38 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jan;34(1):38~43 网络出版时间 :2017-12-1413:50 网络出版地址 :htp://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.r.20171211.1847.020.html IGFBP 5 及 p53 与汉防己甲素抑制乳腺癌 MCF 7 细胞增殖的关系研究 周林云 1,2, 任文艳 1,2, 廖云鹏 1,2, 王涵 1,2, 朱茄慧 1,2, 胡莹 1,2, 李福书 1,2, 周娅 1,2 1,2, 何百成 ( 重庆医科大学 1. 药理教研室 ;2. 重庆市生物化学与分子药理学重点实验室, 重庆 400016) doi:10.3969/j.isn.1001-1978.2018.01.010 文献标志码 :A 文章编号 :1001-1978(2018)01-0038-06 中国图书分类号 :R284 1;R329 24;R737 902 2;R977 6 摘要 : 目的研究汉防己甲素 (tetrandrine,tet) 抑制乳腺癌 MCF 7 细胞增殖的作用及可能的分子机制 方法采用 CCK 8 流式及 Westernblot 分析不同浓度 Tet 对 MCF 7 细胞增殖与凋亡的影响 ; 通过 real timepcr Westernblot 检测 Tet 对 MCF 7 细胞 IGFBP 5 表达的影响 ; 应用 CCK 8 分析 Tet 及 IGFBP 5 过表达或沉默表达对 Tet 抑制乳腺癌 MCF 7 细胞增殖作用的影响 ; 利用 Westernblot 检测 Tet 对 MCF 7 细胞 p53 表达的影响, 以及过表达 IGFBP 5 和 ( 或 )Tet 对乳腺癌 MCF 7 细胞 p53 表达的影响 结果 Tet 呈浓度和时间依赖收稿日期 :2017-08-27, 修回日期 :2017-10-16 基金项目 : 国家自然科学基金资助项目 (No81372120) 作者简介 : 周林云 (1989-), 女, 硕士生, 研究方向 : 分子药理学,E mail:462212665@qq.com; 何百成 (1972-), 男, 博士, 教授, 研究方向 : 分子药理学和干细胞生物学, 通讯作者,E mail:hebaicheng99@yahoo. com 性抑制 MCF 7 细胞增殖, 诱导 G 1 期阻滞, 并降低 PCNA 表达水平 ; 同时,Tet 明显增加 MCF 7 细胞凋亡比例, 升高 Bad 的蛋白水平, 降低 Bcl 2 的蛋白水平 Tet 上调 MCF 7 细胞 IG FBP 5 的表达水平, 过表达 IGFBP 5 增加 Tet 对 MCF 7 细胞的增殖抑制作用, 而沉默 IGFBP 5 则减弱 Tet 的这种作用 Tet 升高 MCF 7 细胞的 p53 蛋白水平, 降低 MDM2 的蛋白水平 ; 过表达 IGFBP 5 增强 Tet 对 p53 表达的促进和对 MDM2 表达的抑制作用 结论 Tet 对 MCF 7 细胞增殖具有抑制作用, 机制可能与其上调 IGFBP 5 而增强 p53 信号的功能有关 关键词 : 汉防己甲素 ; 乳腺癌 ;MCF 7; 增殖 ;IGFBP 5;p53 信号汉防己甲素 (tetrandrine,tet) 是一种双苄基异喹啉类生物碱, 主要从多年生藤本防己科植物汉防己的块根中提取 Tet 作为一种钙通道阻滞剂, 具有多种药理作用, 已在临床应用多年, 主要用于治疗矽肺 自身免疫性疾病 炎症性肺部疾病 心血管疾病等 近年来研究表明,Tet 对肝癌 结肠癌 前列腺癌等多种肿瘤细胞具有增殖抑制和促进凋亡的作
中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jan;34(1) 39 用 [1-3], 并且对结肠癌还具有一定的预防作用 [4] 除此之外,Tet 对乳腺癌细胞也具有抑制增殖和促进凋亡的作用, 机制可能与抑制 PKC α 和逆转耐药等有关 [5-6], 但具体分子机制仍不十分清楚 胰岛素样生长因子 (insulin likegrowthfactors, IGFs) 是一类与胰岛素具有高度同源序列的蛋白, IGFs 与其受体结合后参与调节多种生理过程 IGFs 信号受到胰岛素样生长因子结合蛋白 (IGFbinding proteins,igfbps) 的调节 因此, 当 IGF 信号异常时, 可使细胞的多种生物学过程发生异常, 最终导致肿瘤发生 其中, 胰岛素生长因子结合蛋白 5(IG FBP 5) 表达异常与多种肿瘤有关 文献报道, 乳胰癌的发生也与 IGF 信号异常有关 [7] 课题组前期研究表明,Tet 通过促进 IGFBP 5 表达抑制结肠癌细胞增殖, 但 Tet 对乳腺癌的作用是否与 IGFBP 5 有关, 目前还不清楚 因此, 本研究选用人乳腺癌 MCF 7 细胞, 分析 Tet 对乳腺癌的增殖抑制作用, 并探讨 IGFBP 5 与 Tet 抑制乳腺癌细胞增殖作用的可能关系 1 材料 1.1 细胞株及细胞培养人乳腺癌 MCF 7 细胞购自 ATCC(AmericanTypeCultureColection), 用含 10% 胎牛血清,1% 双抗 (100kU L -1 青霉素和 100 mg L -1 链霉素 ) 的 DMEM 培养基 ( 高糖 ) 培养 培养条件为 37 5% CO 2, 待细胞生长至对数生长期时用 0 25% 胰酶消化传代 1.2 试剂汉防己甲素购自 Sigma Aldrich 公司 ; 实验所用 IGFBP 5 p53 等一抗均购自 SantaCruzBi otechnology 公司 ;CCK 8 试剂盒购自上海七海复泰生物科技有限公司 ;AnnexinV FITC/PI 试剂盒购自南京凯基生物科技有限公司 1.3 仪器细胞培养箱 (Thermo) 酶标仪 ( 基因公司 ) 倒置显微镜 (Nikon 公司 ) 定量 PCR 仪 (Bio Rad) 流式细胞仪 (BD 公司 ) 电泳仪 ( 北京六一 ) 等 2 方法 2.1 重组腺病毒的构建采用 AdEasy 系统构建 IGFBP 5 过表达和沉默 IGFBP 5 的 sirna 片段重组腺病毒 过表达 IGFBP 5(AdIGFBP 5) 及沉默 IG FBP 5(AdsiIGFBP 5) 的重组腺病毒均由美国芝加哥大学何通川教授提供 仅表达绿色荧光蛋白 (green fluorescentprotein,gfp) 的重组腺病毒 (AdGFP) 用作载体对照 2.2 实验设计及分组按实验要求, 将细胞分为对照组和实验组 采用二甲基亚砜 (dimethylsulphox ide,dmso) 溶解 Tet, 实验组细胞采用不同浓度 Tet 或 Tet 合并相应重组腺病进行处理, 对照组细胞则用相同体积的 DMSO 和 ( 或 )GFP 重组腺病毒进行处理 2.3 CCK 8 法检测细胞增殖将生长良好的 MCF 7 细胞消化后, 接种到 96 孔板中, 每孔 2000 个细胞 待细胞贴壁后, 按实验设计加入不同浓度的 Tet(1 2 3 4 5μmol L -1 ) 分别于 24 48 72h 后进行检测, 每孔加入 10μLCCK 8 试剂, 放入孵箱孵育 2h 后, 用酶标仪在 450nm 处测定吸光值, 并绘制增殖曲线 每组实验重复 3 次 2.4 流式细胞术检测细胞周期和凋亡将生长状态良好的 MCF 7 细胞均匀种于 6 孔板, 待细胞贴壁后, 用不同浓度的 Tet(1 2 4μmol L -1 ) 或同体积 DM SO 进行处理 48h 后收集细胞, 按试剂盒说明书进行操作, 然后上机检测进行周期分析 对细胞进行凋亡分析时, 利用不含 EDTA 的胰酶消化并收集细胞, 按试剂盒操作说明进行实验, 然后通过流式细胞仪检测, 进行凋亡分析 每组实验重复 3 次 2.5 总 RNA 的提取与 real timepcr 检测将生长状态良好的 MCF 7 细胞消化后, 接种到 T25 培养瓶, 等细胞贴壁后加入不同浓度的 Tet(1 2 4μmol L -1 ) 或同体积 DMSO 进行处理 利用 TRIzol 法提取总 RNA, 然后通过逆转录反应制备 cdna 最后通过 real timepcr 检测目的基因 mrna 表达水平变化情况 所用引物如下 :GAPDH 上游引物 5 CAAC GAATTTGGCTACAGCA 3, 下游引物 5 AGGG GAGATTCAGTGTGGTG 3 ;IGFBP 5 上游引物 5 CGTTTCAGCCCTCATTTAATTC 3, 下游引物 5 CAG TTTTCCCAGAATGAGGAAG 3 每组实验重复 3 次 2.6 Westernblot 实验将生长状态良好的 MCF 7 细胞消化后均匀种于 6 孔板, 用不同浓度 Tet(1 2 4μmol L -1 ) 或同体积 DMSO 对细胞进行处理 按实验设计, 在相应时间点提取各组总蛋白, 按常规方法进行 Westernblot 实验操作 最后, 采用 ECL 试剂盒对目的条带进行显影并采集图像 每组实验重复 3 次 2.7 统计学分析采用 SPSS11 0 软件进行统计学分析, 实验数据以 x±s 珋表示 数据用单因素分析, 利用 SNK 检验法进行组间比较 3 结果 3.1 Tet 对 MCF 7 乳腺癌细胞生长的影响 Fig 1A 结果显示, 不同浓度的 Tet(1 2 3 4 5μmol L -1 ) 在体外对乳腺癌 MCF 7 细胞的增殖有明显抑制作用, 并呈现一定的时间和浓度依赖性 2μmol L -1 Tet 在 48h 时, 即可明显诱导生长抑制 Fig
40 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jan;34(1) 1B 周期分析结果显示,Tet 明显增加 G 1 期细胞比例, 降低 S 期细胞比例 Fig1C 的 Westernblot 结果显示,Tet 呈浓度依赖性降低 PCNA 蛋白水平 以上结果提示,Tet 对乳腺癌细胞 MCF 7 的增殖有明显抑制作用 Fig1 EfectsofTetonproliferationofMCF 7cels A:CCK 8asayresultsshowedtheanti proliferationefectoftetin MCF 7cels( P<0 05, P<0 01vscontrol).B:Celcycleanal ysisresultsshowedthecelcyclearestefectoftetinmcf 7cels.C: WesternblotasayresultsshowedtheefectofTetonthelevelofPCNA inmcf 7cels 3.2 Tet 对 MCF 7 乳腺癌细胞凋亡的影响 Fig 2A 流式分析结果显示,Tet 呈浓度依赖性增加 MCF 7 细胞的凋亡比例 Fig2BWesternblot 结果显示,Tet 升高 Bad 的蛋白水平, 降低 Bcl 2 的蛋白水平 结果表明,Tet 对乳腺癌 MCF 7 细胞的凋亡具有促进作用 3.3 Tet 对乳腺癌 MCF 7 细胞中 IGFBP 5 表达的影响 IGFs 信号异常是肿瘤发生的重要原因之一 IGFBP 5 对 IGFs 信号具有抑制作用, 但 IGFBP 5 与乳腺癌的确切关系目前尚不十分清楚 因此, 本研究拟分析 Tet 抑制乳腺癌 MCF 7 细胞增殖的作用是否与 IGFBP 5 有关 Fig3Areal timepcr 分析结果显示,Tet 明显增加 IGFBP 5 的 mrna 表达水平 Fig3BWesternblot 结果也显示,Tet 可增加 IGFBP 5 的蛋白水平 结果提示,Tet 抑制 MCF 7 细胞增殖的作用可能与其上调 IGFBP 5 表达有关 3.4 IGFBP 5 对 Tet 抑制 MCF 7 细胞增殖作用的影响由于 Tet 在 MCF 7 细胞中明显促进 IGFBP 5 表达, 提示 Tet 对 MCF 7 细胞的增殖抑制作用可能与 IGFBP 5 有关 Fig4CCK 8 检测结果显示, 高表达 IGFBP 5 能抑制 MCF 7 细胞增殖, 并明显增强 Tet 对该细胞增殖的抑制作用 ; 沉默 IGFBP 5 能促进 MCF 7 细胞增殖, 同时减弱 Tet 对 MCF 7 细胞的增殖抑制作用 结果提示,IGFBP 5 与 Tet 抑制 MCF 7 细胞增殖有关, 但具体分子机制尚不清楚 3.5 IGFBP 5 在 MCF 7 细胞中对 p53 信号的影响 p53 作为重要的肿瘤抑制因子, 是抗肿瘤药物的重要靶点之一 因此,Tet 对 MCF 7 细胞的增殖抑制作用可能也与 p53 有关 Westernblot 分析结果显示,Tet 明显增加 p53 的蛋白水平, 同时降低 MDM2 的水平 (Fig5A) 提示 Tet 抑制 MCF 7 细胞增殖可能与增加 p53 信号的功能有关, 但 Tet 调节 p53 的机制尚不清楚 进一步分析结果表明, 高表达 IGFBP 5 能增强 Tet 对 p53 表达的促进和对 MDM2 表达的抑制作用 (Fig5B) 以上实验结果提示,Tet 对 MCF 7 细胞的增殖抑制作用可能与其上调 IGFBP 5 表达, 进而增强 p53 信号的功能有关 4 讨论乳腺癌是最常见的侵袭性肿瘤之一, 严重威胁女性健康 乳腺癌的治疗包括手术 放疗 化疗 靶向治疗等 近年来, 乳腺癌的发生呈上升趋势, 但随着早期筛查和诊断技术的发展, 乳腺癌的治愈率有较大的提高 尽管如此, 乳腺癌的预后仍不乐观, 如何有效改善乳腺癌的预后仍面临巨大的挑战 [8] 天然药物在肿瘤治疗的过程中发挥着重要作用, 越来越多从天然药物来源的单体化合物被证明具有较
中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jan;34(1) 41 Fig2 EfectsofTetonapoptosisinMCF 7cels A:FlowcytometricanalysisresultsshowedtheefectofTetonapoptosisinMCF 7cels.B:WesternblotasayresultsshowedtheefectofTetonthe levelofbadandbcl 2inMCF 7cels. Fig4 EfectsofIGFBP 5ontheanti proliferation efectoftetinmcf 7cels CCK 8asayresultsshowedtheefectofover expresionorknock downigfbp 5onTet inducedproliferationinhibitionefectinmcf 7 cels( P<0 05, P<0 01vscontrol; # P<0 05, ## P<0.01vs grouptreatedwithtetalone). Fig3 EfectsofTetonIGFBP 5inMCF 7cels A:Real timepcrasayresultsshowedtheefectoftetontheex presionofigfbp 5inMCF 7cels( P<0 05, P<0 01vscon trol).b:westernblotasayresultsshowedtheefectoftetonthelevel ofigfbp 5inMCF 7cels. 好的抗肿瘤作用 本研究发现,Tet 能明显抑制乳腺癌 MCF 7 细胞增殖, 这种作用可能与 Tet 通过促进 IGFBP 5 表达而增强 p53 信号的功能有关 Tet 是从防己科植物粉防己干燥根中提取的一种二苄基异喹啉类生物碱 Tet 因具有多种药理作用, 在临床上可用于关节炎 神经痛 消化系统疾病的治疗 [9] 研究表明,Tet 还具有抗肿瘤作用, 对多
42 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jan;34(1) Fig5 EfectsofTetand/orIGFBP 5onp53 andmdm2inmcf 7cels A:WesternblotasayresultsshowedtheefectofTetonthelevelof p53andmdm2inmcf 7cels.B:Westernblotasayresultsshowedthe efectoftetand/orover expresionofigfbp 5onthelevelofp53and MDM2inMCF 7cels. 种肿瘤细胞具有明显增殖抑制和促进凋亡作用, 如结肠癌 肝癌等 [1-3] 本研究结果也显示,Tet 对乳腺癌 MCF 7 细胞的增殖具有明显抑制作用, 并能诱导其凋亡 因此,Tet 可能对乳腺癌具有潜在的治疗效果 研究表明,Tet 抗肿瘤作用的机制可能与抑制 Wnt/β catenin 信号或促进 p53 表达等有关 [2,10] 但到目前为止,Tet 抗肿瘤作用的确切机制仍不十分清楚 IGFs 信号对细胞增殖 分化和凋亡具有重要调节作用 因此,IGFs 信号与胚胎及个体发育, 以及肿瘤发生过程密切相关 该信号主要包括 2 种多肽生长因子配体 (IGF 1 和 IGF 2), 与 IGFs 结合的 2 种受体 (IGF 1 受体和 IGF 2 受体 ),7 种能与 IGFs 结合的蛋白 (IGFBP1 7), 以及一系列参与降解 IG FBPs 的蛋白酶, 该信号异常与多种肿瘤密切相关 [11] IGFBP 5 作为一种 IGFs 结合蛋白, 对 IGF 信号具有调控作用 研究表明,IGFBP 5 表达异常与多种肿瘤的发生有关, 如骨肉瘤 肝癌 乳腺癌等 [12-13] IGFBP 5 对部分肿瘤细胞生长具有抑制作用, 但对另外的一些肿瘤细胞生长具有促进作用 因此,IGFBP 5 对肿瘤细胞生长的影响具有双向作用, 原因可能与肿瘤细胞的微环境 细胞种类以及 IGFBP 5 各结构域的功能状态有关 [14] 本研究发现,Tet 能抑制乳腺癌 MCF 7 细胞增殖, 同时上调 IGFBP 5 表达 ; 高表达 IGFBP 5 增强 Tet 对 MCF 7 细胞增殖的抑制作用, 而沉默 IGFBP 5 则减弱 Tet 对 MCF 7 细胞增殖的抑制作用 提示 Tet 对 MCF 7 细胞的增殖抑制作用可能与上凋 IGFBP 5 表达有关, 但具体机制尚不清楚 作为一种重要的肿瘤抑制因子,p53 突变或表达异常与多种肿瘤的发生有关 对于 p53 水平较低的乳腺癌, 可通过促进 p53 表达或抑制其降解, 从而增强 p53 信号的功能而抑制肿瘤生长 文献报道, LQFM064 能通过 p53 途径抑制 MCF 7 细胞增殖 [15] 因此,p53 可作为治疗某些类型乳腺癌的靶点 Tet 对 MCF 7 乳腺癌细胞具有明显增殖抑制作用, 而这种作用与上调 IGFBP 5 有关 提示, 在 MCF 7 细胞中 IGFBP 5 表达水平增加可能与 p53 有关 本研究结果显示,Tet 在 MCF 7 细胞中明显增加 p53 蛋白水平, 降低 MDM2 的蛋白水平 ; 高表达 IGFBP 5 增加 p53 水平, 降低 MDM2 的水平 ; 高表达 IGFBP 5 合并 Tet 则明显增加 Tet 对 p53 表达的促进和对 MDM2 表达的抑制作用 以上结果表明,IG FBP 5 对 MCF 7 细胞增殖的抑制作用可能与其上调 p53 表达有关 综上所述, 本研究表明 Tet 能抑制乳腺癌 MCF 7 细胞增殖, 这种作用可能与 Tet 通过上调 IGFBP 5 表达, 进而增强 p53 信号的功能有关 但 Tet 调节 IGFBP 5 表达及 IGFBP 5 调节 p53 的机制尚需进一步深入研究 参考文献 : [1] LanJ,WangN,LouH,etal.Designandsynthesisofnoveltet randrinederivativesaspotentialanti tumoragentsagainsthuman hepatocelularcarcinoma[j].eurjmedchem,2017,127:554-66. [2] HeBC,GaoJL,ZhangBQ,etal.TetrandrineinhibitsWnt/β cateninsignalingandsuppresestumorgrowthofhumancolorectal cancer[j].molpharmacol,2011,79(2):211-9. [3] 任文艳, 陈前昭, 周林云, 等. 汉防已甲素抑制人结肠癌细胞增
中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jan;34(1) 43 殖与 TGF 1 的关联机制研究 [J]. 中国药理学通报,2017,33 (9):1227-33. [3] RenW Y,ChenQZ,ZhouLY,etal.Studyontherelationship betweentheanti proliferationefectoftetrandrineandtgf β1in humancoloncancercels[j].chinpharmacolbul,2017,33 (9):1227-33. [4] 王东旭, 袁霜雪, 伍秋香, 等. 胰岛素样生长因子结合蛋白 5 与汉防己甲素抑制人结肠癌细胞增殖的关系研究 [J]. 中国药理学通报,2015,31(10):1403-8. [4] WangDX,YuanSX,WuQX,etal.Studyontherelationship betweeninsulin likegrowthfactorbindingprotein5andtheanti proliferationefectoftetrandrineinhumancoloncancercels[j]. ChinPharmacolBul,2015,31(10):1403-8. [5] WongVKW,ZengW,ChenJ,etal.Tetrandrine,anactivator ofautophagy,inducesautophagicceldeathviapkc αinhibition andmtor dependentmechanisms[j].frontpharmacol,2017, 8:351. [6] CaoX,LuoJ,GongT,etal.Coencapsulateddoxorubicinand bromotetrandrinelipidnanoemulsionsinreversingmultidrugresist anceinbreastcancerinvitroandinvivo[j].molpharm,2015, 12(1):274-86. [7] McKeownBT,HurtaRA.MagnololafectsexpresionofIGF 1 andasociatedbindingproteinsinhumanprostatecancercelsin vitro[j].anticancerres,2014,34(11):6333-8. [8] RubovszkyG,HorváthZ.Recentadvancesintheneoadjuvant treatmentofbreastcancer[j].jbreastcancer,2017,20(2): 119-31 [9] BhagyaN,ChandrashekarKR.Tetrandrine amoleculeofwide bioactivity[j].phytochemistry,2016,125:5-13 [10]MengLH,ZhangH,HaywardL,etal.Tetrandrineinducesearly G1arestinhumancoloncarcinomacelsbydown regulatingthe activityandinducingthedegradationofg1 S specificcyclin de pendentkinasesandbyinducingp53andp21cip1[j].cancer Res,2004,64(24):9086-92. [11] KasprzakA,KwasniewskiW,AdamekA,etal.Insulin like growthfactor(igf)axisincancerogenesis[j].mutatres,2017, 772:78-104. [12]SuY,WagnerER,LuoQ,etal.Insulin likegrowthfactorbind ingprotein5suppresestumorgrowthandmetastasisofhumanos teosarcoma[j].oncogene,2011,30(37):3907-17. [13] GhousainiM,EdwardsSL,MichailidouK,etal.Evidencethat breastcancerriskatthe2q35locusismediatedthroughigfbp5 regulation[j].natcommun,2014,4:4999. [14] LutherGA,LamplotJ,ChenX,etal.IGFBP5domainsexert distinctinhibitoryefectsonthetumorigenicityandmetastasisof humanosteosarcoma[j].cancerlet,2013,336(1):222-30. [15]CabralBLS,daSilvaACG,de?vilaRI,etal.Anovelchal conederivative,lqfm064,inducesbreastcancercelsdeathvia p53,p21,kitandpdgfra[j].eurjpharmsci,2017,107:1-15. StudyonrelationshipbetweenIGFBP 5/p53axisandanti proliferation efectoftetrandrineinmcf 7cels ZHOULin yun 1,2,RENWen yan 1,2,LIAOYun peng 1,2,WANGHan 1,2, ZHUJia hui 1,2,HUYing 1,2,LIFu shu 1,2,ZHOUYa 1,2,HEBai cheng 1,2 (1.DeptofPharmacology,SchoolofPharmacy,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing 400016,China; 2.ChongqingKeyLabofBiochemistryandMolecularPharmacology,Chongqing 400016,China) Abstract:Aim Tostudytheefectoftetrandrine (Tet)onproliferationofMCF 7breastcancercels andtheposiblemechanism underlyingthisbiological proces. Methods CCK 8, flow cytometric and Westernblotwereintroducedtoanalyzetheefectof TetonproliferationandapoptosisinMCF 7cels.Re al timepcrand/orwesternblotasaywereemployed todetecttheefectoftetonexpresionofigfbp 5, p53andmdm2.cck 8andrecombinantadenovirus wereutilizedtodeterminetheefectofigfbp 5onthe proliferationinhibitoryefectoftet.westernblotasay wasintroducedtoevaluatetheefectofigfbp 5on p53whichwasinducedbytet.results Tetinhibited theproliferation,arestedcelcycleatg 1 phaseand decreasedtheexpresionofpcna concentrationde pendentlyinmcf 7cels.Meanwhile,Tetincreased thepercentageofapoptoticcels,thelevelofbadand reducedthelevelofbcl 2.Tetincreasedtheexpres sionofigfbp 5eithermRNAorprotein,over expres sionofigfbp 5enhancedtheanti proliferationactivity oftetinmcf 7cels,butknockdownofIGFBP 5at tenuatedthisefectoftet.tetincreasedthelevelof p53anddecreasedthatofmdm2,andexogenousig FBP 5enhancedtheefectofTetonp53andMDM2, respectively.conclusion Tetcaninhibittheprolifer ationofmcf 7cels,andthisactivityispartlymedia tedbyincreasingthefunctionofp53signal,whichmay betriggeredbythetet inducedigfbp 5. Keywords:tetrandrine;breastcancer;MCF 7;anti proliferation;igfbp 5;p53