二次重蒸水 ; 其他试剂均为分析纯 2 鉴别 2 1 苦豆子的薄层色谱鉴别取本品 5mL, 分别加氨试液 3mL 水 15mL, 后加三氯甲烷振摇提取 3 次, 每次 15mL, 分取三氯甲烷层, 合并, 回收溶剂至干, 残渣加乙醇 1mL, 使其溶解, 作为供试品溶液另取槐定碱对照品, 加乙醇制

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歆姜
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1 年月第卷第期中国现代中药ＭＣＭＯＶＮ中药工业洁妇尔洗剂的质量标准研究谭静玲宋爱华覃金玲祝汪洋丁晓萍湖北省食品药品监督检验研究院湖北马应龙药业集团股份有限公司湖北湖北四环制药有限公司湖北４４摘要目的对洁妇尔洗剂的质量标准进行研究方法采用薄层色谱ＴＬＣ法对苦豆子蛇床子冰片进行定性鉴别采用高效液相色谱法对苦参碱的含量进行定量测定结果ＴＬＣ鉴别方法专属性强ＨＰＬＣ含量测定方法准确重复性好结论该标准可有效控制洁妇尔洗剂的质量关键词洁妇尔洗剂质量标准苦参碱苦豆子蛇床子冰片ＳＱＳＪＬＴＡＮＪＳＯＮＧＡＱＩＮＪＺＨＵＷＤＩＮＧＸＨＩＦＤＣＨＷ４４ＣＷＭＰｍＧＳｋｃＬＨＷ４４ＣＨＳＰｍＣＬＨＷ４ＣＡＯｊＴｑＪＭＳＣｍｗｑＴＬＣＱｍｍｍＨＰＬＣＲｍＴｍＴＬＣｗＨＰＬＣｍｗＣＴｑＪＫｗＪＪＬｑｍＳＣｍｍｊ４９洁妇尔洗剂属民族中药复方制剂由民间古方９柱温箱上海民仪电子有ＡＶＰ紫外检测器ＡＴ开发研制而成该处方由苦豆子蛇床子冰片限公司紫外分光光度仪ＵＶ上海天美科学花椒没食子等味中药组成具有清热解毒止痒抗菌消炎之功能临床广泛应用于各种细菌性霉菌性滴虫性外阴炎阴道炎所致妇女阴部ＤＥ型数控超声波清洗器仪器有限公司ＫＱ红肿瘙痒和白带过多等症状洁妇尔洗剂原标准收载于卫生部药品标准分册为了更有效地控制本品质量根据处方药味相关文献及试验研究结果笔者在原标准的基础上进一步完善其质量标准即采用薄层色谱ＴＬＣ法对苦豆子蛇床子冰片进行鉴别采用高效液相色谱法对君药苦豆子中的有效成分苦参碱进行含量测定仪器与试药仪器通信作者９自动双重纯水蒸馏器上海亚荣生化仪器厂ＭＳ４ＳＺＡＧ电子天平梅特勒托利多仪器上海有限公司试药苦参碱对照品槐定碱对照品冰片对照品蛇床子对照药材中国食品药品检定研究院批号分别为４４４洁妇尔洗剂自制批号分别为４ＶＰ型高效液相色谱岛津ＳＰＤ岛津ＡＴＷ４ＫＨｚ昆山市超声仪器有限公司ＳＺ甲醇乙腈为色谱纯水为丁晓萍副主任药师研究方向中成药质量控制研究ＴＥｍｘｍ

2 二次重蒸水 ; 其他试剂均为分析纯 2 鉴别 2 1 苦豆子的薄层色谱鉴别取本品 5mL, 分别加氨试液 3mL 水 15mL, 后加三氯甲烷振摇提取 3 次, 每次 15mL, 分取三氯甲烷层, 合并, 回收溶剂至干, 残渣加乙醇 1mL, 使其溶解, 作为供试品溶液另取槐定碱对照品, 加乙醇制成质量浓度为 1mg ml -1 的溶液, 作为对照品溶液按处方比例, 制备缺苦豆子的阴性样品, 同法制成阴性供试品溶液照薄层色谱法 ( 中华人民共和国药典 2010 版一部附录 Ⅵ B) 试验, 吸取上述 3 种溶液各 2μL, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以三氯甲烷甲醇氨水 ( ) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 喷以稀碘化铋钾试液供试品色谱中, 在与对照品色谱相应的位置上显相同的橙色斑点, 阴性供试品无干扰见图 1 注 :1 苦豆子阴性供试品 ;2 供试品 ( 批号 : ); 3 供试品 ( 批号 : );4 槐定碱对照品 ; 5 供试品 ( 批号 : ) 图 1 洁妇尔洗剂中苦豆子的 TLC 鉴别图乙酯甲酸 (15 5 2) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置紫外光灯 (365nm) 下检视供试品色谱中, 在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点, 阴性供试品无干扰见图 2 注 :1 蛇床子阴性供试品 ;2 供试品 ( 批号 : ); 3 蛇床子对照药材 ;4 供试品 ( 批号 : ); 5 供试品 ( 批号 : ) 图 2 洁妇尔洗剂中蛇床子的 TLC 鉴别图 2 3 冰片的薄层鉴别取 2 2 项下的供试品溶液, 另取冰片对照品, 加乙酸乙酯制成质量浓度为 0 5mg ml -1 的溶液, 作为对照品溶液按处方比例, 制备缺冰片的阴性样品, 同法制成阴性供试品溶液照薄层色谱法 ( 中华人民共和国药典 2010 版一部附录 Ⅵ B) 试验, 吸取上述 3 种溶液各 5μL, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以环己烷乙酸乙酯 (17 3) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 喷以 5% 香草醛硫酸溶液, 在 105 加热至斑点显色清晰供试品色谱中, 在与对照品色谱相应的位置上, 显相同颜色的斑点, 阴性供试品无干扰见图蛇床子的薄层鉴别取本品 20mL, 加乙醚振摇提取 2 次, 每次 40mL, 分取乙醚液, 合并, 挥干, 残渣加无水乙醇 1mL, 使其溶解, 作为供试品溶液另取蛇床子对照药材 1g, 加水 20mL, 超声提取 1h, 过滤, 取滤液, 加乙醚振摇提取, 同法制成对照药材溶液按处方比例, 制备缺蛇床子的阴性样品, 同法制成阴性供试品溶液照薄层色谱法 ( 中华人民共和国药典 2010 版一部附录 Ⅵ B) 试验, 吸取上述 3 种溶液各 15μL, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以石油醚 (30~60 ) 乙酸 1084 注 :1 冰片阴性供试品 ;2 供试品 ( 批号 : ); 3 冰片对照品 ;4 供试品 ( 批号 : ); 5 供试品 ( 批号 : ) 图 3 洁妇尔洗剂中冰片的 TLC 鉴别图

3 3 含量测定 3 1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱 : KromasilC 18 (250 mm 4 6 mm, 5μm); 流动相 : 乙腈磷酸盐缓冲液 ( 取 0 2moL L -1 磷酸二氢钾溶液 250mL, 加 0 2moL L -1 氢氧化钠溶液 118mL, 加水稀释至 1000mL, 再加入三乙胺 0 5mL)(11 89); 流速 :1 0mL min -1 ; 检测波长 :220nm 理论板数按苦参碱色谱峰计, 不得低于对照品溶液的制备精密称取苦参碱对照品适量, 加流动相制成质量浓度为 0 15mg ml -1 的溶液, 即得 3 3 供试品溶液的制备精密量取本品 5mL, 置分液漏斗中, 加氨水 2mL, 用三氯甲烷 ( mL) 振摇提取 5 次, 合并三氯甲烷层, 回收溶剂至干, 残渣用甲醇溶解, 转移至 10mL 容量瓶中, 定容, 摇匀, 精密量取 5mL 置 25mL 容量瓶中, 用流动相稀释至刻度, 摇匀, 即得 3 4 阴性供试品溶液的制备取按处方比例及工艺制备的缺苦豆子阴性对照样品, 按 3 3 项下方法制成阴性供试品溶液 3 5 专属性试验精密吸取对照品溶液供试品溶液和阴性供试品溶液各 10μL, 分别注入液相色谱仪, 依法测定, 阴性供试品溶液在与苦参碱对照品色谱峰相应保留时间处无吸收峰结果表明, 其他组分对测定无干扰见图 4 注 :A 对照品 ;B 洁妇尔洗剂供试品 ; C 阴性供试品 ;1 苦参碱图 4 苦参的 HPLC 图谱 3 6 线性关系的考察精密称取苦参碱对照品 32 55mg, 置 25mL 容量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为苦参碱对照品储备液精密量取对照品储备液 mL, 分别置 100mL 量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀精密吸取上述对照品溶液及对照品储备液各 10μL, 分别注入高效色谱仪, 按 3 1 项下色谱条件进行测定, 记录色谱图, 以苦参碱对照品溶液浓度为横坐标 X, 峰面积为纵坐标 Y, 绘制标准曲线, 计算, 得回归方程 : Y= X ,r= 结果表明, 苦参碱质量浓度在 0 013~1 30mg ml -1 具有良好的线性关系 3 7 精密度试验取 3 2 项下的苦参碱对照品溶液 10μL, 按上述色谱条件测定, 连续进样 6 次, 测定苦参碱峰面积, 计算 RSD 为 1 5%, 表明仪器精密度良好 3 8 稳定性试验取同一份洁妇尔洗剂 ( 批号 : ) 供试品溶液, 分别在制备后第 h 进样, 测定苦参碱峰面积并计算 RSD 结果, 供试品溶液中苦参碱峰面积的 RSD 为 1 2%, 表明供试品溶液在制备后 24h 内稳定 3 9 重复性试验取同批洁妇尔洗剂 ( 批号 : ), 按 3 3 项下方法平行制备 6 份供试品溶液, 在上述色谱条件下测定苦参碱峰面积, 经计算, 洁妇尔洗剂中苦参碱的平均质量浓度为 1 49mg ml -1,RSD 为 1 1%, 表明该方法的重复性良好 3 10 中间精密度试验取同批洁妇尔洗剂 ( 批号 : ), 由不同分析人员, 于不同时间按 3 3 项下方法平行制备 6 份供试品溶液, 在同一仪器上测定, 计算得洁妇尔洗剂中苦参碱的平均质量浓度为 1 48mg ml -1, RSD 为 1 2%, 经与重复性试验结果比较, α=0 88% 3 11 加样回收试验精密量取已知含量的洁妇尔洗剂 ( 批号 : ) 2mL, 分别加入苦参碱对照品溶液 (1 514mg ml -1, 溶媒为三氯甲烷 )2mL, 加水 1mL, 加氨水 2mL, 其余按 3 3 项下方法制备样品溶液, 平行 6 份, 测 1085

4 定苦参碱含量计算平均回收率为 97 1%,RSD 为 1 7% 结果见表 1 序号取样量 /ml 表 1 加样回收试验结果 (n=6) 样品含量加入量测得值回收率平均回收 RSD (%) 率 (%) (%) 样品测定按上述色谱条件对 10 批样品进行含量测定, 测定结果见表 2 表 2 洁妇尔洗剂中苦参碱含量测定结果 (mg ml -1,n=2) 批号含量 1 含量 2 平均含量由表 2 可知,10 批样品中苦参碱的平均含量为 1 46mg ml -1, 按平均含量的 80% 折算成含量限度, 暂定洁妇尔洗剂每 ml 含苦豆子以苦参碱 (C 15 H 24 N 2 O) 计, 不得少于 1 2mg 待收集到更多来源的药材和更多批次的样品后, 再结合制剂生产贮藏等因素对限度值进行更深入的研究 4 讨论 4 1 苦豆子主要有效成分为生物碱类, 在以槐定碱 [6] 为对照品进行鉴别过程中, 对参考文献的展开剂系统进行了筛选优化, 改善了原鉴别条件下的分离度低和易拖尾现象, 最终以三氯甲烷甲醇氨水 ( ) 为展开剂, 结果表明, 薄层色谱斑点清 1086 晰, 分离度良好蛇床子的 TLC 鉴别试验中, 分别比较了乙醚直接提取加氨水后以乙酸乙酯萃取和加氨水后以三氯甲烷萃取 3 种不同的提取方法, 以及石油醚 (30~ 60 ) 乙酸乙酯甲酸 (15 5 2) 甲苯乙酸乙酯正已烷 (3 3 2) 甲苯乙酸乙酯 (30 1) 等不同的展开系统结果表明, 采用乙醚直接提取, 以石油醚 (30~ 60 ) 乙酸乙酯甲酸 (15 5 2) 为展开剂分离效果最佳, 且阴性供试品无干扰冰片的薄层鉴别试验中, 分别选用三氯甲烷乙酸乙酯乙醚 3 种不同的提取溶媒, 采用甲苯丙酮 (9 1) 甲苯乙酸乙酯 (19 1) 环已烷乙酸乙酯 (17 3) 等不同的展开剂分别进行展开, 并以 5% 香草醛硫酸溶液进行显色试验结果表明, 以乙醚萃取, 环已烷乙酸乙酯 (17 3) 为展开剂时斑点清晰, 耐用性好, 且阴性供试品无干扰本研究亦对组方中其他药味如花椒的薄层色谱进行研究, 但在多次尝试后, 无法取得满意效果 ( 薄层图色带较重, 无特征斑点, 且阴性供试品有干扰 ), 因此未进行鉴别 4 2 本标准制定过程中, 考虑已对苦豆子中的槐定碱进行薄层色谱鉴别, 故选择其含量较高的特征性 [7 8] 活性成分苦参碱作为指标成分进行 HPLC 的含量 [9 10] 测定参考了相关文献对色谱条件进行优化 1) 检测波长的选择 : 采用紫外分分光光度法对苦参碱对照品的甲醇溶液进行全波长扫描, 根据光谱图, 选择 220nm 作为测定波长 ;2) 流动相优化 : 先后以乙腈 0 1% 磷酸 (20 80) 乙腈 0 1% 磷酸 (10 90) 甲醇 0 04% 三乙胺溶液 (61 39) 乙腈磷酸盐缓冲液 ( 取 0 2moL L 1 磷酸二氢钾溶液 250mL, 加 0 2moL L 1 氢氧化钠溶液 118mL, 加水稀释至 1000mL, 再加入 0 5 ml 三乙胺 ) (11 89) 乙腈甲醇磷酸盐缓冲液 ( ) 等分别进行试验结果表明, 以乙腈磷酸盐缓冲液 (11 89) 进行试验, 结果最为理想对色谱条件进行耐用性考察, 如色谱柱流动相比例流速等, 结果表明, 该色谱条件下耐用性良好 ;3) 含量测定中供试品溶液的制备方法考察 : 分别对氨水用量 ( mL) 及三氯甲烷萃取次数 ( 次, 依次以 mL) 进行考察, 结果表明, 氨水用量 2mL, 萃取 5 次时苦参碱提取较完全, 且含量测定结果稳定 ( 下转第 1112 页 )

5 [14] Geng Z,Lau B H S.Aged garlic extractmodulates glutathioneredoxcycleandsuperoxidedismutaseactivityin vascularendothelialcels[j].phytotherres,1997(11): [15]Kim Parks,KuDD.Garlicelicitsanitricoxide dependent relaxationandinhibitshypoxicpulmonaryvasoconstriction inrats[j].clinexppharmacolphysiol,2000,27(10): [16] 聂晓敏, 周玉杰, 谢英, 等. 二烯丙基三硫化物涂层支架对冠状动脉损伤后内皮结构和功能的影响 [J]. 中华医学杂志,2006,86(16): [17] 马瑛. 大蒜抗心血管疾病研究进展 [J]. 中国调味品, 2013,38(9):6 9. [18] 张翠丽, 曾涛, 赵秀兰, 等. 大蒜油对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌抑制作用的研究 [J]. 毒理学杂志,2011,25 (4): [19] AgarwalMK,IqbalM,AtharM.Garlicoilamelioratesferic nitrilotriacetate(fe NTA) induced damage and tumor promotion:implicationsforcancerprevention[j].food ChemToxicol,2007,45(9): [20]LiX,Xie J,LiW,etal.Efects ofgarlic oilon tumoragenecityandintercelularcommunicationinhuman gastriccancercelline[j].scichinaclifesci,2000,43 (1): [21] ArunkumarA,VijayababuM R,KanagarajP,etal.Growth suppresingefectofgarliccompounddialyldisulfideon prostatecancercelline(pc 3)invitro[J].BiolPharm Bul,2005,28(4): [22] 张翠丽, 曾涛, 赵秀兰, 等. 大蒜油与顺铂对人卵巢癌 SKOV3 细胞生长抑制的联合作用 [J]. 毒理学杂志, 2010,24(2): [23] JungY,ParkH,ZhaoH Y,etal.SystemicApproaches Identify a Garlic Derived Chemical, Z ajoene, as a Glioblastoma Multiforme Cancer Stem Cel Specific TargetingAgent[J].MolCels,2014,37(7): [24]JeongJW,ParkS,ParkC,etal.N benzyl N methyldecan 1 amine,a phenylamine derivative isolated from garlic cloves,inducesg2/m phasearestandapoptosisinu937 humanleukemia cels[j].oncolrep,2014,32(1): [25] 张翠丽, 曾涛, 王青山, 等. 大蒜油大蒜素茶多酚对四氯化碳急性肝损伤预防作用的比较 [J]. 毒理学杂志, 2008,22(06): [26] 王倩, 曾涛, 于丽华, 等. 大蒜油对大鼠实验性脂肪肝的预防作用 [J]. 毒理学杂志,2007,21(06): [27] AdemiluyiA O,ObohG,OwoloyeTR,etal.Modulatory efectsofdietaryinclusionofgarlic(alium sativum)on gentamycin inducedhepatotoxicityandoxidativestresin ats[j].asianpacjtropbiomed,2013,3(6): [28] ShivashankaraAR,AzmidahA,HaniadkaR,etal.Dietary agentsinthepreventionofalcohol inducedhepatotoxicity: preclinicalobservations[j].food Funct,2012,3(2): [29] 王艳. 大蒜油治疗过敏性鼻炎临床观察 [J]. 中国校医, 2010,24(6): [30] 闫捷, 赵盛, 李阳, 等. 大蒜油对正己烷致大鼠周围神经病变影响 [J]. 中国公共卫生,2010,26(10): ( 收稿日期 ) 檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿 ( 上接第 1086 页 ) 参考文献 [1] 王伟萍, 曹艳玲, 刘砥威. 阿娜尔妇洁液体外抑菌试验及杀菌曲线测定 [J]. 新疆中医药,2006,24(1): [2] 杨巧丽, 顾政一, 黄华. 中药苦豆子的研究进展 [J]. 西北药学杂志,2011,26(3): [3] 张琳娜, 白洁. 苦豆子药理作用的研究进展 [J]. 宁夏医学院学报,2004,26(3): [4] 陈艳, 张国刚, 余仲平. 蛇床子的化学成分及药理作用的研究进展 [J]. 沈阳药科大学学报,2006,23(4): [5] 吴寿荣, 程刚, 冯岩. 冰片药理作用的研究进展 [J]. 中草药,2001,32(12): [6] 黄韶光, 韩友林, 罗志刚. 阿娜尔妇洁液的质量研究 [J]. 农垦医学,2002,24(3): [7] 张为民, 张彦明, 张涛, 等. 苦豆子生物碱抑菌抗炎作用研究 [J]. 动物医学进展,2005,10(26): [8] 郑立卿, 张力, 董晓华. 蛇床子素药理作用研究进展 [J]. 神经药理学报,2013,3(6): [9] 韩刚, 翟丽, 王炳强. 高效液相色谱法测定不同产地苦参中生物碱的含量 [J]. 华北煤炭医学院学报,2005,7(2): [10] 史银基, 刘砥威, 石雪, 等.HPLC 测定阿娜尔妇洁液中苦参碱的含量 [J]. 中国实验方剂学杂志,2012,18(14): ( 收稿日期 ) 1112

麦门冬对照药材批号１２１０１３唱２０１３１０均购自中国食品药品检定研究院芪黄扶正颗粒批号１６０３０１１６０３１５１６０３３１福州总医院制剂室自制甲醇乙腈为色谱纯水为超纯水其余试剂为分析纯２ＴＬＣ鉴别２１黄芪取芪黄扶正颗粒１０ｇ溶解于５０ｍｌ水中

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