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1 色谱讲堂 ( 三十九 ) 2015 版中国药典四部 色谱相关通则解读 (1) 0502 薄层色谱法 Leo Zeng 广州太玮生物科技有限公司 leoz@techway-gz.com / 年 8 月

2 色谱讲堂 ( 三十九 ) 免责声明 : 本期讲堂内容为非官方权威解读, 仅供学习交流之用

3 色谱讲堂 ( 三十九 ) 定义 : 2015 版药典主要变化 薄层色谱法系将供试品点于薄层板上, 在展开容器内用展开剂展开, 使供试品所含成分分离, 所得色谱图与适宜的对照标准物质按同法所得的色谱图对比, 亦可用薄层色谱扫描仪进行扫描, 用于鉴别 检查或含量测定 将旧版药典 对照物 修订为更规范 对照标准物质

4 色谱讲堂 ( 三十九 ) 2015 版药典主要变化 1 仪器与材料新版药典规范了市售薄层板的要求 : 市售薄层板按固定相种类分为硅胶薄层板 聚酰胺薄层板 氧化铝薄层板等 ; 按固定相粒径大小分为普通薄层板 (10~40um) 和高效薄层板 (5~10um); 按硅胶板是否含有荧光剂分为硅胶 G 板和硅胶 GF 254 板 2 操作方法 : 点样点直径限值由 3mm 修改为 4mm 3 其他变化 : 基本整合旧版药典一部和二部

5 色谱讲堂 ( 三十九 ) 0502 薄层色谱法方法解读 0502 薄层色谱法关键指标 : 对薄层板的要求 ( 市售和自制 ): 固定相粒径 :10~40um 摄图像, 条件! 板层厚度 :0.2~0.3mm 薄层板纵向高度 :20cm 为佳板面 : 平整 均匀 有一定坚固度板间重现性要求 : 更高! 不同时间相同检品的拍 斑点比移值要保持一致, 薄层板品质是首要保障

6 色谱讲堂 ( 三十九 ) 0502 薄层色谱法方法解读 0502 薄层色谱法关键指标 : 点样技术要求 : 点样基线 : 距底边 10~15mm 卡玛自动点样器 : 条带状, 长度 5~10mm 手动圆形点样 : 直径 4mm, 越小越好, 边缘距展开剂液面 5mm, 点样间隔 : 8mm 建议 3 倍原点直径接触点 : 勿损伤薄层板表面, 多次点样应在同一接触点 注 : 蓝色条目为药典规定, 其他为太玮科技建议

7 色谱讲堂 ( 三十九 ) 0502 薄层色谱法方法解读 展开 : 浸入展开剂深度为距原点 5mm 为宜 ; 上行展开 8-15cm; 展开剂蒸气预平衡 15~30min

8 色谱讲堂 ( 三十九 ) 0502 薄层色谱法方法解读 显色与检视 : 有颜色物质在可见光下检视 ; 无色物质可用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色, 或加热显色, 在可见光下检视 ; 有荧光物质或显色后可激发荧光物质可在紫外灯 (365nm 或 254nm) 下观察荧光斑点 ; 紫外灯下有吸收的成分, 可在带有荧光剂的薄层板 ( 如硅胶 GF 254 ), 在紫外灯下 (254nm) 观察荧光物质淬灭形成的斑点 Tips:10% 硫酸乙醇是常用的显色剂,110 加热时, 自制含 CMC-Na 薄层板非常容易加热多度导致整个板面变黑! 成功显色后, 橙红色斑点晾凉放置过程容易变淡, 可在显色完成后, 趁热在薄层板表面覆盖一块尺寸一致的洁净玻璃板, 可更长时间放置不褪色

9 色谱讲堂 ( 三十九 ) 0502 薄层色谱法方法解读 记录 : 薄层色谱图像一般可采用摄像设备保存, 以光学照片或电子图像的形式保留 也可用薄层色谱扫描记录相应色谱图

10 0502 薄层色谱法关键参数要求 色谱讲堂 ( 三十九 ) 系统适用试验要求 : 比移值 R f = 0.2~0.8

11 0502 薄层色谱法关键参数要求 色谱讲堂 ( 三十九 ) 系统适用试验要求 : 分离度 ( 或称分离效能 ) 鉴别时, 供试品与对照标准物质色谱中斑点均应清晰分离 限量检查和含量测定时,R>1.0

12 0502 薄层色谱法关键参数要求 色谱讲堂 ( 三十九 ) 系统适用试验要求 : 重复性 ( 薄层扫描要求 ) 同板同供试液 ( 不显色 ):RSD 5.0% 同板同供试液 ( 显色 ):RSD 10.0% 不同板同供试液 ( 显色和不显色 ):RSD 10.0% 对实验环境 薄层板 操作人员 仪器等有更高要求!

13 0502 薄层色谱法关键参数要求 色谱讲堂 ( 三十九 ) 测定法 : 鉴别 : 供试品与对照标准物质斑点颜色和比移值一致 限量检查与杂质检查 : 半定量颜色 ( 峰面积 ): 供试品杂质斑点 < 杂质对照品斑点颜色 ( 峰面积 ): 供试品杂质斑点 < 稀释对照液主斑点 含量测定 : 薄层扫描法

14 0502 薄层色谱法关键参数要求 色谱讲堂 ( 三十九 ) 薄层扫描法 : 对照标准物质, 两个浓度, 每个浓度点样 2 个供试品取样 2 份, 每份点样 2 个对照标准物质和供试品交叉点样基本要求 : 非显色法,RSD 5.0% 显色法,RSD 10.0% 否则, 重新点板展开扫描 建议使用 20 20cm 市售预制版

15 色谱讲堂 ( 三十九 ) 太玮科技技术建议 1 选择性能更好, 质量更稳定的市售预制薄层板, 鉴别 限量检查和杂质检查项目选择 10 20cm 或 5 20cm 规格玻璃板完成, 薄层扫描选择 20 20cm 规格玻璃板, 不建议使用 10 10cm 规格于 中国药典 为法定依据的方法 2 市售预制薄层板铝板由于更轻便, 易于裁剪等优点, 很多实验室经常使用 但我们不建议用于依据 中国药典 为法定依据的检测项目, 原因如下 : a) 铝板通常涂布厚度 200um, 勉强符合 CHP 要求 ; b) 铝板含有更多的高价金属离子残留, 对许多中药成分 抗生素成分和一些化学药物成分都有严重的潜在不良影响 ; c) 铝板推荐的使用高度是 7.5cm, 当高度 >10cm, 可能会影响上行展开效果

16 太玮科技技术建议 色谱讲堂 ( 三十九 ) 3 自制板的制备 : 按 0502 规定的固定相和水比例研磨混合的浆液比较粘稠, 需要快速铺板, 涂铺的薄层板建议标记方向, 展开时顺着涂铺方向展开, 注意以下细节 : a) CMC-Na 溶液的配制方法 : 取定量水, 至烧杯中, 按比例加入定量 CMC-Na, 漂浮于水面, 静置过夜, 取下层澄清液备用 b) 玻璃板一定要清洗得非常干净, 标准为 : 板面不得滞留任何水珠 c) 调浆时, 研磨混合硅胶和 CMC-Na 溶液 ( 或水 ), 必须沿同一方向慢慢研磨均匀, 避免混入气泡 ; 如发现气泡, 务必将气泡剔除干净后才铺板 ; d) 铺好的薄层板必须静置 自然晾干, 没有充分晾干的薄层板, 不得活化 ; 如发现厚度不均匀 厚度不符合要求 表面不平整等现象的薄层板, 必须抛弃 自制薄层板是一件需要有丰富经验的 费时费力的技术活!

17 太玮科技技术建议 色谱讲堂 ( 三十九 ) 4 点样 采用的薄层板是已活化好, 并于干燥器内保存的薄层板 保存期超过 7 天的, 建议 min 重新活化 一次点样, 不要超过 1uL, 铝板不要超过 0.5uL; 需要点样体积比较大时, 可多次点样, 必要时借助电吹风等工具, 快速挥干第一次点样溶剂后, 继续于同一点点样 长时间点样 (>30min), 点样室相对湿度会影响薄层板活度, 最终影响实验结果, 应该避免 ; 点样室的相对湿度应该密切监控 理想的点样原点直径 2mm; 样品溶剂挥发性越强, 越利于点样 ; 样品溶剂极性较大时, 对正相硅胶板, 点样时容易形成 环, 对色谱结果产生不利影响 ; 点样时, 建议实验人员带上专业口罩!

18 太玮科技技术建议 色谱讲堂 ( 三十九 ) 5 展开展开剂的配制应使用移液管, 临用新配, 配制量为所需用量的 2 倍以上 使用双槽展开缸, 预平衡时向其中 1 槽加入展开剂 ; 平衡后, 迅速向另一槽加入足量展开剂, 开始展开 展开剂浸入薄层板 5mm, 展开剂液面距点样圆点下缘 5mm( 点样基线为 15mm 比较合适 ); 需要连续展开多块薄层板时 ( 相同方法 ), 每块板都需要使用全新展开剂, 不能于展开缸中一次加入展开剂后, 连续展开多板 ; 严格监控环境温度和相对湿度, 有条件的实验室可以对展开环境加以控制 ; 皂苷类成分环境温度越低越有利

19 展开示意图太玮科技技术建议 色谱讲堂 ( 三十九 )

20 匹配 0502 薄层色谱法 相关产品推荐 色谱讲堂 ( 三十九 ) 1 德国默克 Merck 薄层板现正促销 ( 点击查看 ) 规格 优惠单价 硅胶 GF254 20x20cm 20/pk 400 硅胶 G 20x20cm 40/pk 400 硅胶 G 20x10cm 40/pk 400 硅胶 GF254 5x20cm 80/pk 450 关键技术指标 : 固定相粒径 :10~12um( 标准规定 10~40um) 最高的板效板层厚度 :250um( 标准规定 0.2~0.3mm)

21 区域:华南区Merck 授产品:色谱柱 层析板等色谱消耗品信息:权函

22 匹配 0502 薄层色谱法相关产品推荐 色谱讲堂 ( 三十九 ) 2 定量毛细管

23 匹配 0502 薄层色谱法相关产品推荐 色谱讲堂 ( 三十九 ) 3 展开缸

24 匹配 0502 薄层色谱法相关产品推荐 色谱讲堂 ( 三十九 ) 4 3M 防尘防毒口罩

25 色谱讲堂 公司简介 广州太玮生物科技有限公司是一家专注于为色谱实验室提供关键性消耗品的专业公司 我们的骨干员工均有行业主流公司关键岗位的工作经历, 对各知名品牌的产品都有更深入的了解, 可以更准确地为我们的客户推荐最合适的产品 代理品牌 ThermoFisher 色谱产品华南最大授权代理商 Waters,Shimadzu,Merck,Agilent,Alltech,YMC, Sigma(Supelco) USP EP BP 中检院 DR.E Accustandard TRC Witega Chem Service NIST Chiron

26 色谱讲堂栏目色谱讲堂 公司简介 提供服务 : 免费技术咨询 免费分析方法开发 定期 色谱讲堂 上门的技术培训 ( 免费 收费 ) 上门的实操培训( 收费 ) 色谱技术交流群 : ( 色谱那些事 )

27 色谱讲堂 公司简介 提供的产品 : HPLC/UPLC 色谱柱 GC 色谱柱 薄层板等色谱耗材 ; SPE 前处理小柱 散装 SPE 填料 针头式过滤器和微孔滤膜等样品前处理耗品 ; 标准品和对照品 ; 样品瓶 顶空瓶 氘灯 进样针 密封垫 石墨卡套 衬管等色谱仪器配件 ; 移液器 电子天平 离心机等小型仪器设备 ; 培养基等

28 色谱讲堂 公司简介 签约合作物流 : 顺丰快递 最及时供货速度 : 广州市区和珠三角城区当天到达 ( 上午 10:00 前下单 ) 华南地区 华东地区 环渤海地区 省会城市 24 小时到达其他地区 36 小时到达

29 色谱讲堂 公司简介 自主品牌产品 : JADE-PAK 系列色谱柱 : 可能是您最称手的色谱柱美国公司制造, 通用性强, 性能卓越分离度和峰对称性的完美平衡 10 种固定相, 质谱 分析 制备等规格可供药物分析和食品分析大量代表性应用案例点击浏览 :JADE-PAK 色谱柱技术和应用资料 ( 促销火热进行中

30 色谱讲堂 广州太玮生物科技有限公司服务宗旨 : 专业 高效 诚信 责任 品质 价值 服务 急客户所需 一站式优质服务 技术信息反馈和咨询 :technical@techway-gz.com 销售咨询 :sales@techway-gz.com QQ:

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