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牙裕绪
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1 医学研究杂志 2016 年 3 月第 45 卷第 3 期论著 Wnt/β-cateninsignaling[J].MolCancerTher,2013,12(9): 魏铭, 温伟红, 秦卫军. 肾细胞癌相关信号通路的研究进展 [J]. 中华泌尿外科杂志,2014,35(12): HirataH,HinodaY,MajidS,etal.DICKKOPF-4activatesthe noncanonicalc-jun-nh2kinasesignalingpathwaywhileinhibiting thewnt-canonicalpathwayinhumanrenalcelcarcinoma[j]. Cancer,2011,117(8): KumazoeM,SugiharaK,TsukamotoS,etal.67-kDalamininre ceptorincreasescgmptoinducecancer-selectiveapoptosis[j].j ClinInvest,2013,123(2): WhitJD,LiN,TinsleyHN,etal.Anovelsulindacderivativethat potentlysuppressescolontumorcelgrowthbyinhibitingcgmpphos phodiesteraseandβ-catenintranscriptionalactivity[j].cancerprev Res,2012,5(6): ZhuB,VemavarapuL,ThompsonWJ,etal.Suppressionofcyclic GMP-specificphosphodiesterase5promotesapoptosisandinhibits growthinht29cels[j].jcelbiochem,2005,94(2): LiQ,ShuY.Pharmacologicalmodulationofcytotoxicityandcelular uptakeofanti-cancerdrugsbypde5inhibitorsinlungcancercels [J].Pharm Res,2014,31(1): TinsleyHN,GaryBD,KeetonAB,etal.InhibitionofPDE5bysu lindacsulfideselectivelyinducesapoptosisandatenuatesoncogenic Wnt/β-catenin-mediatedtranscriptioninhumanbreasttumorcels [J].CancerPrevRes,2011,4(8): PiazzaGA,ThompsonWJ,PamukcuR,etal.Exisulind,anovel proapoptoticdrug,inhibitsraturinary bladdertumorigenesis[j]. CancerRes,2001,61(10): Lim JTE,PiazaGA,PamukcuR,etal.Exisulindandrelatedcom poundsinhibitexpressionandfunctionoftheandrogenreceptorinhu manprostatecancercels[j].clincancerres,2003,9(13): KumazoeM,Kim Y,BaeJ,etal.Phosphodiesterase5inhibitoracts asapotentagentsensitizingacutemyeloidleukemiacelsto67- kdalamininreceptor-dependentapoptosis[j].febslet,2013,578 (18): ( 收稿日期 : ) ( 修回日期 : ) 二烯丙基二硫对口腔鳞癌 CAL-27 细胞增殖及凋亡的研究刘鲁亮李国林顾博宇迟惠熔孙金环郭福林摘要目的探讨二烯丙基二硫 (dialyldisulfide,dads) 对口腔鳞癌 CAL-27 细胞的增殖抑制及促进凋亡的作用方法体外培养口腔鳞癌 CAL-27 细胞, 采用不同浓度二烯丙基二硫对 CAL-27 细胞进行干预, 并设立对照组, 采用倒置显微镜观察细胞的形态学改变,MTT 法检测细胞的增殖情况,Hoechst33342 染色法检测细胞凋亡, 用比色法检测 caspase-3 活性的改变结果倒置相差显微镜下观察对照组的细胞贴壁, 形态呈多边形, 生长活跃 ; 实验组细胞形态改变, 细胞脱壁, 变小变圆, 细胞膜皱缩 MTT 结果显示, 随着浓度的增加, 时间的延长, 二烯丙基二硫对 CAL-27 细胞的生长及增殖有显著的抑制作用, 并且各实验组相比及实验组与对照组相比, 差异具有统计学意义 (P<0.05) 荧光显微镜下观察到经 Hoechst33342 染色的凋亡细胞实验组 caspase-3 活性较正常对照组明显增高, 差异有统计学意义 (P<0.05) 结论二烯丙基二硫体外能抑制 CAL-27 的细胞增殖, 呈一定的时间及剂量依赖性, 并且诱导细胞凋亡,caspase-3 可能参与了细胞凋亡的调控关键词口腔癌 CAL-27 细胞二烯丙基二硫细胞增殖细胞凋亡中图分类号 R78 文献标识码 A DOI /j.issn X ResearchontheProliferationandApoptosisofCAL-27InducedbyDialylDisulfide. LiuLuliang,LiGuolin,GuBoyu,etal.Depart mentoforalandmaxilofacialsurgery,afiliatedstomatologicalhospital,harbinmedicaluniversity,heilongjiang150001,china Abstract Objective ToinvestigatetheefectsonCAL-27celsproliferationandapoptosisinducedbyDADS.Methods CAL- 27celswereculturedinvitro.TheoralsquamouscelcarcinomaCAL-27celsculturedinmediumweredeltwithdiferentconcentration ofdadsatdiferenttime(24h,48h,72h).morphologicalchangeofcelswasobservedbylightmicroscope.theinfluenceonthecel proliferationwasinvestigatedbymttmethod.thecelapoptosiswasdetectedbyhoechst33342fluorescentstaining.moreover,thechan 基金项目 : 哈尔滨医科大学附属第一医院基金资助项目 (2012B011) 作者单位 : 哈尔滨医科大学附属口腔医院口腔颌面外科通讯作者 : 郭福林, 副教授, 电子信箱 :flguo1967@126.com 115

2 gesofcaspase-3activititywasevaluatedbycolorimetericassay.results Underlightmicroscope,morphologyofcelshasnotchanged inthecontrol,celgrowadherent,polygonalandactively.however,morphologyofcelstreatedbydadshaschanged.thecelsbecame smalerandround,andshrankcelsincreased.comparedwiththecontrol,thecelsoftheexperimentgroupwereobviouslyinhibited. Andtherewassignificantdiferenceofproliferationinhibitionbetweenthem(P<0.05).Atimeanddose-dependentwasdetectedbythe MTTmethod.Thesignificantcelapoptosischangecouldbeobservedwithfluorescentmicroscopy.Thelevelofcaspase-3activitywere higherintheexperimentgroupthancontrolgroup(p<0.05).conclusion DADSinhibitsthegrowthandproliferationofCAL-27cels andinduceapoptosis.furthermore,caspase-3maybeinvolvedintheprocessofapoptosis. Keywords Oralcancer;CAL-27cel;DialylDisulfide;Celproliferation;Celapoptosis 口腔癌是一种很常见的恶性癌症, 在所有常见的癌症中占第 6 位, 具有很高的发生率和病死率 [1~3] 许多研究发现, 人体对大蒜摄入量的增加与多种癌症的发生率下降有密切的关系 [4] 大蒜作为一种抗癌食物, 在肿瘤防治方面的研究受到国内外研究者的广泛关注二烯丙基二硫 (dialyldisulfide,dads), 是大蒜中的一种脂溶性有效成分, 能够抑制肿瘤细胞的生长, 对多种肿瘤细胞的生长具有明显的抑制作用 [5,6] 近年来, 许多研究表明 DADS 对许多肿瘤细胞增殖具有明显的抑制作用, 能够促进肿瘤细胞的凋亡, 然而对口腔鳞癌细胞鲜有研究本实验通过应用不同浓度的 DADS 对体外培养的 CAL-27 细胞进行干预, 初步探讨 DADS 对 CAL-27 细胞的凋亡作用, 为临床治疗口腔鳞癌提供一定的参考材料与方法 1. 材料 : 人舌鳞癌 CAL-27 细胞系 ( 上海交通大学惠赠 ) DADS( 美国 Sigma 公司 ), 纯度 80%, 与 Tween80 以 1 2 的比例充分溶解, 加入 0.9% 生理盐水稀释 1000 倍于 -20 保存, 使用时以细胞培养液稀释成工作浓度 DMEM( 美国 Hyclone 公司 ); 胎牛血清 ( 美国 Biowest 公司 );0 4% TrypanBlue,MTT, DMSO( 美国 Sigma 公司 );Hoechst33342( 碧云天生物试剂公司 );caspase3colorimetricasaykit caspase8 ColorimetricAssayKit( 南方凯基生物 ) 酶标仪为美国 Biotek 公司产品 ; 超净工作台为上海博迅实业有限公司 ; 倒置相差显微镜荧光显微镜均购自日本 O lympus 公司 2. 方法 :(1) 细胞培养和实验分组 : 将口腔鳞癌 CAL-27 细胞常规培养于含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养液, 且含 1% 双抗 (100U/ml 青霉素 100mg/L 链霉素 ), 于 5%CO 2 37 培养箱中培养每日观察细胞生长情况,2~3 天传代 1 次, 取对数生长期细胞用于实验随机分成对照组和实验组 (DADS 药物浓度为 mg/L) 用于实验 (2) 细胞形态学观察 : 将对数生长期的 CAL-27 细胞, 以每孔个接种于 3 块 96 孔培养板, 于培养箱内培养 24h 后更换培养液, 加入上述不同浓度的 DADS 溶液, 并设空白对照孔分别培养 h 后用倒置显微镜观察细胞形态变化 (3)MTT 实验 : 取对数生长期的 CAL-27 细胞, 用含有胎牛血清双抗的 DMEM 培养液调整细胞数为 /ml 细胞的单细胞悬液, 并接种于 3 块 96 孔培养板中, 每孔 100μl, 放入培养箱中培养 24h 后更换为 DMEM 培养液设置对照组, 对照组为接种细胞, 不加药物, 且每组设 6 个复孔再继续培养 h 后取出培养板, 每孔加入 MTT 试剂 (5g/L)20μl, 再继续培养 4h 后, 吸去上清液, 每孔加入 150μlDMSO, 震荡摇匀, 充分溶解结晶在酶标仪上测定 570nm 处的吸光度值, 计算细胞增殖抑制率细胞抑制率 =( 对照组吸光度值 - 实验组吸光度值 )/ 对照组吸光度值 100%, 实验重复 3 次 (4)Hoechst33342 染色检测细胞凋亡 : 将生长良好的 CAL-27 细胞, 以 / 孔接种于 96 孔培养板, 于培养箱内培养 24h 后更换培养液, 加入上述不同浓度的 DADS 溶液, 并设空白对照孔分别培养 h 后, 用 PBS 轻洗两遍后, 用胰蛋白酶消化, 用 PBS 调整细胞数为个 /ml, 每孔 100μl 然后加入 10mg/L,20μlHoechst33342, 用荧光倒置显微镜观察肿瘤细胞核的变化情况 (5)caspase-3 活性测定检测细胞凋亡 : 根据提供的 caspase-3 活性检测试剂盒进行收集各组的 CAL-27 细胞, 用细胞裂解液将细胞打散, 置于冰上裂解 10min,12000r/min 离心 1min 取 5μl 上清进行蛋白定量, 于酶标仪内测定样本在 595nm 下的吸光度值 (A 595 ); 另取 45μl 加 50μl2 反应缓冲液及 5μlcaspase-3 反应底物, 混匀, 于 37 孵育 1h, 酶标仪内测定光密度值 (A 405 ) 计算 caspase-3 活性, 活性 =A 405 /A 统计学方法 : 采用 SPSS13.0 进行统计学分析, 计量资料采用均数 ± 标准差 (x±s) 表示, 采用单因素方差分析, 组间两两比较采用 t 检验, 以 P<0.05 为差异有统计学意义

医学研究杂志２０１６年３月结第４５卷论第３期果著的ＤＡＤＳ胞形态变化不明显图１Ｂ经１细胞形态学观察通过倒置显微镜观察正常作用４８ｈ后细胞变形固缩细胞膜不完整图１Ｃ培养的细胞呈梭形或多边形胞体大折光率高生长经的ＤＡＤＳ作用７２ｈ后大量的细胞变小活跃图１Ａ经的

在２５高图３各实验组相比及实验组与对照组相比差２００ｍｇ浓度范围内ＤＡＤＳ对ＣＡ２７细胞的生长异均具有统计学意义Ｐ００５有明显的抑制作用并且呈时间及浓度依赖性如表１在各时间点各实验组与对照组相比差异有统计０５学意义Ｐ０表１不同浓度的ＤＡＤＳ对ＣＡ２７细胞系的增殖抑制作用浓度

ｃｈｔ３３３４２染色结果荧光显微镜下观察ｃａｐａｅ３的活性发现对照组细胞核呈圆形实验组细胞膜皱缩细胞核浓缩聚集甚至出现了细胞核碎裂形成大小不一的核碎片提示凋亡细胞的出现图２随着浓度增加时间延长凋亡细胞的数目增多讨论口腔鳞癌是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤之一目前以综合治疗

3 医学研究杂志２０１６年３月结第４５卷论第３期果著的ＤＡＤＳ胞形态变化不明显图１Ｂ经１细胞形态学观察通过倒置显微镜观察正常作用４８ｈ后细胞变形固缩细胞膜不完整图１Ｃ培养的细胞呈梭形或多边形胞体大折光率高生长经的ＤＡＤＳ作用７２ｈ后大量的细胞变小活跃图１Ａ经的ＤＡＤＳ作用２４ｈ后细变圆漂浮于培养液中图１Ｄ图１倒置显微镜下观察ＤＡＤＳ对ＣＡ２７细胞系的影响１００Ａ对照组Ｂ作用２４ｈＣ作用４８ｈＤ作用７２ｈ２ＭＴＴ实验结果ＭＴＴ法对ＤＡＤＳ处理的ＣＡ对ＣＡ２７细胞处理４８ｈ时ｃａｐａｅ３活性明显增２７细胞生长情况进行检测结果显示在２５高图３各实验组相比及实验组与对照组相比差２００ｍｇ浓度范围内ＤＡＤＳ对ＣＡ２７细胞的生长异均具有统计学意义Ｐ００５有明显的抑制作用并且呈时间及浓度依赖性如表１在各时间点各实验组与对照组相比差异有统计０５学意义Ｐ０表１不同浓度的ＤＡＤＳ对ＣＡ２７细胞系的增殖抑制作用浓度２５ｍｇ抑制率１００２４ｈ４８ｈ７２ｈ９５０±３０２２９２７±４７３５４８９±３０５５０ｍｇ２１０１±５６３３９０４±６１３６８６５±２６９２８９４±３５６５３７０±３３５８０４３±１７７２００ｍｇ３９４３±７８９６５８７±３７７８９２０±２４６图３ＤＡＤＳ对ＣＡ２７细胞系作用４８ｈ后３Ｈｏｅｃｈｔ３３３４２染色结果荧光显微镜下观察ｃａｐａｅ３的活性发现对照组细胞核呈圆形实验组细胞膜皱缩细胞核浓缩聚集甚至出现了细胞核碎裂形成大小不一的核碎片提示凋亡细胞的出现图２随着浓度增加时间延长凋亡细胞的数目增多讨论口腔鳞癌是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤之一目前以综合治疗为主尤其对于晚期患者常发生远处转移更需要化疗药物进行治疗传统的化疗药物对人体伤害较大且常伴耐药的发生因而有必要开发和研究天然的抗肿瘤药物来提高疗效减少不良反应ＤＡＤＳ是从大蒜中分离提取的一种低分子脂溶性化合物研究表明它对白血病前列腺癌乳腺癌食管癌胶质瘤等多种肿瘤均有明显的抑制作用是一种有很大开发潜力的抗肿瘤药物７１１植物来图２荧光显微镜下观察ＤＡＤＳ对ＣＡ２７源药物的抗肿瘤机制通常包括直接杀伤肿瘤细胞抑细胞系凋亡的影响制肿瘤细胞的增殖诱导肿瘤细胞的分化或者凋亡Ａ正常组Ｂ用药组激活免疫系统包括细胞免疫及体液免疫从而消除体内的肿瘤细胞１２本研究以ＤＡＤＳ作用于体外培养４ｃａｐａｅ３活性测定结果不同浓度的ＤＡＤＳ的口腔鳞癌ＣＡ２７结果表明ＤＡＤＳ通过抑制口腔１１７

4 鳞癌 CAL-27 细胞的增殖, 促进细胞的凋亡来抗肿瘤本实验通过倒置显微镜可以观察到, 随着药物浓度的增加, 在 72h 内, 随着时间的延长, 细胞变形固缩, 最后细胞变圆变小, 漂浮于培养液中, 抑制了细胞的生长 MTT 方法是通过测定活细胞的代谢能力来间接测定活细胞的数目, 本研究应用 MTT 方法检测结果表明,DADS 对口腔鳞癌的增殖具有抑制作用, 且存在时间 - 剂量依赖性在细胞凋亡方面,Hoechst33342 作为一种细胞核荧光染色剂,DADS 作用后的细胞经 Hoechst33342 染色后, 在荧光倒置显微镜下可观察到细胞核的碎裂, 表明凋亡细胞的出现, 说明 DADS 诱导了口腔鳞癌 CAL-27 细胞的凋亡 [13] 分光光度法检测 caspase-3 活性, 是近年用于细胞凋亡检测的新型方法本研究结果显示, 不同浓度的 DADS 作用于 CAL-27 细胞后,CAL-27 细胞的 caspase -3 的活性发生了变化,DADS 作用 48h 时, caspase-3 活性升高较明显, 同时各实验组与对照组相比均差异有统计学意义因而,DADS 促进 CAL-27 细胞的凋亡可能与 caspase-3 通路中 caspase-3 的活化相关细胞凋亡的过程是细胞在各种死亡信号刺激后发生的一系列受细胞内源性基因酶类和信号转导等途径调控的一个瀑布式激活过程在外源性的细胞凋亡激活途径中, 通过引发 caspase 蛋白酶解级联反应, 进而激活 caspase-3 从而发生相应的生物学效应,caspase-3 被认为是 caspase 家族中诱导细胞凋亡的关键酶 [14~16] 许多研究发现,DADS 促进多种癌细胞的凋亡与 caspase-3 信号通路的激活 [17] 有关 Pratheeshkumar 等在对黑色素瘤的研究中发现,DADS 能够促进黑色素瘤细胞的凋亡, 同时激活了线粒体内在凋亡通路, 证实促进了 caspase-3 [18] 的表达增加另外,Lee 等研究发现,DADS 可以促进胃癌细胞的凋亡, 并且通过 Westernblot 法发现 caspase-3 的表达增加目前, 已知的 caspase 家族有 10 余种,caspase-3 为该家族的重要成员, caspase-3 活化后可以裂解 DNA 修复相关分子凋亡抑制蛋白骨架蛋白等相关因子从而促进细胞凋亡 [19] 本研究在口腔癌中发现 DADS 正是激活了 caspase-3 的表达, 促进了癌细胞的凋亡, 这一发现可能与线粒体通路的激活, 从而促进凋亡蛋白的表达密切相关 118 综上所述, 本研究表明 DADS 在体外可以抑制口腔鳞癌细胞的增殖, 并诱导口腔鳞癌细胞的凋亡, 其机制可能与 caspase-3 活性有关这为以后的动物实验及临床应用提供了一定的理论基础及参考, 然而 DADS 诱导口腔鳞癌的具体凋亡信号通路, 仍然有待于进一步研究参考文献 1 JemalA,BrayF,CenterMM,etal.Globalcancerstatistics[J].CA CancerJClin,2011,61(2): ZiniA,CzerninskiR,Sgan-CohenHD.Oralcanceroverfourdec ades:epidemiology, trends, histology, and survivalbyanatomical sites[j].joralpatholmed,2010,39(4): HanS,ChenY,GeX,etal.Epidemiologyandcostanalysisforpa tientswithoralcancerinauniversityhospitalinchina[j].bmc PublicHealth,2010,10:196 4 MansonMM.Cancerprevention-thepotentialfordiettomodulate molecularsignaling[j].trendsmolmed,2003,9(1): Herman-AntosiewiczA,SinghSV.Signaltransductionpathways leadingtocelcyclearestandapoptosisinductionincancercelsby Alium vegetable-derivedorganosulfurcompounds:areview[j]. MutatRes,2004,555(1-2): PowolnyAA,SinghSV.Multitargetedpreventionandtherapyofcanc erbydialyltrisulfideandrelatedalium vegetable-derivedorgano sulfurcompounds[j].cancerlet,2008,269(2): YiL,JiXX,TanH,etal.InvolvementofMcl1indialyldisulfde- inducedg 2 /M celcyclearestinhl-60cels[j].oncolrep, 2012,17(6): ArunkumarR,SharmilaG,ElumalaiP,etal.Efectofdialyldisul fideoninsulin-likegrowthfactorsignalingmoleculesinvolvedincel survivalandproliferationofhumanprostatecancercelsinvitroandin silicoapproachthroughdockinganalysis[j].phytomedicine,2012, 19(10): XiaoX,ChenB,LiuX,etal.DialyldisulfidesuppressesSRC/ Ras/ERKsignaling-mediatedproliferationandmetastasisinhuman breastcancerbyup-regulatingmir-34a[j].plosone,2014,9 (11):e YinX,ZhangJ,LiX,etal.DADSsuppreseshumanesophageal xenografttumorsthrough RAF/MEK/ERK and mitochondria-de pendentpathways[j].intjmolsci,2014,15(7): 汪雪菁, 向姝霖, 唐海林, 等. 二烯丙基二硫对人胶质瘤 U251 细胞增殖及细胞周期的影响 [J]. 实用肿瘤杂志,2014,29(2): 阮敏, 杨雯君, 周晓健, 等. 紫草素对口腔鳞癌 Tca8113 细胞增殖与凋亡的作用 [J]. 中国口腔颌面外科杂志,2010,8(1): 陈红应, 郭福林, 王大力, 等. 阿伦膦酸钠抑制 2 种口腔鳞癌细胞系的初步研究 [J]. 口腔医学研究,2013,29(3): JacobsonMD,WeilM,RafMC.Programmedceldeathinanimal development[j].cel,1997,88(3): ( 下转第 130 页 )

5 物, 从而保护细胞不受过氧化物干扰及损害 [5] ;T- AOC 能够代表生物体内酶性和非酶性抗氧化物的总体水平 ;MAD 是自由基与脂质发生过氧化反应的最终产物, 其含量可间接反映出细胞损伤程度, 以上均是衡量细胞氧化应激水平的重要指标 [7] 本研究发现, 姜黄素干预的高脂饮食大鼠血清 SOD GSH-Px T-AOC 均显著高于高脂饮食对照组, 而 MAD 明显降低, 这表明, 姜黄素能够通过增强肝细胞内抗氧化物质的活力并抑制自由基产生, 从而改善 NAFLD 大鼠肝脏氧化应激水平此外, 既往研究也发现,TNF-α 和 IL-6 在 NAFLD 大鼠中表达明显升高, 能够激活炎性细胞产生炎性反应, 加重肝细胞损伤, 并且参与胰岛素抵抗过程及诱导肝细胞凋亡 [8] NF-κB 是一种能够调控多种炎性因子表达的核转录因子, 在肝脏中,NFκB 激活后通过提高 TNF-α IL-6 IL-1 等炎性因子表达水平参与肝脏炎性反应肝纤维化, 肝细胞再生与凋亡过程, 且 NF-κB 信号通路亦参与氧化应激与胰岛素抵抗, 因此是 NAFLD 的重要机制之一 [9] 本实验结果表明, 经姜黄素治疗后的大鼠血清 TNFα IL-6 水平较高脂饮食组显著降低, 且肝组织 NF -κb 表达水平也显著低于高脂组, 提示姜黄素也可能通过抑制 NF-κB 的激活从而抑制 NF-κB 介导的炎性因子的释放, 改善肝脏炎性反应程度本实验研究还发现, 姜黄素治疗组较高脂饮食组肝组织 Bcl-2 表达水平增高,Bax 表达水平显著降低,Bcl-2/Bax 比值增高, 这表明姜黄素能够激活 Bcl-2 并抑制 Bax 表达, 从而降低 NAFLD 大鼠肝细胞凋亡水平 NAFLD 时, 肝脏中的饱和脂肪酸和游离胆固醇等脂毒性物质, 可通过激活特殊信号调节通路引起细胞凋亡发生, 而肝细胞过度凋亡可进一步导致肝纤维化及肝硬化的发生发展 [10] Bcl-2 是一类高度保守的蛋白家族, 在细胞凋亡调控中起到关键作用, 分为以 Bcl-2 为代表的抗凋亡蛋白和以 Bax 为代表的促凋亡蛋白两大类, 而细胞凋亡水平主要取决于两大类蛋白表达水平的比率, 即 Bcl-2/Bax, 组织中细胞凋亡水平越高, 该比值越低 [11] 综上所述, 姜黄素能够减轻 NAFLD 大鼠脂代谢紊乱和胰岛素抵抗水平, 改善肝功能及脂肪变性程度, 尤其对发病关键环节的氧化应激炎性反应及细胞凋亡具有明显的改善作用, 因此, 姜黄素可能成为非酒精性脂肪肝病的有效防治药物, 然而其确切机制仍需进一步探索参考文献 1 MonjurA.Non-alcoholicfatyliverdiseasein2015[J].WorldJ Hepatol,2015,7(11): DowmanJK,TomlinsonJW,NewsomePN.Pathogenesisofnon-al coholicfatyliverdisease[j].qjmed,2010,103(2): GalalySR,AhmedOM,MahmoudMA.Thymoquinoneandcurcumin preventgentamicin-induced liverinjurybyatenuatingoxidative stress,inflammationandapoptosis[j].jphysiolpharmacol,2014, 65(6): Sigrid,A,RajasekaranK.Therapeuticpotentialofcurcuminingastro intestinaldiseases[j].worldjgastrointestpathophysiol,2011,2 (1): TakakiA,KawaiD,YamamotoK.Multiplehits,includingoxidative stress,aspathogenesisandtreatmenttargetinnon-alcoholicsteato hepatitis(nash)[j].intjmolsci,2013,14(10): PolimeniL,BenMD,BarataF.Oxidativestres:Newinsightson theassociationofnonalcoholicfatyliverdiseaseandatherosclerosis [J].WorldJHepatol,2015,7(10): GaoHT,XuLS,LiDF,et,al.Efectsofglucagon- likepeptide- 1onliveroxidativestres,TNF-αandTGF-β1inratswithnon- alcoholicfatyliverdisease[j].jsouthmeduniv,2013,33(11): BraunersreutherV,VivianiGL,MachF,etal.Roleofcytokinesand chemokinesinnon-alcoholicfaty[j].worldjgastroenterol,2012, 18(8): LuZ,WaiJT,JinJY,etal.Signaltransductionsandnonalcoholic fatyliver:amini-review[j].intjclinexpmed,2014,7(7): AlkhouriN,Carter-KentC,FeldsteinAE.Apoptosisinnonalcoholic fatyliverdisease:diagnosticandtherapeuticimplications[j].ex pertrevgastroenterolhepatol,2011,5(2): FengM,LiJ,WangJ,etal.HighglucoseincreasesLPS-induced DCapoptosisthroughmodulationofERK1/2,AKTandBax/Bcl-2 [J].BMCGastroenterol,2014,14(98):1-8 ( 收稿日期 : ) ( 修回日期 : ) ( 上接第 118 页 ) 15 MatsushitaK,WuY,QiuJ,etal.Fasreceptorandneuronalcel deathafterspinalcordischemia[j].jneurosci,2000,20(18): 李晓玲, 岳磊, 贾志宇, 等.Caspase 在莱菔硫烷诱导人腺样囊性癌细胞系 ACC-M 凋亡中的作用 [J]. 现代口腔医学杂志,2015, 29(1): PratheeshkumarP,ThejasP,KutanG.Dialyldisulfideinduces caspase-dependentapoptosisviamitochondria-mediatedintrinsic pathwayinb16f-10melanomacelsbyup-regulatingp53,caspase- 3anddown-regulatingpro-inflammatorycytokinesandnuclearfac tor-κβ-mediatedbcl-2activation[j].jenvironpatholtoxicol Oncol,2010,29(2): LeeJE,LeeRA,Kim KH,etal.Inductionofapoptosiswithdialyl disulfideinagsgastriccancercelline[j].jkoreansurgsoc, 2011,81(2): 李明, 谭诗云. 阿司匹林对大肠癌 LoVo 细胞增殖凋亡的影响及机制 [J]. 医学研究杂志,2014,43(6):72-76 ( 收稿日期 : ) ( 修回日期 : ) 130

材料方法统计学分析体外作用对细胞增殖的影响

材料方法统计学分析体外作用对细胞增殖的影响生物技术通报罗春燕官涛王红宁杨艳姜蓉胡晓舒华自森王建伟旨在探讨人参总皂苷对细胞表达的影响法显示对细胞增殖抑制程度呈剂量与时间依赖性增加且呈正相关关系流式细胞术表明能阻止细胞从期向期移行激光共聚焦显微镜观