湖南师范大学自然科学学报 第 卷 槲皮素 "- ")*# 是一种多羟基黄酮类化合物 具有多种生物学活性和极高的药用价值 其已知药理作用有抗癌 抗氧化 抗纤维化 抗炎等 并不断有新的药理作用被发现 如抗衰老 抗抑郁症等 & 槲皮素为白苞蒿主要成分之一 其生物学活性与白苞蒿文献所记载的功效相似 故选择槲

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1 年 月湖南师范大学自然科学学报 & & 第 卷第 期? -#( 1 () -( ' *"# " 1 #(# - ( #*5"-0*)/ '" & 6& 3&*0#& &&& 白苞蒿提取工艺优化及槲皮素含量测定 柳贤福 黄红泓 覃日宏 丁 聪 广西中医药大学赛恩斯新医药学院 中国南宁 摘 要 建立测定白苞蒿中槲皮素含量的 $< 方法 & 采用正交试验优化白苞蒿的提取工艺 用 $< 法测定白苞蒿中槲皮素的含量 & 色谱柱为 / "-0* 柱 H& 流动相为 甲醇 & 磷酸 的混合液 检测波长为 # 流速 & < *# E 柱温 F& 结果表明槲皮素进样量为 & D& 4 时呈良好的线性关系 ( & 平均加样回收率为 & " 为 & & 所建方法简单 稳定 重复性好 可用于白苞蒿药材的质量控制 & 关键词 白苞蒿 槲皮素 提取工艺 $< 含量测定中图分类号 7& 文献标识码. 文章编号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白苞蒿为菊科蒿属多年生草本植物 又名白花蒿 白米蒿 红姨妈菜等 主要分布于华中及西南各省区 收载于 中国药典 年版四部中 是中药刘寄奴的基原植物之一 & 全草可入药 性甘 微苦 平 具有清热 解毒 止咳 消炎 活血 散瘀 通经等功效 可用来治疗慢性肝炎 肝硬化 肾炎 水肿 疝气等症 近年也用于治疗血丝虫病 & 广东及广西民间常以白苞蒿作 刘寄奴 奇蒿 (. ( *1 $* 的代用 品 & 钱一鑫等研究表明其有抗肿瘤 抗菌及抗氧化作用 & 另有研究表明白苞蒿含有酯类 萜类 挥发油 黄酮类化合物 & 汪建平等进行了奇蒿与白苞蒿的生药学比较研究 & 收稿日期 基金项目 广西壮族自治区中青年教师基础能力提升项目 广西一流学科建设项目重点课题 2 广西高校中药提取纯化与质量分析重点实验室自主研究课题 通信作者 (* 0 *"# "A &

2 湖南师范大学自然科学学报 第 卷 槲皮素 "- ")*# 是一种多羟基黄酮类化合物 具有多种生物学活性和极高的药用价值 其已知药理作用有抗癌 抗氧化 抗纤维化 抗炎等 并不断有新的药理作用被发现 如抗衰老 抗抑郁症等 & 槲皮素为白苞蒿主要成分之一 其生物学活性与白苞蒿文献所记载的功效相似 故选择槲皮素成分为含量测定指标 & 目前笔者尚未发现有关 $< 法测定该药主要成分含量的研究报道 因此 建立白苞蒿主要成分含量 $< 测定方法 对进一步研究和开发广西民间药用资源具有重要意义 & 仪器与试药.4* "#) 美国.4* "#) 公司 ' 数显恒温水浴锅 * * -"'* * *)/ 超纯水仪 美国密里博公司 2' 电子分析天平 & 槲皮素 中国药品生物制品检定所 批号 & 甲醇 乙腈为色谱纯 其余试剂为分析纯 & 白苞蒿药材均于 年秋季采自广西 个产地 经广西中医药大学赛恩斯新医药学院生药教研室苑敏副教授鉴定 均为菊科蒿属植物白苞蒿 ( *1 $( 6 的干燥地上部分 表 & 表 白苞蒿药材信息 *0 '( "0 - " 1( *1 $( 编号 采收地 编号 采收地 ' 广西贺州市 ' 广西钦州市 ' 广西梧州市 ' 广西柳州市 ' 广西南宁市西乡塘区 ' 广西百色市 ' 广西南宁市邕宁区 ' 广西上思县 ' 广西桂林市 ' 广西河池市 方法与结果 色谱条件采用 / "-0* 柱 H& 流动相为甲醇 & 磷酸溶液 体积比为 检测波长为 # 流速为 & < *# E 柱温 F 进样量为 <& 溶液的制备精密称取 F 条件下干燥至恒重的槲皮素对照品 & 4 置于 < 容量瓶中 加适量甲醇溶解并定容至刻度 摇匀 即得浓度为 & 4< E 的槲皮素对照品溶液 & 取白苞蒿药材粉末约 4 精密称定 精密加入 甲醇 盐酸 的混合溶液 < 称取质量 回流提取 放冷 用上述甲醇 盐酸混合溶液补足减失的质量 摇匀 过 & 微孔滤膜 精密吸取 < 注入液相色谱仪测定 & 专属性试验分别精密吸取上述槲皮素对照品溶液和白苞蒿溶液各 < 进样分析 结果见图 & 槲皮素的保留时间为 & *# 与相邻峰的分离度 J&& 图 白苞蒿. 与槲皮素对照品 #. '( " - () 4-(. (#+ = "- ")*# - () 4-(

3 第 期 柳贤福等 白苞蒿提取工艺优化及槲皮素含量测定 3 供试品处理的正交试验根据槲皮素的性质及预试验结果 采用正交试验 < 进行白苞蒿的甲醇 盐酸 体积比 混合溶液回流提取工艺研究 以槲皮素的含量为评价指标 选择甲醇体积分数. 甲醇用量 提取时间 个因素 每个因素设 个水平 & 正交设计表及分析结果见表 D& 表 正交设计因素水平表 *0 -) 4 #( +"0*4# 1( ) - "5" 水平 甲醇体积分数 甲醇用量 < 提取时间 表 槲皮素 < 正交试验表 *0 < -) 4 #( )"0) &. 误差 含量 44 E & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & 表 3 槲皮素方差分析表 *0 3,"5(-*(# "(#( /0*0 方差来源 离差平方和 方差 & '. & & & & & & & J& & & & J& 误差 & 因素极差 越大 说明因素的水平改变对实验结果影响也越大 & 由实验结果的直观分析及方差分析可知 影响槲皮素提取效果的因素大小顺序为.J J 其中甲醇体积分数对试验结果有显著性影响 根据实验结果确定最佳提取方法为. 即用 < 的 甲醇 盐酸 体积比 混合溶液回流提取 & 为了进一步考察优选工艺的可靠性和稳定性 取 份 ' 粉末按上述最优工艺条件. 进行验证试验 按 & 项下所述方法进行测定 结果槲皮素平均含量 & 44 E " & & 与正交试验方案中的最高值相同 说明优化成功 & 4 线性关系考察精密吸取 & 项下对照品溶液 < 注入高效液相色谱仪 按 & 项下的色谱条件测定其峰面积 见表 & 以对照品溶液进样量 4 为横坐标 色谱峰峰面积为纵坐标 绘制标准工作曲线 得出槲皮素回归方程为 / 6!6 & 结果表明槲皮素在进样量为 & D& 4 条件下呈良好的线性关系 & 5 精密度试验精密吸取 ' 供试品溶液 < 注入高效液相色谱仪 按 & 项下的色谱条件 连续进样 次 测定中

4 湖南师范大学自然科学学报 第 卷 槲皮素的峰面积 & 结果测得中槲皮素峰面积 " 值为 & 见表 表明所用液相色谱仪的精密度好 & 表 4 线性关系考察结果 *0 4 7"0 )0 1*#5"0)*4()* # 1 *#"(--" ()* # 进样体积 < 进样量 4 峰面积 进样体积 < 进样量 4 峰面积 & & & & & & & & & & 表 5 精密度试验结果 *0 5 $-" *0* # )"0)-"0 )0 编号 峰面积 & & & & & & & 6 重复性试验 取 ' 白苞蒿药材粉末 4 精密称定 共取 份 按 & 项下供试品制备方法制备 精密吸取供试品溶液 < 按 & 项下的色谱条件进行测定 计算槲皮素的含量 其 " 值为 & 见表 & 结果表明 用上述 方法测定槲皮素的含量 重复性好 & 表 6 重复性试验结果 *0 6 7" "()(* *)/)"0)-"0 )0 编号 称样量 4 & & & & & & 含量 44 E & & & & & & & 7 稳定性试验取 ' 白苞蒿药材粉末 4 精密称定 按 & 项下方法制备溶液 室温下保存 分别在放置 及 后精密吸取溶液 < 注入液相色谱仪 按 & 项下的色谱条件测定 考察其稳定性 & 结果测得中槲皮素峰面积 " 值为 & 见表 表明供试品溶液在 内保持稳定 & 表 7 稳定性试验结果 *0 7 ')(* *)/)"0)-"0 )0 放置时间 峰面积 & & & & & & & 8 加样回收率试验取已知含量 ' 白苞蒿药材粉末 & 4 精密称定 精密加入 < 甲醇 盐酸 体积比 混合溶液 精密加入槲皮素 && 及 & 4 加入量为含量的 和 & 按 & 项下方法制备 各平行制备 份 分别测定含量 计算加样回收率 白苞蒿药材槲皮素含量以 & 44 E 计 结果见表 & 由实验结果可知 槲皮素的平均加样回收率为 & " & & : 测定分别取广西不同产地白苞蒿药材粉末 每个产地各 份 4 精密称定 按 & 项制备 精密吸取 < 注入高效液相色谱仪测定 实验结果见表 & 结论与讨论 超声提取法和回流提取法比较超声提取法测得槲皮素平均峰面积为 & 加热回流提取法测得槲皮素平均峰面积为 & 考察结果与文献一致 故选择回流提取法 & 通过预试验发现 乙醇溶液提取槲皮素含量极低且图谱峰型较差 甲醇提取槲皮素含量也较低 结合文献 及 选择甲醇 盐酸 体积比 混合溶液 提

5 第 期 柳贤福等 白苞蒿提取工艺优化及槲皮素含量测定 取效果好 且甲醇浓度越高提取效果越好 & 表 8 白苞蒿加样回收试验结果 *0 8 '( "-" 5"-/)"0)-"0 )0 1( *1 $( 质量 4 已知含量 4 加入量 4 测得量 4 加样回收率 平均加样回收率 & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & 表 : 不同产地白苞蒿药材含量测定结果 *0 : ")"- *#()* # 1= "- ")*# #)"#)1- +*1"-"#)-"4* 0 编号 ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' 含量 44 E & & & & & & & & & & 中药材的质量与种植及产地有关通过测定 个产地的白苞蒿药材发现 大部分产地白苞蒿中槲皮素含量基本相同 有少数产地测得含量较低 说明不同产地生产的白苞蒿药材有一定的差异 测定结果为今后开发使用白苞蒿药材提供一定的参考依据 & 参考文献 中国科学院中国植物志编委会 & 中国植物志 & 卷 & 分册 & 北京 科学出版社 & 国家药典委员会 & 中华人民共和国药典 ' & 四部 & 北京 中国医药科技出版社 & 丁宝章 王遂义 & 河南植物志 第三册 & 郑州 河南科学技术出版社 & 钱一鑫 康冀川 雷帮星 & 白苞蒿内生真菌的分离及其抗肿瘤抗菌活性筛选? & 菌物研究 & 钱一鑫 康冀川 雷帮星 等 & 贵州白苞蒿抗肿瘤 抗氧化内生真菌的筛选与鉴定? & 中国中药杂志 & 夏亮铕 张素英 袁廷香 & 白苞蒿石油醚提取物化学成分分析? & 西南师范大学学报 自然科学版 & 周万镜 张素英 杨远义 & 贵州黔北地区白苞蒿挥发油成分分析? & 安徽农业科学 & 肖美添 叶 静 洪本博 等 & 白苞蒿化学成分研究? & 中国药学杂志 & 汪建平 蔡炜坚 张桢漪 等 & 中药奇蒿与白苞蒿的生药学比较研究? & 湖北中医学院学报 & 柯发敏 余 昕 侯杰荣 等 & 赶黄草中槲皮素的提取工艺研究? & 广东化工 & 王斌利 张莉霞 石晓峰 等 & 响应面法优化紫斑牡丹花粉总黄酮的提取工艺? & 中药材 & 颜星星 岳显可 陈晓红 等 & 响应面法优化乌药叶中槲皮素 山奈酚提取工艺? & 中国药师 & 梁 洁 柳贤福 孙正伊 等 & 不同产地龙眼叶中 种黄酮类物质含量测定? & 医药导报 & 编辑 8?

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标溶液 备用 2. 4 供试品溶液的制备. 1 取芍药样品粉末约 0. 8 g 精密称定 置 100 ml 具塞三角瓶中 精密加入甲醇 50 ml 称定 超声处 理 0 min 放冷 甲醇补足失重 摇匀 精密吸取上 清液 ml 至 50 ml 量瓶中 精密加入内标溶液 5. 0 ml 加 与 HPLC 特征指纹谱的建立及其 在质量控制中的应用 王瑞 1 2 黄山君1 杨琪伟1 石燕红1 王峥涛1 2 * ( 1. 上海中医药大学 中药学院 上海 20120; 2. 上海中药标准化研究中心 上海 20120;. 上海中医药大学 中药研究所 中药标准化教育部重点实验室 上海 20120) 摘要 目的: 建立与的高效液相色谱特征指纹分析方法 为科学评价和有效控制其质量提供方法 方法: 采

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