卵磷脂

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1 蛋黄卵磷脂 ( 供注射用 ) Danhuang Luanlinzhi(Gongzhusheyong) Egg yolk lecithin for Injection [ ] 本品系以鸡蛋黄或蛋黄粉为原料, 经适当溶剂提取精制而得的磷脂混合物 以无水物计算, 含氮 (N) 应为 1.75%~1.95%, 含磷 (P) 应为 3.5%~4.1%, 含磷脂酰胆碱不得少于 68%, 含磷脂酰乙醇胺应不得过 20%, 含磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺的总量不得少于 80% 性状 本品为乳白色或淡黄色粉末状或蜡状固体, 具有轻微的特臭, 触摸时有轻微滑腻感 本品在乙醇 乙醚 三氯甲烷或石油醚 ( 沸程 40~60 C) 中溶解, 在丙酮和水中几乎不溶 酸值本品的酸值 ( 中国药典 2010 版二部附录 VII H) 不得过 20.0 皂化值本品的皂化值 ( 中国药典 2010 版二部附录 VII H) 为 195~212 碘值本品的碘值 ( 中国药典 2010 版二部附录 VII H) 为 60~73 过氧化值取本品 2.0g, 精密称定, 置 250ml 碘瓶中, 依法测定 ( 中国药典 2010 版二部附录附录 Ⅶ H), 应不得过 3.0 鉴别 (1) 取本品 0.1g, 置坩埚中, 加碳酸钠 - 碳酸钾 (2:1)3g, 混匀, 微火加热, 产生的气体能使润湿的红色石蕊试纸变蓝 (2) 取鉴别 (1) 项下遗留的残渣约 100mg, 缓缓灼烧至炭化物全部消失, 放冷, 加水 30ml, 微热使残渣溶解, 滤过, 滤液至试管中, 滴加硫酸至无气泡产生, 再加硫酸 4 滴, 加钼酸钾少许, 加热, 应呈黄绿色 (3) 在磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺含量测定项下记录的色谱图中, 供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致 检查 游离脂肪酸对照品溶液的制备称取棕榈酸 0.512g, 至 50ml 量瓶中, 用正庚烷溶解并稀释至刻度, 摇匀, 精密量取 2ml, 至 50ml 量瓶中, 用正庚烷稀释至刻度, 摇匀, 即得 供试品溶液的制备取本品约 1g, 精密称定, 至 25ml 量瓶中, 用异丙醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 即得 1

2 测定法精密量取供试品溶液和对照品溶液各 1ml, 分别置 20ml 具塞试管中, 各加异丙醇 - 正庚烷 -0.5mol/L 硫酸溶液 (40:10:1) 混合溶液 5.0ml, 振摇 1 分钟, 放置 10 分钟 供试品溶液管精密加正庚烷 3ml 和水 3ml, 对照品溶液管精密加正庚烷 2ml 和水 4ml, 密塞, 上下翻转 10 次, 静置至少 15 分钟, 使分层 分别精密量取上层液 3ml, 置 10ml 离心管中, 加尼罗蓝指示液 ( 取尼罗蓝 0.04g, 加水 200ml, 使溶解后, 加正庚烷 100ml 振摇, 弃去上层正庚烷 反复操作 4 次 取下层水溶液 20ml, 加无水乙醇 180ml, 混匀 本液置棕色瓶中, 室温下可存放一个月 )1ml, 在通氮条件下, 用氢氧化钠滴定液 (0.01mol/L) 滴定至溶液显淡紫色 供试品溶液消耗氢氧化钠滴定液 (0.01mol/L) 的毫升数不得大于对照品溶液消耗氢氧化钠滴定液 (0.01mol/L) 的毫升数 ( 不得过 1%) 甘油三酸酯 胆固醇 棕榈酸取本品适量, 用己烷 异丙醇 水 ( 40:50:8) 混合溶剂制成每 1ml 中含 20mg 的溶液, 作为供试品溶液, 分别精密称取甘油三酸酯对照品 胆固醇 棕榈酸对照品各适量, 用上述混合溶剂分别制成每 1ml 各含 0.6mg 0.4mg 0.2mg 的甘油三酸酯 胆固醇 棕榈酸的对照品溶液, 照薄层色谱法 ( 中国药典 2010 年版二部附录 V B) 试验, 吸取上述供试品溶液, 甘油三酸酯对照品溶液, 胆固醇对照品溶液各 5μl, 棕榈酸对照品溶液 1μl, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以己烷 乙醚 冰醋酸 (70:30:1) 为展开剂, 置内壁贴有展开剂湿润滤纸的层析缸中, 展开后, 取出, 晾干 喷以 10%(w/v) 硫酸铜稀磷酸溶液 (8 %,w/v) 溶液, 热风吹干, 在 170 干燥 10 分钟, 供试品溶液如显现与对照品溶液相应位置的杂质斑点, 其颜色与对照品溶液所显的主斑点比较不得更深 ( 即甘油三酸酯不得过 3%; 胆固醇不得过 2%; 棕榈酸不得过 0.2%) 有关物质取本品约 125mg, 精密称定, 置 25ml 量瓶中, 用三氯甲烷 - 甲醇 (2:1) 溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为供试品溶液 另取溶血磷脂酰乙醇胺 鞘磷脂 溶血磷脂酰胆碱 磷脂酰肌醇对照品适量, 加三氯甲烷 - 甲醇 (2:1) 溶解制成每 1ml 约含溶血磷脂酰乙醇胺 μg, 约含鞘磷脂 μg, 约含溶血磷脂酰胆碱 μg, 含磷脂酰肌醇 μg, 的溶液, 作为对照溶液 照磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺含量测定项下的色谱条件, 取对照溶液 20μl 注入液相色谱仪, 以对照品溶液浓度的对数值与相应峰面积的对数值计算回归方程 另取供试溶液 20μl 注入液相色谱仪, 用回归方程计算有关物质的含量 含磷脂酰肌醇 (PI) 不 2

3 得过 5.0%, 含溶血磷脂酰乙醇胺 (LPE) 不得过 1%, 含鞘磷脂 (SPM) 不得过 3.0%, 含溶血磷脂酰胆碱 (LPC) 应不得过 3.5%, 含溶血磷脂酰乙醇胺 (LPE) 和溶血磷脂酰胆碱 (LPC) 总量应不得过 4.0%, 含上述有关物质总量不得过 8.0% 残留溶剂取本品 0.2g, 置 20ml 顶空瓶中, 加水 2ml, 密封, 作为供试品溶液 精密称取乙醇 丙酮 乙醚 石油醚 正己烷适量, 加水溶解并稀释制成每 1ml 分别含上述溶剂约 200μg 200μg 200μg 50μg 27μg 的溶液, 作为对照品溶液 照残留溶剂测定法 ( 中国药典 2010 版二部附录 Ⅷ P) 试验 毛细管柱 HP-PLOT/Q,0.53mm 30m 40um); 起始温度 160, 维持 8 分钟, 以每分钟 5 的速率升温至 190, 维持 6 分钟 ; 进样口温度为 250, 检测器温度 260 ; 分流比 20:1 氮气流速为每分钟 2ml 顶空瓶平衡温度为 80, 平衡时间为 45 分钟, 进样体积为 1ml 各色谱峰之间的分离度应符合要求 按外标法以峰面积计算, 本品含乙醇 丙酮 乙醚均不得过 0.2%, 含石油醚不得过 0.05%, 含正己烷不得过 0.02%, 总残留溶剂不得过 0.5% 水分取本品, 照水分测定法 ( 中国药典 2010 版二部附录 VIII M 第一法 A) 测定, 含水分不得过 3% 蛋白质取本品 1.0g, 加正己烷 10ml, 微温使溶解, 溶液应澄明 如有不溶物, 以 3000 转 / 分钟的速度离心 5 分钟, 弃去上清液, 残留物加正己烷 5ml, 搅拌使溶解, 同法操作 2 次, 残留物经减压干燥除去正己烷后, 加水 1ml, 振摇使溶解, 加缩二脲试液 ( 取硫酸铜 1.5g 和酒石酸钾钠 6.0g, 加水 500m1 使溶解, 边搅拌边加入 10% 氢氧化钠溶液 300m1, 用水稀释至 1000ml, 混匀 )4m1, 放置 30 分钟, 溶液应不呈蓝紫色或红紫色 重金属取本品 2.0g, 缓缓灼烧炭化, 加硝酸 2ml, 小心加热至干, 加硫酸 2ml, 加热至完全炭化, 在 灼烧至完全灰化, 放冷, 依法检查 ( 中国药典 2010 版二部附录 VIII H 第二法 ), 含重金属不得过百万分之五 砷盐取本品 1.0g, 置凯氏烧瓶中, 加硫酸 5ml, 用小火消化使炭化 ( 必要时可添加硫酸, 总量不超过 10ml), 小心逐滴加入浓过氧化氢溶液, 俟反应停止, 继续加热, 并滴加浓过氧化氢溶液至溶液无色, 冷却, 加水 10ml, 蒸发至浓烟发生使除尽过氧化氢, 加盐酸 5ml 与水适量, 依法检查 ( 中国药典 2010 版二部附录 Ⅷ J 第一法 ), 应符合规定 ( 不得过 %) 3

4 细菌内毒素取本品, 依法检查 ( 中国药典 2010 版二部附录 Ⅺ E), 每 1g 蛋黄卵磷脂中含内毒素的量应不得过 2.0EU 微生物限度取本品, 依法检查 ( 中国药典 2010 版二部附录 Ⅺ J), 每 1g 供试品中除细菌 霉菌及酵母菌数不得过 100 个外, 还不得检出大肠埃希菌和沙门氏菌 无菌 ( 若制剂无终端灭菌工艺或无除菌工艺, 应检查此项目 ) 取本品, 用适宜溶剂溶解后, 转移至不少于 500ml 的 0.9% 无菌氯化钠溶液中使溶解, 用薄膜过滤法处理后, 依法检查 ( 附录 Ⅺ H), 应符合规定 含量测定 氮取本品约 0.1g, 依法测定 ( 中国药典 2010 版二部附录 VII D 第二法 ) 磷对照品溶液的制备取 105 C 干燥至恒重的磷酸二氢钾约 0.13g, 精密称定, 置 100ml 量瓶中, 加水溶解并稀释至刻度, 精密量取 10ml 置 100ml 量瓶中, 用水稀释至刻度, 摇匀, 每 1ml 中含磷 (P) 约为 30μg 供试品溶液的制备取本品约 0.1g, 精密称定, 至坩埚中, 加三氯甲烷 2ml 溶解, 加氧化锌 2g, 蒸去三氯甲烷, 缓缓炽灼使样品炭化, 然后在 600 C 炽灼 1 小时, 放冷, 加盐酸溶液 (1 2)10ml, 煮沸 5 分钟使残渣溶解, 转移到 100ml 量瓶中, 加水稀释至刻度 测定法精密量取对照品溶液 ml, 分别置 25ml 量瓶中, 依次分别加水 10ml, 钼酸铵硫酸溶液 ( 取钼酸铵 5g, 加 0.5 mol/l 硫酸溶液 100ml) 1ml, 对苯二酚硫酸溶液 ( 取对苯二酚 0.5g, 加 0.25 mol/l 硫酸溶液 100ml, 临用前配制 )1ml 和 50% 醋酸钠溶液 3ml, 并用水稀释至刻度, 摇匀, 放置 5 分钟 照紫外 - 可见分光光度法 ( 中国药典 2010 年版二部附录 VII A), 以第一瓶为空白, 在 720nm 的波长处测定吸光度, 以测得吸光度与其对应的浓度计算回归方程 另精密量取供试品溶液 4ml, 置 25ml 量瓶中, 照标准曲线制备项下自 依次分别加水 10ml 起同法操作, 测得吸光度, 由回归方程计算含磷 (P) 量 磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺照高效液相色谱法 ( 中国药典 2010 年版二部附录 ⅤD) 测定 色谱条件与系统适用性试验 用硅胶为填充剂 ( 色谱柱 Alltima Sillica, 250mm 4.6mm 5μm); 以甲醇 - 水 - 冰醋酸 - 三乙胺 (85:15:0.45:0.05,) 为流动相 A, 以正己烷 - 异丙醇 - 流动相 A(20:48:32) 为流动相 B; 按下表进行梯度洗脱 ; 柱温 4

5 为 40, 用蒸发光散射检测器检测 ( 参考条件 : 漂移管温度为 72 ; 载气流量为每分钟 2.0ml) 时间 (min) 流动相 A(%) 流动相 B(%) 取磷脂酰乙醇胺 磷脂酰肌醇 溶血磷脂酰乙醇胺 蛋黄磷脂酰胆碱 鞘磷脂 溶血磷脂酰胆碱对照品各适量, 用三氯甲烷 - 甲醇 (2:1) 溶解制成每 1ml 含上述对照品分别为 50μg 100μg 100μg 200μg 200μg 200μg 的混合溶液, 取上述溶液 20μl 注入液相色谱仪, 各成分按上述顺序依次洗脱, 各成分分离度应符合规定, 理论板数按蛋黄磷脂酰胆碱 磷脂酰乙醇胺峰计算应不低于 1500 测定法分别取磷脂酰乙醇胺和蛋黄磷脂酰胆碱对照品适量, 精密称定, 用三氯甲烷 - 甲醇 (2:1) 溶解, 稀释制成含磷脂酰乙醇胺和磷脂酰胆碱 6 个不同浓度溶液作为对照品溶液, 对照溶液中磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺的浓度范围应涵盖供试品溶液中磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺含量的 60%~140% 精密量取上述对照品溶液各 20μl 注入液相色谱仪中, 以对照品溶液浓度的对数值与相应峰面积的对数值计算回归方程 另精密称取本品约 15mg, 置 50ml 量瓶中, 加三氯甲烷 - 甲醇 (2:1) 溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为供试品溶液 精密量取 20μl 注入液相色谱仪中, 记录色谱图 用回归方程计算磷脂酰胆碱 磷脂酰乙醇胺的含量 类别 药用辅料( 供注射用 ), 乳化剂, 增溶剂 脂质体膜材等 贮藏 密封 避光, 低温 (-18 以下 ) 保存 5

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