麦门冬对照药材 批号 121013唱201310 均购自中国 食品药品检定研究院 芪黄扶正颗粒 批号 160301 160315 160331 福州总医院制剂室自制 甲醇 乙 腈为色谱纯 水为超纯水 其余试剂为分析纯 2 TLC 鉴别 2 1 黄芪 取芪黄扶正颗粒 10 g 溶解于 50 ml 水中
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2 麦门冬对照药材 批号 121013唱201310 均购自中国 食品药品检定研究院 芪黄扶正颗粒 批号 160301 160315 160331 福州总医院制剂室自制 甲醇 乙 腈为色谱纯 水为超纯水 其余试剂为分析纯 2 TLC 鉴别 2 1 黄芪 取芪黄扶正颗粒 10 g 溶解于 50 ml 水中 过滤后取滤液 置分液漏斗中用水饱和正丁醇 溶液萃取 50 ml 3 合并正丁醇部位 用氨试液洗 涤 50 ml 3 弃去氨试液 再用正丁醇饱和的水洗 涤 50 ml 3 合并正丁醇部位 蒸干 残渣溶解于 1 ml 甲醇 制得黄芪供试品溶液 取与芪黄扶正颗 粒同法制备的缺黄芪阴性颗粒 10 g 按照供试品制 备方法处理制得黄芪阴性对照溶液 另取黄芪对照 药材约 1 g 用甲醇 30 ml 加热回流提取 1 h 趁热过 滤 滤液蒸干 残渣加水 50 ml 使溶解 其余同供试 品制备方法处理 制得黄芪对照药材溶液 再取适 量黄芪甲苷对照品 溶解于甲醇中 制成每 1 ml 含 1 mg的黄芪甲苷对照品溶液 参照枟中华人民共和 2 国药典 2015 年版 枠 方法试验 依次吸取上述黄 芪甲苷对照品和黄芪对照药材各 5 μl 供试品和阴 性对照溶液各 10 μl 分别点于同一硅胶 G 薄层板 上 以二氯甲烷唱甲醇唱水 20 5 1 4 放置过夜 的下层 溶液为展开剂 展开 取 出 晾 干 喷 以 10 硫酸乙醇溶液 加热至斑点显色清晰 供试品 色谱中 在与黄芪甲苷对照品及黄芪对照药材色谱 相应位置上 显相同的棕红色斑点 阴性对照无干 扰 见图 1 3 2 2 熟地黄 取 2 1 项下供试品作为熟地黄鉴 别用供试品 取与芪黄扶正颗粒同法制备的缺熟地 1 531 黄阴性颗粒 10 g 按照供试品制备方法处理 制得熟 地黄阴性对照溶液 取熟地黄对照药材 2 g 加水 60 ml 回流提取 60 min 趁热过滤 滤液放冷后按照 供试品制备方法处理制得熟地黄对照药材溶液 按 照文献 2 方法试验 依次吸取熟地黄对照药材 供 试品和阴性对照溶液各 5 μl 分别点于同一硅胶 G 薄层板上 以乙酸乙酯唱丁酮唱甲酸唱水 10 1 1 1 为展开剂 展开 取出 晾干 置紫外灯 365 nm 下 检视 供试品色谱中 在与熟地黄对照药材色谱相 应位置上 显相同的蓝色斑点 阴性对照无干扰 见 图2 图2 熟地黄的 TLC 鉴别 1 对照药材 2 4 供试品 5 阴性对照 2 3 山茱萸 4 取 2 1 项下供试品作为山茱萸鉴 别用供试品 取与芪黄扶正颗粒同法制备的山茱萸 阴性颗粒 10 g 按照供试品制备方法处理制得山茱 萸阴性对照溶液 另取山茱萸对照药材约 1 g 用甲 醇 30 ml 回流提取 30 min 趁热过滤 滤液蒸干 残 渣溶于 50 ml 水中 其余同供试品制备方法处理 制 得山茱萸对照药材溶液 再取马钱苷对照品适量 溶解于甲醇中 制成每 1 ml 含1 mg的马钱苷对照品 溶液 按照文献 2 方法试验 依次吸取上述马钱苷 对照品溶液和山茱萸对照药材溶液各 2 μl 供试品 溶液和阴性对照溶液各 10 μl 分别点于同一硅胶 G 薄层板上 以乙酸乙酯唱95 乙醇唱冰醋酸 50 10 1 为展开剂 展开 取出 晾干 喷以 5 香草醛硫酸 溶液 加热至斑点显色清晰 供试品色谱中 在与马 钱苷对照品及山茱萸对照药材色谱相应的位置上 显相同的紫红色斑点 阴性对照无干扰 见图 3 2 4 图1 黄芪的 TLC 鉴别 1 对照品 2 对照药材 3 5 供试品 6 阴性对照 当归和川芎 5 取芪黄扶正颗粒 3 g 加水溶 解至 30 ml 过滤 以稀盐酸调节滤液 ph 至 2 3 置分液漏斗中 用乙醚振摇提取 30 ml 3 合并乙
3 532 图 3 山茱萸的 TLC 鉴别 图 4 当归和川芎的 TLC 鉴别 1 马钱苷对照品 2 山茱萸对照药材 1 对照品 2 当归对照药材 3 川芎对照药材 3 5 供试品 6 阴性对照 醚部位 蒸干 残渣溶解于 1 ml 甲醇 即得供试品溶 液 取与芪黄扶正颗粒同法制备的缺当归和川芎的 阴性颗粒 3 g 按照供试品溶液制备方法处理 制得 阴性对照溶液 分别取当归 川芎对照药材各 1 g 以水 30 ml 回流提取60 min 趁热过滤 以稀盐酸调 节滤液 ph 至 2 3 其余按照供试品溶液制备方法 处理 分别制得当归和川芎对照药材溶液 再称取 适量阿魏酸对照品 用甲醇溶解制成每 1 ml 含1 mg 的阿魏酸对照品溶液 按照文献 2 方法试验 依次 吸取阿魏酸对照品 当归对照药材 川芎对照药材 供试品和阴性对照溶液各 5 μl 分别点于同一硅胶 G 薄层板上 以甲苯唱乙酸乙酯唱冰乙酸 9 4 1 为 展开剂 展开 取出 晾干 置紫外光灯 365 nm 下 检视 供试品色谱中 在与阿魏酸对照品及当归和 川芎对照药材色谱相应位置上 显相同的蓝色荧光 斑点 阴性对照无干扰 见图 4 2 5 赤芍和牡丹皮 6 取 2 1 项下供试品作为赤 芍和牡丹皮鉴别用供试品 取与芪黄扶正颗粒同法 制备的赤芍和牡丹皮阴性颗粒 10 g 按照供试品溶 液制备方法处理 制得阴性对照溶液 分别取赤芍 牡丹皮对 照 药 材 各 0 5 g 加 水 60 ml 回 流 提 取 60 min 趁热过滤 放冷后按照供试品溶液制备方法 处理 分别制得赤芍和牡丹皮对照药材溶液 再称 取适量芍药苷对照品 加甲醇溶解制成每 1 ml 含 1 mg的芍药苷对照品溶液 参照文献 2 方法试 验 依次吸取上述芍药苷对照品溶液和赤芍 牡丹皮 4 6 供试品 7 阴性对照 对照药材溶液各 5 μl 供试品溶液和阴性对照溶液 各 10 μl 分别点于同一硅胶 G 薄层板上 以乙酸乙 酯唱甲醇唱甲酸 10 2 0 1 为展开剂 展开 取出 晾干 喷以 5 香草醛硫酸溶液 加热至斑点显色清 晰 供试品色谱中 在与芍药苷对照品及赤芍和牡 丹皮对照药材色谱相应的位置上 显相同的褐色斑 点 阴性对照无干扰 见图 5 2 6 麦门冬 7 取芪黄扶正颗粒 10 g 加 30 ml 水 和 2 ml 盐酸使溶解 水浴回流提取 30 min 趁热过 滤 滤液放冷至室温 置分液漏斗中用三氯甲烷振摇 提取 30 ml 3 合并三氯甲烷部位 蒸干 残渣溶 解于 1 ml 甲醇 制得供试品 另取与芪黄扶正颗粒 同法制备的麦门冬阴性颗粒 10 g 及麦门冬对照药 材 1 g 按照供试品溶液制备方法处理 制得麦门冬 阴性对照及麦门冬对照药材溶液 按照文献 2 方 法试验 依次吸取麦门冬对照药材 供试品和阴性对 照溶液各 5 μl 分别点于同一硅胶 G 薄层板上 以 环己烷唱乙酸乙酯 1 1 为展开剂 展开 取出 晾 干 喷以 10 硫酸乙醇溶液 加热至斑点显色清晰 供试品色谱中 在与麦门冬对照药材色谱相应位置 上 显相同的黑色斑点 阴性对照无干扰 见图 6 3 3 1 含量测定 色谱条件 色谱柱 DIKM A Diamonsil C18 柱 4 6 mm 200 mm 5 μm 检测波长 240 nm 柱 温 25 流速 1 0 ml min 进样量 10 μl 以乙腈唱
4 533 10 min 用 70 甲醇稀释至刻度 即得供试品溶液 3 2 3 阴性对照溶液 取山茱萸阴性颗粒 按照 3 2 2 项下同法处理 即得 3 3 方法学考察 3 3 1 系统适用性与专属性试验 依次精密吸取 对照品 供试品和阴性对照溶液各 10 μl 按照 3 1 项下测定 结果阴性对照色谱图中 在与对照品色 谱图相应位置无色谱峰 供试品色谱图中 马钱苷与 相邻成分分离良好 分离度为 6 72 理论塔板数为 15 964 表明所建立的方法专属性较好 能用于马钱 苷的定量测定 见图 7 图 5 赤芍和牡丹皮的 TLC 鉴别 1 对照品 2 赤芍对照药材 3 牡丹皮对照 药材 4 6 供试品 7 阴性对照 图 7 芪黄扶正颗粒 HPLC 图 A 对照品溶液 B 供试品溶液 C 阴性对照溶液 1 马钱苷 图 6 麦门冬的 TLC 鉴别 1 对照药材 2 4 供试品 5 阴性对照 0 1 磷酸溶液 10 90 为流动相 3 2 溶液的制备 3 2 1 对照品溶液 精密称取马钱苷对照品约 20 mg 置 25 ml 棕色量瓶 用 70 甲醇溶解并稀释 至刻度 制得 804 0 μg ml 的对照品溶液 3 2 2 供试品溶液 精密称取芪黄扶正颗粒约 3 g 置 25 ml 棕色量瓶 加适量 70 甲醇 超声处理 3 3 2 线性关系 精密量取对照品溶液 1 0 ml 置 10 ml 棕色量瓶 用 70 甲醇稀释至刻度 配制成浓 度为 80 40 μg ml 的对照品溶液 再从80 40 μg ml 的对照品溶液中分别精密吸取 0 5 1 0 1 5 2 5 5 0 ml 溶液置 10 ml 棕色量瓶 并用 70 甲醇稀释 至刻度 摇匀 得系列浓度的马钱苷对照品溶液 按 照 3 1 项下测定 以峰面积为纵坐标 Y 对照品 浓度为横坐标 X μg ml 进行线性回归 得线性方 程 Y 18 50 X 3 273 r 0 999 9 结果表明 马 钱苷浓度在 4 02 80 40 μg ml 范围内呈现良好的 线性关系 3 3 3 精 密 度 试 验 取同一份对照品溶液 40 20 μg ml 6 份 按照 3畅 1 项下测定 计算峰面 积 RSD 值 结果峰面积 RSD 为 0畅 10 表明本方 法精密度良好 3 3 4 重复性试验 从同一批样品中精密称取样
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