538 中国药理学通报 ChinesePharmacologicaluletin 2015pr;31(4) 然结肠癌的诊断和治疗方法已有较大的发展, 但目前结肠癌的治疗效果仍不理想, 面临的挑战主要包括传统化疗药物的细胞毒性及结肠癌细胞的转移 [6] Wnt/β catenin 信号异常活化是结肠癌

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钮贺何
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1 ChinesePharmacologicaluletin 2015pr;31(4):537~ 网络出版时间 : :41 网络出版地址 :htp:// 白藜芦醇抑制 HCT116 结肠癌细胞增殖与 Wnt/β catenin 的关系研究袁霜雪 1,2, 王东旭 1,2, 伍秋香 1,2, 陈前昭 1,2, 李洋 1,2, 曾于桦 1,2, 邵英 1,2, 黄军 1,2, 刘映孜 1,2 1,2, 何百成 (1 重庆市生物化学与分子药理学重点实验室,2 重庆医科大学药理学教研室, 重庆 ) doi: /j.isn 文献标志码 : 文章编号 : (2015) 中国图书分类号 :R 332;R329 24;R329 25;R ; R977 6 摘要 : 目的研究白藜芦醇 (resveratrol,res) 对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及可能的分子机制方法采用结晶紫染色和 Westernblot 分析 Res 对 HCT116 细胞增殖的抑制作用 ; 应用流式细胞术和 Westernblot 分析 Res 对 HCT116 细胞凋亡的促进作用 ; 利用 TCF4/LEF 萤光素酶报告质粒检测 Res 对 Wnt/β catenin 信号转导的影响采用 Westernblot 和 PCR 分析 Res 对 HCT116 细胞内 β catenin 表达水平的影响结果与对照组相比,Res 能抑制 HCT116 细胞增殖, 下调 PCN 蛋白水平 ; 流式细胞术和 Westernblot 检测结果均显示,Res 能明显促进 HCT116 细胞凋亡 ; 报告质粒分析结果收稿日期 : , 修回日期 : 基金项目 : 国家自然科学基金资助项目 (No ) 作者简介 : 袁霜雪 (1987-), 女, 硕士生, 研究方向 : 分子药理学,E mail: @qq.com; 何百成 (1972-), 男, 博士, 教授, 研究方向 : 分子药理学和干细胞生物学, 通讯作者,E mail:hebaicheng99@ ya hoo.com (1 0μmol L -1 )group.lindicatorsweredetected. Results fterhuvecswereincubatedwithmedia containing33mmol L -1 ofglucosefor48h,theno levelsweresignificantlydecreasedwhileet 1levels weresignificantlyelevated,showingasignificantdifer encebetweenirgroupandcontrolgroup(p<0 01). TheexpresionlevelsofPPRγmRNanditsprotein weresomewhatup regulated,buttherewasnosignifi cantdiferencebetweenirgroupandcontrolgroup(p >0 05).WhentheHUVECsinIRgroupweretreated withdmem containingglucose(33mmol L -1 )for 48handinsulinfor30min,theexpresionlevelsof PPRγmRNanditsproteininCapgroupsweresimi lartothoseintheirgroup,andtherewasnosignifi cantdiferencebetweenthetwogroups(p>0 05); however, the expresion levels ofphosphorylated 显示,Res 呈浓度依赖性降低 TCF4/LEF 报告质粒萤光素酶活性 (Res 为 20μmol L -1 时,P<0 05;Res 为 40 或 80μmol L -1 时,P<0.01);Westernblot 和 PCR 分析结果显示,Res 不仅明显降低 HCT116 细胞中 β catenin 的蛋白水平, 同时也下调 β cateninmrn 的表达水平结论 Res 能抑制 HCT116 细胞增殖并促进凋亡, 其机制可能至少与 Res 下调 β cateninmrn 表达, 抑制 Wnt/β catenin 信号转导有关关键词 : 白藜芦醇 ; 结肠癌 ; 增殖抑制 ; 凋亡 ;TCF4/LEF;Wnt/ β catenin 白藜芦醇 (resveratrol,res) 又名芪三酚, 是一种天然多酚类物质, 主要来源于葡萄虎杖花生桑葚等植物 [1-2] Res 作为一种抗氧剂, 临床可用于动脉粥样硬化冠心病缺血性心脏病和高血脂等疾病的防治 [3-4] 近年研究表明,Res 对多种肿瘤细胞具有增殖抑制和促进凋亡作用, 如肺癌肝癌乳腺癌和结肠癌细胞但具体机制目前仍不十分清楚结肠癌是一种常见的消化系统恶性肿瘤, 死亡率仅次于肺癌和肝癌, 严重危害人类的健康 [5] 虽 PPRγproteininCapgroupswereincreasedcompared withirgroup(p<0 05).ThelevelsofNOweresig nificantlyincreasedwhereasthelevelsofet 1were decreasedincapgroups,whichhadsignificantdifer encescomparedwithirgroup(p<0 05).Nonethe les,pre treatingwithgw9662,apprγinhibitor, theimprovementefectsofcapweremarkedlyabol ished.conclusions Captoprilcouldimprovehigh glucose inducedinsulinresistanceofendothelialcels mediatedbypprγ,andtheunderlyingmechanisms arerelatedtotheactivationofpprγ,ratherthanits expresion. Keywords:captopril;highglucose;humanumbilical veinendothelium cels; insulin resistance; PPRγ; NO;ET 1

2 538 中国药理学通报 ChinesePharmacologicaluletin 2015pr;31(4) 然结肠癌的诊断和治疗方法已有较大的发展, 但目前结肠癌的治疗效果仍不理想, 面临的挑战主要包括传统化疗药物的细胞毒性及结肠癌细胞的转移 [6] Wnt/β catenin 信号异常活化是结肠癌发生的重要原因之一 [7] 在结肠癌细胞中, 由于 β cate nin 或 PC 突变, 导致 β catenin 不能被降解结果引起 β catenin 在胞质内大量聚积并转位入核, 与相应的转录因子 ( 如 TCF4/LEF) 结合促进下游某些原癌基因表达, 导致肿瘤发生 [7] 文献报道,Res 能抑制结肠癌细胞增殖并促进凋亡, 这种作用可能与 Res 调节 Wnt/β catenin 信号转导有关 [8], 但 Res 对 Wnt/β catenin 信号转导的具体调节机制仍不清楚本研究通过检测 Res 对 HCT116 细胞增殖和凋亡的影响, 并分析 Res 的这种作用是否与其抑制 Wnt/β catenin 信号转导有关 ; 最后分析 Res 调控 Wnt/β catenin 信号转导的可能机制本研究为将 Res 作为抗肿瘤药物或辅助抗肿瘤药物治疗结肠癌提供新的理论与实验基础 1 材料及方法 1.1 试剂及细胞培养人结肠癌细胞 HCT116 细胞购自 mericantypeculturecolection(tcc) 白藜芦醇购自西安昊轩生物科技有限公司实验所用抗体均购自 SantaCruziotechnology 公司 Lipo fectamine 购自 Invitrogen 公司 HCT116 细胞采用 DMEM 培养基 ( 高糖 ) 培养细胞 ( 含 10% 胎牛血清 10 5 U L -1 青霉素和 0 1g L -1 链霉素 ), 培养条件为 5% 的 CO 2 及实验设计及分组将 HCT116 细胞分为对照组和实验组用 DMSO 溶解 Res, 实验组用不同浓度的 Res 处理 ( 及 100μmol L -1 ), 对照组用相同体积 DMSO 处理 1.3 结晶紫染检测细胞增殖将细胞铺于 24 孔板, 用不同浓度 Res( μmol L -1 ) 处理分别在处理后和 72h 进行结晶紫染色 [9], 检测细胞增殖情况方法如下 : 弃培养基, 用 PS 小心清洗孔板一次每孔加 500μL 结晶紫饱和溶液, 在室温下孵育 20min 移去结晶紫染液, 用 PS 小心清洗 3 次室温下将孔板晾干后扫描每组实验重复 3 次 1.4 流式分析检测细胞凋亡将处于指数生长期的细胞铺于 6 孔板中, 待其贴壁后按实验设计加入不同浓度 Res( μmol L -1 ) 24h 后收集细胞, 先用 PS(4 ) 清洗, 然后分别用 nnexin VEGFP 和处理细胞 ( 按试剂盒操作说明进行 ); 最后通过流式细胞仪进行凋亡检测每组实验重复 3 次 1.5 萤光素酶报告质粒检测 Wnt/β catenin 信号转导活性将处于指数生长状态的细胞铺于 T25 培养瓶中待细胞贴壁后, 用 lipofectamine 转染 TCF4/LEF 报告质粒 (ptop Luc)3μg,4h 后换液 12h 后将细胞消化并重新种于 24 孔板中, 待细胞贴壁后按实验设计加入不同浓度 Res( μmol L -1 ) 进行处理 24h 后, 裂解细胞, 收集裂解液, 并按照试剂盒操作说明进行萤光素酶活性测定用 C 法测定裂解液总蛋白浓度 ( 用以校正萤光素酶活性 ) 每组实验重复 3 次, 结果取平均值 1.6 Westernblot 实验将处于指数生长期的细胞种于 6 孔板中, 按实验设计加入不同浓度的 Res ( μmol L -1 ), 并于相应时间点提取各组总蛋白采用 10% 的聚丙烯酰胺凝胶进行电泳, 按常规操作方法进行 Westernblot 实验最后采用 ECL 试剂盒显影并成像每组实验重复 3 次 1.7 RN 提取及 RT PCR 实验 RT PCR 实验按如下步骤进行 : 将细胞铺于 T25 培养瓶中, 按实验设计加入不同浓度的 Res( μmol L -1 ), 并用含 1% 胎牛血清的完全培养基培养细胞 TRIzol 法提取总 RN, 通过逆转录反应制备 cdn, 然后进行 PCR 检测目的基因 mrn 表达水平所用引物如下 : 上游引物 5 CCGTTTGGCT CGC 3, 下游引物 5 GGGGGTTCGTGTG GTG 3 ;β catenin 上游引物 5 CTGC GGGGTC CTCTGTG 3, 下游引物 5 TGCTTGTCGCC CCC 3 每组实验重复 3 次 1.8 统计学分析实验数据以 x±s 珋表示,t test 进行组间比较 2 结果 2.1 Res 对 HCT116 细胞增殖的影响本研究首先分析 Res 对 HCT116 细胞的增殖影响结晶紫染色分析结果显示 (Fig1), 与对照组相比,Res 处理组 HCT116 细胞的增殖明显呈浓度依赖性抑制, 并且这种作用随着药物作用时间延长而增强 ;Res 在 40μmol L -1 时已能明显抑制 HCT116 细胞生长 Westernblot 分析结果显示,Res 对增殖细胞核抗原 (proliferatingcelnuclearantigen,pcn) 表达也具有明显抑制作用 (Fig1) 以上结果提示,Res 能抑制 HCT116 增殖 2.2 Res 对 HCT116 细胞凋亡的影响诱导肿瘤细胞凋亡是抗肿瘤药物的重要特点之一 Western blot 分析结果显示 (Fig2),Res 不同浓度处理组 Caspase 3 蛋白水平明显高于对照组, 并呈浓度依赖性增加,Caspase 3 蛋白水平在 48h 升高更明显

ChinesePharmacologicaluletin 2015pr;31(4) 539 24 h 48 h 72 h 20 40 60 80 100 癌的重要发病原因之一因此, 抑制 Wnt/β catenin

Wnt/β catenin 信号转导具有抑制作用 PCN Fig1 EfectofResonproliferationinHCT116cels :Crystalvioletstainingresultsshowedtheanti

Relative reporter activity/% 120 100 80 60 40 20 * ** ** nnexin VEGFP/ 双染流式分析结果显示 (Fig 2), 与对照组相比,Res 处理组凋亡细胞比例明显随药物浓度增加而升高

42 20 μmol L -1 12.03 83.46 80 μmol L -1 78.

HCT116cels;:Flowcytometryanalysisresultsshowedtheefectof ResonapoptosisinHCT116cels. 2.

58 48 h 0-1 Res/ μmol L Fig3 EfectofResonWnt/β cateninsignal transductioninhct116cels

4 Res 对 HCT116 细胞中 β catenin 表达的影响 β catenin 在 Wnt/β catenin 信号转导过程中具有重要作用 Westernblot 分析结果显示, 与对照组相比,Res 处理组 β catenin

3 ChinesePharmacologicaluletin 2015pr;31(4) h 48 h 72 h 癌的重要发病原因之一因此, 抑制 Wnt/β catenin 信号是抑制结肠癌细胞生长的重要靶点之一萤光素酶报告质粒分析结果显示, 与对照组相比,Res 对 TCF4/LEF 报告质粒的转录活性具有明显抑制作用 (Fig3), 并且这种抑制作用呈浓度依赖性增加结果提示,Res 对 HCT116 细胞的 Wnt/β catenin 信号转导具有抑制作用 PCN Fig1 EfectofResonproliferationinHCT116cels :Crystalvioletstainingresultsshowedtheanti proliferationefect ofresinhct116cels;:westernblotresultsshowedtheefectofres ontheproteinlevelofpcninhct116cels. Relative reporter activity/% * ** ** nnexin VEGFP/ 双染流式分析结果显示 (Fig 2), 与对照组相比,Res 处理组凋亡细胞比例明显随药物浓度增加而升高结果提示, Res 对 HCT116 细胞凋亡具有促进作用 Caspase μmol L h μmol L μmol L Fig2 EfectofResonapoptosisinHCT116cels :WesternblotresultsshowedtheefectofResonCaspase 3in HCT116cels;:Flowcytometryanalysisresultsshowedtheefectof ResonapoptosisinHCT116cels. 2.3 Res 对 HCT116 细胞中 Wnt/β catenin 信号转导的影响 Wnt/β catenin 信号异常激活是结肠 h 0-1 Res/ μmol L Fig3 EfectofResonWnt/β cateninsignal transductioninhct116cels LuciferasereporterasayresultsshowedtheefectofResonWnt/β cateninsignaltransductioninhct116cels. P<0 05, P<0 01vs control 2.4 Res 对 HCT116 细胞中 β catenin 表达的影响 β catenin 在 Wnt/β catenin 信号转导过程中具有重要作用 Westernblot 分析结果显示, 与对照组相比,Res 处理组 β catenin 蛋白水平明显呈浓度依赖性下降 (Fig4) 由于 HCT116 细胞中存在 β cate nin 突变而无法被降解复合物降解, 所以 Res 对 β catenin 蛋白水平的降低可能与 β cateninmrn 表达降低有关进一步 PCR 分析结果显示, 与对照组相比,Res 处理 HCT116 细胞后能明显降低 β cate nin 的 mrn 表达水平 (Fig4) 结果提示,Res 对 HCT116 细胞中 Wnt/β catenin 信号转导的抑制作用很可能与其下调 β catenin 的 mrn 表达有关 3 讨论结肠癌是一种常见的消化系统恶性肿瘤, 其发病率和致死率均较高, 仅次于肝癌肺癌及胃癌, 对人类健康的危害很大, 每年全球约有 50 万患者死于结肠癌 [6] 目前虽然对结肠癌的诊断和治疗水平都有了较大提高, 但结肠癌的预后仍不乐观植物药来源的有效单体成份在各种肿瘤的治疗中发挥着重要作用 [10-11] 本研究表明,Res 对人结肠癌 HCT116 细胞的增殖具有明显抑制作用, 并能促进

540 中国药理学通报 ChinesePharmacologicaluletin 2015pr;31(4) β-catenin β-catenin Fig4 EfectofResonβ catenininhct116cels :WesternblotresultsshowedtheefectofResonthelevelofβ

凋亡 ; 这种作用可能与 Res 通过下调 β cateninmr N 表达, 抑制 Wnt/β catenin 信号转导有关研究表明, 大部分结肠癌发病与遗传因素无关 [12],Wnt 信号的异常激活是结肠癌发生的重要原因之一 [7] 该信号参与个体胚胎发育及正常生理功能调节, 分为经典 Wnt 信号通路和非经典 Wnt 信号通路在经典 Wnt 信号通路中,β catenin

4 540 中国药理学通报 ChinesePharmacologicaluletin 2015pr;31(4) β-catenin β-catenin Fig4 EfectofResonβ catenininhct116cels :WesternblotresultsshowedtheefectofResonthelevelofβ catenininhct116cels;:pcrresultsshowedtheefectofresonthe expresionofβ catenininhct116cels. 凋亡 ; 这种作用可能与 Res 通过下调 β cateninmr N 表达, 抑制 Wnt/β catenin 信号转导有关研究表明, 大部分结肠癌发病与遗传因素无关 [12],Wnt 信号的异常激活是结肠癌发生的重要原因之一 [7] 该信号参与个体胚胎发育及正常生理功能调节, 分为经典 Wnt 信号通路和非经典 Wnt 信号通路在经典 Wnt 信号通路中,β catenin 对信号转导起着中枢作用 ; 非经典 Wnt 信号通路包括细胞极性及钙依赖性信号, 和经典 Wnt 信号一样与肿瘤的发生密切相关 [7,13-14] 在经典 Wnt 信号通路中, Wnt 配体与细胞膜上的卷曲蛋白 (Frizled/FZD, Wnt 的受体 ) 结合, 使 β catenin 降解复合物 xin PC GSK3β 无法形成, 从而使 β catenin 降解受到抑制而在胞内聚集, 最后转位入核, 与相应的转录因子 ( 如 T celfactor4/lymphoid enhancerfactor, TCF4/LEF) 结合形成复合物, 调节下游靶基因表达反之, 当 Wnt 受体未与 Wnt 配体结合时, 胞内 β catenin 降解复合物形成, 促进 β catenin 降解, 抑制 Wnt 信号转导文献报道, 经典 Wnt/β catenin 信号异常活化可能与调节 β catenin 蛋白水平的重要因子发生突变有关, 如 PC 突变 [7,14] 因此,β cate nin 成为治疗结肠癌药物的重要靶点之一白藜芦醇 (Res) 是一种天然多酚类物质, 主要来源于葡萄虎杖花生桑葚等植物近年研究表明,Res 能抑制多种肿瘤细胞增殖和促进凋亡, 如肺癌肝癌乳腺癌和结肠癌等这种作用可能与 Res 抑制 Wnt/β catenin 信号转导有关, 但具体机制仍不十分清楚 [8] 本研究通过结晶紫染色发现,Res 能够明显抑制人结肠癌细胞的增殖 (Fig1) PCN 是细胞增殖启动的重要调节因子, 其蛋白水平可以反映细胞的增殖状态本研究分析表明,Res 也能明显降低 HCT116 细胞中的 PCN 蛋白水平 (Fig 1), 进一步证实 Res 能抑制结肠癌细胞增殖半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 (cysteine asparticproteases, Caspase) 属于半胱氨酸蛋白水解酶类, 在细胞的凋亡坏死及炎症反应中具有重要作用其中, Caspase 8 和 Caspase 9 被认为是凋亡的启动者, 而 caspase 3 是凋亡的执行者另外, 在凋亡的早期, 处于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸翻向外侧 nnex inv 是一种磷脂结合蛋白, 与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力, 可与细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸结合, 是检测细胞早期凋亡的特异性指标本研究结果显示,Res 能明显增强 Caspase 3 蛋白水平 (Fig2), 流式分析结果也显示 Res 处理后 nnexinv 阳性细胞比例明显增加 (Fig2) 以上结果表明,Res 不仅能抑制 HCT116 细胞增殖, 也能促进 HCT116 细胞凋亡由于经典 Wnt/β catenin 信号异常活化是结肠癌的重要发病原因之一 [7], 所以本研究利用 TCF4/ LEF 萤光素酶报告质粒 (ptop Luc) 分析 Res 对 Wnt/β catenin 信号的影响实验结果显示,Res 能明显抑制 TCF4/LEF 报告质粒的转录活性 (Fig3) 这一结果提示 Res 对 Wnt/β catenin 信号转导具有抑制作用进一步分析发现,Res 能明显降低 HCT116 细胞内的 β catenin 蛋白水平 (Fig4) 由于 HCT116 细胞中 β catenin 本身存在突变, 已形成的降解复合物无法加速 β catenin 降解因此, 在这些肿瘤细胞中,β catenin 能在胞质内聚积并转位入核, 持续激活 Wnt/β catenin 信号 [15] 由此, 我们推测,Res 降低 β catenin 的蛋白水平可能与抑制 β cateninmrn 表达有关 PCR 分析结果显示,Res 对 β cateninmrn 表达具有明显抑制作用 (Fig4) 以上结果表明,Res 能通过下调 β cateninmrn 表达实现对 Wnt/β catenin 信号转导的抑制, 但 Res 对 β cateninmrn 表达调控的具体机制仍不清楚本研究结果表明,Res 能抑制结肠癌细胞增殖, 这种作用与抑制 Wnt/β catenin 信号转导有关 ;Res 在结肠癌细胞中抑制 Wnt/β catenin 信号转导可能通过下调 β cateninmrn 表达实现但是,Res 对 β cateninmrn 表达调控的详细机制还有待进一步研究课题组将利用其他结肠癌细胞株, 进一步确认 Res 抑制结肠癌细胞生长与 Wnt/β catenin 的关系 ; 深入分析 Res 对 β catenin 表达调控的可能机制, 为将 Res 用于对结肠癌的临床治疗提供理论和实验基础

5 ChinesePharmacologicaluletin 2015pr;31(4) 541 参考文献 : [1] aurj,sinclaird.therapeuticpotentialofresveratrol:the invivoevidence[j].natrevdrugdiscov,2006,5(6): [2] WangKH,LaiYH,ChangJC,etal.Germinationofpeanut kernelstoenhanceresveratrolbiosynthesisandpreparesproutsasa functionalvegetable[j].jgricfoodchem,2005,53(2): [3] TamakiN,CristinaOrihuela CamposR,InagakiY,etal.Res veratrolimprovesoxidativestresandpreventstheprogresionof periodontitisviatheactivationofthesirt1/mpk andthenrf2/ antioxidantdefensepathwaysinaratperiodontitismodel[j].fre RadiciolMed,2014,75: [4] TomaykoEJ,CachiaJ,ChungHR,etal.Resveratrolsupple mentationreducesaorticatherosclerosisandcalcificationandaten uateslosofaerobiccapacityinamousemodelofuremia[j].j MedFood,2014,17(2): [5] TáragaLópezPJ,lberoJS,Rodríguez MontesJ.Primary andsecondarypreventionofcolorectalcancer[j].clinmedin sightsgastroenterol,2014,7: [6] MerikaE,SaifM W,Katz,etal.Reviewcoloncancervac cines:anupdate[j].invivo,2010,24(5): [7] SaifM W,ChuE.iologyofcolorectalcancer[J].CancerJ, 2010,16(3): [8] ChenHJ,HsuLS,ShiaYT,etal.Theβ catenin/tcfcomplex asanoveltargetofresveratrolinthewnt/β cateninsignalingpath way[j].iochempharmacol,2012,84(9): [9] 杨秋臖, 周龙洋, 刘映孜, 等. 小檗碱抑制 HCT116 细胞生长与 Wnt/β catenin 信号的关系研究 [J]. 中国药理学通报,2012, 28(09):60-4. [9] YangQJ,ZhouLY,LiuYZ,etal.Studyonthecorelationbe tweentheanti-proliferationefectofberberineonhct116cels andwnt/β cateninsignaling[j].chinpharmacolul,2012, 28(9):60-4. [10]WuK,YangQJ,MuYQ,etal.erberineinhibitstheprolifera tionofcoloncancercelsbyinactivatingwnt/β cateninsignaling [J].IntJOncol,2012,41: [11]HeC,GaoJL,LuoXJ,etal.GinsenosideRg3inhibitscolor ectaltumorgrowththroughthedown regulationofwnt/β catenin signaling[j].intjoncol,2011,38: [12] WatsonJ,ColinsPD.Coloncancer:acivilizationdisorder [J].DigDis,2011,29(2): [13] PoureyronC,ReilyL,ProbyC,etal.Wnt5aisstronglyex presedattheleadingedgeinnon melanomaskincancer,forming activegradients,whilecanonicalwntsignalingisrepresed[j]. PloSOne,2012,7(2):e [14]MarkowitzSD,ertagnoliMM.Molecularoriginsofcancer:mo lecularbasisofcolorectalcancer[j].nengljmed,2009,361 (25): [15]MorinPJ,Sparks,KorinekV,etal.ctivationofbet acate nin Tcfsignalingincoloncancerbymutationsinbeta cateninor PC[J].Sci,1997,275: Studyontherelationshipbetweenanti proliferationefectof resveratrolonhct116coloncancercelsandwnt/β catenin YUNShuang xue 1,2,WNGDong xu 1,2,WUQiu xiang 1,2,CHENQian zhao 1,2,LIYang 1,2,ZENGYu hua 1,2, SHOYing 1,2,HUNGJun 1,2,LIUYing zi 1,2,HEai cheng 1,2 (1 ChongqingKeyLabrotoryofiochemistryandMolecularPharmacology, 2 Deptofpharmacology,PharmacySchoolofChongqingMedicalUniversity,Chongqing ,China) bstract:im Toinvestigatetheanti proliferation efectofresveratrol(res)onhumancoloncancercels anddisecttheposiblemechanism underlayingthis efect.methods Weintroducedcrystalvioletstaining andwesternblottoanalysetheanti proliferationefect ofresonhct116cels.then,weusedflowcytome tryandwesternblotasaytodetecttheresinduced apoptosisinhct116cels.next,weemployedthe welestablishedtcf4/lefluciferasereportertomeas uretheefectofresonwnt/β cateninsignalingtrans duction.finaly,wetookwesternblotandpcrasay toanalysetheefectofresontheexpresionofβ cate nininhct116cels.results Crystalvioletstaining andwesternblotanalysisshowedthatrescouldinhib ittheproliferationofhct116celsinaconcentration andtimedependentfashion.what smore,rescould promoteapoptosisinhct116cels.thetranscriptional activitiesoftcf4/lefreporterwerereducedbyres inaconcentration dependentfashion(p<0 05when theconcentrationofreswas20μmol L -1,andP< 0 01whentheconcentrationofReswas40μmol L -1 or80μmol L -1 ).Rescoulddecreasenotonlythe proteinlevelofβ catenininhct116cels,butalso themrnexpresionofβ catenin.conclusion Res caninhibittheproliferationofhct116cels,which maybemediatedatleastbydown regulatingtheex presionofβ catenintoinhibitthewnt/β cateninsig nalingtransduction. Keywords:resveratrol;coloncancer;anti prolifera tion;apoptosis;tcf4/lef;wnt/β catenin

2016药理封面大版

2016药理封面大版 ChinesePharmacologicalBuletin 2016Dec;32(12):1705~11 1705 网络出版时间 :2016-12-515:14 网络出版地址 :htp://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.r.20161205.1514.028.html 白藜芦醇抑制人结肠癌细胞增殖的作用与促进骨形态蛋白 9 及其受体表达的关系研究曾于桦 1,2,