Microsoft Word - 吕?晨.doc

Size: px

Start display at page:

Download "Microsoft Word - 吕?晨.doc"

拙蛙郝
5 years ago
Views:

1 第 25 卷第 4 期 2010 年 8 月天津科技大学学报 Journal of Tianjin University of Science & Technology Vol.25 No. 4 Aug 保利甘胶囊的质量标准研究吕晨 1, 王大平 2, 马长雨 2, 张泽生 (1. 天津科技大学食品工程与生物技术学院, 天津 ;2. 天狮集团全球研发中心, 天津 ) 1 摘要 : 建立保利甘胶囊的质量控制方法. 对姜黄五味子泽泻白芍和枸杞子进行薄层色谱 (TLC) 鉴别 ; 用反相高效液相色谱法 (RP-HPLC) 测定姜黄素和五味子醇甲含量. 结果表明,TLC 图谱分离度好, 检出斑点清晰.RP-HPLC 法测定的姜黄素质量浓度在 5.15~ µg/ml 范围内与峰面积呈良好的线性关系,R 2 = , 平均回收率为 98.04% (n=9),rsd=3.15%;rp-hplc 法测定的五味子醇甲的进样质量浓度在 5.22~ µg/ml 范围内与峰面积呈良好的线性关系,R 2 = , 平均回收率为 98.52%(n=9),RSD=3.67%. 本法专属性强, 结果准确可靠, 可作为保利甘胶囊的质量控制方法. 关键词 : 保利甘胶囊 ; 肝损伤 ; 质量标准 ; 姜黄素 ; 五味子醇甲 ;RP-HPLC 中图分类号 :R927.2 文献标志码 :A 文章编号 : (2010) Study on Quality Standard of Baoligan Capsule LÜ Chen 1,WANG Da-ping 2,MA Chang-yu 2,ZHANG Ze-sheng 1 (1. College of Food Engineering and Biotechnology,Tianjin University of Science & Technology,Tianjin ,China; 2. Global R&D Center,Tiens Group,Tianjin ,China) Abstract:The quality standard for Baoligan Capsule was to been established. Curcuma longa,schisandra chinensis, Alisma orientalis,paeonia lactiflora and Mespilus germanica were identified by TLC,and the contents of curcumin and schisandrin were determined by RP-HPLC. The TLC spots were clear and the resolution was good while the content of curcumin was determined by RP-HPLC. Curcumin showed good linear relationship at a range of 5.15 to µg/ml,r 2 = The average recovery of curcumin was 98.04%(n=9)and RSD was 3.15% by RP-HPLC. And schisandrin showed good linear relationship at a range of 5.22 to µg/ml,r 2 = The average recovery of schisandrin was 98.52%(n=9)and RSD was 3.67% by RP-HPLC. The method is specific,reliable and accurate. It can be used for the quality control of Baoligan Capsule. Keywords:Baoligan Capsule;liverdamage;quality standard;curcumin;schisandrin;rp-hplc 保利甘胶囊是正在研发中的对化学性肝损伤具有辅助保护功能的保健食品, 本课题来源于国家十一五科技支撑计划项目区域性特色资源的开发与利用. 该胶囊主要由姜黄白芍泽泻五味子和枸杞子等中草药组成, 处方立法主要以活血化瘀疏肝理气健脾祛湿祛痰化浊为主. 为有效地控制本品质量, 本文建立了全部药材的薄层鉴别和主要功效成分姜黄素与五味子醇甲含量的检测方法, 为该产品的质量控制提供了客观的定量评价方法, 也有助于该保健食品的研发工作和市场推广. 1 试药与仪器 1.1 试药姜黄素对照品 ( 批号 ) 五味子醇甲对照品 ( 批号 ) 姜黄对照药材( 批号 ) 泽泻对照药材( 批号 ) 白芍对照药材 ( 批号 ) 五味子对照药收稿日期 : ; 修回日期 : 基金项目 : 国家十一五科技支撑计划项目 (2006BAI06A20) 作者简介 : 吕晨 (1985 ), 女, 安徽淮北人, 硕士研究生 ; 通信作者 : 王大平, 主任中药师,wdpmy@yahoo.com.cn.

2 2010 年 8 月吕晨, 等 : 保利甘胶囊的质量标准研究 7 材 ( 批号 ) 和枸杞子对照药材 ( 批号 ), 中国药品生物制品检定所 ; 姜黄泽泻五味子白芍枸杞子药材, 河北金木药业有限公司 ; 乙醇和冰醋酸为分析纯, 天津科密欧化学试剂有限公司 ; 乙腈和甲醇为色谱纯, 德国 Merck 公司 ; 水为高纯水. 1.2 仪器 Waters 2695 型高效液相色谱仪及其工作站, 美国 Waters 公司 ;Mettler Toledo XS205 型十万分之一电子天平, 瑞士 Mettler Toledo 公司 ; 电热恒温水浴锅, 天津市通达实验电炉厂 ;KQ 250DB 型数控超声波清洗器, 昆山市超声仪器有限公司 ;WH 861 型漩涡混合器, 上海骥辉科学分析仪器有限公司 ; 硅胶板, 青岛海洋化工厂分厂. 2 定性方法与结果 2.1 姜黄的薄层色谱鉴别取本品试品 1,g 研细, 加无水乙醇 25,mL, 超声处理 15,min, 滤过, 滤液蒸干, 残渣加无水乙醇 1,mL 溶解, 作为供试品溶液. 另取姜黄对照药材 0.5,g, 同法制成对照药材溶液. 取除姜黄外的其他处方量药材, 按制备工艺方法制备阴性样品, 然后按上述供试品溶液处理方法制备不含姜黄的阴性样品溶液. 吸取上述 3 种溶液各 4,µL, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以三氯甲烷甲醇甲酸按体积比 96:3:1 为展开剂, 展开, 晾干, 置紫外灯 (365,nm) 下检视 [1]. 结果显示 : 供试品对照药材的色谱在相应位置上, 显相同颜色的荧光斑点, 阴性样品无干扰 ( 见图 1(a)). 2.2 五味子的薄层色谱鉴别取本品试品 1,g, 加 25,mL 三氯甲烷, 超声 15 min, 滤过, 滤液蒸干, 残渣加三氯甲烷 1,mL 使溶解, 作为供试品溶液. 另取五味子对照药材 0.5,g, 同法制成对照药材溶液. 取除五味子外的其他处方量药材, 按制备工艺方法制备阴性样品, 然后按上述供试品溶液处理方法制备不含五味子的阴性样品溶液. 吸取上述 3 种溶液各 4,µL, 分别点于同一硅胶 GF 254 薄层板上, 以正己烷甲酸乙酯甲酸按体积比 15:5:1 上层溶液为展开剂, 展开, 晾干, 分别置日光及紫外光灯 (254,nm) 下检视 [1]. 结果显示 : 供试品对照药材的色谱在相应位置上, 显相同颜色的荧光斑点, 阴性样品无干扰 ( 见图 1(b)). 2.3 白芍的薄层色谱鉴别取本品试品 1,g, 加无水乙醇 25,mL, 超声处理 15,min, 滤过, 滤液水浴蒸干, 残渣加无水乙醇 1,mL 使溶解, 作为供试品溶液. 另取白芍对照药材 0.5,,g, 同法制成对照药材溶液. 取除白芍外的其他处方量药材, 按制备工艺方法制备阴性样品, 然后按上述供试品溶液处理方法制备不含白芍的阴性样品溶液. 吸取上述 3 种溶液各 4,µL, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以氯仿醋酸乙酯甲醇甲酸按体积比 40 : 5:10:0.2 为展开剂, 展开, 晾干, 喷以 5% 香草醛硫酸试液, 加热至斑点显色清晰, 日光下检视 [1]. 结果显示 : 供试品对照药材的色谱在相对应的位置上, 出现相同的蓝紫色斑点, 阴性无干扰 ( 见图 1(c)). (a) 姜黄 (b) 五味子 (c) 白芍 (d) 泽泻 (e) 枸杞子 A. 供试品 ;B. 对照药材 ;C. 阴性对照图 1 姜黄五味子白芍泽泻和枸杞子的薄层色谱图 Fig.1 TLC of Curcuma longa,schisandra chinensis,paeonia lactiflora,alisma orientalis and Mespilus germanica 2.4 泽泻的薄层色谱鉴别取本品试品 1,g, 加甲醇 25,mL, 超声处理 15,min, 放冷, 滤过, 滤液蒸干, 残渣加甲醇 1,mL, 作为供试品溶液. 另取泽泻对照药材 0.5,g, 同法制成对照药材溶液. 取除泽泻外的其他处方量药材, 按制备工艺方法制备阴性样品, 按上述供试品溶液处理方法制备不含泽泻的阴性样品溶液. 吸取上述 3 种溶液各 4,µL, 分别点于同一块硅胶 GF 254 薄层板上, 以甲苯乙酸乙酯甲酸按体积比 10:3:0.2 为展开剂, 展开, 晾干, 喷以 10% 硫酸乙醇溶液,105 加热至斑点清晰. 结果显示 : 供试品对照药材的色谱在相对应的位置上, 出现相同的蓝紫色斑点, 阴性无干扰 ( 见

3 8 天津科技大学学报第 25 卷第 4 期图 1(d)). 2.5 枸杞子的薄层色谱鉴别取本品试品 1,g, 加水 70,mL, 加热煮沸 15,min, 放冷, 滤过, 滤液用乙酸乙酯 30,mL 振荡提取, 提取液浓缩至约 1,mL, 作为供试品溶液. 另取枸杞子对照药材 0.5,g, 同法制成对照药材溶液. 取除枸杞子外的其他处方量药材, 按制备工艺方法制备阴性样品, 然后按上述供试品溶液处理方法制备不含枸杞子的阴性样品溶液. 吸取上述 3 种溶液各 4,µL, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以乙酸乙酯三氯甲烷甲酸按体积比 3:2:1 上层溶液为展开剂, 展开, 晾干, 置紫外光灯 (365 nm) 下检视 [1]. 结果显示 : 供试品对照药材的色谱在相应位置上, 显相同颜色的荧光斑点, 阴性样品无干扰 ( 见图 1(e)). 制得阴性样品溶液. 过微孔过滤膜, 注入液相色谱仪测定, 结果表明, 阴性对照样品无姜黄素对照品的对应峰 ( 见图 2). (a) 姜黄素标准品色谱图 3 定量方法与结果 3.1 姜黄素含量的检测方法色谱条件的选择色谱柱为 Xterra RP18(4.6 mm 250 mm,5 µm), 流动相为乙腈 4% 冰乙酸溶液 ( 体积比为 48:52), 流量为 1.0 ml/min, 柱温 30.0, 检测波长 430 nm, 进样量 20 µl 对照溶液储备液的制备精密称取姜黄素对照品 10.29,mg, 置于 50,mL 容量瓶中, 用甲醇溶解定容至刻度, 混合即得质量浓度为 ,µg/mL 姜黄素对照品溶液储备液供试品溶液的制备精密称取粉碎后保利甘胶囊内容物 100,mg, 用甲醇定容至 50,mL, 超声提取 30,min, 冷却至室温, 用甲醇补足溶液减失的体积, 以 0.45,µm 微孔滤膜滤过线性关系的考察取 205.8,µg/mL 姜黄素对照品储备液, 精密移取该储备液 ,mL 分别置于 10 ml 容量瓶中, 加甲醇定容, 以 0.45,µm 微孔滤膜滤过, 分别注入高效液相色谱仪, 测定峰面积. 以峰面积积分值 y 为纵坐标, 以姜黄素质量浓度 x 为横坐标, 绘制标准曲线并进行回归计算, 得回归方程 y= x (R 2 = ,n=5). 结果表明, 姜黄素进样质量浓度在 5.15~102.90,µg/mL 范围内与峰面积呈良好的线性关系阴性对照实验取处方中除姜黄以外的其他组分, 按照保利甘胶囊工艺制得姜黄阴性样品, 按供试品溶液的制备方法 (b) 保利甘样品色谱图 (c) 姜黄阴性对照样品色谱图图 2 姜黄素标准品保利甘样品和姜黄阴性对照样品色谱图 Fig.2 Chromatogram of crcumin standards,baoligan Capsule and blank control of Curcuma longa 仪器精密度实验精密吸取同一姜黄素对照品溶液, 按上述色谱条件重复自动进样 6 次, 峰面积分别为 3,543,510 3,484,860 3,562,855 3,536,344 3,522,076 3,498,582, RSD=0.82%(n=6), 说明仪器的进样与检测精密度良好供试品溶液稳定性考察取同一供试品溶液在室温条件放置, 于 ,h 进样测定其峰面积, 结果 6 次测定峰面积分别为 2,479,800 2,460,445 2,468,073 2,453,607 2,446,927 2,445,461,RSD=0.538%, 说明供试品溶液

4 2010 年 8 月吕晨, 等 : 保利甘胶囊的质量标准研究 9 室温放置 24,h 基本稳定重复性实验取同一批供试品 5 份, 按供试品溶液的处理方法制备, 按色谱条件测试, 峰面积分别为 2,407,652 2,415,561 2,420,082 2,460,445 2,448,054,RSD=0.93% 回收率实验称取已知含量的同批样品 9 份, 精密称定,3 份为一组分别按姜黄素浓度的 0.8 倍 1 倍 1.2 倍精密加入一定量的姜黄素对照品溶液, 按色谱条件测得平均回收率为 98.02%,RSD=3.15%( 见表 1). 表 1 姜黄素加样回收率实验结果 (n=9) Tab.1 Results of rcovery test of crcumin(n=9) ml 分别置于 10,mL 容量瓶中, 加甲醇定容, 以 0.45 µm 微孔滤膜滤过, 分别注入高效液相色谱仪, 测定峰面积. 以峰面积积分值 y 为纵坐标, 以五味子醇甲浓度 x 为横坐标, 绘制标准曲线并进行回归计算, 得回归方程 y=40 832x ,(R 2 = ,n=5). 结果表明, 五味子醇甲的进样质量浓度在 5.22~ µg/ml 范围内与峰面积呈良好的线性关系阴性对照实验取处方中除五味子以外的其他组分, 按照保利甘胶囊工艺制得五味子阴性样品, 按供试品溶液的处理方法制得阴性样品溶液. 过微孔过滤膜, 注入液相色谱仪测定, 结果阴性对照样品无五味子醇甲对照品的对应峰 ( 见图 3). 样品中含量 /mg 对照品加入量 /mg 实测量 / mg 回收率 / % (a) 五味子醇甲标准品样品测定取 3 份保利甘胶囊内容物 100,mg, 精密称定, 按制备供试品溶液, 按项下色谱条件测定姜黄素含量,3 份样品姜黄素含量分别为 ,µg/g, 平均值为 1.83,µg/g. 3.2 五味子醇甲含量的检测方法色谱条件的选择色谱柱为 Xterra RP18(4.6,mm 250,mm,5,µm), 流动相为甲醇水 ( 体积比为 56.5:43.5), 流量为 1.0,mL/min, 柱温 30.0,, 检测波长 250,nm, 进样量 20,µL 对照品溶液储备液的制备精密称取五味子醇甲对照品 10.44,mg, 置于 50,mL 棕色容量瓶中, 用甲醇溶解定容至刻度, 混合即得质量浓度为 208.8,µg/mL 五味子醇甲对照品溶液储备液供试品溶液的制备精密称取粉碎后保利甘胶囊内容物 100,mg, 用甲醇定容至 25,mL, 超声振荡 30,min, 放冷, 用甲醇补足溶液减失的体积, 摇匀, 以 0.45,µm 微孔滤膜滤过线性关系的考察精密移取该储备液 (b) 保利甘样品 (c) 五味子阴性对照样品图 3 五味子醇甲标准品保利甘样品和五味子阴性对照样品色谱图 Fig.3 Chromatogram of standards schisandrin,baoligan Cpsule and blank control of Schisandra chinensis 仪器精密度实验精密吸取同一姜黄素对照品溶液, 按上述色谱

5 10 天津科技大学学报第 25 卷第 4 期条件重复自动进样 6 次, 峰面积分别为 1,759,773 1,759,929 1,763,719 1,763,582 1,762,991 1,764,511, RSD=0.10%(n=6), 说明仪器的进样与检测精密度良好供试品溶液稳定性考察取同一供试品溶液在室温条件放置, 于 ,h 进样测定其峰面积, 结果 6 次测定峰面积分别为 348, , , , , ,217,RSD = 6.82%, 其中 ,h,RSD = 1.12%, 说明供试品溶液室温放置 8,h 内稳定性良好, 8,h 后稳定性不佳重复性实验取同一批供试品 5 份, 按供试品溶液的处理方法进行样品前处理, 按色谱条件测试, 结果 5 份样品的峰面积分别为 396, , ,RSD=3.57% 回收率实验称取已知含量的同批样品 9 份, 精密称定, 按制备成供试品溶液,3 份为一组分别按五味子醇甲浓度的 0.8 倍 1 倍 1.2 倍精密加入一定量的五味子醇甲对照品溶液, 按色谱条件测定. 结果平均回收率为 98.50%,RSD=3.66%( 见表 2). 表 2 五味子醇甲加样回收率实验结果 (n=9) Tab.2 Results of recovery test of schisandrin(n=9) 样品中含量 /mg 对照品加入量 /mg 实测量 / mg 回收率 / % 样品测定取 3 份保利甘胶囊内容物 100,mg, 精密称定, 按方法制备供试品溶液, 按色谱条件测定五味子醇甲的含量,3 份样品五味子醇甲含量分别为 ,µg/g, 平均值为 1.48,µg/g. 4 讨论泽泻含有生物碱, 在生物碱的鉴别实验中大多存在拖尾严重的问题, 从而影响鉴别结果. 本实验在 TLC 鉴别实验中, 经过调整展开剂条件, 以甲苯乙酸乙酯甲酸按体积比 10:3:0.2 为展开剂, 喷以 10% 硫酸乙醇溶液,105, 加热至斑点清晰, 得到满意结果. 供试品色谱中, 在与对照药材色谱相应位置上显棕黄色斑点, 阴性样品无干扰. 含量测定项的流动相参考文献 [1] 中姜黄和五味子下的流动相组成. 经过调整, 以甲醇与水体积比 56.5:43.5 为流动相测定五味子醇甲的含量, 图谱分离度良好, 积分准确. 提取方法在参考文献 [2 6] 的基础上, 比较了加热回流 30,min 和超声提取 30,min 的提取效果, 结果无显著性差异, 考虑到后者操作简便易行, 故确定以超声法提取 30,min. 本实验建立 RP- HPLC 法, 以姜黄素和五味子醇甲为指标性成分进行含量测定, 专属性强, 准确度高, 重现性好, 可有效控制该制剂质量. 参考文献 : [1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典 ( 一部 )[M]. 北京 : 化学工业出版社,2000:48,165. [2] 吕武清, 龙新华. 中成药中的药材薄层色谱鉴别 [M]. 北京 : 人民卫生出版社,1997:396. [3] 张贵君. 常用中药鉴加大全 [M]. 哈尔滨 : 黑龙江科学技术出版社,1993:484. [4] 赵晓霞, 田丰, 胥云. RP-HPLC 测定姜黄中姜黄素的含量 [J]. 中国中药杂志,2003,28(8): [5] 张林疆, 刘唯芬, 毕开顺, 等. 五味子质量标准的研究 [J]. 辽宁中医学院学报,2004,6(3): [6] 张玉洁, 黄海欣. 利肝隆片质量标准研究 [J]. 中国实验方剂学杂志,2005,11(4):7-9.

麦门冬对照药材批号１２１０１３唱２０１３１０均购自中国食品药品检定研究院芪黄扶正颗粒批号１６０３０１１６０３１５１６０３３１福州总医院制剂室自制甲醇乙腈为色谱纯水为超纯水其余试剂为分析纯２ＴＬＣ鉴别２１黄芪取芪黄扶正颗粒１０ｇ溶解于５０ｍｌ水中

麦门冬对照药材批号１２１０１３唱２０１３１０均购自中国食品药品检定研究院芪黄扶正颗粒批号１６０３０１１６０３１５１６０３３１福州总医院制剂室自制甲醇乙腈为色谱纯水为超纯水其余试剂为分析纯２ＴＬＣ鉴别２１黄芪取芪黄扶正颗粒１０ｇ溶解于５０ｍｌ水中麦门冬对照药材批号１２１０１３唱２０１３１０均购自中国食品药品检定研究院芪黄扶正颗粒批号１６０３０１１６０３１５１６０３３１福州总医院制剂室自制甲醇乙腈为色谱纯水为超纯水其余试剂为分析纯２ＴＬＣ鉴别２１黄芪取芪黄扶正颗粒１０ｇ溶解于５０ｍｌ水中过滤后取滤液置分液漏斗中用水饱和正丁醇溶液萃取５０ｍｌ３合并正丁醇部位用氨试液洗涤