大黄具有泻下攻积 清热泻火 凉血解毒 逐瘀通经 利湿退黄的作用, 大黄素和大黄酚具有泻下 抗炎 降压 降血脂等作用 [5 6] 目前对于上述几种成分的含量测定方法的报道较多 [7 14], 除黄芪甲苷的含量测定采用高效液相 蒸发光散射检测器检测外, 其余成分的含量测定方法皆为高效液相 紫外检测器检测

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1 年 月 第 卷 第 期 中国现代中药 M C M N V N 中药工业 HPLC DAD法同时测定黄芪护肝丸中 种活性成分的含量 米振清 刘斌 山东省泰安市食品药品检验检测中心 山东 泰山医学院 山东 泰安 泰安 摘要 目的 建立高效液相色谱法同时测定黄芪护肝丸中芍药苷 橙皮苷 五味子醇甲 大黄素和大黄酚 种活性成分含量的方法 方法 采用 ZORBAXS B C色谱柱 流动相 甲醇 A 磷酸的水溶液 B 梯度洗 脱 柱温 流速 ml m 检测波长 芍药苷为 m 橙皮苷和五味子醇甲为 m 大黄素和大 黄酚为 m 结果 芍药苷 橙皮苷 五味子醇甲 大黄素和大黄酚的线性范围分别为 μ ml 平 均加样回 收 率 分 别 为 RS D分 别 为 结论 本法专属性强 结果准确 重复性好 可用于黄芪护肝丸的质量控制 关键词 高效液相色谱 二极管阵列检测器 黄芪护肝丸 芍药苷 橙皮苷 五味子醇甲 大黄素 大黄酚 含量 S m D m F K C m H P HPLC DAD MIZ LI UB T T C F D C T C T M U T C Oj T HPLCm m m H A m M A HPLC m w ZORBAXS B C m m m A w B m m T w w ml m m m w T w w m m m m R T m w μ ml T w RS Dw C T m w H K w HPLC DAD H m j 黄芪护肝丸是在中医临床验方和现代中药药理 赤芍具有清热凉血 散瘀止痛的作用 其有效成分 学研究基础上由黄芪 赤芍 陈皮 五味子 大黄 芍药苷具有镇痛 镇静 舒张平滑肌的作用 陈 等 味中药组成的水丸 具有清热解毒 益 气 活 皮具有理气健脾 燥湿化痰的作用 橙皮苷具有降 血 保肝护肝之功能 用于甲肝或乙肝的治疗 其 脂 抗血栓 抗肿瘤等作用 五味子具有收敛固 中 黄芪具有补气升阳 益卫固表的作用 其有效 涩 益气生津 补肾宁心的作用 其有效成分五味 成分黄芪甲苷具有抗血栓 抗肿瘤 保肝等作用 通信作者 子醇甲具有保肝护肝 促进肝糖原合成等作用 刘斌 主管药师 研究方向 中药质量控制 T E m m

2 大黄具有泻下攻积 清热泻火 凉血解毒 逐瘀通经 利湿退黄的作用, 大黄素和大黄酚具有泻下 抗炎 降压 降血脂等作用 [5 6] 目前对于上述几种成分的含量测定方法的报道较多 [7 14], 除黄芪甲苷的含量测定采用高效液相 蒸发光散射检测器检测外, 其余成分的含量测定方法皆为高效液相 紫外检测器检测, 且未见关于黄芪护肝丸多成分含量测定方法的研究 本研究以赤芍中的芍药苷 陈皮中的橙皮苷 五味子的五味子醇甲 大黄中的大黄素和大黄酚为定量指标, 根据 5 种成分紫外吸收特征的不同, 采用高效液相色谱 二极管阵列检测器检查法, 在 3 个紫外波长下同时对黄芪护肝丸中的 5 种成分的含量测定方法进行研究 结果表明, 本法专属性强, 结果准确, 重复性好, 可为黄芪护肝丸的质量控制提供依据 1 仪器与试药 1 1 仪器 ShimadzuLC 20AT 高效液相色谱仪 SPD M20A 二极管阵列检测器 LCsolution 色谱工作站 ( 日本岛津公司 ); 十万分之一电子天平 (MetlerToledo XS205DU) 1 2 试药芍药苷对照品 橙皮苷对照品 五味子醇甲对照品 大黄素对照品 大黄酚对照品 ( 中国食品药品检定研究院, 批号分别为 , , , , ); 黄芪护肝丸 ( 自制, 每 20 丸重 1g, 批号分别为 , , ); 甲醇为色谱纯 ; 磷酸为分析纯 ; 水为纯化水 2 方法与结果 醇苷 大黄素和大黄酚的分离度均大于 1 5, 理论板数按橙皮苷色谱峰计算应不低于 溶液的制备 混合对照品溶液分别精密称取芍药苷 橙皮苷 五味子醇甲 大黄素和大黄酚对照品适量, 分别加甲醇制成质量浓度分别为 μg ml -1 的对照品储备液 再分别精密量取储备液 1mL, 置于同一 10mL 量瓶中, 加甲醇制成每 ml 中分别含芍药苷 橙皮苷 五味子醇甲 大黄素 大黄酚 μg 的混合对照品溶液, 即得 供试品溶液取本品 100 丸, 研细, 混匀, 取约 2 0g, 精密称定 置 100mL 具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇 50mL, 密塞, 称定重量, 超声处理 ( 功率为 300W, 频率为 50KHz)30min, 取出, 放冷, 再称定重量 用甲醇补足减失的重量, 摇匀, 用微孔滤膜 (0 45μm) 滤过, 取续滤液, 即得 阴性供试品溶液按黄芪护肝丸处方比例, 分别制备不含赤芍 陈皮 五味子 大黄的黄芪护肝丸阴性样品, 按 项下的方法制备阴性供试品溶液 2 3 空白试验按 2 1 色谱条件, 分别取对照品溶液 供试品溶液及阴性供试品溶液依法测定, 记录色谱图 结果表明, 供试品溶液中芍药苷 橙皮苷 五味子醇甲 大黄素和大黄酚的色谱峰与对照品溶液保留时间一致, 阴性供试品溶液在与芍药苷 橙皮苷 五味子醇甲 大黄素和大黄酚对照品相同保留时间处无干扰峰, 处方中其他药味对测定结果无影响 HPLC 图谱见图 1~6 2 1 色谱条件 色谱柱 :ZORBAX SB C 18 (250mm 4 6mm, 5μm); 流动相 : 甲醇 (A) 0 1% 磷酸水溶液 (B), 梯度洗脱 (0~10min,35%A;10~15min,35% ~ 60%A;15~35min,60% A;35~40min,60% ~ 80%A;40~60min,80% A;60~65min,80% ~ 35%A;65~70min,35%A); 检测波长 : 芍药苷为 230nm, 橙皮苷和五味子醇甲为 217nm, 大黄素和大黄酚为 254nm; 流速 :1 0mL min -1 ; 柱温 : 30 ; 进样量 :10μL 芍药苷 橙皮苷 五味子 注 :1 芍药苷 ;2 橙皮苷 ;3 五味子醇甲 ; 4 大黄素 ;5 大黄酚 下同 图 1 对照品 HPLC 图 1205

3 图 2 样品 HPLC 图图 3 缺赤芍阴性对照样品 HPLC 图图 4 缺陈皮阴性对照样品 HPLC 图图 5 缺五味子阴性对照样品 HPLC 图 1206 图 6 缺大黄阴性对照样品 HPLC 图 2 4 线性关系考察精密量取 项下芍药苷 橙皮苷 五味子醇甲 大黄素和大黄酚对照品储备液各 mL, 分别置 10mL 量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 制成不同浓度的混合对照品溶液, 依法测定 以质量浓度 X(μg ml -1 ) 对峰面积 Y 进行线性回归, 回归方程分别为芍药苷 :Y= C (r=0 9996); 橙皮苷 :Y= X (r=0 9998); 五味子醇甲 :Y= X (r=0 9997); 大黄素 : Y= X (r=0 9998); 大黄酚 :Y= X (r=0 9998), 芍药苷 橙皮苷 五味子醇甲 大黄素和大黄酚的线性范围分别为 5 12~ ~ ~ ~ ~49 0μg ml 精密度试验取 项下混合对照品溶液, 按 2 1 色谱条件连续进样 6 次, 测定峰面积, 以峰面积考察精密度, 芍药苷 橙皮苷 五味子醇甲 大黄素和大黄酚峰面积的 RSD 分别为 0 62% 0 81% 0 63% 0 62% 和 0 70%, 表明仪器精密度良好 2 6 重复性试验取黄芪护肝丸 ( 批号 : ), 按 项下方法平行制备 6 份供试品溶液, 依 2 1 色谱条件进行测定, 结果芍药苷 橙皮苷 五味子醇甲 大黄素和大黄酚的平均质量分数分别为 mg g -1,RSD 分别为 1 5% 1 4% 1 3% 1 3% 和 1 5%, 表明该方法的重复性良好 2 7 稳定性试验取黄芪护肝丸 ( 批号 : ), 按照 项下方法制备的供试品溶液, 依 2 1 色谱条件分别在供

4 试品溶液制备后的 h 进行测定, 结果芍药苷 橙皮苷 五味子醇甲 大黄素和大黄酚峰面积的 RSD 分别为 1 1% 1 5% 1 2% 1 0% 和 1 1%, 表明供试品溶液在 12h 内稳定 2 8 加样回收试验取已知含量的黄芪护肝丸 ( ) 适量, 研 细, 称取约 1 0g, 共 6 份, 精密称定, 分别精密加入 项下的芍药苷 橙皮苷 五味子醇甲 大黄素和大黄酚对照品储备液 2 0mL, 照 项下方法制备供试品溶液, 依 2 1 色谱条件测定, 分别计算各成分加样回收率, 结果见表 1 表明该方法的准确度良好 表 1 加样回收试验结果 (n=6) 组分 称样量 /g 样品含量 /mg 加入量 /mg 测得总量 /mg 回收率 (%) 平均回收率 (%) RSD(%) 芍药苷 橙皮苷 五味子醇甲 大黄素 大黄酚

5 2 9 样品测定取本品 3 批样品, 按 项下方法制备供试品溶液, 按 2 1 色谱条件测定, 用外标一点法分别计算样品中芍药苷 橙皮苷 五味子醇甲 大黄素和大黄酚的含量, 结果见表 2 表 2 样品含量测定结果 (n=3) /mg g -1 批号 芍药苷 橙皮苷 五味子醇甲 大黄素 大黄酚 讨论 3 1 供试品溶液制备方法的考察本研究分别采用超声和回流提取方法, 分别以甲醇 70% 甲醇溶液 50% 甲醇溶液为溶媒, 分别超声处理 15 30min 以及加热回流 30 60min, 制备供试品溶液 比较发现,5 种待测成分在甲醇溶液中超声提取 30min 提取效果较好, 杂质干扰少, 且操作简便, 节约时间 3 2 检测波长的选择由于 5 种成分的紫外光谱差异较大, 为了能同时检测 5 种活性成分, 采用二极管阵列检测器, 多波长同时检测各成分的含量 芍药苷在 230nm 处有最大吸收, 且吸收值高, 分离度好, 故选择此波长检测 ; 橙皮苷在 nm 处有特征吸收, 且灵敏度高, 无干扰峰 ; 五味子醇甲在 nm 处有特征吸收, 但均在 217nm 处有较大吸收, 因此选择 217nm 作为橙皮苷和五味子醇甲共同的测定波长 ; 大黄素和大黄酚共有的特征吸收均为 nm, 因均在 254nm 处有较大吸收, 且灵敏度高, 无干扰峰, 因此选择 254nm 作为共同的测定波长 3 3 流动相的选择笔者参照相关文献 [8 14], 分别比较了甲醇 水 甲醇 0 1% 磷酸溶液和甲醇 2% 醋酸溶液 3 种不同的流动相 结果发现以甲醇 0 1% 磷酸为流动相, 采用梯度洗脱的方法,5 种待测活性成分的峰形及分离度均良好, 保留时间适宜 使用本法测定的专属性强, 结果准确, 重复性好, 可结合黄芪护肝丸中黄芪甲苷的含量测定方法综合评价黄芪护肝丸的质量 参考文献 [1] 陈国辉, 黄文凤. 黄芪的化学成分及药理作用研究进展 [J]. 中国新药杂志,2008,17(17): [2] 冀兰鑫, 黄浩, 李长志. 赤芍药理作用的研究进展 [J]. 药物评价研究,2010,33(3): [3] 李庆耀, 梁生林. 陈皮的药用研究进展 [J]. 中成药, 2008,30(2): [4] 王文燕, 陈建光. 五味子的药理作用及开发研究 [J]. 北华大学学报,2007,8(2): [5] 王磊, 张静泽, 高文远. 大黄活性成分药代动力学研究进展 [J]. 中成药,2011,33(9): [6] 李娟, 李坚. 大黄药理作用研究及临床应用概述 [J]. 实用医药杂志,2006,23(9): [7] 刘浩文, 刘嘉仪, 杨妙荣, 等. 黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的两种方法的比较研究 [J]. 中药新药与临床药理, 2011,22(6): [8] 周海玲, 许舜军, 杨柳.HPLC 法测定赤芍中芍药苷的含量 [J]. 临床医学工程,2011,18(4): [9] 孔铭, 朱玲英, 王佩娟, 等.HPLC 测定补肾活血颗粒中芍药苷, 阿魏酸, 淫羊藿苷的含量 [J]. 中成药,2010,32 (4): [10] 张月辉, 王冬梅, 王安达, 等.HPLC 法同时测定益胃口服液中芍药苷和橙皮苷的含量 [J]. 沈阳药科大学学报, 2007,24(8): [11] 徐海燕, 金艺, 张红霞, 等.HPLC 同时测定胃力片中柚皮苷 橙皮苷和新橙皮苷的含量 [J]. 中成药,2010,32(8): [12] 倪琳, 杨锡.HPLC 法同时测定生脉饮中五味子醇甲 五味子甲素和五味子乙素 [J]. 中成药,2012,34(5): [13] 巫涛, 顾明君.HPLC 测定黄连上清胶囊中大黄素 大黄酚含量 [J]. 中成药,2005,27(4): [14] 王洪志, 范俊婷, 刘勇, 等.HPLC 法测定清胰片中芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚的含量 [J]. 中国实验方剂学杂志,2008,14(9): ( 收稿日期 ) 1208

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® 1332 变波长 RP-HPLC 法同时测定调经丸中 12 种成分 陈雪梅 1, 周慧 2* 1. 天津医科大学第二医院药学部, 天津 300211 2. 天津市临床药物关键技术重点实验室, 天津医科大学药学院, 天津 300070 摘要 : 目的建立同时测定调经丸中芍药苷 毛蕊花糖苷 阿魏酸 盐酸益母草碱 橙皮苷 丹皮酚 黄芩苷 川续断皂苷 VI 柠檬苦素 白术内酯 I 白术内酯 III 茯苓酸

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