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儡赡国
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1 中华人民共和国国家标准 GB 食品安全国家标准食品添加剂维生素 D 2 ( 麦角钙化醇 ) 发布实施中华人民共和国卫生部发布

2 前言 GB 本标准代替 GB 食品添加剂维生素 D 2 本标准与 GB 相比, 主要变化如下 : 增加了红外光谱鉴别 ; 维生素 D 2 的测定系统适用性试验所用样品由维生素 D 2 改为维生素 D 3, 高效液相色谱含量测定方法由内标法改为外标法 ; 洋地黄皂苷试验检查麦角甾醇修改为薄层色谱法 ; 增加了还原性物质指标和试验方法 ; 增加了重金属指标和试验方法 ; 增加了砷指标和试验方法本标准的附录 A 和附录 B 为规范性附录, 附录 C 为资料性附录本标准所代替标准的历次版本发布情况为 : GB I

3 食品安全国家标准 GB 食品添加剂维生素 D 2 ( 麦角钙化醇 ) 1 范围本标准适用于以麦角甾醇为原料制得的食品添加剂维生素 D2 2 规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件, 仅所注日期的版本适用于本标准凡是不注日期的引用文件, 其最新版本 ( 包括所有的修改单 ) 适用于本标准 3 化学名称分子式结构式和相对分子质量 3.1 化学名称 CH 3 9,10- 开环麦角甾 -5,7,10(19),22- 四烯 -3β- 醇 CHCH H 3 C 3.2 分子式 CH 2 C 28 H 44 O 3.3 结构式 HO CH 3 CHCH CH(CH3)2 3.4 相对分子质量 ( 按 2007 年国际相对原子质量 ) 4 技术要求 4.1 感官要求 : 应符合表 1 的规定表 1 感官要求项目要求检验方法色泽无色或白色取适量样品置于清洁干燥的试管中, 在自然光气味组织状态无臭针状结晶或结晶性粉末线下, 观察色泽和组织状态, 嗅其气味 4.2 理化指标 : 应符合表 2 的规定 1

4 表 2 理化指标项目指标检验方法维生素 D 2 (C 28 H 44 O),/ % 98.0~103.0 附录 A 中 A.4 麦角甾醇,w /% 0.2 附录 A 中 A.5 比旋光度 α m (20,D)/ ( º) dm 2 kg ~ 附录 A 中 A.6 质量吸收系数 α (265nm)/(L/cm g) 46~49 附录 A 中 A.7 还原性物质 ( 四唑蓝显色试验 ),w /% 附录 A 中 A.8 砷 (As)/(mg/kg) 2 附录 A 中 A.9 重金属 ( 以 Pb 计 )/(mg/kg) 20 附录 A 中 A.10 2

5 附录 A ( 规范性附录 ) 检验方法 A.1 安全提示本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性, 按相关规定操作, 使用时需小心谨慎若溅到皮肤上应立即用水冲洗, 严重者应立即治疗在使用挥发性酸时, 要在通风橱中进行 A.2 一般规定本标准所用试剂除非另有说明, 在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和 GB/T 中规定的三级水试验方法中所用杂质测定用标准溶液制剂及制品, 在没有注明其他要求时, 均按 GB/T 602 GB/T 603 之规定制备 A.3 鉴别试验 A.3.1 醋酐浓硫酸呈色试验 A 试剂和材料 A 三氯甲烷 A 乙酸酐 A 硫酸 A 分析步骤取约 0.5 mg 实验室样品, 加 5 ml 三氯甲烷溶解后, 加 0.3 ml 醋酐与 0.1 ml 硫酸, 振摇, 初显黄色, 渐变红色, 迅即变为紫色, 最后变为绿色 A.3.2 红外光谱试验采用溴化钾压片法, 按照 GB/T 6040 进行试验, 实验室样品的红外光谱应与对照的图谱一致 ( 对照图谱见附录 B) A.4 维生素 D 2 的测定 A.4.1 方法提要用高效液相色谱法, 在选定的工作条件下, 通过色谱柱使样品分离, 用紫外吸收检测器检测, 用外标法定量, 计算样品中维生素 D 2 的含量 A.4.2 试剂和材料 A 正戊醇 : 色谱纯 A 正己烷 : 色谱纯 A 异辛烷 : 色谱纯 A 维生素 D 2 对照品 3

6 A 维生素 D 3 对照品 A.4.3 仪器和设备高效液相色谱仪 (HPLC) A.4.4 色谱分析条件推荐的色谱柱及典型色谱操作条件见表 A.1, 维生素 D 3 系统适用性试验高效液相色谱图参见图 C.1, 各组分的相对保留时间参见表 C.1 其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱条件均可使用色谱柱表 A.1 色谱柱和典型色谱操作条件柱长 250mm, 柱内径 4.6mm, 硅胶色谱柱流动相正己烷 - 正戊醇 (1000+3) 流速检测器检测波长 2 ml/min 254 nm A.4.5 分析步骤 A 维生素 D 3 对照品系统适应性试验贮备液的制备称取约 25 mg 维生素 D 3 对照品, 精确至 g, 置 100 ml 棕色容量瓶中, 加 80 ml 异辛烷, 用超声处理助溶 1min, 避免加热, 使完全溶解, 再加异辛烷至刻度, 摇匀充氮密塞, 避光,0 以下保存 A 实验室样品溶液的制备称取约 25 mg 实验室样品, 精确至 g, 置 100 ml 棕色容量瓶中, 加 80 ml 异辛烷, 用超声处理助溶 1min, 避免加热, 使完全溶解, 再加异辛烷至刻度, 摇匀量取 5 ml±0.05 ml 上述溶液, 置 10 ml 棕色容量瓶中, 加正己烷至刻度, 摇匀 A 维生素 D 2 对照品溶液的制备称取约 25 mg 维生素 D 2 对照品, 精确至 g, 置 100 ml 棕色容量瓶中, 加 80 ml 异辛烷, 用超声处理助溶 1min, 避免加热, 使完全溶解, 再加异辛烷至刻度, 量取上述溶液 5 ml±0.05 ml, 置 10 ml 棕色容量瓶中, 加正己烷至刻度, 摇匀 A 系统适用性试验以硅胶为填充剂的色谱柱, 正己烷 - 正戊醇 (1000+3) 为流动相, 检测波长 254 nm, 流速约为 2 ml/min 量取维生素 D 3 对照品贮备溶液 5 ml, 置具塞玻璃容器中, 充氮后密塞, 置 90 水浴加热 1h, 取出迅速冷却, 加正己烷 5 ml±0.05 ml, 摇匀, 置 1 cm 具塞石英吸收池中, 在 2 支主波长分别为 254 nm 和 365 nm 的紫外光灯下, 将石英吸收池斜放成 45, 并距灯管 5 cm~6 cm, 照射 5min, 使溶液中含有前维生素 D 3 反式维生素 D 3 维生素 D 3 和速甾醇 D 3 取此溶液注入液相色谱仪, 测定维生素 D 3 的峰值, 先后进样 5 次, 相对标准偏差应不大于 2.0%, 前维生素 D 3 ( 与维生素 D 3 的比保留时间为 0.5) 与反式维生素 D 3 ( 与维生素 D 3 的比保留时间约为 0.6) 以及维生素 D 3 与速甾醇 D 3 ( 与维生素 D 3 的比保留时间约为 1.1) 的峰分离度均应大于 1.0 A 测定取 20μL 实验室样品溶液注入液相色谱仪, 记录色谱图, 另取维生素 D 2 对照品溶液, 同法测定按外标法以峰面积计算出供试品中维生素 D 2 的含量 A.4.6 结果计算 4

7 根据色谱图计算维生素 D 2 的质量分数 w 1, 数值以 % 表示, 按公式 (A.1) 计算 w m A = A1 m2 100% (A.1) GB 式中 : m 1 对照品溶液中维生素 D 2 的进样量的数值, 单位为微克 (μg); A 实验室样品溶液中维生素 D 2 的峰面积的数值 ; 2 A 对照品溶液中维生素 D 2 的峰面积的数值 ; 1 m 2 实验室样品溶液中维生素 D 2 的进样量的数值, 单位为微克 (μg) 取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果, 两次平行测定的允许绝对差不大于 1.5 % A.5 麦角甾醇的测定 A.5.1 方法提要将维生素 D 2 溶液点样于薄层板上, 经展开, 显色后, 所得的色谱图与对照品溶液按同法所得的色谱图作对比, 对维生素 D 2 进行杂质检查 A.5.2 试剂和材料 A 角鲨烷氯仿溶液 :10 g/l A 展开剂 : 环己烷 - 乙醚 (1+1) A 维生素 D 2 对照品 A 麦角甾醇对照品 A.5.3 分析步骤 A 对照品溶液的配制称取约 50 mg 维生素 D 2 对照品, 精确至 g, 用 1 ml 角鲨烷氯仿溶液溶解, 得对照品溶液 A 实验室样品溶液的配制称取约 50 mg 维生素 D 2 实验室样品, 精确至 g, 用 1 ml 角鲨烷氯仿溶液溶解, 得实验室样品溶液 A 麦角甾醇对照溶液的配制称取约 5 mg 麦角甾醇对照品, 精确至 0.1 mg, 置于 50 ml 容量瓶中, 加角鲨烷氯仿溶液 40 ml 溶解并稀释至刻度, 摇匀 A 显色剂的配制取 1.0 g 三氯化锑, 加 20 ml 乙酰氯溶解 A 测定分别取 10 μl 对照品溶液实验室样品溶液及麦角甾醇对照溶液, 分别点于以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶 G 薄层板上, 用展开剂暗处展开, 晾干, 用显色剂显色实验室样品溶液与对照品溶液的主斑点 R f 值及颜色应一致, 实验室样品溶液的杂质斑点不得深于麦角甾醇对照溶液相应的斑点 A.6 比旋光度的测定 5

8 A.6.1 试剂和材料无水乙醇 A.6.2 仪器和设备旋光仪 A.6.3 分析步骤取实验室样品适量, 精确至 g, 加无水乙醇制成 1 ml 中约含 40 mg 的溶液, 其他按 GB/T 规定的方法进行 ( 注 : 在溶液配制后 30min 内测定 ) A.6.4 结果计算比旋光度 а m (20,D) 按公式 (A.2) 计算 : 式中 : α m α = (A.2) l ( 20 CD, ) ρ α 测得的旋光角, 单位为度 ( ); l 旋光管的长度, 单位为分米 (dm); ρ α 溶液中有效组分的质量浓度, 单位为克每毫升 (g/ml) A.7 质量吸收系数的测定 A.7.1 试剂和材料无水乙醇 A.7.2 仪器和设备紫外分光光度仪 A.7.3 分析步骤称取实验室样品适量, 精确至 g, 加乙醇制成每 1 ml 中约含 10 μg 样品的溶液, 按照 GB/T 9721 在 265 nm±1 nm 的波长处测定吸光度 A, 求其质量吸收系数 A.7.4 结果计算根据吸光度 A 计算维生素 D 2 的质量吸收系数 α, 数值以 (º) dm 2 kg -1 表示, 按公式 (A.3) 计算 : 式中 : A 样品溶液的吸光度的数值 ; A α = (A.3) b ρ b 光路长度 ( 即吸收池厚度 ) 的数值, 单位为厘米 (cm); ρ α 实验室样品溶液的质量浓度的数值, 单位为克每升 (g/l) A.8 还原性物质的测定 A.8.1 方法原理 α 6

9 还原性物质在强碱性溶液中能将四唑蓝还原为有色甲月替 (formazan), 与对甲二酚无水乙醇还原物质的标准溶液颜色比较做限量检查 A.8.2 试剂和材料 A 无水乙醇 A 甲醇 A 冰乙酸 A 四唑蓝甲醇溶液 :50 mg/ml A 羟化四甲铵溶液 : 羟化四甲铵水溶液 (100 g/l) - 无水乙醇 (1+9) A 对甲二酚无水乙醇溶液 :0.2 μg/ml A.8.3 分析步骤 A 实验室样品溶液的制备称取约 0.1 g 实验室样品, 精确至 g, 溶解于无水乙醇中, 稀释至 10 ml, 加入 0.5 ml 四唑蓝甲醇溶液和 0.5 ml 羟化四甲铵溶液, 静置 5min, 加入 1.0 ml 冰乙酸, 摇匀 A 对照溶液的制备量取 10 ml±0.05 ml 0.2 μg/ml 对甲二酚无水乙醇溶液, 加入 0.5 ml 四唑蓝甲醇溶液和 0.5 ml 羟化四甲铵溶液, 静置 5min, 加入 1.0 ml 冰乙酸, 摇匀 A 空白溶液的制备取 10 ml 无水乙醇, 加入 0.5 ml 四唑蓝甲醇溶液和 0.5 ml 羟化四甲铵溶液, 静置 5min, 加入 1.0 ml 冰乙酸, 摇匀 A 测定在 525 nm 波长处, 用空白溶液调零, 分别测定实验室样品溶液与对照溶液的吸光度, 实验室样品溶液的吸光度不得大于对照溶液 A.9 砷的测定取 5 g±0.01 g 实验室样品, 用干灰化法处理样品取相同量的氧化镁硝酸镁与试样同法处理, 做试剂空白试验量取 10 ml±0.05 ml 砷标准溶液 ( 含砷 2.0μg), 同法处理, 制备砷限量标准按 GB/T 砷斑法的规定进行 A.10 重金属的测定 A.10.1 试剂和材料 A 硝酸 A 硫酸 A 盐酸 A 甘油 A 乙酸铵 A 硝酸铅 A 硫代乙酰胺 A 氨试液 :

10 A 氢氧化钠溶液 :c(naoh)=1 mol/l A 盐酸溶液 :c(hcl)=2 mol/l A 盐酸溶液 :c(hcl)=7 mol/l A 氨水溶液 :c(nh 3 H 2 O)=5 mol/l A 酚酞指示液 :10g/L 乙醇溶液 A 乙酸盐缓冲液 (ph3.5): 取 25 g 乙酸铵, 加水 25 ml 溶解后, 加 7 mol/l 盐酸溶液 38 ml, 用 2 mol/l 盐酸溶液或氨水溶液准确调节 ph 至 3.5(pH 计 ), 用水稀释至 100 ml A 硫代乙酰胺试液 : 取 4 g 硫代乙酰胺, 精确至 0.01 g, 加水使溶解成 100 ml, 置冰箱中保存临用前取 5.0 ml 混合液 ( 由 1 mol/l 15 ml 氢氧化钠溶液 5.0 ml 水及 20 ml 甘油组成 ), 加上述 1.0 ml 硫代乙酰胺溶液, 置水浴上加热 20s, 冷却, 立即使用 A 铅标准溶液 : 称取 g 硝酸铅, 精确至 g, 置于 1000 ml 容量瓶中, 加 5 ml 硝酸与 50 ml 水溶解后, 用水稀释至刻度, 摇匀, 作为贮备液临用前, 移取 (10±0.02)mL 贮备液, 置于 100 ml 容量瓶中, 加水稀释至刻度, 摇匀, 即得 ( 每 1mL 相当于 10 µg 的 Pb) 配置与贮存用的玻璃仪器均不得含铅 A.10.2 分析步骤按中华人民共和国药典 2005 年版二部附录 Ⅷ H 重金属检查法第二法, 具体方法如下 : 取 1 g ±0.01 g 实验室样品, 缓缓灼烧至完全炭化, 放冷, 加 0.5 ml~1.0 ml 硫酸, 使恰湿润, 用低温加热制硫酸除尽后, 加 0.5 ml 硝酸, 蒸干, 至氧化氮蒸气除尽后, 放冷, 在 500 ±50 炽灼至完全灰化, 放冷, 加 2 ml 盐酸, 置水浴上蒸干后加 15 ml 水, 滴加氨试液至对酚酞指示液显中性, 再加 2 ml 乙酸盐缓冲液 (ph3.5), 微热溶解后, 移置纳氏比色管甲管中, 加水稀释成 25 ml; 另取配制实验室样品溶液的试剂, 置瓷皿中蒸干后, 加 2 ml 乙酸盐缓冲液 (ph3.5) 与 15 ml 水, 微热溶解后, 移置纳氏比色管乙管中, 加 2 ml±0.02 ml 标准铅溶液, 再用水稀释成 25 ml; 再在甲乙两管中分别加 2 ml 硫代乙酰胺试液, 摇匀, 放置 2min, 同置白纸上, 自上向下透视, 甲管中显示的颜色与乙管比较, 不得更深 8

11 附录 B ( 规范性附录 ) 维生素 D 2 红外光谱图注 : 引自药品红外光谱集第一卷 (1995) 图 B.1 维生素 D 2 红外光谱图 1

12 附录 C ( 资料性附录 ) 系统适用性试验高效液相色谱图和相对保留时间图 C.1 系统适用性试验高效液相色谱图表 C.1 各峰保留时间和相对保留时间峰序组分名称相对保留时间 1 溶剂峰 2,3 未知峰 4 前维生素 D 反式维生素 D 维生素 D 速甾醇 D

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<4D F736F F D203232A1B6CAB3C6B7CCEDBCD3BCC1CEACC9FACBD84232A1B7B1EAD7BCCEC4B1BE> 中华人民共和国国家标准 GB 14752 2010 食品安全国家标准食品添加剂维生素 B 2 ( 核黄素 ) 2010-12-21 发布 2011-02-21 实施中华人民共和国卫生部发布前言本标准代替 GB 14752 1993 食品添加剂维生素 B 2 ( 核黄素 ) 本标准与 GB 14752 1993 相比, 主要变化如下 : 鉴别试验增加了紫外 - 可见分光光度法和红外分光光度法鉴别,