2018-7中国药理学通报封面

Size: px

Start display at page:

Download "2018-7中国药理学通报封面"

敷蔡
5 years ago
Views:

1 1012 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jul;34(7):1012~9 网络出版时间 : :30 网络出版地址 :htp://kns.cnki.net/kcms/detail/ r html 和厚朴酚抑制结肠癌细胞增殖与骨形态发生蛋白 7 关系的研究刘荣兴 1,2, 胡培 3, 马妍 1,2, 任文艳 1,2, 周林云 1,2, 何百成 1,2 1,2, 孙文娟 (1. 重庆市生物化学与分子药理学重点实验室,2. 重庆医科大学药理学教研室, 重庆 ; 3. 贵州省遵义市妇幼保健院药剂科, 贵州遵义 ) doi: /j.isn 文献标志码 :A 文章编号 : (2018) 中国图书分类号 :R284 1;R329 24;R329 28;R392 11; R341;R 摘要 : 目的研究和厚朴酚 (honokial,hnk) 对人源结肠癌细胞 HCT116 增殖的影响及其可能分子机制方法采用结晶紫染色流式细胞术检测和厚朴酚对 HCT116 细胞增殖和细胞周期的影响 ;Westernblot 分析和厚朴酚对增殖细胞核抗原 (PCNA) 及细胞凋亡指标 Bcl 2 的影响 ;Westernblot 及半定量 PCR 分析和厚朴酚对 HCT116 细胞中内源性骨形态蛋白 7(BMP7) 表达的影响 ; 利用 BMP7 过表达腺病毒及抗体, 通过结晶紫定量和 Westernblot, 分析和厚朴酚联合应用 BMP7 腺病毒与抗体对 HCT116 细胞增殖的影响结果和厚朴酚呈浓度和时间依赖性地抑制 HCT116 细胞增殖诱导细胞凋亡使细胞阻滞于 G 2 期, 并上调 PCNA 的蛋白表达水收稿日期 : , 修回日期 : 基金项目 : 重庆市渝中区科委课题 (No ) 作者简介 : 刘荣兴 (1992-), 男, 硕士生, 研究方向 : 肿瘤与免疫药理学,E mail: @qq.com; 孙文娟 (1961-), 女, 硕士, 副教授, 研究方向 : 肿瘤与免疫药理学, 通讯作者,E mail: @qq.com 平, 下调 Bcl 2 的蛋白表达水平 ; 和厚朴酚可上调 HCT116 细胞中 BMP7 的 mrna 及蛋白表达水平 ; 外源性 BMP7 过表达腺病毒可促进和厚朴酚的增殖抑制和促凋亡作用, 而 BMP7 抗体可抑制此作用结论和厚朴酚能够抑制 HCT116 的增殖并促进凋亡, 其机制可能与上调 BMP7 的表达有关关键词 : 和厚朴酚 ; 结肠癌 ;HCT116 细胞 ; 增殖抑制 ; 凋亡 ; BMP7 和厚朴酚 (honokiol,hnk) 隶属于木兰科落叶乔木植物, 是中药厚朴的最主要的两个活性组分之一 [1] 研究表明, 和厚朴酚不仅具有抗氧化抗病毒中枢性肌肉松弛神经抑制等作用 [2], 还能够抑制肿瘤细胞的生长调控肿瘤血管生成诱导肿瘤细胞分化抑制肿瘤细胞的侵袭转移等, 对前列腺癌结肠癌宫颈癌都具有良好的抗肿瘤效果 [3] 但其具体的分子机制还不十分清楚本实验中, 我们发现, 和厚朴酚可能通过上调骨形态发生蛋白 7(bonemorphogeneticprotein7, BMP7) 的表达来调控其对结肠癌细胞的增殖抑制作用以及促凋亡作用前期研究结果显示, 与正常人

2 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jul;34(7) 1013 源结肠细胞 FHC 相比,BMP7 在 HCT116 细胞中的内源性表达明显升高 [4] 我们的实验结果也表明, 和厚朴酚对人结肠癌细胞 HCT116 的增殖具有明显的抑制作用, 其作用可能与上调 BMP7 的表达有关利用分子生物学技术以及加入 BMP7 过表达腺病毒和抗体来验证, 实验结果显示, 和厚朴酚确实可以通过激活 BMP7 这个靶点来调控肿瘤细胞的增殖与凋亡, 但确切的机制研究还不十分清楚 1 材料 1.1 细胞株人结肠癌细胞 HCT116 和 HEK 293 细胞购自 AmericanTypeCultureColection(ATCC); 1.2 试剂和厚朴酚购自西安昊轩生物科技有限公司 ( 纯度为 99 9%); 实验所用抗体 (BMP7 BCl 2 和 PCNA) 购自 SantaCruzBiotechnology 公司 ; 结晶紫购自北京索莱宝有限公司 ; 凋亡试剂盒购自凯基生物 ; 重组腺病毒所用试剂 ( 穿梭质粒骨架质粒以及 Taq) 购自 TaKaRa 公司 ;GAPDH 与 BMP7 的引物来源于奥科鼎盛生物科技有限公司 1.3 仪器细胞培养箱 (Thermo 公司 ); 细胞培养超净台 ( 安泰技术有限公司 ); 倒置荧光显微镜 ( 日本 Nikon); 低温离心机 (Thermo 公司 ); 湿式转膜仪垂直电泳槽 ( 六一仪器厂 ); 酶标仪凝胶成像系统 (Bio Rad 公司 ) 2 方法 2.1 细胞培养人结肠癌细胞 HCT116 用含 10% FBS 的 DMEM 培养基培养 (100kU L -1 青霉素和 0 1g L -1 链霉素 ) 孵箱条件为 : 恒温 37,CO 2 浓度为 5% 全部实验均采用对数生长期的细胞进行实验 2.2 实验分组实验设计分为实验组与对照组, 实验组加入浓度梯度的和厚朴酚 ( 初始浓度为 10 μmol L -1, 用 DMSO 溶解并稀释 ) 根据处理的最高药物浓度组, 对照组用相同体积的 DMSO 进行处理, 其余组用 DMSO 补齐 2.3 结晶紫染色检测细胞增殖将处于指数生长期的 HCT116 细胞接种于 24 孔板, 待 6 ~8h 细胞贴壁之后, 和厚朴酚不同浓度 ( μmol L -1 ) 处理细胞分别在处理后的 h 进行结晶紫染色方法如下 : 弃去 24 孔板的上层培养基, 用 PBS 洗 2 次每孔加入 0 2mL 0 25% 的结晶紫溶液, 室温下染色 20min 倒掉结晶紫溶液, 用 PBS 小心清洗 3 次, 风干后扫描并进行定量分析 ( 用 20% 的甲醛溶液完全溶解, 并在酶标仪上读数, 波长为 490nm) 每组实验重复 3 次 2.4 流式分析检测细胞周期与凋亡将处于指数生长期的细胞均匀铺于 6 孔板中, 加入和厚朴酚 ( μmol L -1 ),48h 后收集细胞先用 PBS 清洗细胞, 再用不含 EDTA 的胰酶消化, 收集细胞,1000r min -1 离心 5min,PBS 洗涤并离心 2 次, 最后用 70% 乙醇固定 24h 分别加入 Annex in VEGFP 和 PI( 按试剂盒操作进行 ), 流式细胞仪检测增殖当检测凋亡时, 在最后一步, 用 PBS 离心 2 次之后, 用 1mLPBS 重悬, 加入染色试剂, 经流式细胞仪检测每组实验重复 3 次 2.5 总 RNA 的提取和 PCR 实验弃细胞上清液, 用 PBS 清洗细胞 2 次采用 TRIzol 试剂裂解细胞, 并用常规方法提取 RNA, 根据逆转录试剂盒反转录为 cdna 逆转录程序如下 :37 15min,85 5s 所用引物序列如下:GAPDH 上游引物 5 CAA CGAATTTGGCTACAGCA 3, 下游引物 5 AGGGGAG ATTCAGTGTGGTG 3 ;BMP7 上游引物 5 GGCAGG ACTGGATCATCG 3, 下游引物 5 AAGTGGACC AGCGTCTGC 3 每组实验重复 3 次 2.6 Westernblot 实验将处于对数生长期的 HCT116 细胞种于 6 孔板中, 贴壁后按实验设计加入 HNK( μmol L -1 ), 并于 24 48h 提取细胞总蛋白采用 12% 的聚丙烯酰胺凝胶进行电泳, 冰浴转移至 PVDF 膜上按照常规的方法加入一抗与二抗, 采用 ECL 试剂盒显影并成像每组实验重复 3 次 2.7 重组 BMP7 腺病毒构建采用 AdEasy 系统构建 BMP7 腺病毒, 并用绿色荧光标记将目的基因编码序列进行 PCR 扩增并克隆到穿梭质粒中测序后将穿梭质粒线性化, 与骨架质粒重组将重组后得到的质粒线性化, 转染到 HEK 293 细胞中包装, 即得到携带目的基因的重组腺病毒 BMP7 腺病毒用绿色荧光标记, 以 GFP 重组腺病毒 (AdGFP) 作空白对照 2.8 统计学分析实验数据均以 x±s 珋表示实验数据均用 SPSS11 0 进行分析,3 组以上比较宜用方差分析, 再作两两比较 3 结果 3.1 和厚朴酚对 HCT116 细胞增殖的影响结晶紫染色实验结果显示, 和厚朴酚浓度与时间依赖性地抑制 HCT116 细胞的增殖, 并且这种作用在 d3, 和厚朴酚浓度为 2 0μmol L -1 时更加明显 (Fig

分析结果显示随着和厚朴酚浓度与作用时ｎｂ分析结果显示与对照组相比和厚朴酚下间的增加ＨＣＴ１１６细胞中内源性ＢＭＰ７的蛋白及调了Ｂ２蛋白的表达并具有浓度及时间依赖性ｍｒｎａ表达水平也逐渐增加结果提示ＢＭＰ７可Ｆ１ＥＨＮＫｎｐｎｎｄｎｈｃｔ１１６ＡＣ

3 １０１４中国药理学通报ＣｈｎＰｈｍＢｕｎ２０１８Ｊｕ３４７１ＡＢＡｎｎｘｎＶＥＧＦＰＰＩ双染流式分析结果显２ＡＢ流式检测结果与Ｗｎｂ结果一Ｆ示和厚朴酚使ＨＣＴ１１６细胞阻滞在Ｇ２期Ｆ１Ｃ致Ｆ２ＣＤ结果表明和厚朴酚对ＨＣＴ１１６细ＤＷｎｂ结果显示和厚朴酚浓度与时间梯胞凋亡具有促进作用度性地上调了增殖细胞核抗原ｐｎｎｕ３３和厚朴酚对ＨＣＴ１１６细胞中ＢＭＰ７表达的影ｎｎＰＣＮＡ的表达Ｆ１ＥＦ响半定量ＰＣＲＦ３ＡＢ与ＷｎｂＦ３２和厚朴酚对ＨＣＴ１１６细胞凋亡的影响Ｗ３ＣＤ分析结果显示随着和厚朴酚浓度与作用时ｎｂ分析结果显示与对照组相比和厚朴酚下间的增加ＨＣＴ１１６细胞中内源性ＢＭＰ７的蛋白及调了Ｂ２蛋白的表达并具有浓度及时间依赖性ｍｒｎａ表达水平也逐渐增加结果提示ＢＭＰ７可Ｆ１ＥＨＮＫｎｐｎｎｄｎｈｃｔ１１６ＡＣｖｎｎｕｈｗｄｈＨＮＫｎｐｎｎｈｃｔ１１６ＣＦｗｍｎｕｈｗｄｈＨＮＫｎｎｈｃｔ１１６ＥＷｎｂｕｈｗｄｈＨＮＫｎｘｐｎＰＣＮＡｎｈｃｔ１１６ＢＤＦｈｑｕｎｖｄｍＡＣＥｄｍｐｖＰ００５Ｐ００１ｖｎ

中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jul;34(7) 1015 Fig2 EfectofHNK

2inHCT116cels;C:FlowcytometryanalysisresultsshowedtheefectofHNKonapopto

4 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jul;34(7) 1015 Fig2 EfectofHNK onapoptosisofhct116cels A:WesternblotresultsshowedtheefectofHNKonBCl 2inHCT116cels;C:FlowcytometryanalysisresultsshowedtheefectofHNKonapopto sisinhct116cels;b,d:thequantitativediagramofa,cdiagramrespectively. P<0 05, P<0 01vscontrol. Fig3 EfectofHNK onexpresionofendogenousbmp7inhct116cels A:PCRresultsshowedtheefectofHNKonmRNAexpresionofBMP7inHCT116cels;C:WesternblotresultsshowedtheefectofHNKonpro teinexpresionofbmp7inhct116cels;b,d:thequantitativediagramofa,cdiagramrespectively. P<0 05, P<0 01vscontrol.

5 1016 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jul;34(7) 能与和厚朴酚调控 HCT116 细胞增殖凋亡有关 3.4 BMP7 对和厚朴酚抑制 HCT116 细胞增殖和凋亡作用的影响结晶紫定量分析实验显示, 重组腺病毒表达 BMP7(AdBMP7) 成功转染入 HCT116 细胞中后 ( h), 能够增强和厚朴酚的增殖抑制作用 (Fig4A) 流式检测(Fig4B,C) 及 Westernblot (Fig4D,E) 结果显示, 过表达 BMP7 能够增强和厚朴酚所诱导的增殖抑制作用, 以及促进凋亡作用 3.5 BMP7 抗体对和厚朴酚抑制 HCT116 细胞增殖和促进凋亡作用的影响结晶紫定量分析实验显示,BMP7 抗体能够减弱和厚朴酚的增殖抑制作用 (Fig5A) 流式检测(Fig5B,C) 及 Westernblot(Fig 5D,E) 结果显示, 和厚朴酚所诱导的增殖抑制作用以及凋亡促进作用能够被 BMP7 抗体部分翻转结果提示, 和厚朴酚可能通过 BMP7 来调控细胞的增殖凋亡, 这可能成为治疗结肠癌的一个新靶点 Fig4 EfectsofBMP7onanti proliferationand apoptosisinducingactivitiesofhnk inhct116cels A:Quantificationresultsofcrystalvioletstainingshowedthe efectofbmp7onanti proliferationefectofhnkinhct116cels. P<0 05, P<0 01vscontrolgroup;B:Flowcytometryanaly sisresultsshowedtheefectsofbmp7onapoptosisinducedbyhnk inhct116cels;d:westernblotasayresultsshowedtheefectof BMP7onexpresionofBcl 2 andpcna,afectedbyhnk in HCT116cels;C,E:thequantitativediagram ofb,ddiagram re spectively(1:gfp;2:bmp7;3:hnk;4:hnk+bmp7).

中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jul;34(7) 1017 Fig5 EfectsofBMP7onanti proliferationand apoptosisinducingactivitiesofhnk inhct116cels

P<0 05, P<0 01vscontrolgroup;B:Flowcytometryanalysis resultsshowedtheefectsofanti BMP7onapoptosisinducedbyHNKin HCT116cels;D:Westernblotasayresultsshowedtheefectofanti BMP7onexpresionofBcl

6 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jul;34(7) 1017 Fig5 EfectsofBMP7onanti proliferationand apoptosisinducingactivitiesofhnk inhct116cels A:Quantificationresultsofcrystalvioletstainingshowedtheefect ofanti BMP7 onanti proliferationefectofhnk inhct116 cels. P<0 05, P<0 01vscontrolgroup;B:Flowcytometryanalysis resultsshowedtheefectsofanti BMP7onapoptosisinducedbyHNKin HCT116cels;D:Westernblotasayresultsshowedtheefectofanti BMP7onexpresionofBcl 2andPCNA,afectedbyHNKinHCT116 cels;c,e:thequantitativediagram(1:gfp;2:anti BMP7;3:HNK;4: HNK+anti BMP7)ofB,Ddiagramrespectively. 3.6 BMP7 过表达腺病毒及其抗体对和厚朴酚促进 BMP7 表达的影响 Westernblot 结果显示, 加入外源性 BMP7 过表达腺病毒, 能够协同和厚朴酚的作用, 促进 BMP7 的表达, 在 48h 协同作用最为明显 (Fig6A,B); 另一方面, 加入 BMP7 抗体能够减弱此作用, 降低 BMP7 的表达 (Fig6C,D) 4 讨论结肠癌属于消化系统恶性肿瘤, 具有较高的发病率和死亡率据报道, 全球每年约有 50 万患者死于结肠癌 [5] 在我国的恶性肿瘤死亡率中, 结肠癌的死亡率居第 3 位, 仅次于肝癌和肺癌 [6] 研究表明, 结肠癌的发生与饮食习惯肥胖和基因突变有关 [7] 在结肠癌细胞中, 基因突变可引起细胞增殖凋亡和信号传导异常, 这些异常信号包括 p53 Wnt/ β catenin BMP/Smad TGF β PI3K/Akt 等, 从而对肿瘤细胞的增殖失去调控能力, 导致肿瘤的发生发展 [8] 和厚朴酚具有广泛的药理作用, 抑制肿瘤细胞

1018 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jul;34(7) Fig6 EfectsofHNK combinedwithadbmp7/anti BMP7onexpresionofBMP7inHCT116cels

BMP7onlevelofBMP7inHCT116cels;B,D:thequantitativediagramofA,Cdiagramrespectively. P<0 05, P<0 01vscon trol.

7 1018 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jul;34(7) Fig6 EfectsofHNK combinedwithadbmp7/anti BMP7onexpresionofBMP7inHCT116cels A:WesternblotasayresultsshowedtheefectofHNKandBMP7onlevelofBMP7inHCT116cels;C:Westernblotasayresultsshowedtheefect ofhnkandanti BMP7onlevelofBMP7inHCT116cels;B,D:thequantitativediagramofA,Cdiagramrespectively. P<0 05, P<0 01vscon trol. [9] 增殖是其最具有前景的特点之一 Chen 等报道, 在人结肠癌 RKO 细胞中, 和厚朴酚能抑制 VEGF 基因转录与蛋白的表达, 降解 HIF α 活性, 抑制肿瘤血 [10] 管生成, 降低实体瘤的生长率 Li 等报道, 和厚朴酚双重阻断上皮 - 间质转化 (EMT) 和抑制肿瘤干细胞的生成, 抑制肾癌细胞 (RCC) 的转移由此可见, 和厚朴酚在抗肿瘤的各个方面都具有较大的潜力骨形态蛋白 (BMPs) 属于转化生长因子 β(tgf β) 超家族, 他们不仅在成骨中发挥重要作用, 而且还能调控肿瘤细胞的增殖凋亡侵袭转移分化等 [11] 已有文献报道,BMP 信号通路异常涉及多种肿瘤的发生, 如结肠癌骨肉瘤等 BMP7 是 BMPs 成员, 也被称为成骨蛋白 (OP 1) BMP7 由于其明显的成骨活性, 临床上已经被批准用于脊柱外科的治疗越来越多的证据表明,BMP7 也参与了肿瘤 [12] 的发生发展 Motoyama 等研究报道, 在大多数的结直肠癌患者中,BMP7 在癌组织中的表达明显高于癌旁组织, 并且表达的强度与肿瘤侵袭的深度密切相关因此,BMP7 基因表达可作为一个非常有用的预后指标本研究结果表明, 和厚朴酚能够明显抑制结肠癌细胞 HCT116 的增殖, 诱导细胞阻滞在 G 2 期, 促进细胞凋亡, 其作用可能与 BMP7 有关另有相关研究显示, 和厚朴酚对总的 Smad1/5/8 和磷酸化的 Smad1/5/8 水平无明显影响 [13], 提示 BMP7 介导该抗癌效果可能是通过非经典的 BMP 信号通路, 但细节机制仍不清楚本课题组还将利用其他的结肠癌细胞来分析验证和厚朴酚抑制细胞生长与 BMP7 的关系, 并初步阐明其调控机制, 为和厚朴酚更好地应用于临床提供理论和实验基础 ( 本实验是在重庆市生物化学与分子药理学重点实验室完成, 感谢各位老师和同学对本实验的指导及帮助 ) 参考文献 : [1] 杨爽, 刘晓岩, 胡振宇, 等. 和厚朴酚通过抑制脑 MPTP 开放和调节 PARP 1 活性保护全脑缺血的作用研究 [J]. 中国药理学通报,2012,28(2): [1] YangS,LiuXY,HuZY,etal.Honokiolprotectsbrainagainst globalbrainischemiainmicethroughinhibitingmptpopeningand PARP 1activity[J].ChinPharmacolBul,2012,28(2):218-

8 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jul;34(7) [2] 王冬娥, 陆羡. 和厚朴酚的药理作用及其抗肿瘤的机制研究进展 [J]. 医学综述,2009,15(11): [2] WangDE,LuX.Researchprogresonthepharmacologicalfunc tionandtheantitumormechanismofhonokiol[j].medrecapitu late,2009,15(11): [3] SunQL,ZhaoCP,WangTY,etal.Expresionprofileanalysisof longnon codingrnaasociatedwithvincristineresistanceincolon cancercelsbynext generationsequencing[j].gene,2015,572 (1): [4] RenCM,LiY,ChenQZ,etal.Oridonininhibitstheproliferation ofhumancoloncancercelsbyupregulatingbmp7toactivatep38 MAPK[J].OncolRep,2016,35(5): [5] TáragaLópezPJ,AlberoJS,Rodríguez MontesJA.Primaryand secondarypreventionofcolorectalcancer[j].clinmedinsights Gastroenterol,2014,74: [6] MehraviB,AhmadiM,AmanlouM,etal.Celularup takeandim agingstudiesofglycosylatedsilicananoprob(gsn)inhumanco lonadenocarcinoma(ht29celline)[j].intjnanomedicine, 2013,8(10): [7] DuanL,YeL,WuR,etal.Inactivationofthephosphatidylinositol 3 kinase/aktpathwayisinvolvedinbmp9 mediatedtumor sup presiveefectsingastriccancercels[j].jcelbiochem,2015, 116(6): [8] 袁霜雪, 王东旭, 伍秋香, 等. 白藜芦醇抑制 HCT116 结肠癌细胞增殖与 Wnt/β catenin 的关系研究 [J]. 中国药理学通报, 2015,31(4): [8] YuanSX,WangDX,WuQX,etal.Studyontherelationship betweentheanti proliferationefectofresveratrolonhct116colon cancercelsandwnt/β catenin[j].chinpharmacolbul,2015, 31(4): [9] ChenF,WangT,WuYF,etal.Honokiol:apotentchemotherapy candidateforhumancolorectalcarcinoma[j].worldjgastroen terol,2004,10(23): [10] LiW,WangQ,SuQ,etal.Honokiolsuppresesrenalcancercels 'metastasisviadual blockingepithelial mesenchymaltransitionand cancerstemcelpropertiesthroughmodulatingmir 141/ZEB2sig naling[j].molcels,2014,37(5): [11] KamiyaN,YeL,KobayashiT,etal.DisruptionofBMPsignaling inosteoblaststhroughtypeiareceptor(bmpria)increasesbone mas[j].jboneminerres,2008,23(12): [12] MotoyamaK,TanakaF,KosakaY,etal.Clinicalsignificanceof BMP7inhumancolorectalcancer[J].AnnSurgOncol,2008,15 (5): [13] LiuRX,RenWY,MaY,etal.BMP7mediatestheanticancer efectofhonokiolbyupregulatingp53inhct116cels[j].intj Oncol,2017,51(3): InhibitorygrowthefectofhonokiolandBMP7inhumancoloncancercels LIURong xing 1,2,HUPei 3,MAYan 1,2,RENWen yan 1,2,ZHOULin yun 1,2,HEBai cheng 1,2,SUNWen juan 1,2 (1.ChongqingKeyLabofBiochemistryandMolecularPharmcology,Chongqing ,China; 2.DeptofPharmcology,PharmacySchoolofChongqingMedicalUniversity,Chongqing ,China; 3.DeptofPharmacy,ZunyiMaternalandChildHealthCareHospitalofGuizhou,ZunyiGuizhou ,China) Abstract:Aim Toinvestigatetheanti proliferation efectofhonokialonhumancoloncancercelshct116 andtheposiblemechanism.methods Crystalstai ningandflowcytometryasaywereintroducedtotest theproliferationinhibitoryandcelcyclearestedefect ofhonokialonhct116cels.westernblotwasusedto analysetheexpresionofpcnaandinductionefectof apoptosis.westernblotandpcrasaywereconducted toasesthechangeofbmp7.viaexogenousadenovi rusesofbmp7anditsantibodycombinedwithhonoki al,crystalvioletstainingandwesternblotwereusedto analysetheefectonhct116cels.results Honoki alinhibitedthegrowthofhct116inatime andcon centration dependentway,inducedapoptosisandares tedatg 2 phase;westernblotasayshowedhonokial up regulatedthelevelofpcnaandbmp7,anddown regulatedtheexpresionofbcl 2;Westernblotresult alsoshowedthatexogenousadenovirusesofbmp7en hancedtheefectofhonokialonproliferationinhibition and apoptosis,while BMP7 antibody reversed such efectsofhonokial.conclusion Honokialcaninhibit the proliferation and induce apoptosis on HCT116 cels,whichmaybemediatedbytheup regulationof BMP7. Keywords:honokiol;coloncancer;HCT116cels; anti proliferation;apoptosis;bmp7

2018-5中国药理学通报封面

2018-5中国药理学通报封面 632 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2018May;34(5):632~9 网络出版时间 :2018-4-129:12 网络出版地址 :htp://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.r.20180411.1033.020.html 白藜芦醇抑制人结肠癌细胞增殖与骨形态发生蛋白 7 的关系研究朱茄慧 1,2, 曾于桦 1,2,