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1 (250.0 mm 4.6 mmꎬ5 μm) column at 25.An isocratic elution with methanol and 0.1 formic acid was used at a flow rate of 1 ml / min. An aliquot of 20 μl of sample solution was injected onto the column and the detection wavelength was 330 nm. Results TLC spots features of Roucongrong ( Cistanches Herba) and Gouqizi( Lycii Fruc tus) were clear with strong specificity.the linear ranges of echinacoside and verbascoside were 41.8 to 418.0 μg / ml ( r 0. 999 9) and 40 to 400 μg / ml ( r 0. 999 9). The average sample recoveries were 99. 58 ( RSD 0.85 ) and 99.31 ( RSD 1.13 ).Conclusion The methods reported in this paper can be used scientifically and effectivelly to evaluate the quality of Roucongrong Gouqi Jujuepian. Key words: Roucongrong Gouqi JujuepianꎻHPLCꎻTLCꎻechinacosideꎻverbascosideꎻquality standard 健脾瘦身丸的质量标准研究 王 艳1 ꎬ刘光斌1 ꎬ李怀彪2 ꎬ赵丽萍1 (1.酒钢医院药学部ꎬ甘肃 嘉峪关 735100ꎻ 2.嘉峪关市食品药品和医疗器械检验检测中心中药检验科ꎬ甘肃 摘要:目的 嘉峪关 建立健脾瘦身丸的定性与定量检测方法ꎬ并制定质量标准ꎮ 方法 735100) 对健脾瘦身丸中的决明 子和山楂采用薄层色谱( TLC) 法进行定性鉴别ꎬ对决明子中的有效成分大黄酚采用高效液相色谱( HPLC) 法进行含量测定ꎬ色谱柱为 Inertsil ODS SP(4.6 mm 150.0 mmꎬ5 μm) ꎬ流动相为乙腈 0.1 磷酸溶液(60 40) ꎬ检测波长 430 nmꎬ流速 1.0 ml / minꎬ柱温 30 ꎬ进样量 10 μlꎮ 结果 所建立的 TLC 法斑点清晰ꎬ分离 效果好ꎬ且阴性无干扰ꎮ 含量测定中大黄酚的回归方程为 Y 4.621 74 10 5 X 0.023 729ꎬr 0.999 9ꎬ表明大 黄酚在 0.045 ~ 0.680 μg 范围内呈良好的线性关系ꎮ 计算得平均加样回收率为 97.20 ꎬRSD 为 0.97 ꎮ 结论 本研究建立的健脾瘦身丸的定性与定量检测方法操作简便 专属性强ꎬ结果准确可靠ꎬ可用于健脾瘦身丸 的质量控制ꎮ 关键词:健脾瘦身丸ꎻ大黄酚ꎻ高效液相色谱法ꎻ薄层色谱法ꎻ含量测定 中图分类号:R284.2 文献标志码:B 文章编号:1003 8450(2018)05 0045 05 DOI:10.16841 / j.issn1003 8450.2018.05.10 健脾瘦身丸是我院的院内制剂ꎬ主治肥胖及因 肥胖所致的脾运失司 湿阻痰滞的相关症状ꎬ本制剂 主要由山楂 决明子 茯苓 枸杞子等组成ꎬ具有健 脾 利湿 下气的功效ꎬ对脾湿困阻 水饮内停所致的 肥胖 水 肿 有 独 特 的 疗 效ꎮ 笔 者 采 用 薄 层 色 谱 ( TLC) 法对该制剂中的决明子和山楂进行定性鉴 别ꎬ对处方中决明子的主要成分大黄酚采用高效液 相色谱( HPLC) 法进行含量测定ꎬ为健脾瘦身丸的 质量控制提供依据ꎮ 1 1.1 仪器与试药 仪器 LC 2010AHT 高 效 液 相 色 谱 仪 ( 日 本 岛 津 公 司) ꎬ AUW220D 电 子 分 析 天 平 ( 日 本 岛 津 公 司) ꎬ UV756MC 紫 外 可 见 分 光 光 度 仪 ( 奥 谱 勒 公 司 ) ꎬ KMH1 1100U 型超声清洗仪ꎬ硅胶 G 薄层板( 青岛 海洋化工厂) ꎮ 1.2 试药 大黄酚 对 照 品 ( 购 自 中 国 食 品 药 品 检 定 研 究 院ꎬ批号 110796 201621) ꎬ大黄素对照品( 购自中国 食品药品检定研究院ꎬ批号 110757 201607) ꎬ决明 子对照药材( 购自中国食品药品检定研究院ꎬ批号 121011 201506) ꎬ健脾瘦身丸( 院内制剂ꎬ批号分别 为 20170616ꎬ20170712ꎬ20170821) ꎬ乙腈 甲醇均为 色谱纯ꎬ水为超纯水ꎬ其余试剂均为分析纯ꎮ 收稿日期:2017 12 07 作者简介:王艳(1975 ) ꎬ女ꎬ副主任药师ꎬ医学学士ꎮ 研究方向:药物分析及中药质量控制与评价ꎮ 通信作者:刘光斌(1970 ) ꎬ男ꎬ主任药师ꎬ医学学士ꎮ 研究方向:药物分析及中药质量控制与评价ꎮ E mail:liuguangbin jiugang.com 45

2 2 2.1 共和国药典» 2015 版( 四部) 通则 0502 中的薄层鉴 方法与结果 称取健脾瘦身丸样品粉末 3 gꎬ置 别法ꎬ分别吸取上述 3 种溶液各 2 μlꎬ点于同一硅 胶 G 薄 层 板 上ꎬ 然 后 以 环 己 烷 氯 仿 乙 酸 乙 酯 过滤后置于水浴锅上蒸发至 1 mlꎬ 作为供试品溶 硫酸(9 1) 溶液显色后ꎬ 加热至 80 ꎬ 使斑点清 2.1.1 薄层鉴别 山楂 [1] 于三角瓶中ꎬ加入 4 ml 乙酸乙酯ꎬ超声处理 15 minꎬ 液ꎮ 称取健脾瘦身丸( 缺山楂) 粉末 3 gꎬ采用供试 品溶液的制备方法制成阴性对照溶液ꎮ 精密称取熊 果 酸 对 照 品ꎬ 加 入 乙 酸 乙 酯 制 成 质 量 浓 度 为 0.5 mg / ml的熊果酸对照品溶液ꎮ 按照 «中华人民 (20 5 8) 为展开剂展开ꎬ取出ꎬ晾干ꎬ喷乙酸酐 晰ꎬ分别在日光与紫外灯(365 nm) 下检视ꎮ 结果在 供试品与对照品相应的位置上显相同颜色的斑点ꎬ 紫外灯下呈相同颜色的荧光斑点ꎬ且阴性无干扰ꎮ 详见图 1ꎮ Aꎬ日光ꎻBꎬ紫外灯ꎻ1ꎬ熊果酸对照品ꎻ2ꎬ阴性对照ꎻ3 ~ 5ꎬ供试品ꎮ 图1 山楂 TLC 图 2.1.2 决明子 [2 3] 称取健脾瘦身丸样品粉末 5 gꎬ 加入稀硫酸和三氯甲烷各 20 mlꎬ水浴回流 15 min 1.0 ml / minꎬ柱温 30 ꎬ进样量 10 μlꎬ理论塔板数 溶液ꎮ 称取健脾瘦身丸( 缺决明子) 粉末 5 gꎬ采用 2.2.2 称取决明子对照药材 0.5 gꎬ按上述方法制成对照药 质量浓度为 0. 113 4 mg / ml 的大黄酚对照品储备 后分次萃取三氯甲烷层ꎬ蒸发至 1 mlꎬ作为供试品 与制备供试品溶液相同的方法制成阴性对照溶液ꎮ 材溶液ꎻ再分别精密称取大黄素与大黄酚对照品ꎬ加 入甲醇ꎬ制成质量浓度为 0.5 mg / ml 的混合对照品 溶液ꎮ 按照«中华人民共和国药典» 2015 版( 四部) 酸溶 液 ( 60 40 ) ꎬ 检 测 波 长 430 nmꎬ 流 速 按大黄酚计应不低于 2 000ꎮ 对照品溶液的制备 精密称定大黄酚对照 品 0.005 67 gꎬ用甲醇溶解至 50 ml 容量瓶中ꎬ制成 液ꎬ精密吸取上述溶液 2 mlꎬ用甲醇定容至10 ml容 量瓶中ꎬ得质量浓度为 22.68 μg / ml 的大黄酚对照 品溶液ꎮ 通则 0502 中的薄层鉴别法ꎬ分别吸取供试品溶液和 2.2.3 品溶液各 5 μlꎬ点于同一硅胶 G 薄层板上ꎬ以石油 醚(30 ~ 60 ) 甲酸乙酯 甲酸(15 5 1) 的上层 色谱级甲醇 50 mlꎬ密塞称重ꎬ超声处理 40 minꎬ冷 阴性对照溶液各 10 μl 对照药材溶液和混合对照 溶液为展开剂展开ꎬ分别在日光与紫外灯(365 nm) 下检视ꎮ 结果在供试品与混合对照品及对照药材相 应的位置上显相同颜色的斑点ꎬ紫外灯下呈相同颜 色的荧光斑点ꎬ且阴性无干扰ꎮ 详见图 2ꎮ 2.2 含量测定 色 谱 条 件 色 谱 柱 为 Inertsil ODS SP (4.6 mm 150.0 mmꎬ5 μm) ꎬ流动相为乙腈 0.1 磷 2.2. 1 46 供试品溶液的制备 称取健脾瘦身丸样品 粉末 5.5 gꎬ精密称定ꎬ置于三角瓶中ꎬ用移液管加入 却后进行第 2 次称重ꎬ加入甲醇补足减失的质量ꎬ振 摇均匀ꎬ离心ꎬ取上层液 35 mlꎬ加入 3 ml 盐酸加热 回流 2 hꎬ对大黄酚进行水解ꎬ置冷后转移至 50 ml 容量瓶中ꎬ加入甲醇至刻度ꎬ微孔滤膜(0.22 μm) 过 滤即得ꎮ 2.2.4 阴性对照溶液的制备 同法制备阴性对照 溶液( 缺决明子) ꎬ制备方法同 2.2.3 项下供试品溶 液的制备方法ꎮ

3 Aꎬ紫外灯ꎻBꎬ日光ꎻ1ꎬ阴性对照品ꎻ2ꎬ混合对照品ꎻ3ꎬ对照药材ꎻ4 ~ 6ꎬ供试品ꎮ 图2 2.2.5 决明子 TLC 图 分别精密吸取对照品溶液 供 专属性试验 试品溶液及阴性对照溶液各 10 μlꎬ按照 2.2.1 项 下色谱条件测定ꎮ 详见图 3ꎮ 浓度为纵坐标( Y) 进行线性回归ꎬ得回归方程为Y 4.621 74 10 5 X 0.023 729ꎬr 0.999 9ꎬ表明大黄酚 在 0.045 ~ 0.680 μg 范围内呈良好的线性关系ꎮ 2.2.7 精密度试验 精密吸取大黄酚对照品溶液 10 μlꎬ注入高效液相色谱仪ꎬ连续进样 5 次ꎬ按照 2.2.1 项下色谱条件测定峰面积ꎮ 结果测得大黄 酚 RSD 为 0.21 ꎬ表明仪器精密度良好ꎮ 2.2.8 重复性试验 精密称取 5 份同一批健脾瘦 身丸样品ꎬ按照 2.2.3 项下方法分别制备供试品溶 液ꎬ然后按照 2.2.1 项下色谱条件测定峰面积ꎮ 结 果测 得 大 黄 酚 平 均 含 量 为 0. 19 mg / gꎬ RSD 为 0.31 ꎬ表明该法重复性良好ꎮ 2.2.9 稳定性试验 取同一批次健脾瘦身丸样品 5.5 gꎬ按照 2.2.3 项下方法分别制备供试品溶液ꎬ 然后按照 2.2.1 项下色谱条件分别在 0ꎬ1ꎬ2ꎬ4ꎬ6ꎬ 8 h测定峰面积ꎮ 结果测得大黄酚 RSD 为 0.46 ꎬ表 明本品在 8 h 内稳定ꎮ 2.2.10 加样回收率试验 精密称取已知含量的样 品(0.19 mg / g) 约 5.5 gꎬ共 9 份ꎬ分别精密加入大黄 Aꎬ对照品ꎻBꎬ供试品ꎻCꎬ阴性对照ꎮ 图3 2.2.6 健脾瘦身丸 HPLC 图 线性关系考察 分别配制质量浓度为 4.54ꎬ 11.34ꎬ22.68ꎬ34.02ꎬ45.36ꎬ68.04 μg / ml 的系列对照 品溶液ꎬ摇匀ꎬ过滤ꎬ按照 2. 2. 1 项下色谱条件测 定ꎮ 以峰面积积分值为横坐标( X) 对照品溶液质量 酚储 备 溶 液 ( 质 量 浓 度 为 0. 113 4 mg / ml) 6. 90ꎬ 8.60ꎬ10.00 mlꎬ按照 2.2.1 项下色谱条件测定大黄 酚含量ꎮ 计算得平均加样回收率为 97.20 ꎬRSD 为 0.97 ꎬ表明该法加样回收率良好ꎮ 详见表 1ꎮ 2.2.11 样品含量测定 精密称取不同批次的健脾 瘦身丸样品 3 份ꎬ按照 2.2.3 项下方法分别制备供 试品溶液ꎬ然后按照 2.2.1 项下色谱条件测定ꎮ 详 见表 2ꎮ 47

4 第 35 卷第 5 期 2018 年 10 月 J GANSU UNIVERSITY OF CHINESE MEDICINE Vol 35 No 5 Oct.2018 表 1 大黄酚加样回收率试验结果 (n = 9) 序号 取样量 / g 样品含量 / mg 加入量 / mg 测得量 / mg 回收率 / % 平均回收率 / % RSD / % 表 2 样品含量测定结果 (n = 3) 序号 批号 样品含量 / (mg / g) 平均值 / (mg / g) RSD / % 讨论 文献报道决明子中蒽醌类化合物一般以结合态 存在 ꎬ 易溶于甲醇 ꎬ 在水中有一定溶解度 ꎮ 蒽醌类化 合物的提取方法有加热回流 超声和微波提取等 ꎬ 笔 者经验证 ꎬ 最终采用甲醇超声提取 40 minꎬ 并加入盐 酸加热回流水解的方法对样品进行预处理 ꎬ 所得大 黄酚提取和水解均较完全 ꎬ 可用于含量测定 ꎮ 在对 制剂中的药材决明子进行定性鉴别时 ꎬ 使用药典中 [2] 收载的决明子药材的鉴别方法后 ꎬ 样品的斑点拖 尾严重 ꎬ 经反复查阅文献后改用三氯甲烷提取 ꎬ 并改 变展开剂进行试验 ꎬ 结果斑点清晰 ꎬ 基本无拖尾 ꎮ 在 对制剂进行定量分析时 ꎬ 用 2 种流动相 ( 甲醇 -0.1% 磷酸溶液和乙腈 -0.1% 磷酸溶液 ) 分别以不同比例 在波长 225ꎬ254ꎬ430ꎬ440 nm 处测定样品中大黄酚 的含量 [2-6] ꎮ 结果发现 ꎬ 虽然甲醇 -0.1% 磷酸溶液在 254 nm 处所得峰形较好 ꎬ 但主峰保留时间较短 ꎬ 与 杂质峰分离不好 ꎬ 对样品测定有干扰 ꎬ 在 440 nm 处 又有拖尾 ꎬ 而使用乙腈 -0.1% 磷酸溶液 (60 40) 作 为流动相 ꎬ 在 430 nm 处测定大黄酚 ꎬ 结果样品主峰 保留时间适中 ꎬ 分离度大于 1. 5ꎬ 符合规定 ꎮ 通过考证 ꎬ 本试验所用方法具有较好的精密度 重复性 稳定性和加样回收率 ꎬ 能用作健脾瘦身丸的质量控制 ꎮ 参考文献 : [1] 温伟波 ꎬ 曹拥军 ꎬ 马云叔 ꎬ 等. 健肝消脂颗粒的质量控制研究 [J]. 中成药 ꎬ2009ꎬ31(5):746. [2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典 ( 一部 ) [ M]. 北京 : 中国医药科技出版社 ꎬ2015:145ꎬ507. [3] 雷宁 ꎬ 张颖 ꎬ 马萍. 复方决明子胶囊的质量标准研究 [ J]. 中国药房 ꎬ2011ꎬ22(3): [4] 庄妍 ꎬ 曾文丽 ꎬ 朱红. 高效液相色谱法测定千柏鼻炎分散片中大黄酚的含量 [J]. 江西中医药 ꎬ2007ꎬ38(299): [5] 廖强 ꎬ 韦日伟 ꎬ 黄海涛.ASE HPLC 法快速测定决明子中大黄酚和橙黄决明素 [ J]. 中国药师 ꎬ2017ꎬ20( 5): [6] 刘光斌 ꎬ 李怀彪 ꎬ 谢六生 ꎬ 等. 大黄通气口服液的质量标准研究 [J]. 中国中医药信息杂志 ꎬ2011ꎬ18(7): [ 编辑 : 陈正君 ] 48

5 第 35 卷第 5 期 2018 年 10 月 J GANSU UNIVERSITY OF CHINESE MEDICINE Vol 35 No 5 Oct.2018 Study on quality standard for Jianpishoushen Pills WANG Yan 1 ꎬLIU Guangbin 1 ꎬLI Huaibiao 2 ꎬZHAO Liping 1 (1.Pharmaceutical DepartmentꎬJiugang Hospital of Gansu ProvinceꎬJiayuguanꎬGansuꎬ735100ꎬChinaꎻ 2.Jiayuguan Food and Medicine and Medical Equipment Inspection and Testing CenterꎬJiayuguanꎬ Gansuꎬ735100ꎬChina) Abstract: Objective To establish the qualitative and quantitative determination methods and set quality standard for Jianpishoushen Pills. Methods TLC was used to qualitative identification of Shanzha( Crataegi fruc tus) and Juemingzi ( Cassina semen) in Jianpishoushen Pillsꎻ HPLC was used to content determination of chry sophanol in Cassina semenꎻinertsil ODS SP(4.6 mm mmꎬ5 μm) chromatography column was used with the mobile phase of acetonitrile 0.1% phosphoric acid (60 40) ꎬdetermine wavelength was 430 nmꎬthe flow rate was 1.0 ml / minꎬthe column temperature was 30 ꎬand sample size was 10 μl.results The TLC spots were fairly clear and the result of separation was good. Moreoverꎬthe negative control showed no interference. The regression equation of content determination of Chrysophanol was Y = X ꎬr = ꎬwhich showed that there was a good linear relationship at the range of to μg (r = ) for chrysophanolꎻthe av erage recovery was 97.2% and RSD was 0.97%.Conclusion The qualitative and quantitative method established in this study is simpleꎬspecificꎬaccurate and reliableꎬwhich can be used for the quality control. Key words: Jianpishoushen PillsꎻchrysophanolꎻHPLCꎻTLCꎻcontent determination «中医儿科杂志» 征稿启事 «中医儿科杂志» 是国内外公开发行的全国唯一一种中医儿科专业杂志 ꎬ 是中华中医药学会系列期刊之一 ꎮ 本刊主要报道中医儿科临床 科研与教学成果 ꎬ 设有专家诊疗经验 专题笔谈 理论研究 学术探讨 实验研究 临床研究与报道 针灸推拿 中药研究 教学研究 医案医话 文献综述 研究生园地 名院名科名医风采 儿童保健等栏目 ꎮ 在突出中医儿科特色的同时 ꎬ 还兼顾中西医结合儿科研究 ꎮ 欢迎广大作者投稿 ꎮ 凡各类基金资助项目及各级科研课题论文 ꎬ 一经审查合格即优先发表 ꎬ 且稿酬从优 ꎮ 文稿请注明作者单位及邮政编码 ꎬ 并附第一作者姓名 ( 出生年 ) 性别 职称 学位 主要研究方向 ꎮ 临床报道和实验研究文稿 ꎬ 均请附单位证明或加盖公章 ꎬ 以负责其内容的核实和保密审查 ꎮ 属基金项目或科研项目论文 ꎬ 请在文稿后注明项目来源和编号 ꎮ «中医儿科杂志» 已被 «中国学术期刊综合评价数据库» «中国期刊全文数据库» 中国期刊网 中国学术期刊 ( 光盘版 ) «中国核心期刊 ( 遴选 ) 数据库» 等多家大型数据库全文收录 ꎮ 凡不愿被其转载文章者 ꎬ 请勿投本刊 ꎮ 稿件刊登后 ꎬ 将一次性支付作者稿酬 ( 包括刊物内容上网服务费 )ꎮ 投稿请登录 «中医儿科杂志» 网站 (http: zyekzz.gszy.edu.cn)ꎬ 通过在线投稿系统投稿并查询稿件处理情况 ꎮ 49

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g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min 25 4 2013 8 监测技术 5 1 2 1 ( 1. 江苏省疾病预防控制中心, 江苏南京 210009; 2. 南京医科大学第二附属医院, 江苏南京 210029) 5 Phenomenex kinetex C 18 2. 6 μm 4. 6 mm 150 mm 10 mmol /L ph 2. 5 + 60 40 DAD 280 nm 5 20. 0 mg /L ~ 100 mg /L 0.

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