实验室常用培养基的配制方法

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汗情车
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1 实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin( 氨卡青霉素 )(100 mg/ml) 100 mg/ml Ampicillin 50 ml 配制方法 1. 称量 Ampicillin 置于 50 ml 离心管中 ; 2. 加入 40 ml 灭菌水, 充分混合溶解后, 定容至 50 ml; 3. 用 0.22 µm 过滤膜过滤除菌 ; 4. 小份分装 (1 ml/ 份 ) 后,-20 保存 IPTG( 异丙基 -β-d- 硫代半乳糖苷 )(24 mg/ml) 24 mg/ml IPTG 50 ml 配制方法 1. 称 1.2 g IPTG 置于 50 ml 离心管中 ; 2. 加入 40 ml 灭菌水, 充分混合溶解后, 定容至 50 ml; 3. 用 0 22 µm 过滤膜过滤除菌 ; 4. 小份分装 (1 ml 份 ) 后,-20 保存 X-Gal (20 mg/ml) 20 mg/ml X-Gal 50 ml 配制方法 1. 称量 l g X-Gal 置于 50 ml 离心管中 ; 2. 加入 40 ml DMF( 二甲基甲酰胺 ), 充分混合溶解后, 定容至 50 ml; 3. 小份分装 (1 ml/ 份 ) 后,-20 避光保存 LB 培养基 1%(W/V)( 胰蛋白胨 ),0.5%(W/V)( 酵母提取物 ), 1%(W/V)

2 3. 滴加 5 N NaOH( 约 0.2 m1), 调节 ph 值至 7.0; 4. 加去离子水将培养基定容至 ; 5. 高温高压灭菌后,4 C 保存 LB/Amp 培养基 1%(W/V) 0.5%(W/V) 1%(W/V) 0.1 mg/ml Ampicillin 3. 滴加 5 N NaOH( 约 0.2 ml) 调节 ph 值至 7.0; 4. 加去离子水将培养基定容至 ; 5. 高温高压灭菌后, 冷却至室温 ; 6. 加入 1 ml Ampicillin(100 mg/ml) 后均匀混合 ; 7. 4 保存

3 TB 培养基 1.2%(W/V) 2.4%(W/V) 0.4%(V/V) 17mM 72mM KH2PO4 K2HPOa 1.L 配制方法 1. 配制磷酸盐缓 ; 中液 (0.17 M KH 2 PO4,0.72 M K 2 HPO 4 )100 ml; 溶解 2.31 g KH 2 PO 4 和 l2.54 g K 2 HPO 4 于 90 ml 的去离子水中, 搅拌溶解后, 加去离子水定容至 100 ml, 高温高压灭菌 ; 2. 称取下列试剂, 置于 l L 烧杯中 ; 12 g 24 g 4 m 3. 加入约 800 ml 的去离子水, 充分搅拌溶解 ; 4. 加去离子水将培养基定容至后, 高温高压灭菌 ; 5. 待溶液冷却至 60 以下时,; 加入 100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲液 ; 6. 4 保存 TB/Amp 培养基 1.2%(W/V) 2.4%(W/V) 0.4%(V/V) 17 mm KH2PO4 72 mm K2HPO4 0.1 mg/ml Ampicillin 配制方法 1. 配制磷酸盐缓冲液 (0.17 M KH 2 PO 4,0.72 M K 2 HPO 4 )100 ml;

4 溶解 2.31 g KH 2 PO 4, 和 12.54g K 2 HPO 4 于 90 ml 的去离子水中, 搅拌溶解后, 加去离子水定容至 100 ml, 高温高压灭菌 ; 2. 称取下列试剂, 置于 l L 烧杯中 ; 12 g 24 g 4 ml 3. 加入约 800 ml 的去离子水, 充分搅拌溶解 ; 4. 加去离子水将培养基定容至 l L 后, 高温高压灭菌 ; 5. 待溶液冷却至 60 以下时, 加入 100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲液 ; 6. 均匀混合后 4 保存 SOB 培养基 2%(W/V) 0.5%(W/V) 0.05%(W/V) 2.5mM KCl 10 mm MgCl2 配制方法 1. 配制 250 mm KCl 溶液 ; 在 90 ml 的去离子水中溶解 l.86 g KCl 后, 定容至 100 ml 2. 配制 2 M MgCl 2 溶液 ; 在 90 ml 去离子水中溶解 19 g MgCl 2 后, 定容至 100 ml, 高温高压灭菌 3. 称取下列试剂, 置于 l L 烧杯中 ; 20 g 加入约 800 ml 的去离子水, 充分搅拌溶解 ; 5. 量取 10 m1 250 mm KCl 溶液, 加入到烧杯中 ; 6. 滴加 5 N NaOH 溶液 ( 约 0.2 m1), 调节 ph 值至 7.0;

5 7. 加入去离子水将培养基定容至 l L; 8. 高温高压灭菌后,4 保存 ; 9. 使用前加入 5 ml 灭菌的 2 M MgCl 2 溶液 SOC 培养基 2%(W/V) 0.5%(W/V) 0.05%(W/V) 2.5 mm KCl 10 mm MgCl2 20 mm Glucose 100 ml 配制方法 1. 配制 l M Glucose 溶液 ; 将 18 g Glucose 溶于 90 ml 去离子水中, 充分溶解后定容至 100 ml 用 0.22 µm 滤膜过滤除菌 ; 2. 向 l 00 ml SOB 培养基中加入除菌的 1 M Glucose 溶液 2 ml, 均匀混合 ; 3. 4 保存 2 YT 培养基 1.6%(WV),1%(W/V),0.5%(W/V) 16 g 3. 滴加 5 N NaOH, 调节 ph 值至 7.0; 4. 加去离子水将培养基定容至 ; 5. 高温高压灭菌后,4 保存

6 Фb broth 2%(W/V),0.5%(W/V),o 5%(W/V)MgSO 4 7H 2 O MgSO4 7H2O 20 g 3. 滴加 1 N KOH 调节 ph 值至 7.5; 4. 加去离子水将培养基定容至 ; 5. 高温高压灭菌后,4 保存 NZCYM 培养基 0.5%(WV) 0.1%(WV) Casamino Acid( 酪蛋白氨基酸 ) 1%(WV) 0.5%(WV) 0.2%(WV) NZ 胺 MgSO4 7HO 配制方法 1. 称取下列试剂置于 l L 烧杯中 ; Casamino Acid NZ 胺 MgSO4 7HO 1 g 2 g 3. 滴加 5 N NaOH( 约 0.2 m1), 调节 ph 值至 7.0; 4. 加去离子水将培养基定容至 ;

7 5. 高温高压灭菌后,4 保存 NZYM 培养基 0.5%(WV) 1%(WV) 0.1%(WV) 0.2%(WV) NZ 胺 MgSO4 7HO 配制方法 NZYM 培养基除不含 Casamino Acid 外, 其他成份与 NZCYM 培养基相同 NZM 培养基 1%(WV) 0.1%(WV) 0.2%(WV) NZ 胺 MgSO4 7HO 配制方法 NZM 培养基除不含 ( 酵母提取物 ) 外, 其他成份与 NZYM 培养基相同一般固体培养基的配制配制方法 1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基, 在高温高压灭菌前, 加入下列试剂中的一种 ; Agar( 琼脂 ; 铺制平板用 ) Agar( 琼脂 ; 配制顶层琼脂用 ) Agarose( 琼脂糖 ; 铺制平板用 ) Agarose( 琼脂糖 ; 配制顶层琼脂用 ) 1/L 7 g/l 1/L 7 g/l 2. 高温高压灭菌后, 戴上手套取出培养基, 摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀 ( 此时培养基温度很高, 小心烫伤 ); 3. 待培养基冷却至 50~60 时, 加入热不稳定物质 ( 如抗生素等 ), 摇动容器充分混匀 ; 4. 铺制平板 (30~35 ml 培养基 /90 mm 培养皿 )

8 LB/Amp/X-Gal/LPTG 平板培养基 1%(W/V) 0.5%(W/V) 1%(W/V) 0.1 mg/ml Ampicillin 0.024mg/ml IPTG 0.04 mg/ml X-GaL 1.5%(W/V) Agar 3. 滴加 5 N NaOH( 约 0.2 ml), 调节 ph 值至 7.0; 4. 加去离子水将培养基定容至后, 加入 1 Agar; 5. 高温高压灭菌后, 冷却至 60 左右 ; 6. 加入 1 ml Ampicillin(100 mg/ml) 1 ml IPTG(24 mg/ml) 2 ml X-Gal(20 mg/ml) 后均匀混合 ; 7. 铺制平板 (30~35 ml 培养基 /90 mm 培养皿 ); 8. 4 避光保存 TB/Amp/X-Gal/LPTG 平板培养基 1.2%(W/V) 2.4%(W/V) 0.4%(V/V)

9 17 mm KH2PO4 72 mm K2HPO4 0.1 mg/ml Ampicillin mg/ml IPTG 0.04mg/mL 1.5%(W/V) X-GaL Agar 配制方法 1. 配制磷酸盐缓冲液 (0.17 M KH 2 PO 4,0.72 M K 2 HPO 4 )100 ml; 溶解 2.31 g KH 2 PO 4 和 g K 2 HPO 4 于 90 ml 的去离子水中, 搅拌溶解后, 加去离子水定容至 100 ml, 高温高压灭菌 2. 称取下列试剂, 置于 l L 烧杯中 ; 12 g 24 g 4 ml 3. 加入约 800 ml 的去离子水, 充分搅拌溶解 ; 4. 加去离子水将培养基定容至后加入 l Agar; 5. 高温高压灭菌后, 冷却至 60 左右 ; 6. 加入 100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲液 l ml Ampicillin (100mg/ml) 1 ml IPTG(24mg/mL) 2 ml X-Gal(20 mg/ml) 后均匀混合 ; 7. 铺制平板 (30~35 ml 培养基 /90 mm 培养皿 ); 8. 4 避光保存

3 4 5 1 1-20 4 2, 260mOsm/kg 320 mosm/kg HEPES ph 7.2-7.4 ph ph (7.4-7.7), ph (7.0-7.4) NaHCO 3 CO 2 CO 2 CO 2 5 2

1 (1) (2) ( ) (3) (4) (5) (1) (2) (3) 2 (1) ( ) (2) (3) (4) 1 2 1 3 4 5 1 1-20 4 2, 260mOsm/kg 320 mosm/kg HEPES ph 7.2-7.4 ph ph (7.4-7.7), ph (7.0-7.4) NaHCO 3 CO 2 CO 2 CO 2 5 2 NaHCO 3 1.97g/L CO 2