2016药理封面大版

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1 ChinesePharmacologicalBuletin 2016Dec;32(12):1705~ 网络出版时间 : :14 网络出版地址 :htp:// 白藜芦醇抑制人结肠癌细胞增殖的作用与促进骨形态蛋白 9 及其受体表达的关系研究 曾于桦 1,2, 邵英 1,2, 李洋 1,2, 陈前昭 1,2, 任文艳 1,2, 周林云 1,2, 周益 1,2, 刘荣兴 1,2 1,2, 何百成 (1. 重庆市生物化学与分子药理学重点实验室,2. 重庆医科大学药理教研室, 重庆 ) doi: /j.isn 文献标志码 :A 文章编号 : (2016) 中国图书分类号 :R282.71;R329 24;R341;R392 11; R735 35;R979 1 摘要 : 目的研究白藜芦醇 (resveratrol,res) 对人结肠癌 Lo Vo 细胞增殖的抑制作用与骨形态蛋白 9(bonemorphorgenet icprotein9,bmp9) 之间的可能关系 方法采用结晶紫染色与流式细胞术检测 Res 对 LoVo 细胞增殖的抑制作用 ; 流式细胞术检测 Res 对 LoVo 细胞凋亡的诱导作用 利用 RT PCR 和 Westernblot 检测 Res 在 LoVo 细胞中对 BMP9 表达的影响, 以及对 BMP9 的受体 ALK2 和 ALK3 表达的影响 采用 ALK2 和 ALK3 的抑制剂, 通过结晶紫染色分析 BMP9 介导 Res 抑制 LoVo 细胞增殖的可能机制 结果与对照组相比,Res 明显呈浓度依赖性抑制 LoVo 细胞增殖, 并诱导 LoVo 细胞发生 S 期阻滞 ;Res 呈浓度依赖性增加 LoVo 细胞凋亡比例 ;Res 促进 BMP9 的 mrna 表达并明显增加其蛋白水平 ; 外源性过表达 BMP9 能增强 Res 对 LoVo 细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用 ;Res 能诱导 BMP9 的受体 ALK2 和 ALK3 的 mrna 表达, 抑制 ALK2 和 ALK3 能明显促进 LoVo 细胞增殖, 并减弱 Res 对 LoVo 细胞增殖的抑制作用 结论 Res 对 LoVo 细胞的增殖具有明显抑制作用, 这种作用可能与 Res 促进 BMP9 及其受体表达有关 关键词白藜芦醇 ; 骨形态蛋白 9; 结肠癌 ;LoVo 细胞 ; 增殖抑制结肠癌是临床常见的一种消化系统恶性肿瘤, 每年约有近 100 万新增结肠癌患者, 大约 60 万的患者死于结肠癌 [1] 结肠癌的发生与多种因素有关, 其中调节细胞增殖与分化的关键信号通路调节失控被认为是结肠癌的发生的主要原因之一, 如 TGF β 信号和 Wnt/β catenin 信号等 [2-3] 其中,TGF β 信号不仅参与调节胚胎的发育和个体内环境平衡, 同收稿日期 : , 修回日期 : 基金项目 : 国家自然科学基金资助项目 (No ) 作者简介 : 曾于桦 (1991-), 女, 硕士生, 研究方向 : 分子药理学,E mail: @qq.com; 何百成 (1972-), 男, 博士, 教授, 研究方向 : 分子药理学和干细胞生物学, 通讯作者,E mail:hebaicheng99@ ya hoo.com 时也参与调节细胞的增殖与分化 研究显示,TGF β 受体或 Smad 突变均能明显增加结肠癌的发生危险 近年来, 随着对结肠癌发病机制认识的进一步深入和开展早期筛查, 其临床治疗已有较大改善,5 年生存率也有明显提高 [1] 这种提高也与近年来一些靶向药物的成功应用有关, 如贝伐单抗和西妥昔单抗等, 但结肠癌的治疗效果及预后状况仍不十分理想 [4] 因此, 临床急需开发新型或高效的结肠癌治疗药物 化疗药物的毒性与癌细胞转移是结肠癌治疗所面临的最主要挑战 传统中药是抗癌药物的重要来源之一, 如长春新碱等早已用于结肠癌的治疗 [5] 白藜芦醇(resveratrol,Res) 又名芪三酚, 主要来源于虎杖 葡萄 花生 桑葚等植物 [6] 作为一种多酚类物质,Res 具有明显的抗氧作用, 故可用于防治高血脂 动脉粥样硬化 冠心病以及缺血性心脏病等疾病 [7-8] 除此之外, 研究表明 Res 还具有明显的抗肿瘤作用, 能有效地抑制多种肿瘤细胞增殖并促进细胞凋亡, 如乳腺癌 结肠癌 肺癌和肝癌等 [9-10] 到目前为止,Res 抗肿瘤作用的机制仍不十分清楚 本研究将进一步分析 Res 抑制结肠癌细胞增殖的作用及可能的分子机制, 为将 Res 开发成用于治疗和预防结肠癌的药物或辅助药物提供相应的实验基础 1 材料与方法 1.1 试剂及细胞培养 LoVo 细胞购自 American TypeCultureColection(ATCC) 白藜芦醇(resvera trol,res) 购自西安昊轩生物科技有限公司, 所用一抗均购自 SantaCruzBiotechnology 公司,ALK2 和 ALK3 抑制剂 (LDN ) 购自赛力克公司 (sel eck) LoVo 细胞置于 37,5% 的 CO 2 孵箱中, 采用 DMEM 高糖培养基 ( 含 10% 胎牛血清 青霉素 100U ml -1 和链霉素 0 1g L -1 ) 进行培养 1.2 实验设计及分组按实验要求, 设置对照组和实验组 采用 DMSO 溶解 Res, 实验组的细胞采用不同浓度的 Res 进行处理, 对照组细胞则用相同体积的 DMSO 进行处理 1.3 结晶紫染色实验将生长良好的 LoVo 细胞

2 76 C P m B 2 6D 2 消化后种到 24孔板中 等细胞贴壁后用不同浓度的 抑制结肠癌细胞增殖的机 楚 为进一步分析 R R 2 4 6 和 8 μm L 或同体积的 制 本研究首先分析 R 对 L V细胞的增殖影响 DMSO进行处理 24 48或 72后进行结晶紫 对 L V细胞的增殖 结晶紫染色分析结果显示 R 染色 检测 R 对 L V细胞增殖能力的影响 具体 抑制作用呈浓度和时间依赖性增强 F A 周期 方法简述如下 弃培养基后用 PBS小心清洗 24孔 能明显诱导 L V细胞发生 S期 分析结果显示 R 板 2次 每孔加 5 的结晶紫染液 用 PBS缓冲的 B 以上实验结果表明 R 对 L V细 阻滞 F 甲醛配制 5mL 于室温下孵育 2m 弃 胞的增殖具有明显抑制作用 结晶紫染液 然后用自来水将 24孔板小心清洗干净 并置于空气中自然风干 最后进行扫描或定量分析 每组实验重复 次 4 流式细胞术周期和凋亡分析实验 将生长状态 良好的 L V细胞均匀种于 6孔板 等细胞贴壁以后 采用不同浓度的 R 2 4 和 6 μm L 或同 O进行处理 4 8后收集细胞并按试剂 体积的 DMS 盒说明书操作 然后通过流式细胞仪进行周期分析 对细胞进行凋亡分析时 利用不含 EDTA的胰酶消化 并收集细胞 按试剂盒说明进行实验 最后通过流式 细胞仪进行凋亡分析 每组实验重复 次 5 RNA提取及 RT PCR实验 将生长状态良 好的 L V细胞消化并种到 T2 5培养瓶 等细胞贴 壁后加入不同浓度的 R 2 4 和 6 μm L 或同体积 DMSO进行处理 利用 TRI z 法提 取总 RNA 然后通过逆转录反应制备 DNA 最后通 过 PCR检测目的基因 mrna表达水平变化情况 所用引物如下 GAPDH 上游引物 5 CAACGAATTT GGCTACAGCA 下 游 引 物 5 AGGGGAGAT TCAGTGTGGTG BMP9上游引物 5 CCTGGGCA CAACAAGGAC 下 游 引 物 5 CCTTCCCTG F E R LV GCAGTTGAG ALK2上 游 引 物 5 AGGGCTCAT A C v w R CACCACCAA 下 游 引 物 5 TTCCGTTTCCCT L V B F w m w GAACCA ALK上 游 引 物 5 TCAGATGGTCCG R L V GCAAGT 下 游 引 物 5 CATGGCGCATTAGCA CAG 每组实验重复 次 2 R 对 LV细胞凋亡的影响 6 W b 实验 多数都能 诱 导 细 胞 凋 亡 因 此 本 研 究 进 一 步 分 析 将生长状态良好的 L V 细胞消化后均匀种于 6孔板 用不同浓度 R 抗肿瘤药物 R 对 L V细胞凋亡的影响 流式分析结果显示 2 4 和 6μm L 或同体积 DMS O对细胞进 经 R 处理后 L V细胞凋亡比例明显随药物浓度 行处理 于相应时间点提取各处理组的总蛋白 按 升高而增加 当 R 为 2μm L 时 L V就已 常规方法进行 W b 实验 最后利用 ECL试 明显出现凋亡 F 结果提示 R 对 L V细 剂盒显影并采集图像 每组实验重复 次 胞的凋亡具有促进作用 7 统计学分析 R 对 L V细胞中 BMP9表达的影响 利用 M E 对实 以 上实验结果再次证明 R 对结肠癌细胞的增殖具有 验结果进行统计分析 采用 进行组间比较 实 珋±表示 验数据以 明显抑制作用 但具体机制仍不清楚 骨形态蛋白 2 结果 b m BMP 属于 TGF β超 R 对多种肿 家簇成员 对细胞的增殖分化具有重要调节作用 同 瘤细胞具有增殖抑制作用 但具体机制仍不十分清 时 BMP信号的异常也与结肠癌的发生及发展密切 R 对 LV细胞增殖的影响

3 C P m B 2 6D 2 77 5A W b 体 即 ALK2和 ALK的表达 F 实验结果显示 经 R 处理后虽然 BMP9表达明显 升高 但并未明显增加 Sm 5 8的磷酸化水平 而是有一定程度降低 提示 BMP9在 L V细胞中 Sm 信 号 有 关 F 的作用 可 能 与 非 经 典 BMP 5B 进一步分析表明 抑制 ALK2 能促进 L V 细胞增殖 并减弱 R 对 L V细胞的增殖抑制作用 F 5C 以上结果提示 BMP9可能通过非经典 BMP Sm 信号介导 R 对 L V细胞的增殖抑 制作用 讨论 结肠癌作为一种临床常见的恶性消化系统肿 瘤 具有较高的发病率和死亡率 仅次于肝癌 肺癌 和胃癌 每年全球约有近 6万的患者因结肠癌而死 F 2 E R LV F w m w R 亡 目前治疗结肠癌所面临的主要挑战包括 传 L V 相关 文献报道 BMP9能抑制胃癌细胞的迁移 侵 袭和增殖 但目前尚不清楚 BMP9是否对结肠癌细 胞也有类似的作用 为此本研究首先分析 R 在结 肠癌细胞中对 BMP9表达的影响 RT PCR检测结 果显示 R 能明显促进 BMP9的 mrna表达 F A W b 分析结果显示 经 R 处理后 L V细胞 中 BMP9蛋 白 水 平 也 明 显 升 高 F B 进一步分析表明 在 FHC和几种常见的结肠癌细胞 中 BMP9均存在内源性表达并且 BMP9在 FHC细 胞中的水平明显高于结肠癌细胞 F C 结果提 示 BMP9可能与 R 抑制 L V细胞增殖和诱导凋 亡有关 4 BMP9对 R 抑制 LV细胞增殖和诱导凋 亡作用的影响 R 能促进 BMP9表达 而 BMP9本 身对细胞的增殖与分化具有重要调节作用 因此本 研究进一步分析 BMP9对 R 抑制 L V细胞增殖 作用的影响 结果显示 外源性过表达 BMP9能明 显抑制 L V细胞增殖 F 4A 增强 R 对 L V 细胞的 S期阻滞作用 F 4B 以及增强 R 诱导 B 表达和抑制 B 2表达的作用 F 4C 沉默 BMP9虽然不能逆转 R 对 B 2表达的抑制作用 但能 明 显 减 弱 R 对 B 表 达 的 诱 导 作 用 F 4C 结果提示 上调 BMP9可能参与介导 R 对 L V细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用 5 ALK2 对 R 抑制 L V细胞增殖作用的 影响 BMP9与其受体 ALK2和 ALK结合 通过经 F E R BMP9 LV A RT PCR w R mrna BMP9 L V B W b w R v BMP9 L V C W b 典或非经典 BMP S m 信号通路发挥各种作用 w BMP9 FHC RT PCR分析结果显示 R 能明显促进 BMP9的受

4 78 C P m B 2 6D 2 F 4 E BMP9 R LV A C v w BMP9 L V B F w m w C W b w BMP9 R BMP9 R L V L V D W b w k k wbmp9 R L V 统化疗药物的严重不良反应以及癌细胞的转移等 进作 用 而 BMP2则 抑 制 癌 细 胞 生 长 不 同 虽然对结肠癌的诊断和治疗水平都已有较大程度的 BMP成员对癌细胞增殖的影响不一致 可能与细 提高 但其预后仍不十分乐观 因此 临床急需一些 胞种类以及细胞突变类型及微环境有关 研究表 高效而低毒性的抗肿瘤药物 本研究结果显示 R 明 在结肠癌细胞中正常的 BMP信号能抑制癌细 对人结肠癌 L V细胞具有明显的增殖抑制和促进 m 4缺失 胞生长 该信号异常与结肠癌发生有关S 的这种作用可能与其促进 BMP9及 凋亡作用R 明显促进结肠癌细胞转移 4 BMP4能诱导结肠癌 其受体表达有关 但 R 促进 BMP9表达的详细机 细胞分化并增加其对化疗药物的敏感性 5 BMP9 制尚不清楚 是目前已发现的诱导干细胞成骨分化最强的因子之 结肠癌的发生与多种因素有关 包括生活方式 一 同时对多种肿瘤细胞的增殖也具有明显影响 如 年龄和基因突变等 文献报道 TGF β和 W β 抑制乳腺癌细胞增殖和促进骨肉瘤细胞增殖 6 7 等多种信号转导在结肠癌细胞中明显存在 到目前为止 BMP9对结肠癌细胞的影响还不清楚 异常 2 TGF β信号在胚胎发育 个体稳态的维 R 是一种天然的多酚类物质 主要来源于葡 持以及调节细胞增殖分化等过程中扮演着重要的角 萄 虎杖 花生 桑葚等植物 因具有明显的抗氧化 色 BMP作为 TGF β超家族的成员 与其受体结 作用 所以 R 可用于相关心血管疾病的防治 如动 合后通过经典或非经典 BMP Sm 信号 调节细 脉粥样硬化等 近来越来越多的研究表明 R 具 胞的增殖 分化与凋亡等过程 BMP信号参与调 有明显的抗肿瘤作用 能抑制多种肿瘤细胞的增殖 节多种肿瘤细胞的生物学特性 BMP6能抑制乳腺 并促进其凋亡 如肺癌 肝癌 乳腺癌和结肠癌细胞 癌细胞增殖 但促进前列腺癌骨转移并对雄激素耐 的抗肿瘤作用机制可能与增强 5功 等 9 R 药 2 卵巢癌癌旁间充质干细胞表达部分 BMP 能 抑 制 W 和 促 进 PTEN 表 达 等 有 β 8 9 但具体作用机制仍不清楚 关 成员 其中 BMP4和 BMP6对肿瘤细胞生长具有促

5 C P m B 2 6D 2 79 果显示 R 不仅不抑制 BMP9表达 而且明显促进 BMP9表达BMP9在正常结肠上皮细胞 FHC中的 表达水平明显高于在结肠癌细胞中的表达水平 F 提示 BMP9可能对结肠上皮细胞的增殖具有重 对结肠癌细胞的增殖抑制作 要调控作用并参与 R 用 进一步分析表明 外源性过表达 BMP9能抑制 L V细胞的增殖 并明显增强 R 对结肠癌细胞的 4A B 外源性过表达 BMP9明 增殖抑制作用 F 显增强 R 诱导 L V凋亡的作用 而沉默 BMP9则 能部分逆转 R 对 L V细胞的这种作用 F 4C D 因此 R 抑制 L V细胞增 殖 可 能 与 其 促 进 BMP9表达有关 BMP9与其受体结合后可通过经 Sm 信 号 发 挥 作 用 结 果 显 典与非 经 典 BMP 示 R 能促进 BMP9的受体 ALK2和 ALK 表达 但并不能增加 S m 5 8的磷酸化水平同时 抑 制 ALK2和 ALK明显减弱 R 对 L V细胞增殖 的抑制作用 F 5 提示 在 L V细胞中 BMP9 可能通过非经典的 BMP Sm 信号发挥对细胞增 殖的抑制作用 本研究结果证实 R 能明显抑制结肠癌细胞的 增殖 具有潜在治疗和预防结肠癌的作用R 可能 Sm 信 通过促进 BMP9表达并激活非经典 BMP 号通路实现这种作用 但具体机制仍不清楚 课题 组将进一步分析 R 在结肠癌细胞中促进 BMP9表 达及抑制结肠癌细胞增殖的可能分子机制 研究结 果将有利于促进 R 的临床应用开发 致谢 本研究主要在重庆市生物化学与分子药理学重点实 H 验室完成 课题组感谢芝加哥大学何通川 T 教授为本研究提供所需的重组腺病毒载体 BMP9和 GFP 参考文献 Tá Ló zpj A b JS R z M JA P m F 5 E ALK2 b R LV A RT PCR w R ALK2 ALK L V B W b w v J C M I G 2 4 7 4 6 2 B m N P B T b J C T R 2 5 5 8 5 R Sm 5 8 L V B S b A K M L zh J T W β C v w ALK2 b J E O T T 2 4 8 LDN b ALK2 R L V ALK 6 6 5 4 T J P CJ M b m m v w J C T 2 2 4 7 课题组前期研究已证实 R 对结肠癌细胞的增 5 殖具 有 抑 制 作 用 机 制 可 能 与 促 进 PTEN表 达 有 5 S QL Z CP W TY E 关 2 由于 BMP9在促进干细胞成骨分化的过程 RNA w v 中 能明显抑制 PTEN表达 所以课题组推测 R 抑 b q J G 制结肠癌细胞增殖可能与抑制 BMP9表达有关 结 2 5 5 7 2 79 8 6 6 W KH L YH C JC G m

6 1710 ChinesePharmacologicalBuletin 2016Dec;32(12) kernelstoenhanceresveratrolbiosynthesisandpreparesproutsasa functionalvegetable[j].jagricfoodchem,2005,53(2): [7] PetrovskiG,GurusamyN,DasDK.Resveratrolincardiovascular healthanddisease[j].annnyacadsci,2011,1215: [8] 孙杰, 孙文佳, 陈北冬, 等. 白藜芦醇降低 ox LDL 诱导血小板 ROS 产生和 PECAM 1 表达的分子机制研究 [J].,2015,31(11): [8] SunJ,SunW J,ChenBD,etal.EfectofresveratrolonROSpro ductionandpecam 1expresioninox LDL stimulatedplatelets [J].ChinPharmacolBul,2015,31(11): [9] SinghCK,NdiayeM A,AhmadN.Resveratrolandcancer: Chalengesforclinicaltranslation[J].Biochim BiophysActa, 2015,1852(6): [10] 刘理静, 钱红, 张平, 等. 白藜芦醇对人胚肺成纤维细胞株 MRC 5 生长的抑制作用 [J].,2015,31(5): [10] LiuLJ,QianH,ZhangP,etal.Inhibitoryefectsofresveratrolon humanpulmonaryfibroblastlinemrc 5growth[J].ChinPhar macolbul,2015,31(5): [11] HuF,MengX,TongQ,etal.BMP 6inhibitscelproliferation bytargetingmicrorna 192inbreastcancer[J].BiochimBiophys Acta,2013,1832(12): [12]LeeGT,KangDI,HaYS,etal.Prostatecancerbonemetasta sesacquireresistancetoandrogendeprivationviawnt5a media tedbmp 6induction[J].BrJCancer,2014,110(6): [13] PengJ,YoshiokaY,MandaiM,etal.TheBMPsignalingpath wayleadstoenhancedproliferationinserousovariancancer Apo tentialtherapeutictarget[j].molcarcinog,2016,55(4): [14] ItataniY,KawadaK,FujishitaT,etal.LosofSMAD4from colorectalcancercelspromotesccl15expresiontorecruitccr1 +myeloidcelsandfacilitatelivermetastasis[j].gastroenterolo gy,2013,145(5): [15]LombardoY,ScopelitiA,CammareriP,etal.Bonemorphoge neticprotein4inducesdiferentiationofcolorectalcancerstem celsandincreasestheirresponsetochemotherapyinmice[j]. Gastroenterology,2011,140(1): [16] 黄军, 刘映孜, 袁霜雪, 等. 环氧酶 2 在骨形态蛋白 9 诱导间充质干细胞骨向分化中的作用研究 [J]., 2014,30(7): [16]HuangJ,LiuYZ,YuanSX,etal.StudyontheroleofCOX 2in BMP9induced osteogenicdiferentiation in mesenchymalstem cels[j].chinpharmacolbul,2014,30(7): [17]RenW,LiuY,WanS,etal.BMP9inhibitsproliferationandme tastasisofher2 positivesk BR 3 breastcancercelsthrough ERK1/2andPI3K/AKTpathways[J].PLoSOne,2014,9(5): e [18] LinHY,TangHY,DavisFB,etal.Resveratrolandapoptosis [J].AnnNYAcadSci,2011,1215: [19] 袁霜雪, 王东旭, 伍秋香, 等. 白藜芦醇抑制 HCT116 结肠癌细胞增殖与 Wnt/β catenin 的关系研究 [J]., 2015,31(4): [19]YuanSX,WangDX,WuQX,etal.Studyontherelationshipbe tweentheanti proliferationefectofresveratrolonhct116colon cancercelsandwnt/β catenin[j].chinpharmacolbul,2015, 31(4): [20] 胡培, 伍秋香, 袁霜雪, 等. 白藜芦醇抑制人结肠癌细胞增殖及其与 PTEN 的关系研究 [J]. 第三军医大学学报,2015,37 (10): [20] HuP,WuQX,YuanSX,etal.Studyontherelationshipbetween theanti proliferationefectofresveratrolandptenincoloncancer cels[j].chinpharmacolbul,2015,37(10): Studyonrelationshipbetweenanti proliferation efectofresveratrolandresveratrol inducedbone morphogeneticprotein9anditsreceptorsincoloncancercels ZENGYu hua 1,2,SHAOYing 1,2,LIYang 1,2,CHENQian zhao 1,2,RENWen yan 1,2,ZHOULin yun 1,2, ZHOUYi 1,2,LIURong xing 1,2,HEBai cheng 1,2 (1 DeptofPharmacology,SchoolofPharmacy,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing ,China; 2 ChongqingKeyLaboratoryofBiochemistryandMolecularPharmacology,Chongqing ,China) Abstract:Aim Tostudytheanti proliferationefect ofresveratrol(res)andtheroleofres inducedbone morphorgeneticprotein9(bmp9)inthisprocesin coloncancercels.methods Crystalvioletstaining andflow cytomtrywereintroducedtoasaytheanti proliferationefectofresinlovocels.theefectof ResonapoptosisinLoVocelswasalsodetectedwith flowcytometry.then,rt PCRandWesternblotasay wereemployedtounveiltheefectofresontheex presionofbmp9.theefectofbmp9ontheanti pro liferationofresinlovocelswasanalyzedwithcrystal violetstainingand flow cytometrytoo. Finaly, the efectofresontheexpresionofalk2andalk3was asayedwithrt PCR,andtheinhibitorofALK2and ALK3wasusedtofigureouttheposiblemechanismof BMP9onRes inducedproliferationinhibitioninlovo

7 cels.results Resapparentlyinhibitedtheprolifera tion,arestedthecelcycleatsphaseinlovoandin creasedthepercentageofapopoticcelsinlovocels. ResincreasedtheexpresionofmRNA andproteinof BMP9 concentration dependently. Exogenous ex presed BMP9enhancedtheanti proliferationandap optosisinducingefectsofresin LoVocels, but BMP9knockdowndecreasedtheseefectsofRes.Al thoughreshadnoapparentefectonincreasingthe phosphorylationofsmad1/5/8,itincreasedtheex presionofalk2andalk3.inhibitionofalk2and ALK3decreased theanti proliferation efectofres partlyinlovocels.conclusion Resispotenttoin hibittheproliferationoflovocels,whichmaybe mediatedbyup regulatingtheexpresionofbmp9and itsreceptoratleast. Keywords:resveratrol;BMP9;coloncancer;LoVo cels;anti proliferation

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