第十五章杂环类药物的分析

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攸亚家
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1 任务三 : 诺氟沙星胶囊的质量检验学习目标 1 掌握高效液相色谱法测定诺氟沙星的含量的计算方法 2 熟悉喹诺酮类药物的鉴别和含量测定方法 3 了解喹诺酮类药物的杂质检查项目和方法

2 一喹诺酮类药物的分析 ( 教材 P138) ( 一 ) 临床上常用的药物 : 吡哌酸诺氟沙星环丙沙星氧氟沙星培氟沙星依诺沙星等

3 ( 二 ) 结构与性质基本结构 : 4- 吡啶酮 -3- 羧酸 R 8 N COOH O

4 性质 : 1 酸碱两性( 羧基和哌嗪基 ) 2 显色性 3 还原性( 哌嗪基 ): 变色 4 紫外吸收

5 ( 三 ) 鉴别试验丙二酸反应氟元素的反应光谱法 ( 紫外和红外 ) 分光光度法色谱法 ( 薄层和高效液相色谱 )

6 2010 版药典诺氟沙星的鉴别方法鉴别 (1) 取本品 10mg, 置干燥试管中, 加丙二酸约 10mg, 加醋酐 10 滴, 在水浴中加热 10 分钟, 溶液显红棕色 ( 叔胺基团的特殊反应 ) (2) 取本品与诺氟沙星对照品适量, 加三氯甲烷 - 甲醇 (1:1) 制成每 1ml 中含 2.5mg 的溶液, 照薄层色谱法试验, 吸取上述两种溶液各 10μl, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以三氯甲烷 - 甲醇 - 浓氨溶液 ( ) 为展开剂, 展开, 晾干, 置紫外光灯 (365nm) 下检视供试品溶液所显主加斑点的位置与荧光应与对照品溶液主斑点的位置与荧光相同

7 2010 版药典诺氟沙星的鉴别方法 (3) 在含量测定项下记录的色谱图中, 供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致以上可选做 (1),(2) 项或 (3) 项

8 ( 四 ) 杂质检查溶液澄清度 : 碱中不溶性杂质有关物质 : 高效液相色谱法 ( 高低浓度对照法 )

9 ( 五 ) 含量测定 1 非水溶液滴定法 ( 吡哌酸原料 ) 2 紫外分光光度法 ( 吡哌酸制剂 ) 3 高效液相色谱法 ( 诺氟沙星原料和制剂 ) 以诺氟沙星胶囊质量标准为例, 重点讲解鉴别方法和含量测定的计算, 对胶囊剂的质量检验有全面的理解

10 诺氟沙星胶囊的质量标准 ( 讲义 79 页 ) 性状本品内容物为白色至淡黄色粉末鉴别 ( 薄层 ) 供试品溶液所显主斑点的荧光与位置应与对照品溶液主斑点的荧光与位置相同检查溶出度 ( 紫外 ) 限度为标示量的 75%, 应符合规定有关物质 ( 外标 ) 其他应符合胶囊剂项下有关的各项规定 ( 附录 Ⅰ E)

11 [ 溶出度 ]: 取本品, 照溶出度测定法 ( 附录 X C 第二法 ), 以 ph4.0 醋酸缓冲液 ( 取冰醋酸 2.86ml 与 50% 氢氧化钠溶液 1ml, 加水 900ml, 振摇, 用冰醋酸或 50% 氢氧化钠溶液调节 ph 值至 4.0, 加水至 1000ml)1000ml 为溶出介质, 转速为每分钟 50 转, 依法操作, 经 30 分钟时, 取溶液适量, 滤过, 精密量取续滤液适量, 用溶出介质定量稀释制成每 1ml 中约含 5µg 的溶液, 作为供试品溶液, 照紫外 - 可见分光光度法 ( 附录 Ⅳ A), 在 277nm 的波长处测定吸光度 ; 另取诺氟沙星对照品适量, 精密称定, 加溶出介质溶解定量稀释制成每 1ml 中约含 5µg 的溶液, 同法测定, 计算每粒的溶出量限度为标示量的 75%, 应符合规定 (2010 版药典 )

12 溶出度计算对照品比较法 A X EC X L A R EC R L C AX C D1000 R A 标示量 % R 100% 标示量 X A A X R C 稀释倍数 (D) 要视标示量而定 ) R

13 含量测定取 [ 装量差异 ] 项下的内容物, 混合均匀, 精密称取细粉适量 ( 约相当于诺氟沙星 125mg), 置 500 ml 量瓶中, 加 0.1mol/L 盐酸溶液 10 ml 使溶解后, 用水稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 精密量取续滤液 5 ml, 置 50 ml 量瓶中, 用流动相稀释至刻度, 摇匀, 精密量取 20μl, 照诺氟沙星含量测定项下的方法测定 ( 讲议 :75 页 )( 外标法 )

14 诺氟沙星含量测定项下的方法测定 ( 讲议 :79 页 ) ( 外标法 ) 取本品约 25mg, 精密称定, 置 100ml 量瓶中, 加 0.1mol/L 盐酸溶液 2ml 使溶解后, 用水稀释至刻度, 摇匀, 精密量取 5ml, 置 50ml 量瓶中, 用流动相稀释至刻度, 摇匀, 精密量取 20μl 注入液相色谱仪, 记录色谱图 ; 另取诺氟沙星对照品, 同法测定, 按外标法以峰面积计算供试品中 C 16 H 18 FN 3 O 3 的含量

15 C X A A X R C R 每粒实际含量标示量 % 100% 标示量 AX CR VX AR W S 100% 标示量 A A X R C R V X S 标示量 W 100%

16 如为片剂 : 标示量 % 如何计算? AX CR V AR 头孢拉定 % 100% S 标示量 % A A X R C R V X S 标示量平均片重 100%

17 % 100% 标示量平均片重标示量 S V A A C X R X R 片剂 % 100% 每支容量标示量 R X R A A C 注射剂 % 100% S V C A A R R X 原料药外标法 % 100% S D V C A A R R X % 100% 标示量平均片重标示量 S D V A A C X R X R

18 例 : 取某片剂 ( 规格为 0.25mg)25 片, 精密称定 ( g), 研细, 精密称取适量 ( 约相当于主药 6mg )( 片粉量 :0.5028g), 置 100ml 量瓶中, 精密加入 50% 甲醇溶液 50ml, 微温, 振摇使主药溶解, 放冷, 加 50% 甲醇溶液稀释至刻度, 滤过, 精密量取续滤液 20μl 注入液相色谱仪, 记录色谱图, 另取该药对照品适量, 精密称定 (11.2mg), 同法配成 100ml, 同法测定按外标法以峰面积计算其占标示量的百分比已知 : 对照品峰面积 :86.25; 供试品峰面积 :46.52 标示量 % A A X R CR VX 平均片重 100% S 标示量 % % 100.4%

19 诺氟沙星胶囊取本品 20 粒, 分别精密称定重量后, 倾出内容物, 用小刷子拭净胶囊壳, 再分别精密称定囊壳重量, 求出平均装量为 g, 再取装量差异项下的内容物, 混合均匀, 精密称取细粉 g( 约相当于诺氟沙星 125 mg), 置 500 ml 量瓶中, 加 0.1 mol/l 盐酸溶液 10 ml 使溶解后, 用水稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 精密量取续滤液 5 ml, 置 50 ml 量瓶中, 用流动相稀释至刻度, 摇匀, 精密量取 20μl 注入液相色谱仪, 记录色谱图, 得峰面积为 903; 另取诺氟沙星对照品 g 置 50 ml 量瓶中, 加 0.1 mol/l 盐酸溶液 10 ml 使溶解后, 用水稀释至刻度, 摇匀, 再精密量 5 ml, 置 50 ml 量瓶中, 用流动相稀释至刻度, 摇匀, 同法测定, 记录峰面积为 848, 按外标法以峰面积计算供试品中 C 16 H 18 FN 3 O 3 的含量规格 :0.1g 19

20 标示 A C X R A % R V D平均片重 S标示量 100% 20

21 示量 A C X R A % R % V D平均片重 100% S标示量 % 21

23 杂环化合物 : 指环状有机化合物的碳环中夹杂有非碳元素原子 ( 如 O S N 等 ) 的化合物

24 一吡啶类药物的分析 ( 一 ) 结构与性质 O NHNH 2 C N N 吡啶 (pyridine) 异烟肼 (isoniazid)

25 O C N(C 2 H 5 ) 2 尼可刹米 (nikethamide) N 性质 ( 讲义 46, 书 125) 1 吡啶环( 弱碱性, 开环反应 UV) 2 取代基( 水解 ( 共性 ) 还原和缩合 ( 异烟肼 )

26 ( 二 ) 鉴别试验 1 吡啶环的反应 1) 吡啶环的开环反应适用于吡啶未取代, 以及为烷基或羧基的衍生物 (1) 戊烯二醛反应 (König 反应 ) (2)2,4- 二硝基氯苯反应 ( 略 )

27 尼可刹米 ChP(2005) 鉴别 (2) 取本品 1 滴, 加水 50 ml, 摇匀, 分取 2 ml, 加溴化氰试液 2 ml 与 2.5% 苯胺溶液 3 ml, 摇匀, 溶液渐显黄色尼可刹米溴化氰 H 2 O 苯胺戊烯二醛衍生物黄色

28 2) 沉淀反应 (1) 与氯化汞的反应异烟肼 HgCl 尼可刹米 2 白色

29 (2) 与铜盐的反应尼可刹米 ChP(2005) 鉴别 (3) 取本品 2 滴, 加水 1 ml, 摇匀, 加硫酸铜试液 2 滴与硫氰酸胺试液 3 滴, 即生成草绿色沉淀尼可刹米 CuSO NH SCN 草绿色 4 4 异烟肼 + CuSO 4 + 枸橼酸淡绿色 Δ Cu 2 O 砖红

30 2 酰肼基团的反应 1) 还原反应异烟肼 AgNO 3 Ag( 黑色银镜) N 2

31 异烟肼 ChP(2000) 鉴别 (2) 取异烟肼约 10 mg, 置试管中, 加水 2 ml 溶解后, 加氨制硝酸银试液 1 m1, 即发生气泡与黑色浑浊, 并在试管壁上生成银镜

32 2) 缩合反应异烟肼香草醛 H 2 O 异烟腙 ( 黄色 ) 测定熔点 CONHNH 2 CHO CONH N CH N + OH OCH 3 H 2 O N OH OCH 3

33 异烟肼 ChP(2010) 鉴别 (1) 取本品约 0.1 g, 加水 5 ml 溶解后, 加 10% 香草醛的乙醇溶液 1 m1, 摇匀, 微热, 放冷, 即析出黄色结晶, 滤过, 用稀乙醇重结晶, 在 105 干燥后, 测定熔点, 其熔点为 228~231, 熔融时同时分解

34 3 分解产物的反应尼可刹米 ChP(2000) 鉴别 (1) 取本品 10 滴, 加氢氧化钠试液 3 ml, 加热, 即发生二乙胺的臭气, 能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色 Δ 尼可刹米 NaOH 二乙胺

35 1 异烟肼中游离肼的检查杂质来源原料引入降解产生方法 : 薄层色谱法 (TLC) 2 尼可刹米中有关物质的检查方法 : 高效液相色谱法 (HPLC) ( 自身高低浓度对照法 )

36 取本品, 加水制成每 1ml 中含 50mg 的溶液, 作为供试品溶液另取硫酸肼加水制成每 1ml 中含 0.20mg( 相当于游离肼 50µg 的溶液, 作为对照溶液吸取供试品溶液 10µl 与对照溶液 2µl 分别点于同一硅胶薄层板 ( 用羧甲基纤维素钠溶液制备 ) 上, 以异丙醇 - 丙酮 (3 2) 为展开剂, 展开后, 晾干, 喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液,15min 后检视, 在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上, 不得显黄色斑点

37 在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上, 不得显黄色斑点

38 1 异烟肼的含量测定 1) 高效液相色谱法 ( 外标法 ) 原料及片剂 2) 氧化还原滴定法溴酸钾法 ChP(2010) 测定注射用异烟肼

39 CONHNH 2 COOH HCl 3 +2KBrO N 2 +3 H 2 O +2 KBr N N 反应摩尔比 3 2 T a t cm mg ml

40 取本品约 200mg, 精密称定, 置 100ml 量瓶中, 加水使溶解并稀释至刻度, 摇匀 ; 精密量取 25m1, 加水 50m1 盐酸 20ml 与甲基橙指示剂 1 滴, 用溴酸钾滴定液 ( mo1/L) 缓缓滴定 ( 温度保持在 18~25 ) 至粉红色消失每 1ml 的溴酸钾滴定液 ( mol/L ) 相当于 3.429mg 的 C 6 H 7 N 3 O

41 1) 非水溶液滴定法 ChP(2010) 原料 2) 紫外分光光度法 ( 避免溶剂水的干扰 )ChP(2010) 注射液

42 1 下列药物中, 哪一个药物加氨制硝酸银能产生银镜反应 A. 地西泮 B. 阿司匹林 C. 异烟肼 D. 苯佐卡因 E. 苯巴比妥

43 2 用于吡啶类药物鉴别的开环反应有 ( 多选 ) A. 茚三酮反应 B. 戊烯二醛反应 C. 坂口反应 D. 硫色素反应 E. 二硝基氯苯反应

44 3 ChP(2010) 异烟肼的含量测定方法为 A. 溴酸钾滴定法 B. 溴量法 C. TCL D.HPLC E. 比色法

45 4 能和硫酸铜及硫氰酸铵反应, 生成草绿色沉淀的药物为 A. 对乙酰氨基酚 B. 异烟肼 C. 尼可刹米 D. 地西泮 E. 维生素 E

46 5. 异烟肼可由原料反应不完全或贮藏中的降解反应而引入哪种杂质 A. 间氨基酚 B. 水杨酸 C. 对氨基苯甲酸 D. 游离肼 E. 其他甾体

47 吩噻嗪类药物的基本结构 6 S N 1 2 R' R

48 S N Cl HCl CH 2 CH 2 CH 2 N(CH 3 ) 2 盐酸氯丙嗪

49 S N HCl CH 2 CHN(CH 3 ) 2 CH 3 盐酸异丙嗪

50 S N Cl CH 2 CH 2 CH 2 N N CH 2 CH 2 OH 奋乃静

51 结构分析 7 6 S 硫氮杂蒽母核 N 1 2 (1) 含 S N 的三环共轭的大体系, S N 与苯环形成 p- 共轭具有紫外吸收光谱特征

52 (2) 硫氮杂蒽环上硫原子为 -2 价, 具有还原性, 易氧化呈色 (3) 硫氮杂蒽环上硫原子有两对孤对电子, 易与金属离子络合呈色

53 2. 取代基 R: 脂烃胺基哌嗪基, 具碱性 R: 卤素 C X 一定方法破坏 X

55 1 显色反应氧化剂氧化显色 ( 氧化成醌型和亚砜型的化合物 ) 氧化剂硫酸硝酸过氧化氢盐酸氯丙嗪 ChP(2010) [ 鉴别 ] (1) 取本品约 10mg, 加水 1ml 溶解后, 加硝酸 5 滴, 即显红色 ; 渐变淡黄色

56 2 氯化物的反应盐酸氯丙嗪 ChP(2010) [ 鉴别 ] 本品的水溶液显氯化物的鉴别反应 ( 附录 Ⅲ) 3 紫外分光光度法 4 红外分光光度法

57 ( 三 ) 有关物质检查 ( 略 ) 方法?

58 1 非水溶液滴定法原料药 ( 注意事项 P133: 加维生素 C?)

59 2 紫外分光光度法 1) 直接分光光度法 ( 测片剂和注射剂 ) 249nm( 盐酸异丙嗪 : 片剂测定波长为 1% E 1cm 为 910); 注射液为了消除抗氧剂维生素 C( max 243nm) 对测定的干扰, 测定波长改为 299nm E 1% 1cm ( 为 108)

60 同理, 盐酸氯丙嗪片剂测定波长为 254nm( E 1% 1cm 为 915); 注射液测定 E 1% 1cm 波长改为 306nm( 为 115) 3 铈量法 ( 可避免片剂辅料的干扰 ) 4 钯离子法 ( 消除药物中氧化物的干扰 )

61 1. 盐酸氯丙嗪的含量测定方法有 ( 多选 ) A. 中和法 B. 非水滴定法 C. 紫外法 D. 旋光法 E. 铈量法

62 2. 中国药典 (1995 年版 ) 对盐酸异丙嗪注射液的含量测定, 选用 299nm 波长处测定, 其原因是 A. 299nm 处是它的最大吸收波长 B. 为了排除其氧化产物的干扰 C. 为了排除抗氧剂的干扰 D. 在 299nm 处, 它的吸收系数最大 E. 在其他波长处, 因其无明显吸收

64 H N N CH3 Cl N O 氯氮卓

65 H 3 C N O Cl N 地西泮

66 1. 苯并二氮杂卓母核弱碱性,UV 2. 结构中的环一般比较稳定, 但在酸性溶液中可水解, 形成相应的二苯甲酮衍生物

67 氯氮卓 H H O 2 2 氨基 5 氯二苯甲酮 ( 芳伯氨基 ) N NHCH 3 H + NH 2 Cl N O Cl C O

68 3. 含卤素 C X 氧瓶燃烧法破坏 X

69 1 化学反应 1) 沉淀反应 HCl 氯氮卓地西泮 KBiI 橙红色 4

70 氯氮卓 ChP(2010) 鉴别 (2) 取本品约 10mg, 加盐酸溶液 (9 1000)10ml 溶解后, 加碘化铋钾试液 1 滴, 即生成橙红色沉淀

71 2) 水解后重氮化偶合反应氯氮卓艾司唑仑奥沙西泮氯氮卓 ChP(2010) [ 鉴别 ] (1) 取本品约 10mg, 加盐酸溶液 (1 2)15ml, 缓缓煮沸 15 分钟, 放冷, 溶液显芳香第一胺类的鉴别反应 ( 附录 Ⅲ)

72 3) 硫酸荧光反应地西泮 ChP(2010) [ 鉴别 ] (1) 取本品约 10mg, 加硫酸 3ml, 振摇使溶解, 在紫外灯 (365nm) 下检视, 显黄绿色荧光

73 氯氮卓黄色艾司唑仑亮绿色硝西泮淡蓝色

74 2 UV 和 IR 3 TLC

76 1 非水溶液滴定法原料 2 紫外分光光度法片剂 3 高效液相色谱注射剂, 片剂 ( 注射剂中苯甲酸苯甲酸钠等附加剂对紫外分光光度法有干扰, 故用此法 )

三唑仑片的含量测定取本品 ( 规格为 0.25mg)50 片, 精密称定 ( 1.0474g), 研细, 精密称取适量 ( 约相当于三唑仑 6mg)( 片粉量 :0.

77 三唑仑片的含量测定取本品 ( 规格为 0.25mg)50 片, 精密称定 ( g), 研细, 精密称取适量 ( 约相当于三唑仑 6mg)( 片粉量 :0.5143g), 置 100ml 量瓶中, 精密加入 50% 甲醇溶液 50ml, 微温, 振摇使三唑仑溶解, 放冷, 加 50% 甲醇溶液稀释至刻度, 滤过, 精密量取续滤液 20μl 注入液相色谱仪, 记录色谱图, 另取三唑仑对照品适量, 精密称定, 加入 50% 甲醇溶液使溶解, 并稀释制成每 ml 中约含 0.12mg 的溶液 (0.1244mg/ml), 同法测定按外标法以峰面积计算三唑仑片标示量百分含量已知 : 对照品峰面积 :89.14; 供试品峰面积 :45.71

79 1-5 A. 氯氮卓 ( 利眠宁 )B. 地西泮 ( 安定 ) C. 两者均能 D. 两者均不能 1. 分子母核属于苯并二氮杂卓 (C) 2. 用氧瓶燃烧法破坏后, 显氯化物反应 (C) 3. 水解后呈芳伯胺反应 (A) 4. 与三氯化锑反应生成紫红色 (D) 5. 溶于硫酸后, 在紫外光下显黄绿色荧光 (B)

80 6. 硫酸荧光反应为地西泮的特征鉴别反应之一地西泮加硫酸溶解后, 在紫外光下显 A. 红色荧光 B. 橙色荧光 C. 黄绿色荧光 D. 淡蓝色荧光 E. 紫色荧色

81 7. 某药物经酸水解后可用重氮化偶合反应鉴别, 此药物是 A. 盐酸氯丙嗪 B. 氯氮卓 C. 地西泮 D. 醋酸氢化可的松 E. 维生素 C

82 杂环类药物的含量测定方法喹诺酮类含量测定 1 非水溶液滴定法 ( 吡哌酸原料 ) 2 紫外分光光度法 ( 吡哌酸制剂 ) 3 高效液相色谱法 ( 诺氟沙星原料和制剂 ) 苯并二氮杂卓类含量测定 1 非水溶液滴定法原料 2 紫外分光光度法片剂 3 高效液相色谱注射剂, 片剂吩噻嗪类含量测定 1 非水溶液滴定法原料 2 紫外分光光度法片剂和注射剂 ( 测定波长不同 ) 3 铈量法 4 钯离子比色法吡啶类含量测定异烟肼 1 HPLC 法 ( 原料和制剂 2 溴酸钾法( 注射用无菌粉末 ) 尼可刹米 1 非水溶液滴定法原料 2 紫外分光光度法注射剂

+ a 2 + 2Cl + acl Cl 苯佐卡因 + + a + acl + 2 Cl CR. Cl CC 2 5 橙黄 ~ 猩红色 CR + a acl 3 C 盐酸丁卡因 3 C 白色分析方法 : 1 无明显现象进一步反应供试药物

+ a 2 + 2Cl + acl Cl 苯佐卡因 + + a + acl + 2 Cl CR. Cl CC 2 5 橙黄 ~ 猩红色 CR + a acl 3 C 盐酸丁卡因 3 C 白色分析方法 : 1 无明显现象进一步反应供试药物药物的鉴别试验案例分析通过数组案例分析, 着重掌握典型鉴别试验与药物结构特征的关系, 以及相似或相关分子结构之间的区别 ; 熟悉复杂体系中组分的鉴别方法选择与设计案例一有一药物, 可能是地西泮苯佐卡因或盐酸丁卡因, 请用一种化学方法区别之结构分析 : Cl C C 2 C 2 苯佐卡因地西泮 C3. Cl 3 C 盐酸丁卡因根据上述结构式, 三者均为含氮结构药物, 但氮所处情况不同

第十五章 杂环类药物的分析

第十五章杂环类药物的分析