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1 中南大学学报 医学版! $: 反向高效液相色谱测定法同时测定人血浆中 # 种镇静催眠药浓度 梁湘辉 戴智勇 刘文恩 中南大学湘雅医院 检验科 药剂科 长沙 : 摘要 目的 建立人血浆中地西泮 硝西泮 奥沙西泮 艾司唑仑和阿普唑仑的反向高效液相色谱测定法 27 67%5 方法 以血浆为基质 配制含有 # 种镇静催眠药的混合标准品 取 % 样品加入 # % 卡马西平 % 为内标 乙酸乙酯萃取后用 % 流动相溶解 进样 % 通过高效液相色谱仪检测人血浆基质中 # 种镇静催眠药浓度 色谱条件 色谱柱为 5 : 柱 $ E# 柱温 D 流动相为甲醇 水 $# # 流速 % 紫外检测波长为 结果 地西泮 硝西泮 奥沙西泮 艾司唑仑和阿普唑仑在 #? % 范围内线性关系良好 " $$ # 加样回收率在 # # =? # $ = 萃取回收率均在 # = 以上 日内及日间变异相对标准偏差 24 均小于 = # 结论 27 67%5 方法简便 准确 灵敏 适用于人血浆中地西泮 硝西泮 奥沙西泮 艾司唑仑和阿普唑仑的血药浓度的同时检测 关键词 镇静催眠药 反向高效液相色谱法 血药浓度 中图分类号 2 文献标识码 ; 文章编号 $ $: # #!! # # (!# # ( )#! # %&; ( / ;& %&'!!!"#$(!(! "!"!"#$!"#! )!'! &!( "!( "&!'&! :! $ * + ( -!!*!- (! ( *(! ( (! (!(,( (- (, *(,( /,(! /, /(,(( *!8!*!- (!!*+ *()!, / - )* ( *( 27 67%5,! )*,!*)(* ((!! # % (!!*(,(-(*- ( (--!- %(,! ) ) (!-!#!-!-( 8! )((-(*- / ()!(- /(,((( * / - / ()!!!*!! *()!- ()! ()!(!+*,(((,! (-!!*!-,8!- %,! (!!, - -*/,!8!,!*!((,!-!*+ * ()!, / - )* ( *( %(,! >!) ()* ( *( )),/ 5 : $ E # ( D!,! (!)!- +!(,(- (!* $# # (-!+, *(! ( %!/,*(8,!-!!) (8!,! ( %!!,!(* *(! +!# -*/ (#? % " $$ #!*!) 8!* *(! (# #=? # $=!! *() *!) 8!* *(! ( *!( # =!*!,( 8!(-(*- -!8 ( 24 + *( -( (-!* -( (,!( = #! 27 67%5! - ) 8! 收稿日期 : " " 作者简介 梁湘辉 硕士 主管技师 主要从事临床检验与研究工作 通讯作者! 梁湘辉 1 (,, ( ( ) )

2 $ 中南大学学报 医学版!! ())/*(!(-! 8!+ * /,(! /-!!* ( +!) )!*( +- (! ( *(! ( (! (!(,( (- (, *(,( /(,(( -.!-( 8! )*!8!*!- (!!*+ *()!, / - )* ( *(, - -*/,!8!, $: # 地西泮 硝西泮 奥沙西泮 艾司唑仑和阿普唑仑为临床常用的镇静催眠药 也可用于抗焦虑 抗癫痫治疗 大剂量可引起外周神经肌肉阻断 兴奋不安等不良反应 严重的可导致死亡 这些药物不但临床应用广泛 而且也是急诊药物中毒和自杀患者的常服药物 因此监测其血药浓度对临床治疗和中毒抢救均有重要意义 目前 国内外多采用气相色谱法 # 67%5 法监测其血药浓度 操作较烦琐 本研究拟建立简便 快速 准确的反相高效液相色谱法同时测定上述 # 种镇静催眠药的血药浓度 为临床治疗和中毒抢救提供理论依据 / 0 材料与方法 材料 仪器 美国 ;,! 公司 型高效液相色谱仪 配备二极管阵列紫外检测器及 5!( A 化学工作站 试剂 地西泮 硝西泮 奥沙西泮 艾司唑仑 阿普唑仑和卡马西平对照品均购自中国药品生物制品检定所 甲醇为色谱纯 乙酸乙酯为分析纯 水为重蒸馏水 方法 色谱条件 色谱柱为 7!!!! 5 : 柱 $ E # 填料粒度 # 柱温 D 流动相为甲醇 水 $# # C C 流速 % 紫外检测波长为 标准溶液的制备 精密称取地西泮 硝西泮 奥沙西泮 艾司唑仑 阿普唑仑标准品各 各用甲醇溶解定溶置 # % 的容量瓶中 再用甲醇定容配成浓度为 % 的标准混合贮备液 置 D 冰箱备用 用时再用血浆为基质配制成不同浓度的标准混合液 精密称取内标物卡马西平 # 于 # % 的容量瓶中 用甲醇配成浓度为 # % 的 内标液 置 D 冰箱备用 样品处理精密吸取含 # 种标准混合液的血浆 % 置具塞离心管内 加入 # % 卡马西平内标液 % 乙酸乙酯 # % 盖紧密封塞 旋涡震荡 * 离心 取上清液 D 下 气流吹干 % 流动相溶解 进样 % 通 过高效液相色谱仪检测 0 结 00 果 色谱与分离图 分别为各标准品的色谱图 图 为空白血浆色谱图和加入标准品的色谱图 样品处理干净 杂质少 各色谱峰分离完全 峰形好 柱效高 血浆内源性杂质对测定无干扰 标准曲线及最低定量限用空白血浆将标准贮备液稀释成 # # # : 和 % 的系列浓度 按 样品处理项进行处理并测定 以标准品峰面积与内标峰面积的比值 5 为纵坐标 标准品浓度 ) 为横坐标 进行加权 6 ) 最小二乘法线性回归 得各标准品线性回归方程 表 地西泮 硝西泮 奥沙西泮 艾司唑仑 阿普唑仑的血药浓度在 #? % 范围内均线性关系良好 最低定量浓度均为 # % 信噪比 4 萃取回收率用空白血浆配制地西泮 硝西泮 奥沙西泮 艾司唑仑 阿普唑仑 # 种药物浓度均为 # % 的混合标准品各分成 # 份 按 样品处理项进行平行处理并测定 记录各峰面积 另用流动相配制相应浓度混合标准溶液 不经提取直接进相同量的样 记录各峰面积 各色谱峰对应的前 后峰面积比 得相应萃取回收率 其精密度用相对标准偏差 *!,( 8!(-(*- -!8 ( 24 表示 24 标准差 平均值 E =

3 6$M 反向高效液相色谱测定法同时测定人血浆中 5 种镇静催眠药浓度!梁湘辉#等 上述 各 药 物 低,中,高 浓 度 血 样 的 萃 取 回 收 率 均 日 内, 日 间 精 密 度! PR?" 均 少 于 M # a! 表 % " + 在 ' 5 a 以 上 # PR?均 低 于 M # a! 表 " " + " /5! 血 浆 室 温 放 置 稳 定 性 " /&! 加 样 回 收 率 及 精 密 度 试 验 用空白血浆配制地西泮,硝西 泮,奥 沙 西 泮, 用空白血浆配制地西泮,硝西 泮,奥 沙 西 泮, 艾 司 唑 仑, 阿 普 唑 仑 浓 度 均 为 M 5 #" # # #M "##!=+ 7 艾司唑仑,阿 普 唑 仑 浓 度 5 种 药 物 浓 度 均 为 M5 # 的混 合 标 准 品# 室 温 放 置# 分 别 在 # #" #6 #M" #"& " # # #M " # #!=+7的 混 合 标 准 品 # 每 天 各 分 成 5 ( 取 样 # 按 M /" /% 样 品 处 理 项 处 理 并 测 定 + 上 述 份 # 按 M /" /% 样 品 处 理 项 进 行 平 行 处 理 # 进 样 分 各药物低,中,高浓 度 血 样 室 温 放 置 "& ( 内 变 异 析#得加样回收率和日内精密度%连续测定 5 E 得 系 数 均 少 于 M5 a# 表 明 血 样 室 温 放 置 "& ( 内 日间精密 度+ 上 述 各 药 物 低, 中, 高 浓 度 血 样 的 稳定 + 图 GH各标准品的色谱图' Y$奥沙西泮%e$卡马西平%S$硝西泮%?$艾司唑仑%I$阿普唑仑%Q地西泮+ 4* -GH0.' %5"# %-' "5 %&$ $ ' /1 # "+2"' 2Y$^, * 1%e$S B - 1 *; 2 %S$Z; ) B * 1%?$I0 ) < D 1%I$YD *B < D 1%Q$?; J * 1/

4 $ 中南大学学报 医学版! 图 0 空白血浆色谱图 " 0 # # ;!# # 表 /0 各药物的线性回归方程 & /0!(!! 药物 回归方程 相关系数 " 地西泮 5 $ E)" : 硝西泮 5 E) :#$ $$ 奥沙西泮 5 # E) 艾司唑仑 5 : E)" # # 阿普唑仑 5 # E) :# 图 0 空白血浆加标准品色谱图 奥沙西泮 卡马西 平 硝西泮 艾司唑仑 # 阿普唑仑 $ 地西泮 " 0 # #!# #. (! ( 5(* ((!! *(! ( 1 (,( #;, *(,( $ (! ( 表 0 各药物的加样回收率及精密度 2 & 0%(! 2 药物 药物浓度 % 回收率 = 日内 24 = 日间 24 = 地西泮 # : : $ # # : # : 硝西泮 # # $ : # 表 0 各药物的萃取回收率 2 & 0 (! 2 药物 药物浓度 % 回收率 = 24 = 地西泮 # :# : 硝西泮 # : :# # 奥沙西泮 # : $ $ 奥沙西泮 # $ # : $ $ $ 艾司唑仑 # # # $ : $ # $ 阿普唑仑 # : $ : : # # # : : 艾司唑仑 # :$ : : $ : 阿普唑仑 # : : : $ 0 讨 00 论 本研究采用乙酸乙酯直接提取血浆样品 操作简便 提取后样品中杂质干扰少 各药物的萃取回收率高 均在 # = 以上 且通过有机溶剂的提取和浓缩 测定的灵敏度进一步提高 由于乙

5 反向高效液相色谱测定法同时测定人血浆中 # 种镇静催眠药浓度 梁湘辉 等 $ 酸乙酯比重较轻 与血浆混合后不易乳化 且液面处于上层 所以实验操作更方便 在进行流动相条件筛选时 选用价格低廉的甲醇为有机相 纯水为水相 考察不同配比的分离效果 发现在甲醇 水 $# # 时 各色谱峰及内标间分离效果好 且峰形尖锐 柱效高 完成一次测定只需 # 选择 波长是经分析发现目标成份在 紫外吸收系数均比较大 可以提高 灵敏度 黄成琼等研究发现 氯硝西泮 艾司唑仑 三唑仑 地西泮 种药物的线性范围为 # #? % 毛桂福研究发现 氯硝西泮 艾司唑仑 阿普唑仑 氯氮卓 地西泮 咪达唑仑 $ 种药物的线性范围为? % 而本方法定量范围更宽 最低检测浓度更低 既可满足治疗药物浓度监测或药代动力学研究需要 也可用于中毒药物的定量分析 适用于常规血药浓度监测及急诊中毒病人药物测定 由于本方法流动相中无缓冲盐和改性试剂 因此测试过程中平衡和冲洗色谱系统的时间比较短 有利于提高测定效率 更适合临床应用 本研究建立了人血浆中地西泮 硝西泮 奥沙西泮 艾司唑仑和阿普唑仑 # 种临床常用镇静催眠药的 27 67%5 测定方法 方法简便 准确 重现性好 ( !!!+ *-!!) +! - (!! /*! 9 9; (, ), # $ 5 *!,!C 7 %/-!A 4)*!! + *+ *! )(, *!,!8(! - (!! /( ( * ()* ( *(! ( 8! )! )(, ( (!)*!* 9 9 5* ( *A A!- 4) ;, 郭胜才 邹晓华 张玉荣 等 高效液相色谱法同时测定血浆中艾司唑仑 三唑仑和阿普唑仑浓度 9 中国医院药学杂志 # $ ' 4! )( ' ( /( 6; 0/*!(,!!* ( +!(,( * (,( (- (, *(,(,(( 27 67%5 9 5!! 9 /*(, + 6 (, 7(*() # $ 黄成琼 马传学 姜峻 高效液相色谱法同时测定人血艹清中 种苯二氮卓类药物 9 中国医院药学杂志 6'; 5! ; 5/( /! 9&; 9/ 4 /,(! / -!!* ( ! - (!!!*/ 67%5 9 5!!9 /*(, +6 (,7(*() 艹 # 毛桂福 27 67%5 测定血浆中 $ 种苯二氮卓类药物的浓度 9 中国药师 # $ ; / +/!!* ( +! - (!!) )!*( /(,(( 27 67%5 9 5 ( 7(*() # $ 本文编辑 彭敏宁 参考文献 /( 4! 6 & ;!(, 4, - (! )*! *()

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