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茧溥
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1 环球中医药 2017 年 5 月第 10 卷第 5 期摇 Global Traditional Chinese Medicine, May 2017,Vol 郾 10, No 郾 5 摇 527 抗瘤丸的质量标准研究论著冯英楠摇陈菲摇张鹏摇庄伟摇林晓兰揖摘要铱摇目的摇建立抗瘤丸系统的质量标准, 以提高其质量方法摇分别采用薄层色谱法对院内制剂抗瘤丸中三七土茯苓沉香制何首乌及显微鉴别法对炒山楂进行定性鉴别 ; 并用高效液相色谱法对制剂中的三七土茯苓进行含量测定结果摇薄层色谱斑点清晰, 阴性对照无干扰 ; 三七皂苷 R 1 落新妇苷分别在 ~ 滋 g( r = ) ~ 滋 g (r = ) ~ 滋 g ( r = ) 范围内呈良好的线性关系, 平均回收率分别为 98 郾 70% % % 结论摇该法灵敏简便准确和重复性好, 可作为抗瘤丸的质量控制标准揖关键词铱摇抗瘤丸 ; 摇质量标准 ; 摇高效液相色谱法 ; 摇薄层色谱法揖中图分类号铱摇 R286 摇揖文献标识码铱摇 A 摇 doi:10 郾 3969 / j 郾 issn 郾 1674 鄄 1749 郾 2017 郾 05 郾 004 Quality standard for KangLiuWan 摇 FENG Yingnan, CHEN Fei, ZHANG Peng, et al. 摇 Department of Pharmacy Xuanwu, Hospital of Capital Medical University,Beijing ,China Corresponding author: LIN Xiaolan, E 鄄 mail: xllin83@ 163. com 揖 Abstract 铱摇 Objective 摇 To establish the quality standards of KangLiuWan( KLW), to improve its quality. Methods 摇 Thin layer chromatography(tlc) was used to qualitative identification of Notoginseng Radix et Rhizoma Smilacis Glabrae Rhizoma Aquilariae Lignum Resinatum Polygoni Multiflori Radix Praeparata, and microscopic identification method was used to qualitative identification of Crataegi Fructus; HPLC was applied to quantitatively determining the contents of Notoginseng Radix et Rhizoma and Smilacis Glabrae Rhizoma. Results 摇 The TLC spots were clear and well 鄄 separated; Notoginsenoside R 1, ginsenosides Rg 1,and Chinese astilbin showed good relationships within the ranges of ~ 滋 g (r = ) ~ 滋 g ( r = ) ~ 滋 g ( r = ), the average recovery were % % %,respectively. Conclusion 摇 The method is simple,sensitive, accurate and reproducible,and can be used as the quality control standard of KLW. 揖 Key words 铱摇 KLW; 摇 Quality standards; 摇 HPLC; 摇 TLC 摇摇胶质瘤是中枢神经系统最常见的一类肿瘤, 呈迅速的浸润性生长, 治疗困难, 且生存期短, 死亡率高, 对人类健康威胁极大外科手术是目前治疗脑胶质瘤的主要手段, 但是由于脑胶质瘤浸润性生长的特性以及多累及脑重要功能区域或其附近, 手术难以将肿瘤全部切除放化疗虽可杀灭肿瘤细胞, 但也将损伤正常脑组织, 并导致全身不良反应基金项目 : 北京市科委十病十药冶专项 (Z ) 作者单位 : 摇北京, 首都医科大学宣武医院药剂科作者简介 : 冯英楠 (1988- ), 女, 硕士, 药师研究方向 : 中药药效与作用机制研究 E 鄄 mail:fengyingnan88@ 163. com 通信作者 : 林晓兰 (1963- ), 女, 本科, 主任药师研究方向 : 中药制剂研发与医院药学管理 E 鄄 mail:xllin83@ 163. com 的发生抗瘤丸是由白花蛇舌草半枝莲白英等 18 味中药组成的医院制剂, 主要功效为利湿解毒扶正培本活血化瘀用于胶质瘤之湿热藴毒证, 临床以头痛眩晕视物不清, 或兼呕吐, 舌紫黯或有瘀斑, 脉沉或沉细等为特征, 适用于脑胶质瘤脑垂体瘤等见上述表现者的辅助治疗自 1980 年应用于临床, 至今已有 30 年的历史, 深受广大患者的好评于 1986 年获北京科技进步一等奖, 其有效率高达 64. 7% [1] ; 回顾性研究表明, 院内制剂中药抗瘤丸可以延长恶性神经胶质瘤患者的生存时间, 具有肯定疗效 [2] 笔者对抗瘤丸进行系统的质量标准研究, 可有效地控制抗瘤丸质量

2 摇 528 环球中医药 2017 年 5 月第 10 卷第 5 期摇 Global Traditional Chinese Medicine, May 2017,Vol 郾 10, No 郾 5 1 摇仪器与试剂 1. 1 摇试剂三七皂苷 R 1 ( 批号 : 鄄 ); 人参皂苷 Rb 1 ( 批号 : 鄄 ); ( 批号 : 鄄 ); 落新妇苷对照品 ( 批号 : 鄄 ); 三七 ( 批号 : 鄄 ); 制何首乌 ( 批号 : 鄄 ); 沉香 ( 批号 : 鄄 ); 均由中国食品药品检定研究院提供抗瘤丸 : 批, 批, 批 ; 均由首都医科大学宣武医院提供 1. 2 摇仪器 SHIMADZU LC 鄄 2010Aht 高效液相色谱仪 ; WFH 鄄 203S 三用紫外分析仪 ( 上海精科实业有限公司 );SHIMADZU UV 鄄 2450 紫外可见分光光度计 ; LD5 鄄 2A 低速离心机 ( 北京医用离心机厂 ); CPA225D 精密电子天平 ( 十万分之一, Sartorius); WT1003H 电子分析天平 ( 千分之一, 常州市万泰天平仪器有限公司 ); 澳浦 UB203i 显微镜 ( 重庆重光实业有限公司 ); 硅胶 G 薄层板 ( 烟台市化学工业研究所, 批号 :120712); 硅胶 G( 薄层层析用, 青岛海洋化工有限公司, 批号 : ) 2 摇方法与结果 2. 1 摇薄层鉴别摇三七鉴别摇取本品适量, 研细, 取约 3 g, 加甲醇 30 ml, 加热回流 30 分钟, 蒸干滤过液, 残渣加入水 10 ml, 搅拌至溶解, 转移到分液漏斗, 放冷后, 20 ml 乙醚振摇提取 2 次, 弃去乙醚液, 水饱和的正丁醇提取水液 2 次, 每次 15 ml, 合并正丁醇液, 用 15 ml 水洗涤, 蒸干正丁醇液, 加甲醇 1 ml 溶解残渣, 作供试品溶液另取三七对照药材 0. 5 g, 加甲醇 30 ml, 同法制得对照药材溶液再取人参皂苷 Rb 1 及三七皂苷 R 1 对照品, 加甲醇, 制成每 1 ml 各含 0. 5 mg 的混合溶液, 作为对照品溶液取缺三七的阴性样品 3 g, 按供试品溶液的方法制备成阴性对照溶液吸取供试品对照药材溶液各 1 滋 L 对照品溶液 4 滋 L, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以正丁醇颐乙酸乙酯颐水 (4 颐 1 颐 5) 的上层溶液为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 喷洒 10% 硫酸乙醇溶液,105 益加热至斑点显色清晰供试品色谱中, 在与对照药材和对照品色谱相应的位置上, 显相同颜色的斑点见图摇何首乌鉴别摇取本品适量, 研细, 取约 10 g, 加甲醇 30 ml, 超声 30 分钟, 蒸干滤过液, 加 5% 氢氧化钠溶液 8 ml 溶解残渣, 过滤, 加 HCl 调节 ph 值为 2, 用 30 ml 乙酸乙酯振摇提取, 蒸干乙酸乙酯液, 加乙酸乙酯 1 ml 溶解残渣, 离心, 取上清作为供试品溶液取制何首乌对照药材 0. 5 g, 同法制得对照药材溶液取缺何首乌的阴性样品 10 g, 按供试品溶液的方法制备成阴性对照溶液吸取供试品溶液 5 滋 L 对照药材溶液 2 滋 L, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以甲苯颐乙酸乙酯颐甲酸 (15 颐 2 颐 1) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 供试品色谱中, 在与对照药材色谱相应的位置上, 显相同颜色的斑点, 置氨熏后, 斑点变为红色见图摇土茯苓鉴别摇取本品适量, 研细, 取约 0 郾 5 g, 置三角瓶中, 加甲醇 20 ml, 超声 30 分钟, 蒸干滤过液, 加水 5 ml 溶解残渣, 通过大孔吸附树脂柱, 用水 60 ml 洗脱, 弃去洗脱液, 再用 25% 乙醇 60 ml 洗脱, 弃去洗脱液, 继用 50% 乙醇 60 ml 洗脱, 收集洗脱液, 蒸干, 加甲醇 2 ml 溶解残渣, 作为供试品溶液另取落新妇苷对照品, 加甲醇制成每 1 ml 含 1 mg 的对照品溶液取缺土茯苓的阴性样品 0 郾 5 g, 按供试品的方法制备成阴性对照溶液吸取供试品 3 滋 L 对照品 2 滋 L, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以甲苯颐乙酸乙酯颐甲酸 (13 颐 32 颐 9) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 喷 5% 三氯化铝乙醇溶液, 放置 5 分钟, 紫外光灯 (365 nm) 下检视, 供试品色谱中, 在与对照品相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点见图摇沉香鉴别摇取本品适量, 研细, 取约 2 g, 加石油醚 (30 ~ 60 益 )30 ml, 超声 30 分钟, 蒸干滤过液, 加丙酮 2 ml 溶解残渣, 作供试品溶液另取对照药材粉末 0. 2 g, 同法制得对照药材溶液取缺沉香的阴性样品 2 g, 按供试品的方法制备成阴性对照溶液吸取供试品对照药材溶液各 5 滋 L, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以三氯甲烷颐乙醚 (10 颐 1) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 喷 10% 硫酸乙醇溶液, 晾干, 紫外光灯 (365 nm) 下检视, 供试品色谱中, 在与对照药材色谱相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点见图摇山楂显微鉴别取本品, 研细, 置显微镜下观察 : 果皮石细胞淡紫红色或黄棕色, 类圆形, 直径约至 120 滋 m 见图 5

环球中医药 2017 年 5 月第 10 卷第 5 期摇 Global Traditional Chinese Medicine, May 2017,Vol 郾 10, No 郾 5 摇 529 注 :a. 人参皂苷 Rb 1 Rg 1 与三七注 :a. 何首乌阴样品性 ; b. 抗瘤注 :a. 土茯苓阴性样品 ; b.

抗瘤丸 ( 批号 160201);d. 落新妇苷 ;e. 抗瘤丸 ( 批号 160202 );f. 抗瘤丸 ( 批号 160203) ( 批号 160201 ); c. 抗瘤丸 ( 批号 160202 ); d.

05% 磷酸溶液 ; 检测波长为 203 nm, 流速 :1. 0 ml / min; 柱温 :30 益 2. 3.

3 摇供试品溶液的制备摇取本品约 2 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇 50 ml, 称定重量, 水浴回流 2 小时, 放冷, 再称定重量, 补足减重, 摇匀, 滤过, 精密量取续滤液 25 ml, 蒸干, 残渣加水 20 ml 使溶解, 先用乙醚振摇提取 3 次, 每次 20 ml, 弃去乙醚液,

5 1 郾 0 2. 0 4. 0 8. 0 ml 分别置 10 ml 量瓶中, 用甲醇稀释至刻度, 摇匀, 配制成 33. 31 66. 63 133. 20 266. 51 533.

3 环球中医药 2017 年 5 月第 10 卷第 5 期摇 Global Traditional Chinese Medicine, May 2017,Vol 郾 10, No 郾 5 摇 529 注 :a. 人参皂苷 Rb 1 Rg 1 与三七注 :a. 何首乌阴样品性 ; b. 抗瘤注 :a. 土茯苓阴性样品 ; b. 土茯注 :a. 沉香对照药材 ;b. 抗瘤丸皂苷 R 1 ; b. 抗瘤丸 ( 批号 ); c. 抗瘤丸 ( 批号 ); d. 抗瘤丸 ( 批号 );e. 三七阴性样品丸 ( 批号 );c. 抗瘤丸 ( 批号 ); d. 抗瘤丸 ( 批号 );e. 何首乌对照药材苓对照药材 ; c. 抗瘤丸 ( 批号 );d. 落新妇苷 ;e. 抗瘤丸 ( 批号 );f. 抗瘤丸 ( 批号 ) ( 批号 ); c. 抗瘤丸 ( 批号 ); d. 抗瘤丸 ( 批号 );e 沉香阴性样品图 1 摇三七薄层色谱鉴别图 2 摇何首乌薄层色谱鉴别图 3 摇土茯苓薄层色谱鉴别图 4 摇沉香薄层色谱鉴别图 5 摇山楂显微鉴别 2. 3 摇三七皂苷 R 1 含量测定摇色谱条件摇色谱柱 :Inertsil C 18 (6 伊 250 mm, 5 滋 m); 流动相 : 乙腈 % 磷酸溶液 ; 检测波长为 203 nm, 流速 :1. 0 ml / min; 柱温 :30 益摇对照品溶液的制备摇取三七皂苷 R 1 对照品适量, 精密称定, 加甲醇制成每 1mL 含三七皂苷 R mg 0. 5 mg 的混合溶液摇供试品溶液的制备摇取本品约 2 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇 50 ml, 称定重量, 水浴回流 2 小时, 放冷, 再称定重量, 补足减重, 摇匀, 滤过, 精密量取续滤液 25 ml, 蒸干, 残渣加水 20 ml 使溶解, 先用乙醚振摇提取 3 次, 每次 20 ml, 弃去乙醚液, 再用水饱和正丁醇振摇提取 4 次, 每次 30 ml, 合并正丁醇液, 用氨试液洗涤 3 次, 每次 30 ml, 取正丁醇液挥干, 残渣加甲醇使溶解并转移至 10 ml 量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 即得摇阴性对照溶液的制备摇处方中除去三七, 按比例称取其他药材及辅料同法制成阴性对照溶液摇线性关系考察摇三七皂苷 R 1 : 精密量取上述对照品溶液郾 ml 分别置 10 ml 量瓶中, 用甲醇稀释至刻度, 摇匀, 配制成滋 g / ml 的对照品溶液, 摇匀, 分别精密量取 10 滋 L, 注入色谱仪, 测得峰面积, 以对照品进样量 ( X) 为横坐标, 峰面积 ( Y) 为纵坐标, 绘制标准曲线, 回归方程 : Y = X 三七皂苷 R 1 在滋 g ~ 滋 g 范围内呈良好的线性关系 : 方法同三七皂苷 R 1 线性关系考察冶, 配制成滋 g / ml 的对照品溶液, 摇匀, 分别精密量取滋 L, 注入色谱仪, 测得峰面积, 绘制标准曲线回归方程 :Y = X , 在滋 g ~ 滋 g 范围内呈良好的线性关系摇精密度试验摇精密吸取上述对照品溶液 10 滋 L, 重复进样 6 次, 按前文色谱条件冶项下的色

4 摇 530 环球中医药 2017 年 5 月第 10 卷第 5 期摇 Global Traditional Chinese Medicine, May 2017,Vol 郾 10, No 郾 5 谱柱条件测定, 三七皂苷 R 1 峰面积的 RSD 分别为 1 郾 60% 1. 47%, 表明样品中间精密度良好摇稳定性试验摇取同一批样品 ( )1 份, 按前文供试品溶液的制备冶项下制备和测定法操作, 分别在制备后小时进样在 24 小时内测得三七皂苷 R 1 平均峰面积为 , RSD=0. 68% ; 平均峰面积为 , RSD = 0 郾 58% 表明样品在 24 小时内稳定性良好摇重复性试验摇取同一批样品 ( ) 连续进样 6 次, 按供试品溶液的制备冶项下方法制备样品溶液, 测定峰面积并计算含量结果显示 : 三七皂苷 R 1 平均含量为 mg / g, RSD = 1. 34% ; 平均含量为 mg / g,rsd =1. 99%, 表明该方法重复性良好摇回收率试验摇取已知含量的样品 6 份, 分别精密加入一定量的三七皂苷 R 1, 按前文供试品溶液的制备冶项下方法制备样品溶液, 在前文色谱条件测定计算回收率结果见表 1 表摇样品含量测定摇根据上述确定的三七含量测定方法, 进行了抗瘤丸成品含量测定, 按照冶项下方法配制供试品溶液, 测定三七皂苷 R 1 和含量结果见表 3 表 3 摇三批样品三七皂苷 R 1 和含量测定批号三七皂苷 R 1 和含量之和 (mg / 袋 ) 摇落新妇苷的含量测定摇色谱条件摇色谱柱 :Inertsil C 18 ; 流动相 : 甲醇 -0. 1% 冰醋酸溶液 (39 颐 61); 检测波长为 291 nm, 流速 :1. 0 ml / min; 柱温 :30 益摇对照品溶液的制备摇落新妇苷对照品适量, 精密称定, 加 60% 甲醇制成每 1 ml 含落新妇苷 40 滋 g 的溶液, 即得摇供试品溶液的制备摇取本品适量, 研细, 取约 0. 8 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入 60% 甲醇 25 ml, 密塞, 称定重量, 超声 30 分钟, 放冷, 再称定重量, 补足减重, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得摇阴性对照溶液的制备摇处方中除去土茯苓, 按比例称取其它药材及辅料同法制成阴性对照溶液摇线性关系考察摇精密吸取上述对照品溶液 ml 分别置 10 ml 量瓶中, 分别用 60% 甲醇稀释至刻度, 摇匀, 配制成表 1 摇三七皂苷 R 1 加样回收率试验结果表 2 摇加样回收率试验结果

5 环球中医药 2017 年 5 月第 10 卷第 5 期摇 Global Traditional Chinese Medicine, May 2017,Vol 郾 10, No 郾 5 摇 531 表 4 摇落新妇苷加样回收率试验结果郾郾 54 滋 g / ml 的对照品溶液, 摇匀, 分别精密量取 10 滋 L, 注入色谱仪, 测得峰面积, 以对照品进样量 (X) 为横坐标, 峰面积 (Y) 为纵坐标, 绘制标准曲线, 回归方程 : Y = 郾 7544X-3132 郾 1353 落新妇苷在滋 g ~ 滋 g 范围内呈良好的线性关系摇精密度试验摇精密吸取上述对照品溶液 10 滋 L, 重复进样 6 次, 按前文供试品溶液的制备冶项下供试品溶液的制备和测定法操作, 测定落新妇苷的 RSD = 0 郾 58% 表明样品重复性良好摇稳定性试验摇取同一批样品 ( ) 连续进样 6 次, 按前文供试品溶液的制备冶项下制备和测定法操作, 分别在制备后小时进样在 24 小时内测得落新妇苷平均峰面积为 ,RSD = 0. 14%, 表明样品在 24 小时内稳定性良好摇重复性试验摇取同一批样品 ( ) 连续进样 6 次, 按前文方法制备样品溶液和测定法项下操作, 测定落新妇苷的平均含量为 mg / g, RSD = 0. 69%, 表明样品重复性良好摇回收率试验摇采用加样回收法, 精密称取落新妇苷对照品 mg, 按前文方法制备样品溶液, 在前文色谱条件测定计算回收率结果见表摇样品含量测定摇根据上述确定的土茯苓含量测定方法, 进行了抗瘤丸成品含量测定, 按照前文中的描述配制方法配制供试品溶液, 测定落新妇苷含量结果见表 5 表 5 摇三批样品落新妇苷含量测定批号落新妇苷 (mg / 袋 ) 摇讨论本研究对抗瘤丸中的君药进行定性定量鉴别 ; 对臣药及贵重药进行定性鉴别, 完善了抗瘤丸质量控制标准三七薄层色谱鉴别中, 以中华人 [3] 民共和国药典 2015 版的展开剂三氯甲烷颐乙酸乙酯颐甲醇颐水 (15 颐 40 颐 22 颐 10) 展开, 发现斑点模糊, 分离度不佳, 故以正丁醇颐乙酸乙酯颐水 (4 颐 1 颐 5) 为上层溶液, 斑点清晰, 分离度好 [4 鄄 5] 沉香薄层色谱鉴别中, 在与对照药材色谱相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点但供试品溶液比较黏稠, 超过 2 滋 L 就很难点样, 且斑点不太圆整经文献检索 [6], 喷以 10% 硫酸乙醇溶液, 晾干, 置紫外光灯 365 nm 下检视, 在 Rf 值 0. 5 ~ 0. 7 处有斑点显色清晰, 效果较直接检视更好人参皂苷 Rb 1 总平均回收率仅为 %, 且数据很难稳定经文献检索 [1], 人参皂苷 Rb 1 在酸性和碱性条件下均不稳定, 其水溶液在加热下也不稳定供试品在制备过程中, 氨试液洗涤后, 正丁醇液呈碱性, 并加热蒸干, 可能会造成人参皂苷 Rb 1 降解, 但此为供试品制备必须步骤, 无法略去, 故综合考虑, 放弃人参皂苷 Rb 1, 仅将和三七皂苷 R 1 列入正文综上所述, 本文所建标准可用于抗瘤丸的质量控制参考文献 [1] 摇於堃, 宋珏娴, 刘倩, 等. 高利治疗脑胶质瘤经验 [ J]. 北京中医药,2008,27(10):785 鄄 786. [2] 摇庄伟, 林晓兰, 姜德春, 等. 中药 KLW 鄄 1 治疗恶性神经胶质瘤的临床研究 [J]. 中国新药杂志,2011,20(19):1894 鄄 [3] 摇国家药典委员会. 中华人民共和国药典 ( 一部 ) [ M]. 北京 : 中国医药科技出版社,2015:12. [4] 摇岑艳华, 蔡丽云, 陈华. 活血祛瘀片中三七大黄的薄层色谱鉴别 [J]. 临床医学工程,2011,18(6):915 鄄 916. [5] 摇李霄, 万丹丹, 郭洛宏. 薄层色谱对复方丹参片中三七皂苷 R1 和人参皂苷 Re 的鉴别 [J]. 中成药,2009,31 (9):1470 鄄 [6] 摇王晔, 高沂. 八味三香散质量标准中鉴别和含量测定方法的研究 [J]. 中国药学杂志,2007,42(3):232 鄄 233. ( 收稿日期 : 2017 鄄 02 鄄 16) ( 本文编辑 : 韩虹娟 )

心可舒片

心可舒片 Xinkeshu Pian 处方丹参 294g 葛根 294g 三七 19.6g 山楂 294g 木香 19.6g 制法以上五味, 取部分山楂三七木香及部分山楂粉碎成细粉, 剩余的山楂葛根加入 60% 乙醇温浸 30 分钟, 回流提取二次, 合并醇提液, 回收乙醇, 备用 ; 丹参加水煎煮二次, 合并煎液, 滤过, 滤液与上述备用液合并, 混匀, 浓缩至适量, 加入上述细粉制成颗粒,