2017-1中国药理学通报封面

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1 114 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2017Jan;33(1):114~9 网络出版时间 : :13 网络出版地址 :htp:// 人参皂苷 Rh2 调控 PI3K/AKT/GSK 3β 信号通路诱导人结肠癌细胞凋亡 石雪萍, 李静, 冉建华, 熊伟, 李海星, 郭, 陈地龙 ( 重庆医科大学基础医学院干细胞与组织工程研究室, 重庆 ) doi: /j.isn 文献标志码 :A 文章编号 : (2017) 中国图书分类号 :R284.1;R329.25;R329 24;R735 35; R977 6 摘要 : 目的探究人参皂苷 Rh2(ginsenosideRh2,Rh2) 诱导人结肠癌细胞 SW480 凋亡作用机制 方法 CCK 8 法检测 Rh2 对 SW480 细胞增殖的影响 ; 流式细胞术 (FlowcytoMe try,fcm) 检测 Rh2 对 SW480 细胞凋亡的影响 ;Ho echst33258 染色观察 Rh2 对 SW480 细胞凋亡形态学的影响 ; Westernblot 检测经 Rh2 诱导 SW480 细胞中凋亡相关蛋白 Bcl 2 Bax p53 cleavedcaspase 3,PI3K/AKT/GSK 3β 信号通路相关蛋白 PI3K AKT P AKT GSK 3β P GSK 3β 表达量变化 ;LY Rh2 单独及联合诱导 SW480 细胞后, 蛋白 PI3K AKT P AKT GSK 3β P GSK 3β 表达量变化 结果 CCK 8 结果显示 Rh2 呈时间浓度依赖抑制 SW480 细胞增殖 FCM 结果显示细胞早期凋亡率由正常对照组的 (0 70 ±0 09)% 增至 (11 06 ±1 04)% (P <0 05) Ho echst33258 结果显示,Rh2 诱导 SW480 细胞 48h 后呈现典型的凋亡形态学改变 Westernblot 结果显示, 经 Rh2 诱导的 SW480 细胞, 凋亡相关蛋白 Bcl 2 表达降低,Bax p53 激活型胱天蛋白酶 3(cleavedcaspase 3) 蛋白表达增加 ;PI3K/ AKT/GSK 3β 信号通路蛋白 PI3K P AKT P GSK 3β 表达量与对照组比较明显减少,AKT GSK 3β 表达量无明显变化 ; LY Rh2 和 LY 与 Rh2 联合诱导 SW480 细胞后, 总 AKT 蛋白和总 GSK 3β 蛋白表达量基本一致, LY 与 Rh2 联合用药对 SW480 细胞中 PI3K P AKT 和 P GSK 3β 的表达抑制作用较单独用药更加明显 结论 Rh2 可能是通过抑制 PI3K/AKT/GSK 3β 通路, 激活 p53 信号通路, 激活 caspase 3, 破坏 Bcl 2/Bax 比例, 诱导结肠癌细胞 SW480 凋亡 关键词 : 人参皂苷 Rh2; 人结肠癌 SW480 细胞 ;PI3K/AKT/ GSK 3β;p53;Bcl 2;Bax;cleavedcaspase 3; 凋亡收稿日期 : , 修回日期 : 基金项目 : 国家自然科学基金资助项目 (No ) 作者简介 : 石雪萍 (1989-), 女, 硕士生, 研究方向 : 药物抗肿瘤作用及机制,E mail: @163.com; 陈地龙 (1971-), 男, 博士, 研究员, 研究方向 : 中药药理学, 通讯作者,E mail:xinmengyuandlc@163.com 人参作为历史悠久的传统名贵中药材, 近年来, 应用于许多肿瘤的辅助性治疗 人参皂苷 Rh2 (ginsenosiderh2,rh2) 作为人参的主要有效成分之一, 具有较高的抗肿瘤活性, 研究表明其对多种肿瘤细胞具有抑制增殖, 诱导凋亡的作用 [1-5] 目前关于 Rh2 对结肠癌作用的研究包括 Rh2 能够通过阻滞细胞处于 S 期抑制结肠癌细胞增殖 [6], 诱导结肠癌细胞凋亡 [7], 以上研究肯定了 Rh2 抑制结肠癌细胞增殖, 诱导凋亡的作用, 但对其具体机制研究甚少 PI3K/AKT/GSK 3β 信号通路在多种细胞凋亡的过程中扮演了重要的角色, 那么 Rh2 诱导结肠癌 SW480 细胞凋亡能否通过经典的 PI3K/AKT/GSK 3β 通路发挥作用, 目前尚未见报道 本研究拟观察 Rh2 作用结肠癌细胞后, 对其增殖和凋亡的影响, 凋亡相关蛋白及 PI3K/AKT/GSK 3β 信号通路蛋白表达量变化 ;PI3K 抑制剂 LY Rh2 单独及联合诱导 SW480 细胞后, PI3K/AKT/GSK 3β 信号通路蛋白表达量变化 旨在探讨 Rh2 对结肠癌细胞凋亡的影响及其可能作用机制 1 材料与方法 1.1 细胞与试剂人结肠癌细胞系 SW480 细胞由重庆医科大学附属医院肿瘤分子研究中心惠赠 [ 来源于美国模式培养物集存库 (americantypeculture colection,atcc)];rh2 购自成都曼斯特生物科技有限公司 (20mg/ 支 ), 相对分子质量为 , HPLC 检测纯度 98%;DMEM 培养基 胎牛血清均购自 HyClone 公司 ;0 25% 胰酶购自 Gibco 公司 ; CelCountingKit 8(CCK 8) 试剂盒购自日本株式会社同仁化学研究所 ;LY Hoechst33258 染液 BCA 蛋白浓度测定试剂盒 ( 增强型 ) RIPA 裂解液 ( 强 ) PMSF(100nmolL -1 ) SDS PAGE 凝胶配制试剂盒购自碧云天生物技术有限公司 ;6 孔板和 96 孔板购自 NEST 公司 ; 抗体 β actin 兔抗人 IgG 购自巴傲得生物科技有限公司 ; 抗体 p53 Bcl 2 Bax cleavedcaspase 3 PI3K 和 AKT 购自沈阳

2 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2017Jan;33(1) 115 万类科技有限公司 ; 抗体 p AKT GSK 3β p GSK 3β 购自美国 CelSignalingTechnology;PVDF 膜和 ECL 显色剂购自 Miliproe 公司 1.2 方法 细胞培养及药品储存液配制人结肠癌 SW480 细胞用含 10% 胎牛血清 DMEM 完全培养基, 于 37,5% CO 2 饱和湿度下常规培养, 每 2~ 3d 传代 1 次 人参皂苷 Rh2(20mg/ 支 ) 溶于 200μLDMSO 配制成 160mmolL -1 储存液, -20 保存, 实验时用 10% 胎牛血清的高糖 DMEM 培养基稀释成相应浓度 (DMSO 终体积分数不能超过 0 1% ) CCK 8 法检测 SW480 细胞增殖抑制率取处于对数生长期的 SW480 细胞, 调整细胞密度为 L -1, 以每孔 100μL 的细胞悬液接种于 96 孔板, 培养 5~6h 贴壁后弃去培养上清液 配制终浓度为 μmolL -1 的 Rh2, 每孔 200μL, 每个浓度设置 3 个复孔, 各药物诱导组作为实验组 空白组为含 10% 胎牛血清的 200μL 完全培养基, 对照组为含与实验组等量细胞的 200μL 细胞悬液 细胞培养 h 后, 每孔加入 20μL 的 CCK 8 试剂并放孵箱孵育 2 5h, 酶标仪于 450nm 波长处测定各孔的吸光度 (A 值 ), 并计算药物诱导组细胞生存抑制率和各个时间点的半数抑制浓度 (IC 50 ), 以 IC 50 为标准确定药物最适作用浓度和时间 细胞生存抑制率由下面公式计算 : 抑制率 /% =(A Control 组 -A Rh2 )/ A Control 组 -A 空白对照组 ) 100% FCM 检测结肠癌 SW480 细胞凋亡取对数生长期的 SW480 细胞, 以 L -1 的密度接种于直径为 6cm 的培养皿, 设置对照组和药物组, 培养 24h 后药物组分别加入终浓度为 和 50 μmoll -1 的 Rh2 处理 48h, 收集上清液并用 PBS 洗涤 2 次, 收集全细胞, 每组样本测定 个细胞, 流式细胞仪检测采用 CelQuest 软件分析得出细胞凋亡率 实验重复 3 次 Hoechst33258 染色检测 SW480 细胞核形态变化将无菌的防脱盖玻片置于 6 孔板内, 以 L -1 的密度接种在 6 孔板内 培养 24h, 分别设置对照组 (0μmol L -1 ) 和药物组 ( μmoll -1 ) 处理 48h, 吸尽培养基,PBS 洗涤 2 遍, 每孔加入 1mL 固定液, 固定 30min 弃去固定液, 用 PBS 洗涤 3 次, 每次 2min 避光加入 1mLHo echst33258 染色液, 染色 5min 去除染色液, 用 PBS 洗 3 遍, 每次 5min 用抗荧光淬灭封片液将 盖玻片封片于载玻片上, 使用荧光显微镜观察, 采图 实验重复 3 次 蛋白质免疫印迹法 (Westernblot) 检测相关蛋白取对数生长期的 SW480 细胞, 调整细胞数为 L -1, 接种于直径 10cm 培养皿, 每皿 6 ml 1 分别设置对照组和药物组, 培养 24h 后药物组加入终浓度为 μmolL -1 的 Rh2 诱导 48h;2 分别设置对照组 Rh2(50μmolL -1 ) LY294002(20μmolL -1 ) LY294002(20μmol L -1 )+Rh2(50μmolL -1 ) 组, 培养 24h 后, 分别加入对应的药物组诱导 48h 用细胞裂解液在冰上同时裂解细胞组 20min,12000 g, 离心 15min, 提取各组总蛋白,BCA 法测定蛋白含量 酶标仪测定各组蛋白质含量并配平, 使各组蛋白终浓度为 5g L -1 每个加样孔加样 50μg, 采用 SDS PAGE 胶分离蛋白,70~110V 电泳 ;4 250mA 恒流条件下转膜 封闭液 37 封闭 2h, 采用兔抗人 p53(1 1000) Bcl 2(1 1000) Bax(1 500) cleaved caspase 3(1 500) PI3K(1 1000) AKT( ) p AKT(1 1000) GSK 3β(1 1000) p GSK 3β(1 1000) β actin( ),4 孵育过夜,TBST 漂洗,37 孵育山羊抗兔 IgG( ) 二抗 20min,TBST 漂洗,ECL 试剂发光,Bio Rad 发光系统呈像 采用 Bio Rad Image Lab Soft ware 分析测定条带, 检测分析条带灰度值, 用各组目的条带的灰度值和内参的灰度值比值表示蛋白质相对表达水平 1.3 统计学方法分析采用 SPSS22 0 软件进行统计学分析, 进行独立样本 t 检验 2 结果 2.1 人参皂苷 Rh2 能有效抑制人结肠癌 SW480 细胞增殖运用 CCK 8 法检测 Rh2 对 SW480 细胞增殖抑制率 结果显示,Rh 和 70 μmoll -1 作用于 SW480 细胞 h,SW480 细胞的增殖受到明显抑制 (Fig1), 与对照组比较, 差异有统计学意义 (P<0 01) Rh2 作用于 SW480 细胞 h 的半数致死浓度 (IC 50 ) 分别为 61 74μmolL μmolL μmol L -1 由 Fig1 可见,Rh2 对 SW480 细胞的抑制作用呈时间浓度依赖性 2.2 Rh2 对人结肠癌 SW480 细胞凋亡的影响 FCM 检测 Rh2 诱导人结肠癌 SW480 细胞凋亡 Rh μmolL -1 作用于 SW480 细胞 48h 后,SW480 细胞的早期凋亡率分别为 (5.37

3 6 中国药理学通报 Ch Ph m Bu 2 7J ± 5 7 ± 2 9 和 6 ± 后 对照组发出均匀的淡蓝色荧光 细胞核无明显凋 随着药物浓度升高 S 细胞的凋亡率 亡形态学特征 Rh 2 5μm L 分别诱导 逐渐增加 与正常对照组的 7± 9 相较 h后 随着药物浓度增加 各组出现核染色质浓 F 2 T b 差异有统计学意义 P 缩聚集 核碎裂 核边集及发出蓝白色荧光等典型的 凋亡改变 且呈明显浓度依赖性 F E G drh2p 珋± S P up 2h "" P up F E G drh2 m ph y h P mp dw h up 72h S d dbyh h 25 A B μm L C μm L D 5 μm L A w h wp h h p p Rh2诱导人结肠癌 S 细胞调控相关蛋白 表达 Rh 2对 S 细胞凋亡相关蛋白调控 S细胞经 5μm L Rh 2诱导 h 后收集细胞提取总蛋白 W b 进行凋亡相 与对照 关蛋白表达量变化分析 结果显示 F 组相较 抑凋亡蛋白 B 2表达水平逐渐下降 促凋 亡蛋白 B 抑癌蛋白 p 5和激活型 p 表达 水平升高逐渐升高 与对照组比较差异均有统计学 5 此结果提示 Rh 2诱导 S 细 意义 P F 2 E G drh2 pp S d dbyfcm 比例和 p 激活共同参与 Tb E G drh2 p p S Rh 2 L μm C 胞凋亡过程 可能通过 p 5 信号通路破坏 B 2 B Ap p 7 ± 9 5 7± 5 7± 29 5 6± 2 Rh 2对 S 细胞 PI β信 号通路 相 关 蛋 白 调 控 S 细 胞 经 5 L Rh 2诱导 h后收集细胞提取总蛋白 μm W b 进行 PI GS K β信号通路相关 蛋白表达量变化分析 结果显示 F 5 与对照组 相比较 各实验组总 AKT蛋白和总 β蛋白表 P u p 达量基本无变化 与对照组相比较差异无统计学意 2 H h 25染 色 观 察 人 结 肠 癌 细 胞 5 PI K P AKT和 P β蛋白表 义 P S 凋亡形 态 学 改 变 达量呈逐渐减少趋势 与对照组比较差异有统计学 H h 2检 测 结 果 F 显 示 Rh 2处 理 对 照 组 S 细 胞 h 意义 P 5 结果提示 在 Rh 2诱导 S 细

4 中国药理学通报 Ch Ph m Bu 2 7J 7 胞凋亡过程中 PI β信号通路可能发 Rh 2和 LY29 2诱导 S 细胞 PI 挥了重要作用 β信 号 通 路 相 关 蛋 白 表 达 量 变 化 S细胞经 Rh 2 5μm L LY29 2 2 L LY29 2 Rh 2组 诱 导 h后 收 μm 集 提取总蛋白 W b 进行 PI GS K β信号通路相关蛋白表达量变化分析 结果显示 6 与对照组比较 各实验组总 AKT蛋白和总 F β蛋白表达量基本一致 与对照组比较差异 无 统 计 学 意 义 P 5 与 对 照 组 比 较 LY29 2诱导组较 Rh 2诱导组对 PI K P AKT和 P β蛋白的下调作用更明显 且两药联合诱导 后 表现出协同作用 对 S 细胞中 PI K P AKT 和 P β的表达抑制作用较单独用药更加明显 P 5 结果提示 Rh 2诱导细胞凋亡可能是通 过抑制 PI β 信号通路 下调 P AKT 和 P β来实现的 F E G drh2pp p p S d dbyw b A B μm L C μm L D 5μm L P 5 P up F 6 E G drh2 dly29 2 p PI β p S d dbyw b A B Rh 2 5μm L C LY29 2 2μm L D Rh 2 LY2 9 P 5 P u p "" P Rh 2v Rh 2 LY29 2 P 5 P F 5 E G drh2p PI β p S d dbyw b A B μm L C μm L D 5μm L P 5 P up LY2 9 2v Rh 2 LY2 9 2 讨论 结肠癌作为胃肠道常见的恶性肿瘤 近年来 其 2 发病率和致死率呈逐年上升趋势 人参皂苷 Rh

5 118 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2017Jan;33(1) 作为一种中国传统中药人参的主要成分之一, 大量研究表明, 其不仅对正常细胞脂溶性毒性很低, 还具有很高的抗肿瘤活性, 能够有效阻滞肿瘤细胞的细胞周期 诱导凋亡和分化 [8-10], 提高荷瘤机体免疫 [11] 功能, 抑制肿瘤转移等多种作用 有关人参皂苷 Rh2 对结肠癌的增殖抑制和诱导凋亡已有相关文献报道 [12], 但对其调节机制在分子水平层面的报道甚少, 且其调节机制在分子水平也没有彻底阐明 PI3K/AKT 通路是机体内重要信号通路, 通过调节细胞增殖 凋亡作用而参与多种肿瘤发生发展的过程 磷酸化 AKT 通过促进丝氨酸 / 苏氨酸残基底物磷酸化二而发挥抗凋亡的作用, 糖原合成酶激酶 3β(glycogensynthasekinase3β,GSK 3β) 作为细胞内主要的丝氨酸 / 苏氨酸家族激酶, 是 AKT 的重要底物 在多种肿瘤中, 肿瘤抑制因子 p53 可直接与 GSK 3β 结合, 激活的 GSK 3β 能够增加激活型 caspase 3 的表达水平 [13], 这可能会促进凋亡 在结直肠癌细胞系和结直肠肿瘤中,GSK 3β 的表达水平和活化形式均高于正常,PI3K/AKT 信号通路也处于异常活化水平, 磷酸化 GSK 3β 可以抑制促凋亡蛋白 Bax 蛋白线粒体转位和抗凋亡分子 Bcl 2 的降解, 维持线粒体稳定而抑制凋亡 本实验用人参皂苷 Rh2 诱导人结肠癌 SW480 细胞, 通过 CCK 8 FCM 和 Hoechst33258 检测其增殖 凋亡指标, 确定人参皂苷 Rh2 对结肠癌 SW480 细胞具有抑制增殖 促进凋亡的作用 ; 研究结果表明, 人参皂苷 Rh2 能明显抑制人结肠癌 SW480 细胞增殖, 并且呈一定的时间浓度依赖性 Ho echst33258 染色结果显示,SW480 细胞经过人参皂苷 Rh2 诱导 48h 后,SW480 细胞出现了典型的细胞核染色质浓缩聚集, 核碎裂, 并发出较强蓝白色荧光等细胞凋亡特征 FCM 检测结果也证实了 Rh2 能诱导结肠癌 SW480 细胞的早期凋亡, 随着人参皂苷 Rh2 浓度增加,SW40 细胞凋亡率逐渐升高 综上, 人参皂苷 Rh2 可以诱导 SW480 细胞凋亡, 阻止结肠癌的进一步恶化 本实验运用了多个实验方法从多方面验证文献报道 Rh2 对结肠癌细胞抑制增殖, 诱导凋亡的作用, 并且根据实验结果选择出对人结肠癌细胞 SW480 细胞最适 Rh2 药物浓度为 μmoll -1 运用 Westernblot 检测凋亡和 PI3K/AKT/GSK 3β 信号通路相关蛋白的表达, 探究人参皂苷 Rh2 诱导结肠癌 SW480 细胞凋亡可能机制 LY 作为 PI3K/AKT/GSK 3β 信号通路特异性抑制剂, 可以阻断该信号通路的激活 Westernblot 结果显示, 经 Rh2 诱导后的 SW480 细胞抗凋亡蛋白 Bcl 2 表达量下降, 促凋亡蛋白 Bax 抑癌蛋白 p53 和激活型 caspase 3 表达水平升高 ;PI3K/AKT/GSK 3β 信号通路相关蛋白总 AKT 和总 GSK 3β 与对照组比较基本保持一致,PI3K P AKT P GSK 3β 蛋白表达量降低, 并且呈浓度依赖性 经 LY 处理的 SW480 细胞中,PI3K/AKT/GSK 3β 信号通路的激活被阻断 另 LY Rh2 联合用药组与 LY 单独诱导组 Rh2 单独诱导组比较, 可进一步抑制 PI3K/AKT/GSK 3β 信号通路中 P13K p AKT p GSK 3β 蛋白表达 提示 P13K/AKT/GSK 3β 可能不是 Rh2 诱导 SW480 细胞凋亡的唯一通路 综上所述,Rh2 对人结肠癌 SW480 细胞有明显抗肿瘤活性, 其作用机制可能是 Rh2 能够抑制 SW480 细胞中的 P13K/AKT/GSK 3β 的激活, 激活 p53 信号通路, 激活 caspase 3, 破坏 Bcl 2/Bax 比例, 诱导结肠癌细胞 SW480 凋亡 ( 致谢 : 本实验在重庆医科大学干细胞与组织工程研究室完成 衷心感谢组胚平台的所有老师及同学对我的支持与帮助!) 参考文献 : [1] ChenY,LiuZH,XiaJ,etal.20(S) ginsenosiderh2inhibits theproliferationandinducestheapoptosisofkg 1acelsthrough thewnt/beta cateninsignalingpathway[j].oncolrep,2016,36 (1): [2] QianJ,LiJ,JiaJG,etal.Ginsenoside Rh2inhibitsproliferation andinducesapoptosisofhumangastriccancersgc 7901sidepop ulationcels[j].asianpacjcancerprev,2016,17(4): [3] YangZ,ZhaoT,LiuH,etal.GinsenosideRh2inhibitshepato celularcarcinomathroughbeta cateninandautophagy[j].sci Rep,2016,6: [4] 张春晶, 于海涛, 侯金才.S 型与 R 型人参皂苷 Rh2 对人肺癌 A549 细胞增殖和凋亡的影响 [J]. 中国中药杂志,2011,36 (12): [4] ZhangCJ,YuHT,HouJC.Efectof20(s) ginsenosiderh2 and20(r) ginsenosiderh2onproliferationandapoptosisofhu manlungadenocainomaa549cels[j].chinjchinmetermed, 2011,36(12): [5] 盛磊, 郝树芳, 周洁芸, 等. 人参皂苷 Rh2 抑制实验性大鼠子宫异位内膜增殖及其作用机制探讨 [J]. 中国药理学通报, 2013,29(5): [5] ShengL,HaoSF,ZhouJY,etal.GinsenosideRh2inhibits growthofectopicendometriuminratmodelandmechanismofac tion[j].chinpharmecolbul,2013,29(5):

6 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2017Jan;33(1) 119 [6] 李秋影, 颜璐璐, 马晓慧, 等.20(S) 人参皂苷 Rh2 对人结肠癌细胞增殖和周期的影响 [J]. 中成药,2011,33(11): [6] LiQY,YanLL,MaXH,etal.Efectof20(s) ginsenoside Rh2oncelproloferationandcycleofhumancoloncancercels [J].ChinTraditPatMed,2011,33(11): [7] ZhuCL,LiuF,QianW B,etal.Combinedefectofsodiumsel eniteandginsenosiderh2onhct 116humancolorectalcarcino macels[j].archiranmed,2016,19(1):23-9. [8] ChoiS,Kim TW,SinghSV.GinsenosideRh2 mediatedg1 phasecelcyclearestinhumanbreastcancercelsiscausedby p15ink4bandp27kip1 dependentinhibitionofcyclin dependent kinases[j].pharmres,2009,26(10): [9] KimYS,JinSH,LeeYH,etal.Diferentialexpresionofpro teinkinasecsubtypesduringginsenosiderh2 lnducedapoptosis insk N BE(2)andC6Bu 1cels[J].ArchPharmRes,2000,23 (5): [10] ZengXL,TuZG.InductionofdiferentiationbyginsenosideRh2 inhepatocarcinomacelsmmc 7721[J].AiZheng,2004,23 (8): [11] TatsukaM,MaedaM,otaT.Anticarcinogenicefectanden hancementofmetastaticpotentialofbalb/c3t3celsbyginsen osiderh(2)[j].jpnjcancerres,2001,92(11): [12]LiB,ZhaoJ,WangCZ,etal.GinsenosideRh2inducesapopto sisandparaptosis likeceldeathincolorectalcancercelsthrough activationofp53[j].cancerlet,2011,301(2): [13]WatcharasitP,BijurGN,ZmijewskiJW,etal.Direct,activa tinginteractionbetweenglycogensynthasekinase 3betaandp53 afterdnadamage[j].procnatlacadsciusa,2002,99(12): GinsenosideRh2inducedhumancolorectalcancer celapoptosisthroughpi3k/akt/gsk 3βpathway SHIXue ping,lijing,ranjian hua,xiongwei,lihai xing,guopei,chendi long (ChongqingMedicalUniversity,LaboratoryofStemCelsandTisueEnginering, ColegeofBasicMedicine,Chongqing ,China) Abstract:Aim ToinvestigatetheefectofGinsen osiderh2onapoptosisinhumancolorectalcancercel SW480,andtoexploretheposiblemechanism ofit. Methods TheproliferationactivityofSW480treated withginsenosiderh2wasmeasuredcck 8asay.Ap optosisrateswereevaluatedbyfcm.hoechst33258 stainingwasusedtoobservecelnucleusmorphologi cal;changesw480celsweretreatedwithginsenoside Rh2,andtheproteinexpresionsofBcl 2,Bax,p53, cleavedcaspase 3,PI3K,AKT,P AKT,GSK 3β,P GSK 3βweredetectedbyWesternblot;SW480cels weretreatedwithly294002,rh2,ly rh2, theexpresionsofpi3k,akt,p AKT,GSK 3β,P GSK 3βweredetectedbyWesternblot.Results The proliferationofsw480celswassignificantlyinhibited byginsenosiderh2indose dependentandtime de pendentmanner.fcm showedtheinducingapoptosis efectofginsenosiderh2 wassignificantlydiferent fromthatofcontrolgroup.hoechst33258stainingin dicatedclearlycelapoptosisinginsenosiderh2treat mentgroups.westernblotshowedginsenosiderh2 decreasedexpresionofbcl 2,increasedexpresionof Bax,p53andcleavedcaspase 3,PI3K/AKT/GSK 3β pathwayproteinspi3k,p AKT,P GSK 3βdecreased obviously,aktandgsk 3βwerenotchangedsignifi cantlyinsw480.sw480celswereseparatelytreated withly294002,rh2,ly rh2,therewere nosignificantdiferenceinaktandgsk 3βproteina mongalgroups,andtheexpresionofpi3k,p AKT, P GSK 3βdecreasedmoreobviouslyinLY Rh2groupcomparedwithLY294002andRh2alone. Conclusion Rh2inducescolorectalcancercelapop tosisthroughpi3k/akt/gsk 3βpathway,whichac tivatesp53andcleavedcaspase 3,anddestroysthe balanceofbcl 2/Bax. Keywords:GinsenosideRh2;humancolorectalcanc ercelsw480; PI3K/AKT/GSK 3β; p53;bcl 2; Bax;cleavedcaspase 3;apoptosis

12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL

12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL ( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot

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