1400 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2016Oct;32(10) 细胞经 40nmol L -1 TP 处理 24h,PBS 洗涤 2 次后, 用预冷的 RIPA 蛋白裂解液冰上裂解 20min, 然后 r min -1 离心 20mi

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虢组那拉
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1 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2016Oct;32(10):1399~ 网络出版时间 : :14 网络出版地址 :htp:// 雷公藤甲素对人结肠癌 HCT116 细胞增殖自噬和凋亡的影响赵林 1, 吴鹏 2, 章平贵 2, 谢大泽 2, 高典 3 2, 周南进 ( 江西省医学科学院 1. 实验中心,2. 分子医学研究所, 江西南昌 ;3. 南昌大学基础医学院, 江西南昌 ) doi: /j.isn 文献标志码 :A 文章编号 : (2016) 中国图书分类号 :R284.1;R329.24;R329.25;R ; R979 1 摘要 : 目的探究雷公藤甲素 (TP) 对人结肠癌 HCT116 细胞增殖的的影响和可能的抑制机制方法取 TP 不同浓度不同时间作用 HCT116 细胞,MTT 检测细胞的存活率, 流式细胞术检测 TP 对细胞凋亡的影响, 免疫印迹检测蛋白 LC3 Ⅱ 表达,MDC 检测细胞自噬结果 TP 能够抑制 HCT116 细胞的增殖, 不同浓度的 TP 作用 HCT116 细胞 48h 后,LC3 Ⅱ 的水平随着 TP 浓度的增加而升高, 呈浓度依赖性 ; 用 40 nmol L -1 TP 作用 HCT116 细胞,LC3 Ⅱ 蛋白水平随作用时间的延长而增加, 呈时间依赖性, 同时荧光显微镜观察到 HCT116 细胞中酸性自噬囊泡的数量增多 TP+3 MA 作用 HCT116 细胞 48h, 与对照组比较 TP 组细胞凋亡率下降 ; 与 TP 组比较 TP+3 MA 组细胞凋亡率明显下降 TP+RAPA 作用 HCT116 细胞 24h, 与对照组比较 TP 组细胞凋亡率增加 ; 与 TP 组比较 TP+RAPA 组细胞凋亡率明显增加结论 TP 能够抑制人结肠癌 HCT116 细胞的增殖, 诱导 HCT116 细胞凋亡, 提示自噬和凋亡间可能有协同关系关键词 : 雷公藤甲素 ; 结肠癌 ;HCT116 细胞 ; 增殖 ; 自噬 ; 凋亡雷公藤是我国传统中草药, 具有解毒散结活血化瘀扶正祛邪等多种功效, 雷公藤多苷已在临床上普遍应用于类风湿病治疗, 其药理作用较为安全稳定雷公藤甲素 (triptolide,tp) 又称雷公藤内酯醇, 是雷公藤多苷的主要有效成分国内外报道,TP 除有抗炎和免疫抑制作用外 [1], 还有较强的抗肿瘤的作用 [2], 但对结肠癌细胞的抑制作用少有研究自噬和凋亡是机体的一种细胞死亡机制, 对维持机体内环境的稳态有重要意义经典的细胞凋亡被称为 Ⅰ 型程序性细胞死亡, 自噬性细胞死亡又称为 Ⅱ 型程序性细胞死亡二者的发生都是由一定的程收稿日期 : , 修回日期 : 基金项目 : 江西省自然科学基金资助项目 (No20142BAB205079) 作者简介 : 赵林 (1963-), 男, 高级实验师, 研究方向 : 免疫学,E mail: @189.com; 周南进 (1959-), 男, 研究员, 研究方向 : 免疫药理学, 通讯作者,E mail:jxznj@163.com 序所调控, 比如各种相关基因和蛋白质等自噬和凋亡与肿瘤关系密切, 而且自噬与凋亡间的相互串扰, 进而对肿瘤的治疗产生影响 [3-4] 因此, 研究自噬与凋亡的发生过程两者间相互关系及其对肿瘤的影响, 可为今后的抗癌治疗提供新的思路本研究将针对细胞内自噬相关蛋白 LC3 及自噬诱导剂为研究方向, 探索 TP 诱导下自噬 - 凋亡通路在结肠癌 HCT116 细胞中的影响 1 材料与方法 1.1 试剂 TP, 上海融禾制药 ;RPMI1640,Solar bio; 胎牛血清, 杭州四季青 ;5 FU RAPA(rapamycin) Sigma;β actin 抗体,CST;LC3 Ⅱ 抗体,Sigma;3 MA, Seleck;MDC,Sigma;ECL 化学发光试剂盒,Pierce; AnnexinV FITC/PI 凋亡检测试剂盒,BD; 其余试剂均为国产 AR 级分析纯 1.2 方法药液配制 TP 用 DMSO 配成 5 5mmol L -1 贮液,-20 保存, 临用前以 RPMI1640 细胞培养液稀释成 nmol L -1 ;5 FU 配成 40nmol L -1 ;3 MA 配成 100mg L -1 ;RAPA 配成 100mmol L 细胞培养人结肠癌 HCT116 细胞株, 购自中国医学科学院, 由江西省医学科学院保存细胞常规复苏后, 贴壁培养在 RMPI1640 细胞培养液 ( 含 10% FBS,100U L -1 青霉素和 100U L -1 链霉素 ) 中, 置 37,5% CO 2 的细胞培养箱中培养, 隔 2~3d 消化传代选取对数生长期细胞进行实验 MTT 检测细胞活力胰酶消化 HCT116 细胞, 接种于 96 孔板中, 过夜培养后加入不同剂量 ( nmol L -1 ) 的 TP 处理, 对照组加入 PBS, 阳性对照组孔内加入 40nmol L -1 5 FU 处理, 培养 h 终止培养前 4h, 加 20μL MTT(5g L -1 ) 于各个孔中吸去培养基, 加入 150μL L -1 DMSO, 室温振荡 10min,490nmol L -1 波长下测定各孔吸光度值免疫印迹检测 LC3 Ⅱ 蛋白表达 HCT116

2 1400 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2016Oct;32(10) 细胞经 40nmol L -1 TP 处理 24h,PBS 洗涤 2 次后, 用预冷的 RIPA 蛋白裂解液冰上裂解 20min, 然后 r min -1 离心 20min, 收集上清,BCA 法测定蛋白浓度经 SDS PAGE 分离蛋白, 将凝胶上的蛋白质电转至硝酸纤维素膜上用 5% 脱脂奶粉封闭 2h, 加入一抗,4 摇床孵育过夜,TBST 洗膜 3 次后加入二抗 1h 按 ECL 化学发光试剂盒说明, 显色, 曝光, 保存图片 MDC 检测细胞自噬取对数生长期的 HCT116 细胞, 接种于 24 孔板培养 24h,PBS 洗涤 2 次后, 每孔加入含 MDC(50μmol L -1 ) 的培养基 500μL, 培养 10min 取出 24 孔板, 弃去孔内液体, PBS 洗涤 2 次后, 每孔加入 500μL4% 多聚甲醛室温静置固定 15min PBS 洗涤 2 次后, 置荧光显微镜下, 用 355nmol L -1 发射滤片和 512nmol L -1 阻断滤片观察拍照 TP 联合 3 MA/RAPA 对细胞凋亡的影响制备单细胞悬液, 细胞计数调整细胞浓度为 L -1, 加入 6 孔板中, 每孔 1mL, 再加 1mL 细胞培养液,37 5% CO 2 细胞培养箱中过夜 ; 次日分别加不同浓度 TP( nmol L -1 ) 处理, 继续培养 48h 待细胞贴壁后, 将 3 MA 和 RAPA 分别加入相应组 HCT116 细胞中预处理 3h(37 ), 然后再加入 40nmol L -1 TP 分别作用 HCT116 细胞 24h 和 48h, 另设对照组 FCM 检测细胞凋亡采用 AnnexinV FITC/ PI 双标法检测 HCT116 细胞凋亡, 操作方法参照试剂盒说明书, 根据荧光强度计算细胞凋亡百分率统计学分析采用 SPSS16.0 软件进行分析, 计量资料采用 x±s 珋表示, 多组均数比较采用单因素方差检验 2 结果 2.1 TP 抑制 HT116 细胞增殖 TP 作用 HCT116 细胞 24h,20nmol L -1 TP 可诱导细胞存活率下降, 当 80 nmol L -1 TP 时, 细胞存活率降至 65 75%; 作用 48h,10nmol L -1 TP 可使 HCT116 细胞的存活率明显降低, 此时 40nmol L nmol L -1 TP 组的细胞存活率分别为 35 18% 35 68%, 表明 TP 剂量再增加, 对 HCT116 细胞的存活率影响已不再明显 ;TP 作用 HCT116 细胞 72h,5 nmol L -1 也能够明显降低细胞存活率 ; 此外,40 nmol L -1 TP 抑制 HCT116 细胞增殖的活性明显强于 40nmol L -1 5 FU(Fig1) Fig1 EfectsofdiferentconcentrationsofTPonviabilityof HCT116celsmeasuredbyMTT( x±s,n=3) 珋 P<0 05, P<0.01vscontrol 2.2 TP 作用 HCT116 细胞后的 LC3 表达水平结果显示, 不同浓度的 TP(0nmol L -1 10nmol L -1 20nmol L -1 30nmol L -1 40nmol L -1 ) 作用 HCT116 细胞 48h 后, 自噬标记蛋白 LC3 Ⅱ 的相对表达水平随着 TP 浓度的增加逐渐升高, 呈浓度依赖性 ; 用 40nmol L -1 TP 作用 HCT116 细胞不同时长 ( h) 后发现,LC3 Ⅱ 蛋白的相对表达水平随着作用时间的延长不断增加, 呈时间依赖性 (Fig2) 表明 TP 可以上调 LC3 Ⅱ 蛋白的表达, 促进 HCT116 细胞产生自噬 2.3 TP 促进 HCT116 细胞产生自噬囊泡荧光显微镜下,40nmol L -1 TP 处理后的 HCT116 细胞内出现自噬囊泡, 并呈点状结构, 散在分布于核周及胞质表明 TP 促使 HCT116 细胞中酸性自噬囊泡的数量增多, 提示 TP 可能诱导 HCT116 细胞产生自噬, 见 Fig3 2.4 TP 联合 3 MA 作用 HCT116 细胞后的凋亡水平结果显示, 对照组 TP 组 TP+3 MA 组与 3 MA

中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2016Oct;32(10) 1401 Fig2 EfectofTPonexpresionofLC3 ⅡproteinsinHCT116celsdetectedbyWesternbloting( 珋 x±s,n=3) P<0 05, P<0 01vscontrol

组比较,RAPA 组的细胞凋亡率明显降低 (Fig5B) 表明自噬抑制剂可以有效抑制 TP 诱导的 HCT116 细胞凋亡 3 讨论结肠癌 (colorectalcancer,crc) 是临床最常见的消化道恶性肿瘤之一 2011 年的统计数据显示, 全球每年有 CRC120 万新发病例和 60.

3 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2016Oct;32(10) 1401 Fig2 EfectofTPonexpresionofLC3 ⅡproteinsinHCT116celsdetectedbyWesternbloting( 珋 x±s,n=3) P<0 05, P<0 01vscontrol Fig3 NumberofacidautophagicvaculoesinHCT116cels Afterexposedto40nmol L -1 TP,thenumberofacidautophagic vacuolesinhct116celshadincreasedwhichwasobservedbyfluores cencemicroscope(400 ).A:controlgroup;B:40nmol L -1 TPgroup 组作用 HCT116 细胞 48h 后, 其凋亡率分别为 12 1% 31 6% 20 6% 7 5%(Fig4A) 与对照组比较发现,TP 组细胞凋亡率增加,RAPA 组细胞凋亡率无变化 ; 与 TP 组比较,TP+3 MA 组细胞凋亡率明显增加 (Fig4B) 表明自噬诱导剂 3 MA 可以促进 TP 诱导 HCT116 细胞凋亡 2.5 TP 联合 RAPA 作用 HCT116 细胞后的凋亡水平结果显示, 对照组 TP 组 TP+RAPA 组与 RAPA 组作用 HCT116 细胞 24h 后, 其凋亡率分别为 3 4% 34 0% 30 0% 2 4%(Fig5A) 与对照组比较,TP 组的细胞凋亡率明显增加, 而 RAPA 组细胞凋亡率无明显变化 ; 与 TP 组比较,RAPA 组的细胞凋亡率明显降低 (Fig5B) 表明自噬抑制剂可以有效抑制 TP 诱导的 HCT116 细胞凋亡 3 讨论结肠癌 (colorectalcancer,crc) 是临床最常见的消化道恶性肿瘤之一 2011 年的统计数据显示, 全球每年有 CRC120 万新发病例和万死亡病例 [5] 2012 年, 美国的结肠癌发病率及病死率均居癌症发病率和病死率的第 3 位 [6] 在国内, 随着民众生活水平的不断增高和饮食结构的改变,CRC 的发病率也在呈逐年上升趋势 [7] CRC 的治疗, 目前尽管在以外科手术为主的综合治疗方面取得了一定的进展, 但其 5 年生存率仍徘徊在 50% 左右 [8] 我们的研究发现,TP 可以抑制 HCT116 细胞的增殖, HCT116 细胞的存活率随着 TP 浓度和作用时间的增加而下降, 呈现出浓度和时间效应此外,TP 抑制 HCT116 细胞增殖的活性较 5 FU 增强, 这只是初步有待深入研究自噬 (autophagy) 是细胞的一种基本代谢机制, 在生存压力条件下如营养物质不足, 可降解细胞内非必需组分, 以提供营养保证细胞的生存 [9] 已有的研究表明, 在多种肿瘤中都存在着自噬水平的改变和异常, 表现在肿瘤病理变化的不同阶段, 从而促进或抑制肿瘤的发生和发展 [10-11] ; 研究发现 [12], 肝癌组织区域内的中性粒细胞大量高表达 LC3, 中性粒细胞自噬活性加强, 可以增加迁移相关蛋白的表

１４０２中国药理学通报ＣｈｎＰｈａｍａｇａＢｎ２０１６Ｏ３２１０Ｆｇ４Ｅｆｆｆｔｐｍｂｎｄｗｈ３ＭＡｎａｐｐｆｈｃｔ１１６ｂｙｆｗｙｍｙｍｐｙａｄｎｇｐＴＰｇｐＴＰ３ＭＡｇｐ３ＭＡｇｐＰ００１ｖｎＦｇ５Ｅｆｆｆｔｐｍｂｎｄｗｈｒａｐａｎａｐｐｆｈｃｔ１１６ｂｙｆ

4 １４０２中国药理学通报ＣｈｎＰｈａｍａｇａＢｎ２０１６Ｏ３２１０Ｆｇ４Ｅｆｆｆｔｐｍｂｎｄｗｈ３ＭＡｎａｐｐｆｈｃｔ１１６ｂｙｆｗｙｍｙｍｐｙａｄｎｇｐＴＰｇｐＴＰ３ＭＡｇｐ３ＭＡｇｐＰ００１ｖｎＦｇ５Ｅｆｆｆｔｐｍｂｎｄｗｈｒａｐａｎａｐｐｆｈｃｔ１１６ｂｙｆｗｙｍｙｍｐｙａｄｎｇｐＴＰｇｐＴＰＲＡＰＡｇｐＲＡＰＡｇｐＰ００１ｖｎ达有助于癌细胞的侵袭转移在营养缺乏时肝细时间的延长而增加呈时间依赖性表明ＴＰ可以胞内的自噬体明显增多自噬体特异蛋白ＬＣ３从上调ＬＣ３１６细胞产 Ⅱ 蛋白的表达进而促进ＨＣＴ１ＬＣ３ Ⅰ向ＬＣ３ Ⅱ的表型转化明显减少表明营养缺生自噬这和ＭＤＣ染色所观察到的结果一致然乏时肝癌细胞的自噬能力是增强的同时肝癌细胞而自噬作为一种应激反应能够促进肿瘤细胞的存１３我们的结果显示不同浓度活自噬通过清理化疗与电离辐射时受损的大分子的ＴＰ作用ＨＣＴ１１６细胞４８ｈ后ＬＣ３ Ⅱ 的水平随或细胞器保护被化疗药物攻击与遭受电离辐射的肿着ＴＰ浓度的增加而升高呈浓度依赖性用４０ｎｍ瘤细胞从而使之逃避凋亡而存活下来４的侵袭力是增强的Ｌ１ＴＰ作用ＨＣＴ１１６细胞ＬＣ３ Ⅱ 的水平随作用目前对于自噬与凋亡的研究结果显示大部分

5 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBuletin 2016Oct;32(10) 1403 研究提示自噬发生于凋亡之前, 并可以进一步上调后者的活性 ; 但是在部分细胞内部, 细胞自噬却通过抑制凋亡因子的释放抑制了凋亡 [15] 我们用 TP 联合自噬诱导剂 RAPA 作用 HCT116 细胞 24h, 与对照组比较发现,TP 组细胞凋亡率增加 ; 与 TP 组比较,TP+RAPA 组细胞凋亡率明显增加 TP 联合 RAPA 作用 HCT116 细胞 48h 的话, 会出现细胞大量的死亡, 表现出 TP 的毒性另有研究发现 [16], 自噬抑制剂 3 MA 可使鼻咽癌细胞的增殖能力下降, 细胞有典型凋亡形态学改变, 提示自噬与凋亡之间的对抗关系我们用 TP 联合自噬抑制剂 3 MA 作用 HCT116 细胞 48h, 与对照组比较发现,TP 组细胞凋亡率增加,RAPA 组细胞凋亡率无变化 ; 与 TP 组比较,TP +3 MA 组细胞凋亡率明显增加基于自噬凋亡以及二者相互作用后对肿瘤的发展过程产生的复杂影响, 探讨如何利用自噬与凋亡的作用关系, 促进对肿瘤的抑制, 目前的研究虽然取得了一些进展, 但是自噬与凋亡间相互作用的确切机制并不十分清楚, 如何利用好自噬与凋亡之间的关系, 促进肿瘤细胞死亡, 达到理想的抗肿瘤效果仍将是今后研究的重点另外,TP 能够诱导细胞凋亡抑制鼻咽癌细胞 CNE 2Z 生长, 作用的机制可能与其诱导氧化应激及抑制 Akt 的表达及活化有关 [17] 在众多的凋亡调控基因中,bcl 2 和 bax 是凋亡调控过程中一对相互对立的重要基因,caspase 3 是凋亡过程中关键的凋亡执行蛋白酶, 三者在细胞凋亡过程中的关系是当今研究中的热点, 也是本研究的继续 ( 致谢 : 本研究在江西省医学科学院实验中心完成, 在此致以由衷的感谢!) 参考文献 : [1] FanD,HeX,BianY,etal.TriptolidemodulatesTREM 1signal pathwaytoinhibittheinflammatoryresponseinrheumatoidarthritis [J].IntJMolSci,2016,17(4):498(1-14). [2] WangH,MaD,WangC,etal.Triptolideinhibitsinvasionand tumorigenesis of hepatocelular carcinoma MHCC 97H cels throughnf κbsignaling[j].medscimonit,2016,22: [3] 唐琪, 布文奂, 王丹丹, 等. 自噬与凋亡的相互作用及其对肿瘤发展过程影响的研究进展 [J]. 吉林大学学报 ( 医学版 ), 2015,41(6): [3] TangQ,BuW H,WangDD,etal.Advanceresearchoninterac tionbetweenautophagyandapoptosisanditsinfluenceindevelop mentoftumors[j].jjilinuniv(mededit),2015,41(6): [4] 张茂娜, 汤志杰, 陈莉. 自噬 - 凋亡通路在肿瘤靶向治疗中的意义 [J]. 肿瘤学杂志,2014,5(20): [4] ZhangMN,TangZJ,ChenL,etal.Thesignificanceofautoph agy apoptosispathwayintargettherapyforcancer[j].jchinon col,2014,5(20): [5] JemalA,BrayF,CenterMM,etal.Globalcancerstatistics[J]. CACancerJClin,2011,61(2): [6] SiegelR,NaishadhamD,JemalA.Cancerstatistics,2012[J]. CACancerJClin,2012,62(1): [7] 郑荣寿, 张思维, 吴良有, 等. 中国肿瘤登记地区 2008 年恶性肿瘤发病和死亡分析 [J]. 中国肿瘤,2012,21(1):1-12. [7] ZhengRS,ZhangSW,WuLY,etal.Reportofincidenceand mortalityfromchinacancerregistriesin2008[j].chinacancer, 2012,21(1):1-12. [8] RansohofDF.Howmuchdoescolonoscopyreducecoloncancer mortality?[j].anninternmed,2009,150(1):50-2. [9] KobayashiS.Choosedelicatelyandreuseadequately:Thenewly revealedprocesofautophagy[j].biolpharm Bul,2015,38 (8): [10]LevineB,SinhaSC,KroemerG.Bcl 2familymembers:Dual regulatorsofapoptosisandautophagy[j].autophagy,2008,4 (5): [11] MaycoteP,JonesKL,GoodalM L,etal.Autophagysupports breastcancerstem celmaintenancebyregulatingil6secretion [J].MolCancerRes,2015,13(4): [12]LiXF,ChenDP,OuyangFZ,etal.Increasedautophagysus tainsthesurvivalandpro tumourigenicefectsofneutrophilsinhu manhepatocelularcarcinoma[j].jhepatol,2015,62(1): [13] 李俊, 杨斌, 郭瑜, 等. 营养剥夺通过诱导自噬促进肝癌细胞侵袭 [J]. 华中科技大学学报 ( 医学版 ),2012,41(5): [13] LiJ,YangB,GuoY,etal.Starvation inducedautophagepro motesinvasionofhepatocelularcarcinomacels[j].actamed UnivSciTechnolHuazhong,2012,41(5): [14]KanzawaT,KondoY,ItoH,etal.Inductionofautophagiccel deathinmalignantgliomacelsbyarsenictrioxide[j].cancer Res,2013,63(9): [15] BousmanCA,ChanaG,GlatSJ,etal.Preliminaryevidenceof ubiquitinproteasomesystemdysregulationinschizophreniaandbi polardisorder:convergentpathwayanalysisfindingsfromtwoinde pendentsamples[j].am JMedGenetBNeuropsychiatrGenet, 2010,153B(2): [16] SongLL,LiuH,LinyanM A,etal.Inhibitionofautophagyby 3 MAenhancesERSinducedapoptosisinhumannasopharyngeal carcinomacels[j].oncolleters,2013,6(4): [17] 王秀, 张竞竞, 张配, 等. 雷公藤甲素诱导鼻咽癌细胞凋亡作用 [J]. 中国药理学通报,2014,30(8): [17]WangX,ZhangJJ,ZhangP,etal.Efectoftriptolideonapopto sisofnasopharynxcancer[j].chinpharmacolbul,2014,30 (8):

6 Efectoftriptolideonhumancolorectalcancer HCT116celproliferation,autophagyandapoptosis ZHAOLin 1,WUPeng 2,ZHANGPing gui 2,XIEDa ze 2,GAODian 3,ZHOUNan jin 2 (1.ExperimentCenterofJiangxiAcademyofMedicalSciences,2.InstituteofMolecularMedicine,JiangxiAcademyofMedicalSciences, 3.DeptofPathogenBiologyandImmunology,MedicalColegeofNanchangUniversity,Nanchang ,China) Abstract:Aim Toinvestigatetheefectoftriptolide (TP)onhumancolorectalcancerHCT116celprolif erationandexplorethepotentialmechanism oftpin treatingcoloncancer.methods MTTasaywasused forestimatingthesurvivalratesofhct116celsex posedtodiferentconcentrationsanddiferentduration timeoftp.westernblot(wb)wasusedfortesting theexpresionoflc3 Ⅱ.MDCstainingwasemployed todetectcelautophagy.flowcytometry(fcm)was appliedtotesttheefectsoftponcelapoptosis.re sults TPcouldinhibitcelproliferationinHCT116 cels.theexpresionoflc3 Ⅱ wasenhancedwiththe increaseoftheconcentrationoftpafterexposedtodif ferentconcentrationsoftpfor48handtheduration timeoftpafterexposedto40nmol L -1 TP,andthe numberofacidautophagicvacuolesinhct116cels hadincreased,whichwasobservedbyfluorescencemi croscope.thehct116 celsapoptoticratesin TP grouphaddecreasedcomparedtocontrolgroupandde creasedsignificantlycomparedtotp+3 MA group. TheHCT116celsapoptoticratesinTPgrouphadin creasedcomparedtocontrolgroupandincreasedsignif icantlycomparedtotp+rapagroup.conclusion TPcouldinhibittheproliferationofhumancoloncanc erhct116 celsand induce apoptosisin HCT116 cels,whichindicatesthatsynergymayexistbetween autophagyandapoptosis. Keywords:triptolide;coloncancer;HCT116cel; proliferation;autophagy;apoptosis

12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL

12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL ( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot