标题

Size: px

Start display at page:

Download "标题"

失豫储
5 years ago
Views:

1 2017 年 9 月第 27 卷第 9 期中国比较医学杂志 CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE September, 2017 Vol. 27 No. 9 研究报告 mir 143 通过负向调控 Bcl 2 抑制食管癌细胞的增殖胡琛琛, 张莉 ( 湖北省肿瘤医院重症医学科, 武汉 ) 摘要目的探讨 mir 143 通过负向调控 B 淋巴细胞瘤 2( Bcl 2) 抑制食管癌细胞的增殖方法 RT PCR 法检测食管癌细胞 TE 1 EC109 EC9706 KYSE150 KYSE510 SEG 1 及人正常食管上皮细胞 HEEC 中 mir 143 表达, 使用脂质体 Lipofectamine TM 2000 将 mir 143 mimics 和 mir 143 NC 转入 EC9706 细胞中,48 h 后,RT PCR 法检测 mir 143 表达,CCK 8 法检测细胞活力,EdU 染色检测细胞增殖情况, 流式细胞术检测细胞周期,RT PCR 及 Western blot 检测 Bcl 2 蛋白及 mrna 的表达结果 mir 143 在食管癌细胞 TE 1, EC109, EC9706, KYSE150, KYSE510 及 SEG 1 中的表达量 [(1 36 ± 0 13),(1 08 ± 0 10),(0 89 ± 0 09),(0 95 ± 0 09),(1 32 ± 0 14), (0 96 ± 0 11)] 显著低于 mir 143 在人正常食管上皮细胞 HEEC(2 38 ± 0 15) 中的表达量 ( P < 0 01) 与 mir 143 NC 组比较,miR 143 mimics 组 mir 143 表达量显著升高 (P < 0 01), 细胞活力下降 (P < 0 01), 细胞增殖能力降低 (P < 0 01), 细胞周期阻滞在 G1 期 (P < 0 01), 同时 Bcl 2 蛋白及 mrna 表达量显著降低 ( P < 0 01) 结论 mir 143 过表达能通过下调 Bcl 2 表达抑制 EC9706 细胞增殖关键词 mir 143; 食管癌 ;EC9706; 增殖 ;B 淋巴细胞瘤 2,Bcl 2 中图分类号 R 33 文献标识码 A 文章编号 (2017) doi: j. issn Inhibition of proliferation of esophageal cancer cells by mir 143 through negative regulation of Bcl 2 expression HU Chen chen, Zhang Li ( Department of Intensive Care Medicine, Hubei Cancer Hospital, Wuhan , China) Abstract Objective To investigate the effect of mir 143 on proliferation of esophageal cancer cells by negative regulation of B cell lymphoma 2 ( Bcl 2). Methods The expression levels of mir 143 in the esophageal cancer cells TE 1, EC109, EC9706, KYSE150, KYSE510 and SEG 1 and human normal esophageal epithelial cells HEEC were detec ted by RT PCR. mir 143 mimics and mir 143 NC were transfected into EC9706 cells by Lipofectamine TM 2000 After 48 h, the expression levels of mir 143 were detected by RT PCR, the viability and proliferation of the cells were measured using CCK 8 and EdU staining, the cell cycle was analyzed by flow cytometry, and the expression of Bcl 2 protein and mrna was detected by Western blot and RT PCR. Results The expression levels of mir 143 in esophageal cancer cells TE 1, EC109, EC9706, KYSE150, KYSE510 and SEG 1 [(1 36 ± 0 13), (1 08 ± 0 10), (0 89 ± 0 09), (0 95 ± 0 09), (1 32 ± 0 14) and (0 96 ± 0 11)] were significantly lower than that in the human normal esophageal epithelial cells HEEC (2 38 ± 0 15) ( P < 0 01). Compared with the mir 143 NC group, the expression level of mir 143 was significantly increased (P < 0 01), the cell viability and proliferation were decreased ( P < 0 01), the cell cycle was [ 作者简介 ] 胡琛琛 ( ), 女, 医学硕士, 研究方向 : 重症医学 E mail: @ qq. com [ 通讯作者 ] 张莉 ( ), 女, 副主任医师, 医学硕士, 研究方向 : 肿瘤重症 E mail: koshenshen@ sina. com. cn

2 66 中国比较医学杂志 2017 年 9 月第 27 卷第 9 期 Chin J Comp Med, September 2017,Vol. 27 No. 9 arrested in the G1 phase (P < 0 01), and the expression of Bcl 2 protein and mrna was significantly decreased (P < 0 01) in the mir 143 mimics group. Conclusions Over expression of mir 143 can inhibit the proliferation of esophageal cancer EC9706 cells through down regulation of Bcl 2 expression. Key words mir 143; Esophageal cancer; Cell line EC9706; Proliferation; B cell lymphoma 2, Bcl 2 食管癌是消化系统中常见的恶性肿瘤之一, 我国每年约有 15 万人死于食管癌, 占了世界病死率将近 50% [1, 2] 目前食管癌的主要治疗方式为手术放疗化疗相结合, 但是患者一旦确诊基本处于中晚期,5 年生存率不足 20%, 因此寻找有效的能够早期诊断治疗食管癌的生物标志物已成为食管癌等 [1, 肿瘤领域研究的热点 2] mirna 是一类高度保守的非编码 RNA 分子, 能与靶基因 mrna 的 3 非翻译区 (untranslated region,utr) 结合, 进而降解或者抑制靶基因的转录, 从而参与细胞增殖凋亡细 [3, 胞周期等生物学行为的调控 4] 现研究已经显示 mirna 的异常表达与肿瘤的发生发展密切相 [5, 关 6] 同时在食管癌组织及其正常组织中发现多种差异性表达的 mirna,mir 143 就是其中的一种, 且其在其它肿瘤中的作用机制已被深入探讨, 但在食管癌的发生发展的具体作用机制尚未见报 [5 - 道 9] 此外肿瘤细胞呈现无限增殖与凋亡抑制, 并受凋亡相关蛋白调控,Bcl 2 就是其中的一种凋亡抑制蛋白, 且有研究显示 mir 143 能通过下调 Bcl 2 [10, 表达抑制骨肉瘤细胞宫颈癌细胞增殖 11], 因而本研究推测 mir 143 是否也可以通过靶向调控 Bcl 2 进而影响食管癌细胞增殖, 本研究将对此推测展开以下实验研究 1 材料和方法 1 1 细胞株食管癌细胞 TE 1 EC109 EC9706 KYSE150 KYSE510 及 SEG 1 购于中国科学院上海细胞库, 人正常食管上皮细胞 HEEC 购于上海酶研生物科技有限公司 1 2 主要试剂和仪器 mir 143 mimics 和 mir 143 NC 购于上海吉玛制药技术有限公司 ; 兔抗 Bcl 2 单克隆抗体购于美国 Epitomics 公司 ; 胎牛血清,DMEM 培养基购于美国 Gibco 公司 ; 辣根过氧化物酶标记山羊抗兔 IgG ( H + L),BCA 试剂盒,Trizol 法试剂盒,CCK 8 试剂盒, 细胞周期检测试剂盒购自碧云天生物技术有限公司 ;Lipofectamine TM 2000 脂质体, 一步法 RT PCR 试剂盒购自大连宝生生物技术有限公司 ;EdU 细胞增殖试剂盒购自广州市锐博生物科技有限公司 DYCZ 425D 型双垂直电泳仪, DYCZ 40D 型迷你转印电泳仪购于北京六一仪器厂 ;GelDoc XR System 凝胶成像系统购于美国 Bio Rad 公司 ;FAC SCalibur 型流式细胞仪, XC 型酶标仪购于美国 BD 公司 ;AF6000 型荧光显微镜购自德国莱卡公司 1 3 实验方法 RT PCR 法检测细胞中 mir 143 及 Bcl 2 的表达采用 TRIzol 法抽提细胞中总 RNA, 并检测 RNA 纯度, 通过一步法 RT PCR 逆转录 RNA, 扩增产物用于琼脂糖凝胶电泳引物由上海生工生物工程有限公司合成 mir 143 上游引物 : 5 ACACTCC AGCTGGGTGAGATGAAGCACTGTAG 3, 下游引物 : 5 CTCAACTGGTGTCGTGGA 3 ; Bcl 2 上游引物 : 5 CAGCTGCACCTGACGCCCTT 3, 下游引物 :5 GCCTCCGTTATCCTGGATCC 3 ;GAPDH 上游引物 : 5 AGCCACATCGCTCAGACA 3, 下游引物 :5 TG GACTCCACGACGTACT 细胞转染当 EC9706 细胞汇合度达到 50% ~ 70% 左右时候, 利用 Lipofectamine TM 2000 脂质体转染 mir 143 mimics 和 mir 143 NC,6 h 以后换成含 10% 血清的 DMEM 培养基 ;37,CO 2 培养箱培养 48 h 应用 RT PCR 法检测细胞中的 mir CCK 8 法检测 EC9706 细胞活力将个细胞接种于 96 孔板, 分别于 24 h 48 h 72 h 96 h 加入 CCK 8 试剂, 继续培养 4 h 后, 于酶标仪中检测 OD 值, 波长设置为 570 nm, 所测 OD 值即细胞活力 EdU 染色检测细胞增殖将个细胞接种于 96 孔板,48 h 后, 消化收集细胞, 加入含有 EdU 的培养基孵育 2 h,pbs 洗涤后,4% 多聚甲醛固定 30 min 后, 按试剂盒说明书要求分别加入试剂 B C D E 进行孵育, 接着 PBS 洗涤, 最后用 Hoechst33342 染色液室温孵育 30 min, 后 PBS 洗涤, 并于荧光显微镜下进行观察拍照, 最后用 Image J 进行统计分析

3 中国比较医学杂志 2017 年 9 月第 27 卷第 9 期 Chin J Comp Med, September 2017,Vol. 27 No 流式细胞术检测细胞周期将个细胞接种于 6 孔板,48 h 后, 消化收集细胞, 接着根据细胞周期检测试剂盒说明书对细胞进行固定, 染色并于 1 h 内在流式细胞仪中进行检测 Western blot 检测细胞中 Bcl 2 蛋白表达将个细胞接种于 6 孔板,48 h 后, 收集细胞, 并加入适量的细胞裂解液, 裂解 30 min, 离心收集上清液, 即收获总蛋白接着采用 BCA 试剂盒测定蛋白浓度, 蛋白经煮沸变性后上样, 进行十二烷基苯磺酸钠凝胶电泳, 后湿法转膜 30 min 5% 脱脂奶粉室温封闭 1 h, 一抗溶液 ( 兔 Bcl 2 单克隆抗体, 稀释度为 1 100)4 过夜孵育, 次日室温二抗溶液 [ 辣根过氧化物酶标记山羊抗兔 IgG (H + L)] 孵育 1 ~ 2 h, 在凝胶成像系统中曝光, 最后采用 Quan tity One 软件分析各个抗体条带的灰度值荧光素酶报告基因表达分析 mir 143 及 Bcl 2 重组载体共转染到 EC9706 细胞中分组如下 :( mir 143 mimics) + ( pmir Bcl 2 3 UTR Wt),( mir 143 NC) + ( pmir Bcl 2 3 UTR Mut),( mir 143 mimics) + ( pmir Bcl 2 3 UTR Mut),( mir 143 NC) + ( pmir Bcl 2 3 UTR Mut) 应用双荧光素酶检测系统检测转染好的荧光素酶活性, 计算公式 : 相对荧光值 = 萤火虫荧光素酶荧光值 / 海肾荧光素酶荧光值每个实验组三个平行复孔 1 4 统计学方法所有数据均用 SPSS 17 0 统计分析, 用平均数 ± 标准差 ( x ± s ) 表示, 经 t 检验差异显著性, 以 P < 0 05 表示差异有显著性 2 结果 2 1 mir 143 在食管癌及正常食管上皮细胞中的表达如图 1 所示, mir 143 在食管癌细胞 TE 1 EC109 EC9706 KYSE150 KYSE510 及 SEG 1 中的表达量 [(1 36 ± 0 13),(1 08 ± 0 10), (0 89 ± 0 09), ( 0 95 ± 0 09 ), ( 1 32 ± 0 14 ), ( 0 96 ± 0 11)] 显著低于 mir 143 在人正常食管上皮细胞 HEEC(2 38 ± 0 15) 中的表达量, 且差异有显著性 (P < 0 01) 2 2 mir 143 mimics 转染效果的检测如图 2 所示, 与 mir 143 NC 组 (0 76 ± 0 07) 注 : 1 HEEC; 2 TE 1; 3 EC109; 4 EC9706; 5 KYSE150; 6 KYSE510; 7 SEG 1 与 HEEC 比较, P < 0 01 图 1 mir 143 在食管癌细胞及正常食管上皮细胞中的表达 Note. 1 HEEC; 2 TE 1; 3 EC109; 4 EC9706; 5 KYSE150; 6 KYSE510; 7 SEG 1 Compared with HEEC, P < 0 01 Fig. 1 Expression levels of mir 143 in the esophageal cancer cells and normal esophageal epithelial cells 注 : 与 mir 143 NC 组比较, P < 0 01 图 2 mir 143 mimics 转染效果的检测 Note. Compared with the mir 143 NC group, P < 0 01 Fig. 2 Efficiency of transfection of mir 143 mimics 比较,miR 143 mimics 组 (1 56 ± 0 15) 中 mir 143 表达量显著上调, 差异有显著性 (P < 0 01) 2 3 mir 143 mimics 对 EC9706 细胞活力的影响如图 3 所示, 随着转染时间的延长, 与 mir 143 NC 组比较,miR 143 mimics 组细胞活力均显著降低, 差异有显著性 (P < 0 01) 2 4 mir 143 mimics 对 EC9706 细胞增殖的影响如图 4 所示, 与 mir 143 NC 组 ( ± 12 51) 比较,miR 143 mimics 组 (21 74 ± 0 22) 细胞增殖数目显著降低, 差异有显著性 (P < 0 01) 2 5 mir 143 mimics 对 EC9706 细胞周期的影响如图 5 表 1 所示, 与 mir 143 NC 组比较,miR 143 mimics 组细胞周期阻滞在 G1 期 (P < 0 01) 2 6 报告基因分析将 mir 143 mimics mir 143 NC 及野生型载体

６８中国比较医学杂志２０１７年９月第２７卷第９期ＣｈｉｎＪＣｏｍｐＭｅｄＳｅｐｔｅｍｂｅｒ２０１７Ｖｏｌ２７Ｎｏ９来说各组间荧光强度差异无显著性Ｐ００５见图６表１ｍｉｒ１４３ｍｉｍｉｃｓ对ＥＣ９７０６细胞周期的影响ｘ ± ｓＴａｂ１Ｅｆｆｅｃｔｏｆｍｉｒ１４３ｍｉｍｉｃｓｏｎｔｈｅｃｅｌｌｃｙｃｌｅｏｆ

Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｉｒ１４３ＮＣｇｒｏｕｐＰ００１注与ｍｉｒ１４３ＮＣ组比较Ｐ００１图３ｍｉｒ１４３ｍｉｍｉｃｓ对ＥＣ９７０６细胞活力的影响ＮｏｔｅＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｉｒ１４３ＮＣｇｒｏｕｐＰ００１Ｆｉｇ３Ｅｆｆｅｃｔｏｆｍｉｒ１４３ｍｉｍｉｃｓｏｎｔｈｅｖｉａｂｉｌｉｔｙ

4 ６８中国比较医学杂志２０１７年９月第２７卷第９期ＣｈｉｎＪＣｏｍｐＭｅｄＳｅｐｔｅｍｂｅｒ２０１７Ｖｏｌ２７Ｎｏ９来说各组间荧光强度差异无显著性Ｐ００５见图６表１ｍｉｒ１４３ｍｉｍｉｃｓ对ＥＣ９７０６细胞周期的影响ｘ ± ｓＴａｂ１Ｅｆｆｅｃｔｏｆｍｉｒ１４３ｍｉｍｉｃｓｏｎｔｈｅｃｅｌｌｃｙｃｌｅｏｆＥＣ９７０６ｃｅｌｌｓ组别ＧｒｏｕｐｓＧ１期Ｇ１ｐｈａｓｅｍｉｒ１４３ＮＣ５２３８ ± ５２５ｍｉｒ１４３ｍｉｍｉｃｓ６４５７ ± ６２１Ｓ期Ｓｐｈａｓｅ１６７４ ± １７２１２４６ ± １２５Ｇ２期Ｇ２ｐｈａｓｅ３０８８ ± １７２２２９７ ± ２６０注与ｍｉｒ１４３ＮＣ组比较Ｐ００１ＮｏｔｅＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｉｒ１４３ＮＣｇｒｏｕｐＰ００１注与ｍｉｒ１４３ＮＣ组比较Ｐ００１图３ｍｉｒ１４３ｍｉｍｉｃｓ对ＥＣ９７０６细胞活力的影响ＮｏｔｅＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｉｒ１４３ＮＣｇｒｏｕｐＰ００１Ｆｉｇ３Ｅｆｆｅｃｔｏｆｍｉｒ１４３ｍｉｍｉｃｓｏｎｔｈｅｖｉａｂｉｌｉｔｙｏｆＥＣ９７０６ｃｅｌｌｓ注与ｐｍｉｒＢｃｌ２３ＵＴＲＷｔ比较Ｐ００１图６报告基因分析图４ｍｉｒ１４３ｍｉｍｉｃｓ对ＥＣ９７０６细胞增殖的影响２００Ｆｉｇ４Ｅｆｆｅｃｔｏｆｍｉｒ１４３ｍｉｍｉｃｓｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＥＣ９７０６ｃｅｌｌｓＮｏｔｅＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｐｍｉｒＢｃｌ２３ＵＴＲＷｔＰ００１Ｆｉｇ６Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｒｅｐｏｒｔｅｒｇｅｎｅｓ２７ｍｉｒ１４３ｍｉｍｉｃｓ对ＥＣ９７０６细胞中Ｂｃｌ２蛋白及ｍｒｎａ表达的影响如图７所示与ｍｉｒ１４３ＮＣ组比较ｍｉｒ１４３ｍｉｍｉｃｓ组Ｂｃｌ２蛋白及ｍｒｎａ表达量下调Ｐ００１３讨论１９９３年Ａｍｂｒｏｓ等学者在秀丽隐杆线虫中第一次发现了ｍｉｒｎａ即ｌｉｎ４随后又有学者于２０００年在秀丽隐杆线虫中发现了第二个ｍｉｒｎａ即ｌｅｔ７往后的二十几年间学者陆续于脊椎动物植物及病图５ｍｉｒ１４３ｍｉｍｉｃｓ对ＥＣ９７０６细胞周期的影响Ｆｉｇ５Ｅｆｆｅｃｔｏｆｍｉｒ１４３ｍｉｍｉｃｓｏｎｔｈｅｃｅｌｌｃｙｃｌｅｏｆＥＣ９７０６ｃｅｌｌｓｐｍｉｒＢｃｌ２３ＵＴＲＷｔ突变型载体ｐｍｉｒＢｃｌ２３ＵＴＲＭｕｔ转入ＥＣ９７０６细胞中结果发现ｍｉｒ１４３ｍｉｍｉｃｓ与野生型载体ｐｍｉｒＢｃｌ２３ＵＴＲＷｔ共转染组的荧光信号强度明显弱于其它转染组Ｐ００１而对于突变型载体ｐｍｉｒＢｃｌ２３ＵＴＲＭｕｔ毒中发现了上千种的ｍｉｒｎａ在这期间有学者于２００２年发现了ｍｉｒｎａ与肿瘤的关系在慢性淋巴细胞白血病中存在着ｍｉｒ１５与ｍｉｒ１６的表达量下调或者缺失并且这两个ｍｉｒｎａ还与白血病的发生发展密切相关引起了研究者深厚的兴趣并进一步的深入研究ｍｉｒｎａ在肿瘤中的作用机制３４ｍｉｒｎａ在食管癌组织及正常组织中存在着差异性表达ｍｉｒ１４３就是其中的一种ｍｉｒ１４３位于人类染色体５ｑ３２最早被发现于鼠类具有显著的组织

中国比较医学杂志 2017 年 9 月第 27 卷第 9 期 Chin J Comp Med, September 2017,Vol. 27 No. 9 69 Fig. 7 注 : 与 mir 143 NC 组比较, P < 0 01 图 7 mir 143 mimics 对 EC9706 细胞中 Bcl 2 蛋白及 mrna 表达量的影响 Note.

5 中国比较医学杂志 2017 年 9 月第 27 卷第 9 期 Chin J Comp Med, September 2017,Vol. 27 No Fig. 7 注 : 与 mir 143 NC 组比较, P < 0 01 图 7 mir 143 mimics 对 EC9706 细胞中 Bcl 2 蛋白及 mrna 表达量的影响 Note. Compared with the mir 143 NC group, P < 0 01 Effect of mir 143 mimics on the expression of Bcl 2 protein and mrna in EC9706 cells [7] 特异性 Wu 等利用 mirna 微阵列分析方法发现了 mir 143 在食管癌组织及正常组织中存在差异性表达, 进一步用 RT PCR 也证实了 mir 143 在食管鳞状细胞癌患者中的表达量是下调的, 且将稳定表达 mir 143 的质粒转染到食管癌细胞后, 发现细胞迁移能力显著的降低后续 Liu 等 [12] [13],Ni 等也都证实了 mir 143 在食管癌中的低表达同时 mir 143 在其他肿瘤中的具体作用机制已深入报道, 在食管癌中的具体作用还尚未可知 [8, 9], 因此本研究将对此展开讨论本研究首先利用 RT PCR 法检测了 6 株食管癌细胞中 ( TE 1, EC109, EC9706, KYSE150, KYSE510 及 SEG 1) 及 1 株人正常食管上皮细胞 HEEC 中 mir 143 的表达, 结果表明 mir 143 在组织标本中的表达趋势一致, 食管癌细胞中的 mir 143 表达量也显著低于正常食管细胞接着利用脂质体转染 mir 143 NC 和 mir 143 mimics, 转染效果通过 RT PCR 验证, 结果也表明转染成功进一步的利用 CCK 8 及 EdU 染色检测 mir 143 mimics 对 EC9706 食管癌细胞活力及增强情况的影响, 结果表明 mir 143 mimics 能显著的降低 EC9706 细胞活力, 并抑制细胞增殖能力, 与 mir 143 在结直肠癌细胞中的作用效果一致 [8, 9] 说明提高 EC9706 细胞中 mir 143 表达量能显著的抑制细胞的增殖能力另外肿瘤细胞的无限增殖源自于细胞周期的不可控制, 细胞周期关键调控点包括 G1,S 及 G2 期, 且这 3 个调控点是众多肿瘤药物作用于肿瘤细胞的靶点之 [14, 一 15] 因此本研究进一步探讨 mir 143 mimics 对 EC9706 细胞周期的影响, 结果表明 mir 143 mimics 能显著延长 G1 期, 使细胞周期阻滞在 G1 期, 抑制细胞的复制与增殖, 与 mir 143 在肝癌细胞中作用效果一致 [16] 从而说明 mir 143 mimics 能通过阻滞 EC9706 细胞周期于 G1 期, 从而抑制细胞的增殖与活力肿瘤细胞的无限增殖与凋亡抑制受到细胞凋亡蛋白的调控作用, 其中 Bcl 2 家族是最常见的细胞凋亡调控家族 Bcl 2 是研究最为广泛的凋亡抑制蛋白, 是第一个在淋巴细胞中被发现的能抑制细胞凋亡的蛋白, 能与促凋亡蛋白 Bax 形成异二聚体, 进而调控细胞的增殖与凋亡而 mirna 对于细胞生物学行为的调控作用, 主要是通过对其下游靶基因的调控作用实现的 [17], 且已有研究表明 mir 143 能通过下调 Bcl 2 表达抑制骨肉瘤细胞宫颈癌细 [10, 胞增殖 11], 但是否能够此作用机制抑制食管癌细胞的增殖还尚不可知所以本研究首先利用荧光素酶报告基因检测了 mir 143 mimics 对野生型 Bcl 2 载体及突变型 Bcl 2 载体荧光信号的影响, 结果证实只有野生型 Bcl 2 载体的信号减弱, 说明 mir 143 mimics 能够结合于 Bcl 2 的 3 UTR 区域, 进而抑制其表达接着利用 Western blot 及 RT PCR 进一步证实了 mir 143 mimics 能通过下调 Bcl 2 蛋白及 mrna 表达, 从而说明 mir 143 mimics 通过负

6 70 中国比较医学杂志 2017 年 9 月第 27 卷第 9 期 Chin J Comp Med, September 2017,Vol. 27 No. 9 向调控 Bcl 2 表达, 进而使 EC9706 细胞周期阻滞于 G1 期, 并抑制细胞增殖与活力综上所述, mir 143 在 TE 1, EC109, EC9706, KYSE150,KYSE510 及 SEG 1 细胞中的表达量显著低于其在 HEEC 细胞中的表达量, 因此上调 EC9706 细胞中 mir 143 表达量能显著降低 Bcl 2 表达, 进而抑制细胞活力及增殖能力, 并使细胞周期阻滞在 G1 期参考文献 : [ 1 ] 叶韬, 孙苏平. 食管癌术后放射治疗的研究进展 [ J]. 癌症进展, 2012, 10(6): [ 2 ] 李定安, 彭开桂. 食管癌术前同步放化疗的临床研究进展 [J]. 中华全科医学, 2014, 12(9): [ 3 ] Gambari R, Brognara E, Spandidos DA, et al. Targeting oncomirnas and mimicking tumor suppressor mirnas: New trends in the development of mirna therapeutic strategies in on cology (Review) [J]. Int J Oncol, 2016, 49(1): 5-32 [ 4 ] 许文剑, 苏秀兰, 刘明. mirna 与肿瘤关系的研究进展 [J]. 医学综述, 2013, 19(17): [ 5 ] 蔡晓波, 李庆, 郭俊明, 等. MicroRNA 与食管癌的研究进展 [J]. 中国细胞生物学学报, 2013, 35(9): [ 6 ] Sharma P, Sharma R. mirna mrna crosstalk in esophageal cancer: from diagnosis to therapy [ J]. Crit Rev Oncol Hemat, 2015, 96(3): [ 7 ] Wu BL, Xu LY, Du ZP, et al. mirna profile in esophageal squamous cell carcinoma: downregulation of mir 143 and mir 145 [J]. World J Gastroenterol, 2011, 17(1): [ 8 ] Yang F, Xie YQ, Tang SQ, et al. mir 143 regulates prolifera tion and apoptosis of colorectal cancer cells and exhibits altered expression in colorectal cancer tissue [ J]. Int J Clin Exp Med, 2015, 8(9): [ 9 ] Su J, Liang H, Yao W, et al. mir 143 and mir 145 regulate IGF1R to suppress cell proliferation in colorectal cancer [ J]. PLoS One, 2014, 9(12): e [10] Li WH, Wu HJ, Li YX, et al. MicroRNA 143 promotes apopto sis of osteosarcoma cells by caspase 3 activation via targeting Bcl 2 [J]. Biomed Pharmacother, 2016, 80: 8-15 [11] Liu L, Yu X, Guo X, et al. mir 143 is downregulated in cervi cal cancer and promotes apoptosis and inhibits tumor formation by targeting Bcl 2 [J]. Mol Med Rep, 2012, 5(3): [12] Liu R, Liao J, Yang M, et al. The cluster of mir 143 and mir 145 affects the risk for esophageal squamous cell carcinoma through co regulating fascin homolog 1 [ J]. PLoS One, 2012, 7 (3): e33987 [13] Ni Y, Meng L, Wang L, et al. MicroRNA 143 functions as a tumor suppressor in human esophageal squamous cell carcinoma [J]. Gene, 2013, 517(2): [14] Sommariva S, Tarricone R, Lazzeri M, et al. Prognostic value of the cell cycle progression score in patients with prostate cancer: a systematic review and meta analysis [ J]. Eur Urol, 2016, 69 (1): [15] Vermeulen K, Van Bockstaele DR, Berneman ZN. The cell cy cle: a review of regulation, deregulation and therapeutic targets in cancer [J]. Cell Prolif, 2003, 36(3): [16] Liu X, Gong J, Xu B. mir 143 down regulates TLR2 expression in hepatoma cells and inhibits hepatoma cell proliferation and in vasion [ J]. Int J Clin Exp Pathol, 2015, 8 ( 10 ): [17] 龚勇, 谢海龙. 肿瘤中 mirna 异常表达的分子调控机制及研究进展 [ J]. 临床与实验病理学杂志, 2014, 30 ( 10 ): 收稿日期

12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL

12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL ( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot