500 对照品溶液的制备精密称取在 60 减压干燥 4 h 的黄芩苷对照品适量, 加甲醇制成每 1 ml 含 60 μg 的溶液, 即得 供试品溶液的制备取本品中粉约 0.3 g, 精密称定, 加 70 % 乙醇 40 ml, 加热回流 3 h, 放冷, 滤过, 滤液置 100 ml 量瓶中, 用少量 70 % 乙醇分次洗涤容器和残渣, 洗液滤入同一量瓶中, 加 70 % 乙醇至刻度, 摇匀 精密量取 1 ml, 置 10 ml 量瓶中, 加甲醇至刻度, 摇匀, 即得 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10 μl, 注入液相色谱仪, 测定, 即得 二 炮制黄芩片除去杂质, 置沸水中煮 10 min, 取出, 闷透, 切薄片, 干燥 ; 或蒸半小时, 取出, 切薄片, 干燥 ( 注意避免曝晒 ) 本品为类圆形或不规则形薄片, 外表皮黄棕色至棕褐色, 切面黄棕色或黄绿色, 具放射状纹理 照上述 [ 鉴别 ](1) (2) 项下试验, 应显相同的结果 ; 照上述 [ 含量测定 ] 项下的方法测定, 按干燥品计算, 含黄芩苷 (C 21 H 18 O 11 ) 不得少于 8.0 % 三 正交设计法确定黄芩提取工艺条件 6

8 1. 正交设计黄芩的主要成分为黄芩苷, 提取方法为水提酸沉法, 即水煎液合并浓缩, 加酸沉淀, 黄芩提取液再加酸沉淀过程中,pH 值, 加热温度 保温时间对黄芩苷收率影响极大, 故采用正交试验选择酸沉工艺的最佳条件 正交试验 : 利用 L 9 (3 4 ) 正交表进行试验表 1 因素水平表 ( 静置时间为 2 h) 水平 PH 值 加热温度 保温时间 因素 (A) (B / ) (C / hr) 试验方法准确称取黄芩各 100 g, 分别加 10 倍量沸水煎煮 30 min, 滤过, 再加 8 倍量的水, 煎煮 30 min, 滤过, 合并滤液 滤液离心 (3000 rpm,10 min) 后取上清液, 各组分别根据因素水平表, 按表 2 L 9 (3 4 ) 正交试验设计表确定的实验条件进行试验 用浓盐酸调 ph, 水浴加热保温, 静置 2 h, 搅匀后离心, 刮取沉淀物, 转移至大小合适 预先称过重量的滤纸上, 铺成薄层, 抽滤, 置蒸发皿中,60 烘箱减压干燥, 称重, 测定含量 3. 黄芩提取物中黄芩苷含量测定 (1) 黄芩苷标准曲线的绘制精密称取黄芩苷对照品 8 mg 左右, 加 95 % 乙醇于 100 ml 量瓶中, 加热溶解, 冷至室温, 加 95 % 乙醇至刻度, 摇匀 分别量取 0.00,0.50,0.75,1.00,1.25,1.50, 2.00 ml 于 10 ml 量瓶中, 加 95 % 乙醇至刻度, 摇匀 用分光光度计在 276 nm 波长处分别测定吸收度 以吸收度为 X, 浓度为 Y, 回归处理, 得标准曲线线性方程 (2) 黄芩提取物的黄芩苷含量测定用干燥乳钵将黄芩提取物研细, 取约 15 mg, 精密称定, 置于 100 ml 量瓶中, 加 95 % 乙醇 50 ml, 加热或超声溶解, 冷至室温, 加 95 % 乙醇至刻度, 摇匀, 滤过, 精密量取续滤液 0.5 ml 于 10 ml 量瓶中, 加 95% 乙醇至刻度, 摇匀, 以 95% 乙醇作空白, 用分光光度计在 276 nm 波长处分别测定吸收度, 代入标准曲线的线性方程或 7

9 Beer-Lambert 定律中, 计算提取物中黄芩苷的百分含量和提取物中黄芩苷总量 表 2 L 9 (3 4 ) 正交试验设计表 试验设计 型号 1A 2B 3 4 提取物重量 提取物中黄芩苷 黄芩苷总量 (g) 因素 C D (g) 的含量 (%) 试验号 结果分析 以黄芩提取物的黄芩苷含量为指标, 进行直观分析 ( 表 3) 和方差分析 ( 表 4) 表 3 黄芩苷总量直观分析表 因素 A B C D 水平 K 1 K 2 K 3 K 1 K 2 K 3 R 8

10 实验结果分析 : 从表 3 可直观看出最佳工艺为 : 表 4 黄芩苷总量方差分析表 A B C D 方差 离差 自由 均方 F 值 显著 来源 平方 度 (4)=(2 性 P (1) 和 (2) (f)(3) ) (3) K 1 K 2 K 3 A B C 2 K D 1 2 K 总和 2 2 K 3 Q S 9 G = Yi = i= 1 CT=G 2 /9 3 Q= 1/3 Ki S=Q=CT i= 1 2 结果分析 : 由表 4 可以看出, 影响黄芩苷提取效果的主要因素是, 其次是 四 黄芩提取物的制备 按正交实验确定的黄芩提取的最佳工艺制备黄芩提取物 五 金银花提取物的制备 取金银花 80 g 用 70 % 乙醇回流提取二次 (10 倍量和 8 倍量 ), 每次 1.5 h, 提取 液合并滤过, 回收乙醇, 并浓缩至约 80 ml, 定容于 100 ml 量瓶中, 即得 六 口服液原料的含量测定 1. 黄芩苷含量测定 [ 同三.3(2)] 2. 绿原酸含量测定 9

11 (1) 绿原酸标准曲线绘制精密称取绿原酸对照品 8 mg 左右, 用蒸馏水溶解并定容于 100 ml 量瓶中, 摇匀 分别精密量取 0.00, 0.50, 0.75, 1.00, 1.25, 1.50, 1.75, 2.00 ml 于 10 ml 量瓶中, 用蒸馏水稀释至刻度, 摇匀 用分光光度计在 324 nm 波长出分别测定吸收度 以吸收度为 X, 浓度为 Y, 回归处理, 得标准曲线的线性方程 (2) 金银花提取物中绿原酸的含量测定将已定容至 100 ml 量瓶中金银花提取物摇匀 精密量取 1 ml 置 50 ml 量瓶中, 用蒸馏水稀释至刻度, 滤过, 弃去初滤液, 精密吸取续滤液 1 ml 置 50 ml 量瓶中, 用蒸馏水稀释至刻度, 置 1 cm 比色皿中, 以蒸馏水作空白, 用分光光度计在 324 nm 波长出分别测定吸收度, 代入标准曲线的线性方程或 Beer-Lambert 定律中, 计算百分含量及提取物中绿原酸的总量 七 银黄口服液的制备 处方 金银花提取物 ( 以绿原酸计 ) 黄芩提取物 ( 以黄芩苷计 ) g 1.0 g 8 % 氢氧化钠适量 蒸馏水 ad 50 ml 制法 (1) 根据处方量计算所需黄芩苷提取物 g, 根据处方量计算所需金银花提取液 ml (2) 称取黄芩提取物加适量蒸馏水与 8 % 氢氧化钠使溶解, 加入金银花提取液, 混匀, 加蒸馏水至 45 ml, 用 8 % 氢氧化钠溶液调节 ph 值至 7.0, 滤过, 自滤器上添加蒸馏水至 50 ml, 灌封, 灭菌, 即得 八 银黄口服液的质量检查 性状 本品为红棕色的澄清液体 ; 味甜 微苦 鉴别 (1) 取本品 1 ml, 加 5 % 硝酸钠溶液与 10 % 硝酸铝溶液各 0.3 ml, 生成黄色沉淀 ; 再加 5 % 氢氧化钠溶液使成碱性, 沉淀即溶解, 溶液显棕红色 10

12 (2) 取本品 0.1 ml, 加水 10 ml, 摇匀, 取溶液 2 ml, 加 5 % 二氧化锆溶液 1~2 滴, 溶液显黄色, 再加盐酸 1~2 滴, 黄色不褪 (3) TLC: 供试品 : 银黄口服液 对照品 : 吸附剂 : 展开剂 : 黄芩苷 绿原酸 聚酰胺 36 % 醋酸 UV(365 nm) 下检视, 供试品色谱中, 在与对照品色谱相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点 检查 相对密度应不低于 1.10( 详见 2005 版中国药典附录 Ⅶ A) ph 值应为 6.0~7.0( 详见 2005 版中国药典附录 Ⅶ G) 其他 应符合 2005 版中国药典合剂 ( 附录 IL) 项下有关的各项规定 含量测定 本品每 1 ml 含金银花提取物以绿原酸 (C 16 H 18 O 9 ) 计, 不得少于 11.2 mg; 含黄芩提取物以黄芩苷 (C 21 H 18 O 11 ) 计, 不得少于 18.0 mg 1. 紫外分光光度法测定银黄口服液的含量精密量取银黄口服液 2 ml, 置 100 ml 量瓶中, 加蒸馏水至刻度, 摇匀 精密量取 2 ml 置 100 ml 量瓶中, 加 0.2 mol L -1 盐酸溶液至刻度, 摇匀 于分光光度计在 278 nm 与 318 nm 的波长处分别测定吸收度 按下式计算, 即得 C 1 =2.599 A A 278 C 2 =2.121 A A 318 绿原酸 (C 16 H 18 O 9 ) 的含量 (mg ml -1 )=(C ) / ( ) 黄芩苷 (C 21 H 18 O 11 ) 的含量 (mg ml -1 )=(C ) / ( ) 式中 : C 1 为供试品溶液中绿原酸的浓度 (mg 100mL -1 ); C 2 为供试品溶液中黄芩苷的浓度 (mg 100mL -1 ); A 278 为供试品溶液在 278 nm 波长处测得的吸收度 ; A 318 为供试品溶液在 318 nm 波长处测得的吸收度 2. 高效液相色谱法测定黄芩苷 绿原酸的含量 2.1 金银花提取物色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ; 以乙腈 -0.4 % 11

13 磷酸溶液 (10 90) 为流动相 ; 检测波长为 327 nm 理论板数按绿原酸峰计算应不低于 2000 对照品溶液的制备取绿原酸对照品适量, 精密称定, 置棕色量瓶中, 加 50 % 甲醇制成每 1 ml 含 40 μg 的溶液, 即得 供试品溶液的制备精密量取本品 1 ml, 置 50 ml 棕色量瓶中, 加 50 % 甲醇稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10 μl, 注入液相色谱仪, 测定, 即得 2.2 黄芩提取物色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ; 以甲醇 - 水 - 磷酸 ( ) 为流动相 ; 检测波长为 274 nm 理论板数按黄芩苷峰计算应不低于 2500 对照品溶液的制备取黄芩苷对照品 10 mg, 精密称定, 置 100 ml 量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 精密量取 5 ml, 置 10 ml 量瓶中, 加水稀释至刻度, 摇匀, 即得 ( 每 1 ml 含黄芩苷 50 μg) 供试品溶液的制备精密量取本品 1 ml, 置 50 ml 量瓶中, 加水稀释至刻度, 摇匀, 精密量取 3 ml, 置 25 ml 量瓶中, 加 50 % 甲醇稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10μL, 注入液相色谱仪, 测定, 即得 12

14 实验二丹皮酚注射液的制备 实验目的 1. 熟悉中药注射剂制备的全过程 ( 原药材的鉴定 有效成分的提取 注射液的制备 成品的质量检查 ) 2. 掌握水蒸气蒸馏法提取低分子类化合物的方法 3. 熟悉紫外分光光度法测定主药含量的方法 实验内容 一. 原药材质量检查徐长卿 (RADIX ET RHIZOMA CYNANCHI PANICULATI ) 本品为萝藦科植物徐长卿 Cynanchum paniculatum (Bge.) Kitag. 的干燥根及根茎 秋季采挖, 除去杂质, 阴干 性状 本品根茎呈不规则柱状, 有盘节, 长 0.5~3.5 cm, 直径 2~4 mm 有的顶端带有残茎, 细圆柱形, 长约 2 cm, 直径 1~2 mm, 断面中空 ; 根茎节处周围着生多数根 根呈细长圆柱形, 弯曲, 长 10~16 cm, 直径 1~1.5 mm 表面淡黄白色至淡棕黄色, 或棕色 ; 具微细的纵皱纹, 并有纤细的须根 质脆, 易折断, 断面粉性, 皮部类白色或黄白色, 形成层环淡棕色, 木部细小 气香, 味微辛凉 ( 见图 2-1) 图 2-1 徐长卿原植物 ( 左 ) 及徐长卿药材 ( 右 ) 13

15 薄层层析鉴别 (1) 取徐长卿 1 g, 加乙醚 10 ml, 超声波处理 10 min, 滤过, 滤液水浴蒸干, 残渣加乙醇 1 ml 使溶解, 作为供试品溶液 (2) 另取丹皮酚对照品, 加乙醇制成每 1 ml 含 2 mg 的溶液, 作为对照品溶液 (3) 照薄层色谱法 (2005 版药典附录 Ⅵ B) 试验, 吸取上述两种溶液各 5 μl, 分别点样于同一硅胶 G 薄层板上, 以环己烷 - 醋酸乙酯 (3:1) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 喷以盐酸酸性 5 % 的三氯化铁乙醇溶液, 热风吹至斑点显色清晰 供试品色谱中, 在与对照品色谱相应的位置上, 显相同的蓝褐色斑点 含量测定 (1) 取本品粗粉约 0.3 g, 精密称定 ( 同时另取本粉末测定水份 ), 加水 600 ml, 用直火蒸馏法, 收集馏出液约 450 ml, 置 500 ml 量瓶中, 加蒸馏水稀释至刻度, 摇匀, 于分光光度计在 274 nm 的波长处测定吸收度, 按丹皮酚的吸收系数 (E 1% 1cm) 为 862 计算, 即得 (2) 照高效液相色谱法测定 ( 照 2005 版药典附录 Ⅵ D 操作测定 ) 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ; 以甲醇 - 水 (45:55) 为流动相 ; 检测波长为 274 nm 理论板数按丹皮酚峰计算应不低于 3000 对照品溶液的制备 精密称取丹皮酚对照品适量, 加甲醇制成每 1 ml 含 20 μg 的溶液, 即得 供试品溶液的制备 取本品粗粉约 0.5 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密 加入甲醇 50 ml, 称定重量, 超声处理 ( 功率 250 W, 频率 33 khz)30 min, 放冷, 再称定重量, 用甲醇补足减失的重量, 摇匀, 滤过 精密量取续滤液 1 ml, 置 10 ml 量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 即得 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10 μl, 注入液相色谱仪, 测定, 即得 本品按干燥品计算, 含丹皮酚 (C 9 H 10 O 8 ) 不得少于 1.3 % 二. 丹皮酚的提取 称取徐长卿 100 g 加水 700 ml 浸渍 30 min, 直火蒸馏至无浑浊蒸馏液滴出为止 蒸馏液再次重蒸馏, 收集蒸馏液 150 ml~200 ml, 冷藏 2 天, 有白色针状结晶析出, 14

16 抽滤, 置预先称重的称量瓶中, 于干燥器中干燥恒重, 称重, 计算丹皮酚提取收率 三. 丹皮酚注射液的制备 处方 丹皮酚 吐温 -80 注射用水 150 mg 1.5 g ad 30.0 ml 制法 取丹皮酚约 mg(105 % 投药量 ), 精密称定, 加入处方量的吐温 -80, 搅匀, 加注射用水 25 ml,<50 水浴, 加热溶解, 粗滤, 精滤, 从滤器上添 加注射用水至 30 ml, 灌封于 2 ml 安瓿瓶中, 灭菌, 质检, 即得 四. 丹皮酚注射液的质量检查 性状 本品为无色或微黄色的澄明液体 鉴别 (1) 取本品 1 ml, 加乙醇制氨试液 2 滴与硫酸铜溶液 2 滴, 即产生绿色沉淀 (2) TLC: 供试品 : 丹皮酚注射液对照品 : 丹皮酚吸附剂 : 硅胶 G 展开剂 : 环己烷 醋酸乙酯 (3:1) 显色剂 : 5 % 三氯化铁乙醇溶液供试品色谱中, 在与对照品色谱相应的位置上显示相同颜色的斑点 检查 PH 值应为 3.5~5.5 澄明度 澄明无异物 含量测定 精密吸取 1 ml 于 50 ml 容量瓶中, 加蒸馏水至刻度, 摇匀 精密吸取 0.5 ml 于 10 ml 量瓶中, 加蒸馏水至刻度, 摇匀 以蒸馏水为空白, 于 274 nm 处测定吸收度, 以丹皮酚的吸收系数 (E 1% 1cm) 为 862, 按下式计算, 即得 丹皮酚 (C 9 H 10 O 8 ) 的含量 (mg ml -1 )=(A 50 20) / ( ) 本品为丹皮酚的灭菌水溶液, 含丹皮酚应为标示量的 95.0 %~105.0 % 15

17 实验三 罗布麻叶冲剂的制备 实验目的 1. 熟悉中药冲剂制备的全过程 ( 原药材的鉴定 提取 半成品的质量检查 冲剂的制备 成品的质量检查 ) 2. 掌握比色法测定黄酮类化合物含量的方法 实验内容 一. 原药材质量检查罗布麻叶 (FOLIUM APOCYNI VENETI ) 本品为夹竹桃科植物罗布麻 Apocynum venetum L. 的干燥叶 夏季采收, 除去杂质, 干燥 性状 本品多皱缩卷曲, 有的破碎, 完整叶片展平后呈椭圆状披针形或卵圆状披针形, 长 2~5 cm, 宽 0.5~2 cm 淡绿色或灰绿色, 先端钝, 有小芒尖, 基部钝圆或楔形, 边缘具细齿, 常反卷, 两面无毛, 叶脉于下表面突起 ; 叶柄细, 长约 4 mm 质脆 气微, 味淡 ( 见图 3-1) 鉴别 图 3-1 罗布麻原植物 ( 左 ) 及罗布麻药材 ( 右 ) (1) 本品表面观 : 上下表皮细胞多角形, 垂周壁平直, 表面有颗粒状角质纹

18 理 ; 气孔平轴式 本品横切面 : 表皮细胞扁平, 外壁突起 ; 叶两面均具栅栏组织, 上表皮内栅栏细胞多为 2 列, 下表皮内多为 1 列, 细胞极短, 海绵组织细胞 2~4 列, 含棕色物 ; 主脉维管束双韧型, 维管束周围及韧皮部散有乳汁管 (2)TLC 鉴别 : 取粉碎的罗布麻叶 2 g, 加乙酸乙酯 10 ml, 超声 20 min, 滤过, 滤液蒸干, 加乙醇 1mL 溶解备用 另取槲皮素对照品, 加无水乙醇制成每 1 ml 各含 1 mg 的溶液, 作为对照品溶液 吸取上述两种溶液各 4 μl, 分别点样于同一用 0.5 %CMC-Na 制备的硅胶 G 薄层板上, 以甲苯 - 氯仿 - 丙酮 - 甲酸 (8: 5:7:2) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置紫外灯 (365 nm) 下检视 供试品色谱中, 在与对照品色谱相应的位置上, 显相同黄绿色的斑点 二. 罗布麻叶流浸膏的制备称取罗布麻叶 50 g, 分别以 10 倍量 8 倍量的水煎液二次, 第一次 30 min, 第二次 20 min, 滤过, 合并二液, 浓缩至 50 ml, 加 95 % 乙醇至含醇量达 70 %, 冷藏 24 h, 滤过, 回收乙醇浓缩至约 40 ml, 定容于 50 ml 量瓶中, 备用 三. 半成品罗布麻叶流浸膏的质量检查 性状 本品为棕褐色的液体, 味咸涩而苦 鉴别 (1) 取本品约 1.0 g, 加乙醇 10 ml, 冷浸 10 min, 滤过, 取滤液 1 ml, 加镁粉少许及盐酸 2~3 滴, 即显红色 (2) TLC 鉴别 : 取流浸膏 1 ml, 加入乙酸乙酯 10 ml 萃取, 萃取液合并并另室蒸干, 加入 1 ml 无水乙醇溶解备用 余下操作同原药材质量检查项 检查 (1) 干燥失重在 105 干燥至恒重, 减失重量不得过 10.0 % (2) 总灰分不得过 18.0 % 含量测定 1. 对照品溶液的制备精密称取在 120, 减压干燥至恒重的芦丁标准品 15 mg, 至 25 ml 量瓶中, 加 70 % 乙醇 20 ml 加热溶解, 冷却, 并稀释至刻度, 摇匀, 精密量取溶液 5 ml 17

19 置 50 ml 量瓶中加 70 % 乙醇稀释至刻度, 摇匀, 即得 ( 每 ml 中含无水芦丁 60 μg) 2. 标准曲线的制备精密量取对照品溶液 0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 ml 分别置 25 ml 量瓶中, 各加 70 % 乙醇 5.0 ml, 准确加入三氯化铝溶液 (0.1 mol L -1 )3 ml 及醋酸钾溶液 (1 mol L -1 )5 ml, 摇匀, 放置 40 min 用分光光度计在 415 nm 波长处测定吸收度, 以吸收度为 X, 浓度为 Y, 回归处理, 得标准曲线的线性方程 3. 罗布麻叶流浸膏总黄酮的含量测定取流浸膏 1 ml 于 50 ml 量瓶中, 用 70 % 乙醇定容, 得供试液 A, 取 A 1 ml 于 25 ml 量瓶中, 准确加入 0.1 mol L -1 AlCl 3 3 ml 1 mol L -1 KAC 5 ml 70 % 乙醇 4 ml, 放置 40 min, 再用 70 % 乙醇定容, 摇匀,415 nm 测定, 按标曲计算, 不得少于 6.0 % 空白溶液 : 四. 罗布麻叶冲剂的制备 处方 罗布麻叶浸膏 糊精 9 g 适量 制法 取流浸膏 40 ml, 浓缩至约 8 ml, 加入糊精 ( 约 15 g~25 g), 混匀, 以适量 95 % 乙醇或无水乙醇制粒 (12 目 ~14 目 ),80 以下干燥, 整粒, 分装, 即得 五. 罗布麻冲剂成品的质量检查本品为罗布麻叶流浸膏制成的冲剂, 每 g 含总黄酮 >10 mg 性状 本品为棕黄色的颗粒, 微涩 鉴别 (1) 取本品粉末 2 g, 加乙醇 5 ml, 冷浸 20 min, 不时振摇, 滤过, 取滤液 1 ml, 加镁粉少许及盐酸 2~3 滴, 即显红色 (2) TLC 鉴别 : 取本品 2 g, 研成粉末, 加乙酸乙酯 10 ml, 超声波处理 10 min, 18

20 滤过, 滤液另室水浴蒸干, 加乙醇 1 ml 使溶解, 做供试品溶液 另取槲皮素对照品, 加无水乙醇制成每 1 ml 各含 1 mg 的溶液, 作为对照品溶液 吸取上述两种溶液各 4 μl, 分别点样于同一用 0.5 %CMC-Na 制备的硅胶 G 薄层板上, 以甲苯 - 氯仿 - 丙酮 - 甲酸 (8:5:7:2) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置紫外灯 (365 nm) 下检视 供试品色谱中, 在与对照品色谱相应的位置上, 显相同黄绿色的斑点 检查 粒度 : 不通过一号筛和通过五号筛颗粒和粉末总和不得过 15.0 % 水分 : 不得过 6.0 % 操作: 供试品 2~5 g, 平铺于干燥至恒重的称量瓶 (W) 中, 厚度 5 mm 或 10 mm, 精密称定 (W 0 ), 打开瓶盖在 100 ~105 烘箱中干燥 5 h, 盖上盖移至干燥器中, 冷却 30 min, 精密称重 (W 1 ), 再在上述温度干燥 1 h, 冷却称重, 至连续两次承重的差异 5 mg 为止, 根据减失重量计算水含量 溶化性 : 取冲剂颗粒 10 g, 加热水 20 倍, 搅拌 5 min, 应全部融化, 可允许轻微混浊 装量差异 : 应 <±5.0 % 注 : 1. 安瓿的洗涤自来水水洗去内外灰尘, 灌满去离子水, 倒置于含去离子水的烧杯中,100 蒸煮 30 min, 热处理两次后倒置于烧杯中, 烘箱干燥备用 2. 硅胶 G 板的制备 1 g 硅胶 G 加 2~3 ml 0.5 % CMC-Na,10 10 的板需要 3~4 g 硅胶 G, 在研钵中用杵棒沿一个方向充分研磨, 调成均匀糊状物, 均匀涂布好后于室温下水平晾干,105 ~110 活化约 30~60 min, 置于干燥器中冷却, 备用 19

21 小结 内容 : 1. 中药制剂制备的全过程包括哪几方面? 2. 在中药制剂制备的全过程中应采取哪些措施来保证中药制剂的质量 3. 谈谈本课程学习的体会和收获及对开设综合性实验课程的意见和建议 参考书及参考文献 1. 中药鉴定学 分析化学 上 下册 中药炮制学 中药化学 中药药剂学 医药数理统计方法 等 2. 中华人民共和国药典 2005 年版一部 3. 中药制剂新技术与应用 蔡宝昌主编人民卫生出版社 2006 年 12 月出版 4. 药物制剂技术 张劲主编化学工业出版社 2005 年 8 月出版 5. 药物制剂技术实训教程 张健泓主编化学工业出版社 2007 年 1 月出版 6. 桑旭峰等, 中成药 ;2005,27(1):96 7. 李展等, 中草药 ;2001,32(7): 香川珠实等, 国际中医中药杂志 ;2006,28(1):46 9. 杨志芳等, 中草药 ;2006,37(8):

22 附录 一 制剂通则 ( 颗粒剂 合剂 注射剂 ) 二 水分测定法三 灰分测定法四 干燥失重测定法五 相对密度测定法六 ph 测定法七 薄层色谱法八 分光光度法 21

23 一 制剂通则 ( 颗粒剂 合剂 注射剂 ) 颗粒剂 颗粒剂系指药材提取物与适宜的辅料或药材细粉制成具有一定粒度的颗粒状制剂, 分为可溶颗粒剂 混悬颗粒剂和泡腾颗粒 颗粒剂在生产与贮藏期间应符合下列有关规定 一 除另有规定外, 药材应按各该品种项下规定的方法进行提取 纯化 浓缩至规定相对密度的清膏, 采用适宜的方法干燥, 并制成细粉, 加适量的辅料或药材细粉, 混匀并制成颗粒 ; 应控制辅料用量, 一般前者不超过干膏量的 2 倍, 后者不超过清膏量的 5 倍 二 除另有规定外, 挥发油应均匀喷入干燥颗粒中, 密闭至规定时间或用 β- 环糊精包合后加入 三 制备颗粒剂时可加入矫味剂和芳香剂 ; 为防潮 掩盖药物的不良气味也可包薄膜衣 必要时, 包衣颗粒剂应检查残留溶剂 四 颗粒剂应干燥 颗粒均匀 色泽一致, 无吸潮 结块 潮解等现象 五 除另有规定外, 颗粒剂应密封贮藏, 在干燥处贮存, 防止受潮 颗粒剂应进行以下相应检查 粒度 除另有规定外, 照粒度测定法 ( 附录 Ⅺ B 第二法, 双筛分法 ) 测定, 不能通过一号筛和能通过五号筛的总和, 不得过 15 % 水分 照水分测定法 ( 附录 Ⅸ H) 测定 除另有规定外, 不得过 6.0 % 溶化性 取供试品 1 袋 ( 多剂量包装取 10 g), 加热水 200 ml, 搅拌 5 分钟, 立即观察 应全部溶化或呈混悬状 可溶颗粒应全部溶化, 允许有轻微浑浊 ; 混悬性颗粒剂应能混悬均匀 泡腾颗粒取供试品 1 袋, 置盛有 200 ml 水的烧杯中, 水温为 15~25, 应能迅速产生气体而呈泡腾状 5 分钟内颗粒应完全分散或溶解在水中 颗粒剂按上述方法检查, 均不得有焦屑等 装量差异 单剂量包装的颗粒剂, 照下述方法检查应符合规定 检查法取供试品 10 袋 ( 瓶 ), 分别称定每袋内容物的重量, 每袋装量与标示装量相比较, 按表中的规定, 超出装量差异限度的不得多于 2 袋, 并不得有 1 袋超出限度 1 倍 标示装量 装量差异限度 1.0 g 或 1.0 g 以下 ±10 % 1.0 g 以上至 1.5 g ±8 % 1.5 g 以上至 6 g ±7 % 6 g 以上 ±5 % 装量 多剂量包装的颗粒剂, 照最低装量检查法 ( 附录 Ⅻ C) 检查, 应符合规定 微生物限度 照微生物限度检查法 ( 附录 ⅩⅢ C) 检查, 应符合规定 22

24 合剂 合剂系指药材用水或其他溶剂, 采用适宜方法提取制成的口服液体制剂 ( 单剂量灌装者也可称 口服液 ) 合剂在生产与贮藏期间应符合下列有关规定 一 药材应按各品种项下规定的方法提取 纯化, 浓缩至一定体积 ; 除另有规定外, 含有挥发性成分的药材宜先提取挥发性成分, 再与余药共同煎煮 二 可加入适宜的附加剂 如需加入防腐剂, 山梨酸和苯甲酸的用量不得超过 0.3 %( 其钾盐 钠盐的用量分别按酸计 ), 对羟基苯甲酸酯类的用量不得超过 0.05 %, 如需加入其他附加剂, 其品种与用量应符合国家标准的有关规定, 不影响成品的稳定性, 并应避免对检验产生干扰 必要时可加入适量的乙醇 三 合剂若加蔗糖作为附加剂, 除另有规定外, 其含蔗糖量不高于 20 %(g ml -1 ) 四 除另有规定外, 合剂应澄清 在贮存期间不得有发霉 酸败 异物 变色 产生气体或其他变质现象, 允许有少量摇之易散的沉淀 五 一般应制定相对密度 ph 值等 六 除另有规定外, 合剂应密封, 置阴凉处贮存 合剂应进行以下相应检查 装量 单剂量灌装的合剂, 照下述方法检查应符合规定 检查法取供试品 5 支, 将内容物分别倒入经校正的干燥量筒内, 在室温下检视, 每支装量与标示装量相比较, 少于标示装量的不得多于 1 支, 并不得少于标示装量的 95% 多剂量灌装的合剂, 照最低装量检查法 ( 附录 Ⅻ C) 检查, 应符合规定 微生物限度 照微生物限度检查法 ( 附录 ⅩⅢ C) 检查, 应符合规定 注射剂 注射剂系指从药材经提取 纯化后制成的供注入体内的溶液或乳状液及供临用前配制成溶液的粉末或浓溶液的无菌制剂 注射剂可分为注射液 注射用无菌粉末和注射用浓溶液 注射液系指注射人体内用的无菌溶液型注射液或乳状液型注射液 可用于肌内注射 静脉注射或静脉滴注等 其中, 供静脉滴注用的大体积 ( 除另有规定外, 一般不小于 100ml) 注射液也称静脉输液 注射用无菌粉末系指供临用前用适宜的无菌溶液配制成溶液的无菌粉末或无菌块状物 可用适宜的注射用溶剂配制后注射, 也可用静脉输液配制后静脉滴注 无菌粉末用冷冻干燥法或喷雾干燥法制得 ; 无菌块状物用冷冻干燥法制得 注射用浓溶液系指临用前稀释供静脉滴注用的无菌浓溶液 注射剂在生产与贮藏期间均应符合下列有关规定 一 除另有规定外, 药材应按各该品种项下规定的方法提取 纯化 制成半成品, 以半成品投料配制成品 二 溶液型注射剂应澄明 乳状液型注射应稳定, 不得有相分离现象, 不得用于椎管注射, 静脉用乳状液型注射分散相球粒的粒度 90 % 应在 1μm 以下, 不得有大于 5μm 的球粒 静脉输液尽可能与血液等渗 三 注射剂所用溶剂必须安全无害, 并不得影响疗效和药品质量 一般分为水性溶剂和非水性溶剂 水性溶剂最常用的为注射用水, 也可用 0.9 % 氯化钠溶液或其他适宜的水溶 23

25 液 非水性溶剂常用的为植物油, 主要为供注射用大豆油 其质量应符合 大豆油 ( 供注射用 ) 标准 ; 其他还有乙醇 丙二醇 聚乙二醇等溶液 四 配制注射剂时, 可根据药物的性质加入适宜的附加剂 如渗透压调节剂 PH 值调节剂 增溶剂 抗氧剂 抑菌剂 乳化剂等 所用附加剂应不影响药物疗效, 避免对检验产生干扰, 使用浓度不得引起毒性或过度的刺激 常用的抗氧剂有亚硫酸钠 亚硫酸氢钠 焦亚硫酸钠, 一般浓度为 0.1 %~0.2 %; 常用抑菌剂为 0.5 % 苯酚 0.3 % 甲酚 0.5 % 三氯叔丁醇等 多剂量包装的注射液可加适宜的抑菌剂, 抑菌剂用量应能抑制注射液内微生物的生长 加有抑菌剂的注射液, 仍应用适宜的方法灭菌, 静脉输液与脑池内 硬膜外 椎管内用的注射液均不得加抑菌剂 除另有规定外, 一次注射量超过 15ml 的注射液, 不得加抑菌剂 五 注射剂常用容器有玻璃安瓿 玻璃瓶 塑料瓶 ( 袋 ) 等, 容器的密封性, 须用适宜的方法确证 除另有规定外, 容器应符合有关注射用玻璃容器和塑料容器的国家标准规定 容器用胶塞特别是多剂量包装注射剂用的胶塞应有足够的弹性, 其质量应符合有关国家标准规定 六 生产过程中应尽可能缩短注射剂的配制时间, 防止微生物与热原的污染及药物变质 静脉输液的配制过程更应严格控制 制备乳状液型注射液过程中, 应采取必要的措施, 保证粒子大小符合质量标准的要求 注射用无菌粉末应按无菌操作制备 七 灌装标示装量不大于 50 ml 的注射剂时, 应按下表适当增加装量 除另有规定外, 多剂量包装的注射剂, 每一容器的装量不得超过 10 次注射量, 增加装量应能保证每次注射用量 标示装量 /ml 增加量 /ml 易流动液 黏稠液 接触空气易变质的药物, 在灌装过程中, 应排除容器内空气, 可填充二氧化碳或氮等气体, 立即熔封或严封 八 熔封或严封后, 一般应根据药物性质选用适宜的方法和条件及时灭菌, 以保证制成品无菌 注射剂在灭菌时或灭菌后, 应采用减压法或其他适宜的方法进行容器检漏 九 除另有规定外, 注射剂应遮光贮存 十 加有抑菌剂的注射剂, 在标签上应标明所加抑菌剂的名称与浓度 ; 注射用无菌粉末应标明所用溶剂 十一 用于配制注射剂前的半成品, 应检查重金属 砷盐, 除另有规定外, 含重金属不得过百万分之十 ( 附录 Ⅸ E 第二法 ); 含砷盐不得过百万分之二注射剂应进行以下相应检查 装量 注射液和注射用浓溶液照下述方法检查, 应符合规定 检查法标示装量不大于 2ml 者取供试品 5 支,2ml 以上至 50ml 者取供试品 3 支, 开启时注意避免损失, 将内容物分别用相应体积的干燥注射器及注射针头抽尽, 然后注入经标 24

26 化的量具内 ( 量取的大小应使待测体积至少占其额定体积的 40%), 在室温下检视 测定油溶液的装量时, 应先加温摇匀, 再用干燥注射器及注射针头抽尽后, 同前法操作, 放冷, 检视 每支的装量均不得少于其标示量 标示装量为 50ml 以上至 500ml 的注射液及注射用浓溶液照最低装量检查法检查, 应符合规定 装量差异 除另有规定外, 注射用无菌粉末照下述方法检查, 应符合规定 检查法取供试品 5 瓶 (5 支 ), 除去标签 铝盖, 容器外壁用乙醇擦净, 干燥, 开启时注意避免玻璃屑等异物落入容器中, 分别迅速精密称定, 倾出内容物, 容器可用水 乙醇洗净, 在适宜的条件下干燥后, 再分别精密称定每一容器的重量, 求出每瓶 ( 支 ) 的装量与平均装量 每 1 瓶 ( 支 ) 中的装量与平均装量相比较, 应符合表中的规定 如有 1 瓶 ( 支 ) 不符合规定, 应另取 10 瓶 ( 支 ) 复试, 均应符合规定 平均装量 装量差异限度 0.05 g 及 0.05 g 以下 ±15 % 0.05 g 以上至 0.15 g ±10 % 0.15 g 以上至 0.50 g ±7 % 0.5 g 以上 ±5 % 凡规定检查含量均匀度的注射用无菌粉末, 一般不再进行装量差异检查 可见异物 除另有规定外, 照可见异物检查法 ( 附录 Ⅺ C) 检查, 应符合规定 不溶性微粒 除另有规定外, 溶液型静脉用注射液 溶液型静脉用注射用无菌粉末及注射用浓溶液照不溶性微粒检查法 ( 附录 Ⅸ R) 检查, 应符合规定 有关物质 按各品种项下规定, 照注射剂有关物质检查法 ( 附录 Ⅸ S) 检查, 应符合有关规定 无菌 照无菌检查法项下的方法 ( 附录 ⅩⅢ B) 检查, 应符合规定 热原 或 细菌内毒素 除另有规定外, 静脉用注射剂按各品种项下的规定, 照热原检查法 ( 附录 ⅩⅢ A) 或细菌内毒素检查法 ( 附录 ⅩⅢ D) 检查, 应符合规定 25

27 二 水分测定法 测定用的供试品, 一般先破碎成直径不超过 3 mm 的颗粒或碎片 直径和长度在 3 mm 以下的花类, 种子和果实类药材, 可不破碎 减压干燥法需先经二号筛 第一法 ( 烘干法 ) 本法适用于不含或少含挥发性成分的药品 测定法取供试品 2~5 g, 平铺于干燥至恒重的扁形称瓶中, 厚度不超过 5 mm, 疏松供试品不超过 10 mm, 精密称定, 打开瓶盖在 100~105 干燥 5 小时, 将瓶盖盖好, 移置干燥器中, 冷却 30 分钟, 精密称定重量, 再在上述温度干燥 1 小时, 冷却, 称重, 至连续两次称重的差异不超过 5 mg 为止 根据减失的重量, 计算供试品中含水量 (%) 第二法 ( 甲苯法 ) 本法适用于含挥发性成分的药品 仪器装置如图 A 为 500 ml 的短颈圆底烧瓶 ;B 为水分测定管 ;C 为直形冷凝管, 外管长 40cm 使用前, 全部仪器应清洁, 并置烘箱中烘干 测定法取供试品适量 ( 约相当于含水量 1~4mL), 精密称定, 置 A 瓶中, 加甲苯约 200 ml, 必要时加入干燥 洁净的沸石或玻璃珠数粒, 将仪器各部分连接, 自冷凝管顶端加入甲苯, 至充满 B 管的狭细部分 将 A 瓶置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热, 待甲苯开始沸腾时, 调节温度, 使每秒钟馏出 2 滴 待水分完全馏出, 即测定管刻度部分的水量不再增加时, 将冷凝管内部先用甲苯冲洗, 再用饱蘸甲苯的长刷或其他适宜的方法, 将管壁上附着的甲苯推下, 继续蒸馏 5 分钟, 放冷至室温, 拆卸装置, 如有水黏附在 B 管的管壁上, 可用蘸甲苯的铜丝推下, 放置, 使水分与甲苯完全分离 ( 可加亚甲蓝粉末少量, 使水染成蓝色, 以便分离观察 ) 检读水量, 并计算供试品中的含水量 (%) 附注 用化学纯甲苯直接测定, 必要时甲苯可先加水少量, 充分振摇后放置, 将水层分离弃去, 经蒸馏后使用 第三法 ( 减压干燥法 ) 本法适用于含有挥发性成分的贵重药品 减压干燥器取直径 12 cm 左右的培养皿, 加入五氧化二磷干燥剂适量, 使铺成 0.5~1 cm 的厚度, 放入直径 30 cm 的减压干燥器中 测定法取供试品 2~4 g, 混合均匀, 分取约 0.5 ~1 g, 置已在供试品同样条件下干燥并称重的称量瓶中, 精密称定, 打开瓶盖, 放入上述减压干燥器中, 减压至 2.67 kpa(20 mmhg) 以下持续半小时, 室温放置 24 小时 在减压干燥器出口连接无水氯化钙干燥管, 打开活塞, 待内外压一致, 关闭活塞, 打开干燥器, 盖上瓶盖, 取出称量瓶迅速精密称定重量, 计算供试品中的含水量 (%) 第四法 ( 气相色谱法 ) 色谱条件与系统适用性试验用直径为 0.25~0.18 mm 的二乙烯苯 - 乙基乙烯苯型高分子多孔小球作为载体, 柱温为 140~150, 热导检测器检测 注入无水乙醇, 照气相色谱法 ( 附录 Ⅵ E) 测定, 应符合下列要求 : (1) 理论板数按水峰计算应大于 1000; 理论板数按乙醇峰计算的应大于 150 (2) 水和乙醇两峰的分离度应大于 2 (3) 将无水乙醇注样 5 次, 水峰面积的相对标准偏差不得大于 3.0 % 标准溶液的制备取纯化水约 0.2 g, 置 25 ml 量瓶中, 精密称定, 加无水乙醇至刻度, 摇匀, 即得 供试品溶液的制备取供试品适量 ( 含水量约 0.2 g), 粉碎或研细, 精密称定, 置具 26

28 塞锥形瓶中, 精密加入无水乙醇 50 ml, 密塞, 混匀, 超声处理 20 分钟, 放置 12 小时, 再超声处理 20 分钟, 密塞放置, 待澄清后倾取上清液, 即得 测定法取无水乙醇 对照溶液及供试品溶液各 5 μl, 注入气相色谱仪, 测定, 即得 附注 (1) 对照溶液与供试品溶液的配制须用新开启的同一瓶无水乙醇 (2) 用外标法计算供试品中的含水量 计算时应扣除无水乙醇中的含水量, 方法如下 : 对照溶液中实际加入的水的峰面积 = 对照溶液中总水峰面积 -K 对照溶液中乙醇峰面积供试品溶液中水峰面积 = 供试品溶液中总水峰面积 -K 供试品溶液中乙醇峰面积 无水乙醇中水峰面积 K= 无水乙醇中乙醇峰面积 27

29 三 灰分测定法 1. 总灰分测定法测定用的供试品须粉碎, 使能通过二号筛, 混合均匀后, 取供试品 2~ 3 g( 如须测定酸不溶性灰分, 可取供试品 3~5 g), 置炽灼至恒重的坩埚中, 称定重量 ( 准确至 0.01 g), 缓缓炽热, 注意避免燃烧, 至完全炭化时, 逐渐升高温度至 500~600, 使完全灰化并至恒重 根据残渣重量, 计算供试品中总灰分的含量 (%) 如供试品不易灰化, 可将坩埚放冷, 加热水或 10 % 硝酸铵溶液 2 ml, 使残渣湿润, 然后置水浴上蒸干, 残渣照前法炽灼, 至坩埚内容物完全灰化 2. 酸不溶性灰分测定法取上项所得的灰分, 在坩锅中小心加入稀盐酸约 10 ml, 用表面皿覆盖坩锅, 置水浴上加热 10 分钟, 表面皿用热水 5 ml 冲洗, 洗液并入坩埚中, 用无灰滤纸滤过, 坩埚内的残渣用水洗于滤纸上, 并洗涤至洗液不显氯化物反应为止 滤渣连同滤纸移置同一坩埚中, 干燥, 炽灼至恒重 根据残渣重量, 计算供试品中酸不溶性灰分的含量 (%) 28

30 四 干燥失重测定法 取供试品, 混合均匀 ( 如为较大的结晶, 应先迅速捣碎使成 2 mm 以下的小粒 ), 取约 1 g 或各品种项下规定的重量, 置与供试品同样条件下干燥至恒重的扁形称量瓶中, 精密称定, 除另有规定外, 照各品种项下规定的条件干燥至恒重 从减失的重量和取样量计算供试品的干燥失重 供试品干燥时, 应平铺在扁形称量瓶中, 厚度不可超过 5 mm, 如为疏松物质, 厚度不可超过 10 mm 放入烘箱或干燥器进行干燥时, 应将瓶盖取下, 置称量瓶旁, 或将瓶盖半开进行干燥 ; 取出时, 须将称量瓶盖好 置烘箱内干燥的供试品, 应在干燥后取出置干燥器中放冷至室温, 然后称定重量 供试品如未达规定的干燥温度即融化时, 应先将供试品于较低的温度下干燥至大部分水分除去后, 再按规定条件干燥 当用减压干燥器或恒温减压干燥器时, 除另有规定外, 压力应在 2.67 kpa(20 mmhg) 以下 ; 干燥器中常用的干燥剂为无水氯化钙 硅胶或五氧化二磷, 恒温减压干燥器中常用的干燥剂为五氧化二磷 干燥剂应保持在有效状态 29

31 五 相对密度测定法 相对密度系指在相同的温度 压力条件下, 某物质的密度与水的密度之比 除另有规定外, 温度为 20 纯物质的相对密度在特定的条件下为不变的常数 但如物质的纯度不够, 则其相对密度的测定值会随着纯度的变化而改变 因此, 测定药品的相对密度, 可用以检查药品的纯杂程度 液体药品的相对密度, 一般用比重瓶 ( 如图 1 或图 2) 测定 ; 测定易挥发液体的相对密度, 可用韦氏比重秤 ( 图 3) 用比重瓶测定时的环境 ( 指比重瓶和天平的放置环境 ) 温度应略低于 20 或各品种项下规定的温度 1. 比重瓶法 (1) 取洁净 干燥并精密称定重量的比重瓶 ( 如图 1), 装满供试品 ( 温度应低于 20 或各品种项下规定的温度 ) 后, 装上温度计 ( 瓶中应无气泡 ), 置 20 ( 或各品种项下规定的温度 ) 的水浴中放置若干分钟, 使内容物的温度达到 20 ( 或各品种项下规定的温度 ), 用滤纸除去溢出侧管的液体, 立即盖上罩 然后将比重瓶自水浴中取出, 再用滤纸将比重瓶的外面擦净, 精密称定, 减去比重瓶的重量, 求得供试品的重量后, 将供试品倾去, 洗净比重瓶, 装满新沸过的冷水, 再照上法测得同一温度时水的重量, 按下式计算, 即得 供试品重量供试品的相对密度 = 水重量 (2) 取洁净 干燥并精密称定重量的比重瓶 ( 如图 2), 装满供试品 ( 温度应低于 20 或各品种项下规定的温度 ) 后, 插入中心有毛细孔的瓶塞, 用滤纸将从塞孔溢出的液体擦干, 置 20 ( 或各品种项下规定的温度 ) 恒温水浴中, 放置若干分钟, 随着供试液温度的上升, 过多的液体将不断从塞孔溢出, 随时用滤纸将瓶塞顶端擦干, 待液体不再由塞孔溢出, 迅即将比重瓶自水浴中取出, 照上述 (1) 法, 自 再用滤纸将比重瓶的外面擦净 起, 依法测定, 即得 2. 韦氏比重秤法 30

32 取 20 时相对密度为 1 的韦氏比重秤 ( 图 3), 用新沸过的冷水将所附玻璃圆筒装至八分满, 置 20 ( 或各品种项下规定的温度 ) 的水浴中, 搅动玻璃圆筒内的水, 调节温度至 20 ( 或各品种项下规定的温度 ), 将悬于秤端的玻璃锤浸入圆筒内的水中, 秤臂右端悬挂游码于 处, 调节秤臂左端平衡用的螺旋使平衡, 然后将玻璃圆筒内的水倾去, 拭干, 装入供试液至相同的高度, 并用同法调节温度后, 再把拭干的玻璃锤浸入供试液中, 调节秤臂上游码的数量与位置使平衡, 读取数值, 即得供试品的相对密度 如该比重秤系在 4 时相对密度为 1, 则用水校准时游码应悬挂于 处, 并应将在 20 测得的供试品相对密度除以

33 六 ph 测定法 除另有规定外, 水溶液的 ph 值应以玻璃电极为指示电极, 饱和甘贡电极为参比电极的酸度计进行测定 酸度计应定期检定, 并符合国家有关规定 测定前, 应采用下列标准缓冲液校正仪器, 也可用国家标准物质管理部门发放的标示 PH 值准确至 0.01PH 单位的各种标准缓冲液校正仪器 一 仪器校正用的标准缓冲液 (1) 草酸盐标准缓冲液精密称取在 54 ±3 干燥 4~5 小时的草酸三氢钾 g, 加水使溶解并稀释至 1000 ml (2) 邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液精密称取在 115 ±5 干燥 2~3 小时的邻苯二甲酸氢钾 g, 加水使溶解并稀释至 1000 ml (3) 磷酸盐标准缓冲液精密称取在 115 ±5 干燥 2~3 小时的无水磷酸氢二钠 3.55 g 与磷酸二氢钾 3.40 g, 加水使溶解并稀释至 1000 ml (4) 硼砂标准缓冲液精密称取硼砂 3.81 g( 注意避免风化 ), 加水使溶解并稀释至 1000 ml, 置聚乙烯塑料瓶中, 密塞, 避免与空气中二氧化碳进入 (5) 氢氧化钙标准缓冲液于 25, 用无二氧化碳的水制备氢氧化钙的饱和溶液, 取上清液使用 存放时应防止空气中二氧化碳进入 一旦出现浑浊, 应弃去重配 温度 / 草酸盐标准缓冲液 苯二甲酸盐标准缓冲液 磷酸盐标准缓冲液 硼砂标准缓冲液 氢氧化钙标准缓冲液 (25 ) 上述标准缓冲液必须用 PH 值基准试剂配制 不同温度时标准缓冲液的 ph 值如上表 二 注意事项测定 ph 值时, 应严格按仪器的使用说明书操作, 并注意下列事项 (1) 测定前, 按各品种项下的规定, 选择二种 ph 值约相差 3 个单位的标准缓冲液, 使供试液的 ph 值处于二者之间 (2) 取与供试液 ph 值较接近的第一种标准缓冲液对仪器进行校正 ( 定位 ), 使仪器示值与表列数值一致 (3) 仪器定位时, 再用第二种标准缓冲液核对仪器示值, 误差应不大于 ±0.02 ph 值单位 32

34 若大于此偏差, 则应小心调节斜率, 使示值与第二种标准缓冲液的表列数值相符 重复上述定位与斜率调节操作, 至仪器示值与标准缓冲液的规定数值相差不大于 0.02 ph 单位 否则, 须检查仪器或更换电极后, 再行校正至符合要求 (4) 每次更换标准缓冲液或供试液前, 应用纯化水充分洗涤电极, 然后将水吸尽, 也可用所换的标准缓冲液或供试液洗涤 (5) 在测定高 ph 值的供试品和标准缓冲液时, 应注意碱误差的问题, 必要时选用适用的玻璃电极测定 (6) 对弱缓冲液 ( 如水 ) 的 ph 值测定, 先用邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液校正仪器后测定供试液, 并重取供试液再测, 直至 ph 值的读数在 1 分钟内改变不超过 ±0.05 为止 ; 然后再用硼砂标准缓冲液校正仪器, 再如上法测定 ; 二次 ph 值的读数相差应不超过 0.1, 取二次读数的平均值为其 ph 值 (7) 配制标准缓冲液与溶解供试品的水, 应是新沸过的冷的纯化水, 其 ph 值应为 5.5~ 7.0 (8) 标准缓冲液一般可保存 2~3 个月, 但发现有浑浊 发霉或沉淀等现象时, 不能继续使用 33

35 七 薄层色谱法 薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上, 在展开容器内用展开剂展开, 使供试品所含成分分离, 所得色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图对比, 并可用薄层扫描仪进行扫描, 用于鉴别 检查或含量测定 1. 仪器与材料 (1) 薄层板市售薄层板市售薄层板分普通薄层板和高效薄层板, 如硅胶薄层板 硅胶 GF 254 薄层板 聚酰胺薄膜等 自制薄层板在保证色谱质量的前提下, 如需对薄层板进行特别处理和化学改性, 以适应供试品分离的要求时, 也可用实验室自制的薄层板 最常用的固定相有硅胶 G 硅胶 GF 254 硅胶 H 硅胶 HF 254 微晶纤维素等, 其颗粒大小一般要求直径为 10~40 μm, 加水或用梭甲基纤维素钠水溶液 (0.2 %~0.5 %) 适量调成糊状, 均匀涂布于玻板上 使用涂布应能使固定相在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层 玻板应光滑 平整, 洗净后不附水珠 (2) 点样器一般采用微升毛细管或手动 半自动 全自动点样器材 (3) 展开容器上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或有双槽展开缸, 展开时须能密闭, 水平展开用专用的水平展开缸 (4) 显色装置喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器, 要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出, 浸渍显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用 ; 蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替 (5) 检视装置为装有可见光 254 nm 及 365 nm 紫外光光源及相应的滤光片的暗箱, 可附加摄像设备供拍摄图像用, 暗箱内光源应有足够的光照度 (6) 薄层色谱扫描仪系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点, 或经激发后能发射出荧光的斑点, 进行扫描, 将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量的分析仪器 2. 操作方法 (1) 薄层板制备市售薄层板临用前一般应在 110 活化 30 分钟 聚酰胺薄膜不需活化 铝基片薄层板可根据需要剪裁, 但须注意剪裁后的薄层板底边的硅胶层不得有破损 如在存放期间被空气中杂质污染, 使用前可用三氯甲烷 甲醇或二者的混合溶剂在展开缸中上行展开预洗, 110 活化, 置干燥器中备用 自制薄层板除另有规定外, 将 1 份固定相和 3 份水 ( 或加有黏合剂的水溶液 ) 在研钵中按同一方向研磨混合, 去除表面的气泡后, 倒入涂布器中, 在玻板上平稳地移动布器进行涂布 ( 厚度为 0.2~0.3 mm), 取下涂好薄层的玻板, 置水平台上于室温下晾干后, 在 110 烘 30 分钟, 即置有干燥剂的干燥箱中备用 使用前检查其均匀度, 在反射光及透视光下检视, 表面应均匀 平整 光滑, 无麻点 无气泡 无破损及污染 (2) 点样除另有规定外, 在洁净干燥的环境, 用专用毛细管或配合相应的半自动 自动点样器械点样于薄层板上, 一般为圆点状或窄细的条带状, 点样基线距底边 10~15 mm, 高效板一般基线离底边 8~10 mm 圆点状直径一般不大于 3 mm, 高效板一般大于 3 mm; 接触点样时注意勿损伤薄层表面 条带状宽度一般为 5~10 mm 高效板条带宽度一般为 4~8 mm, 可用专用半自动或自动点样器械喷雾法点样 点间距离可视斑点扩散情况以相邻斑点 34

36 互不干扰为宜, 一般不少于 8 mm, 高效板供试品间隔不少于 5 mm (3) 展开将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中, 浸入展开剂的深度为距原点 5 mm 为宜, 密闭 除另有规定外, 一般上行展开 8~15 cm, 高效薄层板上展开 5~8 cm 溶剂前沿达到规定的展距, 取出薄层板, 晾干, 待检测 展开前如需要溶剂蒸气预平衡, 可在展开缸中加入适量的展开剂, 密闭, 一般保持 15~30 分钟 溶剂蒸气预平衡后, 应迅速放入载有供试品的薄层板, 立即密闭, 展开 如需使展开缸达到溶剂蒸气饱和的状态, 则须在展开缸的内侧放置与展开缸内径同样大小的滤纸, 密闭一定时间, 使达到饱和再如法展开 必要时, 可进行二次展开或双向展开 (4) 显色与检视供试品含有可见光下有颜色的成分可直接在日光下检视, 也可用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色, 或加热显色, 在日光下检视 有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在 365 nm 紫外光灯下观察荧光色谱 对于可见光下无色, 但在紫外光下有吸收的成分可用带有荧光剂的硅胶板 ( 如硅胶 GF 254 板 ), 在 254 nm 紫外光灯下观察荧光板面上的荧光猝灭物质形成的色谱 (5) 记录薄层色谱图像一般可采用摄像设备拍摄, 以光学照片或电子图像的形式保存 也可用薄层扫描仪扫描记录相应的色谱图 3. 系统适用性试验按各品种项下要求对实验条件进行系统适用性试验, 即用供试品和对照品对实验条件进行试验和调整, 应达到规定的检测灵敏度 分离度和重复性要求 (1) 检测灵敏度用于限量检查时, 采用供试品溶液和对照品溶液与稀释若干倍的对照品溶液在规定的色谱条件下, 于同一薄层板上点样 展开 检视, 后者应显清晰的斑点 (2) 分离度用于鉴别时, 对照品溶液与供试品溶液中相应的主斑点, 应显示两个清晰分离的斑点 用于限量检查和含量测定时, 要求定量峰与相邻峰之间有较好的分离度, 分离 (R) 的计算公式为 : R=2(d 2 -d 1 )/(W 1 +W 2 ) 式中 d 2 为相邻两峰中后一峰与原点的距离 ; d 1 为相邻两峰中前一峰与原点的距离 ; W 1 及 W 2 为相邻两峰各自的峰宽 除另有规定外, 分离度应大于 1.0 (3) 重复性同一供试品溶液在同一薄层板上平行点样的待测成分的峰面积测量值的相对标准偏差应不大于 3.0 %; 需显色后测定的相对标准偏差应不大于 5.0 % 4. 测定法 (1) 鉴别取适宜浓度的对照溶液与供试品溶液, 在同一薄层板上点样 展开与检视, 供试品溶液所显主斑点的颜色 ( 或荧光 ) 和位置应与对照溶液的斑点一致 (2) 限度检查采用定量配制的对照品对照或对照品稀释对照 供试品溶液色谱中待检查的斑点应与相应的对照品溶液或系列对照品溶液的相应斑点比较, 颜色 ( 或荧光 ) 不得更深 ; 或照薄层色谱扫描法操作, 峰面积不得大于对照品的峰面积值 必要时应规定检查的斑点数和限量值 (3) 含量测定照薄层色谱扫描法, 测定供试品中相应成分的含量 3. 薄层色谱扫描法系指用一定波长的光照射在薄层板上, 对薄层色谱中可吸收紫外光或可见光的斑点, 或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描, 将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别 检查或含量测定 测定时可根据不同薄层扫描仪的结构特点, 按照规定方式扫描测定, 一般选择反射方式, 采用吸收法或荧光法 除另有规定外, 含量测定应使用市售薄层板 扫描方法可采用单波长扫描或双波长扫描 如采用双波长扫描, 应选用待测斑点无吸收 35

37 或最小吸收的波长为参比波长, 供试品色谱中待测斑点的比移值 (R f 值 ) 和光谱扫描得到的吸收光谱图或测得的光谱最大吸收与最小吸收应与对照品相符, 以保证测定结果的准确性 薄层扫描定量测定应保证供试品斑点的最在线性范围内, 必要时可适当调整供试品溶液的点样量, 供试品与对照品同板点样, 展开, 扫描, 测定和计算 薄层色谱扫描用于含量测定时, 通常采用线性回归二点法计算, 如线性范围很窄时, 可用多点法校正多项式回归计算 供试品溶液和对照品溶液应交叉点于同一薄层板上, 供试品点样不得少于 2 个, 对照品每一浓度不得少于 2 个 扫描时, 应沿展开方向扫描, 不可横向扫描 36

38 八 分光光度法 分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内的吸光度或发光强度, 对该物质进行定性和定量分析的方法 常用的波长范围为 :(1)200~400 nm 的紫外光区 ;(2)400~760 nm 的可见光区,(3)2.5~ 25 μm( 按波数计为 4000~400 cm -1 ) 的红外光区 所用仪器为紫外分光光度计 可见分光光度计 ( 或比色计 ) 红外分光光度计或原子吸收分光光度计 为保证测量的精密度和准确度, 所用仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定, 定期进行校正检定 单色光辐射穿过被测物质溶液时, 在一定的浓度范围内被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度 ( 光路长度 ) 成正比, 其关系如下式 : 1 A=1g =ECL T 式中 A 为吸光度 ; T 为透光率 ; E 为吸收系数, 采用的表示方法是 (E1% 1 cm), 其物理意义为当溶液浓度为 1%(g/ml), 液层厚度为 1 cm 时的吸光度数值 ; C 为 100 ml 溶液中所含被测物质的重量 ( 按干燥品或无水物计算 ),g; L 为液层厚度,cm 物质对光的选择性吸收波长, 以及相应的吸收系数是该物质的物理常数 当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后, 可用同样条件将该供试品配成溶液, 测定其吸收度, 即可由上式计算出供试品中该物质的含量 在可见光区, 除某些物质对光有吸收外, 很多物质本身并没有吸收, 但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定, 故又称比色分析 37