枣椹安神颗粒质量标准研究张永锋 1, 许红辉 1, 杨丽荣 2, 李正杰 1, 柏艳柳 1, 陆欣奇制药技术 ( 石家庄 ) 有限公司, 石家庄 ;3. 河北省食品药品监督管理局, 石家庄 ) 3 (1. 河北以岭医药研究院有限公司, 石家庄 ;2. 石药集团

Size: px

Start display at page:

Download "枣椹安神颗粒质量标准研究张永锋 1, 许红辉 1, 杨丽荣 2, 李正杰 1, 柏艳柳 1, 陆欣奇制药技术 ( 石家庄 ) 有限公司, 石家庄 ;3. 河北省食品药品监督管理局, 石家庄 ) 3 (1. 河北以岭医药研究院有限公司, 石家庄 ;2. 石药集团"

汽束狄
5 years ago
Views:

1 枣椹安神颗粒质量标准研究张永锋 1, 许红辉 1, 杨丽荣 2, 李正杰 1, 柏艳柳 1, 陆欣奇制药技术 ( 石家庄 ) 有限公司, 石家庄 ;3. 河北省食品药品监督管理局, 石家庄 ) 3 (1. 河北以岭医药研究院有限公司, 石家庄 ;2. 石药集团中摘要 : 目的建立枣椹安神颗粒的质量控制标准方法采用薄层色谱法鉴别方中的酸枣仁陈皮茯苓桑椹菊花, 采用高效液相色谱法测定橙皮苷的含量结果鉴别方法专属性强, 定量方法简便准确, 橙皮苷在 ~ ng 内线性良好 (r=1.000), 平均回收率 (n=9) 为 96.69%,RSD 为 1.10%(n=9) 结论本质量标准可有效地控制枣椹安神颗粒的质量关键词 : 枣椹安神颗粒 ; 质量标准 ; 薄层色谱法 ; 高效液相色谱法中图分类号 :R943.3 文献标志码 :B 文章编号 : (2011) 作者简介 : 张永锋, 男, 工程师 Tel: (0311) a8775@126.com 中国现代应用药学 2011 年 11 月第 28 卷第 11 期 Chin JMAP, 2011 November, Vol.28 No

2 Study on Quality Standards of Zaoshenanshen Granule ZHANG Yongfeng 1, XU Honghui 1, YANG Lirong 2, LI Zhengjie 1, BAI Yanliu 1, LU Xin 3 (1.Hebei Yiling Medicine Institute, Shijiazhuang , China; 2. CSPC Zhongqi Pharmaceutical Technology(SJZ) Co., Ltd., Shijiazhuang , China; 3. Hebei Food Drug Administration, Shijiazhuang , China) ABSTRACT: OBJECTIVE To establish the method for quality control of Zaoshenanshen granule. METHODS TLC was performed to identify Ziziphi Spinosae Semen, Citri Reticulatae Pericarpium, Poria, Mori Fructus, Chrysanthemi Flos in the granules. HPLC was used to determine the content of hesperidin. RESULTS The TLC identification was highly specific. The method of content determination was simple and accurate. The linearity of hesperidin was obtained over the range of ng(r=1.000). The average recovery rate of hesperidin was 96.69% with RSD of 1.10%(n=9). CONCLUSION This quality standard is effective in the quality control of Zaoshenanshen granule. KEY WORDS: Zaoshenanshen granule; quality standards; TLC; HPLC 枣椹安神颗粒是我单位研发的中药八类新药, 由酸枣仁陈皮茯苓桑椹菊花等 9 味中药组成, 具有养心益肾安神之功效, 用于神经衰弱症见失眠多梦头晕的治疗为了有效控制产品质量, 制定了酸枣仁陈皮茯苓桑椹菊花的薄层色谱鉴别方法及橙皮苷高效液相色谱含量测定的方法 1 仪器与试药 Agilent 1100 高效液相色谱仪 ( 美国安捷伦公司 ); 定量毛细管 ( 美国 Drummond);KQ-250B 型超声波清洗器 ( 昆山市超声仪器有限公司 );AT201 1/10 万分析天平 ( 瑞士 METTLER TOLEDO) 枣椹安神颗粒 ( 石家庄以岭药业股份有限公司, 批号 : ,030202,030203); 酸枣仁皂苷 A 对照品 ( 批号 : ) 酸枣仁皂苷 B 对照品 ( 批号 : ) 橙皮苷对照品( 批号 : , 纯度 >98%) 茯苓对照药材( 批号 : ) 桑椹对照药材 ( 批号 : ) 菊花对照药材 ( 中国药品生物制品检定所, 批号 : ); 硅胶 G( 青岛海洋化工厂 ); 重蒸水 ( 自制 ); 乙腈为色谱纯, 其他试剂均为分析纯 2 方法与结果 2.1 薄层鉴别酸枣仁取本品 20 g, 研细, 加甲醇 40 ml, 超声处理 20 min, 滤过, 滤液蒸干残渣加水 20 ml 使溶解, 加乙醚振摇提取 2 次, 每次 20 ml 醚层蒸干, 残渣加甲醇 2 ml 使溶解, 作为供试品溶液 A; 水层用乙酸乙酯振摇提取 2 次, 每次 20 ml 乙酸乙酯层蒸干, 残渣加甲醇 2 ml 使溶解, 作为供试品溶液 B; 水层再用水饱和正丁醇提取 3 次, 每次 20 ml 合并正丁醇层, 用 1%NaOH 溶液洗涤 2 次, 每次 20 ml, 弃去碱液, 正丁醇层再用水洗至中性, 蒸干残渣加甲醇 2 ml 使溶解, 作为供试品溶液 C; 取缺酸枣仁的阴性样品, 照供试品 C 制备方法制备阴性供试品溶液 ; 另取酸枣仁皂苷 A B 对照品, 加甲醇制成每 1 ml 各含 1 mg 的溶液, 作为对照品溶液吸取供试品溶液 C 20 μl 对照品溶液 5 μl, 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上, 以水饱和的正丁醇为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 喷以 5% 香草醛硫酸试液, 立即检视供试品色谱中, 在与对照品色谱相应的位置上, 显相同颜色的斑点 TLC 色谱图见图 1 图 1 酸枣仁薄层鉴别 1 阴性样品 ;2 酸枣仁皂苷 A;3 酸枣仁皂苷 B;4~6 样品 Fig 1 TLC of Ziziphi Spinosae Semen 1 negative sample; 2 Jujuboside A; 3 Jujuboside B; 4-6 sample 陈皮取项下的供试品溶液 B 作为供试品溶液 ; 取缺陈皮的阴性样品, 照供试品 B 制备方法制备阴性供试品溶液 ; 另取橙皮苷对照品, 加甲醇制成饱和溶液, 作为对照品溶液吸取供试品溶液 10~15 μl 对照品溶液 10 μl, 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上, 以氯仿 - 醋酸乙酯 - 甲醇 - 水 ( ) Chin JMAP, 2011 November, Vol.28 No.11 中国现代应用药学 2011 年 11 月第 28 卷第 11 期

以下放置 12 h 以上的下层液为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 喷以 AlCl 3 试液, 置紫外光灯 (365 nm) 下检视供试品色谱中, 在与对照品色谱相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点 TLC 色谱图见图 2 对照药材色谱相应的位置上, 有一个相同颜色的斑点 TLC 色谱图见图 4 图 2 陈皮薄层鉴别 1 阴性样品 ;2 橙皮苷 ;3~5 样品 Fig 2 TLC of

negative sample; 2 Hesperidin; 3-5 sample 2.1.

1 项下的供试品溶液 C 作为供试品溶液取缺茯苓的阴性样品, 照供试品 C 制备方法制备阴性供试品溶液 ; 另取茯苓对照药材 2 g, 加甲醇 10 ml, 超声处理 20 min, 滤过, 滤液蒸干残渣加甲醇 2 ml 使溶解, 作为对照药材溶液吸取供试品溶液 3~5 μl 对照药材溶液 10~15 μl, 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上, 以环己烷 -

3 以下放置 12 h 以上的下层液为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 喷以 AlCl 3 试液, 置紫外光灯 (365 nm) 下检视供试品色谱中, 在与对照品色谱相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点 TLC 色谱图见图 2 对照药材色谱相应的位置上, 有一个相同颜色的斑点 TLC 色谱图见图 4 图 2 陈皮薄层鉴别 1 阴性样品 ;2 橙皮苷 ;3~5 样品 Fig 2 TLC of Citri Reticulatae Pericarpium 1 negative sample; 2 Hesperidin; 3-5 sample 茯苓取项下的供试品溶液 C 作为供试品溶液取缺茯苓的阴性样品, 照供试品 C 制备方法制备阴性供试品溶液 ; 另取茯苓对照药材 2 g, 加甲醇 10 ml, 超声处理 20 min, 滤过, 滤液蒸干残渣加甲醇 2 ml 使溶解, 作为对照药材溶液吸取供试品溶液 3~5 μl 对照药材溶液 10~15 μl, 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上, 以环己烷 - 甲酸乙酯 - 甲酸 ( ) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 喷以 5% 磷钼酸试液,105 烘至斑点显色清晰供试品色谱中, 在与对照药材色谱相应的位置上, 至少有一个相同颜色的斑点 TLC 色谱图见图桑椹取项下的供试品溶液 B 作为供试品溶液 ; 取缺桑椹的阴性样品, 照供试品 B 制备方法制备阴性供试品溶液 ; 另取桑椹对照药材 1 g, 加甲醇 10 ml, 超声处理 30 min, 滤过, 滤液蒸干残渣加水 20 ml 使溶解, 用乙酸乙酯萃取 2 次, 每次 20 ml, 乙酸乙酯层蒸干, 残渣加甲醇 2 ml 使溶解, 作为对照药材溶液吸取供试品溶液 20 μl 对照药材溶液 2~5 μl, 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上, 以正己烷 - 丙酮 - 甲酸 ( ) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 喷 5% 磷钼酸试液显色, 105 烘至斑点显色清晰供试品色谱中, 在与图 3 茯苓薄层鉴别 Fig 3 TLC of Poria 图 4 桑椹薄层鉴别 Fig 4 TLC of Mori Fructus 菊花取项下的供试品溶液 A 作为供试品溶液 ; 取缺菊花的阴性样品, 照供试品 A 制备方法制备阴性供试品溶液 ; 另取菊花对照药材 1 g, 加甲醇 10 ml, 超声处理 30 min, 滤过, 滤液蒸干残渣加甲醇 2 ml, 作为对照药材溶液吸取供试品溶液 5~10 μl 对照药材溶液 5~10 μl, 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上, 以甲苯 - 甲酸乙酯 - 甲酸 (5 3 1) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 喷以 AlCl 3 试液,105 烘 5 min, 置紫外灯 (365 nm) 下检视供试品色谱中, 在与对照药材色谱相应的位置上, 至少有一个相同颜色的斑点 TLC 色谱图见图 5 中国现代应用药学 2011 年 11 月第 28 卷第 11 期 Chin JMAP, 2011 November, Vol.28 No

图 6 专属性试验色谱图 A 样品 ;B 橙皮苷对照品 ;C 阴性样品 Fig 6 Specificity experimental chromatogram A sample; B Hesperidin; C negative sample 图 5 菊花薄层鉴别 Fig 5 TLC of Chrysanthemi Flos 2.

4 图 6 专属性试验色谱图 A 样品 ;B 橙皮苷对照品 ;C 阴性样品 Fig 6 Specificity experimental chromatogram A sample; B Hesperidin; C negative sample 图 5 菊花薄层鉴别 Fig 5 TLC of Chrysanthemi Flos 2.2 含量测定色谱条件色谱柱 :Waters Symmetryshield RP 18 色谱柱 (4.6 mm 150 mm, 5 μm); 检测波长 : 283 nm; 流动相为乙腈 -0.1% 磷酸溶液 (18 82), 流速为 1.0 ml min 1 ; 理论板数以橙皮苷峰计 [1] 对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品适量, 加 50% 甲醇制成每 1 ml 含 27 μg 的溶液, 摇匀, 即得供试品溶液的制备取本品适量, 研细, 取 1.5 g, 精密称定, 精密加入 25 ml 甲醇, 称定重量超声处理 20 min, 放冷, 称重, 用甲醇补足减失的重量滤过, 精密吸取续滤液 10 ml, 蒸干, 残渣加水 10 ml 使溶解, 上聚酰胺柱 (100~200 目,1.5 g, 内径 1.0 cm), 先加水 10 ml 洗脱, 弃去再用 50 ml 30% 甲醇洗脱, 收集洗脱液, 蒸干残渣加 50% 甲醇溶解并转移至 25 ml 量瓶中, 稀释至刻度, 摇匀, 用 0.45 μm 微孔滤膜滤过, 即得检测波长的选择对橙皮苷对照品进行光谱检测, 光谱图上可见, 在 283,328 nm 处均有最大吸收, 但在 283 nm 处吸收较大, 所以选择 283 nm 作为检测波长专属性试验按处方比例取缺陈皮的药材, 依照制备工艺制得阴性样品, 按项下方法处理, 即得阴性对照液, 吸取对照品溶液供试品溶液及阴性样品溶液, 进样, 测定, 结果阴性样品不干扰橙皮苷的测定色谱图见图标准曲线精密吸取浓度为 μg ml 1 的橙皮苷对照品溶液 5,10,15,30,60,90 μl, 注入高效液相色谱仪, 以峰面积为纵坐标, 进样量为横坐标, 绘制标准曲线得回归方程 : Y=1.698X 1.740,r=1.000, 表明橙皮苷进样量在 ~ ng 内具有良好的线性关系仪器精密度试验吸取对照品溶液, 在上述色谱条件下连续进样 5 次, 测定峰面积, 结果对照品峰面积的 RSD 为 0.14%, 说明仪器精密度良好稳定性试验吸取供试品溶液, 于 0,2,6, 12,24 h 进样, 测定峰面积, 结果供试品峰面积的 RSD 为 0.37%, 说明 24 h 内供试品溶液稳定重复性试验取同一批样品, 分别取高中低 3 个样品量, 每个样品量 3 份, 按项下方法处理, 测定, 结果样品的含量平均值为 mg g 1,RSD 为 0.62%, 说明方法重复性良好回收率试验采用加样回收试验, 取同一批样品 9 份, 分 3 组, 分别加入高中低 3 种浓度的橙皮苷对照品溶液, 按项下方法处理后, 依法测定, 计算回收率结果橙皮苷的平均回收率为 96.69%,RSD 为 1.10%(n=9), 结果见表 1 表 1 回收率试验结果 (n=9) Tab 1 Results of recovery test(n=9) 已知量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD/% Chin JMAP, 2011 November, Vol.28 No.11 中国现代应用药学 2011 年 11 月第 28 卷第 11 期

5 按项下色谱条件依用 10 ml 水溶解后上 1.5 g 聚酰胺柱再加 10 ml 法测定 10 批样品中橙皮苷的含量结果见表 2 水冲洗不但除去了诸多杂质而且不影响橙皮苷样品测定的含量测定从而有利于保护色谱柱对洗脱溶剂表 2 样品中橙皮苷含量测定结果(n=2) Tab 2 Determination of hesperidin in the sample (n=2) 3 进行了考察发现使用 50%甲醇和 30%甲醇都能将平均含量(mg pocket ) 橙皮苷洗脱完全但 50%甲醇洗脱时在紧邻橙皮样品批号橙皮苷含量/mg pocket 皮苷的溶出均有一定的影响因此对这些因素进行了考察结果发现选定的条件最适合橙皮苷的提苷位置有一杂质峰为避免其对橙皮苷的含量测定造成影响所以采用 30%甲醇洗脱经过优化后提高了橙皮苷的分离度缩短了分析时间由于提取溶剂提取溶剂用量超声时间对橙取并且重复性和回收率试验均表明所选的条件能够保证橙皮苷含量测定的准确度讨论该质量标准中的 5 个鉴别部分均采用相同的 REFERENCES 供试品制备方法不仅节省了溶剂时间而且操作简单经济环保 [1] Ch.P(2010)VolⅠ(中国药典 2010 年版一部)[S] 收稿日期对洗脱溶剂用量进行了考察发现提取物残渣双波长 RP-HPLC 同时测定黄连上清片中栀子苷和黄芩苷的含量师永清 1 师永花 2(1.西北民族大学化工学院兰州摘要目的定西市人民医院甘肃定西 ) 建立同时测定黄连上清片中栀子苷黄芩苷含量的方法方法采用双波长高效液相色谱法色谱柱为 Hibor C18 柱(4.6 mm 150 mm 5 µm) 流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液梯度洗脱栀子苷和黄芩苷检测波长分别为 240 nm 和 278 nm 柱温为 30 结果栀子苷和黄芩苷进样量分别在 µg(r= )和 µg(r= )内线性关系良好平均加样回收率分别为 95.7%和 96.1% RSD 分别为 2.63%和 1.37% 结论方法简便准确重复性好适用于黄连上清片中栀子苷和黄芩苷的含量测定关键词反相高效液相色谱黄连上清片栀子苷黄芩苷中图分类号 R284.1 R 文献标志码 A 文章编号 (2011) Simultaneous Determination of Geniposide and Baicalin Content in Huanglianshangqing Tablets by Double Wavelength RP-HPLC SHI Yongqing1, SHI Yonghua2(1.College of Chemical Engineering, Northwest University for Nationalities, Lanzhou , China; 2.Dingxi People s Hospital, Dingxi , China) ABSTRACT: OBJECTIVE To establish an RP-HPLC method for simultaneous determination of geniposide and baicalin in Huanglianshangqing tablets. METHODS The analytical column was Hibor C18 column(4.6 mm 150 mm, 5 µm). The mobile phase was composed of acetonitrile and 0.2% phosphoric acid with gradient elution. Geniposide and baicalin were detected at 240 nm and 278 nm, respectively. The column temperature was 30. RESULTS The calibration curves of geniposide and baicalin showed good linearity in the ranges of µg(r= ) and µg (r= ). The average recoveries were 95.7% and 96.1%. RSD were 2.63% and 1.37%. CONCLUSION The method is simple, accurate and reproducible for determining geniposide and baicalin in Huanglianshangqing tablets. 作者简介师永清男副教授 Tel: 中国现代应用药学 2011 年 11 月第 28 卷第 11 期 syq631110@163.com Chin JMAP, 2011 November, Vol.28 No

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min 25 4 2013 8 监测技术 5 1 2 1 ( 1. 江苏省疾病预防控制中心, 江苏南京 210009; 2. 南京医科大学第二附属医院, 江苏南京 210029) 5 Phenomenex kinetex C 18 2. 6 μm 4. 6 mm 150 mm 10 mmol /L ph 2. 5 + 60 40 DAD 280 nm 5 20. 0 mg /L ~ 100 mg /L 0.

枣椹安神颗粒质量标准研究 张永锋 1, 许红辉 1, 杨丽荣 2, 李正杰 1, 柏艳柳 1, 陆欣 奇制药技术 ( 石家庄 ) 有限公司, 石家庄 ;3. 河北省食品药品监督管理局, 石家庄 ) 3 (1. 河北以岭医药研究院有限公司, 石家庄 ;2. 石药集团

枣椹安神颗粒质量标准研究张永锋 1, 许红辉 1, 杨丽荣 2, 李正杰 1, 柏艳柳 1, 陆欣奇制药技术 ( 石家庄 ) 有限公司, 石家庄 ;3. 河北省食品药品监督管理局, 石家庄 ) 3 (1. 河北以岭医药研究院有限公司, 石家庄 ;2. 石药集团