Microsoft Word - 多肽水解氨基酸测定 doc

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去裴
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1 测试报告样品信息样品名称多肽水解氨基酸测定编号 W 样品重量 \ 剂型 \ 收样日期 2014/05/04 测试期间 2014/05/04-05/08 样品描述测试需求测试成分含测参考标准参考标准高效液相色谱法标样有仪器信息测试仪器高效液相色谱仪仪器型号安捷伦 1260 色谱条件 : 色谱柱 : 流动相 : 检测波长 : 月旭 Amino Acid, mm,5µm 流动相 A: 0.1mol/L 醋酸钠溶液 (ph 6.5): 乙睛 =93:7 流动相 B: 水 : 乙腈 =20: nm 柱温 : 40 流速 : 1 ml/min 进样量 : 2.5 µl 注意事项 :

2 流动相配置 : 流动相 A: 0.1mol/L 醋酸钠溶液 (ph 6.5): 乙睛 =93.0:7.0 配制方法 : 准确称取三水合醋酸钠 13.6g 于 1000ml 水中, 搅拌均匀, 使之溶解, 用冰醋酸或氢氧化钠溶液调 ph 值至 6.50; 准确量取配制好的三水合醋酸钠溶液 930ml 和乙腈 70ml, 混合均匀, 抽滤过 0.45µm 滤膜 ; 流动相 B: 水 : 乙腈 =20.0:80.0 配制方法 : 准确量取水 200ml 和乙腈 800ml, 混合均匀, 抽滤过 0.45µm 滤膜 ; 梯度程序 : T(min) 流动相 A(% ) 流动相 B(%) 溶液配制 : 1)0.1mol/L 盐酸溶液 : 量取 9.0mL 浓盐酸, 加去离子水稀释至 1000mL 2) 正亮氨酸内标溶液 : 称取正亮氨酸约 10.08mg, 加 0.1mol/L 盐酸溶液 10mL 溶解, 混匀 3)6mol/L 盐酸溶液配制 : 取浓盐酸 10mL 和水 10mL 溶解, 混匀 4) 混合氨基酸标准溶液 ( 标液氨基酸浓度见表一 ): 准确取氨基酸标准溶液 1.0mL, 置于 10mL 容量瓶中, 加水定容至刻度 ( 该溶液在 4 C 可保存 2 个月, 在 -20 C 下可保存 6 个月 ) 5) 衍生试剂配制 : 分别取 A,B 两种衍生试剂用稀释剂稀释各稀释 5 倍, 混匀

3 样品溶液配制 : 1 对照品溶液的制备 Name 表一 17 种氨基酸对照品溶液稀释 10 倍后的浓度为 M.W. 标准值 C(mmol/L) 浓度 C(mg/mL) Name M.W. 标准值 C(mmol/L) 浓度 C(mg/mL) 门冬氨酸氯化铵谷氨酸酪氨酸丝氨酸缬氨酸甘氨酸蛋氨酸组氨酸异亮氨酸精氨酸亮氨酸苏氨酸苯丙氨酸丙氨酸赖氨酸脯氨酸供试品溶液制备酸水解法 : 准确称取样品 1.92 mg, 置于 50mL 碘量瓶中, 加入 10mL 的 6mol/L 盐酸, 振摇使样品溶解或使样品均匀分散于溶液中, 密封, 然后置 110±1 加热回流水解 24 小时, 取出冷却, 打开碘量瓶, 将水解液全部转移到 50mL 容量瓶内, 用超纯水定容至刻度, 混匀, 精密量取 40ml 溶液用蒸发皿中挥干, 再量取 4ml 超纯水分两次润洗, 混合溶液供衍生使用 3 氨基酸标准溶液和样品溶液的衍生氨基酸样品溶液 : 准确量取样品溶液 1ml, 置于试管中, 准确加入 50μl 正亮氨酸内标溶液, 混匀, 再加入稀释后的 A 溶液 0.5ml 和稀释后的 B 溶液 0.5ml, 摇匀 ; 在 50±1 水浴中加热 45 分钟, 取出, 加入正己烷溶液 1ml 振摇, 室温放置 30 分钟后, 取澄清的下层液用 0.45µm 小滤器过滤氨基酸标准溶液 : 精密量取上述对照品溶液 1ml, 置于试管中, 准确加入 50μl 正亮氨酸内标溶液, 再加入稀释后的 A 溶液 0.5ml 和稀释后的 B 溶液 0.5ml, 摇匀 ; 在 50±1 水浴中加热 45 分钟, 取出, 加入正己烷溶液 1ml 振摇, 室温放置 30 分钟后, 取澄清的下层液用 0.45µm 小滤器过滤谱图和数据 :

4 1 氨基酸空白 2 氨基酸标准品

5 1. 门冬氨酸 10. 氯化铵 2. 谷氨酸 11. 酪氨酸 3. 丝氨酸 12. 缬氨酸 4. 甘氨酸 13. 蛋氨酸 5. 组氨酸 14. 异亮氨酸 6. 精氨酸 15. 亮氨酸 7. 苏氨酸 16. 正亮氨酸 8. 丙氨酸 17. 苯丙氨酸 9. 脯氨酸 18. 赖氨酸

6 3 多肽氨基酸水解样品六. 计算样品溶液中各种氨基酸浓度 (mg/ml) =f 1/f 2 C 其中 : f 1= 样品溶液中各氨基酸峰面积 / 内标峰面积 f 2= 混合氨基酸标准溶液中各氨基酸峰面积 / 内标峰面积 C= 氨基酸对照品浓度 (mg/ml) 样品氨基酸质量 M( 样 )=C( 样 ) V( 样 )

7 计算结果 : 样品名称样品氨基酸浓度样品氨基酸质量氨基酸总质量 / 多氨基酸比值 (mg/ml) (mg) 肽样品氨基酸质量 (mg/mg) 门冬氨酸谷氨酸甘氨酸脯氨酸氯化铵酪氨酸异亮氨酸亮氨酸氨基酸比值的测定 : 以样品中门冬氨酸谷氨酸甘氨酸脯氨酸异亮氨酸和亮氨酸这六种氨基酸的摩尔数之和的六分之一为基准, 以样品中各种氨基酸的摩尔数除于基准摩尔数即为氨基酸的比值门冬氨酸谷氨酸甘氨酸脯氨酸异亮氨酸和亮氨酸这六种氨基酸的氨基酸比值应在范围内 ; 酪氨酸的氨基酸比值范围应在范围内 ; 半胱氨酸的氨基酸比值范围应在范围内报告签字测试 : 张厚才日期 : 审核 : 薛昆鹏日期 :

实验室常用培养基的配制方法

实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin( 氨卡青霉素 )(100 mg/ml) 100 mg/ml Ampicillin 50 ml 配制方法 1. 称量 Ampicillin 置于 50 ml 离心管中 ; 2. 加入 40 ml 灭菌水, 充分混合溶解后, 定容至 50 ml; 3. 用 0.22 µm 过滤膜过滤除菌 ; 4. 小份分装 (1 ml/ 份 ) 后,-20 保存 IPTG(