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1 复方脑肽节苷脂注射液 Fufang naotaijieganzhi Zhusheye Compound Porcine Cerebroside and Ganglioside Injection 本品系由健康家兔肌肉和猪脑经提取制成的含有多肽 神经节苷脂 次黄嘌呤的无菌水溶 液 每 1ml 含多肽应为 2.72 mg~3.68 mg, 含单唾液酸四己糖神经节苷脂 (GM1) 应为 0.20 mg~ 0.28 mg, 含次黄嘌呤应为 0.11 mg~0.14 mg 处方 兔肌肉提取物 猪脑神经节苷脂提取物 注射用水 适量 ( 含多肽 3200mg 次黄嘌呤 125mg) 适量 ( 含单唾液酸四己糖神经节苷脂 240mg) 适量 制成 1000ml 制法 本品应从检疫合格的兔肌肉和猪脑中提取, 生产过程均应符合现行版 药品生 产质量管理规范 的要求 将兔肌肉提取物和猪脑神经节苷脂提取物按照处方比例混合得到复 方脑肽节苷脂提取液 复方脑肽节苷脂提取液检验合格后过滤至配制罐中, 补加适量注射用水 定容, 将药液混匀, 控制 ph 值至 6.5~7.5, 药液经终端过滤后灌封, 灭菌 性状 本品为无色至微黄色澄明液体 鉴别 (1) 取本品 1ml, 加茚三酮试液数滴, 加热, 应显紫色 (2) 取本品 1ml, 加丙酮 2.5ml, 应产生白色混浊 (3) 在单唾液酸四己糖神经节苷脂 (GM1) 含量测定项下记录的色谱图中, 供试品溶液主 峰的保留时间应与单唾液酸四己糖神经节苷脂 (GM1) 对照品溶液主峰的保留时间一致 (4) 取本品 5ml, 减压浓缩至干, 加甲醇 1ml 溶解, 离心, 取上清液作为供试品溶液 另 取单唾液酸四己糖神经节苷脂 (GM1) 对照品适量, 加甲醇溶解并稀释制成每 1ml 中含 0.2mg 的溶液, 作为对照品溶液 照薄层色谱法 ( 中国药典 2010 年版二部附录 V B) 试验, 吸取上述 两种溶液各 10μl, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以三氯甲烷 甲醇 0.2% 的氯化钙溶液 (8: 13:2) 为展开剂, 展开后, 晾干, 喷以间苯二酚溶液 ( 取 2% 间苯二酚溶液 10ml, 加 2.5% 硫 酸铜溶液 0.25ml, 加盐酸 80ml, 加水至 100ml, 混匀 ), 喷后即加玻片封盖 ( 两玻片间需用夹 夹紧 ),120 加热至斑点清晰, 供试品溶液所显主斑点的颜色及位置应与对照品溶液的主斑点 相同 (5) 在次黄嘌呤含量测定项下记录的色谱图中, 供试品溶液主峰的保留时间应与次黄嘌呤 对照品溶液主峰的保留时间一致 以上 (3) (4) 两项可选做一项 检查 ph 值应为 6.0~8.0( 中国药典 2010 年版二部附录 Ⅵ H) 溶液的颜色取本品, 依法检查 ( 中国药典 2010 年版而不附录 Ⅸ A), 溶液应无色 ; 如 显色, 与黄色 4 号标准比色液比较, 不得更深 蛋白质取本品 2ml, 加 20% 磺基水杨酸溶液 2ml, 混匀, 不得发生浑浊 高分子量杂质照分子排阻色谱法 ( 中国药典 2010 年版二部附录 Ⅴ H) 测定 色谱条件与系统适用性试验用凝胶色谱柱 ( 如 TSK GEL 2000SW xl 7.8mm 300mm, 5μm); 以三氟醋酸 - 乙腈 - 水 (0.05:10:90) 为流动相, 检测波长为 214nm 理论板数按胰岛素 峰计算应不低于 3000

2 对照品溶液的制备取胰岛素 ( 分子量 5800) 适量, 用流动相溶解制成每 1ml 中含 1mg 的溶液 供试品溶液的制备取本品, 加流动相稀释制成每 1ml 中含多肽 1mg 的溶液 测定法取对照品溶液和供试品溶液各 20μl, 分别注入液相色谱仪, 记录色谱图 按面积归一化法计算, 小于胰岛素峰保留时间的各峰面积之和不得过 4.0% 活力取本品, 照呼吸活性测定法 ( 附件一 ) 测定, 从测得的耗氧量计算出刺激指数 (SI) 应不小于 2.0 异常毒性取本品, 依法检查 ( 中国药典 2010 年版二部附录 Ⅺ C), 按静脉注射法给药, 应符合规定 过敏试验取本品, 依法检查 ( 中国药典 2010 年版二部附录 Ⅺ K), 应符合规定 细菌内毒素取本品, 依法检查 ( 中国药典 2010 年版二部附录 Ⅺ E), 每 1ml 中含细菌内毒素的量应小于 4.0EU 降压物质取本品, 依法检查 ( 中国药典 2010 年版二部附录 Ⅺ G), 剂量按猫体重每 1kg 注射 0.2ml, 应符合规定 无菌取规定量供试品, 转移至 100ml 无菌 0.1% 蛋白胨水溶液中, 采用薄膜过滤法过滤后, 分别接种相应培养基, 同时以金黄色葡萄球菌 (CMCC(B)26003) 为阳性对照菌 依法检查 ( 中国药典 2010 年版附录 XI H), 应符合规定 其他应符合注射剂项下有关的各项规定 ( 中国药典 2010 年版二部附录 Ⅰ B) 含量测定 多肽取本品, 加水定量制成每 1ml 中约含多肽 0.15mg 的溶液, 作为供试品溶液, 精密量取 1.0ml, 照蛋白含量测定法 ( 中国药典 2010 年版二部附录 Ⅶ M 第二法福林酚法 ) 测定, 即得 单唾液酸四己糖神经节苷脂 (GM1) 照高效液相色谱法 ( 中国药典 2010 年版附录 VD) 测定 色谱条件与系统适用性试验用氨基键合硅胶为填充剂 ( 如 Merck Lichrospher 100NH mm,5μm), 以乙腈 -0.1mol/L 磷酸 - 四氢呋喃 (66:34:10) 为流动相 ; 检测波长为 205nm 理论板数按单唾液酸四己糖神经节苷脂 (GM1) 峰计算不低于 1500 测定法精密量取本品适量, 加水制成每 1ml 中约含 0.12mg 单唾液酸四己糖神经节苷脂 (GM1) 的溶液, 作为供试品溶液 精密量取 10μl 注入液相色谱仪, 记录色谱图 另取单唾液酸四己糖神经节苷脂 (GM1) 对照品适量, 同法测定, 按外标法以峰面积计算 次黄嘌呤照高效液相色谱法 ( 中国药典 2010 年版二部附录 Ⅴ D) 测定 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ; 以 0.001mol/L 磷酸二氢钾溶液 (ph6.9)- 甲醇 (100:0.2) 为流动相 ; 检测波长为 260nm 取次黄嘌呤对照品和黄嘌呤对照品各适量, 置同一量瓶中, 加水溶解并制成每 1ml 中约含次黄嘌呤 25μg 和黄嘌呤 2.5μg 的溶液, 取 20μl 注入液相色谱仪中, 理论塔板数按次黄嘌呤峰计算应不低于 5000, 次黄嘌呤峰与黄嘌呤峰的分离度应符合规定 测定法精密量取本品适量, 加水制成每 1ml 中含次黄嘌呤 10μg 的溶液, 作为供试品溶液 取 20μl 注入液相色谱仪中, 记录色谱图 ; 另取次黄嘌呤对照品适量, 精密称定, 加水制成每 1ml 中含 10μg 的溶液 同法测定, 按外标法以峰面积计算 类别 脑功能改善药 规格 (1)2ml (2)5ml (3)10ml 贮藏 密闭, 在阴凉处保存

3 附件一 : 呼吸活力测定法 本法系用瓦氏微量呼吸检压仪测定豚鼠肝匀浆的呼吸活力, 从测得的耗氧量计算出呼吸活力 QO 2 (μlo 2 /mg h) 和剌激指数 SI 1 仪器瓦氏微量呼吸检压仪, 匀浆器, 定时器 2 雄性豚鼠肝匀浆液的制备取体重 200~300g 的雄性豚鼠一只, 颈部打击处死 ( 处死前需禁食至少 24 小时 ), 立即切断颈动脉放血, 打开腹腔取出肝脏, 置冰水浴中的磷酸盐缓冲液中 ( 注意 : 不要损伤胆囊或胆管 ) 称取 5.5g 的肝脏, 并切割为大小相同的 7 块, 每块用 7ml 的 Soerensen 缓冲液匀浆 ( 注意 : 以上操作必须在冰水浴中进行 ) 3 测定法 (1) 预先把测压计反应瓶洗净并干燥, 备用 (2) 装好测压液于测压管内, 调节液面至 150mm (3) 反应瓶中先加入磷酸盐缓冲液 1.0ml, 加供试品 1.0ml, 然后加肝匀浆液 1.0ml (4) 加 10% 氢氧化钠溶液 0.2ml 于具一小滤纸条的反应瓶中间小杯 (5) 由于肝匀浆本身有耗氧作用, 故实验时以磷酸盐缓冲液 1.0ml 代替供试品, 其余试剂同样品管, 作为空白管 (6) 将装好的反应瓶按管号与测压计相连 ( 注意密闭, 勿使漏气 ), 置 37 恒温水浴中 (7) 开动振荡器振摇 10 分钟 (75 次 / 分 ) 使反应瓶内外温度一致 将测压计右侧柱液面调至 150mm, 记下左侧液面初读数 (A), 然后关闭三向活塞, 开始计时, 反应 30 分钟记后将测压计右侧柱液面再调至 150mm, 记下左侧液面读数 (B) 打开三向活塞, 重复上述过程, 进行下一个 30 分钟的反应并记下左侧液面初读数 (C) 及 30 分钟后的液面读数 (D) (8) 实验过程中必须附加一套供校正用的温压计, 在反应瓶中加 3.1ml 的磷酸盐缓冲液, 使其在与试验管完全相同的条件下试验, 观察其压力的变化 ( C), 以消除试验过程中温度及大气压的影响 (9) 取 2.0ml 肝匀浆, 置恒重的装有海沙的称量瓶中,110 干燥至恒重, 计算两次的重量差 W(mg) 4 计算方法: QO 2 (μlo 2 / mg h)={ (A-B)+(C-D) K 1 - C K 2 }/(G T) 式中 K 1 空白或样品的反应瓶常数 ; K 2 稳压计组的反应瓶常数 ; mg; G 每 1ml 肝匀浆的干重,mg,G= W/2-9.3,9.3 为 1ml 肝匀浆中磷酸盐缓冲液的干重, T 反应时间 ( 小时 ) ; C 为稳压计组压力变化之和 刺激指数 (SI)= 供试品 QO 2 / 空白 QO 2

4 试验结果应满足 : 对照品的 SI 2.0, 且空白的 QO 2 1.0μl O 2 /(mg h), 否则无效 试剂的配制 : 10% 氢氧化钠溶液取氢氧化钠 10g, 加水溶解并稀释至 100ml 磷酸盐缓冲液 (ph7.4) 取磷酸氢二钠 (Na2HPO4 2H2O)9.72g 和磷酸二氢钾 1.65g, 加水溶解并稀释至 1000ml 测压液取氯化钠 23g, 牛胆酸钠 5g, 伊文氏兰 100mg, 加水溶解并稀释至 500ml 相对密度为 1.033g/ml

5 附件二 : 兔肌肉提取物 本品系由健康家兔肌肉提取制成的含有多肽 次黄嘌呤的水溶液 每 1ml 中含多肽应不少于 6.4mg, 含次黄嘌呤应不少于 0.25 mg 制法 本品应从检疫合格兔肌肉中提取, 生产过程均应符合现行版 药品生产质量管理规范 要求 兔肌肉提取物系由健康家兔肌肉经匀浆 多次冻融 过滤 加热 酶解 多次调节 ph 加热 离心 过滤 超滤等工艺步骤提取, 即得 性状 本品为无色至淡黄色的溶液 鉴别 (1) 取本品适量, 加水稀释制成每 1ml 约含多肽 3.2mg 的溶液 取 1ml, 加茚三酮试液数滴, 加热, 应显紫色 (2) 在次黄嘌呤含量测定项下记录的色谱图中, 供试品溶液主峰的保留时间应与次黄嘌呤对照品溶液主峰的保留时间一致 检查 ph 值应为 6.5~7.5( 中国药典 2010 年版二部附录 VI H) 细菌内毒素取本品, 依法检查 ( 中国药典 2010 年版二部附录 Ⅺ E), 每 1mg 多肽中含内毒素的量应小于 1.0EU 降压物质取本品, 加水稀释制成每 1ml 约含多肽 3.2mg 的溶液, 依法检查 ( 中国药典 2010 年版二部附录 Ⅺ G), 剂量按猫体重每 1kg 注射 0.2ml, 应符合规定 微生物限度取供试品 10ml, 加 ph7.0 无菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液 90ml, 制成 1:10 的供试液 细菌 霉菌及酵母菌计数可采用平皿法 ; 控制菌检查科采用常规法检验 依法检查 ( 中国药典 2010 年版二部附录 Ⅺ J) 测定 含量测定 多肽取本品, 加水定量制成每 1ml 中约含多肽 0.15mg 的溶液, 作为供试品溶液, 精密量取 1.0ml, 照蛋白含量测定法 ( 中国药典 2010 年版二部附录 Ⅶ M 第二法福林酚法 ) 测定, 即得 次黄嘌呤照高效液相色谱法 ( 中国药典 2010 年版二部附录 V D) 测定 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ; 以 0.001mol/L 磷酸二氢钾溶液 (ph6.9)- 甲醇 (100:0.2) 为流动相 ; 检测波长为 260nm 取次黄嘌呤对照品和黄嘌呤对照品各适量, 置同一量瓶中, 加水溶解并制成每 1ml 中约含次黄嘌呤 25μg 和黄嘌呤 2.5μg 的溶液, 取 20μl 注入液相色谱仪中, 理论板数按次黄嘌呤峰计算不低于 5000, 次黄嘌呤峰与黄嘌呤峰的分离度应符合规定 测定法精密量取本品适量, 加水制成每 1ml 中含次黄嘌呤 10μg 的溶液, 作为供试品溶液 取 20μl 注入液相色谱仪中, 记录色谱图 ; 另取次黄嘌呤对照品适量, 精密称定, 加水制成每 1ml 中含 10μg 的溶液 同法测定, 按外标法以峰面积计算 贮藏 密闭,4~8 冷藏保存 2 天或 -20 冷冻保存 1 年

6 附件三 : 白条兔或兔肌肉质量标准 来源于健康家兔, 白条兔或兔肌肉要求有动物检疫部门动物产品检疫合格证明 外观 肌肉有光泽, 呈肉红色且分布均匀, 用手轻轻压兔肌肉, 指压后的凹陷能够立即恢复, 白条兔 1.5~3.5kg/ 条, 缓化后的白条兔或兔肌肉外表微干, 光滑, 不粘手 冷冻白条兔或兔肌肉缓化后应具有鲜兔肉正常的气味 包装 用洁净塑料袋或编织袋包装 贮藏 冷藏 (4~8 ): 不超过 48 小时 ; 冷冻 (-17~-22 ): 不超过一年

7 附件四 : 猪脑神经节苷脂提取物 本品系由健康猪脑提取制成的含有神经节苷脂的水溶液 每 1ml 含单唾液酸四己糖神经节 苷脂 (GM1) 应不少于 24mg 制法 本品应从检疫合格猪脑中提取, 生产过程均应符合现行版 药品生产质量管理 规范 的要求 猪脑神经节苷脂提取物系由健康猪脑经抽提 萃取 水解 层析 浓缩 沉淀 干燥等工艺步骤提取, 即得 性状 本品为无色至淡黄色的溶液 鉴别 在单唾液酸四己糖神经节苷脂 (GM1) 含量测定项下记录的色谱图中, 供试品 溶液主峰的保留时间应与单唾液酸四己糖神经节苷脂 (GM1) 对照品溶液主峰的保留时间一致 检查 ph 值应为 6.5~8.0 ( 中国药典 2010 年版二部附录 VI H) 甲醇 丙酮与三氯甲烷精密称取甲醇 丙酮 三氯甲烷适量, 加水制成 1ml 中含 3mg 5mg 0.06mg 的溶液, 作为对照品溶液 ; 另取本品作为供试品溶液 照残留溶剂测定法 ( 附录 Ⅷ P 第一法, 毛细管顶空进样等温法 ), 用 (5% 苯基 )-95% 甲基聚硅氧烷为固定相的键合交 联毛细管柱, 柱温 40 ; 检测器为氢火焰离子化检测器 精密量取对照品和供试品溶液各 4ml, 分别置于 20ml 顶空瓶中, 平衡温度 80, 平衡时间为 35min 精密抽取对照品溶液和供试品溶 液顶空气体各 0.5ml, 注入气相色谱仪 记录色谱图, 按外标法以峰面积计算, 均应符合规定 细菌内毒素取本品, 依法检查 ( 中国药典 2010 年版二部附录 XI E), 每 1μg 单唾液酸 四己糖神经节苷脂 (GM1) 中含细菌内毒素的量应小于 0.03EU 微生物限度取本品, 采用平皿法进行细菌 霉菌及酵母菌计数, 采用常规法进行控制菌检 查, 依法检查 ( 中国药典 2010 年版二部附录 Ⅺ J), 细菌 霉菌和酵母菌总数每 1ml 不得过 10 个, 大肠埃希菌 沙门菌不得检出 含量测定 照高效液相色谱法 ( 中国药典 2010 年版附录 VD) 测定 色谱条件与系统适用性试验用氨基键合硅胶为填充剂 ( 如 Merck Lichrospher 100NH mm,5μm), 以乙腈 -0.1mol/L 磷酸 - 四氢呋喃 (66:34:10) 为流动相 ; 检测波长为 205nm 理论板数按单唾液酸四己糖神经节苷脂 (GM1) 峰计算应不低于 1500 测定法精密量取本品适量, 加水制成每 1ml 中约含 0.12mg 单唾液酸四己糖神经节苷脂 (GM1) 的溶液, 作为供试品溶液 精密量取 10μl 注入液相色谱仪, 记录色谱图 另取单唾液 酸四己糖神经节苷脂 (GM1) 对照品适量, 同法测定, 按外标法以峰面积计算 贮藏 密闭,4~8 冷藏保存 2 天或 -20 冷冻保存 1 年

8 附件五 : 猪脑质量标准 来源于健康猪, 猪脑要求有动物检疫部门动物产品检疫合格证明 外观 形状肉眼观察, 猪脑特征明显, 鲜品猪脑形态基本完整, 呈球状固体外观, 血管及沟 回组织纹理清晰可辨, 不得有病变 模糊 液化现象 色泽肉眼观察, 应色泽鲜明, 具备新鲜脏器特征, 血管鲜红, 皮层 灰质髓质呈白色灰夹, 不得有全部灰色 无血色或任何发黑 发黄现象 气味具新鲜血腥味, 无臭味或异味 纯度不得夹杂其他脏器组织或异物 包装 包装应能有效防止贮运污染, 如使用大包装应有不使猪脑因包装过大而产生深部变质的措施 贮藏 离体后速置 4 以下暂存并当日使用 ; 长期应存放于 -10 以下, 贮存期不得超过 6 个月 起草单位 : 辽宁省食品药品检验所复核单位 : 吉林省食品药品检验所

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