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1 592 中 国 药 事 2013 年 第 27 卷 第 6 期 药 物 研 究 芪 参 胶 囊 的 质 量 标 准 研 究 汪 冰, 林 永 强, 徐 丽 华 ( 山 东 省 食 品 药 品 检 验 所, 济 南 ) 摘 要 : 目 的 建 立 芪 参 胶 囊 的 质 量 标 准. 方 法 采 用 薄 层 色 谱 法 对 芪 参 胶 囊 中 三 七 人 参 制 何 首 乌 和 甘 草 进 行 定 性 鉴 别 ; 用 高 效 液 相 色 谱 法 G 蒸 发 光 散 射 检 测 器 (HPLCGELSD 法 ) 测 定 三 七 中 三 七 皂 苷 R1 和 黄 芪 中 黄 芪 甲 苷 的 含 量. 结 果 应 用 所 建 立 的 方 法 对 样 品 进 行 定 性 与 定 量 分 析, 结 果 在 TLC 色 谱 中 均 可 检 出 与 对 照 品 或 对 照 药 材 相 同 的 斑 点, 且 阴 性 无 干 扰. 三 七 皂 苷 R1 进 样 量 在 ~7 6392μg 范 围 内, 其 对 数 值 与 峰 面 积 对 数 值 呈 良 好 的 线 性 关 系, 平 均 加 样 回 收 率 为 97 66%,RSD 为 1 66%; 黄 芪 甲 苷 进 样 量 在 ~4 9152μg 范 围 内, 其 对 数 值 与 峰 面 积 对 数 值 呈 良 好 的 线 性 关 系, 平 均 加 样 回 收 率 为 %,RSD 为 1 57%. 结 论 该 方 法 操 作 简 便, 重 现 性 好, 结 果 准 确 可 靠, 可 用 于 芪 参 胶 囊 的 质 量 控 制. 关 键 词 : 薄 层 色 谱 法 ; 高 效 液 相 色 谱 G 蒸 发 光 散 射 检 测 器 法 ; 芪 参 胶 囊 ; 三 七 皂 苷 R1; 黄 芪 甲 苷 中 图 分 类 号 :R284 1 文 献 标 识 码 :A 文 章 编 号 :1002G7777 (2013)06G0592G05 StudyonQualityStandardofQishenCapsules WangBing,LinYongqiangandXuLihua(ShandongInstituteforFoodandDrugControl,Jinan250101) ABSTRACT: ObjectiveToestablishthequalitystandardofQishenCapsules.MethodsThethinlayer chromatography was used to identify Radix notoginseng,ginseng, Radix polygonum multiflorum preparataandradixglycyrrhizaein QishenCapsules,andthehighperformanceliquidchromatographyG evaporativelightgscateringdetector wasusedtodeterminethecontentofnotoginsenoside R1in Radix notoginseng and astragaloside in Astragali radix.results Samples were analyzed qualitatively and quantitativelybythe developed methods.thecharacteristicspots which werethesameasthose of referencesubstances/referencecrudematerialswereobviousinthechromatogram by TLC,andthetest showednegativeofinterference.there wasagoodlinearrelationship betweenthelogarithmicofthe absorption area and the logarithmic of the concentration in the range of G μg for notoginsenosider1and0 6144G4 9152μgforastragaloside.Theiraveragerecoveriesofstandardaddition were97 66% and100 51%,RSDs were1 66% and1 57% (n =6),respectively.Conclusion These methodsaresimple,repeatableandaccurate,andcanbeusedforthequalitycontrolofqishencapsules. KEY WORDS: TLC;HPLCGELSD;QishenCapsules;notoginsenosideR1;astragaloside 芪 参 胶 囊 由 黄 芪 人 参 三 七 制 何 首 乌 甘 草 等 十 五 味 药 组 成, 具 有 益 气 活 血 化 瘀 止 痛 的 功 效. 临 床 用 于 冠 心 病 稳 定 型, 劳 累 型 心 绞 痛 Ⅰ Ⅱ [1G4] 级 的 治 疗. 该 品 种 现 行 标 准 为 国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 局 标 准 YBZ , 标 准 虽 已 收 载 水 蛭 的 显 微 鉴 别, 三 七 皂 苷 R1 ( 三 七 ) 川 芎 大 黄 素 ( 制 何 首 乌 ) 葛 根 素 ( 葛 根 ) 黄 芩 苷 ( 黄 芩 ) 的 TLC 鉴 别, 丹 参 酮 ⅡA ( 丹 参 ) 的 HPLC 含 量 测 定, 人 参 皂 苷 Rb1 ( 三 七 人 参 ) 的 TLCS 含 量 测 定 ; 仍 缺 乏 对 其 他 药 味 的 质 量 控 制, 同 时 原 有 的 方 法 部 分 检 测 项 目 缺 乏 专 属 性, 如 对 制 何 首 乌 的 鉴 别 以 大 黄 素 为 指 标 成 分, 以 及 对 三 七 人 参 中 共 有 成 分 人 参 皂 苷 Rb1 进 行 TLCS 含 量 测 定. 为 控 制 药 品 质 量, 增 强 标 准 的 约 束 力, 保 证 临 床 用 药 的 安 全 性 作 者 简 介 : 汪 冰, 主 管 药 师 ; 研 究 方 向 : 中 药 分 析 ;Tel:(0531) ;EGmail:wwhbing@163 com

2 中国药事 年第 7 卷第 6 期 59 和有效性,本文对处方中的三七和人参同时进行薄 层色谱鉴别,对制何首乌和甘草采用薄层色谱法进 行鉴别,并采用高效液相色谱法 蒸发光散射检测 器 (HPLCELSD 法 ) 测 定 三 七 中 三 七 皂 苷 R 黄芪中黄芪 甲 苷 的 含 量,建 立 的 定 性 定 量 方 法, 简便 准确 专属性强 [58]. 仪器与试药 Ag i l e n t 高效液相色谱仪,Al l t e c h ELSD 检测器,METTLERAE4 电子天平. 芪参胶囊 (河南省新谊药业股份有 限公司,编 号为 ~6). 对 照 品: 黄 芪 甲 苷 (批 号:78 6) 三七皂苷 R (批号:745 ) 人 参皂苷 Rg (批号:7 7) 人参皂苷 Rb (批号 74 9),,5,4 四 羟 基 二 苯 乙 烯 O 葡 萄 糖 苷 (批 号:844 98); 对 βd 照药 材: 制 何 首 乌 (批 号:454 4) 甘 草 (批号:94 5);均由中国药品生物制品检 定所 提 供.乙 腈 为 色 谱 纯,纯 净 水 为 MILL I PORE 纯水,其余试剂均为分析纯. 鉴别 三七和人参薄层色谱鉴别 取含量测 定 项 下 的 供 试 品 溶 液 作 为 该 薄层鉴别的供试品溶液.取人参皂苷 Rg 人参皂 苷 Rb 三七皂苷 R 对照品,加甲醇制成每mL 各含 mg 的混合溶 液, 作 为 对 照 品 溶 液. 取 按 处 方除去三七和人参的阴性样品,同法制成阴性对照 溶液.吸 取 上 述 供 试 品 溶 液 5 μl 对 照 品 溶 液 μl 阴性对照 溶 液 5μL, 分 别 点 于 同 一 硅 胶 G 板上使成 条 带 状, 以 三 氯 甲 烷甲 醇水 ( 7 缺三七 人参阴性对照;~4 ~ 号供试品;5 人参皂苷 Rg (上) 三七皂苷 R (中) 人参皂苷 Rb (下) 对照品. 图 三七和人参薄层色谱图 苯乙烯 O βd葡萄 糖 苷 对 照 品, 加 甲 醇 制 成 每 ml 含 5 mg 的 溶 液, 作 为 对 照 品 溶 液. 取 按 处方除去制何首乌的阴性样品,同法制成阴性对照 溶液.吸取上述供 试 品 溶 液 5μL 对 照 药 材 和 对 照 品 溶 液 各 μl 阴 性 对 照 溶 液 5 μl, 分 别 点 于 同 一 硅 胶 G 板 上, 以 甲 苯乙 酸 乙 酯丙 酮水 ( 7 65 55 ) 为 展 开 剂, 展 开, 取 出, 晾 干, 喷以磷钼酸硫酸溶液 (取 磷 钼 酸 g, 加 水 ml 使溶解,再缓缓 加 入 硫 酸 ml, 摇 匀), 加 热 至 斑点显色清晰.供试品色谱中,在与对照药材色谱 和对照品色谱 相 应 的 位 置 上, 显 相 同 颜 色 的 斑 点. 阴性对照无干扰.见图. ) 以 下 放 置 的 下 层 溶 液 为 展 开 剂, 以 下展 开, 取 出, 晾 干, 喷 以 硫 酸 乙 醇 溶 液, 在5 加热至斑点显色清晰.供试品色谱 中,在 与对照品色谱 相 应 的 位 置 上, 显 相 同 颜 色 的 斑 点. 阴性对照无干扰.见图. 制何首乌薄层色谱鉴别 取本品内容 物 g,加 甲 醇 ml, 超 声 (功 率: W,频率:4kHz) 处 理 mi n, 滤 过, 滤液蒸干,残渣加水 ml 使溶解,加乙醚提取 次,每次 ml,弃去乙醚液,加乙酸乙酯 提 取 次,每次 ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加 甲醇 ml 使溶解,作为供试品溶液.另取何 首 乌 对照药材 5g, 加 乙 醇 5 ml, 回 流 提 取 h, 放冷, 滤 过, 滤 液 蒸 干, 残 渣 加 乙 醇 ml 使 溶 解,作为对照药材溶液.再取,, 5, 4 四 羟 基 二 缺制何首乌阴性对照;~4 ~ 号供试品; 5 制何首乌对照药材;6 四羟基二苯乙烯葡萄糖苷对照品. 图 制何首乌薄层色谱图 甘草薄层色谱鉴别 取 鉴别 项 下 的 供 试 品 溶 液 作 为 该 薄 层

3 中国药事 年第 7 卷第 6 期 594 鉴别的供试品溶 液.取 甘 草 对 照 药 材 5g, 加 甲 醇 ml,加热回 流 h,滤 过,滤 液 蒸 干,残 渣 加水 4 ml 使溶解,用水饱和的正丁醇提取 次, 每次 ml, 合 并 正 丁 醇 液, 用 水 ml 洗 涤, 弃去洗涤液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇 ml 使 溶解,作为对照药材溶液.取按处方除去甘草的阴 性样品,同法制成阴性对照溶液.吸取上述供试品 溶液 5μL 及 对 照 药 材 溶 液 μl 阴 性 对 照 溶 液 5μL,分别点于 同 一 硅 胶 G 薄 层 板 上, 以 三 氯 甲 烷甲醇水 ( 7 ) 以下放置的下层溶液 为展开 剂, 展 开, 取 出, 晾 干, 喷 以 硫 酸 乙 黄芪甲苷 mg 的混合溶液. 供试品溶液的制备 取本品 内 容 物, 研 匀, 取 约 g, 精 密 称 定, 置具塞锥形 瓶 中, 精 密 加 入 甲 醇 5 ml, 称 定 重 量,超 声 处 理 (功 率: W, 频 率:4 khz) mi n,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重 量,摇匀,滤过, 精 密 量 取 续 滤 液 5 ml, 蒸 干, 残渣加水 ml 使溶解,加水饱和的正丁醇提取 5 次 ( ml), 合 并 正 丁 醇 提 取 液,用浓氨试液洗涤 次,每次 ml,弃去洗涤 液,正丁 醇 液 蒸 干, 残 渣 加 甲 醇 溶 解 并 转 移 置 醇溶液,在5 加热至斑点显色清晰.置日光下 5 ml 量瓶中,加 甲 醇 至 刻 度, 摇 匀, 滤 过, 取 续 滤液,即得. 置上,显 相 同 颜 色 的 斑 点. 阴 性 对 照 无 干 扰. 见 4 阴性对照溶液的制备 取 按 处 方 除 去 三 七 和 黄 芪 的 阴 性 样 品, 按 检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位 图. 项下的制备方法制备阴性对照溶液. 5 干扰试验 分别精密吸取上述对照品溶液 供试品溶液和 阴性 对 照 溶 液 各 μl, 注 入 液 相 色 谱 仪, 按 项下的色谱条 件 测 定, 结 果 供 试 品 色 谱 中, 在与对照品色谱保留时间相同的位置上,有相应色 谱峰,而阴性对 照 色 谱 在 与 三 七 皂 苷 R 和 黄 芪 甲 苷相应保留时间处,无干扰峰出现,说明处方中其 他药味对测定结果无干扰.见图 4. 缺甘草阴性对照;~4 ~ 号供试品;5 甘草对照药材. 含量测定 色谱条件 图 甘草薄层色谱图 色 谱 柱: Hype r s i l BDS C8 ( 4 6 mm 5 mm, 5μm);流动相: 乙 腈 为 流 动 相 A 水 为 流动 相 B 进 行 线 性 洗 脱,~ mi n,9 A A,~9 mi n, A A,9~mi n, A A,6~4 mi n, A A;流 速: ml mi n ;柱温:5 ;进样量:μL; 蒸发 光 检 测 器,气 体 流 量: 6SLM, 漂 移 管 温 度:9. 理 论 板 数: 按 三 七 皂 苷 R 峰 计 算 为 9869;分离度:三七 皂 苷 R 峰 与 相 邻 峰 为 4 黄芪甲苷峰与相邻峰为. 对照品溶液的制备 取三七皂 苷 R 和 黄 芪 甲 苷 对 照 品 适 量, 精 密 称定,加甲醇制成每 ml 含三七皂苷 R 4mg 6 线性关系考察 分 别 精 密 吸 取 三 七 皂 苷 R 对 照 品 溶 液 ( 444 mg ml ) 6 9 5 8 μl, 黄芪 甲 苷 对 照 品 溶 液 ( 48 mg ml ) 6 9 5 8 4μL,注入液相色谱仪,测 定峰面积积 分 值. 分 别 以 三 七 皂 苷 R 黄 芪 甲 苷 对照品进样 量 的 对 数 值 为 横 坐 标 ( X ), 峰 面 积 积 分值的对数值 为 纵 坐 标 ( Y ), 绘 制 标 准 曲 线, 计 算回归方程: Y 三 七 皂 苷 R 484X 4 485 r 999 ( n 6) Y 黄 芪 甲 苷 55X 4 6 r 9996 ( n 8) 结果表明,三七 皂 苷 R 和 黄 芪 甲 苷 进 样 量 分 别 在 7~7 69μg 和 644~4 95μg 之 间 其 对数值与峰面积积分值的对数值分别呈良好的线性 关系. 7 精密度试验 精密吸 取 对 照 品 溶 液 μl, 按 上 述 色 谱 条 件,重复进样 6 次,记录色谱峰面积,计算三七皂 苷 R 黄芪甲苷色谱峰面积积分对数值的 RSD 分 别为 5,表明精密度良好.

4 中国药事 年第 7 卷第 6 期 595 a 对照品;b 供试品;c 阴性对照; 三七皂苷 R对照品; 黄芪甲苷对照品. 图 4 芪参胶囊 HPLC 色谱图 8 稳定性试验 精密吸取 号供试品溶液 μl,按 上 述 色 谱 条件,分别于 4 6 8 6 4h 测定,记录 色 谱 峰 面 积, 计 算 三 七 皂 苷 R 黄 芪 甲苷色谱峰面积积分对数值的 RSD 分别为 4,表明供试品溶液在 4h 内基本稳定. 9 重复性试验 取 号样品,共 6 份,按供试品溶液制备方法 制备,测 定, 计 算 含 量, 三 七 皂 苷 R 黄 芪 甲 苷 平均 含 量 分 别 为 8665 54 mg g,rsd 分别为 6 75,表明重复性良好. 加样回收率试验 精密称取已知含量的 号样品,共 6 份,每份 5g.精密加入混合对照品甲醇溶液 (含三七皂苷 R 4mg ml,黄芪甲苷 96 mg ml ) ml,精密加入甲醇5ml,按供试品溶液制备 方法制备,并按上述色谱条件测定,计算 种成分 的回收率,结果见表. 表 回收率测定结果 成分 三七皂苷 R 样品含量 加入量 测得量 回收率 平均回收率 58 6 584 98 7 4 6 56 96 788 7 5 5 黄芪甲苷 999 87 845 86 868 87 84 6 6 6 6 988 988 988 988 988 988 59 56 44 56 767 96 74 759 66 66 5 57 95 76 99 87 99 75 6 78 98 88 775 686 554 48 RSD 778

5 596 中 国 药 事 2013 年 第 27 卷 第 6 期 3 11 样 品 测 定 取 6 批 样 品, 按 建 立 的 方 法 测 定 三 七 皂 苷 R1 和 黄 芪 甲 苷 的 含 量. 分 别 精 密 吸 取 对 照 品 溶 液 5 10μL, 供 试 品 溶 液 10μL, 注 入 液 相 色 谱 仪, 测 定, 以 外 标 两 点 法 对 数 方 程 计 算, 即 得. 结 果 见 表 2. 表 2 样 品 测 定 结 果 (n=3) 编 号 三 七 皂 苷 R1 RSD 黄 芪 甲 苷 RSDV (mg 粒 G1) (%) (mg 粒 G1) (%) 讨 论 4 1 薄 层 色 谱 鉴 别 以 大 黄 素 为 指 标 成 分 对 制 何 首 乌 进 行 鉴 别 缺 乏 专 属 性, 故 本 文 采 用 二 苯 乙 烯 苷 对 照 品 和 制 何 首 乌 对 照 药 材 对 制 何 首 乌 进 行 鉴 别. 制 何 首 乌 的 鉴 别 中, 曾 采 用 三 氯 甲 烷 G 甲 醇 (7 3) 为 展 开 剂, 再 [9] 以 三 氯 甲 烷 G 甲 醇 (20 1) 为 展 开 剂 二 次 展 开 ; 以 及 乙 酸 乙 酯 G 甲 酸 G 冰 醋 酸 G 水 ( ) 作 为 展 开 剂, 其 分 离 效 果 均 不 及 以 甲 苯 G 乙 酸 乙 酯 G 丙 酮 G 水 ( ) 为 展 开 剂. 4 2 含 量 测 定 提 取 方 法 考 察 为 了 保 证 含 量 测 定 的 准 确 性, 对 供 试 品 溶 液 制 备 方 法 中 样 品 的 取 样 量 (1 3 5g) 超 声 提 取 时 间 ( min) 及 正 丁 醇 提 取 次 数 ( 次 ) 进 行 考 察, 结 果 采 用 取 样 品 3g, 超 声 30min, 提 取 5 次 为 宜. 4 3 含 量 测 定 耐 用 性 考 察 同 时 对 Kromasil100AC18(4 6mm 250mm, 5μm) ThermodC18 (4 6 mm 250 mm,5μm) 等 色 谱 柱 按 上 述 色 谱 条 件 进 行 试 验, 结 果 色 谱 峰 的 峰 形 较 好, 各 峰 之 间 的 分 离 度 均 大 于 含 量 测 定 检 测 方 法 考 察 在 对 供 试 品 溶 液 进 行 检 测 时, 曾 采 用 紫 外 [10G12] 203nm 对 三 七 皂 苷 R1 进 行 检 测, 但 多 次 调 整 色 谱 条 件, 供 试 品 色 谱 杂 质 峰 均 较 多, 对 所 要 测 定 成 分 干 扰 严 重 ; 而 采 用 蒸 发 光 检 测 器 检 测, 消 除 了 杂 质 干 扰, 并 且 可 以 同 时 对 三 七 皂 苷 R1 和 黄 芪 甲 苷 进 行 测 定, 操 作 简 便 快 捷, 试 验 结 果 表 明 该 方 法 重 复 性 好, 结 果 准 确 可 靠. 参 考 文 献 : [1] 张 斌. 芪 参 胶 囊 治 疗 冠 心 病 心 绞 痛 ( 气 虚 血 瘀 证 ) 疗 效 观 察 [J]. 中 国 中 医 急 症,2010,(10):1773G1774. [2] 李 新 华, 徐 贵 银, 郭 立 军. 芪 参 胶 囊 治 疗 稳 定 型 心 绞 痛 疗 效 观 察 [J]. 临 床 医 学,2010,(9):117G118. [3] 李 玉 岭. 芪 参 胶 囊 治 疗 冠 心 病 心 绞 痛 气 虚 血 瘀 证 120 例 [J]. 河 南 中 医,2010,(08):770G771. [4] 尚 景 和. 芪 参 胶 囊 治 疗 心 绞 痛 临 床 观 察 [J]. 中 成 药, 2003,(4):303G304. [5] 刘 炜, 吴 义 忠. 舒 胸 片 中 人 参 皂 苷 Rg1 人 参 皂 苷 Rb1 三 七 皂 苷 R1 的 含 量 测 定 [J]. 中 国 医 药 导 报,2010, (10): 84G85. [6] 郭 小 春, 陈 金 霞.HPLC 测 定 黄 芪 建 中 丸 中 黄 芪 甲 苷 的 含 量 [J]. 江 西 中 医 药,2009,(10):67G68. [7] 周 迎 春, 赵 怀 清, 梁 宁, 等. 高 效 液 相 色 谱 法 同 时 测 定 三 七 总 皂 苷 中 人 参 皂 苷 Rg1 Re Rb1 与 三 七 皂 苷 R1 含 量 [J]. 沈 阳 药 科 大 学 学 报,2003,(1):27G31. [8] 张 永 昕, 俞 发.HPLC 法 测 定 活 血 止 痛 片 中 三 七 皂 苷 R1 人 参 皂 苷 Rg1 Re Rb1 含 量 [J]. 中 药 材,2008, (5): 771G773. [9] 中 国 药 典 [S]. 一 部,2010:164G165. [10] 宋 恬, 李 桥, 何 再 安, 等.RPGHPLC 测 定 脑 得 生 软 胶 囊 中 三 七 皂 苷 R _1 人 参 皂 苷 Rb_ 1 及 人 参 皂 苷 Rg_ 1 含 量 [J] 中 成 药,2009,(2):237G240. [11] 汪 霞.RPGHPLC 法 测 定 舒 胸 胶 囊 中 三 七 皂 苷 R1 人 参 皂 苷 Rg1 的 含 量 [J]. 中 国 药 事,2011,(3):289G291. [12] 代 龙.HPLC 法 测 定 血 塞 通 分 散 片 中 三 七 皂 苷 R1 及 人 参 皂 苷 Rg1 Rb1 的 含 量 [J]. 齐 鲁 药 事,2009,28 (6):333G 335. ( 本 文 编 辑 王 雅 雯 )

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