中药申报资料模板 - 中药学讨论版 - 爱爱医-华人医学论坛 - 医学专业交流与执业医师考试

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1 申报资料目录 ( 一 ) 综述资料 1 药品名称 2 证明性文件 3 立题目的与依据 4 对主要研究成果的总结与评价 5 药品说明书样稿 起草说明及最新参考文献 6 包装 标签设计样稿 ( 二 ) 药学研究资料 7 药学研究资料综述 8 药材来源及鉴定依据 12 生产工艺的研究资料及文献资料, 辅料来源及质量标准 15 药品标准草案及起草说明, 并提供药品标准物质的有关资料 16 样品及检验报告书 17 药物稳定性研究的试验资料及文献资料 18 直接接触药品的包装材料和容器的选择依据及质量标准 ( 一 ) 综述资料 1 药品名称 : 汉语拼音 : 命名依据 : 根据 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册 页 2 证明性文件: 附件 1 药品生产企业许可证 复印件 附件 2 营业执照 复印件 附件 3 GMP 认证证书 复印件 附件 4 不侵权行为保证书 附件 5 药品包装材料和容器注册证 复印件 3 立题目的与依据 中药 处方来自 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册 页 处方 由 等十七味中药构成, 其中 的作用为清热解毒 消肿散结, 利尿通 淋 ; 的作用为泻热通肠 凉血解毒, 逐淤通经 ; 的作用为清热燥湿, 泻火除蒸, 解毒 疗疮 因此, 具有, 消肿止痛的功效 对于脏腑毒热, 血液不清引起的, 血淋, 白浊, 尿道刺痛, 大便秘结, 疥疮,, 红肿疼痛均有很好的疗效, 受到广大医药工作者和患 者的欢迎, 市场前景广阔 所以, 我们选择了这个品种, 通过试验对其生产工艺及质量标准 进行了研究, 进一步加强了生产过程中的中间体及产品的质量控制, 提高了产品的质量

2 4 对主要研究成果的总结及评价: 收载于 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册, 根据国家有关药品 管理的政策要求, 现按中药注册分类第 11 类要求开展有关的研究工作, 现将各项研究工作 总结如下 : 4.1 工艺研究 我们对的提取工艺进行了研究 其君药大黄的主要有效成分是蒽醌甙类物质, 我们以大黄酚 作为对照品, 用 HPLC 法测定大黄酚的含量, 计算提取过程中大黄酚的转移率, 以确定最佳 的提取条件 经试验证明水提以 20 倍水量为宜, 即第一次 8 倍水量, 第二次 6 倍水量, 第 三次 6 倍水量, 大黄酚的转移率达到 83.1%, 提取收膏率为 19.2%( 比重为 1.35,50 ), 加入处 方量的, 减压干燥, 粉碎后装入胶囊, 成品收率为 98% 以上 4.2 质量与质量标准的研究 根据 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册 项下质量标准要求, 我们对原标准项下内容进行了验证, 同时在原标准基础上增加了高效液相色谱法测定 中的 大黄酚含量测定方法, 以大黄酚为对照品 ( 中国药品生物制品检定所提供 ), 样品在与对照 品相应保留时间均出现吸收峰, 无阴性对照干扰, 结果证明该方法灵敏 准确 快速 表 1 不同厂家 质量情况对比 (n=2,mg/ 粒 ) 生产厂家 公司自行试制产品 产品批号 性状 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 本品为胶囊剂, 内容物 为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦 涩 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 鉴别 (1) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 鉴别 (2) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 检查 水份装量差异崩解度微生物限度 8.0% ±7.0% 15 分钟 符合规定 7.8% ±7.0% 15 分钟符合规定 7.6% ±8.0% 14 分钟符合规定 8.1% ±8.0% 15 分钟符合规定 含量测定 mg/ 粒 mg/ 粒 mg/ 粒 0.241mg/ 粒 从上述表中结果可以看出, 我公司研制的产品质量明显优于市面同类产品, 说明我公司已完 全掌握了该产品的关键工艺条件, 产品质量好, 质量标准可控性强, 操作方便, 能基本真实 反映该产品的内在质量 4.3 初步稳定性研究 对 3 批试制样品进行 6 个月加速稳定性考察实验, 并按原质量标准及按拟定的质量标准进行 检验, 结果均符合规定 表明该制剂在加速实验期内质量是稳定的 ( 具体研究见 药物稳定 性研究的试验资料及文献资料 项下内容 )

3 5 药品说明书样稿, 起草说明及最新参考文献 : 5.1 药品说明书样稿 6 包装标签设计样稿 内标签 (PTP 铝箔 ): 7 药学研究资料综述: 收载于 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册, 根据国家有关药品管理的政策要求, 现按中药注册分类第 11 类要求开展有关的研究工作, 研究资料综述如下 : 7.1 工艺研究我们对的提取工艺进行了研究 其君药大黄的主要有效成分是蒽醌甙类物质, 我们以大黄酚作为对照品, 用 HPLC 法测定大黄酚的量, 计算提取过程中大黄酚的转移率, 以确定最佳的提取条件 经试验证明水提以 20 倍水量为宜, 即第一次 8 倍水量, 第二次 6 倍水量, 第三次 6 倍水量, 大黄酚的转移率达到 83.1%, 提取收膏率为 19.2%( 比重为 1.35,50 ), 加入处方量的 粉减压干燥, 粉碎后装入胶囊, 成品收率为 98% 以上 7.2 质量及质量标准研究我们对的质量及质量标准作了研究, 根据 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册 质量标准的要求, 对本品种作了 性状 鉴别 以及 检查 等项目的检查测定 ; 同时增加中大黄酚的 HPLC 法含量测定项目, 含量测定方面 : 照高效液相色谱法 ( 中国药典 2000 年版一部附录 Ⅵ D) 测定 色谱条件与系统适用性试验用辛基硅烷键合硅胶为填充剂 ; 甲醇 -0.1% 磷酸 (75:25) 为流动相 ; 流速为每分钟 1ml; 检测波长为 254nm 理论板数按大黄酚峰计算应不低于 3000 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥 ( 减压至 16mmHg 后室温放置 24 小时 ) 至恒重的大黄酚适量, 加甲醇使溶解, 制成每 1ml 含 0.08mg 的溶液作为对照品溶液 供试品溶液的制备取本品内容物约 1g, 精密称定, 加甲醇 30ml 超声 30 分钟, 过滤, 挥干甲醇, 加氯仿 25ml 溶解, 加浓盐酸 1ml, 置水浴上回流 30 分钟, 放冷, 过滤, 挥干氯仿, 用甲醇溶解并定容为 25ml 作为供试品溶液 本品每粒含大黄酚 (C15H10O4) 以干燥品计, 不得少于 0.200mg 薄层定性鉴别方面标准正文基本采用了原标准的鉴别方法 7.3 质量稳定性方面经对三批试制的产品作为期 6 个月的加速稳定性试验, 并分别按原标准及拟提高的质量标准 ( 草案 ) 进行检验, 结果均符合规定, 表明该产品的质量在加速试验期内是稳定的, 故拟定有效期为二年

4 综上所述, 我公司对 的研制是成功的, 产品质量与质量标准均代表了同类产品的先进水 平 8 药材来源及鉴定依据: 所用药材均由有限公司提供 黄柏 (CORTEX PHELLODENDRI) 本品为芸香科植物黄皮树 Phellodendron chinense schneid. 或黄檗 Phellodendron amurense Rupr. 的干燥树皮 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 251 页陈皮 (PERICARPIUM CITRI RETICULATAE) 本品为芸香科植物 Citrus reticulata Blanco 及其栽培变种的干燥成熟果皮 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 148 页金银花 (FLOS LONICERAE) 本品为忍冬科植物忍冬 Lonicera japonica Thunb. 红腺忍冬 Lonicera hupoglauca Miq. 山银花 Lonicera confusa DC. 或毛花柱忍冬 Lonicera dasystyla Rehd. 的干燥花蕾或带初开的花 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 177 页当归 (RADIX ANGELICAE SINENSIS) 本品为伞形科植物当归 Angelica sinensis(oliv.)diels 的干燥根 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 101 页乳香 (OLIBANUM) 本品为橄榄科植物卡氏乳香的胶树脂 鉴定依据 : 吉林省中药炮制规范 126 页鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 316 页鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 294 页甘草 (RADIX GLYCYRRHIZAE) 本品为豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch. 胀果甘草 yrrhiza Iflata Bat. 或光果甘草 rrhiza glabra L. 的干燥根及根茎 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 65 页蛇蜕 (PERIOSTRACUM SERPENTIS) 本品为游蛇科动物黑眉锦蛇 Elaphe teaniura Cope 锦蛇 Elaphecarinata(Guenther) 或乌梢蛇 Zaocusdhumnades(Cantor) 等蜕下的干燥表皮膜 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 256 页芒硝 (NATRII SULFAS) 本品为硫酸盐类矿物芒硝族芒硝, 经加工精制而成的结晶体 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 96 页赤芍 (RADIX PAEONIAE RUBRA) 本品为毛莨科植物芍药 Paeonia lactiflora Pall. 川赤芍 Paeonia veitchii Lynch 的干燥根 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 125 页鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 42 页 12 生产工艺的研究资料及文献资料, 辅料来源及质量标准 : 12.1 处方 : 12.2 制备工艺研究

5 我们以 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二册 的制备工艺为基本工艺路线, 对制备工艺提取用水量进行了重点研究, 确定了一个较为合理的工艺路线, 情况如下 : 1 考察指标 : 工艺研究以君药大黄中大黄酚的转移率为考察指标 2 大黄酚含量测定方法 : 照高效液相色谱法 ( 中国药典 2000 年版一部附录 Ⅵ D) 测定 色谱条件与系统适用性试验用辛基硅烷键合硅胶为填充剂 ; 甲醇 -0.1% 磷酸 (75:25) 为流动相 ; 流速为每分钟 1ml; 检测波长为 254nm 理论板数按大黄酚峰计算应不低于 3000 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥 ( 减压至 16mmHg 后室温放置 24 小时 ) 至恒重的大黄酚适量, 加甲醇使溶解, 制成每 1ml 含 0.08mg 的溶液作为对照品溶液 供试品溶液的制备取本品内容物约 1g, 精密称定, 加甲醇 30ml 超声 30 分钟, 过滤, 挥干甲醇, 加氯仿 25ml 溶解, 加浓盐酸 1ml, 置水浴上回流 30 分钟, 放冷, 过滤, 挥干氯仿, 用甲醇溶解并定容为 25ml 作为供试品溶液 本品每粒含大黄酚 (C15H1004) 以干燥品计, 不得少于 0.200mg 3 提取用水量的考察表 1 不同用水量提取大黄酚转移情况表方案编号加水方案大黄药材中大黄酚转移率方案 1 4:4: % 方案 2 6:4: % 方案 3 8:6: % 方案 4 8:6: % 方案 5 10:8: % 方案 6 12:10: % 从表中数据可知 : 当提取用水量达到方案 4 的水平时, 再增加用水量, 大黄酚的转移率不再有显著的提高, 本着保证产品质量及节能降耗的宗旨, 我们认为选择方案 4 作为提取加水工艺是符合工业化大生产的 12.3 制作过程及工艺条件 1 药材炮制 : 乳香按 吉林省中药炮制规范 126 页 炮制 除净杂质, 制成小块, 置锅内文火炒至表面稍溶化, 取出放凉 2 备料 : 按要求洗 捡 切 干燥, 天花粉 白芷粉碎过 60 目筛 3 提取 : 按处方投料, 提取温度为 95±2, 一次加水量为 8 倍, 提取时间为 1.5 小时 ; 二次加水量 6 倍, 提取时间为 1 小时 ; 三次加水量 6 倍, 提取时间为 1 小时 4 浓缩 : 浓缩温度 80, 真空度 -0.09Mpa, 浓缩至比重为 1.35(50 ) 5 干燥 : 混入天花粉 白芷细粉, 干燥温度 80, 真空度 -0.09Mpa 6 粉碎整粒 : 粉碎过 60 目筛整粒, 得半成品 ( 中间体 )

6 7 包装 : 取上述半成品, 装入胶囊, 打光, 包装, 即得 12.4 中试情况统计统计了 3 批的中试情况, 即按处方生产投料, 统计大黄酚的转移率 收率情况及按拟定质量标准 ( 草案 ) 检验含量情况, 结果全部符合规定 具体情况如下表 : 批号总处方投料量 (g) 大黄酚转移率中间体重 (g) 成品量 ( 粒 ) 收率 (%) 大黄酚含量 (mg/ 粒 ) % % % * 本实验投料量按 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册 页标准中的 10 倍处方量 文献资料 : 1 中国药典 一部 二部 2 毕殿洲等, 药剂学 3 姚新生等, 天然药物化学 4 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册 页 5 中国药典 一部( 附录 Ⅵ D) 15 药品标准草案及起草说明: 15.1 质量标准 处方药材来源及质量标准大黄 (RADIX ET RHIZOMA RHEI) 本品为蓼科植物掌叶大黄 Rheum officinale palmatun L., 唐古特大黄 Rheum tanguticum maxim.ex Balf. 或药用大黄 Rheum officinale Baill. 的干燥根及根茎 收载于 中国药典 2000 年版一部 18 页 成品质量标准 ( 草案 ) 处方 制法 以上十七味, 除芒硝外, 天花粉 白芷粉碎成细粉, 过筛, 混匀, 其余大黄等十四位, 加水煎煮三次, 第一次 2 小时, 第二次 第三次各 1 小时, 合并煎液, 滤过, 滤液浓缩至相对密度 1.30(50 ) 的清膏, 将芒硝粉碎, 加入清膏中, 搅匀, 浓缩至相对密度 1.35 (50 ) 的稠膏, 加入上述细粉, 混匀, 干燥, 粉碎成细粉, 装入胶囊, 即得 性状 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 鉴别 (1) 取本品内容物约 5g, 加氯仿 25ml, 浓盐酸 1ml, 置水浴上加热回流 30 分钟, 放冷, 滤过, 滤液置水浴上浓缩至约 1ml, 作为供试品溶液 另取大黄对照药材 1g, 加氯仿 10ml, 盐酸 1ml, 同法制成对照药材溶液, 照薄层色谱法 ( 附录 Ⅵ B) 试验, 吸取上述两种溶液各 5ul, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以石油醚 (30~ 60 )

7 - 甲酸乙酯 - 甲酸 (15:5:1) 的上层溶液为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置紫外光灯 (365nm) 下检视 供试品色谱中, 在于对照药材相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点 (2) 取本品内容物约 1g, 加甲醇 5ml, 超声处理 5 分钟, 滤过, 滤液作为供试品溶液 另取黄柏对照药材 1g, 加甲醇 10ml, 同法制层对照药材溶液 再取盐酸小檗碱对照品, 加甲醇制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液, 作为对照品溶液 照薄层色谱法 ( 附录 Ⅵ B) 试验, 吸取上述两种溶液各 5ul, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以正丁醇 - 冰醋酸 - 水 (7:1:2) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置紫外光灯 (365nm) 下检视 供试品色谱中, 在于对照药材相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点 ; 在与对照品色谱相应的位置上, 显相同的一个黄色荧光斑点 检查 应符合胶囊剂项下有关的各项规定 ( 中国药典 2000 年版一部附录 ⅠL) 含量测定 照高效液相色谱法( 中国药典 2000 年版一部附录 Ⅵ D) 测定 色谱条件与系统适用性试验用辛基硅烷键合硅胶为填充剂 ; 甲醇 -0.1% 磷酸 (75:25) 为流动相 ; 流速为每分钟 1ml; 检测波长为 254nm 理论板数按大黄酚峰计算应不低于 3000 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥至恒重的大黄酚适量, 加甲醇使溶解, 制成每 1ml 含 0.08mg 的溶液作为对照品溶液 供试品溶液的制备取本品内容物约 1g, 精密称定, 加甲醇 30ml 超声 30 分钟, 过滤, 挥干甲醇, 加氯仿 25ml 溶解, 加浓盐酸 1ml, 置水浴上回流 30 分钟, 放冷, 过滤, 挥干氯仿, 残渣用甲醇溶解并定容为 25ml 作为供试品溶液 测定法分别取对照品和供试品溶液各 10μl 注入液相色谱仪, 测定, 即得 本品每粒含大黄酚 (C15H10O4) 以干燥品计, 不得少于 0.200mg 功能主治 用法用量 口服, 一次 5 粒, 一日 4 次 禁忌 孕妇忌服 规格 每粒装 0.5g 贮藏 密封 15.2 质量标准修订说明 名称 同原标准( 指 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册, 下同 ), 即 : 名称 : 汉语拼音 : 处方 同原标准, 即 : 制法 同原标准, 即 : 以上十七味, 除芒硝外, 天花粉 白芷粉碎成细粉, 过筛, 混匀, 其余大黄等十四位, 加水

8 煎煮三次, 第一次 2 小时, 第二次 第三次各 1 小时, 合并煎液, 滤过, 滤液浓缩至相对密度 1.30(50 ) 的清膏, 将芒硝粉碎, 加入清膏中, 搅匀, 浓缩至相对密度 1.35(50 ) 的稠膏, 加入上述细粉, 混匀, 干燥, 粉碎成细粉, 装入胶囊, 即得 性状 同原标准, 即 : 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 表 1 性状观察结果供试品批号性状 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 根据 3 批样品的性状观察, 结果均符合规定 鉴别 同原标准, 即 : (1) 取本品内容物约 5g, 加氯仿 25ml, 浓盐酸 1ml, 置水浴上加热回流 30 分钟, 放冷, 滤过, 滤液置水浴上浓缩至约 1ml, 作为供试品溶液 另取大黄对照药材 1g, 加氯仿 10ml, 盐酸 1ml, 同法制成对照药材溶液, 照薄层色谱法 ( 附录 Ⅵ B) 试验, 吸取上述两种溶液各 5ul, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以石油醚 (30~60 ) - 甲酸乙酯 - 甲酸 (15:5:1) 的上层溶液为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置紫外光灯 (365nm) 下检视 供试品色谱中, 在于对照药材相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点 附紫外光下色谱示意图 : 鉴别 (1) 薄层层析色谱图注 :1 供试品溶液( 批号 ) 2 供试品溶液( 批号 ) 3 供试品溶液( 批号 ) 4 大黄对照药材 (2) 取本品内容物约 1g, 加甲醇 5ml, 超声处理 5 分钟, 滤过, 滤液作为供试品溶液 另取黄柏对照药材 1g, 加甲醇 10ml, 同法制层对照药材溶液 再取盐酸小檗碱对照品, 加甲醇制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液, 作为对照品溶液 照薄层色谱法 ( 附录 Ⅵ B) 试验, 吸取上述两种溶液各 5ul, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以正丁醇 - 冰醋酸 - 水 (7:1:2) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置紫外光灯 (365nm) 下检视 供试品色谱中, 在于对照药材相应

9 的位置上, 显相同颜色的荧光斑点 ; 在与对照品色谱相应位置上, 显相同的一个黄色荧光斑 点 附紫外光下色谱示意图 : 鉴别 (2) 薄层层析色谱图 注 :1 供试品溶液( 批号 ) 2 供试品溶液( 批号 ) 3 供试品溶液( 批号 ) 4 黄柏对照药材 5 盐酸小檗碱对照品 检查 同原标准, 即 : 应符合胶囊剂项下有关的各项规定 ( 附录 ⅠL) 表 2, 检查情况结果 : 检查项目 批 批 批 水分 7.8% 8.1% 8.0% 装量差异 0.464~0.538g 0.470~0.541g 0.473~0.531g 崩解时限 14 分钟 15 分钟 14 分钟 细菌总数 50 个 /g 60 个 /g 40 个 /g 霉菌及酵母菌总数 <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g 大肠杆菌及活螨未检出 未检出 未检出 含量测定 原标准无含量测定方法, 新建高效液相色谱含量测定方法, 即 : 照高效液相色谱法 ( 中国药典 2000 年版一部附录 Ⅵ D) 测定 色谱条件与系统适用性试验用辛基硅烷键合硅胶为填充剂 ; 甲醇 -0.1% 磷酸 (80:20) 为流动相 ; 流速为每分钟 1ml; 检测波长为 254nm 理论板数按大黄酚峰计算应不低于 3000 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥 ( 减压至 16mmHg 后室温放置 24 小时 ) 至恒重的大黄酚适量, 加甲醇使溶解, 制成每 1ml 含 0.08mg 的溶液作为对照品溶液 供试品溶液的制备取本品内容物约 1g, 精密称定, 加甲醇 30ml 超声 30 分钟, 过滤, 挥干甲醇, 加氯仿 25ml, 加浓盐酸 1ml, 置水浴上回流提取 30 分钟, 放冷, 过滤, 挥干氯仿, 残渣用甲醇溶解并定容为 25ml 作为供试品溶液 测定法分别取对照品和供试品溶液各 10μl 注入液相色谱仪, 测定, 即得 本品每粒含大黄酚 (C15H10O4) 以干燥品计, 不得少于 0.200mg 由于本方法为新建, 故本处列出方法学考察的情况, 具体试验说明如下 : 1 实验仪器与材料: Agilent 1100 高效液相色谱仪色谱柱 :Agilent Eclipse XDB-C8 分析柱 (150mm 4.6mm,5um) METTLER TOLEDO AG135 十万分之一天平大黄酚对照品 ( 中国药品生物制品检定所提供 ) 样品 ( 有限公司提供 )

10 磷酸 ( 分析纯 ) 一般用途甲醇为分析纯, 流动相用甲醇为色谱纯, 水为重蒸水 2 提取条件的选择根据 中国药典 (2000 年版一部 ) 大黄 药材含量测定的样品处理方法, 并结合加样回收率试验考察, 最终确定的样品处理方法为 : 取本品内容物约 1g, 精密称定, 加甲醇 30ml, 超声 30 分钟, 过滤, 挥干甲醇, 加氯仿 25ml, 加浓盐酸 1ml, 置水浴上回流提取 30 分钟, 放冷, 过滤, 挥干氯仿, 残渣用甲醇溶解并定容为 25ml 作为供试品溶液 3 色谱条件的确定通过查阅各种药学资料及中国药典 (2000 年版 ) 关于 大黄 药材的含量测定方法, 我们对流动相进行筛选, 最终确定的色谱条件如下 : 色谱柱 :Agilent Eclipse XDB-C8 分析柱 (150mm 4.6mm,5um) 检测波长 :254nm 流动相 : 甲醇 -0.1% 磷酸溶液 (75:25) 流速 :lml/ 分钟柱温 : 室温 大黄酚对照品图谱 样品 阴性对照品在该色谱条件下, 对照品峰形良好, 样品相应保留时间的峰形和分离度均良好, 阴性对照品在相应保留时间无吸收, 说明该色谱条件符合专属性的要求 4 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥 ( 减压至 16mmHg 后室温放置 24 小时 ) 至恒重的大黄酚适量, 加甲醇使溶解, 制成每 1ml 含 0.08mg 的溶液作为对照品溶液 5 线性关系试验 5.1 实验方法精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥 ( 减压至 16mmHg 后室温放置 24 小时 ) 至恒重的对照品大黄酚 2.5mg, 用甲醇定容至 25ml 容量瓶中, 配成 100ug/ml 的对照品储备液, 吸取储备液稀释制成浓度为 40ug/ml,5ug/ml 的对照品溶液 按上述色谱条件, 进样, 测定峰面积, 以峰面积积分值为纵坐标, 对照品进样量为横坐标, 绘制标准曲线 5.2 线性关系结果序号标准品浓度进样体积进样量 (10-3ug) 峰面积 1 5ug/ml 4ul ug/ml 2ul ug/ml 6ul ug/ml 14ul

11 5 100ug/ml 25ul 以上数据, 以峰面积为纵坐标, 进样量为横坐标进行线性回归, 回归方程如下 : 回归方程 :y = x 相关系数 r= 检出线性范围 : ug~2.5ug 6 检出限的确定 6.1 实验方法将色谱工作站检测仪的灵敏度调高, 用 1:10 倍比稀释处理的系列对照品溶液及空白溶剂进样, 进样量为 10ul, 考察对照品与噪声强度之间的关系, 以信噪比为 3 时确定检出限 6.2 试验结果 通过实验, 可以确定上述图谱为最低检出限图谱, 该 HPLC 法大黄酚含量测定的最低检出限 为 1ng. 7 精密度试验 7.1 实验方法 取大黄酚对照品溶液 ( 每 1ml 含大黄酚 0.04mg) 及供试品溶液 ( 批号为 ), 分次 进样 ( 进样量均为 10μl) 各 5 次, 记录峰面积值 7.2 精密度结果 序号 大黄酚对照品峰面积 供试品中大黄酚峰面积 平均值 RSD% 0.20% 0.16% 8 重现性试验 8.1 实验方法取本品 ( 批号为 ), 混匀, 精密称取 5 份, 每份 1.0g, 按上述拟定的含量测定方法测定大黄酚的含量 8.2 重现性结果 ( 含量,mg/g n=2) 序号 平均值 RSD% 含量 % 9 加样回收率试验

12 9.1 实验方法分别精密称取已知含量的样品 ( 批号 , 含大黄酚 0.486mg/g)1.0g, 置锥形瓶中, 各精密加入大黄酚对照品溶液 ( 每 1ml 含 0.10mg 的溶液 )1ml 2ml 3ml,4ml,5ml, 挥干甲醇, 按样品含量测定方法处理分析, 计算加样回收率 9.2 加样回收率结果 取样量 (g) 样品中大黄酚含量 (mg) 大黄酚加入量 (mg) 大黄酚总测得量 (mg) 大黄酚回收量 (mg) 回收率 (%) 平均回收率 :98.9 %; 变异系数 :0.62 % 以大黄酚回收量为纵坐标, 大黄酚加入量为横坐标进行线性回归, 得线性方程 : 回归方程 Y=0.993x 相关系数 r= 稳定性实验 10.1 实验方法取同一 ( 批 ) 供试品溶液, 按上文拟定的含量测定条件, 每隔 2 小时进样 10μl, 测定大黄酚含量 10.2 稳定性考查结果序号 平均值 RSD% 峰面积 % 实验证明 : 供试品的甲醇提取液中的大黄酚在 10 小时内是稳定的 11 样品含量测定 11.1 实验方法精密称取不同批次的本品 1.0g, 照含量测定方法提取 测定大黄酚含量 11.2 含量测定结果 (mg/ 粒,n=2) 批号 平均值含量 结论 : 通过以上方法学的验证结果表明, 用上述高效液相色谱条件测定中的大黄酚含量是专属 准确 可行的 通过对 3 个批次的含量测定结果表明, 制剂中大黄酚平均含量为 0.243mg/ 粒, 根据通用含量限度确定方法 (±15%), 确定本品的含量限度不得低于 mg/ 粒

13 功能主治 同原标准, 即 : 用法用量 口服, 一次 5 粒, 一日 4 次 禁忌 同原标准, 即 : 孕妇忌服 规格 同原标准, 即 : 每粒装 0.5g 贮藏 同原标准, 即 : 密封 有效期 新增 : 按加速稳定性试验结果, 拟定有效期二年 参考文献 : (1) 中国药典 (2000 年版 ) 一部 二部 16 样品及检验报告书: 样品 : 随材料附上, 三批计 480 粒 检验报告书见附页 药物稳定性研究的试验资料及文献资料 1 加速稳定性实验 表 1 ( 批号 ) 加速稳定性试验结果 考察条件 : 温度 40 (±2 ); 相对湿度 75%(±5%); 市售铝塑板包装 规格 : 每粒装 0.5g 生产日期 :2003 年 11 月 1 日 放置及检验时间 检验项目 0 月 ( ) 1 月 ( ) 2 月 ( ) 3 月 ( ) 6 月 ( ) 检验 依据性状 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色粉末 ; 气腥, 味苦涩 1&2 鉴别 (1) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 鉴别 (2) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 检查 (1) 水分 6.8% 6.9% 6.8% 7.0% 7.3% 1&2 (2) 装量差异 0.461~ 0.532g 0.473~ 0.545g 0.471~

14 0.528g 0.459~ 0.536g 0.464~ 0.540g 1&2 1&2 (3) 崩解时限 14 分钟 15 分钟 14 分钟 14 分钟 15 分钟 1&2 微生物限度 细菌总数 30 个 /g 60 个 /g 40 个 /g 60 个 /g 60 个 /g 1& 2 霉菌及酵母菌总数 <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g 1&2 大肠杆菌及活螨 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 1&2 含量测定 ( 以大黄酚计 ) 0.243mg/ 粒 0.243mg/ 粒 0.244mg/ 粒 0.243mg/ 粒 0.245mg/ 粒 2 注 :1 为 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二册 ;2 为提高的质量标准 ( 草案 ); 1&2 为提高的质量标准 ( 草案 ) 与 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二 册 要求相同部分 从检验结果看, 批在加速稳定性试验期内, 按原标准以及按提高的质量标准 ( 草 案 ) 检验, 结果均符合规定 表 2 ( 批号 ) 加速稳定性试验结果 考察条件 : 温度 40 (±2 ); 相对湿度 75%(±5%); 市售铝塑板包装 规格 : 每粒装 0.5g 生产日期 :2003 年 11 月 3 日 放置及检验时间 检验项目 0 月 ( ) 1 月 ( ) 2 月 ( ) 3 月 ( ) 6 月 ( ) 检验 依据性状 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色粉末 ; 气腥, 味苦涩 1&2 鉴别 (1) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 鉴别 (2) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 检查 (1) 水分 6.8% 6.9% 6.8% 7.0% 7.3% 1&2 (2) 装量差异 0.464~ 0.538g 0.463~ 0.541g 0.470~ 0.538g 0.467~

15 0.535g 0.463~ 0.530g 1&2 1&2 (3) 崩解时限 14 分钟 14 分钟 14 分钟 15 分钟 14 分钟 1&2 微生物限度 细菌总数 50 个 /g 40 个 /g 60 个 /g 60 个 /g 30 个 /g 1& 2 霉菌及酵母菌总数 <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g 1&2 大肠杆菌及活螨 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 1&2 含量测定 ( 以大黄酚计 ) 0.245mg/ 粒 0.245mg/ 粒 0.245mg/ 粒 0.243mg/ 粒 0.246mg/ 粒 2 注 :1 为 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二册 ;2 为提高的质量标准 ( 草案 ); 1&2 为提高的质量标准 ( 草案 ) 与 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二 册 要求相同部分 从检验结果看, 批在加速稳定性试验期内, 按原标准以及按提高的质量标准 ( 草 案 ) 检验, 结果均符合规定 表 3 ( 批号 ) 加速稳定性试验结果 考察条件 : 温度 40 (±2 ); 相对湿度 75%(±5%); 市售铝塑板包装 规格 : 每粒装 0.5g 生产日期 :2003 年 11 月 9 日 放置及检验时间 检验项目 0 月 ( ) 1 月 ( ) 2 月 ( ) 3 月 ( ) 6 月 ( ) 检验 依据性状 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色粉末 ; 气腥, 味苦涩 1&2 鉴别 (1) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 鉴别 (2) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 检查 (1) 水分 7.8% 7.9% 7.8% 7.8% 7.9% 1&2 (2) 装量差异 0.461~ 0.532g 0.473~ 0.545g 0.471~ 0.528g 0.459~

16 0.536g 0.464~ 0.540g 1&2 1&2 (3) 崩解时限 14 分钟 15 分钟 14 分钟 14 分钟 15 分钟 1&2 微生物限度 细菌总数 30 个 /g 60 个 /g 40 个 /g 60 个 /g 60 个 /g 1& 2 霉菌及酵母菌总数 <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g 1&2 大肠杆菌及活螨 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 1&2 含量测定 ( 以大黄酚计 ) 0.241mg/ 粒 0.240mg/ 粒 0.240mg/ 粒 0.241mg/ 粒 0.240mg/ 粒 2 注 :1 为 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二册 ;2 为提高的质量标准 ( 草案 ); 1&2 为提高的质量标准 ( 草案 ) 与 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二 册 要求相同部分 从检验结果看, 批在加速稳定性试验期内, 按原标准以及按提高的质量标准 ( 草 案 ) 检验, 结果均符合规定 2 长期稳定性实验 表 1 ( 批号 ) 长期稳定性试验结果 考察条件 : 温度 25 (±2 ); 相对湿度 60%(±10%); 市售铝塑板包装 规格 : 每粒装 0.5g 生产日期 :2003 年 11 月 1 日 放置及检验时间 检验项目 0 月 ( ) 3 月 ( ) 6 月 ( ) 检验 依据性状 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色粉末 ; 气腥, 味苦涩 1&2 鉴别 (1) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 鉴别 (2) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 检查 (1) 水分 6.8% 7.0% 7.3% 1&2 (2) 装量差异 0.461~ 0.532g 0.460~ 0.532g 0.467~ 0.543g 1&2 1&2

17 (3) 崩解时限 14 分钟 14 分钟 15 分钟 1&2 微生物限度 细菌总数 30 个 /g 60 个 /g 60 个 /g 1&2 霉菌及酵母菌总数 <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g 1&2 大肠杆菌及活螨 未检出 未检出 未检出 1&2 含量测定 ( 以大黄酚计 ) 0.243mg/ 粒 0.245mg/ 粒 0.242mg/ 粒 2 注 :1 为 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二册 ;2 为提高的质量标准 ( 草案 ); 1&2 为提高的质量标准 ( 草案 ) 与 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二 册 要求相同部分 从检验结果看, 批在现有 6 个月的长期稳定性试验期内, 按原标准以及按提高的质 量标准 ( 草案 ) 检验, 结果均符合规定 表 2 ( 批号 ) 长期稳定性试验结果 考察条件 : 温度 25 (±2 ); 相对湿度 60%(±10%); 市售铝塑板包装 规格 : 每粒装 0.5g 生产日期 :2003 年 11 月 3 日 放置及检验时间 检验项目 0 月 ( ) 3 月 ( ) 6 月 ( ) 检验 依据性状 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色粉末 ; 气腥, 味苦涩 1&2 鉴别 (1) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 鉴别 (2) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 检查 (1) 水分 6.8% 7.0% 7.3% 1&2 (2) 装量差异 0.464~ 0.538g 0.472~ 0.530g 0.468~ 0.537g 1&2 1&2 (3) 崩解时限 14 分钟 15 分钟 14 分钟 1&2 微生物限度 细菌总数 50 个 /g 60 个 /g 30 个 /g 1&2 霉菌及酵母菌总数 <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g 1&2 大肠杆菌及活螨 未检出 未检出 未检出 1&2 含量测定 ( 以大黄酚计 ) 0.245mg/ 粒 0.247mg/ 粒 0.244mg/ 粒 2 注 :1 为 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二册 ;2 为提高的质量标准 ( 草案 ); 1&2 为提高的质量标准 ( 草案 ) 与 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二

18 册 要求相同部分 从检验结果看, 批在现有 6 个月的长期稳定性试验期内, 按原标准以及按提高的质 量标准 ( 草案 ) 检验, 结果均符合规定 表 3 ( 批号 ) 长期稳定性试验结果 考察条件 : 温度 25 (±2 ); 相对湿度 60%(±10%); 市售铝塑板包装 规格 : 每粒装 0.5g 生产日期 :2003 年 11 月 9 日 放置及检验时间 检验项目 0 月 ( ) 3 月 ( ) 6 月 ( ) 检验 依据性状 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色粉末 ; 气腥, 味苦涩 1&2 鉴别 (1) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 鉴别 (2) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 检查 (1) 水分 7.8% 7.8% 7.9% 1&2 (2) 装量差异 0.461~ 0.532g 0.476~ 0.536g 0.468~ 0.542g 1&2 1&2 (3) 崩解时限 14 分钟 14 分钟 15 分钟 1&2 微生物限度 细菌总数 30 个 /g 60 个 /g 60 个 /g 1&2 霉菌及酵母菌总数 <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g 1&2 大肠杆菌及活螨 未检出 未检出 未检出 1&2 含量测定 ( 以大黄酚计 ) 0.242mg/ 粒 0.243mg/ 粒 0.241mg/ 粒 2 注 :1 为 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二册 ;2 为提高的质量标准 ( 草案 ); 1&2 为提高的质量标准 ( 草案 ) 与 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二 册 要求相同部分 从检验结果看, 批在现有 6 个月的长期稳定性试验期内, 按原标准以及按提高的质 量标准 ( 草案 ) 检验, 结果均符合规定 文献资料 :1 中国药典 2000 年版二部附录 2 毕殿洲等, 药剂学 3 朱景申等, 药物分析

19 18 直接接触药品的包装材料和容器的选择依据及质量标准 PTP 铝箔 : 无毒, 无污染, 符合药用要求, 具体标准参见 GB 药用 PVC 硬片 : 无毒, 无污染, 符合药用要求, 具体标准参见 GB 申报资料目录 ( 一 ) 综述资料 1 药品名称 2 证明性文件 3 立题目的与依据 4 对主要研究成果的总结与评价 5 药品说明书样稿 起草说明及最新参考文献 6 包装 标签设计样稿 ( 二 ) 药学研究资料 7 药学研究资料综述 8 药材来源及鉴定依据 12 生产工艺的研究资料及文献资料, 辅料来源及质量标准 15 药品标准草案及起草说明, 并提供药品标准物质的有关资料 16 样品及检验报告书 17 药物稳定性研究的试验资料及文献资料 18 直接接触药品的包装材料和容器的选择依据及质量标准 ( 一 ) 综述资料 1 药品名称 : 汉语拼音 : 命名依据 : 根据 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册 页 2 证明性文件: 附件 1 药品生产企业许可证 复印件 附件 2 营业执照 复印件 附件 3 GMP 认证证书 复印件 附件 4 不侵权行为保证书 附件 5 药品包装材料和容器注册证 复印件 3 立题目的与依据中药 处方来自 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册 页 处方由 等十七味中药构成, 其中的作用为清热解毒 消肿散结, 利尿通

20 淋 ; 的作用为泻热通肠 凉血解毒, 逐淤通经 ; 的作用为清热燥湿, 泻火除蒸, 解毒 疗疮 因此, 具有, 消肿止痛的功效 对于脏腑毒热, 血液不清引起的, 血淋, 白浊, 尿道刺痛, 大便秘结, 疥疮,, 红肿疼痛均有很好的疗效, 受到广大医药工作者和患 者的欢迎, 市场前景广阔 所以, 我们选择了这个品种, 通过试验对其生产工艺及质量标准 进行了研究, 进一步加强了生产过程中的中间体及产品的质量控制, 提高了产品的质量 4 对主要研究成果的总结及评价: 收载于 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册, 根据国家有关药品 管理的政策要求, 现按中药注册分类第 11 类要求开展有关的研究工作, 现将各项研究工作 总结如下 : 4.1 工艺研究 我们对的提取工艺进行了研究 其君药大黄的主要有效成分是蒽醌甙类物质, 我们以大黄酚 作为对照品, 用 HPLC 法测定大黄酚的含量, 计算提取过程中大黄酚的转移率, 以确定最佳 的提取条件 经试验证明水提以 20 倍水量为宜, 即第一次 8 倍水量, 第二次 6 倍水量, 第 三次 6 倍水量, 大黄酚的转移率达到 83.1%, 提取收膏率为 19.2%( 比重为 1.35,50 ), 加入处 方量的, 减压干燥, 粉碎后装入胶囊, 成品收率为 98% 以上 4.2 质量与质量标准的研究 根据 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册 项下质量标准要求, 我们对原标准项下内容进行了验证, 同时在原标准基础上增加了高效液相色谱法测定 中的 大黄酚含量测定方法, 以大黄酚为对照品 ( 中国药品生物制品检定所提供 ), 样品在与对照 品相应保留时间均出现吸收峰, 无阴性对照干扰, 结果证明该方法灵敏 准确 快速 表 1 不同厂家 质量情况对比 (n=2,mg/ 粒 ) 生产厂家 公司自行试制产品 产品批号 性状 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 本品为胶囊剂, 内容物 为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦 涩 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 鉴别 (1) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 鉴别 (2) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 检查水份装量差异崩解度微生物限度 8.0% ±7.0% 15 分钟

21 符合规定 7.8% ±7.0% 15 分钟符合规定 7.6% ±8.0% 14 分钟符合规定 8.1% ±8.0% 15 分钟符合规定含量测定 mg/ 粒 mg/ 粒 mg/ 粒 0.241mg/ 粒 从上述表中结果可以看出, 我公司研制的产品质量明显优于市面同类产品, 说明我公司已完 全掌握了该产品的关键工艺条件, 产品质量好, 质量标准可控性强, 操作方便, 能基本真实 反映该产品的内在质量 4.3 初步稳定性研究 对 3 批试制样品进行 6 个月加速稳定性考察实验, 并按原质量标准及按拟定的质量标准进行 检验, 结果均符合规定 表明该制剂在加速实验期内质量是稳定的 ( 具体研究见 药物稳定 性研究的试验资料及文献资料 项下内容 ) 5 药品说明书样稿, 起草说明及最新参考文献 : 5.1 药品说明书样稿 6 包装标签设计样稿内标签 (PTP 铝箔 ): 7 药学研究资料综述: 收载于 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册, 根据国家有关药品管理的政策要求, 现按中药注册分类第 11 类要求开展有关的研究工作, 研究资料综述如下 : 7.1 工艺研究我们对的提取工艺进行了研究 其君药大黄的主要有效成分是蒽醌甙类物质, 我们以大黄酚作为对照品, 用 HPLC 法测定大黄酚的量, 计算提取过程中大黄酚的转移率, 以确定最佳的提取条件 经试验证明水提以 20 倍水量为宜, 即第一次 8 倍水量, 第二次 6 倍水量, 第三次 6 倍水量, 大黄酚的转移率达到 83.1%, 提取收膏率为 19.2%( 比重为 1.35,50 ), 加入处方量的 粉减压干燥, 粉碎后装入胶囊, 成品收率为 98% 以上 7.2 质量及质量标准研究我们对的质量及质量标准作了研究, 根据 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第

22 十册 质量标准的要求, 对本品种作了 性状 鉴别 以及 检查 等项目的检查测定 ; 同时增加中大黄酚的 HPLC 法含量测定项目, 含量测定方面 : 照高效液相色谱法 ( 中国药典 2000 年版一部附录 Ⅵ D) 测定 色谱条件与系统适用性试验用辛基硅烷键合硅胶为填充剂 ; 甲醇 -0.1% 磷酸 (75:25) 为流动相 ; 流速为每分钟 1ml; 检测波长为 254nm 理论板数按大黄酚峰计算应不低于 3000 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥 ( 减压至 16mmHg 后室温放置 24 小时 ) 至恒重的大黄酚适量, 加甲醇使溶解, 制成每 1ml 含 0.08mg 的溶液作为对照品溶液 供试品溶液的制备取本品内容物约 1g, 精密称定, 加甲醇 30ml 超声 30 分钟, 过滤, 挥干甲醇, 加氯仿 25ml 溶解, 加浓盐酸 1ml, 置水浴上回流 30 分钟, 放冷, 过滤, 挥干氯仿, 用甲醇溶解并定容为 25ml 作为供试品溶液 本品每粒含大黄酚 (C15H10O4) 以干燥品计, 不得少于 0.200mg 薄层定性鉴别方面标准正文基本采用了原标准的鉴别方法 7.3 质量稳定性方面经对三批试制的产品作为期 6 个月的加速稳定性试验, 并分别按原标准及拟提高的质量标准 ( 草案 ) 进行检验, 结果均符合规定, 表明该产品的质量在加速试验期内是稳定的, 故拟定有效期为二年 综上所述, 我公司对 的研制是成功的, 产品质量与质量标准均代表了同类产品的先进水平 8 药材来源及鉴定依据: 所用药材均由有限公司提供 黄柏 (CORTEX PHELLODENDRI) 本品为芸香科植物黄皮树 Phellodendron chinense schneid. 或黄檗 Phellodendron amurense Rupr. 的干燥树皮 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 251 页陈皮 (PERICARPIUM CITRI RETICULATAE) 本品为芸香科植物 Citrus reticulata Blanco 及其栽培变种的干燥成熟果皮 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 148 页金银花 (FLOS LONICERAE) 本品为忍冬科植物忍冬 Lonicera japonica Thunb. 红腺忍冬 Lonicera hupoglauca Miq. 山银花 Lonicera confusa DC. 或毛花柱忍冬 Lonicera dasystyla Rehd. 的干燥花蕾或带初开的花 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 177 页当归 (RADIX ANGELICAE SINENSIS) 本品为伞形科植物当归 Angelica sinensis(oliv.)diels 的干燥根 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 101 页乳香 (OLIBANUM) 本品为橄榄科植物卡氏乳香的胶树脂

23 鉴定依据 : 吉林省中药炮制规范 126 页鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 316 页鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 294 页甘草 (RADIX GLYCYRRHIZAE) 本品为豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch. 胀果甘草 yrrhiza Iflata Bat. 或光果甘草 rrhiza glabra L. 的干燥根及根茎 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 65 页蛇蜕 (PERIOSTRACUM SERPENTIS) 本品为游蛇科动物黑眉锦蛇 Elaphe teaniura Cope 锦蛇 Elaphecarinata(Guenther) 或乌梢蛇 Zaocusdhumnades(Cantor) 等蜕下的干燥表皮膜 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 256 页芒硝 (NATRII SULFAS) 本品为硫酸盐类矿物芒硝族芒硝, 经加工精制而成的结晶体 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 96 页赤芍 (RADIX PAEONIAE RUBRA) 本品为毛莨科植物芍药 Paeonia lactiflora Pall. 川赤芍 Paeonia veitchii Lynch 的干燥根 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 125 页鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 42 页 12 生产工艺的研究资料及文献资料, 辅料来源及质量标准 : 12.1 处方 : 12.2 制备工艺研究我们以 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二册 的制备工艺为基本工艺路线, 对制备工艺提取用水量进行了重点研究, 确定了一个较为合理的工艺路线, 情况如下 : 1 考察指标 : 工艺研究以君药大黄中大黄酚的转移率为考察指标 2 大黄酚含量测定方法 : 照高效液相色谱法 ( 中国药典 2000 年版一部附录 Ⅵ D) 测定 色谱条件与系统适用性试验用辛基硅烷键合硅胶为填充剂 ; 甲醇 -0.1% 磷酸 (75:25) 为流动相 ; 流速为每分钟 1ml; 检测波长为 254nm 理论板数按大黄酚峰计算应不低于 3000 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥 ( 减压至 16mmHg 后室温放置 24 小时 ) 至恒重的大黄酚适量, 加甲醇使溶解, 制成每 1ml 含 0.08mg 的溶液作为对照品溶液 供试品溶液的制备取本品内容物约 1g, 精密称定, 加甲醇 30ml 超声 30 分钟, 过滤, 挥干甲醇, 加氯仿 25ml 溶解, 加浓盐酸 1ml, 置水浴上回流 30 分钟, 放冷, 过滤, 挥干氯仿, 用甲醇溶解并定容为 25ml 作为供试品溶液 本品每粒含大黄酚 (C15H1004) 以干燥品计, 不得少于 0.200mg 3 提取用水量的考察表 1 不同用水量提取大黄酚转移情况表

24 方案编号 加水方案 大黄药材中大黄酚转移率 方案 1 4:4: % 方案 2 6:4: % 方案 3 8:6: % 方案 4 8:6: % 方案 5 10:8: % 方案 6 12:10: % 从表中数据可知 : 当提取用水量达到方案 4 的水平时, 再增加用水量, 大黄酚的转移率不再 有显著的提高, 本着保证产品质量及节能降耗的宗旨, 我们认为选择方案 4 作为提取加水工 艺是符合工业化大生产的 12.3 制作过程及工艺条件 1 药材炮制 : 乳香按 吉林省中药炮制规范 126 页 炮制 除净杂质, 制成小块, 置锅内文火炒至表面稍溶化, 取出放凉 2 备料 : 按要求洗 捡 切 干燥, 天花粉 白芷粉碎过 60 目筛 3 提取 : 按处方投料, 提取温度为 95±2, 一次加水量为 8 倍, 提取时间为 1.5 小时 ; 二次 加水量 6 倍, 提取时间为 1 小时 ; 三次加水量 6 倍, 提取时间为 1 小时 4 浓缩 : 浓缩温度 80, 真空度 -0.09Mpa, 浓缩至比重为 1.35(50 ) 5 干燥 : 混入天花粉 白芷细粉, 干燥温度 80, 真空度 -0.09Mpa 6 粉碎整粒 : 粉碎过 60 目筛整粒, 得半成品 ( 中间体 ) 7 包装 : 取上述半成品, 装入胶囊, 打光, 包装, 即得 12.4 中试情况统计 统计了 3 批的中试情况, 即按处方生产投料, 统计大黄酚的转移率 收率情况及按拟定质量 标准 ( 草案 ) 检验含量情况, 结果全部符合规定 具体情况如下表 : 批号 总处方投料量 (g) 大黄酚转移率 中间体重 (g) 成品量 ( 粒 ) 收率 (%) 大黄酚含量 (mg/ 粒 ) % % % * 本实验投料量按 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册 页标准中的 10 倍处方量 文献资料 : 1 中国药典 一部 二部 2 毕殿洲等, 药剂学 3 姚新生等, 天然药物化学 4 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十 册 页 5 中国药典 一部( 附录 Ⅵ D)

25 15 药品标准草案及起草说明: 15.1 质量标准 处方药材来源及质量标准大黄 (RADIX ET RHIZOMA RHEI) 本品为蓼科植物掌叶大黄 Rheum officinale palmatun L., 唐古特大黄 Rheum tanguticum maxim.ex Balf. 或药用大黄 Rheum officinale Baill. 的干燥根及根茎 收载于 中国药典 2000 年版一部 18 页 成品质量标准 ( 草案 ) 处方 制法 以上十七味, 除芒硝外, 天花粉 白芷粉碎成细粉, 过筛, 混匀, 其余大黄等十四位, 加水煎煮三次, 第一次 2 小时, 第二次 第三次各 1 小时, 合并煎液, 滤过, 滤液浓缩至相对密度 1.30(50 ) 的清膏, 将芒硝粉碎, 加入清膏中, 搅匀, 浓缩至相对密度 1.35 (50 ) 的稠膏, 加入上述细粉, 混匀, 干燥, 粉碎成细粉, 装入胶囊, 即得 性状 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 鉴别 (1) 取本品内容物约 5g, 加氯仿 25ml, 浓盐酸 1ml, 置水浴上加热回流 30 分钟, 放冷, 滤过, 滤液置水浴上浓缩至约 1ml, 作为供试品溶液 另取大黄对照药材 1g, 加氯仿 10ml, 盐酸 1ml, 同法制成对照药材溶液, 照薄层色谱法 ( 附录 Ⅵ B) 试验, 吸取上述两种溶液各 5ul, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以石油醚 (30~ 60 ) - 甲酸乙酯 - 甲酸 (15:5:1) 的上层溶液为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置紫外光灯 (365nm) 下检视 供试品色谱中, 在于对照药材相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点 (2) 取本品内容物约 1g, 加甲醇 5ml, 超声处理 5 分钟, 滤过, 滤液作为供试品溶液 另取黄柏对照药材 1g, 加甲醇 10ml, 同法制层对照药材溶液 再取盐酸小檗碱对照品, 加甲醇制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液, 作为对照品溶液 照薄层色谱法 ( 附录 Ⅵ B) 试验, 吸取上述两种溶液各 5ul, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以正丁醇 - 冰醋酸 - 水 (7:1:2) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置紫外光灯 (365nm) 下检视 供试品色谱中, 在于对照药材相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点 ; 在与对照品色谱相应的位置上, 显相同的一个黄色荧光斑点 检查 应符合胶囊剂项下有关的各项规定 ( 中国药典 2000 年版一部附录 ⅠL) 含量测定 照高效液相色谱法( 中国药典 2000 年版一部附录 Ⅵ D) 测定 色谱条件与系统适用性试验用辛基硅烷键合硅胶为填充剂 ; 甲醇 -0.1% 磷酸 (75:25) 为流动相 ; 流速为每分钟 1ml; 检测波长为 254nm 理论板数按大黄酚峰计算应不低于 3000 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥至恒重的大黄酚适量, 加甲醇使溶解, 制成每 1ml 含 0.08mg 的溶液作为对照品溶液 供试品溶液的制备取本品内容物约 1g, 精密称定, 加甲醇 30ml 超声 30 分钟, 过滤, 挥干

26 甲醇, 加氯仿 25ml 溶解, 加浓盐酸 1ml, 置水浴上回流 30 分钟, 放冷, 过滤, 挥干氯仿, 残渣用甲醇溶解并定容为 25ml 作为供试品溶液 测定法分别取对照品和供试品溶液各 10μl 注入液相色谱仪, 测定, 即得 本品每粒含大黄酚 (C15H10O4) 以干燥品计, 不得少于 0.200mg 功能主治 用法用量 口服, 一次 5 粒, 一日 4 次 禁忌 孕妇忌服 规格 每粒装 0.5g 贮藏 密封 15.2 质量标准修订说明 名称 同原标准( 指 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册, 下同 ), 即 : 名称 : 汉语拼音 : 处方 同原标准, 即 : 制法 同原标准, 即 : 以上十七味, 除芒硝外, 天花粉 白芷粉碎成细粉, 过筛, 混匀, 其余大黄等十四位, 加水煎煮三次, 第一次 2 小时, 第二次 第三次各 1 小时, 合并煎液, 滤过, 滤液浓缩至相对密度 1.30(50 ) 的清膏, 将芒硝粉碎, 加入清膏中, 搅匀, 浓缩至相对密度 1.35(50 ) 的稠膏, 加入上述细粉, 混匀, 干燥, 粉碎成细粉, 装入胶囊, 即得 性状 同原标准, 即 : 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 表 1 性状观察结果供试品批号性状 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 根据 3 批样品的性状观察, 结果均符合规定 鉴别 同原标准, 即 : (1) 取本品内容物约 5g, 加氯仿 25ml, 浓盐酸 1ml, 置水浴上加热回流 30 分钟, 放冷, 滤过, 滤液置水浴上浓缩至约 1ml, 作为供试品溶液 另取大黄对照药材 1g, 加氯仿 10ml, 盐酸 1ml, 同法制成对照药材溶液, 照薄层色谱法 ( 附录 Ⅵ B) 试验, 吸取上述两种溶液各 5ul, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以石油醚 (30~60 ) - 甲酸乙酯 - 甲酸 (15:5:1) 的上层溶液为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置紫外光灯 (365nm) 下检视 供试品色谱中, 在于对照药材相应的位置上, 显相同

27 颜色的荧光斑点 附紫外光下色谱示意图 : 鉴别 (1) 薄层层析色谱图注 :1 供试品溶液( 批号 ) 2 供试品溶液( 批号 ) 3 供试品溶液( 批号 ) 4 大黄对照药材 (2) 取本品内容物约 1g, 加甲醇 5ml, 超声处理 5 分钟, 滤过, 滤液作为供试品溶液 另取黄柏对照药材 1g, 加甲醇 10ml, 同法制层对照药材溶液 再取盐酸小檗碱对照品, 加甲醇制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液, 作为对照品溶液 照薄层色谱法 ( 附录 Ⅵ B) 试验, 吸取上述两种溶液各 5ul, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以正丁醇 - 冰醋酸 - 水 (7:1:2) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置紫外光灯 (365nm) 下检视 供试品色谱中, 在于对照药材相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点 ; 在与对照品色谱相应位置上, 显相同的一个黄色荧光斑点 附紫外光下色谱示意图 : 鉴别 (2) 薄层层析色谱图 注 :1 供试品溶液( 批号 ) 2 供试品溶液( 批号 ) 3 供试品溶液( 批号 ) 4 黄柏对照药材 5 盐酸小檗碱对照品 检查 同原标准, 即 : 应符合胶囊剂项下有关的各项规定 ( 附录 ⅠL) 表 2, 检查情况结果 : 检查项目 批 批 批 水分 7.8% 8.1% 8.0% 装量差异 0.464~0.538g 0.470~0.541g 0.473~0.531g 崩解时限 14 分钟 15 分钟 14 分钟 细菌总数 50 个 /g 60 个 /g 40 个 /g 霉菌及酵母菌总数 <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g 大肠杆菌及活螨未检出 未检出 未检出

28 含量测定 原标准无含量测定方法, 新建高效液相色谱含量测定方法, 即 : 照高效液相色谱法 ( 中国药典 2000 年版一部附录 Ⅵ D) 测定 色谱条件与系统适用性试验用辛基硅烷键合硅胶为填充剂 ; 甲醇 -0.1% 磷酸 (80:20) 为流动相 ; 流速为每分钟 1ml; 检测波长为 254nm 理论板数按大黄酚峰计算应不低于 3000 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥 ( 减压至 16mmHg 后室温放置 24 小时 ) 至恒重的大黄酚适量, 加甲醇使溶解, 制成每 1ml 含 0.08mg 的溶液作为对照品溶液 供试品溶液的制备取本品内容物约 1g, 精密称定, 加甲醇 30ml 超声 30 分钟, 过滤, 挥干甲醇, 加氯仿 25ml, 加浓盐酸 1ml, 置水浴上回流提取 30 分钟, 放冷, 过滤, 挥干氯仿, 残渣用甲醇溶解并定容为 25ml 作为供试品溶液 测定法分别取对照品和供试品溶液各 10μl 注入液相色谱仪, 测定, 即得 本品每粒含大黄酚 (C15H10O4) 以干燥品计, 不得少于 0.200mg 由于本方法为新建, 故本处列出方法学考察的情况, 具体试验说明如下 : 1 实验仪器与材料: Agilent 1100 高效液相色谱仪色谱柱 :Agilent Eclipse XDB-C8 分析柱 (150mm 4.6mm,5um) METTLER TOLEDO AG135 十万分之一天平大黄酚对照品 ( 中国药品生物制品检定所提供 ) 样品 ( 有限公司提供 ) 磷酸 ( 分析纯 ) 一般用途甲醇为分析纯, 流动相用甲醇为色谱纯, 水为重蒸水 2 提取条件的选择根据 中国药典 (2000 年版一部 ) 大黄 药材含量测定的样品处理方法, 并结合加样回收率试验考察, 最终确定的样品处理方法为 : 取本品内容物约 1g, 精密称定, 加甲醇 30ml, 超声 30 分钟, 过滤, 挥干甲醇, 加氯仿 25ml, 加浓盐酸 1ml, 置水浴上回流提取 30 分钟, 放冷, 过滤, 挥干氯仿, 残渣用甲醇溶解并定容为 25ml 作为供试品溶液 3 色谱条件的确定通过查阅各种药学资料及中国药典 (2000 年版 ) 关于 大黄 药材的含量测定方法, 我们对流动相进行筛选, 最终确定的色谱条件如下 : 色谱柱 :Agilent Eclipse XDB-C8 分析柱 (150mm 4.6mm,5um) 检测波长 :254nm 流动相 : 甲醇 -0.1% 磷酸溶液 (75:25) 流速 :lml/ 分钟柱温 : 室温

29 大黄酚对照品图谱 样品 阴性对照品在该色谱条件下, 对照品峰形良好, 样品相应保留时间的峰形和分离度均良好, 阴性对照品在相应保留时间无吸收, 说明该色谱条件符合专属性的要求 4 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥 ( 减压至 16mmHg 后室温放置 24 小时 ) 至恒重的大黄酚适量, 加甲醇使溶解, 制成每 1ml 含 0.08mg 的溶液作为对照品溶液 5 线性关系试验 5.1 实验方法精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥 ( 减压至 16mmHg 后室温放置 24 小时 ) 至恒重的对照品大黄酚 2.5mg, 用甲醇定容至 25ml 容量瓶中, 配成 100ug/ml 的对照品储备液, 吸取储备液稀释制成浓度为 40ug/ml,5ug/ml 的对照品溶液 按上述色谱条件, 进样, 测定峰面积, 以峰面积积分值为纵坐标, 对照品进样量为横坐标, 绘制标准曲线 5.2 线性关系结果序号标准品浓度进样体积进样量 (10-3ug) 峰面积 1 5ug/ml 4ul ug/ml 2ul ug/ml 6ul ug/ml 14ul ug/ml 25ul 以上数据, 以峰面积为纵坐标, 进样量为横坐标进行线性回归, 回归方程如下 : 回归方程 :y = x 相关系数 r= 检出线性范围 : ug~2.5ug 6 检出限的确定 6.1 实验方法将色谱工作站检测仪的灵敏度调高, 用 1:10 倍比稀释处理的系列对照品溶液及空白溶剂进样, 进样量为 10ul, 考察对照品与噪声强度之间的关系, 以信噪比为 3 时确定检出限 6.2 试验结果 通过实验, 可以确定上述图谱为最低检出限图谱, 该 HPLC 法大黄酚含量测定的最低检出限 为 1ng.

30 7 精密度试验 7.1 实验方法 取大黄酚对照品溶液 ( 每 1ml 含大黄酚 0.04mg) 及供试品溶液 ( 批号为 ), 分次 进样 ( 进样量均为 10μl) 各 5 次, 记录峰面积值 7.2 精密度结果 序号 大黄酚对照品峰面积 供试品中大黄酚峰面积 平均值 RSD% 0.20% 0.16% 8 重现性试验 8.1 实验方法取本品 ( 批号为 ), 混匀, 精密称取 5 份, 每份 1.0g, 按上述拟定的含量测定方法测定大黄酚的含量 8.2 重现性结果 ( 含量,mg/g n=2) 序号 平均值 RSD% 含量 % 9 加样回收率试验 9.1 实验方法分别精密称取已知含量的样品 ( 批号 , 含大黄酚 0.486mg/g)1.0g, 置锥形瓶中, 各精密加入大黄酚对照品溶液 ( 每 1ml 含 0.10mg 的溶液 )1ml 2ml 3ml,4ml,5ml, 挥干甲醇, 按样品含量测定方法处理分析, 计算加样回收率 9.2 加样回收率结果 取样量 (g) 样品中大黄酚含量 (mg) 大黄酚加入量 (mg) 大黄酚总测得量 (mg) 大黄酚回收量 (mg) 回收率 (%)

31 平均回收率 :98.9 %; 变异系数 :0.62 % 以大黄酚回收量为纵坐标, 大黄酚加入量为横坐标进行线性回归, 得线性方程 : 回归方程 Y=0.993x 相关系数 r= 稳定性实验 10.1 实验方法取同一 ( 批 ) 供试品溶液, 按上文拟定的含量测定条件, 每隔 2 小时进样 10μl, 测定大黄酚含量 10.2 稳定性考查结果序号 平均值 RSD% 峰面积 % 实验证明 : 供试品的甲醇提取液中的大黄酚在 10 小时内是稳定的 11 样品含量测定 11.1 实验方法精密称取不同批次的本品 1.0g, 照含量测定方法提取 测定大黄酚含量 11.2 含量测定结果 (mg/ 粒,n=2) 批号 平均值含量 结论 : 通过以上方法学的验证结果表明, 用上述高效液相色谱条件测定中的大黄酚含量是专属 准确 可行的 通过对 3 个批次的含量测定结果表明, 制剂中大黄酚平均含量为 0.243mg/ 粒, 根据通用含量限度确定方法 (±15%), 确定本品的含量限度不得低于 mg/ 粒 功能主治 同原标准, 即 : 用法用量 口服, 一次 5 粒, 一日 4 次 禁忌 同原标准, 即 : 孕妇忌服 规格 同原标准, 即 : 每粒装 0.5g 贮藏 同原标准, 即 : 密封 有效期 新增 : 按加速稳定性试验结果, 拟定有效期二年 参考文献 :

32 (1) 中国药典 (2000 年版 ) 一部 二部 16 样品及检验报告书: 样品 : 随材料附上, 三批计 480 粒 检验报告书见附页 药物稳定性研究的试验资料及文献资料 1 加速稳定性实验 表 1 ( 批号 ) 加速稳定性试验结果 考察条件 : 温度 40 (±2 ); 相对湿度 75%(±5%); 市售铝塑板包装 规格 : 每粒装 0.5g 生产日期 :2003 年 11 月 1 日 放置及检验时间 检验项目 0 月 ( ) 1 月 ( ) 2 月 ( ) 3 月 ( ) 6 月 ( ) 检验 依据性状 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色粉末 ; 气腥, 味苦涩 1&2 鉴别 (1) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 鉴别 (2) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 检查 (1) 水分 6.8% 6.9% 6.8% 7.0% 7.3% 1&2 (2) 装量差异 0.461~ 0.532g 0.473~ 0.545g 0.471~ 0.528g 0.459~ 0.536g 0.464~ 0.540g 1&2 1&2 (3) 崩解时限 14 分钟 15 分钟 14 分钟 14 分钟 15 分钟 1&2 微生物限度 细菌总数 30 个 /g 60 个 /g 40 个 /g 60 个 /g 60 个 /g 1& 2 霉菌及酵母菌总数 <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g 1&2 大肠杆菌及活螨 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 1&2 含量测定 ( 以大黄酚计 ) 0.243mg/ 粒 0.243mg/ 粒 0.244mg/ 粒 0.243mg/ 粒 0.245mg/ 粒 2

33 注 :1 为 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二册 ;2 为提高的质量标准 ( 草案 ); 1&2 为提高的质量标准 ( 草案 ) 与 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二 册 要求相同部分 从检验结果看, 批在加速稳定性试验期内, 按原标准以及按提高的质量标准 ( 草 案 ) 检验, 结果均符合规定 表 2 ( 批号 ) 加速稳定性试验结果 考察条件 : 温度 40 (±2 ); 相对湿度 75%(±5%); 市售铝塑板包装 规格 : 每粒装 0.5g 生产日期 :2003 年 11 月 3 日 放置及检验时间 检验项目 0 月 ( ) 1 月 ( ) 2 月 ( ) 3 月 ( ) 6 月 ( ) 检验 依据性状 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色粉末 ; 气腥, 味苦涩 1&2 鉴别 (1) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 鉴别 (2) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 检查 (1) 水分 6.8% 6.9% 6.8% 7.0% 7.3% 1&2 (2) 装量差异 0.464~ 0.538g 0.463~ 0.541g 0.470~ 0.538g 0.467~ 0.535g 0.463~ 0.530g 1&2 1&2 (3) 崩解时限 14 分钟 14 分钟 14 分钟 15 分钟 14 分钟 1&2 微生物限度 细菌总数 50 个 /g 40 个 /g 60 个 /g 60 个 /g 30 个 /g 1& 2 霉菌及酵母菌总数 <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g 1&2 大肠杆菌及活螨 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 1&2 含量测定 ( 以大黄酚计 ) 0.245mg/ 粒 0.245mg/ 粒 0.245mg/ 粒 0.243mg/ 粒 0.246mg/ 粒 2 注 :1 为 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二册 ;2 为提高的质量标准

34 ( 草案 ); 1&2 为提高的质量标准 ( 草案 ) 与 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二册 要求相同部分 从检验结果看, 批在加速稳定性试验期内, 按原标准以及按提高的质量标准 ( 草案 ) 检验, 结果均符合规定 表 3 ( 批号 ) 加速稳定性试验结果 考察条件 : 温度 40 (±2 ); 相对湿度 75%(±5%); 市售铝塑板包装 规格 : 每粒装 0.5g 生产日期 :2003 年 11 月 9 日 放置及检验时间 检验项目 0 月 ( ) 1 月 ( ) 2 月 ( ) 3 月 ( ) 6 月 ( ) 检验 依据性状 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色粉末 ; 气腥, 味苦涩 1&2 鉴别 (1) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 鉴别 (2) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 检查 (1) 水分 7.8% 7.9% 7.8% 7.8% 7.9% 1&2 (2) 装量差异 0.461~ 0.532g 0.473~ 0.545g 0.471~ 0.528g 0.459~ 0.536g 0.464~ 0.540g 1&2 1&2 (3) 崩解时限 14 分钟 15 分钟 14 分钟 14 分钟 15 分钟 1&2 微生物限度 细菌总数 30 个 /g 60 个 /g 40 个 /g 60 个 /g 60 个 /g 1& 2 霉菌及酵母菌总数 <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g 1&2 大肠杆菌及活螨 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 1&2 含量测定 ( 以大黄酚计 ) 0.241mg/ 粒 0.240mg/ 粒 0.240mg/ 粒 0.241mg/ 粒 0.240mg/ 粒 2 注 :1 为 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二册 ;2 为提高的质量标准

35 ( 草案 ); 1&2 为提高的质量标准 ( 草案 ) 与 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二册 要求相同部分 从检验结果看, 批在加速稳定性试验期内, 按原标准以及按提高的质量标准 ( 草案 ) 检验, 结果均符合规定 2 长期稳定性实验 表 1 ( 批号 ) 长期稳定性试验结果 考察条件 : 温度 25 (±2 ); 相对湿度 60%(±10%); 市售铝塑板包装 规格 : 每粒装 0.5g 生产日期 :2003 年 11 月 1 日 放置及检验时间 检验项目 0 月 ( ) 3 月 ( ) 6 月 ( ) 检验 依据性状 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色粉末 ; 气腥, 味苦涩 1&2 鉴别 (1) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 鉴别 (2) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 检查 (1) 水分 6.8% 7.0% 7.3% 1&2 (2) 装量差异 0.461~ 0.532g 0.460~ 0.532g 0.467~ 0.543g 1&2 1&2 (3) 崩解时限 14 分钟 14 分钟 15 分钟 1&2 微生物限度 细菌总数 30 个 /g 60 个 /g 60 个 /g 1&2 霉菌及酵母菌总数 <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g 1&2 大肠杆菌及活螨 未检出 未检出 未检出 1&2 含量测定 ( 以大黄酚计 ) 0.243mg/ 粒 0.245mg/ 粒 0.242mg/ 粒 2 注 :1 为 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二册 ;2 为提高的质量标准 ( 草案 ); 1&2 为提高的质量标准 ( 草案 ) 与 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二 册 要求相同部分 从检验结果看, 批在现有 6 个月的长期稳定性试验期内, 按原标准以及按提高的质 量标准 ( 草案 ) 检验, 结果均符合规定 表 2 ( 批号 ) 长期稳定性试验结果

36 考察条件 : 温度 25 (±2 ); 相对湿度 60%(±10%); 市售铝塑板包装 规格 : 每粒装 0.5g 生产日期 :2003 年 11 月 3 日 放置及检验时间 检验项目 0 月 ( ) 3 月 ( ) 6 月 ( ) 检验 依据性状 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色粉末 ; 气腥, 味苦涩 1&2 鉴别 (1) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 鉴别 (2) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 检查 (1) 水分 6.8% 7.0% 7.3% 1&2 (2) 装量差异 0.464~ 0.538g 0.472~ 0.530g 0.468~ 0.537g 1&2 1&2 (3) 崩解时限 14 分钟 15 分钟 14 分钟 1&2 微生物限度 细菌总数 50 个 /g 60 个 /g 30 个 /g 1&2 霉菌及酵母菌总数 <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g 1&2 大肠杆菌及活螨 未检出 未检出 未检出 1&2 含量测定 ( 以大黄酚计 ) 0.245mg/ 粒 0.247mg/ 粒 0.244mg/ 粒 2 注 :1 为 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二册 ;2 为提高的质量标准 ( 草案 ); 1&2 为提高的质量标准 ( 草案 ) 与 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二 册 要求相同部分 从检验结果看, 批在现有 6 个月的长期稳定性试验期内, 按原标准以及按提高的质 量标准 ( 草案 ) 检验, 结果均符合规定 表 3 ( 批号 ) 长期稳定性试验结果 考察条件 : 温度 25 (±2 ); 相对湿度 60%(±10%); 市售铝塑板包装 规格 : 每粒装 0.5g 生产日期 :2003 年 11 月 9 日 放置及检验时间 检验项目 0 月 ( ) 3 月 ( ) 6 月 ( ) 检验 依据

37 性状本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色粉末 ; 气腥, 味苦涩 1&2 鉴别 (1) 呈正反应呈正反应呈正反应 1&2 鉴别 (2) 呈正反应呈正反应呈正反应 1&2 检查 (1) 水分 7.8% 7.8% 7.9% 1&2 (2) 装量差异 0.461~ 0.532g 0.476~ 0.536g 0.468~ 0.542g 1&2 1&2 (3) 崩解时限 14 分钟 14 分钟 15 分钟 1&2 微生物限度 细菌总数 30 个 /g 60 个 /g 60 个 /g 1&2 霉菌及酵母菌总数 <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g 1&2 大肠杆菌及活螨 未检出 未检出 未检出 1&2 含量测定 ( 以大黄酚计 ) 0.242mg/ 粒 0.243mg/ 粒 0.241mg/ 粒 2 注 :1 为 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二册 ;2 为提高的质量标准 ( 草案 ); 1&2 为提高的质量标准 ( 草案 ) 与 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二 册 要求相同部分 从检验结果看, 批在现有 6 个月的长期稳定性试验期内, 按原标准以及按提高的质 量标准 ( 草案 ) 检验, 结果均符合规定 文献资料 :1 中国药典 2000 年版二部附录 2 毕殿洲等, 药剂学 3 朱景申等, 药物分析 18 直接接触药品的包装材料和容器的选择依据及质量标准 PTP 铝箔 : 无毒, 无污染, 符合药用要求, 具体标准参见 GB 药用 PVC 硬片 : 无毒, 无污染, 符合药用要求, 具体标准参见 GB 某胶囊注册申报资料.doc 申报资料目录 ( 一 ) 综述资料 1 药品名称

38 2 证明性文件 3 立题目的与依据 4 对主要研究成果的总结与评价 5 药品说明书样稿 起草说明及最新参考文献 6 包装 标签设计样稿 ( 二 ) 药学研究资料 7 药学研究资料综述 8 药材来源及鉴定依据 12 生产工艺的研究资料及文献资料, 辅料来源及质量标准 15 药品标准草案及起草说明, 并提供药品标准物质的有关资料 16 样品及检验报告书 17 药物稳定性研究的试验资料及文献资料 18 直接接触药品的包装材料和容器的选择依据及质量标准 ( 一 ) 综述资料 1 药品名称 : 汉语拼音 : 命名依据 : 根据 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册 页 2 证明性文件: 附件 1 药品生产企业许可证 复印件 附件 2 营业执照 复印件 附件 3 GMP 认证证书 复印件 附件 4 不侵权行为保证书 附件 5 药品包装材料和容器注册证 复印件 3 立题目的与依据 中药 处方来自 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册 页 处方 由 等十七味中药构成, 其中 的作用为清热解毒 消肿散结, 利尿通 淋 ; 的作用为泻热通肠 凉血解毒, 逐淤通经 ; 的作用为清热燥湿, 泻火除蒸, 解毒 疗疮 因此, 具有, 消肿止痛的功效 对于脏腑毒热, 血液不清引起的, 血淋, 白浊, 尿道刺痛, 大便秘结, 疥疮,, 红肿疼痛均有很好的疗效, 受到广大医药工作者和患 者的欢迎, 市场前景广阔 所以, 我们选择了这个品种, 通过试验对其生产工艺及质量标准 进行了研究, 进一步加强了生产过程中的中间体及产品的质量控制, 提高了产品的质量 4 对主要研究成果的总结及评价 : 收载于 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册, 根据国家有关药品

39 管理的政策要求, 现按中药注册分类第 11 类要求开展有关的研究工作, 现将各项研究工作 总结如下 : 4.1 工艺研究 我们对的提取工艺进行了研究 其君药大黄的主要有效成分是蒽醌甙类物质, 我们以大黄酚 作为对照品, 用 HPLC 法测定大黄酚的含量, 计算提取过程中大黄酚的转移率, 以确定最佳 的提取条件 经试验证明水提以 20 倍水量为宜, 即第一次 8 倍水量, 第二次 6 倍水量, 第 三次 6 倍水量, 大黄酚的转移率达到 83.1%, 提取收膏率为 19.2%( 比重为 1.35,50 ), 加入处 方量的, 减压干燥, 粉碎后装入胶囊, 成品收率为 98% 以上 4.2 质量与质量标准的研究 根据 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册 项下质量标准要求, 我们对原标准项下内容进行了验证, 同时在原标准基础上增加了高效液相色谱法测定 中的 大黄酚含量测定方法, 以大黄酚为对照品 ( 中国药品生物制品检定所提供 ), 样品在与对照 品相应保留时间均出现吸收峰, 无阴性对照干扰, 结果证明该方法灵敏 准确 快速 表 1 不同厂家 质量情况对比 (n=2,mg/ 粒 ) 生产厂家 公司自行试制产品 产品批号 性状 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 本品为胶囊剂, 内容物 为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦 涩 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 鉴别 (1) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 鉴别 (2) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 检查水份装量差异崩解度微生物限度 8.0% ±7.0% 15 分钟符合规定 7.8% ±7.0% 15 分钟符合规定 7.6% ±8.0% 14 分钟 符合规定

40 8.1% ±8.0% 15 分钟符合规定含量测定 mg/ 粒 mg/ 粒 mg/ 粒 0.241mg/ 粒 从上述表中结果可以看出, 我公司研制的产品质量明显优于市面同类产品, 说明我公司已完 全掌握了该产品的关键工艺条件, 产品质量好, 质量标准可控性强, 操作方便, 能基本真实 反映该产品的内在质量 4.3 初步稳定性研究 对 3 批试制样品进行 6 个月加速稳定性考察实验, 并按原质量标准及按拟定的质量标准进行 检验, 结果均符合规定 表明该制剂在加速实验期内质量是稳定的 ( 具体研究见 药物稳定 性研究的试验资料及文献资料 项下内容 ) 5 药品说明书样稿, 起草说明及最新参考文献 : 5.1 药品说明书样稿 6 包装标签设计样稿内标签 (PTP 铝箔 ): 7 药学研究资料综述: 收载于 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册, 根据国家有关药品管理的政策要求, 现按中药注册分类第 11 类要求开展有关的研究工作, 研究资料综述如下 : 7.1 工艺研究我们对的提取工艺进行了研究 其君药大黄的主要有效成分是蒽醌甙类物质, 我们以大黄酚作为对照品, 用 HPLC 法测定大黄酚的量, 计算提取过程中大黄酚的转移率, 以确定最佳的提取条件 经试验证明水提以 20 倍水量为宜, 即第一次 8 倍水量, 第二次 6 倍水量, 第三次 6 倍水量, 大黄酚的转移率达到 83.1%, 提取收膏率为 19.2%( 比重为 1.35,50 ), 加入处方量的 粉减压干燥, 粉碎后装入胶囊, 成品收率为 98% 以上 7.2 质量及质量标准研究我们对的质量及质量标准作了研究, 根据 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册 质量标准的要求, 对本品种作了 性状 鉴别 以及 检查 等项目的检查测定 ; 同时增加中大黄酚的 HPLC 法含量测定项目, 含量测定方面 : 照高效液相色谱法 ( 中国药典 2000 年版一部附录 Ⅵ D) 测定 色谱条件与系统适用性试验用辛基硅烷键合硅胶为填充剂 ; 甲醇 -0.1% 磷酸 (75:25) 为流动相 ; 流速为每分钟 1ml; 检测波长为 254nm 理论板数按大黄酚峰计算应不低于 3000 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥 ( 减压至 16mmHg 后室温放置 24 小时 ) 至恒重的大黄酚适量, 加甲醇使溶解, 制成每 1ml 含 0.08mg 的溶液作为对照品溶液

41 供试品溶液的制备取本品内容物约 1g, 精密称定, 加甲醇 30ml 超声 30 分钟, 过滤, 挥干甲醇, 加氯仿 25ml 溶解, 加浓盐酸 1ml, 置水浴上回流 30 分钟, 放冷, 过滤, 挥干氯仿, 用甲醇溶解并定容为 25ml 作为供试品溶液 本品每粒含大黄酚 (C15H10O4) 以干燥品计, 不得少于 0.200mg 薄层定性鉴别方面标准正文基本采用了原标准的鉴别方法 7.3 质量稳定性方面经对三批试制的产品作为期 6 个月的加速稳定性试验, 并分别按原标准及拟提高的质量标准 ( 草案 ) 进行检验, 结果均符合规定, 表明该产品的质量在加速试验期内是稳定的, 故拟定有效期为二年 综上所述, 我公司对 的研制是成功的, 产品质量与质量标准均代表了同类产品的先进水平 8 药材来源及鉴定依据: 所用药材均由有限公司提供 黄柏 (CORTEX PHELLODENDRI) 本品为芸香科植物黄皮树 Phellodendron chinense schneid. 或黄檗 Phellodendron amurense Rupr. 的干燥树皮 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 251 页陈皮 (PERICARPIUM CITRI RETICULATAE) 本品为芸香科植物 Citrus reticulata Blanco 及其栽培变种的干燥成熟果皮 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 148 页金银花 (FLOS LONICERAE) 本品为忍冬科植物忍冬 Lonicera japonica Thunb. 红腺忍冬 Lonicera hupoglauca Miq. 山银花 Lonicera confusa DC. 或毛花柱忍冬 Lonicera dasystyla Rehd. 的干燥花蕾或带初开的花 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 177 页当归 (RADIX ANGELICAE SINENSIS) 本品为伞形科植物当归 Angelica sinensis(oliv.)diels 的干燥根 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 101 页乳香 (OLIBANUM) 本品为橄榄科植物卡氏乳香的胶树脂 鉴定依据 : 吉林省中药炮制规范 126 页鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 316 页鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 294 页甘草 (RADIX GLYCYRRHIZAE) 本品为豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch. 胀果甘草 yrrhiza Iflata Bat. 或光果甘草 rrhiza glabra L. 的干燥根及根茎 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 65 页蛇蜕 (PERIOSTRACUM SERPENTIS) 本品为游蛇科动物黑眉锦蛇 Elaphe teaniura Cope 锦蛇 Elaphecarinata(Guenther) 或乌梢蛇 Zaocusdhumnades(Cantor) 等蜕下的干燥表皮膜 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 256 页

42 芒硝 (NATRII SULFAS) 本品为硫酸盐类矿物芒硝族芒硝, 经加工精制而成的结晶体 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 96 页赤芍 (RADIX PAEONIAE RUBRA) 本品为毛莨科植物芍药 Paeonia lactiflora Pall. 川赤芍 Paeonia veitchii Lynch 的干燥根 鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 125 页鉴定依据 : 中国药典 2000 年版一部 42 页 12 生产工艺的研究资料及文献资料, 辅料来源及质量标准 : 12.1 处方 : 12.2 制备工艺研究我们以 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二册 的制备工艺为基本工艺路线, 对制备工艺提取用水量进行了重点研究, 确定了一个较为合理的工艺路线, 情况如下 : 1 考察指标 : 工艺研究以君药大黄中大黄酚的转移率为考察指标 2 大黄酚含量测定方法 : 照高效液相色谱法 ( 中国药典 2000 年版一部附录 Ⅵ D) 测定 色谱条件与系统适用性试验用辛基硅烷键合硅胶为填充剂 ; 甲醇 -0.1% 磷酸 (75:25) 为流动相 ; 流速为每分钟 1ml; 检测波长为 254nm 理论板数按大黄酚峰计算应不低于 3000 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥 ( 减压至 16mmHg 后室温放置 24 小时 ) 至恒重的大黄酚适量, 加甲醇使溶解, 制成每 1ml 含 0.08mg 的溶液作为对照品溶液 供试品溶液的制备取本品内容物约 1g, 精密称定, 加甲醇 30ml 超声 30 分钟, 过滤, 挥干甲醇, 加氯仿 25ml 溶解, 加浓盐酸 1ml, 置水浴上回流 30 分钟, 放冷, 过滤, 挥干氯仿, 用甲醇溶解并定容为 25ml 作为供试品溶液 本品每粒含大黄酚 (C15H1004) 以干燥品计, 不得少于 0.200mg 3 提取用水量的考察表 1 不同用水量提取大黄酚转移情况表方案编号加水方案大黄药材中大黄酚转移率方案 1 4:4: % 方案 2 6:4: % 方案 3 8:6: % 方案 4 8:6: %

43 方案 5 10:8: % 方案 6 12:10: % 从表中数据可知 : 当提取用水量达到方案 4 的水平时, 再增加用水量, 大黄酚的转移率不再有显著的提高, 本着保证产品质量及节能降耗的宗旨, 我们认为选择方案 4 作为提取加水工艺是符合工业化大生产的 12.3 制作过程及工艺条件 1 药材炮制 : 乳香按 吉林省中药炮制规范 126 页 炮制 除净杂质, 制成小块, 置锅内文火炒至表面稍溶化, 取出放凉 2 备料 : 按要求洗 捡 切 干燥, 天花粉 白芷粉碎过 60 目筛 3 提取 : 按处方投料, 提取温度为 95±2, 一次加水量为 8 倍, 提取时间为 1.5 小时 ; 二次加水量 6 倍, 提取时间为 1 小时 ; 三次加水量 6 倍, 提取时间为 1 小时 4 浓缩 : 浓缩温度 80, 真空度 -0.09Mpa, 浓缩至比重为 1.35(50 ) 5 干燥 : 混入天花粉 白芷细粉, 干燥温度 80, 真空度 -0.09Mpa 6 粉碎整粒 : 粉碎过 60 目筛整粒, 得半成品 ( 中间体 ) 7 包装 : 取上述半成品, 装入胶囊, 打光, 包装, 即得 12.4 中试情况统计统计了 3 批的中试情况, 即按处方生产投料, 统计大黄酚的转移率 收率情况及按拟定质量标准 ( 草案 ) 检验含量情况, 结果全部符合规定 具体情况如下表 : 批号 总处方投料量 (g) 大黄酚转移率 中间体重 (g) 成品量 ( 粒 ) 收率 (%) 大黄酚含量 (mg/ 粒 ) % % % * 本实验投料量按 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册 页标准中的 10 倍处方量 文献资料 : 1 中国药典 一部 二部 2 毕殿洲等, 药剂学 3 姚新生等, 天然药物化学 4 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十 册 页 5 中国药典 一部( 附录 Ⅵ D) 15 药品标准草案及起草说明: 15.1 质量标准 处方药材来源及质量标准 大黄 (RADIX ET RHIZOMA RHEI) 本品为蓼科植物掌叶大黄 Rheum officinale palmatun L., 唐古特大黄 Rheum tanguticum maxim.ex Balf. 或药用大黄 Rheum officinale Baill. 的干燥根及

44 根茎 收载于 中国药典 2000 年版一部 18 页 成品质量标准 ( 草案 ) 处方 制法 以上十七味, 除芒硝外, 天花粉 白芷粉碎成细粉, 过筛, 混匀, 其余大黄等十四位, 加水煎煮三次, 第一次 2 小时, 第二次 第三次各 1 小时, 合并煎液, 滤过, 滤液浓缩至相对密度 1.30(50 ) 的清膏, 将芒硝粉碎, 加入清膏中, 搅匀, 浓缩至相对密度 1.35 (50 ) 的稠膏, 加入上述细粉, 混匀, 干燥, 粉碎成细粉, 装入胶囊, 即得 性状 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 鉴别 (1) 取本品内容物约 5g, 加氯仿 25ml, 浓盐酸 1ml, 置水浴上加热回流 30 分钟, 放冷, 滤过, 滤液置水浴上浓缩至约 1ml, 作为供试品溶液 另取大黄对照药材 1g, 加氯仿 10ml, 盐酸 1ml, 同法制成对照药材溶液, 照薄层色谱法 ( 附录 Ⅵ B) 试验, 吸取上述两种溶液各 5ul, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以石油醚 (30~ 60 ) - 甲酸乙酯 - 甲酸 (15:5:1) 的上层溶液为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置紫外光灯 (365nm) 下检视 供试品色谱中, 在于对照药材相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点 (2) 取本品内容物约 1g, 加甲醇 5ml, 超声处理 5 分钟, 滤过, 滤液作为供试品溶液 另取黄柏对照药材 1g, 加甲醇 10ml, 同法制层对照药材溶液 再取盐酸小檗碱对照品, 加甲醇制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液, 作为对照品溶液 照薄层色谱法 ( 附录 Ⅵ B) 试验, 吸取上述两种溶液各 5ul, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以正丁醇 - 冰醋酸 - 水 (7:1:2) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置紫外光灯 (365nm) 下检视 供试品色谱中, 在于对照药材相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点 ; 在与对照品色谱相应的位置上, 显相同的一个黄色荧光斑点 检查 应符合胶囊剂项下有关的各项规定 ( 中国药典 2000 年版一部附录 ⅠL) 含量测定 照高效液相色谱法( 中国药典 2000 年版一部附录 Ⅵ D) 测定 色谱条件与系统适用性试验用辛基硅烷键合硅胶为填充剂 ; 甲醇 -0.1% 磷酸 (75:25) 为流动相 ; 流速为每分钟 1ml; 检测波长为 254nm 理论板数按大黄酚峰计算应不低于 3000 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥至恒重的大黄酚适量, 加甲醇使

45 溶解, 制成每 1ml 含 0.08mg 的溶液作为对照品溶液 供试品溶液的制备取本品内容物约 1g, 精密称定, 加甲醇 30ml 超声 30 分钟, 过滤, 挥干甲醇, 加氯仿 25ml 溶解, 加浓盐酸 1ml, 置水浴上回流 30 分钟, 放冷, 过滤, 挥干氯仿, 残渣用甲醇溶解并定容为 25ml 作为供试品溶液 测定法分别取对照品和供试品溶液各 10μl 注入液相色谱仪, 测定, 即得 本品每粒含大黄酚 (C15H10O4) 以干燥品计, 不得少于 0.200mg 功能主治 用法用量 口服, 一次 5 粒, 一日 4 次 禁忌 孕妇忌服 规格 每粒装 0.5g 贮藏 密封 15.2 质量标准修订说明 名称 同原标准( 指 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十册, 下同 ), 即 : 名称 : 汉语拼音 : 处方 同原标准, 即 : 制法 同原标准, 即 : 以上十七味, 除芒硝外, 天花粉 白芷粉碎成细粉, 过筛, 混匀, 其余大黄等十四位, 加水煎煮三次, 第一次 2 小时, 第二次 第三次各 1 小时, 合并煎液, 滤过, 滤液浓缩至相对密度 1.30(50 ) 的清膏, 将芒硝粉碎, 加入清膏中, 搅匀, 浓缩至相对密度 1.35(50 ) 的稠膏, 加入上述细粉, 混匀, 干燥, 粉碎成细粉, 装入胶囊, 即得 性状 同原标准, 即 : 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 表 1 性状观察结果供试品批号性状 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 内容物为黄褐色的粉末 ; 气腥, 味苦涩 根据 3 批样品的性状观察, 结果均符合规定 鉴别 同原标准, 即 : (1) 取本品内容物约 5g, 加氯仿 25ml, 浓盐酸 1ml, 置水浴上加热回流 30 分钟, 放冷,

46 滤过, 滤液置水浴上浓缩至约 1ml, 作为供试品溶液 另取大黄对照药材 1g, 加氯仿 10ml, 盐酸 1ml, 同法制成对照药材溶液, 照薄层色谱法 ( 附录 Ⅵ B) 试验, 吸取上述两种溶液各 5ul, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以石油醚 (30~60 ) - 甲酸乙酯 - 甲酸 (15:5:1) 的上层溶液为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置紫外光灯 (365nm) 下检视 供试品色谱中, 在于对照药材相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点 附紫外光下色谱示意图 : 鉴别 (1) 薄层层析色谱图注 :1 供试品溶液( 批号 ) 2 供试品溶液( 批号 ) 3 供试品溶液( 批号 ) 4 大黄对照药材 (2) 取本品内容物约 1g, 加甲醇 5ml, 超声处理 5 分钟, 滤过, 滤液作为供试品溶液 另取黄柏对照药材 1g, 加甲醇 10ml, 同法制层对照药材溶液 再取盐酸小檗碱对照品, 加甲醇制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液, 作为对照品溶液 照薄层色谱法 ( 附录 Ⅵ B) 试验, 吸取上述两种溶液各 5ul, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以正丁醇 - 冰醋酸 - 水 (7:1:2) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置紫外光灯 (365nm) 下检视 供试品色谱中, 在于对照药材相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点 ; 在与对照品色谱相应位置上, 显相同的一个黄色荧光斑点 附紫外光下色谱示意图 : 鉴别 (2) 薄层层析色谱图 注 :1 供试品溶液 ( 批号 ) 2 供试品溶液 ( 批号 ) 3 供试品溶液 ( 批号 ) 4 黄柏对照药材

47 5 盐酸小檗碱对照品 检查 同原标准, 即 : 应符合胶囊剂项下有关的各项规定 ( 附录 ⅠL) 表 2, 检查情况结果 : 检查项目 批 批 批 水分 7.8% 8.1% 8.0% 装量差异 0.464~0.538g 0.470~0.541g 0.473~0.531g 崩解时限 14 分钟 15 分钟 14 分钟 细菌总数 50 个 /g 60 个 /g 40 个 /g 霉菌及酵母菌总数 <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g 大肠杆菌及活螨未检出 未检出 未检出 含量测定 原标准无含量测定方法, 新建高效液相色谱含量测定方法, 即 : 照高效液相色谱法 ( 中国药典 2000 年版一部附录 Ⅵ D) 测定 色谱条件与系统适用性试验用辛基硅烷键合硅胶为填充剂 ; 甲醇 -0.1% 磷酸 (80:20) 为流动相 ; 流速为每分钟 1ml; 检测波长为 254nm 理论板数按大黄酚峰计算应不低于 3000 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥 ( 减压至 16mmHg 后室温放置 24 小时 ) 至恒重的大黄酚适量, 加甲醇使溶解, 制成每 1ml 含 0.08mg 的溶液作为对照品溶液 供试品溶液的制备取本品内容物约 1g, 精密称定, 加甲醇 30ml 超声 30 分钟, 过滤, 挥干甲醇, 加氯仿 25ml, 加浓盐酸 1ml, 置水浴上回流提取 30 分钟, 放冷, 过滤, 挥干氯仿, 残渣用甲醇溶解并定容为 25ml 作为供试品溶液 测定法分别取对照品和供试品溶液各 10μl 注入液相色谱仪, 测定, 即得 本品每粒含大黄酚 (C15H10O4) 以干燥品计, 不得少于 0.200mg 由于本方法为新建, 故本处列出方法学考察的情况, 具体试验说明如下 : 1 实验仪器与材料: Agilent 1100 高效液相色谱仪色谱柱 :Agilent Eclipse XDB-C8 分析柱 (150mm 4.6mm,5um) METTLER TOLEDO AG135 十万分之一天平大黄酚对照品 ( 中国药品生物制品检定所提供 ) 样品 ( 有限公司提供 ) 磷酸 ( 分析纯 ) 一般用途甲醇为分析纯, 流动相用甲醇为色谱纯, 水为重蒸水 2 提取条件的选择根据 中国药典 (2000 年版一部 ) 大黄 药材含量测定的样品处理方法, 并结合加样回收率试验考察, 最终确定的样品处理方法为 : 取本品内容物约 1g, 精密称定, 加甲醇 30ml, 超声 30 分钟, 过滤, 挥干甲醇, 加氯仿

48 25ml, 加浓盐酸 1ml, 置水浴上回流提取 30 分钟, 放冷, 过滤, 挥干氯仿, 残渣用甲醇溶解并定容为 25ml 作为供试品溶液 3 色谱条件的确定通过查阅各种药学资料及中国药典 (2000 年版 ) 关于 大黄 药材的含量测定方法, 我们对流动相进行筛选, 最终确定的色谱条件如下 : 色谱柱 :Agilent Eclipse XDB-C8 分析柱 (150mm 4.6mm,5um) 检测波长 :254nm 流动相 : 甲醇 -0.1% 磷酸溶液 (75:25) 流速 :lml/ 分钟柱温 : 室温 大黄酚对照品图谱 样品 阴性对照品在该色谱条件下, 对照品峰形良好, 样品相应保留时间的峰形和分离度均良好, 阴性对照品在相应保留时间无吸收, 说明该色谱条件符合专属性的要求 4 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥 ( 减压至 16mmHg 后室温放置 24 小时 ) 至恒重的大黄酚适量, 加甲醇使溶解, 制成每 1ml 含 0.08mg 的溶液作为对照品溶液 5 线性关系试验 5.1 实验方法精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥 ( 减压至 16mmHg 后室温放置 24 小时 ) 至恒重的对照品大黄酚 2.5mg, 用甲醇定容至 25ml 容量瓶中, 配成 100ug/ml 的对照品储备液, 吸取储备液稀释制成浓度为 40ug/ml,5ug/ml 的对照品溶液 按上述色谱条件, 进样, 测定峰面积, 以峰面积积分值为纵坐标, 对照品进样量为横坐标, 绘制标准曲线 5.2 线性关系结果序号标准品浓度进样体积进样量 (10-3ug) 峰面积 1 5ug/ml 4ul

49 2 40ug/ml 2ul ug/ml 6ul ug/ml 14ul ug/ml 25ul 以上数据, 以峰面积为纵坐标, 进样量为横坐标进行线性回归, 回归方程如下 : 回归方程 :y = x 相关系数 r= 检出线性范围 : ug~2.5ug 6 检出限的确定 6.1 实验方法将色谱工作站检测仪的灵敏度调高, 用 1:10 倍比稀释处理的系列对照品溶液及空白溶剂进样, 进样量为 10ul, 考察对照品与噪声强度之间的关系, 以信噪比为 3 时确定检出限 6.2 试验结果 通过实验, 可以确定上述图谱为最低检出限图谱, 该 HPLC 法大黄酚含量测定的最低检出限 为 1ng. 7 精密度试验 7.1 实验方法 取大黄酚对照品溶液 ( 每 1ml 含大黄酚 0.04mg) 及供试品溶液 ( 批号为 ), 分次 进样 ( 进样量均为 10μl) 各 5 次, 记录峰面积值 7.2 精密度结果 序号 大黄酚对照品峰面积 供试品中大黄酚峰面积 平均值 RSD% 0.20% 0.16% 8 重现性试验 8.1 实验方法取本品 ( 批号为 ), 混匀, 精密称取 5 份, 每份 1.0g, 按上述拟定的含量测定方法测定大黄酚的含量 8.2 重现性结果 ( 含量,mg/g n=2) 序号 平均值 RSD%

50 含量 % 9 加样回收率试验 9.1 实验方法分别精密称取已知含量的样品 ( 批号 , 含大黄酚 0.486mg/g)1.0g, 置锥形瓶中, 各精密加入大黄酚对照品溶液 ( 每 1ml 含 0.10mg 的溶液 )1ml 2ml 3ml,4ml,5ml, 挥干甲醇, 按样品含量测定方法处理分析, 计算加样回收率 9.2 加样回收率结果 取样量 (g) 样品中大黄酚含量 (mg) 大黄酚加入量 (mg) 大黄酚总测得量 (mg) 大黄酚回收量 (mg) 回收率 (%) 平均回收率 :98.9 %; 变异系数 :0.62 % 以大黄酚回收量为纵坐标, 大黄酚加入量为横坐标进行线性回归, 得线性方程 : 回归方程 Y=0.993x 相关系数 r= 稳定性实验 10.1 实验方法取同一 ( 批 ) 供试品溶液, 按上文拟定的含量测定条件, 每隔 2 小时进样 10μl, 测定大黄酚含量 10.2 稳定性考查结果序号 平均值 RSD% 峰面积 %

51 实验证明 : 供试品的甲醇提取液中的大黄酚在 10 小时内是稳定的 11 样品含量测定 11.1 实验方法精密称取不同批次的本品 1.0g, 照含量测定方法提取 测定大黄酚含量 11.2 含量测定结果 (mg/ 粒,n=2) 批号 平均值含量 结论 : 通过以上方法学的验证结果表明, 用上述高效液相色谱条件测定中的大黄酚含量是专属 准确 可行的 通过对 3 个批次的含量测定结果表明, 制剂中大黄酚平均含量为 0.243mg/ 粒, 根据通用含量限度确定方法 (±15%), 确定本品的含量限度不得低于 mg/ 粒 功能主治 同原标准, 即 : 用法用量 口服, 一次 5 粒, 一日 4 次 禁忌 同原标准, 即 : 孕妇忌服 规格 同原标准, 即 : 每粒装 0.5g 贮藏 同原标准, 即 : 密封 有效期 新增 : 按加速稳定性试验结果, 拟定有效期二年 参考文献 : (1) 中国药典 (2000 年版 ) 一部 二部 16 样品及检验报告书: 样品 : 随材料附上, 三批计 480 粒 检验报告书见附页 药物稳定性研究的试验资料及文献资料 1 加速稳定性实验表 1 ( 批号 ) 加速稳定性试验结果考察条件 : 温度 40 (±2 ); 相对湿度 75%(±5%); 市售铝塑板包装 规格 : 每粒装 0.5g 生产日期 :2003 年 11 月 1 日放置及检验时间检验项目 0 月

52 ( ) 1 月 ( ) 2 月 ( ) 3 月 ( ) 6 月 ( ) 检验 依据性状 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色粉末 ; 气腥, 味苦涩 1&2 鉴别 (1) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 鉴别 (2) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 检查 (1) 水分 6.8% 6.9% 6.8% 7.0% 7.3% 1&2 (2) 装量差异 0.461~ 0.532g 0.473~ 0.545g 0.471~ 0.528g 0.459~ 0.536g 0.464~ 0.540g 1&2 1&2 (3) 崩解时限 14 分钟 15 分钟 14 分钟 14 分钟 15 分钟 1&2 微生物限度 细菌总数 30 个 /g 60 个 /g 40 个 /g 60 个 /g 60 个 /g 1& 2 霉菌及酵母菌总数 <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g 1&2 大肠杆菌及活螨 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 1&2 含量测定 ( 以大黄酚计 ) 0.243mg/ 粒 0.243mg/ 粒 0.244mg/ 粒 0.243mg/ 粒 0.245mg/ 粒 2 注 :1 为 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二册 ;2 为提高的质量标准 ( 草案 ); 1&2 为提高的质量标准 ( 草案 ) 与 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二 册 要求相同部分 从检验结果看, 批在加速稳定性试验期内, 按原标准以及按提高的质量标准 ( 草 案 ) 检验, 结果均符合规定 表 2 ( 批号 ) 加速稳定性试验结果 考察条件 : 温度 40 (±2 ); 相对湿度 75%(±5%); 市售铝塑板包装 规格 : 每粒装 0.5g 生产日期 :2003 年 11 月 3 日 放置及检验时间 检验项目 0 月 ( ) 1 月

53 ( ) 2 月 ( ) 3 月 ( ) 6 月 ( ) 检验 依据性状 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色粉末 ; 气腥, 味苦涩 1&2 鉴别 (1) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 鉴别 (2) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 检查 (1) 水分 6.8% 6.9% 6.8% 7.0% 7.3% 1&2 (2) 装量差异 0.464~ 0.538g 0.463~ 0.541g 0.470~ 0.538g 0.467~ 0.535g 0.463~ 0.530g 1&2 1&2 (3) 崩解时限 14 分钟 14 分钟 14 分钟 15 分钟 14 分钟 1&2 微生物限度 细菌总数 50 个 /g 40 个 /g 60 个 /g 60 个 /g 30 个 /g 1& 2 霉菌及酵母菌总数 <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g 1&2 大肠杆菌及活螨 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 1&2 含量测定 ( 以大黄酚计 ) 0.245mg/ 粒 0.245mg/ 粒 0.245mg/ 粒 0.243mg/ 粒 0.246mg/ 粒 2 注 :1 为 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二册 ;2 为提高的质量标准 ( 草案 ); 1&2 为提高的质量标准 ( 草案 ) 与 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二 册 要求相同部分 从检验结果看, 批在加速稳定性试验期内, 按原标准以及按提高的质量标准 ( 草 案 ) 检验, 结果均符合规定 表 3 ( 批号 ) 加速稳定性试验结果考察条件 : 温度 40 (±2 ); 相对湿度 75%(±5%); 市售铝塑板包装 规格 : 每粒装 0.5g 生产日期 :2003 年 11 月 9 日放置及检验时间检验项目 0 月 ( ) 1 月

54 ( ) 2 月 ( ) 3 月 ( ) 6 月 ( ) 检验 依据性状 本品为胶囊剂, 内容物为黄褐色粉末 ; 气腥, 味苦涩 1&2 鉴别 (1) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 鉴别 (2) 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 呈正反应 1&2 检查 (1) 水分 7.8% 7.9% 7.8% 7.8% 7.9% 1&2 (2) 装量差异 0.461~ 0.532g 0.473~ 0.545g 0.471~ 0.528g 0.459~ 0.536g 0.464~ 0.540g 1&2 1&2 (3) 崩解时限 14 分钟 15 分钟 14 分钟 14 分钟 15 分钟 1&2 微生物限度 细菌总数 30 个 /g 60 个 /g 40 个 /g 60 个 /g 60 个 /g 1& 2 霉菌及酵母菌总数 <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g <10 个 /g 1&2 大肠杆菌及活螨 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 1&2 含量测定 ( 以大黄酚计 ) 0.241mg/ 粒 0.240mg/ 粒 0.240mg/ 粒 0.241mg/ 粒 0.240mg/ 粒 2 注 :1 为 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二册 ;2 为提高的质量标准 ( 草案 ); 1&2 为提高的质量标准 ( 草案 ) 与 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十二 册 要求相同部分 从检验结果看, 批在加速稳定性试验期内, 按原标准以及按提高的质量标准 ( 草 案 ) 检验, 结果均符合规定 2 长期稳定性实验表 1 ( 批号 ) 长期稳定性试验结果考察条件 : 温度 25 (±2 ); 相对湿度 60%(±10%); 市售铝塑板包装 规格 : 每粒装 0.5g 生产日期 :2003 年 11 月 1 日放置及检验时间检验项目 0 月