2018-7中国药理学通报封面

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老鸡交柏
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1 934 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jul;34(7):934~9 网络出版时间 : :30 网络出版地址 :htp://kns.cnki.net/kcms/detail/ r html 汉防己甲素衍生物 HL 27 对 BLM 解旋酶生物学特性的影响张望明 1, 葛章文 2, 晏文涛 1, 潘卫东 3, 焦彦朝 4 5,6, 刘杰麟 (1. 贵阳中医学院第一附属医院检验科, 贵州贵阳 ;2. 贵州省人民医院检验科, 贵州贵阳 ;3. 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室, 贵州贵阳 ;4. 贵州出入境检验检疫局综合技术中心, 贵州贵阳 ; 5. 贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心, 贵州贵阳 ;6. 贵州医科大学免疫学教研室, 贵州贵阳 ) doi: /j.isn 文献标志码 :A 文章编号 : (2018) 中国图书分类号 :R284 1;R342 3;R345 89;R979 1 摘要 : 目的研究汉防己甲素衍生物 HL 27 对 BLM 解旋酶生物学特性的影响方法利用荧光偏振技术研究汉防己甲素衍生物 HL 27 对 BLM 解旋酶 DNA 结合活性解链活性的影响 ; 利用孔雀绿 - 磷钼酸铵比色法研究汉防己甲素衍生物 HL 27 对 BLM 解旋酶 ATPase 活性的影响 ; 利用紫外吸收光谱法研究汉防己甲素衍生物 HL 27 对 BLM 解旋酶构象的影响结果当 HL 27 浓度达到 33 34μmol L -1 时, 其对 dsdna 或 sdna 与 BLM 解旋酶结合活性的抑制率分别为 41 35% 59 54%; 当 HL 27 浓度达到 50μmol L -1 时, 其对 BLM 解旋酶解链活性的抑制率为 78 68%; 当 HL 27 的浓度为 100μmol L -1 时, 其对 BLM 解旋酶 ATPase 活性的抑制率为 43 8% 结论汉防己甲素衍生物 HL 27 可以抑制 BLM 解旋酶的 DNA 结合活性解链活性与 ATPase 活性关键词 :BLM 解旋酶 ;HL 27; 荧光偏振 ; 结合活性 ; 解链活性 ;ATPase 活性 RecQ 解旋酶家族是解旋酶第二大超家族中最保守的一个家族,RecQ 解旋酶家族在各种生物体遗传稳定性的维持中发挥着非常重要的作用 [1] Re cq 解旋酶家族成员均具有相同的保守区, 分别为解旋功能区 RecQ C 功能区 HRDC 功能区人体内存在着 RecQl BLM WRN RecQ4 和 RecQ5 共 5 种 RecQ 解旋酶, 其中 3 种编码基因 BLM WRN RE CQ4 缺陷将会导致人类相应疾病的发生, 分别为 Bloom 综合征 Wemer 综合征 Rothmund Thomson 综收稿日期 : , 修回日期 : 基金项目 : 国家自然科学基金资助项目 (No ); 贵州省科技合作计划资助项目 (No 黔科合 LH 字 [2015]7282 号 ) 作者简介 : 张望明 (1986-), 男, 硕士, 主管检验师, 研究方向 : 肿瘤生物治疗,E mail: @qq.com; 刘杰麟 (1963-), 男, 博士, 教授, 研究方向 : 肿瘤生物治疗, 通讯作者,E mail:liujlin63@yahoo.com 合征这些疾病的患者存在易患癌症的共同特征, Bloom 综合征患者表现为一系列癌症的高发病率在细胞周期中,RecQ 解旋酶参与了复制重组和修复等 DNA 代谢过程, 而染色体数目和结构的改变是肿瘤细胞的一种非常重要的细胞遗传学表现 RE CQ1 的功能除了参与对基因调控, 它也有助于肿瘤的发生和发展, 也就是说它可以通过调控关键基因的表达来促进肿瘤细胞迁移和侵袭沉默 RecQ1 的基因表达可以明显减少肿瘤细胞的增殖迁移和侵袭 [2] [3] Sanada 等研究发现,RecQ1 在生长迅速的乳腺癌细胞中呈高表达,RecQ1 sirna 干扰后能抑制乳腺癌细胞生长人 BLM 解旋酶表达在许多种淋巴细胞和上皮细胞来源的肿瘤中, 在 BLM 表达活性和细胞增殖之间存在很强的关联性, 在肿瘤中, BLM 表达水平高于正常组织 [4-5] 在食道鳞癌细胞中,BLM 表达上调了倍 [6] 因此, 以 BLM 解旋酶作为靶标来筛选抗肿瘤药物为癌症的治疗提供了新思路近年来, 利用 RecQ 解旋酶活性抑制模型筛选具有潜在抗癌作用的小分子物质的研究已有报道, [7] Monika 等发现,NSC19630(1- 丙氧基甲基马来 [8] 酰亚胺 ) 可以抑制 WRN 解旋酶活性段丽霞等发现, 丙酸睾酮对大肠杆菌 RecQ 解旋酶活性有抑制作用文献记载, 双苄基异喹啉生物碱类具有抗肿瘤作用, 现已作为候选抗癌药物进行研究开发汉防己甲素属于双苄基异喹啉生物碱类, 且临床观察表明, 此药毒性低副作用小, 无其它抗肿瘤药物 [9] 引起的骨髓抑制作用周林云等发现, 汉防己甲素对乳腺癌 MCF 7 细胞增殖具有抑制作用另有研究发现, 汉防己甲素能够抑制结肠癌细胞的增殖 [10-11] 本实验运用荧光偏振自由磷检测紫外光谱等技术, 研究汉防己甲素衍生物 HL 27 对 BLM 解旋酶生物学特性的影响, 对阐明汉防己甲素衍生物 HL 27 与 BLM 解旋酶作用的分子机制具有一定意义, 为该小分子物质进行抗癌研究奠定基础

2 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jul;34(7) 材料与方法 1.1 药物与试剂汉防己甲素衍生物 HL 27: 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室潘卫东研究员提供 ;45nt 单链 DNA(singlestrandedDNA,sD NA):5 AATCCGTCGAGCAGAGTTAGGTTAGGTTAG GTTAGTTTTTTTTTT 3 ) 和用荧光素标记的 21nt 单链 DNA(3 FAM TTAGGCAGCTCGTCTCAATCC 5 ) 由北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司合成, 两条互补 sdna 在缓冲液 (20mmol L -1 Tris 100mmol L -1 NaCl,pH 7 9) 中等量混合, 经 85 水浴 5 min, 缓慢冷却至室温, 复性后的双链 DNA(double strandeddna,dsdna) 用作检测 BLM 解旋酶 DNA 结合活性和解链活性的底物 ; 重组大肠杆菌 pet 15b BLM BL21 CodonPlus, 法国巴黎第十一大学居里研究所奚绪光主任研究员馈赠实验所用化学试剂均为分析纯, 整个实验过程所用超纯水由 Mili Q 超纯水系统制备 1.2 仪器 AKTApurifier100 蛋白质分离纯化系统 ( 美国 GEHealthcare 公司 );VCX 500 超声波破碎仪 ( 美国 SONICS 公司 );Synergy4 多功能酶标仪 ( 美国 BIO TEK 公司 );Beacon2000 荧光偏振仪 ( 美国 PanVera 公司 );UV 3600 紫外可见分光光度计 ( 日本 SHIMADZU 公司 );Mili Q 超纯水系统 ( 美国 MiliporeCorp 公司 ) 1.3 方法 BLM 解旋酶的表达纯化将重组大肠杆菌 pet-15b-blm BL21 CodonPlus 接种于 LB 培养基 ( 含 50mg L -1 氨苄青霉素 +30mg L -1 氯霉素 ),37 190r min -1 培养至 OD 600 值达到 0 5~ r min -1 条件下经 0 4 mmol L -1 IPTG 诱导 BLM 解旋酶表达 20h, 然后 r min -1 离心 20min, 收集菌体超声破碎, r min -1 离心 40min, 收集上清液, 再经镍离子亲和层析柱和凝胶过滤层析柱分离纯化, 获得可用于开展酶生物学特性研究的重组 BLM 解旋酶 HL 27 对 BLM 解旋酶 DNA 结合活性影响的检测利用荧光偏振法测定 HL 27 对 DNA 与 BLM 解旋酶结合活性的影响取终浓度为 2 nmol L -1 的荧光素标记 DNA[dsDNA 或 sdna(21 nt)] 于反应缓冲液 (20mmol L -1 Tris 25mmol L -1 NaCl 3mmol L -1 MgCl 2 0 1mmol L -1 DTT, ph7 9) 中, 置于荧光偏振仪中检测荧光偏振值至稳定 ; 然后加入不同终浓度 (0~33 34μmol L -1 ) 的 HL 27, 测定荧光偏振值至稳定 ; 再加入终浓度为 500nmol L -1 的 BLM 解旋酶使 DNA 底物饱和, 测定荧光偏振值至稳定记录各反应体系的荧光偏振值本实验中通过调节 ddh 2 O 的体积, 使反应体系的总体积保持在 150μL 实验数据都经过 3 次重复实验确定无误 HL 27 对 BLM 解旋酶解链活性影响的检测利用荧光偏振法测定 HL 27 对 BLM 解旋酶解链活性的影响取终浓度为 2nmol L -1 荧光标记 dsdna 于反应缓冲液 (20mmol L -1 Tris 25 mmol L -1 NaCl 3mmol L -1 MgCl 2 0 1mmol L -1 DTT,pH7 9) 中, 置于荧光偏振仪中检测荧光偏振值至稳定 ; 将终浓度为 500nmol L -1 的 BLM 解旋酶与不同终浓度 (0~50μmol L -1 ) 的 HL 27 混匀, 室温孵育 5min, 加入测定管中, 测定荧光偏振值至稳定 ; 再加入终浓度为 0 2mmol L -1 的 ATP, 测定荧光偏振值至稳定记录荧光偏振值实验中通过调节 ddh 2 O 的体积, 保持反应体系总体积为 150μL 实验数据都经过 3 次重复实验确定无误 HL 27 对 BLM 解旋酶 ATPase 活性影响的检测利用孔雀绿 - 磷钼酸铵比色法检测 HL 27 对 BLM 解旋酶 ATPase 活性的影响取终浓度为 125nmol L -1 的 BLM 解旋酶终浓度为 100 nmol L -1 的 sdna(45nt) 和不同终浓度 (0~100 μmol L -1 ) 的 HL 27 于反应缓冲液 (50mmol L -1 三乙醇胺 50mmol L -1 KCl 20mmol L -1 MgCl 2, ph7 5) 中作为反应底物, 室温下孵育 10min; 然后加入终浓度为 2mmol L -1 的 ATP, 室温下孵育 20 min 实验中通过调节 ddh 2 O 的体积, 保持反应体系总体积为 75μL 取出上一步反应混合液 50μL, 迅速加入到 850μL 染液中以终止 ATP 水解反应,1 min 后, 再加入 100μL34% 的柠檬酸溶液以终止显色反应处理完毕后, 各吸取 100μL 转入 96 孔板, 于 660nm 波长处 3 次读值实验数据都经过 3 次重复实验确定无误采用国际单位定义表示酶量的多少, 即每分钟催化 1μmol 底物水解所需的酶量为 1 个国际单位 (unit) 其酶活力 Aactivity(kU L -1 ) 可由以下方程式计算得出 :Aactivity= 3A 10B 式中,A 是根据标准曲线得出的磷酸盐浓度 (μmol L -1 );B 是反应时间 (min) 相对 ATPase 活力 =BLM 解旋酶经过处理后的 ATPase 活力 / 未经处理的 ATPase 活力 100% HL 27 对 BLM 解旋酶紫外光谱影响的检测保持 BLM 解旋酶终浓度为 500nmol L -1 与不同终浓度 (0~50μmol L -1 ) 的 HL 27 置于

3 936 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jul;34(7) Tris HCl 缓冲液 (ph7 9) 中, 维持反应体系总体积为 3mL 置于紫外分光光度计测量室中, 设定扫描波长间隔为 0 5nm, 扫描速度为中等速度, 于 220~ 380nm 波段下进行波段扫描, 每 3min 扫描 1 次直至平衡根据峰形和峰位的变化即可判定蛋白质的构象是否发生变化 [12] 再用同样的方法扫描不同终浓度 (0~50μmol L -1 ) 的 HL 27 在缓冲液中的紫外吸收光谱 2 结果 2.1 HL 27 对 BLM 解旋酶 DNA 结合活性的影响通过 Fig1A 1C 可知,HL 27 能够与 dsd NA 或 sdna(21nt) 结合并形成复合物通过 Fig 1B 1D 可知,HL 27 作用于 dsdna 或 sdna(21nt) 后可以抑制其与 BLM 解旋酶的结合当 HL 27 浓度达到 33 34μmol L -1 时,HL 27 对 dsdna 或 s DNA(21nt) 与 BLM 解旋酶结合活性的抑制率分别达到 41 35% 59 54% HL 27 对 sdna(21nt) 与 BLM 解旋酶结合活性的抑制要强于其对 dsdna 与 BLM 解旋酶结合活性的抑制 2.2 HL 27 对 BLM 解旋酶解链活性的影响通过 Fig2A 2B 可知,HL 27 可以强烈抑制 BLM 解旋酶的解链活性当 HL 27 浓度达到 50μmol L -1 时,HL 27 对 BLM 解旋酶解链活性的抑制率为 78 68% 由 Fig2B 还可知,HL 27 对 BLM 解旋酶的解链速率亦有抑制作用 2.3 HL 27 对 BLM 解旋酶 ATPase 活性的影响当 HL 27 的浓度达到 100μmol L -1 时,HL 27 对 BLM 解旋酶 ATPase 活性的抑制率为 43 8% (Fig3) 2.4 HL 27 对 BLM 解旋酶紫外光谱的影响通过 Fig4B 4C 4D 可知,BLM 解旋酶与 HL 27 作用后, 在 237nm 和 277nm 两波长处所产生的紫外光吸收值明显高于 HL 27 BLM 解旋酶在 237nm 和 277nm 两波长处的紫外光吸收值之和 (BLM 解旋 Fig1 EfectsofHL 27onDNA bindingactivityofblm helicase A:EfectsofHL 27ondsDNAandthefluorescenceanisotrophyofcomplexesformedbyBLMbindingHL 27 dsdna;b:efectsofhl 27ontheds DNA bindingactivityofblm helicase;c:efectsofhl 27on sdna(21nt)andthefluorescenceanisotrophyofcomplexesformedbyblmbindinghl 27 sdna(21nt);d:efectsofhl 27onthe sdna(21nt) bindingactivityofblmhelicase.a 0 isthefluorescenceanisotrophyofdnabindinghl 27;A 1 isthefluorescenceanisotrophyofcomplexesformedbyblm bindingdnaandhl 27.

4 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jul;34(7) 937 Fig2 EfectsofHL 27onunwindingactivityofBLM helicase A:TheefectsofHL 27ontheunwindingactivityofBLMhelicase;B:Theefectsof6.67,26.67and50μmol L -1 HL 27ontheunwindingtime curveofblm helicase.a 1 isthefluorescenceanisotrophyofblmbindingdnaandhl 27;A 2 isthefluorescenceanisotrophyaftertheadditionof0 2 mmol L -1 ATP. Fig3 EfectsofHL 27onATPaseactivityofBLM helicase 酶的生色基团被翻转到极性较大的区域 [12] ) 通过 Fig4A 可知, 随着 HL 27 浓度的增加,BLM 解旋酶与 HL 27 作用后 237nm 与 277nm 波长处所产生的紫外吸收峰值不断增大综合以上结果可知,HL 27 可以与 BLM 解旋酶结合, 并使其构象发生改变 3 讨论 RecQ 解旋酶在 DNA 的复制转录修复重组以及端粒的维持等细胞代谢过程中都发挥着非常重要的作用 [13] 解旋酶的生化活性是其能够发挥这些重要功能的基础, 解旋酶与 dsdna 结合是其发挥解链功能的第一步, 在与 DNA 结合后解旋酶具有 DNA 依赖的 ATP 酶活性, 能水解 ATP 产生能量, 在此基础上解旋酶将 dsdna 解开荧光偏振技术是本课题研究中所用到的最为重要的技术 Weber [14-15] 发明了第一台荧光偏振仪 [16] 器 Dandliker 等将荧光偏振技术应用到生物系统中, 如抗原 - 抗体反应激素 - 受体反应 Joley [17] 等将荧光偏振法应用于治疗药物的监测目前, 荧光偏振技术被广泛应用于荧光免疫分析药物筛选测定蛋白质 - 核酸及蛋白质 - 蛋白质的相互作用等领域荧光偏振技术应用于该研究, 能够实时跟踪检测药物分子与 DNA 的相互作用 DNA 与药物分子作用后对 BLM 解旋酶结合 DNA 的影响, 以及药物对 BLM 解旋酶解开 dsdna 的影响本研究发现, 汉防己甲素衍生物 HL 27 与荧光素标记的 sdna dsdna 均能发生结合 HL 27 结合 DNA 后对 DNA 结构进行修饰, 从而影响 BLM 解旋酶与之结合当 HL 27 浓度为 33 34μmol L -1 时, 其对 BLM 解旋酶结合 dsdna 活性的抑制率为 41 35%, 而对 BLM 解旋酶结合 sdna 活性的抑制率达 59 54% 说明 HL 27 对 BLM 解旋酶结合 s DNA 的抑制作用要强于 dsdna BLM 解旋酶的 ATPase 活性依赖于其结合 DNA 的能力 [18], 因此, 我们检测了 HL 27 对 BLM 解旋酶 ATPase 活性的影响结果发现,HL 27 对 BLM 解旋酶的 ATPase 活性有较强的抑制作用, 这与其抑制 BLM 解旋酶结合 DNA 活性是相符的 BLM 解旋酶依赖其 ATPase 活性水解 ATP 为其解链 DNA 提供能量 [19], 本研究发现,HL 27 对 BLM 解旋酶的 DNA 解链活性亦有较强的抑制作用, 这与其对 BLM 解旋酶 ATPase 活性的抑制亦是相符的本实验通过研究 HL 27 对 BLM 解旋酶的紫外吸收光谱的影响发现,HL 27 能与 BLM 解旋酶结合并使其构象发生改变 HL 27 对 BLM 解旋酶构象变化的影响在 HL 27 浓度为 0 1μmol L -1 时就很

９３８ＣＰｍＢ８Ｊ３４７Ｆ４ＥＨＬ７ｍＢＬＭＡＥＨＬ７ｍＢＬＭｍＬＢＥＨＬ７ μｍＬｍＢＬＭｍＬＣＥＨＬ７μｍＬｍＬＤＥＨＬ７ μｍＬｍＢＬＭｍＬｍＢＬＭ明显这与其对ＢＬＭ解旋酶活性的抑制浓度范围存在较大差异原因可能是ＨＬ７在较低的浓度下ＪＭＳＲｙｍＪＭＪＨｍ

5 ９３８ＣＰｍＢ８Ｊ３４７Ｆ４ＥＨＬ７ｍＢＬＭＡＥＨＬ７ｍＢＬＭｍＬＢＥＨＬ７ μｍＬｍＢＬＭｍＬＣＥＨＬ７μｍＬｍＬＤＥＨＬ７ μｍＬｍＢＬＭｍＬｍＢＬＭ明显这与其对ＢＬＭ解旋酶活性的抑制浓度范围存在较大差异原因可能是ＨＬ７在较低的浓度下ＪＭＳＲｙｍＪＭＪＨｍＲＥＣＱＡＧｍＧ５５９３３虽可使ＢＬＭ解旋酶构象发生一定程度的改变但还３ＳＳＦｍｋＴＡＲＥＣＱＬＤＮＡ不足以引起ＢＬＭ解旋酶活性的变化当ＨＬ７达ｍｋ到较高浓度时ＨＬ７通过较大程度地改变ＢＬＭ解ＰＬＳＯ３８８７８旋酶的构象才使得其结合ＤＮＡ活性被抑制进而４ＴｙｈＷＬＣｍＭＴｘ抑制其ＡＴＰ活性与解链活性综上所述本实验研究了汉防己甲素衍生物ＨＬＢｍｙｍｍＢＪＣ８５６５ｍ５ＷＸＢＨＬＨＰｘＢＬＭ７对ＢＬＭ解旋酶生物学特性的影响对阐明其与ｙｍｍＪＨＢＬＭ解旋酶的作用机制具有一定意义为下一步应ｚＵＳＴＭＳ８８４６８用该小分子物质进行抗癌研究奠定了一定的理论基础６ＹＷＳＪＨＲｚＣＪＩｑｘｑｍｍＢＭＣＲＮ５７３致谢本实验在贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心完成感谢对实验给予帮助的老师和同学８６７５６５５７３７ＡｗＭＳｍｍＪＡＳｍｋＲＨＩｙｙｍｍｍＷｙｍＤＮＡｍＷＲＮ参考文献ＣＤＬＰＶＯｋＰＬＨｍＲＱＤＮＡｍＡＲＢｍ４８３５９５ＰＮＡＳ８４５５３８段丽霞许厚强陈祥等丙酸睾酮对大肠杆菌ＲＱ解７４旋酶结构和功能的影响

6 ChinesePharmacologicalBuletin 2018Jul;34(7) [8] DuanLX,XuHQ,ChenX,etal.Efectsoftestosteronepropio nateonthestructureandfunctionofe.colirecq helicase[j]. ChinPharmacolBul,2011,27(4): [9] 周林云, 任文艳, 廖云鹏, 等.IGFBP-5 及 p53 与汉防己甲素抑制乳腺癌 MCF-7 细胞增殖的关系研究 [J].,2018,34(1): [9] ZhouLY,RenW Y,LiaoYP,etal.Studyonrelationshipbe tweenigfbp 5/p53axisandanti proliferationefectoftetrandrine inmcf 7cels[J].ChinPharmacolBul,2018,34(1): [10] 王东旭, 袁霜雪, 伍秋香, 等. 胰岛素样生长因子结合蛋白 5 与汉防己甲素抑制人结肠癌细胞增殖的关系研究 [J].,2015,31(10): [10] WangDX,YuanSX,WuQX,etal.Studyontherelationship betweeninsulin likegrowthfactorbindingprotein5andtheanti proliferationefectoftetrandrineinhumancoloncancercels[j]. ChinPharmacolBul,2015,31(10): [11] 任文艳, 陈前昭, 周林云, 等. 汉防已甲素抑制人结肠癌细胞增殖与 TGF 1 的关联机制研究 [J].,2017, 33(9): [11] RenW Y,ChenQZ,ZhouLY,etal.Studyontherelationship betweentheanti proliferationefectoftetrandrineandtgf β1in humancoloncancercels[j].chinpharmacolbul,2017,33 (9): [12] 张根成, 范苏. 光谱法研究铬 (Ⅵ) 与血红蛋白的相互作用 [J]. 无机化学学报,2009,25(7): [12]ZhangGC,FanS.Interactionbetweenchromium(Ⅵ)andhemo globin:spectroscopicapproach[j].chinjinorgchem,2009,25 (7): [13]BohrVA.RisingfromtheRecQ age:theroleofhumanrecqhe licasesingenomemaintenance[j].trendsbiochemsci,2008,33 (12): [14] WeberG.Polarizationofthefluorescenceofmacromolecules.Ⅰ. Theoryandexperimentalmethod[J].Biochem J,1952,51(2): [15] WeberG.Polarizationofthefluorescenceofmacromolecules.Ⅱ. Fluorescentconjugatesofovalbuminandbovineserum albumin [J].BiochemJ,1952,51(2): [16]DandlikerW B,FeigenGA.Quantificationoftheantigen anti bodyreactionbythepolarizationoffluorescence[j].biochembio physrescommun,1961,26(5): [17]JoleyME,StroupeSD,WangCH,etal.Fluorescencepolariza tionimmunoasay.i.monitoringaminoglycosideantibioticsinser umandplasma[j].clinchem,1981,27(7): [18]RoychowdhuryA,SzymanskiM R,JezewskaM J,etal.Mecha nismofntphydrolysisbytheescherichiacoliprimaryreplicative helicasednabprotein.Ⅱ.nucleotideandnucleicacidspecifici ties[j].biochemistry,2009,48(29): [19]WaksmanG,LankaE,CarazoJM.Helicasesasnucleicacidun windingmachines[j].natstructbiol,2000,7(1):20-2. EfectsofbisbenzylisoquinolinealkaloidtetrandrinederivativeHL 27 onbiologicalpropertiesofblm helicase ZHANGWang ming 1,GEZhang wen 2,YANWen tao 1,PANWei dong 3,JIAOYan chao 4,LIUJie lin 5,6 (1.LaboftheFirstAfiliatedHospitalofGuiyangColegeofTraditionalChineseMedicine,Guiyang ,China; 2.LabofGuizhouProvincialPeople shospital,guiyang ,China;3.KeyLabofChemistryforNaturalProducts ofguizhouprovinceandchineseacademyofsciences,guiyang ,China;4.GuizhouInspectionandQuarantine TechnologyCenter,Guiyang ,China;5.LabofTisueEngineringandStemCel,GuizhouMedicalUniversity, Guiyang550004,China;6.DeptofImmunology,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang ,China) Abstract:Aim Toinvestigatetheefectsofbisbenzyl isoquinolinealkaloidtetrandrinederivativehl 27on thebiologicalpropertiesoftheblm helicase. Methods Fluorescence polarization technique was usedtoinvestigatetheefectsofbisbenzylisoquinoline alkaloidtetrandrinederivativehl 27ontheDNAbind ingactivityandunwindingactivityoftheblm helicase.malachitegreen phosphateammoniummolyb datecolorimetrywasusedtoinvestigatetheefectsof HL 27ontheATPaseactivityoftheBLM heli case.ultravioletspectralscanningwasusedtoinvesti gatetheefectsofhl 27ontheconformationofthe BLM helicase.results Whentheconcentra tionofhl 27reached33 34μmol L -1,theinhibi tionratioofdsdnaand sdnabindingactivityofthe BLM helicasewas41 35% and59 54%,re spectively.whentheconcentrationofhl 27reached 50μmol L -1,theinhibitionratioofDNAunwinding activity ofthe BLM helicase was78 68%. WhentheconcentrationofHL 27reached100μmol L -1,theinhibition ratioofatpaseactivityofthe BLM helicasewas43 8%.Conclusion The DNAbindingactivity,ATPaseactivityandunwinding activityoftheblm helicasecanbeinhibitedby bisbenzylisoquinoline alkaloid tetrandrine derivative HL 27. Keywords:BLM helicase;hl 27;fluorescence polarization;bindingactivity;unwindingactivity;at Paseactivity

7 北京大学学报医学版 # +94* 4 ' % 论著!! "# $ #% %"&!%'!! $ "( )& * $ +,-.)/ ) 01 " * ). " 2")3 )01 ( /" 433% /1 " 0 "51 " -.)/$ 6',)") 4.))%) 0

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