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6 78 中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals, 46() 中药与天然药物 维吾尔药材苦豆子的质量标准 沈晓丽, 赵鹏, 苏来曼 哈力克 * ( 新疆维吾尔自治区食品药品检验所, 新疆乌鲁木齐 834) 摘要 : 采用 TLC 法定性鉴别维吾尔药材苦豆子, 建立 HPLC 法测定其中的氧化槐果碱 () 和氧化苦参碱 () 以氯仿 甲醇 浓氨试液 (4 ) 为展开剂,TLC 结果显示苦豆子中的 和槐定碱有效分离 HPLC 法采用氨基柱, 以乙腈 无水乙醇 3% 磷酸 (8 ) 为流动相, 检测波长 nm 和 均在 ~ µg/ml 浓度范围内线性关系良好 平均回收率为.% 和 4.7%,RSD 为.6% 和.3% 关键词 : 苦豆子 ; 氧化槐果碱 ; 氧化苦参碱 ; 薄层色谱 ; 高效液相色谱 ; 鉴别 ; 测定中图分类号 :R93 文献标志码 :A 文章编号 :-8()-78-3 DOI:.6/j.cnki.cjph...8 Quality Standard for Uighur Medicinal Herb Sophora alopecuroides L. SHEN Xiaoli, ZHAO Peng, SULEYMAN Halik* (Xinjiang Uygur Autonomous Region Institute of Food and Drug Control, Urumqi 834) ABSTRACT: A TLC method and an HPLC method were established for the identification of the Uighur medicinal herb Sophora alopecuroides L. and the determination of oxysophocarpine () and oxymatrine (), respectively. The TLC results showed that compounds, and sophoridine could achieve an effective separation with the developers of chloroform methanol concentrated ammonia solution (4 ). For the HPLC method, an NH column was used, with the mobile phase of acetonitrile absolute ethanol 3% phosphoric acid (8 ), at the detection wavelength of nm. The calibration curves for both and were linear in the concentration range of - µg/ml. Their average recoveries were.% and 4.7%, with RSDs of.6% and.3%, respectively. Key Words: Sophora alopecuroides L.; oxysophocarpine; oxymatrine; TLC; HPLC; identification; determination 苦豆子系维吾尔医习用药材, 为豆科植物苦 豆子 Sophora alopecuroides L. 的干燥成熟种子 具 有生干生寒 清热燥湿 消炎镇痛 止泻止痢的功 效, 临床用于湿热性或血液质性疾病, 如湿热痢疾 收稿日期 :-3-6 基金项目 : 国家药典委员会 中国药典 年版科研项目 (3-M46) 作者简介 : 沈晓丽 (983-), 女, 硕士, 药师, 从事中药民族药质 量标准研究 shenxiaoli9@sina.com 通信联系人 : 苏来曼 哈力克 (96-), 男, 主任药师, 教授, 从事 中药 维吾尔药材及制剂质量标准研究 Tel: suleyman@sina.cn 腹泻 肠炎 湿疹 胃痛 牙痛 咽痛等症 [,] [ 苦豆子药材中含有 多种生物碱类成分 3], 以氧化槐果碱 (oxysophocarpine,) 氧化苦参碱 (oxymatrine,) 槐定碱 (sophoridine,3) 和苦参碱 ( markine,4) 等为主 文献报道了以 HPLC 法同时测定苦豆子药材中的 3 4 金雀花碱和 [ 槐果碱 4] 苦豆子药材现行质量标准收载于 新疆维吾尔自治区维吾尔药材标准 年版 ( 第一册 ) [], 其中仅进行性状和薄层色谱 ( TLC) 鉴别 本研究对 TLC 方法作了改进, 并建立了 HPLC 法测定其中含量较高的 和, 以全面提升质量标准

7 79 中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals, 46() 的可控性 仪器与试药 LC-AT 型高效液相色谱仪和 Lab solution 色谱工作站 ( 日本 Shimadzu 公司 ) Camag Reprostar3 薄层色谱成像系 统 ( 瑞士卡玛柯公司 ) 硅胶 G 薄层预制板 ( 青岛海洋化 工厂分厂 厚度.. mm 规格 cm cm 批号 38) Merck TLC Silica gel 6( 德国 Merck 公司 规 苦豆子样品 3 3 对照品 4 对照品 定性用供试品溶液 3 定性用 3 对照品溶液 对照品 6 苦豆子对照药材 格 cm cm 批号 HX367) 4 定性用 对照品溶液 定性用 对照品溶液 ( 供 含 量 测 定 用 批 号 6-3) ( 供 含 6 对照药材溶液 量 测 定 用 批 号 78-7) 和 3( 供 鉴 别 用 批 号 图 TLC 鉴别色谱图 Fig. TLC Identification Chromatogram ) 对照品均购自中国食品药品检定研究院 苦豆子对照药材 ( 自制 批号 43) 批不同产地苦 豆子样品经本所苏来曼 哈力克主任药师鉴定均为豆科植物 苦豆子 Sophora alopecuroides L. 的干燥成熟种子 样品编号 批号和产地见表 乙腈 无水乙醇为色谱纯 水为超纯水 其他试剂均为分析纯 方法与结果. TLC 鉴别 取本品粉末. g 加入浓氨试液 ml 和氯仿 ml 超声处理 (3 W 9 khz) min 过滤 3 min 放冷 用氯仿补足减失的重量 摇匀 过 9 ml 上样于中性氧化铝柱 滤 精密量取续滤液 ( 目 g 内径 cm) 依次以氯仿 氯 3 6 仿 甲醇 ( 7 3) 混合溶液各 ml洗脱 收集洗 4 脱液 合并后回收溶剂蒸干 剩余物加入混合溶剂 3 适量使溶解 以混合溶剂定容 转移至 ml 量瓶中 摇匀 即得 色谱条件与系统适应性试验 取滤液蒸干 剩余物加甲醇 ml 溶解 作为定性 成对照药材溶液 取 3 对照品 分别加甲醇 ) 检测波长 nm 柱温 3 流速 制成 mg/ml 的定性用对照品溶液 照 TLC 法 ( 中. ml/min 进样量 µl 理论板数按 峰计不低 国药典 年版附录Ⅵ B) 试验 吸取上述溶液各 于 3 µ l 分别点于同一硅胶 G 薄层板上 以氯仿 甲 分别取对照品溶液和供试品溶液进样测定 记 醇 浓氨试液 ( 4 ) 为展开剂 展开 取 录色谱图 结果显示样品中各目标峰分离完全 结 出 晾干 喷以稀碘化铋钾试液 结果见图 可见 果见图 定性用供试品溶液图谱中 在与定性用对照品溶液..3 线性试验 分 别 精 密 量 取 对 照 品 贮 备 液 适 量 置. 含量测定 ml 量瓶中 用混合溶剂定容 制成 8.. 溶液配制 和 µ g/ml 的 系列浓度溶液 分 对照品溶液 精密称取 对照品适量 加 A 氨基柱 (4.6 mm mm B Zorbax 色谱柱 AgilentA 对照品(µg/ml)溶液 B 对照品(µg/ml)溶液 - (8 µm) 流动相 乙腈 无水乙醇 3 磷酸 - 用供试品溶液 另取苦豆子对照药材. g 同法制 图谱相应位置上 显相同的橙色斑点 6 4 别进样测定 以浓度 c 为横坐标 峰面积 A 为纵坐标 乙腈 无水乙醇 ( 8 ) ( 下称混合溶剂 ) 分别 进行线性回归 得回归方程 A=.6 7c+3. 制成浓度均为 mg/ml 的 对照品贮备液 4 r= A=. 7c r= 供试品溶液 精密称取本品粉末 ( 过 3 号筛 ) 均在 µ g/ml 范围内线性关系良好 检. g 置具塞锥形瓶中 加浓氨试液 ml 精密加 测限 (LOD) 为.3 和.3 µg/ml 定量限 (LOQ) 入氯仿 ml 称重 超声处理 (3 W 9 khz) 为.69 和.9 µg/ml

8 对照品 6 苦豆子对照药材 8 中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals, 46() A B C A 对照品(µg/ml)溶液 B 对照品(µg/ml)溶液 C 供试品溶液 A 对照品 ( µg/ml) 溶液 B 对照品 ( µg/ml) 溶液 C 供试品溶液 图 HPLC 色谱图 Fig. HPLC Chromatograms..4 精密度 稳定性和重复性试验 分别取浓度为 µg/ml 的 和 对照品溶液 连续测定 6 次 计算得峰面积的 RSD 为.8 和. 取同一供试品溶液 于室温下放置 每隔 4 h 测定 连续测定 7 次 计算得 峰面积的 RSD 为.84 和.4 (n=7) 表明供试品溶液在 4 h 内稳定 取同批样品适量 共 6 份 按.. 项下 方法分别制备供试品溶液 进样测定 结果 的平均含量为.3 和.86 RSD 为.93 和.9 表 样品测定结果 / Tab. Determination Results of Samples/ 样品编号 批号) 3 产地 莎车 伊犁 新疆 乌拉泊.. 33 乌拉泊 昌吉 福海 福海 塔城.. 39 塔城.4. 7 伊犁 平均 / 和田 /.3. ) 注 批号即为采集时间 如3表示年3月日采集.. 回收率试验 分别精密称取已知含量的苦豆子样品. g 3 讨论 共 9 份 各置具塞锥形瓶中 分别加入相当于供试 经验证 原标准方法 TLC 鉴别供试品溶液色 品溶液含量 8 和 的 对照品溶 谱中无 4 相对应斑点 同时将 3 误写为槐果碱 此 液 各 3 份 制备低 中 高浓度样品 按.. 外供试品溶液色谱拖尾较明显 故本试验改进了原 项下方法处理 进样测定 计算得 和 的平均回 TLC 试验条件 为验证 TLC 条件的耐用性 考察 收率 (n=9) 为. 和 4.7 RSD 为.6 和 了硅胶 G 薄层预制板和 TLC Silica gel 6 种薄层.3 板 同时考察了不同温度 ( 和 3 ) 及相对湿..6 样品测定 度 ( 和 7 ) 的影响 结果表明 本法在上述 分别取 批不同产地 不同采集期的苦豆子 条件下均图谱清晰 斑点明显 相对迁移率 (Rf) 为 样品粉末 ( 过 3 号筛 ). g 按.. 项下方法..8 各主斑点达到有效分离 方法专属性 制备供试品溶液 分别进样测定 记录色谱图 按 重现性和耐用性均符合要求 外标法计算含量 结果见表 ( 下转第 9 页 )

9 中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals, 46() 9 dependent effects of andrographolide on human cancer cell lines [J]. Life Sci,, 9(-6): [3] 吕巧莉, 涂国刚, 王嘉琦, 等. 穿心莲内酯的研究进展及临床应用 [J]. 南昌大学学报 : 医学版, 3, 3(): [4] Mamaeva V, Sahlgren C, Lindén M. Mesoporous silica nanoparticles in medicine Recent advances [J]. Adv Drug Deliv Rev, 3, 6(): [] Shen J, Song G, An M, et al. The use of hollow mesoporous silica nanospheres to encapsulate bortezomib and improve efficacy for non-small cell lung cancer therapy [ J]. Biomaterials, 4, 3(): [6] Stöber W, Fink A, Bohn E. Controlled growth of monodisperse silica spheres in the micron size range [J]. J Colloid Interf Sci, 968, 6(): [7] Möller K, Kobler J, Bein T. Colloidal suspensions of nanometer-sized mesoporous silica [J]. Adv Funct Mater, 7, 7(4): 6-6. [8] Bhattacharyya S, Wang H, Ducheyne P. Polymer-coated mesoporous silica nanoparticles for the controlled release of macromolecules [J]. Acta Biomater,, 8(9): [9] Kruk M, Jaroniec M. Gas adsorption characterization of ordered organic inorganic nanocomposite materials [J]. Chem Mater,, 3(): [] Ozeki T, Tagami T. Functionally engineered nanosized particles in pharmaceutics: improved oral delivery of poorly water-soluble drugs [J]. Curr Pharm Des, 3, 9(3): [] Park JH, Saravanakumar G, Kim K, et al. Targeted delivery of low molecular drugs using chitosan and its derivatives [J]. Adv Drug Deliv Rev,, 6(): 8-4. [] Lin CX, Qiao S, Lu GQ. Periodic mesoporous silica and organosilica with controlled morphologies as carriers for drug release [J]. Micropor Mesopor Mater, 9, 7(-): 3-9. ffffffffffffffffffffffffffffffffffffffffffffffffff ( 上接第 8 页 ) 中国药典 年版苦参项下生物碱含量测定检测波长为 nm 经二极管阵列检测器 (DAD) 扫描, 本试验样品色谱图中主峰与对照品 UV 光谱一致, 在 nm 处有最大吸收, 故确定检测波长为 nm 参照中国药典 年版苦参及山豆根项下生物碱含量测定方法, 以及文献报道的生物碱提取 [ 分离测定方法 6-8], 分别考察了超声提取时间 ( 3 和 4 min) 的影响 结果显示, 超声 3 min 时, 含量均较高且稳定 还考察了中性氧化铝色谱柱的不同内径 ( 和 3 cm) 氧化铝用量 (3 和 8 g) 及不同比例洗脱液的影响 结果显示, 色谱柱内径 和 cm 时无差异, 选择内径 3 cm 的色谱柱时目标成分有损失 选择填料 g 及依次以氯仿 氯仿 甲醇 ( 7 3) 各 ml 洗脱时, 样品提取较充分 对不同比例流动相的考察结果表明, 采用.. 项下条件时, 样品中目标峰分离度及保留时间较适宜 此外, 因生物碱属于碱性有机化合物, 故选择氨基柱进行分离测定 本法耐用性较好, 测定结果准确可靠 参考文献 : [] 国家中医药管理局 中华本草 编委会. 中华本草 : 维吾尔药卷 [ M]. 版, 上海 : 上海科学技术出版社, : -3. [] 刘勇民. 维吾尔药志 ( 上 )[M]. 乌鲁木齐 : 新疆人民出版社, : [3] 秦学功, 元英进. 苦豆子种子中生物碱的冷浸提取实验研究 [J]. 中草药,, 3(7): [4] 游菁菁, 沙碧莹, 尹小英. 高效液相色谱法测定不同产地苦豆子各部位中 6 种生物碱 [ J]. 中国药学杂志, 4, 49(3): -3. [] 新疆维吾尔自治区食品药品监督管理局. 维吾尔药材标准 ( 年版第一册 )[M]. 乌鲁木齐 : 新疆人民卫生出版社, : [6] 耿革霞, 孙英华, 向柏, 等. HPLC 法同时测定苦豆子总碱中槐定碱 苦参碱和槐果碱的含量 [J]. 药物分析杂志, 6, 6(): [7] 刘力, 程雪梅, 王长虹, 等. 骆驼蓬总生物碱提取物的质量标准研究 [J]. 中国医药工业杂志,, 4(6): [8] 刘振龙, 张丽, 魏蕾初, 等. HPLC 法测定苦豆子总碱结肠定位释放片中生物碱 [ J]. 中成药, 3, 3(7) :

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