Qubit-DNA RNA 总浓度测定 dsdna BR Assay Kits 各试剂加样量 : Buffer 标准 1 标准 2 样品 试剂 ( 荧光染色 ) 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度 未知 0 ng
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- 攻 松
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1 Qubit-DNA RNA 总浓度测定 dsdna BR Assay Kits 各试剂加样量 : 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度 未知 0 ng/μl 100 ng/μl 待测 200 测定时要求浓度 未知 0 ng/μl 5000ng/ml 0~5000 ng/ml 1 备注 -Buffer:Qubit dsdna BR buffer (Component B); 标准 1:Qubit dsdna BR standard #1 (Component C), 溶于 TE Buffer; 标准 2:Qubit dsdna BR standard #2 (Component D), 溶于 TE Buffer; 样品 : 待测的 DNA 样品 ; 试剂 :Qubit dsdna BR reagent (Component A) ( 为荧光染色试剂, 使用及存放时注意避光 ) 试剂存放: dsdna HS Assay Kits 各试剂加样量 : 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度 未知 0 ng/μl 10 ng/μl 待测 200 测定时要求浓度 未知 0 ng/μl 500 ng/ml 0~500 ng/ml 1 备注 -Buffer:Qubit dsdna HS buffer (Component B); 标准 1:Qubit dsdna HS standard #1 (Component C), 溶于 TE Buffer; 标准 2:Qubit dsdna HS standard #2 (Component D), 溶于 TE Buffer; 样品 : 待测的 DNA 样品 ; 试剂 :Qubit dsdna HS reagent (Component A) ( 为荧光染色试剂, 使用及存放时注意避光 ) 试剂存放:
2 Qubit TM ssdna Assay Kits 各试剂加样量 : 总量 ( 溶液体积 ) 50 ml 1 ml 1 ml 待测 250µl 原始浓度 未知 0 ng/μl 20 ng/μl 待测 200 测定时要求浓度 未知 0 ng/μl 1000 ng/ml 0~1000 ng/ml 1 备注 -Buffer:Qubit ssdna HS buffer (Component B); 标准 1:Qubit ssdna HS standard #1 (Component C), 溶于 TE Buffer; 标准 2:Qubit ssdna HS standard #2 (Component D), 溶于 TE Buffer; 样品 : 待测的 DNA 样品 ; 试剂 :Qubit ssdna HS reagent (Component A) ( 为荧光染色试剂, 使用及存放时注意避光 ) 试剂存放: Qubit RNA Assay Kits 各试剂加样量 总量 ( 溶液体积 ) 50 /250ml 1/5 ml 1/5 ml 待测 250µl/1.25ml 原始浓度 未知 0 ng/μl 10 ng/μl 待测 200 测定时要求浓度 未知 0 ng/μl 500 ng/ml 0~500 ng/ml 1 备注 -Buffer:Qubit RNA buffer (Component B); 标准 1:Qubit RNA standard #1 (Component C), 溶于 TE Buffer; 标准 2:Qubit RNA standard #2 (Component D), 溶于 TE Buffer; 样品 : 待测的 DNA 样品 ; 试剂 :Qubit RNA reagent (Component A) ( 为荧光染色试剂, 使用及存放时注意避光 ) 试剂存放:
3 Qubit RNA BR Assay Kits 各试剂加样量 总量 ( 溶液体积 ) 50/250 ml 1/5 ml 1/5 ml 待测 250µl/1.25ml 原始浓度 未知 0 ng/μl 100 ng/μl 待测 200 测定时要求浓度 未知 0 ng/μl 5000 ng/ml 0~5000 ng/ml 1 备注 -Buffer:Qubit RNA buffer (Component B); 标准 1:Qubit RNA standard #1 (Component C), 溶于 TE Buffer; 标准 2:Qubit RNA standard #2 (Component D), 溶于 TE Buffer; 样品 : 待测的 DNA 样品 ; 试剂 :Qubit RNA reagent (Component A) ( 为荧光染色试剂, 使用及存放时注意避光 ) 试剂存放: Qubit TM Protein Assay Kits 各试剂加样量 Buffer 标准 1 标准 2 标准 3 样品 染色试剂 总量 ( 溶液体积 ) 60/300 ml 1/5 ml 1/5 ml 1/5 ml 待测 300µl/1.2ml 原始浓度 未知 0 ng/μl 200 ng/μl 400 ng/μl 待测 200 测定时要求浓度 未知 0 ng/μl 10 ng/μl 20 ng/μl 0~20 ng/μl 1 189μL *** *** 10μL *** 1μL 备注 -Buffer:Qubit protein buffer (Component B); 标准 1:Qubit protein standard #1 (Component C), 溶于 TE Buffer; 标准 2:Qubit protein standard #2 (Component D), 溶于 TE Buffer; 标准 3:Qubit protein standard #2 (Component D), 溶于 TE Buffer(Component E); 样品 : 待测的 DNA 样品 ; 试剂 :Qubit protein reagent (Component A) ( 为荧光染色试剂, 使用及存放时注意避光 ) 试剂存放:
4 仪器操作步骤 : 1. 接通 Qubit 2.0 Fluorometer 仪器电源, 打开仪器电源开关, 仪器屏幕显示以 下界面 : 点击 Date/Time 菜单, 设置日期和时间 ; 点击 Brightness 菜单, 调整屏幕亮度 ; 点击 Version 菜单, 对仪器内置软件升级 ( 网上下载升级程序至 U 盘 点击 Update 即可开始升级 ) 2. 返回仪器屏幕首页, 选择需要测定的项目 (DNA RNA Protein), 点击 Standard 按钮 3. 若利用以前校正值, 则不需要进行校正, 点击 No 按钮, 直接进行下一步样品浓度测定 ; 仪器首次使用或较长时间没有使用, 点击 Yes 按钮, 利用标准品进行校正,DNA RNA 设置两个标准浓度梯度,Protein 设置 3 个浓度梯度 ( 见上表 ) 4. 标准品加入 0.5ml 离心管中 (Qubit 仪器专用的 ), 各试剂所加的量见上表 涡旋 2~3 秒, 短暂低速离心, 室温静止放置 2(DNA RNA) 或 15 分钟 ( 蛋白质 ) 顺序测定标准样品, 先 Insert Standard1( 低浓度 ), 点击 Read 按钮 ; 然后测定 Insert Standard 2 或 3( 高浓度 ), 点击 Read 按钮 5. 校正完成, 出现以下新的标准图, 点击 No 图标, 开始测定样品浓度
5 6. 点击 Sample 图标, 将加好样的离心管放置在测定孔中, 盖好盖子, 点击 Read 图标, 测定样品 DNA RNA 或蛋白质浓度 若测定样品的浓度较大, 大于 标准样品的最大浓度, 需将样品稀释一定倍数之后重新测定 7. 样品原始浓度计算 : Concentration of your sample = QF value (200/X) 样品稀释倍数 QF value = the value given by the Qubit 2.0 Fluorometer( 仪器读数值 ) X = the number of microliters of sample you added to the assay tube( 加样体积 )
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