中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 214Nov;3(11) 159 细胞增殖实验 : 先用黄芪甲苷 ( 使终浓度分别为 mol L 1 ) 或地塞米松 ( 终浓度为 1 8 mol

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1 158 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 214Nov;3(11):158~13 论著网络出版时间 : :27 网络出版地址 :htp:// 黄芪甲苷对 Th2 型淋巴细胞 D1.G4.1 体外作用的研究金华良 1, 王利民 1, 罗清莉 2, 厉蓓 2, 杜懿杰 2, 吕玉宝 2 2, 董竞成 (1. 南京医科大学附属杭州医院呼吸科, 浙江杭州 321;2. 复旦大学附属华山医院中西医结合科, 上海 241) doi:1.3969/j.isn 文献标志码 :A 文章编号 :111978(214) 中国图书分类号 :R284.1;R329.24;R329.25;R ; R392 12;R 摘要 : 目的探讨黄芪甲苷对 Th2 型淋巴细胞株 (D1.G4. 1,D1) 体外的干预作用方法体外培养 D1 细胞, 采用 ConA 作为刺激剂, 分别予以 mol L 1 剂量黄芪甲苷体外干预, 并用地塞米松作为对照 CCK 8 法检测药物对 D1 细胞的增殖影响 ; 流式细胞术检测药物对 D1 细胞凋亡和周期的影响 ;ELISA 法检测药物对细胞培养上清 IL 4 IL 5 IL 13 及 TNF α 水平的影响 ;Westernblot 法检测 D1 细胞 gata 3 表达水平结果黄芪甲苷各剂量组对 D1 细胞增殖及凋亡均无明显影响 (P> 5); 但黄芪甲苷高剂量组 IL 13 与 gata 3 表达水平明显下降 (P< 1), 而低剂量组 TNF α 明显下降 (P< 1) 结论黄芪甲苷体外具有抑制 Th2 反应的作用, 但与药物细胞毒性或诱导凋亡无关关键词 : 黄芪甲苷 ;D1.G4.1;Th2 反应 ;gata 3; 凋亡 ; 体外 Th2 细胞因子在过敏性疾病 ( 如哮喘 ) 中发挥重要作用研究证实其可促进 B 细胞分泌 IgE, 嗜酸性细胞聚集及气道上皮粘液分泌, 是气道炎症产生的主要机制 [1] 黄芪甲苷属于三萜皂苷类药物, 是传统益气类中药黄芪的的主要活性成分, 也是黄芪质量控制的标准本课题组前期发现黄芪可抑制哮喘模型 IL 4 IL 5 IL 13 水平, 改善气道炎症 [2] 研究证实黄芪甲苷具有抗炎免疫调节抗氧化抗纤维化等作用, 对哮喘气道炎症及重塑均有较好的改善作用 [3] 本课题组推测黄芪甲苷可抑制 Th2 型收稿日期 :214712, 修回日期 :21488 基金项目 : 国家重点基础研究发展计划 (973 计划 ) 资助项目 (No 29CB5231); 国家自然科学基金资助项目 (No ); 浙江省医药卫生科技计划项目 (No ) 作者简介 : 金华良 (1984), 男, 博士, 医师, 研究方向 : 中西医结合呼吸病学,Tel: E mail:jinhualiang28@ 126.com; 董竞成 (1959), 男, 博士, 教授, 研究方向 : 中西医结合临床与实验, 通讯作者,Tel: E mail:jc dong24@hotmail.com 反应, 但目前报道多为对脾淋巴细胞等模型的干预研究本研究采用 D1.G4.1(D1) 淋巴细胞, 其为目前公认的 Th2 淋巴细胞株, 旨从细胞水平探讨黄芪甲苷对 Th2 型反应的免疫调节机制 1 材料与方法 1.1 材料 D1 细胞株来源 : 购于美国 ATCC 公司, 货号 :TIB 224TM; 黄芪甲苷 ( 纯度 :>99%) 购于上海融禾医药科技发展有限公司 ; 地塞米松注射液由山东新华制药股份有限公司提供 ; 刀豆素蛋 A (concanavalina,cona) 碘化丙啶 (propidium io dide,pi) 购于美国 Sigma 公司 ;RPMI164 完全培养液胎牛血清 2 巯基丙醇购自美国 Gibco 公司 ;T STIM 购于美国 BD 公司 ; 小鼠 IL 1α 购于美国 R&D 公司 ; 细胞增殖毒性检验试剂盒 (celcountingkit 8,CCK 8) 购自日本同仁化学研究所 ;IL 4 IL 5 IL 13 TNF α 酶联免疫吸附测定试剂盒购于上海西唐生物医药公司 ;gata 3 兔抗小鼠多克隆抗体购于美国 SantaCruz 公司 1.2 方法实验分组 1 空白组 : 将 D1 细胞予完全培养基中培养, 予培养基对照处理 2 ConA 组 : 将 D1 细胞予完全培养基中培养, 予以 5mg L 1 ConA 3 地塞米松 (Dex) 组 : 将 D1 细胞予完全培养基中培养, 予以 1 8 mol L 1 Dex 黄芪甲苷低中高剂量组 : 将 D1 细胞予完全培养基中培养, 予以 5mg L 1 ConA, 及分别为 mol L 1 黄芪甲苷 D1 细胞株培养条件 RPMI164 培养基, 1% T STIM 和 ConA,1% 胎牛血清, 5mmol L 1 2 巯基丙醇,1ng L 1 小鼠 IL 1α, 在 37, 5% CO 2 条件下培养 CCK 8 法检测细胞毒性及细胞增殖细胞毒性实验 : 无菌条件下, 向 96 孔培养板中依次加入 D1 细胞悬液, 使每孔细胞数为 1 4, 再加入黄芪甲苷 ( 使终浓度为 mol L 1 ) 或地塞米松 ( 终浓度为 1 8 mol L 1 ) 或等体积培养基, 共孵育 48h 最后加入 1μlCCK 8 试剂,37 孵育 3h

2 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 214Nov;3(11) 159 细胞增殖实验 : 先用黄芪甲苷 ( 使终浓度分别为 mol L 1 ) 或地塞米松 ( 终浓度为 1 8 mol L 1 ) 或等体积培养基预处理 D1 细胞 2 h, 然后每孔加入 ConA( 终浓度为 5mg L 1 ), 共刺激 48h 最后加入 1μlCCK 8 试剂,37 孵育 3 h 最后采用酶标仪测定吸光度值, 读取波长为 57 nm 流式细胞仪检测细胞凋亡与周期无菌条件下, 向 12 孔培养板中依次加入 D1 细胞悬液, 使每孔细胞数为 1 6, 加入黄芪甲苷 ( 使终浓度分别为 mol L 1 ) 或地塞米松 ( 终浓度为 1 8 mol L 1 ) 或等体积培养基预处理 2h 再加入 Co na( 终浓度为 5mg L 1 ), 共刺激 48h 后, 收集细胞悬液 1r min 1 离心收集细胞冰 7% 乙醇 4 固定 2h 离心细胞去除乙醇, 用 PBS 洗 1 遍加 PI 染色液放置 1h 后上流式细胞仪, 检测细胞凋亡比例及细胞周期 ELISA 检测 D1 细胞培养上清细胞因子无菌条件下, 向 24 孔培养板中依次加入 D1 细胞悬液, 使每孔细胞数为 1 5, 加入黄芪甲苷 ( 使终浓度分别为 mol L 1 ) 或地塞米松 ( 终浓度为 1 8 mol L 1 ) 或等体积培养基预处理 2h 再加入 ConA( 终浓度为 5mg L 1 ), 共刺激 48h 后, 收集细胞悬液,15r min 1,5min, 收集细胞上清液, 采用 ELISA 法测定 IL 4 IL 5 IL 13 TNF α 水平, 具体操作参照厂家说明书进行 Westernblot 测定 D1 细胞 gata 3 表达水平无菌条件下, 向 6 孔培养板中依次加入 D1 细胞悬液, 使每孔细胞数为 2 1 6, 加入黄芪甲苷 ( 使终浓度分别为 mol L 1 ) 或地塞米松 ( 终浓度为 1 8 mol L 1 ) 或等体积培养基预处理 2h 再加入 ConA( 终浓度为 5mg L 1 ), 共刺激 48h 后, 收集细胞, 提取总蛋白,BCA 法测定蛋白浓度灌注凝胶, 上样, 电泳 6V 3min 后改用 8V 恒压电泳 ;3mA 恒流转膜 9min; 封闭 2h; 加入 TBST 稀释的 gata 3 抗体,4 过夜 ; 加羊抗兔二抗, 室温 2h;ECL 显色后将滤膜在暗室曝光后显影, 定影, 使用 QuantityOne 软件进行条带光密度值扫描以 β actin 作内参对照统计学方法采用 SPSS16. 统计软件进行统计分析, 数据采用 x±s 珋表示, 凡符合方差齐性的数据, 采用单因素方差分析 (One WayANOVA), 两组间比较采用 Dunnet 法对不符合方差齐性的数据, 则进行秩和检验 (Kruskal Walis 法 ), 多组间两两比较采用 Mann Whiteney U 法 2 结果 2.1 黄芪甲苷对 D1 淋巴细胞体外增殖的影响细胞毒性实验结果显示, 培养 48h 后, 地塞米松可明显抑制 D1 细胞活性 (P< 5), 而不同浓度的黄芪甲苷 ( mol L 1 ) 对 D1 细胞活性无明显影响 (P> 5); 加入 5mg L 1 ConA 刺激后, 细胞活性明显提高 (P< 5); 地塞米松可明显抑制 ConA 诱导的细胞增殖 (P< 5); 不同浓度的黄芪甲苷 ( mol L 1 ) 对 D1 细胞活性无明显影响 (P> 5) 见 Fig1 2.2 黄芪甲苷对 D1 细胞体外凋亡和细胞周期的影响结果显示,ConA 组凋亡较正常组明显减少 (P< 5); 地塞米松组较 ConA 组细胞凋亡明显增 Cell viability/control % 1..5 Cell viability/control % Dex(1 μmol L ) 2 1 AS(1 mmol L ) ConA(5 mg L ) 2 1 Dex(1 μmol L ) 2 1 AS(1 mmol L ) Fig1 EfectsofASand/orConAonD1celviability P< 5vsblankgroup; P<.5vsConAgroup

3 中国药理学通报ＣｈＰｈｍｇＢｕ２４ＮｖＦｇ２ＲｐｖｐｆｆｗｙｍｙｆｙｄｂｕＴｂＥｆｆｆａｓｙｄｂｕｆｄ多ＰＧＧ期细胞比例明显增加Ｐ而Ｓ期和Ｇ２Ｍ期细胞比例明显减少Ｐ细胞ＧＧ黄芪甲苷低中高剂量组ＤＧｕｐＧＧＳＧ２ＭＢｋ ± ９８ ± ８ ± ２７ＣＡ４ ± ４２± ４７± ８８期Ｓ期均无明显变化Ｐ而高剂量组Ｇ２ＤｘＭ期细胞比例较ＣＡ组明显减少Ｐ以ＡＳ２７ ± ± ２７９ ± ９４８± ７ ± ８４９ ± ７ＡＳ４８± ９７± ４７± ４ＡＳ８２± ２ ± ７４± 上说明黄芪甲苷在本实验浓度内对Ｄ细胞无明显的促凋亡作用但高剂量组对细胞周期有一定影ＰＰｖＣＡ响见Ｆｇ２Ｔｂ明显升高Ｐ地塞米松组ＩＩ 2 及ＴＮＦＰ黄芪 α水平明显下降Ｐ甲苷高剂量组可明显下降Ｄ细胞培养上清中Ｉ 15 而低剂量组ＴＮＦ水平Ｐ α水平明显下 Apoptosis/% 降Ｐ但黄芪甲苷各剂量组对Ｉ水平无明显影响Ｐ见Ｆｇ４ 1 ４黄芪甲苷对Ｄ细胞ｇ表达水平的影响结果显示ＣＡ组较空白组ｇ表达水平明显 5 增加Ｐ而地塞米松组ｇ表达水平明显降低Ｐ黄芪甲苷高剂量组ｇ表达 Blank ConA Dex AS 2 AS 4 AS 8 ＦｇＥｆｆｆａｓｐｐｆｄＰｖｂｋｇｕｐＰｖＣＡｇｕｐ水平较ＣＡ组明显下降Ｐ而低中剂量组无明显差异Ｐ见Ｆｇ讨论现代药理学研究表明黄芪甲苷具有良好的免ＩＴＮＦ α 的影响结果显示培养４８ｈ后疫调节作用可抗炎抗氧化抗病毒等作用４哮喘是Ｔｈ２淋巴细胞等介导的气道炎症性疾病既ＣＡ组较正常组ＩＩ及ＴＮＦ α水平均往的研究７提示黄芪甲苷可调节ＴＢ淋巴细胞增黄芪甲苷对培养上清中细胞因子Ｉ

4 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 214Nov;3(11) IL4/ng L IL5/ n g L Blank ConA Dex AS 2 AS 4 AS 8 Blank ConA Dex AS 2 AS 4 AS IL13/ n g L TNF α / n g L Blank ConA Dex AS 2 AS 4 AS 8 Blank ConA Dex AS 2 AS 4 AS 8 Fig4 EfectsofASoncytokinesinculturesupernatantsofD1cels P< 5, P< 1vsblankgroup; P<.5, P<.1vsConAgroup Relative protein levels gata3 βactin Blank ConA Dex AS 2 AS 4 AS 8 Fig5 EfectsofASongata 3expresionofD1cels P< 5vsblankgroup; P<.5vsConAgroup. 殖, 但罕见对 Th2 型淋巴细胞作用的相关报道因此, 本研究通过探讨黄芪甲苷体外干预 Th2 淋巴细胞株 (D1 细胞 ) 的作用, 进一步阐明黄芪甲苷对哮喘等疾病的作用机制, 为临床应用奠定理论基础为探讨黄芪甲苷是否存在细胞毒性作用, 本研究首先检测药物对细胞活性的影响结果发现, 在有无 ConA 刺激时, 黄芪甲苷在本实验浓度下 ( mol L 1 ) 对 D1 细胞活性均无明显影响, 说明在本实验浓度下, 黄芪甲苷对 D1 细胞无细胞毒性作用地塞米松在有无 ConA 刺激的条件下, 均可明显抑制 D1 细胞的活性, 说明本实验浓度下的地塞米松 (1 8 mol L 1 ), 对 D1 细胞具有一定的细胞毒性凋亡和细胞周期的检测可进一步分析药物对细胞增殖的影响本研究发现, 与 ConA 组比较, 低中高剂量组黄芪甲苷对 D1 细胞凋亡均无明显影响, 进一步证实本实验浓度下黄芪甲苷对 D1 细胞无细胞毒性但黄芪甲苷高剂量组 G 2 /M 期细胞比例明显减少, 说明一定剂量的黄芪甲苷可减缓细胞的有丝分裂而地塞米松组 D1 细胞凋亡明显增加,G /G 1 期的细胞比例时间明显上调, 而 S 与 G 2 / M 期的细胞比例明显减少, 提示地塞米松可以抑制 D1 细胞内 DNA 合成, 促使细胞停滞在静止期 IL 4 IL 5 及 IL 13 是经典的 Th2 型淋巴细胞因子, 也是哮喘气道炎症的主要炎症介质 [8] 研究已证实黄芪甲苷可抑制气道炎性因子水平, 减少嗜酸

5 1512 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 214Nov;3(11) 性粒细胞聚集, 从而改善气道炎症 [9] 本课题从体外研究发现, 黄芪甲苷对 Th2 型细胞因子 IL 4 及 IL 5 水平无明显影响, 但可明显抑制 IL 13 水平 IL 13 在哮喘发病机制中发挥多种功能, 可促进气道粘液分泌, 加重气道炎症及气道高反应性 [1] 此外, 本研究还发现, 低剂量组黄芪甲苷可抑制 TNF α 水平 TNF α 可以促进嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的募集, 促进 T 细胞活化, 上调黏附分子 ICAM 1 和 VCAM 1 的表达, 从而加重哮喘气道炎症 [11] 以上提示黄芪甲苷体内改善哮喘气道炎症, 其作用可能与抑制 Th2 细胞 IL 13 及 TNF α 水平相关本实验中, 地塞米松组 IL 4 IL 5 IL 13 及 TNF α 水平明显下降, 但其作用可能与其明显抑制 D1 细胞活性相关为进一步分析黄芪甲苷对 D1 细胞的作用, 本研究检测了 gata 3 表达的变化 gata 3 是 Th2 淋巴细胞分化成熟的关键转录因子, 对 Th2 型细胞因子水平具有重要影响本研究发现, 黄芪甲苷高剂量组可明显抑制 gata 3 表达研究认为 gata 3 可调控 IL 13 基因的转录表达, 与其蛋白表达水平密切相关 [12] 因此, 黄芪甲苷降低 IL 13 水平, 可能与其抑制 gata 3 水平相关 gata 3 表达水平对 IL 4 IL 5 细胞因子也具有重要影响, 但本实验中黄芪高剂量组 IL 4 及 IL 5 水平与 ConA 组无明显差异一方面, 细胞因子的表达水平受细胞内外环境的影响, 本实验采用 ConA 为促有丝分裂原, 可选择性刺激 T 细胞增殖, 因此 IL 4 及 IL 5 水平升高与 D1 细胞增殖密切相关, 而 gata 3 水平的变化并未影响 ConA 促进细胞因子 (IL 4 及 IL 5) 的表达黄芪甲苷可抑制 IL 13 水平, 推测除抑制 gata 3 外, 可能存在其它作用机制, 有待进一步研究证实另一方面,gata 3 对 IL 4 及 IL 5 的调节首先表现在转录水平, 故而进一步实验可检测黄芪甲苷对 IL 4 及 IL 5mRNA 水平的影响综上, 本研究证实黄芪甲苷体外具有抑制 Th2 反应的作用, 这可能是黄芪甲苷治疗哮喘的作用基础至于黄芪甲苷调节 gata 3 表达机制, 有待进一步研究参考文献 : [1] RomagnaniS.Theroleoflymphocytesinalergicdisease[J].J AlergyClinImmunol,2,15(3): [2] JinH,LuoQ,ZhengY,etal.CD4+CD25+Foxp3+ Tcels contributetotheantiasthmaticefectsofastragalusmembranaceus extractinaratmodelofasthma[j].intimmunopharmacol,213, 15(1):429. [3] 杜强, 张倩, 沈立, 等. 黄芪甲苷对慢性哮喘模型小鼠气道重塑的影响 [J]. 中国药理学通报,211,27(1):1434. [3] DuQ,ZhangQ,ShenL,etal.EfectsofastragalosideIVonair wayremodelinginamurinemodelofchronicasthma[j].chin pharmacolbul,211,27(1):1434. [4] 商蕾, 曲章义, 宁莉莉, 等. 黄芪甲苷体外抗腺病毒作用研究 [J]. 中国药理学通报,213,29(6):8548. [4] ShangL,QuZY,NingLL,etal.Theanti adenovirusefectof astragalosideivinvitro[j].chinpharmacolbul,213,29(6): [5] 柴丽娟, 钟佩茹, 周志焕, 等. 黄芪甲苷对体外神经干细胞增殖作用影响的研究 [J]. 中国药理学通报,21,26(5):673. [5] CaiLJ,ZhongPR,ZhouZH,etal.Proliferationefectsofas tragalosideonneuralatemcelsinvitro[j].chinpharmacolbul, 21,26(5):673. [6] GuX,JiangD,WangY,etal.EfectsofastragalosideIVoneo sinophilactivationinducedbyhousedustmitealergen[j].mol MedRep,212,6(1):1152. [7] WangYP,LiXY,SongCQ,etal.EfectofastragalosideIVon T,Blymphocyteproliferationandperitonealmacrophagefunction inmice[j].actapharmacolsin,22,23(3):2636. [8] XuQ,ChaiSJ,QianYY,etal.Breastregresionprotein 39 (BRP 39) promotesdendriticcelmaturationinvitroanden hancesth2inflammationinmurinemodelofasthma[j].acta PharmacolSin,212,33(12): [9] GuX,JiangD,WangY,etal.EfectsofastragalosideIVoneo sinophilactivationinducedbyhousedustmitealergen[j].mol MedRep,212,6(1):1152. [1]LaiHY,RogersDF.Mucushypersecretioninasthma:intracel lularsignalingpathwaysastargetsforpharmacotherapy[j].cur OpinAlergyClinImmunol,21,1(1):6776. [11]BrightlingC,BeryM,AmraniY.TargetingTNF alpha:anovel therapeuticapproachforasthma[j].jalergyclinimmunol, 28,121(1):51. [12]KishikawaH,SunJ,ChoiA,etal.Theceltype specificexpres sionofthemurineil 13geneisregulatedbyGATA 3[J].JIm munol,21,167(8): EfectsofastragalosideIVonTh2lymphocyteD1.G4.1invitro JINHua liang 1,WANGLi min 1,LUOQing li 2,LIBei 2,DUYi jie 2,L Yu bao 2,DONGJing cheng 2 (1.DeptofRespiratoyDiseases,HangzhouFirstPeople shospital,nanjingmedicaluniversity,hangzhou 3121,China; 2.DeptofIntegrativeMedicine,HuashanHospital,FudanUniversity,Shanghai 241) Abstract:Aim Toevaluatetheefectsofastragalo sideⅣ onth2lymphocyted1 G4 1(D1)invitro.

6 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 214Nov;3(11):1513~ 网络出版时间 : :27 网络出版地址 :htp:// FW 4 86 对 HER2 阳性胃癌细胞的抗肿瘤活性及其机制研究张敏 1, 曹品容 1, 吴群丹 1, 孔应利 1, 陈丽红 1, 罗燕梅 1, 黄维 1,3, 许建华 1,2 1,2, 叶敏 (1. 福建医科大学药学院, 福建福州 354;2. 福建省天然药物药理学重点实验室, 福建福州 354; 3. 福建省微生物研究所, 福建福州 357) doi:1.3969/j.isn 文献标志码 :A 文章编号 :111978(214) 中国图书分类号 :R329.24;R329.25;R735.2;R978.15; R979.1 摘要 : 目的研究大环双内酯类化合物 FW 4 86 对 HER2 阳性胃癌细胞的抗肿瘤活性及其机制, 探讨其与拉帕替尼的联合作用方法 MTT 法检测 FW 4 86 对 HER2 阳性胃癌细胞增殖抑制作用 ; 结晶紫染色法检测集落形成抑制能力 ; 流式细胞术检测细胞蛋白表达凋亡诱导和周期阻滞 ; 免疫共沉淀法检测蛋白间相互作用 ; 免疫组化法观察蛋白的表达变化 ; 免疫印迹法检测细胞增殖和凋亡通路相关蛋白的表达 ; 体内异种移植瘤模型检测抑瘤效果结果 FW 4 86 明显抑制 HER2 阳性胃癌细胞 NCI N87 OE19 的增殖和集落形成能力, 半数抑制率 (IC 5 ) 分别为 (24 17± 2) (29 61± 3)μmol L 1 ; 剂量依赖性诱导阻滞细胞于 G 2 M 期, 并增加凋亡比例 ;2mg kg 1 实验组对 OE19 瘤块的收稿日期 : 修稿日期 :21471 基金项目 : 国家自然科学基金资助项目 (No , ); 福建省自然科学基金资助项目 (No211J57) 作者简介 : 张敏 (1988), 男, 硕士, 研究方向 : 肿瘤药理学,E mail: @qq.com; 曹品容 (199), 女, 硕士, 研究方向 : 肿瘤药理学, 共同第一作者,E mail:caopr@qq.com; 叶敏 (1979), 男, 博士, 教授, 硕士生导师, 研究方向 : 肿瘤药理学, 通讯作者,E mail:miny@fjmu.edu.cn; 许建华 (1958), 男, 博士, 教授, 博士生导师, 研究方向 : 肿瘤药理学, 通讯作者,E mail:xjh@mail.fjmu.edu.cn 抑瘤率为 48 %(P< 1); 诱使 Hsp9/CDC37 复合物解离 ; 降解 HER2 Akt 蛋白 ; 抑制 HER2 Akt 和 ERK 的磷酸化, 增加 cleavedcaspase 3 cleavedparp 的表达 ;FW 4 86 与拉帕替尼体外联用对 NCI N87 胃癌细胞具有协同作用, 能抑制增殖, 提高凋亡比例结论 FW 4 86 对 HER2 阳性胃癌细胞具有良好的体内外抗肿瘤活性 ; 与拉帕替尼联合具有协同作用关键词 :FW 4 86;HER2 阳性胃癌 ; 细胞周期 ; 凋亡 ; 增殖抑制 ; 协同作用胃癌是全球第 4 大常见的癌症, 癌症相关致死率在全球排名第 2 位 [1], 在我国, 胃癌的发生率居各癌症之首大约 2% 的胃癌患者 HER2 过表达 [2] 人类表皮生长因子受体 2(HER2) 是表皮生长因子受体家族的成员之一, 分子质量 185ku, 是一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜受体 [3] 临床上已出现多种 HER2 靶向药物, 然而, 大多数起初对 HER2 靶向药物有效的患者, 最终都发生获得性耐药或二级耐药, 由此衍生出一系列对曲妥珠单抗耐药的治疗策略, 其中之一就是热休克蛋白 9(Hsp9) 抑制剂 [4] Hsp9 是高度保守的分子伴侣, 通过消耗 ATP, 对细胞中众多信号蛋白构象成熟和功能稳定进行调控 [5] 众多癌症相关蛋白 ( 包括 HER2) 的稳定都需要 Hsp9 的参与, 这使得它成为研究治疗基因突变相关癌症和克服靶向药物耐药的热门靶点因此, Methods Celswereculturedinvitroaccordingto ATCCrecommendationsandweretreatedwithastraga losideivatdoseof2,4,8 1 5 mol L 1 ordexam ethasone(dex)inthepresentofcona.celviability wasdeterminedbycelcountingkit 8asay.Apoptosis andcycledistributionofd1wereevaluatedbyflow cytometry.th2cytokinesintheculturesupernatantof D1wereevaluatedbyELISA.Th2transcriptionfactor GATA 3expresioninD1celswasdeterminedby Westernblot.Results AstragalosideIVatdoseof2, 4,8 1 5 mol L 1 havenosignificantefectoncel viabilityorapoptosisofd1(p> 5).Astragaloside IVatdoseof8 1 5 mol L 1 markedlysuppresed thelevelofil 13intheculturesupernatant(P< 1),andtheexpresionofGATA 3(P< 5), andastragalosideivatdoseof2 1 5 mol L 1 ob viouslyinhibitedtheleveloftnf α (P< 1). Conclusion AstragalosideIV hasimmunomodulatory propertiesonth2responseinvitro,whichisnotasoci atedwithcytotoxicefectorapoptosis. Keywords:astragalosideIV;D1.G4.1;Th2re sponse;gata 3;apoptosis;invitro

研究论文ｗｗｗ号ｍ组有非常显著的统对照组延长其中试剂计学差异与对照组比较Ｐ效果优于阳性氯化铵ＡＲ相对分子质量天津市福晨对照谷氨酸片ｍ组化学试剂厂瓶批号硫代乙酰对四氯化碳致肝损伤合并硫代乙酰铵诱导高ｍ公司产品产品号Ｇ批号氨Ｓ血氨大鼠肝性脑病的

研究论文ｗｗｗ号ｍ组有非常显著的统对照组延长其中试剂计学差异与对照组比较Ｐ效果优于阳性氯化铵ＡＲ相对分子质量天津市福晨对照谷氨酸片ｍ组化学试剂厂瓶批号硫代乙酰对四氯化碳致肝损伤合并硫代乙酰铵诱导高ｍ公司产品产品号Ｇ批号氨Ｓ血氨大鼠肝性脑病的中国药师年第卷第期ＣＰｍＶＮ丹参注射液对肝性脑病的的防治作用及机制研究胡瑜蔡梦婷陈健文陈浩凡广东省边防总队医院广东深圳中山大学药学院摘要目的探讨丹参注射液对肝性脑病ＨＥ的防治作用及其作用的初步机制方法通过急性氨中毒动物模型和四氯化碳ＣＣ致肝损伤合并硫代乙酰胺ＴＡＡ诱导!血氨的大鼠肝性脑病模型对氨中毒死亡时相血氨脑氨水平肝脏功能以及肝脏病理组织学改变等指标进行了评价

中 国 药 理 学 通 报 ChinesePharmacologicalBuletin 214Nov;3(11) 159 细 胞 增 殖 实 验 : 先 用 黄 芪 甲 苷 ( 使 终 浓 度 分 别 为 mol L 1 ) 或 地 塞 米 松 ( 终 浓 度 为 1 8 mol

中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 214Nov;3(11) 159 细胞增殖实验 : 先用黄芪甲苷 ( 使终浓度分别为 mol L 1 ) 或地塞米松 ( 终浓度为 1 8 mol