年版一部以绿原酸 木犀草苷为其质量控制的指标 ; 方中臣药赤芍含有单萜类 酚类 黄酮类 鞣质类等成分, 其中单萜类主要为芍药苷 芍药内酯苷等, 中华人民共和国药典 2015 年版一部以芍药苷为其质量控制的指标 ; 方中佐药防风含有挥发油 色原酮类 有机酸 香豆素类等成分, 中华人民共和国药典 201

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1 年 月 第 卷 第 期 中国现代中药 M C M M V N 中药工业 HPLC波长切换法同时测定仙方活命片中 个成分的含量 刘源 丁广军 陈慧慧 商丘市第一人民医院 药学部 河南 商丘 摘要 目的 建立 HPLC波长切换法同时测定仙方活命片中绿原酸 木犀草苷 木犀草素 芍药苷 升麻素 甲基维斯阿米醇苷的方法 方法 采用 A S BC mm mm μm 色谱柱 以乙腈 甲醇 苷和 和 磷酸溶液为流动相 梯度洗脱 流速为 ml m 柱温为 进样量为 μl 结果 绿原 甲基维斯阿米醇苷分别在 酸 木犀草苷 木 犀 草 素 芍 药 苷 升 麻 素 苷 和 m L 与峰面积呈良好的线性关系 平均加样回收率分 别为 和 结论 该方法可为仙方活命片质量控制提 供参考 关键词 仙方活命片 绿原酸 木犀草苷 木犀草素 芍药苷 升麻素苷 甲基维斯阿米醇苷 波长切换法 S m D m S xc X H m T W Sw HPLCM LI UY DI NGG j CHENH D m m S q F P H S q H C A Oj T m m m m m m mm X H m w w HPLCm M AA S BC mm mm μm m mw m w m w w ml m T m m w T m q w μlr C m m m mm w m L w T w C T m X H m m q K w X H m m m mm w w m m j 仙方活命片处方源于 卫生部颁药品标准 中 药成方制剂第十七册 由金银花 防风 赤芍等 味中药材加工而成 临床上主要用于火毒壅盛 痈疽疮疡 红肿热痛 脓成不溃等症状的治疗 方 中金银花为忍冬科植物忍冬 L j T 的干燥花蕾或带初开的花 性味甘寒 最善清热解 毒疗疮 故重用为君药 配以赤芍 当归尾 乳香 没药 陈皮行气活血通络 消 肿 止 痛 共 为 臣 药 佐以防风 白芷通滞散结 浙贝母 天花粉清热化 通信作 者 痰 结皂角刺 穿山甲通行经络 透脓溃坚 甘草 清热解毒 调和诸药 诸药合 用 共 奏 清 热 解 毒 散瘀消肿 化脓生肌之功 仙方活命片现行质量标准仅有理化鉴别项 在 质量控制中尚显不足 也未检索到对该制剂定量测 定的文献报道 方中君药金银花含有有机酸 黄酮 皂苷及鞣质等化学成分 其中有机酸主要为绿原酸 异绿原酸和咖啡酸等 黄酮类主要为木犀草素 忍 冬苷和木犀草苷等 中华人民共和国药典 刘 源 主 管 药 师 研 究 方 向 药 物 质 量 分 析 和 医 院 药 学 相 关 研 究 T E m m

2 年版一部以绿原酸 木犀草苷为其质量控制的指标 ; 方中臣药赤芍含有单萜类 酚类 黄酮类 鞣质类等成分, 其中单萜类主要为芍药苷 芍药内酯苷等, 中华人民共和国药典 2015 年版一部以芍药苷为其质量控制的指标 ; 方中佐药防风含有挥发油 色原酮类 有机酸 香豆素类等成分, 中华人民共和国药典 2015 年版一部以升麻素苷 5 O 甲基维斯阿米醇苷为其质量控制的指标 本研究采用 HPLC 波长切换法, 对仙方活命片方中金银花所含绿原酸 木犀草素 木犀草苷, 赤芍所含芍药苷, 防风所含升麻素苷 5 O 甲基维斯阿米醇苷进行同时测定研究, 检测方法简便 快速 灵敏 准确, 适用于仙方活命片质量控制分析, 对进一步提高仙方活命片质量标准提供了数据支持 1 仪器与试药 1 1 仪器 Agilent1260 型全自动高效液相色谱仪 ( 美国安捷伦公司 );BS224S 型电子分析天平 ( 十万分之一, 德国赛多利斯公司 );ASS150 型超声波提取器 ( 济宁科特超声电子有限责任公司 ) 1 2 试药仙方活命片 ( 规格 : 每片重 0 35g) 来源于广东万年青制药有限公司 ; 绿原酸对照品 木犀草苷对照品 木犀草素对照品 芍药苷对照品 升麻素苷对照品 5 O 甲基维斯阿米醇苷对照品 ( 中国食品药品检定研究院, 批号分别为 ); 甲醇 乙腈为色谱纯 ; 其他试剂均为分析纯 2 方法 2 1 色谱条件采用 AgilentSBC 18 (250mm 4 6mm,5μm) 色谱柱 ; 流动相 A: 乙腈 甲醇 (1 1), 流动相 B: 0 4% 磷酸溶液, 梯度洗脱 [3 4] (0~10min,15 0% A;10~24min,15 0%A 32 0%A;24~31min, 32 0%A 38 0%A;31~39min,38 0%A 50 0% A;39~45min,50 0%A 15 0%A);0~16min 时在 326nm [5] 波长下检测绿原酸,16~24min 在 350nm [5 7] 波长下检测木犀草苷和木犀草素,24~ 31min 时在 230nm [6,8 9] 波长下检测芍药苷,31~ 45min 在 254nm [6,10 11] 波长下检测升麻素苷和 5 O 甲基维斯阿米醇苷 ; 流速 :0 8mL min -1 ; 柱温 : 30 ; 进样量为 10μL 2 2 溶液的制备 对照品溶液的制备分别精密称取对照品绿原酸 木犀草苷 木犀草素 芍药苷 升麻素苷和 5 O 甲基维斯阿米醇苷各适量, 用甲醇分别制成单一成分对照品储备溶液 ( 绿原酸 2 164g L -1 木犀草苷 0 572g L -1 木犀草素 0 436g L -1 芍药苷 1 494g L -1 升麻素苷 1 532g L -1 5 O 甲基维斯阿米醇苷 0 718g L -1 ) 再分别依次吸取各对照品储备溶液 mL, 置同一 100mL 量瓶中, 用甲醇稀释至刻度, 即得混合对照品溶液 供试品溶液的制备取仙方活命片, 研细, 取约 1 0g, 精密称定, 置 50mL 量瓶中, 加甲醇适量, 超声提取 30min, 放冷至室温, 用甲醇稀释至刻度, 摇匀, 过滤, 取续滤液, 即得仙方活命片供试品溶液 阴性样品溶液的制备按仙方活命片质量标准项下的处方和生产工艺, 分别制备缺金银花阴性样品 缺防风阴性样品和缺赤芍阴性样品, 按 所述的制备方法制成阴性样品溶液 2 3 专属性试验精密吸取 项下的溶液, 按照 2 1 项下色谱条件进行检测 结果显示, 在与对照品绿原酸 木犀草苷 木犀草素 芍药苷 升麻素苷和 5 O 甲基维斯阿米醇苷色谱图相应的保留时间处, 供试品溶液色谱图中有相应的色谱峰, 而阴性样品色谱图中未显示对应的色谱峰, 阴性无干扰, 专属性强, 色谱图见图 线性关系考察分别精密吸取 项下绿原酸 木犀草苷 木犀草素 芍药苷 升麻素苷和 5 O 甲基维斯阿米醇苷对照品储备溶液各 10 0mL, 用甲醇定容至 100mL, 作为线性关系工作溶液 Ⅰ, 再用甲醇分别稀释 倍, 依次制得线性关系工作溶液 Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ 按照 2 1 项下色谱条件进行测定, 采用质量浓度 (mg L -1 ) 为横坐标 (X), 峰面积为纵坐标 (Y), 进行线性回归, 见表 1 333

3 注 :A 对照品溶液 ;B 供试品溶液 ;C 金银花阴性样品溶液 ;D 赤芍阴性样品溶液 ;E 防风阴性样品溶液 ;1 绿原 酸 ;2 木犀草苷 ;3 木犀草素 4 芍药苷 ;5 升麻素苷 ;6 5 O 甲基维斯阿米醇苷 图 1 对照品 供试品 金银花阴性样品 赤芍阴性样品和防风阴性样品 HPLC 图 表 1 线性关系试验结果 所测组份 回归方程 线性范围 /mg L -1 r 绿原酸 Y= X ~ 木犀草苷 Y= X ~ 木犀草素 Y= X ~ 芍药苷 Y= X ~ 升麻素苷 Y= X ~ O 甲基维斯阿米醇苷 Y= X ~ 精密度试验取 项下的混合对照品溶液, 按照 2 1 项下色谱条件测定, 连续进样 6 次, 测定峰面积, 结果绿原酸 木犀草苷 木犀草素 芍药苷 升麻素苷和 5 O 甲基维斯阿米醇苷峰面积的 RSD 分别为 0 63% 0 99% 1 13% 0 87% 1 02% 和 0 90% 2 6 重复性试验取同一批次仙方活命片样品 6 份, 按照 的方法制备供试品溶液, 再按照 2 1 项下色谱条件 334 进样测定, 分别计算绿原酸 木犀草苷 木犀草素 芍药苷 升麻素苷和 5 O 甲基维斯阿米醇苷的含量, 并计算所测组分含量的 RSD, 结果所测组分的 RSD 依次为 1 04% 0 37% 1 44% 0 79% 1 26% 和 1 51% 2 7 稳定性考察取同一仙方活命片供试品溶液, 室温下放置 h, 按照 2 1 项下色谱条件进样测定, 记录绿原酸 木犀草苷 木犀草素 芍药苷

4 升麻素苷和 5 O 甲基维斯阿米醇苷的峰面积值, 结果仙方活命片供试品溶液室温下 16h 内稳定, 所测各成分峰面积的 RSD 分别为 0 59% 1 17% 1 06% 0 74% 0 96% 和 1 01% 2 8 加样回收率试验称取已知含量的仙方活命片 6 份, 每份约 0 5g, 研细, 精密称定, 分别精密加入绿原酸对照品溶液 (0 627g L -1 )5 0mL 木犀草苷对照品溶液 (0 381g L -1 )1 0 ml 木犀草素对照品溶液 (0 306g L -1 )1 0mL 芍药苷对照品溶液 (0 689g L -1 ) 3 0mL 升麻素苷对照品溶液 (0 937 g L -1 ) 2 0mL 5 O 甲基维斯阿米醇苷对照品溶液 (0 993g L -1 )1 0mL, 甲醇适量, 按照供试品溶液制备方法制备加样回收样品溶液 再按照 2 1 项下色谱条件及上述检测方法, 计算这 6 个组分的回收率及 RSD, 结果见表 2 表 2 绿原酸 木犀草苷 木犀草素 芍药苷 升麻素苷和 5 O 甲基维斯阿米醇苷的回收率 (n=6) 成分 称取量 /g 样品中含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 (%) 平均值 (%) RSD(%) 绿原酸 木犀草苷 木犀草素 芍药苷 升麻素苷 O 甲基维斯阿 米醇苷

5 年 月 第 卷 第 期 中国现代中药 样品含量测定 M C M M V N 总结 取 批仙方活命片 按照 的方法制备供 试品溶液 再按照 项下色谱条件进样 测定绿 原酸 木犀草苷 木犀草素 芍药苷 升麻素苷和 本研究建立了 HPLC波长切换法同时测定仙方 活命片中绿原酸 木犀草苷 木 犀 草 素 芍 药 苷 甲基维斯阿米醇苷的方法 该方法 升麻素苷和 甲基维斯阿米醇苷含量 结果见表 溶液制备简便 快速 稳定性好 所建立的方法灵 表 含量测定结果 m 批号 绿原酸 木犀 草苷 木犀 草素 芍药苷 升麻 素苷 甲基维斯 阿米醇苷 敏度高 准确性好 测定结果准确可靠 重复性好 对进一步提高仙方活命片质量标准提供了数据支持 确保了仙方活命片的产品质量和疗效的一致性 参考文献 中华人民共和国卫生部药典委员会 卫生部颁药品标 准 中药成方制剂 第十七册 S 北京 人民卫生出版 讨论 社 庞博 董军杰 庞国勋 清热解毒类中药的药理作用及临 检测波长的选择 取所测各 成 分 绿 原 酸 木 犀 草 苷 木 犀 草 素 芍药苷 升麻素苷和 甲基维斯阿米醇苷对照品 m波长范围内进行紫 储备溶液适量 在 m处有最大吸收 木犀 外扫描 结果绿原酸在 草苷和木犀草素在 m处有最大吸收 芍药苷在 m处有最大吸收 升麻素苷和 甲基维斯阿 m处有最大吸收 同时参考 中国人 米醇苷在 民共和国药典 年版一部金银花 赤芍和防风 项下各成分的检测波长 结合液相色谱图 最终确 时在 m波长下 定采用波长切换法 m 检测绿原酸 m 在 m波长下检测木犀 草苷和木犀草素 m 时在 m波长下检 床应用探讨 J 临床合理用药 A 艾光丽 王维 曾桢 等 HPLC法同时测定银黄颗粒中 种成分 J 中成药 俞敬波 章军 王文全 等 赤芍野生品与栽培品 种化 中国实验方剂学杂志 学成分含量的比较 J 郭琪 闫艳 王海波 等 HPLC波长切换法同时测定清热 解毒颗粒中 个成分的含量 J 药物分析杂志 国家药典委员会 中华人民共和国药典 一部 M 北 京 中国医药科技出版社 王春秋 李雯霞 RP HPLC法同时测定金银花中 种化 中成药 学成分 J 胡世林 付桂兰 冯学锋 等 不同产地和部位赤芍中芍 测芍药苷 m 在 m波长下检测升麻素 药苷的 含 量 测 定 J 中 国 中 药 杂 志 苷和 甲基维斯阿米醇苷 样品制备方法的优化 在选择样品溶液制备方法时 本文分别对提取 方法 超声提取 加热回流提取 提取溶剂 甲醇 甲 醇 甲 醇 水 提 取 时 间 m 进行了对比考察 以所测各成分绿原酸 木 犀草苷 木犀草素 芍药苷 升麻素苷和 甲基 陈述 HPLC法测定不同产地赤芍中芍药苷的含量及重 金属和残留农药的分析 J 世界中医药 李悦悦 王慧 陈俊 等 HPLC法测定防风中升麻苷 升 麻素 甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的含量 J 药 学实践杂志 姜艳艳 刘斌 石任兵 高效液相色谱法测定防风色原酮 维斯阿米醇苷的提取率和操作的便捷性为指标 优 北京中医药大学学报 部位中 种成分含量 J 选最佳的样品制备方法为甲醇超声提取 m 收稿日期

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