药物分析实验与习题

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1 药物分析实验与药物分析习题集 姚彤炜编著 曾苏审校 浙江大学出版社 1

2 内容简介本教材内容分为二部分 : 第一部分包括绪论 ( 药物分析的学习方法 实验要求 专业术语 方法验证等 ) 实验内容( 收录和编写了 13 个验证性实验和 3 个设计性实验 ) 教学大纲与实验指导要点 每个实验项下均收录了 2~3 种药物的分析, 可供不同实验室根据教学条件选择适当的药物安排学生实验 实验后的指导要点可供指导老师带教实验时参考, 也可供学生自学复习 第二部分为药物分析习题集, 根据全国规划教材 ( 本科 专科和执业药师应试指南 ) 内容与要求, 结合我们长期的教学经验, 收集和编写了练习思考题约 300 题, 不同类型的选择题约 1000 题 ( 选择题附参考答案 ) 根据试题内容, 结合理论教学章节和实验内容, 把习题分为 15 章, 可作为全日制本科生, 成人专科 本科生, 应试执业药师的考生, 以及应试药物分析学硕士研究生的考生的复习用书, 也可供教师出题时参考, 不同层次的学生可根据大纲要求选择有关章节的试题进行练习 书末附有专业英语阅读材料和词汇, 可供学生自学参考 2

3 编写说明 药物分析是药学专业教学计划中设置的一门主要专业课程 本课程旨在培养学生掌握药品质量研究和质量控制的基本理论知识与基本操作技能, 具有基本的实验研究思路和分析问题 解决问题的能力 要掌握药物分析这门课程, 不仅需要有无机化学 有机化学 分析化学等基础课程的知识, 而且还需要有药物化学 植物化学 药物制剂等专业基础及专业课程的知识 而药物分析实验技术的发展与完善又为以上这些专业学科的发展提供了有效的实验手段和技术方法, 因此, 掌握药物分析课程内容, 是药学专业人员从事各项研究工作的实验基础 药物分析也是全国执业药师资格考试的专业科目之一 由于这门课涉及面广, 内容多, 同时又是一门应用性很强的方法学科, 为提高教学效果, 加强理论与实践的联系, 加强学生的自学能力, 作者在原浙江医科大学药学院药物分析教研室编写的历届 药物分析实验讲义 和 药物分析试题库 的基础上, 结合多年的理论 实验教学实践中积累的素材和经验, 编写了 药物分析实验与药物分析习题集 这本教材 全书分为二部分内容 第一部分为药物分析实验, 包括 :(1) 实验要求 专业术语 方法认证 常用标准溶液的配制等 (2) 实验内容, 编写了 13 个验证性实验和 3 个设计性实验 根据药物分析方法的发展趋势, 为适应实际工作的需求, 在验证性实验中, 加强了色谱分析实验内容, 如顶空气相色谱分析 二极管阵列检测的高效液相色谱技术等实验 选择了典型的鉴别 检查和含量测定等实验内容 在药品来源上尽量选用易得的原料药和常用制剂, 同时在每个实验项下均收录了 2~3 种药物, 可供不同实验室根据实验条件选择适当的药物安排学生实验 特意设计了各类典型药物的鉴别 区别实验, 药物的含量测定方法的探讨 设计与由试剂配制到写出分析报告全过程的实验 旨在培养学生如何根据药物的结构特征和理化性质, 选择合适的分析方法 ; 同时, 使学生在查阅资料和书籍的过程中达到综合复习已学知识和理论联系实际的目的 (3) 教学大纲与实验指导要点 根据本科 专科的不同要求, 分别列出了实验教学大纲与实验指导要点, 可供指导老师带教实验时参考, 也可供学生自学复习 第二部分为药物分析习题集, 以全日制本科 药物分析 全国规划教材为基础, 结合专科和执业药师应试指南的 药物分析 教材内容, 将习题内容分为 15 章, 八大类药物自成一章 ; 绪论 药品质量标准的制订以及有关药典的内容合并为一章 ; 药物的鉴别与杂质检查合并为一章 ; 制剂分析 中药制剂分析和生化药物分析合并为一章 ; 药物的有机破坏与前处理方法, 分析数据处理与分析方法验证, 有关实验内容, 3

4 分别成一章, 多章内容混合的试题归纳为综合性试题一章 试题类型分为两大类, 一类为问答题形式的练习思考题, 学生在学习新的内容前, 可先阅读这些问题, 然后带着这些问题有目的地去学习 另一类为选择题, 参考执业药师应试的题型, 分为四类选择题, 书后附有参考答案, 这些选择题可作为学生自我测试题, 以衡量所学内容掌握程度 不同层次的学生, 可根据大纲要求选择有关章节的试题进行练习 书末附有专业英语阅读材料和词汇, 以提高学生的专业英语阅读能力 本书由姚彤炜编写, 曾苏审校 对我院药物分析教研室多年来积累了大量有关药物分析实验教学资料和试题的老师们表示衷心的感谢 由于作者的水平和能力有限, 书中错误和疏漏之处, 恳请读者批评指正 编著者 4

5 目录 第一章绪论 一 药物分析实验课的目的意义 二 药物分析的 三基 三 药物分析实验课的要求 四 药物分析的专业术语与规定 五 常用标准溶液的配制与标定 六 药品质量标准分析方法验证 第一部分药物分析实验 第二章实验 一 验证性实验实验一 药物的杂质检查实验二 气相色谱法测定药物中有机溶剂残留量实验三 氧瓶燃烧法测定含碘药物的含量实验四 葡萄糖注射液分析实验五 双波长分光光度法测定复方制剂含量实验六 片剂的含量均匀度测定和溶出度测定实验七 异烟肼片含量测定实验八 有关物质的色谱检查实验九 非水溶液滴定法测定含氮碱性药物的含量实验十 维生素 E 胶丸含量测定实验十一 维生素 C 制剂的含量测定实验十二 血浆中水杨酸的 PLC 测定法实验十三 尿中氧氟沙星的 PLC 测定法二 设计性实验实验一 药物的鉴别试验实验二 差示分光光度法测定苯巴比妥片的含量实验三 药物的含量测定 第三章药物分析实验课教学大纲与指导要点一 本科生实验课教学大纲与指导要点二 成教生实验课教学大纲与指导要点附 : 一 分析天平的使用与维护二 容量仪器的洗涤与校正三 一些特殊用水的制法四 附表 5

6 第一章药品质量标准第二章药物的鉴别与杂质检查第三章制剂分析第四章巴比妥类药物分析第五章芳酸类药物分析第六章芳胺类药物分析第七章杂环类药物分析第八章生物碱类药物分析第九章维生素类药物分析第十章甾体激素类药物分析第十一章抗生素类药物分析第十二章药物的有机破坏与前处理方法第十三章分析数据处理与分析方法验证第十四章实验第十五章综合性试题附 :1. 选择题参考答案 2. 专业英语词汇 3. 专业英语阅读理解 第二部分药物分析习题集 参考文献 6

7 第一部分药物分析实验 7

8 第一章绪 论 一 药物分析实验课的目的意义 药物分析是药学专业教学计划中设置的一门主要专业课程, 是根据药物理化性质及其结构, 研究药物及其各种制剂的组成 真伪鉴别 纯度检查 有效成分含量测定的一门综合性应用学科 药品是用于诊断 预防 治疗疾病, 增强体质的一种特殊商品, 药品质量的好坏直接关系到用药的安全 有效, 关系到人民的健康与生命安全 为了确保用药的安全 合理 有效, 必须从药品的研制 生产 供应和临床使用等过程全面控制药品质量, 药物分析在药品的质量控制中担负着重要任务 通过对药物成品的检验, 判断药品是否符合药品质量标准的要求, 只有符合药品质量标准的药品才能销售和供临床使用 同时在药品的生产过程中需进行中间体 半成品的质量控制, 在贮存过程中需对药物的稳定性进行考察 随着药学事业的发展, 药物分析学科还需配合临床医疗需要, 进行治疗药物浓度监测和体内内源性物质的测定 ; 配合临床药理学 遗传药理学进行药物动力学 代谢分型等研究 ; 配合药剂学的剂型研究进行生物利用度以及相应的新剂型的质量标准的研究与制定 ; 配合药物化学的化学合成和生产工艺流程的优化等进行质量监控 ; 而天然药物或中药的活性成分的化学结构确定 中成药质量的综合评价 生化药物和基因工程药物的质量分析均需要现代化的分离分析技术, 新药研究过程中的各个阶段更离不开药物分析这双 眼睛 因此, 可以说 哪里有药物, 哪里就有药物分析 同时, 药物分析又是一门实践性很强的方法学科, 从事药物分析的专业人员不仅要掌握药物分析的基本理论 基本知识, 还要有扎实的操作技能和实事求是的科学态度, 才能精确地分析研究一个药物的质量, 并对被分析的药物作出合理 公正和客观的评价 所以, 药物分析实验课是药物分析课程教学中不可缺少的组成部分, 是整个教学过程中的一个重要环节 通过药物分析实验课教学, 旨在培养学生熟练的分析操作技能, 理论联系实际的学风, 严谨 科学的工作作风和对事业的高度责任心 通过基本操作训练, 获得较强的从事药品质量控制工作的能力, 正确掌握药物常用法定方法及规范化操作技术, 通过设计性实验的训练, 模拟科学研究的整个过程, 培养学生独立思考和独立工作的能力, 以及运用药物分析理论及有关基础与专业知识去解决实际问题的能力, 为今后从事药品检验 新药研究和开展临床药物分析工作打下基础 二 药物分析的 三基 药物分析课程是在学习了无机化学 有机化学 分析化学 药物化学 天然药物化学 药剂学以及其他有关课程的基础上进行教学的一门综合性的应用学科 通过本课程的学习, 使学生树立起比较完整的药品质量观念, 掌握常用的鉴别 杂质检查和含量测定的基本原理与方法, 能够理解药物的化学结构 理化特性 存在状况与分析方法选择之间的关系, 并能综合运用所学知识, 解决药品质量问题和制定药品质量标准, 具备初步的科学研究能力 了解体内药物分析 生化药物分析和中药制剂分析的特点 要完成本门课程的学习, 必须掌握药物分析的 三基, 即 基本理论, 基本知识和基本操作 1. 基本理论所谓基本理论就是要掌握药品质量控制过程中分析方法所依据的有关理论, 化学反应的原理及基本规律, 化学变化中的当量关系, 药物的化学结构 理化性质与分析方法的相互关系, 理化特性 存在状态与分析方法选择之间的关系等 8

9 2. 基本知识为了掌握制订药品质量标准的依据, 必须认真地学习各类药物的法定分析方法, 掌握各类药物的通性, 典型药物的特性, 一般鉴别试验 一般杂质检查, 制剂分析的特点与基本分析方法, 限量 定量计算方法 临床药物分析方法等 这些知识具有应用上的广泛性, 具备了这些基本知识后, 就有 举一反三, 触类旁通 之效 3. 基本操作熟练地掌握各类仪器的洗涤 合理选用和正确使用 ; 掌握药物的定性分析技术, 药物的杂质检查方法, 容量分析中称量 滴定 定量转移 稀释等技术 ; 掌握比色法, 比浊法, 旋光法, 折光法, 电位法, 光谱法, 色谱法等分析技术的操作原理和测定方法 ; 掌握常见的有机破坏方法 这些基本操作的熟练程度关系到分析结果的精确性, 关系到对被检测药品 合格 与否的结论, 同时也关系到对存在问题的判断与解释 以上三者是相辅相成的, 光有理论知识而不会实际操作, 只能是 纸上谈兵 ; 而只会按照本本操作, 不懂理论知识, 则在出现异常情况时, 就会束手无策 因此, 要完成药物分析这门课程的学习, 应该将理论课程的学习与实验操作课的实践并重 用课堂理论知识指导实验, 例如对反应原理, 各步操作目的与注意问题及定量计算等, 做到心中有数, 有目的 有准备地去进行实验, 少走弯路, 避免差错 同时根据所学理论知识分析评判实验结果, 查找实验失败的原因, 或对分析方法提出改进措施等 通过实验课的实践, 加深理解课堂教学的内容, 补充课堂教学未涉及的内容, 如熟悉药品检验中常用专业术语 药典的正确使用与规范化操作, 以及如何根据药物结构, 实验室条件等选择合理 可行的分离分析方法等 在学习过程中应围绕药物的质量评价问题, 即药物的鉴别 检查和含量测定来学习, 而药物的鉴别 检查和含量测定则是根据药物的结构 理化性质, 选用合适的技术与分析方法来进行的, 所以要掌握药物分析课程的内容, 必须抓住 药物的结构 理化特性与分析方法的关系 这一主线 将各类药物的结构特征 鉴别试验 杂质检查 含量测定方法的原理 条件 结果与计算, 作为学习的重点 并重视实验技能的训练, 打好基础, 加强理论与实际的联系, 课前做好预习, 课后及时总结, 必要时需对相关课程的有关内容进行复习, 并前后联系融会贯通, 找出规律性的东西和异同点, 不断总结, 不断提高 三 药物分析实验课的要求 药物分析实验课是培养学生掌握基本操作技能的重要教学环节 通过有限的教学时数, 经过精心安排的实验内容的训练, 使学生了解药品质量控制的全貌和建立分析方法的一般思路 过硬的基本操作技能是进行药品质量控制与药品质量研究的基本条件, 也是保证药品质量真正符合法定标准的必要条件 如果因操作技术问题, 将合格产品检验成 不合格 品, 势必给生产厂家造成不必要的损失 ; 若将不合格产品检验成 合格 产品, 则会使劣质药品进入流通领域, 危害人民的健康 掌握基本技能的关键在于 三严, 即严肃的态度, 严密的方法和严格的要求 因此, 要求学生珍惜实验训练机会, 在实验过程中勤动手, 勤思考 为提高实验课教学效率, 必须做到如下几点 : 1. 课前做好预习 明确该次实验的目的要求, 弄懂原理及操作要点, 考虑实验中必须注意的事项 实验的顺序 所需的仪器及必要的准备 每次实验课应有准备地接受指导教师的提问 2. 要准备一个实验记录本, 在对药物进行分析时, 应将全部数据准确及时地用钢笔记录于记录本上, 决不允许记于小纸条上或实验讲义上甚至手掌上 原始记录是实验报告的组成部分, 尊重实验原始记录是必要的科学作风, 绝不允许将记录本内任何数据擅自涂改, 如系笔误, 仅能以钢笔将写错处划去 ( 但要求能看清原来数据 ), 再重写一次 实验完毕, 应写出实验报告, 并根据检验结果作出明确的结论 9

10 3. 在实验中要养成整洁 细致 踏实 准确而有系统的优良习惯, 切实严格遵守操 作规程, 注意基本操作与实验现象的观察分析 4. 头脑里随时都要有量的概念 任何一项含量测定均要同时做两份, 两次测定结果 含量高的值 含量低的值应相符, 间差不大于 0.4%{ 间差 = 100% } 绝平均值 不允许伪造或估计一个数据, 两次结果不能做依据时, 应重新测定一次 5. 实验课不得随便旷课, 或相互调课, 实验期间不得擅自离开实验室, 有急事须经 指导老师同意后方可离开 实验报告必须按规定时间上交教师批改 6. 实验时应避免试剂污染, 试剂瓶盖错盖, 或不随手加盖的现象发生 当不慎发生 试剂污染时, 应以负责态度及时处理 7. 爱护公物, 移物归位, 节约水电, 公用药品试剂或仪器用后应及时归位, 仪器用 后应洗净, 破损仪器要及时登记 8. 实验期间确保安全, 经常注意防火 防爆 9. 实验完毕做好各自实验台的清洁工作, 值日生应做好实验室的卫生清洁工作和检 查水 电 门 窗等安全事宜 10. 实验记录与报告格式可参考以下两个例子 例 1 实验一 葡萄糖分析年月日 原始记录 一 鉴别 本品 0.2g+ 水 5mL 溶解, 滴加碱性酒石酸铜 TS 砖红色 二 检查 1. 酸度 : 取本品 2.0g+ 水 20 ml 溶解后 + 酚酞 3 滴 ml Na 滴定液 (0.02mol/L) 显粉红色 2. 氯化物检查 : 甲管 : 本品 0.6g 水 25 ml 溶解 + 稀 N 3 10 ml 40 ml 乙管 : 标准 NaCl 溶液 6.0 ml+ 稀 N 3 10 ml ( 置 50 ml 纳氏比色管中 ) 水 +AgN 试液 1.0mL 3 水 50 ml, 摇匀, 暗处放置 5 分钟, 同置黑色背景上, 从比色 管上方向下观察 比较, 甲管浑浊度浅于乙管 实验报告 年 月日 检品名称 : 批号 : 规格 : 一 鉴别 原理 : 10

11 C C C C C CNa C C C 2 C Cu C CK C C C 2 C C CK Cu 2 () 2 ( 黄色 ) C 2 C 2 葡萄糖 Fehling 试剂葡萄糖酸 Cu 2 () 2 Cu 2 2 实验现象 : 砖红色沉淀 ( 红色 ) 结论 : 呈阳性反应, 符合规定 二 检查 1. 酸度 原理 : 检品中酸性杂质被碱中和, 过量的碱使酚酞显粉红色 实验现象 : 显粉红色 结论 : 符合规定 2. 氯化物检查 : N 3 原理 :Cl - +Ag + AgCl ( 白色 ) 实验现象 : 样品管浑浊度浅于标准管 结论 : 符合规定 ( < 0.01%) 讨论 : 对实验中出现的问题 解决的办法, 注意事项, 实验成败关键等进行讨论 例 2 实验二 异烟肼片含量测定年月日 原始记录 20 片重 + 瓶 片粉 瓶 g g g 水方法 : 取 20 片, 称重, 研细, 称取片粉适量, 置 100mL 量瓶中 + 水 振摇刻度, 摇匀, 用干燥滤纸滤过 取续滤液 25.00mL+ 水 50mL+ 盐酸 20mL+ 甲基橙指示剂 1 滴 用 mol/L(F=0.995)KBr 标准液滴定至红色消退 (T=3.429mg) 3 滴定体积 ml ml 11

12 计算 / / % = 101.3% / / % = 101.6% 平均 % 2 = 101.4(%) 间差 % = 0.3% 实验报告年月日 检品名称 : 批号 : 规格 : 原理 : N 2 3 N 2KBr Cl 3 3 N N 3N KBr 结果 : 测得本品含量为标示量的 %, 间差 <0.4 % 结论 : 符合规定 (95.0%~105.0%) 讨论 : 对实验中出现的问题 解决的办法, 注意事项, 实验成败关键等进行讨论 四 药物分析专业术语与规定 1. 药典收载的原料药及制剂, 均应按规定的方法进行检验 ; 如采用其他方法, 应将该方法与规定的方法做比较试验, 根据试验结果掌握使用, 但在仲裁时仍以药典规定的方法为准 2. 标准中规定的各种纯度和限度数值以及制剂的重 ( 装 ) 量差异, 系包括上限和下限两个数值本身及中间数值 规定的这些数值不论是百分数还是绝对数字, 其最后一位数字都是有效位 试验结果在运算过程中, 可比规定的有效数字多保留一位数, 而后根据有效数字的修约规则进舍至规定有效位 计算所得的最后数值或测定读数值均可按修约规则进舍至规定的有效位, 取此数值与标准中规定的限度数值比较, 以判断是否符合规定的限度 3. 标准品 对照品系指用于鉴别 检查 含量测定的标准物质 标准品与对照品 ( 不包括色谱用的内标物质 ) 均由国务院药品监督管理部门指定的单位制备 标定和供应 标准品系指用于生物检定 抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质, 按效价单位 ( 或 μg) 计, 以国际标准品进行标定 ; 对照品除另有规定外, 均按干燥品 ( 或无水物 ) 进行计算后使用 4. 试验时的温度, 未注明者, 系指在室温下进行 ; 温度高低对试验结果有显著影响者, 除另有规定外, 应以 25 ±2 为准 5. 试验用水, 除另有规定外, 均系指纯化水 酸碱度检查所用的水, 均系指新沸并放冷至室温的水 6. 酸碱性试验时, 如未指明用何种指示剂, 均系指石蕊试纸 12

13 7. 乙醇未指明浓度时, 均系指 95%(mL/mL) 的乙醇 8. 计算分子量以及换算因子等使用的原子量均按最新国际原子量表推荐的原子量 9. 药典采用的计量单位 (1) 药典使用的滴定液和试液的浓度, 以 mol/l( 摩尔 / 升 ) 表示者, 其浓度要求精密 标定的滴定液用 XXX 滴定液 (YYYmol/L) 表示 ; 作其他用途不需精密标定其浓度时, 用 YYYmol/L XXX 溶液 表示, 以示区别 此处 XXX 代表溶液名称,YYY 代表摩尔 浓度 例 : 盐酸滴定液 (0.1mol/L), 1mol/L 盐酸溶液 (2) 温度以摄氏度 ( ) 表示, 见表 1-1 表 1-1 温度术语 术语 温度 ( ) 术语 温度 ( ) 水浴 98~100 冷水 2~10 热水 70~80 冰浴 约 0 微温或温水 40~50 放冷 放冷至室温 室温 10~30 (3) 百分比用 % 符号表示, 系指重量的比例 ; 但溶夜的百分比, 系指溶液 100mL 中含有溶质若干克 ; 乙醇的百分比, 系指在 20 时容量的比例 此外, 根据需要可采用下列符号 : %(g/g) 表示溶液 100g 中含有溶质若干克 ; %(ml/ml) 表示溶液 100mL 中含有溶质若干毫升 ; %(ml/g) 表示溶液 100g 中含有溶质若干毫升 ; %(g/ml) 表示溶液 100mL 中含有溶质若干克 (4) 液体的滴, 系在 20 时, 以 1.0mL 水为 20 滴进行换算 (5) 溶液后记示的 (1 10) 等符号, 系指固体溶质 1.0g 或液体溶质 1.0mL 加溶剂使成 10mL 的溶液 ; 未指明用何种溶剂时, 均系指水溶液 ; 两种或两种以上液体的混合物, 名称间用半字线 - 隔开, 其后括号内所示的 : 符号, 系指各液体混合时的体积 ( 重量 ) 比例 10. 药品 性状 项下记载药品的外观 臭 味 溶解度以及物理常数等 (1) 外观性状是对药品的色泽和外表感观的规定 遇有对药品的晶型 细度或溶液的颜色需作严格控制时, 应在检查项下另作具体规定 (2) 溶解度是药品的一种物理性质 正文品种下选用的部分溶剂及其在该溶剂中的溶解性能, 可供精制或制备溶液时参考 药品的溶解度表示方法如表 1-2 表 1-2 药品的溶解度表示方法 溶解度表示方法 使 1g 或 1mL 溶质溶解的溶剂体积 (ml) 极易溶解 <1mL 易溶 1~<10mL 溶解 10~<30 ml 略溶 30~<100 ml 微溶 100~<1000 ml 极微溶解 1000~<10000 ml 几乎不溶或不溶 ml 中不能完全溶解 试验法 : 称取研成细粉的供试品或量取液体供试品, 置于 25 ±2 一定容量 的溶剂中, 每隔 5 分钟强力振摇 30s; 观察 30min 内的溶解情况, 如看不见溶质颗粒 或液滴时, 即视为完全溶解 13

14 (3) 物理常数包括相对密度 馏程 熔点 凝点 比旋度 折光率 黏度 吸收系数 碘值 皂化值和酸值等 ; 测定结果不仅对药品具有鉴别意义, 也反映药品的纯度, 是评价药品质量的主要指标之一 11. 药典鉴别项下规定的试验方法, 仅适用于鉴别药品的真伪 ; 对于原料药, 还应结合性状项下的外观和物理常数进行确认 12. 药典检查项下包括有效性 均一性 纯度要求与安全性四个方面 ; 对于规定中的各种杂质检查项目, 系指该药品在按既定工艺进行生产和正常贮藏过程中可能含有或产生并需要控制的杂质 ; 改变生产工艺时需另考虑增修订有关项目 (1) 原料药和制剂在生产过程中, 如使用有害的有机溶剂, 应按药典有机溶剂残留量测定法检查, 并应符合规定 (2) 恒重, 除另有规定外, 系指供试品连续两次干燥或炽灼后的重量差异在 0.3mg 以下的重量 ; 干燥至恒重的第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥 1 小时后进行 ; 炽灼至恒重的第二次称重应在继续炽灼 30 分钟后进行 13. 含量测定 (1) 药典规定原料药的含量 (%), 除另有注明者外, 均按重量计 如规定上限为 100% 以上时, 系指用本药典规定的分析方法测定时可能达到的数值, 它为药典规定的限度或允许偏差, 并非真实含有量 ; 如未规定上限时, 系指不超过 101.0% (2) 制剂的含量限度范围, 系根据主药含量的多少 测定方法 生产过程和贮存期间可能产生的偏差或变化而制定的, 生产中应按标示量 100% 投料 如已知某一成分在生产或贮存期间含量会降低, 生产时可适当增加投料量, 以保证在有效期 ( 或使用期限 ) 内含量能符合规定 (3) 试验中供试品与试药等 称重 或 量取 的量, 均以阿拉伯数码表示, 其精确度可根据数值的有效数位来确定, 如称取 0.1g, 系指称取重量可为 0.06~0.14g; 称取 2g, 系指称取重量可为 1.5~2.5g; 称取 2.0g, 系指称取重量可为 1.95~2.05g; 称取 2.00g, 系指称取重量可为 1.995~2.005g 精密称定 系指称取重量应准确至所取重量的千分之一 ; 称定 系指称取重量应准确至所取重量的百分之一 ; 精密量取 系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精密度要求 ; 量取 系指可用量筒或按照量取体积的有效数位选用量具 取用量为 约 若干时, 系指取用量不得超过规定量的 ±10% (4) 试验中规定 按干燥品 ( 或无水物, 或无溶剂 ) 计算 时, 除另有规定外, 应取未经干燥 ( 或未去水, 或未去溶剂 ) 的供试品进行试验, 并将计算中的取用量按检查项下测得的干燥失重 ( 或水分, 或溶剂 ) 扣除 (5) 试验中的 空白试验, 系指在不加供试品或以等量溶剂替代供试液的情况下, 按同法操作所得的结果 ; 含量测定中的 并将滴定的结果用空白试验校证, 系指按供试品所耗滴定液的量 (ml) 与空白试验中所耗滴定液量 (ml) 之差进行计算 14. 制剂的规格, 系指每一支 片或其他每一个单位制剂中含有主药的重量 ( 或效价 ) 或含量 (%) 或装量 ; 注射液项下, 如为 1mL:10mg, 系指 1mL 中含有主药 10mg 15. 贮藏项下的规定, 系对药品贮存与保管的基本要求, 以下列名词表示 : 遮光系指用不透光的容器包装, 例如棕色容器或黑纸包裹的无色透明 半透明容器 ; 密闭系指将容器密闭, 以防止尘土及异物进入 ; 密封系指将容器密封以防止风化 吸潮 挥发或异物进入 ; 熔封或严封系指将容器熔封或用适宜的材料严封, 以防止空气与水分的侵入并防止污染 ; 14

15 阴凉处系指不超过 20 ; 凉暗处系指避光并不超过 20 ; 冷处系指 2~10 五 常用标准溶液的配制与标定 1. 盐酸滴定液 (1mol/L 0.5mol/L 0.2mol/L 或 0.1mol/L) Cl=36.46 [ 配制 ] 盐酸滴定液 (1mol/L) 取盐酸 90mL, 加水适量使成 1000mL, 摇匀 盐酸滴定液 (0.5mol/L 0.2mol/L 或 0.1mol/L) 照上法配制, 但盐酸的取用量分别为 45mL 18mL 或 9.0mL [ 标定 ] 盐酸滴定液 (1mol/L) 取在 270~300 干燥至恒重的基准无水碳酸钠约 1.5g, 精密称定, 加水 50mL 使溶解, 加甲基红 - 溴甲酚绿混合指示液 10 滴, 用本液滴定至溶液由绿色转变为紫红色时, 煮沸 2min, 冷却至室温, 继续滴定至溶液由绿色变为暗紫色 每 1mL 盐酸滴定液 (1mol/L) 相当于 53.00mg 的无水碳酸钠 根据本液的消耗量与无水碳酸钠的取用量, 算出本液的浓度, 即得 盐酸滴定液 (0.5mol/L) 照上法标定, 但基准无水碳酸钠的取用量改为约 0.8g 每 1mL 盐酸滴定液 (0.5mol/L) 相当于 26.50mg 的无水碳酸钠 盐酸滴定液 (0.2mol/L) 照上法标定, 但在准无水碳酸钠的取用量改为约 0.3g 每 1mL 盐酸滴定液 (0.2mol/L) 相当于 10.60mg 的无水碳酸钠 盐酸滴定液 (0.1mol/L) 照上法标定, 但基准无水碳酸钠的取用量改为约 0.15g 每 1mL 盐酸滴定液 (0.1mol/L) 相当于 5.30mg 的无水碳酸钠 如需用盐酸滴定液 (0.05mol/L 0.02mol/L 或 0.01mol/L) 时, 可取盐酸滴定液 (1mol/L 或 0.1mol/L) 加水稀释制成 必要时标定浓度 2. 硫酸滴定液 (0.5mol/L 0.25mol/L 0.1mol/L 或 0.05mol/L) 2 S 4 =98.08 [ 配制 ] 硫酸滴定液 (0.5mol/L) 取硫酸 30mL, 缓缓注入适量水中, 冷却至室温, 加水稀释至 1000mL, 摇匀 硫酸滴定液 (0.25mol/L 0.1mol/L 或 0.05mol/L) 照上法配制, 但硫酸的取用量分别为 15mL 6.0mL 或 3.0mL [ 标定 ] 照盐酸滴定液 (1mol/L 0.5mol/L 0.2 mol/l 或 0.1mol/L) 项下的方法标定, 即得 如需用硫酸滴定液 (0.01mol/L) 时, 可取硫酸滴定液 (0.5mol/L 0.1mol/L 或 0.05mol/L) 加水稀释制成, 必要时标定浓度 3. 氢氧化钠滴定液 (1mol/L 0.5mol/L 或 0.1mol/L) Na=40.00 [ 配制 ] 取氢氧化钠适量, 加水振摇使溶解成饱和溶液, 冷却后, 置聚乙烯塑料瓶中, 静置数日, 澄清后备用 氢氧化钠滴定液 (1mol/L 0.5mol/L 0.1mol/L) 分别取澄清的氢氧化钠饱和溶液 56mL 28mL 5.6mL, 加新沸过的冷水使成 1000mL, 摇匀 [ 标定 ] 氢氧化钠滴定液 (1mol/L) 取在 105 干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约 6g, 精密称定, 加新沸过的冷水 50mL, 振摇, 使其尽量溶解 ; 加酚酞指示液 2 滴, 用本液滴定 ; 在接近终点时, 应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解, 滴定至溶液显粉红色 每 1mL 氢氧化钠滴定液 (1mol/L) 相当于 204.2mg 的邻苯二甲酸氢钾 根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量, 算出本液的浓度, 即得 15

16 氢氧化钠滴定液 (0.5mol/L 0.1mol/L) 分别取在 105 干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约 3g 0.6g, 照上法标定 每 1mL 氢氧化钠滴定液相当于 102.1mg 20.42mg 的邻苯二甲酸氢钾 如需用氢氧化钠滴定液 (0.05mol/L 0.02mol/L 或 0.01mol/L) 时, 可取氢氧化钠滴定液 (0.1mol/L) 加新沸过的冷水稀释制成 必要时, 可用盐酸滴定液 (0.05mol/L 0.02mol/L 或 0.01mol/L) 标定浓度 [ 贮藏 ] 置聚乙烯塑料瓶中, 密封保存 ; 塞中有 2 孔, 孔内各插入玻璃管 1 支,1 管与钠石灰管相连,1 管供吸出本液使用 4. 高氯酸滴定液 (0.1mol/L) Cl 4 = [ 配制 ] 取无水冰醋酸 ( 按含水量计算, 每 1g 水加醋酐 5.22mL)750mL, 加入高氯酸 (70%~72%)8.5mL, 摇匀, 在室温下缓缓滴加醋酐 23mL, 边加边摇, 加完后再振摇均匀, 放冷, 加无水冰醋酸适量使成 1000mL, 摇匀, 放置 24 小时 若所测供试品易乙酰化, 则须用水分测定法测定本液的含水量, 再用水和醋酐调节至本液的含水量为 0.01%~0.2% [ 标定 ] 取在 105 干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约 0.16g, 精密称定, 加无水冰醋酸 20mL 使溶解, 加结晶紫指示液 1 滴, 用本液缓缓滴定至蓝色, 并将滴定的结果用空白试验校正 每 1mL 高氯酸滴定液 (0.1mol/L) 相当于 20.42mg 的邻苯二甲酸氢钾 根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量, 算出本液的浓度, 即得 如需用高氯酸滴定液 (0.05mol/L 或 0.02mol/L) 时, 可取高氯酸滴定液 (0.1mol/L) 用无水冰醋酸稀释制成, 并标定浓度 [ 贮藏 ] 置棕色玻瓶, 密闭保存 5. 硫代硫酸钠滴定液 (0.1mol/L) Na 2 S 5 = [ 配制 ] 取硫代硫酸钠 26g 与无水碳酸钠 0.20g, 加新沸过的冷水适量使溶解成 1000mL, 摇匀, 放置 1 个月后滤过 [ 标定 ] 取在 120 干燥至恒重的基准重铬酸钾 0.15g, 精密称定, 置碘瓶中, 加水 50mL 使溶解, 加碘化钾 2.0g, 轻轻振摇使溶解, 加稀硫酸 40mL, 摇匀, 密塞, 在暗处放置 10 分钟后, 加水 250mL 稀释, 用本液滴定至近终点时, 加淀粉指示液 3mL, 继续滴定至蓝 色消失而显亮绿色, 并将滴定的结果用空白试验校正 每 1mL 硫代硫酸钠滴定液 (0.1mol/L) 相当于 4.903mg 的重铬酸钾 根据本液的消耗量与重铬酸钾的取用量, 算出 本液的浓度, 即得 室温在 25 以上时, 应将反应液及稀释用水降温至约 20 如需用硫代硫酸钠滴定液 (0.01mol/L 或 0.005mol/L) 时, 可取硫代硫酸钠滴定液 (0.1mol/L) 在临用前加新沸过的冷水稀释制成 6. 碘滴定液 (0.1mol/L) I= [ 配制 ] 取碘 13.0g, 加碘化钾 36g 与水 50mL 溶解后, 加盐酸 3 滴与水适量使成 1000mL, 摇匀, 用垂熔玻璃滤器滤过 [ 标定 ] 取在 105 干燥至恒重的基准三氧化二砷约 0.15g, 精密称定, 加氢氧化钠滴定液 (1mol/L)10mL, 微热使溶解, 加水 20mL 与甲基橙指示液 1 滴, 加硫酸滴定液 (0.5mol/L) 适量使黄色转变为粉红色, 再加碳酸氢钠 2g 水 50mL 与淀粉指示液 2mL, 用本液滴定至溶液显浅蓝紫色 每 1mL 碘滴定液 (0.1mol/L) 相当于 4.946mg 的三氧化二砷 根据本液的消耗量与三氧化二砷的取用量, 算出本液的浓度 即得 如需用碘滴定液 (0.05mol/L) 时, 可取碘滴定液 (0.1mol/L) 加水稀释制成 16

17 [ 贮藏 ] 置玻璃塞的棕色玻瓶中, 密闭, 在凉处保存 7. 溴酸钾滴定液 ( mol/L) KBr 3 = [ 配制 ] 取溴酸钾 2.8g, 加水适量使溶解成 1000mL, 摇匀 [ 标定 ] 精密量取本液 25mL, 置碘瓶中, 加碘化钾 2.0g 与稀硫酸 5mL, 密塞, 摇匀, 在暗处放置 5 分钟后, 加水 100mL 稀释, 用硫代硫酸钠滴定液 (0.1mol/L) 滴定至近终点时, 加淀粉指示液 2mL, 继续滴定至蓝色消失 根据硫代硫酸钠滴定液 (0.1mol/L) 的消耗量, 算出本液的浓度, 即得 室温在 25 以上时, 应将反应液及稀释用水降温至约 溴滴定液 (0.1mol/L) Br=79.90 [ 配制 ] 取溴酸钾 3.0g 与溴化钾 15g, 加水适量使溶解成 1000mL, 摇匀 [ 标定 ] 精密量取本液 25mL, 置碘瓶中, 加水 100mL 与碘化钾 2.0g, 振摇使溶解, 加盐酸 5mL, 密塞, 振摇, 在暗处放置 5 分钟, 用硫代硫酸钠滴定液 (0.1mol/L) 滴定至近终点时, 加淀粉指示液 2mL, 继续滴定至蓝色消失 根据硫代硫酸钠滴定液 (0.1mol/L) 的消耗量, 算出本液的浓度, 即得 室温在 25 以上时, 应将反应液降温至约 20 本液每次临用前均应标定浓度 如需用溴滴定液 (0.01mol/L) 时, 可取溴滴定液 (0.1mol/L) 加水稀释制成, 并标定浓度 [ 贮藏 ] 置玻璃塞的棕色玻瓶中, 密闭, 在凉处保存 9. 亚硝酸钠滴定液 (0.1mol/L) NaN 2 =69.00 [ 配制 ] 取亚硝酸钠 7.2g, 加无水碳酸钠 (Na C 2 3)0.10g, 加水适量使溶解成 1000mL, 摇匀 [ 标定 ] 取在 120 干燥至恒重的基准对氨基苯磺酸约 0.5g, 精密称定, 加水 30mL 与浓 氨试液 3mL, 溶解后, 加盐酸 (1 2)20mL, 搅拌, 在 30 以下用本液迅速滴定, 滴定 时将滴定管尖端插入液面下约 2/3 处, 随滴随搅拌 ; 至近终点时, 将滴定管尖端提出液 面, 用少量水洗涤尖端, 洗液并入溶液中, 继续缓缓滴定, 用永停法指示终点 每 1mL 亚硝酸钠滴定液 (0.1mol/L) 相当于 17.32mg 的对氨基苯磺酸 根据本液的消耗量与对氨 基苯磺酸的取用量, 算出本液浓度, 即得 如需用亚硝酸钠滴定液 (0.05mol/L) 时, 可取亚硝酸钠滴定液 (0.1mol/L) 加水稀释 制成 必要时标定浓度 [ 贮藏 ] 置玻璃塞的棕色玻瓶中, 密闭保存 10. 草酸滴定液 (0.05mol/L) C = [ 配制 ] 取草酸 6.4g, 加水适量使溶解成 1000mL, 摇匀 [ 标定 ] 精密量取本液 25mL, 加水 200mL 与硫酸 10mL, 用高锰酸钾滴定液 (0.02mol/L) 滴定, 至近终点时, 加热至 65, 继续滴定至溶液显微红色, 并保持 30 秒钟不褪 ; 当滴 定终了时, 溶液温度应不低于 55 根据高锰酸钾滴定液 (0.02mol/L) 的消耗量, 算出 本液的浓度, 即得 如需用草酸滴定液 (0.25mol/L) 时, 可取草酸约 32g, 照上法配制与标定, 但改用高 锰酸钾滴定液 (0.1mol/L) 滴定 [ 贮藏 ] 置玻璃塞的棕色玻瓶中, 密闭保存 17

18 11. 高锰酸钾滴定液 (0.02mol/L) KMn= [ 配制 ] 取高锰酸钾 3.2g, 加水 1000mL, 煮沸 15min, 密塞, 静置 2 日以上, 用垂熔玻璃 滤器滤过, 摇匀 [ 标定 ] 取在 105 干燥至恒重的基准草酸钠约 0.2g, 精密称定, 加新沸过的冷水 250mL 与硫酸 10mL, 搅拌使溶解, 自滴定管中迅速加入本液约 25mL, 待褪色后, 加热至 65, 继续滴定至溶液显微红色并保持 30s 不褪 ; 当滴定终了时, 溶液温度应不低于 55, 每 1mL 高锰酸钾滴定液 (0.02mol/L) 相当于 6.70mg 的草酸钠 根据本液的消耗量与草酸钠 的取用量, 算出本液的浓度, 即得 如需用高锰酸钾滴定液 (0.002mol/L) 时, 可取高锰酸钾滴定液 (0.02mol/L) 加水稀 释, 煮沸, 放冷, 必要时滤过, 再标定其浓度 [ 贮藏 ] 置玻璃塞的棕色玻瓶中, 密闭保存 12. 硝酸银滴定液 (0.1mol/L) AgN= [ 配制 ] 取硝酸银 17.5g, 加水适量使溶解成 1000mL, 摇匀 [ 标定 ] 取在 110 干燥至恒重的基准氯化钠约 0.2g, 精密称定, 加水 50mL 使溶解, 再 加糊精溶液 (1 50)5mL 碳酸钙 0.1g 与荧光黄指示液 8 滴, 用本液滴定至浑浊液由黄 绿色变为微红色 每 1mL 硝酸银滴定液 (0.1mol/L) 相当于 5.844mg 的氯化钠 根据本液 的消耗量与氯化钠的取用量, 算出本液的浓度, 即得 如需用硝酸银滴定液 (0.01mol/L) 时, 可取硝酸银滴定液 (0.1mol/L) 在临用前加水 稀释制成 [ 贮藏 ] 置玻璃塞的棕色玻瓶中, 密闭保存 13. 硫氰酸铵滴定液 (0.1mol/L) N 4 SCN=76.12 [ 配制 ] 取硫氰酸铵 8.0g, 加水使溶解成 1000mL, 摇匀 [ 标定 ] 精密量取硝酸银滴定液 (0.1mol/L)25mL, 加水 50mL 硝酸 2mL 与硫酸铁铵指示液 2mL, 用本液滴定至溶液微显淡棕红色 ; 经剧烈振摇后仍不褪色, 即为终点 根据本液的消耗量算出本液的浓度, 即得 硫氰酸钠滴定液 (0.1mol/L) 或硫氰酸钾滴定液 (0.1mol/L) 均可作为本液的代用品 14. 乙二胺四醋酸二钠滴定液 (0.05mol/L) C N2Na2 8 22= [ 配制 ] 取乙二胺四醋酸二钠 19g, 加适量的水使溶解成 1000mL, 摇匀 [ 标定 ] 取于约 800 灼烧至恒重的基准氧化锌 0.12g, 精密称定, 加稀盐酸 3mL 使溶解, 加水 25mL, 加 0.025% 甲基红的乙醇溶液 1 滴, 滴加氨试液至溶液显微黄色, 加水 25mL 与氨 - 氯化铵缓冲液 (p10.0)10ml, 再加铬黑 T 指示剂少量, 用本液滴定至溶液由紫色 变为纯蓝色, 并将滴定结果用空白试验校正 每 1mL 乙二胺四醋酸二钠滴定液 (0.05mol/L) 相当于 4.069mg 的氧化锌 根据本液的消耗量与氧化锌的取用量, 算出本液的浓度, 即得 [ 贮藏 ] 置玻璃塞瓶中, 避免与橡皮塞 橡皮管等接触 15. 硫酸铈滴定液 (0.1 mol/l) Ce(S) 4 = [ 配制 ] 取硫酸铈 42 g( 或硫酸铈铵 70g), 加含有硫酸 28mL 的水 500mL, 加热溶解后, 放冷, 加水适量使成 1000mL, 摇匀 [ 标定 ] 取在 105 干燥至恒重的基准三氧化二砷 0.15g, 精密称定, 加氢氧化钠滴定液 (1 mol/l)10ml, 微热使溶解, 加水 50mL 盐酸 25mL 一氯化碘试液 5mL 与邻二氮菲指 示液 2 滴, 用本液滴定至近终点时, 加热至 50, 继续滴定至溶液由浅红色转变为淡绿 18

19 色 每 1mL 硫酸铈滴定液 (0.1 mol/l) 相当于 4.946mg 的三氧化二砷 根据本液的消耗量与三氧化二砷的取用量, 算出本液的浓度, 即得 如需用硫酸铈滴定液 (0.01 mol/l) 时, 可精密量取硫酸铈滴定液 (0.1 mol/l), 用每 100mL 中含硫酸 2.8mL 的水定量稀释制成 六 药品质量标准分析方法验证 药品质量标准的分析方法根据其使用的对象和检验目的都有相应的效能指标 对分析方法评价的目的不仅是要验证采用的方法是否适合于相应的检验要求, 同时也是建立新的分析方法的实验研究依据 中国药典规定的需验证的分析项目有 : 鉴别试验, 杂质定量或限度检查, 原料药或制剂中有效成分含量测定, 制剂中其他成分 ( 如降解产物 防腐剂等 ) 的测定以及药品溶出度 释放度等测试方法 分析方法的效能评价指标包括 : 准确度 精密度 ( 包括重复性 中间精密度和重现性 ) 专属性 检测限 定量限 线性 范围和耐用性 根据不同分析项目拟订验证的内容 ( 一 ) 准确度准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度, 一般以回收率 (%) 表示 准确度应在规定的范围内建立 1 含量测定方法的准确度原料药可用已知纯度的对照品或样品进行测定, 或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较 制剂可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定 如不能得到制剂的全部组分, 可向制剂中加入已知量的被测物进行测定, 或与另一个已建立准确度的方法比较结果 2 杂质定量测定的准确度可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定 如果不能得到杂质或降解产物, 可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较, 如药典标准方法或经过验证的方法 如不能测得杂质或降解产物的相对响应因子, 则可用原料药的响应因子 应明确证明单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比 (%), 或是面积比 (%) 3 测定数据要求在规定范围内, 制备高 中 低 3 个不同浓度的样品, 各测定 3 次, 用 9 次测定结果进行评价 应报告已知加入量的回收率 (%), 或测定结果平均值与真实值之差及其可信限, 回收率的相对标准差 (RSD) 一般应在 2% 以内 ( 二 ) 精密度精密度系指在规定的测试条件下, 同一个均匀样品, 经多次取样测定所得结果之间的接近程度 精密度一般用偏差 标准偏差或相对标准偏差表示 在相同条件下, 由一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性 ; 在同一个实验室, 不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度, 称为中间精密度 ; 在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度, 称为重现性 1 重复性在规定范围内, 制备 3 个不同浓度的样品, 各测定 3 次, 用 9 次测定结果进行评价, 或把被测物浓度当作 100%, 用至少测定 6 次的结果进行评价 2 中间精密度为考察随机变动因素对精密度的影响, 应进行中间精密度试验 变动因素为不同日期 不同分析人员 不同设备 3 重现性当分析方法将被法定标准采用时, 应进行重现性试验 如建立药典分析方法时通过协同检验得出重现性结果 4 分析数据要求均应报告标准偏差 相对标准偏差和可信限 ( 三 ) 专属性专属性系指在其他成分 ( 如杂质 降解产物 辅料等 ) 可能存在下, 采用的方法能 19

20 准确测定出被测物的特性 鉴别反应 杂质检查 含量测定方法, 均应考察其专属性 1 鉴别反应应能与可能共存的物质或结构相似化合物区分 不含被测成分的样品, 以及结构相似或组分中的有关化合物, 均应呈负反应 2 含量测定和杂质测定色谱法和其他分离方法, 应附代表性图谱, 以说明专属性 图中应标明诸成分的位置, 色谱法中的分离度应符合要求 在杂质可获得的情况下, 对于药物的含量测定, 试样中可加入杂质或辅料, 考察测定结果是否受干扰, 并与未加杂质和辅料的试样比较测定结果 对于药物中杂质的测定, 也可向试样中加入一定量的杂质, 考察杂质能否得到分离 在杂质或降解产物不能获得的情况下, 可将含有杂质或降解产物的试样进行测定, 与另一个经验证了的或药典方法比较结果 用强光照射, 高温, 高湿, 酸 碱水解, 或氧化的方法进行加速破坏, 以研究降解产物 含量测定方法应对比两法的结果, 杂质测定应对比检出的杂质个数, 必要时可采用光电二极管阵列检测和质谱检测, 进行纯度检查 ( 四 ) 检测限检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量 常用的方法如下 1 非仪器分析目视法用已知浓度的被测物, 试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量 2 信噪比法用于能显示基线噪音的分析方法, 即把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较, 算出能被可靠地检测出的最低浓度或量 一般以信噪比为 3:1 或 2:1 时相应浓度或注入仪器的量确定检测限 3 测定数据要求应附测试图谱, 说明测试过程和检测限结果 ( 五 ) 定量限定量限系指样品中被测物能被定量测定的最低量, 其测定结果应具一定准确度和精密度 杂质和降解产物用定量测定方法研究时, 应确定定量限 常用信噪比法确定定量限 一般以信噪比为 10:1 时相应的浓度或注入仪器的量进行确定 ( 六 ) 线性线性系指在设计的范围内, 测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度 应在规定的范围内测定线性关系 可用一贮备液经精密稀释, 或分别精密称样, 制备一系列供试样品的方法进行测定, 至少制备 5 份供试样品 以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图, 观察是否呈线性, 再用最小二乘法进行线性回归 测定数据要求 : 应列出回归方程 相关系数和线性图 ( 七 ) 范围范围系指能达到一定精密度 准确度和线性, 测试方法适用的高低限浓度或量的区间 范围应根据分析方法的具体应用和线性 准确度 精密度结果和要求确定 原料药和制剂含量测定, 范围应为测试浓度的 80%~120%; 制剂含量均匀度检查, 范围应为测试浓度的 70%~130%, 根据剂型特点, 如气雾剂 喷雾剂, 范围可适当放宽, 溶出度或释放度中的溶出量测定, 范围应为限度的 ±20%; 如规定限度范围, 则应为下限的 -20% 至上限的 +20%; 杂质测定, 研究时, 范围应根据初步实测, 拟订出规定限度的 ±20% 如果含量测定与杂质检查同时测定, 用百分归一化法, 则线性范围应为杂质规定的 -20% 至含量限度 ( 或上限 ) 的 +20% ( 八 ) 耐用性耐用性系指在测定条件有小的变动时, 测定结果不受影响的承受程度, 为常规检验提供依据 典型的变动因素有 : 被测溶液的稳定性, 样品提取次数 时间等 液相色谱法中典型的变动因素有 : 流动相的组成和 p 值, 不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱, 柱温, 20

21 流速等 气相色谱法变动因素有 : 不同厂牌或批号的色谱柱 固定相, 不同类型的担体 柱温, 进样口和检测器温度等 经试验, 应说明小的变动能否通过设计的系统适用性试验, 以确保方法有效 如果测试条件要求苛刻, 则应在方法中写明 表 1-3 列出了分析项目和相应的验证内容 表 1-3 检验项目和验证内容 项目杂质测定含量测定及鉴别内容定量限度溶出量测定 准确度 + + 精密度 + 重复性 + + 中间精密度 专属性 检测限 3 + 定量限 + 线性 + + 范围 + + 耐用性 已有重现性验证, 不需验证中间精密度 2 如一种方法不够专属, 可用其他分析方法予以补充 3 视具体情况予以验证 21

22 第二章实 验 一 验证性实验 实验一 药物的杂质检查一 目的要求 1. 掌握药物的一般杂质检查原理与实验方法 2. 掌握杂质限度试验的概念及计算方法 3. 熟悉一般杂质检查项目与意义 二 主要仪器与药品 50mL 纳氏比色管,100mL 测砷瓶, 药物天平, 刻度吸管 葡萄糖 氯化钠原料药 三 实验方法 ( 一 ) 葡萄糖 (Glucose) 2 (C ) 6 2 酸度取本品 2.0g, 加水 20mL 溶解后, 加酚酞指示液 3 滴与氢氧化钠滴定液 (0.02mol/L)0.20mL, 应显粉红色 溶液的澄清度与颜色取本品 5g, 加热水溶解后, 放冷, 用水稀释至 10mL, 溶液应澄清无色 ; 如显浑浊, 与 1 号浊度标准液 ( 附录 A) 比较, 不得更浓 ; 如显色, 与对照液 ( 取比色用氯化钴液 3mL 比色用重铬酸钾液 3mL 与比色用硫酸铜液 6mL, 加水稀释成 50mL)1.0mL 加水稀释至 10mL 比较, 不得更深 乙醇溶液的澄清度取本品 1.0g, 加 90% 乙醇 30mL, 置水浴上加热回流约 10min, 溶液应澄清 氯化物取本品 0.6g, 加水溶解使成 25mL, 再加稀硝酸 10mL; 溶液如不澄清, 应滤过 ; 置 50mL 纳氏比色管中, 加水使成约 40mL, 摇匀, 即得供试溶液 另取标准氯化钠溶液 6.0mL, 置 50mL 纳氏比色管中, 加稀硝酸 10mL, 加水使成 40mL, 摇匀, 即得对照溶液 于供试溶液与对照溶液中, 分别加入硝酸银试液 1.0mL, 用水稀释, 使成 50mL, 摇匀, 在暗处放置 5 分钟, 同置黑色背景上, 从比色管上方向下观察 比较 ( 附录 B) 供试溶液所显浑浊度不得较对照液更浓 (0.01%) 硫酸盐取本品 2.0g, 加水溶解使成约 40mL; 溶液如不澄清, 应滤过 ; 置 50mL 纳氏比色管中, 加稀盐酸 2mL, 摇匀, 即得供试溶液 另取标准硫酸钾溶液 2.0mL, 置 50mL 纳氏比色管中, 加水使成约 40mL, 加稀盐酸 2mL, 摇匀, 即得对照溶液 于供试溶液与对照溶液中, 分别加入 25% 氯化钡溶液 5mL, 用水稀释至 50mL, 充分摇匀, 放置 10 分钟, 同置黑色背景上, 从比色管上方向下观察 比较 ( 附录 C) 供试溶液所显浑浊度不得较对照液更浓 (0.01%) 22

23 亚硫酸盐与可溶性淀粉取本品 1.0g, 加水 10mL 溶解后, 加碘试液 1 滴, 应即显黄色 干燥失重取本品, 在 105 干燥至恒重, 减失重量不得过 9.5%( 附录 D) 炽灼残渣不得过 0.1%( 附录 E) 蛋白质取本品 1.0g, 加水 10mL 溶解后, 加磺基水杨酸溶液 (1 5)3mL, 不得发生沉淀 铁盐取本品 2.0g, 加水 20mL 溶解后, 加硝酸 3 滴, 缓缓煮沸 5 分钟, 放冷, 加水稀释使成 45mL, 加硫氰酸铵溶液 (30 100)3mL, 摇匀, 如显色, 与标准铁溶液 2.0mL 用同一方法制成的对照液比较, 不得更深 (0.001%) 重金属取 25mL 纳氏比色管两支, 甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液 (p3.5)2ml 后, 加水稀释成 25mL 取本品 4.0g, 置乙管中, 加水适量溶解后, 加醋酸盐缓冲液 (p3.5)2ml, 加水使成 25mL; 若供试液带颜色, 可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液, 使之与乙管颜色一致 再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各 2mL, 摇匀, 放置 2 分钟, 同置白纸上, 自上向下透视, 乙管中显出的颜色与甲管比较, 不得更深 ( 附录 F), 含重金属不得过百万分之五 砷盐取本品 2.0g, 加水 5mL 溶解后, 加稀硫酸 5mL 与溴化钾溴试液 0.5mL, 置水浴上加热约 20 分钟, 使保持稍过量的溴存在, 必要时, 再补加溴化钾溴试液适量, 并随时补充蒸散的水分, 放冷, 加盐酸 5mL 与水适量使成 28mL, 置测砷瓶中, 作为供试溶液 另精密量取标准砷溶液 2mL, 照供试品制备项下方法, 自 加水 5mL 溶解后 起, 至 置测砷瓶中, 同法处理, 作为标准液 取供试溶液和标准液分别进行以下操作 : 加碘化钾试液 5mL 与酸性氯化亚锡试液 5 滴, 在室温放置 10min 后, 加锌粒 2g, 立即将装妥的导气管密塞于测砷瓶上, 并将测砷瓶置 25~40 水浴中, 反应 45min, 取出溴化汞试纸, 比较 供试溶液生成的砷斑与标准砷斑比较 ( 附录 G), 不得更深 (0.0001%) ( 二 ) 氯化钠(Sodium Chloride) 酸碱度取本品 5.0g, 加水 50mL 溶解后, 加溴麝香草酚蓝指示液 2 滴, 如显黄色, 加氢氧化钠滴定液 (0.02mol/L)0.10mL, 应变为蓝色 ; 如显蓝色或绿色, 加盐酸滴定液 (0.02mol/L)0.20mL, 应变为黄色 溶液的澄清度取本品 5.0g, 加水 25mL 溶解后, 溶液应澄清 碘化物取本品的细粉 5.0g, 置瓷蒸发皿内, 滴加新配制的淀粉混合液 ( 取可溶性淀粉 0.25g, 加水 2mL, 搅匀, 再加沸水至 25mL, 随加随搅拌, 放冷, 加 0.025mol/L 硫酸溶液 2mL 亚硝酸钠试液 3 滴与水 25mL, 混匀 ) 适量使晶粉湿润, 置日光下 ( 或日光灯下 ) 观察,5 分钟内晶粒不得显蓝色痕迹 溴化物取本品 2.0g, 加水 10mL 使溶解, 加盐酸 3 滴与氯仿 1mL, 边振摇边滴加 2% 氯胺 T 溶液 ( 临用新制 )3 滴, 氯仿层如显色, 与标准溴化钾溶液 ( 精密称取在 105 干燥至恒重的溴化钾 g, 加水使溶解成 100mL, 摇匀 )1.0mL 用同一方法制成的对照液比较, 不得更深 硫酸盐取本品 5.0g, 加水溶解使成约 40mL; 溶液如不澄清, 应滤过 ; 置 50mL 纳氏比色管中, 加稀盐酸 2mL, 摇匀, 即得供试溶液 另取标准硫酸钾溶液 1.0mL, 置 50mL 纳氏比色管中, 加水使成约 40mL, 加稀盐酸 2mL, 摇匀, 即得对照溶液 于供试溶液与对照溶液中, 分别加入 25% 氯化钡溶液 5mL, 用水稀释至 50mL, 充分摇匀, 放置 10 分钟, 同置黑色背景上, 从比色管上方向下观察 比较 ( 附录 C) 供试溶液所显浑浊度不得较对照液更浓 (0.002%) 钡盐取本品 4.0g, 加水 20mL 溶解后, 滤过, 滤液分为两等份, 一份中加稀硫酸 2mL, 23

24 另一份中加水 2mL, 静置 15 分钟, 两液应同样澄清 钙盐取本品 2.0g, 加水 10mL 使溶解, 加氨试液 1mL, 摇匀, 加草酸铵试液 1mL, 5 分钟内不得发生浑浊 镁盐取本品 1.0g, 加水 20mL 使溶解, 加氢氧化钠试液 2.5mL 与 0.05% 太坦黄溶液 0.5mL, 摇匀 ; 生成的颜色与标准镁溶液 ( 精密称取在 800 炽灼至恒重的氧化镁 16.58mg, 加盐酸 2.5mL 与水适量使溶解成 1000mL, 摇匀 )1.0mL 用同一方法制成的对照液比较, 不得更深 (0.001%) 钾盐取本品 5.0g, 加水 20mL 溶解后, 加稀醋酸 2 滴, 加四苯硼钠溶液 ( 取四苯硼 钠 1.5g, 置乳钵中, 加水 10mL 研磨后, 再加水 40mL, 研匀, 用质密的滤纸滤过, 即得 ) 2mL, 加水使成 50mL, 如显浑浊, 与标准硫酸钾溶液 12.3mL 用同一方法制成的对照液比 较, 不得更浓 (0.02%) 干燥失重取本品, 在 130 干燥至恒重, 减失重量不得过 0.5%( 附录 D) 铁盐取本品 5.0g, 加水溶解使成 25mL, 移置 50mL 纳氏比色管中, 加稀盐酸 4mL 与过硫酸铵 50mg, 用水稀释使成 35mL 后, 加 30% 硫氰酸铵溶液 3mL, 再加水适量稀释 成 50mL, 摇匀 另取标准铁溶液 1.5mL, 置 50mL 纳氏比色管中, 加水使成 25mL, 加稀 盐酸 4mL 与过硫酸铵 50mg, 用水稀释使成 35mL, 加 30% 硫氰酸铵溶液 3mL, 再加水适 量稀释成 50mL, 摇匀, 比较 ( 附录 ) 供试液所显颜色不得较对照液更深 (0.0003%) 重金属取本品 5.0g, 加水 20mL 溶解后, 加醋酸盐缓冲液 (p3.5)2ml 与水适量 使成 25mL, 置 25mL 纳氏比色管中 另取标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液 (p3.5)2ml 后, 加水稀释成 25mL, 置另一 25mL 纳氏比色管中 若供试液带颜色, 可在标准管中滴 加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液, 使之与样品管颜色一致 ; 再在两管中分别加硫代乙酰胺试液各 2mL, 摇匀, 放置 2 分钟, 同置白纸上, 自上向下透视, 样品管所显颜色与标准管比较, 不得更深 ( 附录 F) 含重金属不得过百万分之二 砷盐取本品 5.0g, 加水 23mL 溶解后, 加盐酸 5mL, 置测砷瓶中, 照标准砷斑的制备, 自 再加碘化钾试液 5mL 起, 依法操作 将生成的砷斑与标准砷斑比较, 不得更深 ( 附录 G), 应符合规定 ( %) 标准砷斑的制备精密量取标准砷溶液 2mL, 置测砷瓶中, 加盐酸 5mL 与水 21mL, 再加碘化钾试液 5mL 与酸性氯化亚锡试液 5 滴, 在室温放置 10 分钟后, 加锌粒 2g, 立即将装妥的导气管密塞于测砷瓶上, 并将测砷瓶置 25~40 水浴中, 反应 45 分钟, 取出溴化汞试纸, 即得 四 注意事项 1. 比色管的正确使用 选择配对的两支纳氏比色管, 用清洁液荡洗除去污物, 再用水冲洗干净 采用旋摇的方法使管内液体混合均匀 2. 正确选用量具 根据检查试验一般允许误差为 ±10% 的要求和药品 试剂的取用量, 选择合适的容量仪器 3. 平行操作 标准与样品必须同时进行实验, 加入试剂量等均应一致 观察时, 两管受光照的程度应一致, 使光线从正面照入, 比色时置白色背景上, 比浊时置黑色背景上, 自上而下地观察 4. 注意刻度吸管的正确使用和观察 5. 限量计算 杂质限量 %= V V 标准 C 标准 100% W 样 式中 V 标准为标准液体积,C 标准为标准液浓度,W 样为样品取样量 24

25 五 附录 A. 澄清度检查法方法 : 在室温条件下, 将一定浓度的供试品水溶液与等量的浊度标准液分别置于配对的比浊用玻璃管中, 在浊度标准液制备 5 分钟后, 在暗室内垂直同置于伞棚灯下, 照度为 1000lx, 从水平方向观察 比较溶液的澄清度或浑浊程度, 判断被检样品的澄清度是否符合规定 注意事项 :1) 比浊用玻璃管由无色 透明 中性硬质玻璃制成, 内径 15~16mm, 平底, 具塞 2) 供试品溶解后应立即检视 3) 澄清 系指供试品溶液的澄清度相同于所用溶剂, 或未超过 0.5 号浊度标准液 浊度标准液的制备 : 称取于 105 干燥至恒重的硫酸肼 1.00g, 置 100mL 量瓶中, 加水适量使溶解, 必要时可在 40 的水浴中温热溶解, 并用水稀释至刻度, 摇匀, 放置 4~6 小时 ; 取此溶液与等容量的 10% 乌洛托品溶液混合, 摇匀, 于 25 避光静置 24 小时, 即得浊度标准贮备液 ( 置冷处避光保存, 在两个月内使用, 用前摇匀 ) 取贮备液 15.0mL, 置 1000mL 量瓶中, 加水稀释至刻度, 摇匀, 取适量, 置 1cm 吸收池中, 照分光光度法, 在 550nm 的波长处测定, 其吸收度应在 0.12~0.15 范围内, 即为浊度标准原液 (48 小时内使用, 用前摇匀 ) 取浊度标准原液与水, 按下表配制, 即得浊度标准液 ( 临用时制备, 使用前充分摇匀 ) 级号 浊度标准原液 /ml 水 /ml B. 氯化物检查法标准氯化钠溶液的制备 : 精密称取干燥至恒重的氯化钠 0.165g, 置 1000mL 量瓶中, 加水适量使溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为贮备液 临用前, 精密量取贮备液 10mL, 置 100mL 量瓶中, 加水稀释至刻度, 摇匀, 即得每 1mL 相当于 10µg Cl 的标准溶液 干扰的排除 : 供试溶液如带颜色, 可取供试溶液两份, 分置 50mL 纳氏比色管中, 一份中加硝酸银试液 1.0mL, 摇匀, 放置 10 分钟, 如显浑浊, 可反复滤过, 至滤液完全澄清, 再加规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成 50mL, 摇匀, 在暗处放置 5 分钟, 作为对照溶液 ; 另一份中加硝酸银试液 1.0mL 与水适量使成 50mL, 摇匀, 在暗处放置 5 分钟, 按上述方法与对照溶液比较, 即得 用滤纸滤过时, 应预先用含有硝酸的水洗净滤纸中的氯化物后再过滤 C. 硫酸盐检查法标准硫酸钾溶液的制备 : 精密称取干燥至恒重的硫酸钾 0.181g, 置 1000mL 量瓶中, 加水适量使溶解并稀释至刻度, 摇匀, 即得每 1mL 相当于 100µg S 4 的标准溶液 干扰的排除 : 供试溶液如带颜色, 可取供试溶液两份, 分置 50mL 纳氏比色管中, 一份中加 25% 氯化钡溶液 5mL, 摇匀, 放置 10min, 如显浑浊, 可反复滤过, 至滤液完全澄清, 再加规定量的标准硫酸钾溶液与水适量使成 50mL, 摇匀, 放置 10min, 作为对照溶液 ; 另一份中加 25% 氯化钡溶液 5mL 与水适量使成 50mL, 摇匀, 放置 10min, 按上述方法与对照溶液比较, 即得 D. 干燥失重测定法方法 : 取供试品混合均匀 ( 如为较大的结晶, 应先迅速捣碎使成 2mm 以下的小粒 ), 取约 1g 或各药品项下规定的重量, 置与供试品同样条件下干燥至恒重的扁形称量瓶中, 精密称定, 照药品项下规定的条件干燥至恒重 从减失的重量和取样量计算供试品的干燥失重 25

26 注意事项 : 供试品干燥时, 应平铺在扁形称量瓶中, 厚度不可超过 5mm, 如为疏松物质, 厚度不可超过 10mm 放入烘箱或干燥器进行干燥时, 应将瓶盖取下, 置称量瓶旁, 或将瓶盖半开进行干燥 ; 取出时, 须将称量瓶盖好 置烘箱内干燥的供试品, 应在干燥后取出置干燥器中放冷至室温, 然后称定重量 E. 炽灼残渣检查法方法 : 取供试品 1.0~2.0g 或药品项下规定的重量, 置已炽灼至恒重的坩埚中, 精密称定, 缓缓炽灼至完全炭化, 放冷至室温, 加硫酸 0.5~1mL 使湿润, 低温加热至硫酸蒸气除尽后, 在 700~800 炽灼使完全灰化, 移置干燥器内, 放冷至室温, 精密称定后, 再在 700~800 炽灼至恒重, 即得 注意事项 : 如需将残渣留作重金属检查, 则炽灼温度必须控制在 500~600 F. 重金属检查法标准铅溶液的制备 : 精密称取干燥至恒重的硝酸铅 0.160g, 置 1000mL 量瓶中, 加硝酸 5mL 与水 50mL 溶解后, 用水稀释至刻度, 摇匀, 作为贮备液 临用前, 精密量取贮备液 10mL, 置 100mL 量瓶中, 加水稀释至刻度, 摇匀, 即得每 1mL 相当于 10µg Pb 的标准溶液 干扰的排除 : 若供试液带颜色, 可在标准管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液, 使之与样品管颜色一致 如在标准管中滴加稀焦糖溶液仍不能使颜色一致时, 可取该药品项下规定的二倍量的供试品和试液, 加水或该药品项下规定的溶剂使成 30mL, 将溶液分成甲乙二等份, 乙管中加水或该药品项下规定的溶剂稀释成 25mL; 甲管中加入硫代乙酰胺试液 2mL, 摇匀, 放置 2 分钟, 经滤膜 ( 孔径 3μm) 滤过, 然后甲管中加入标准铅溶液一定量, 加水或该药品项下规定的溶剂使成 25mL; 再分别在乙管中加硫代乙酰胺试液 2mL, 甲管中加水 2mL, 依法比较, 即得 配制与贮存用的玻璃容器均不得含铅 G. 砷盐检查法仪器装置 : 如图 2-1 所示 测试时, 于导气管 C 中装入醋酸铅棉花 60mg( 装管高度 60~80mm), 再于旋塞 D 的顶端平面上放一片溴化汞试纸 ( 试纸大小以能覆盖孔径而不露出平面外为宜 ), 盖上旋塞盖 E 并旋紧, 即得 标准砷溶液的制备 : 精密称取干燥至恒重的三氧化二砷 0.132g, 置 1000mL 量瓶中, 加 20% 氢氧化钠溶液 5mL 溶解后, 用适量的稀硫酸中和, 再加稀硫酸 10mL, 用水稀释至刻度, 摇匀, 作为贮备液 临用前, 精密量取贮备液 10mL, 置 1000mL 量瓶中, 加稀硫酸 10mL, 用水稀释至刻度, 摇匀, 即得每 1mL 相当于 1µg As 的标准溶液 注意事项 :(1) 所用仪器和试液等照本法检查, 均不应生成砷斑, 或至多生成仅可辩认的斑痕 (2) 本法所用锌粒应无砷, 以能通过一号筛的细粒为宜, 如使用的锌粒较大时, 用量应酌情增加, 反应时间亦应延长为 1 小时 (3) 醋酸铅棉花系取脱脂棉 1.0g, 浸入醋酸铅试液与水的等容混合液 12mL 中, 湿透后, 挤压除去过多的溶液, 并使之疏松, 在 100 以下干燥后, 贮于玻璃塞瓶中备用 (4) 若供试品需经有机破坏后再行检砷, 则应取标准砷溶液代替供试品, 照各药品项下规定的方法同法处理后, 依法制备标准砷斑 26

27 . 铁盐检查法 标准铁溶液的制备 : 精密称取硫酸铁铵 [FeN (S ) ] 0.863g, 置 1000mL 量瓶中, 加水溶解后, 加硫酸 2.5mL, 用水稀释至刻度, 摇匀, 作为贮备液 临用前, 精密 量取贮备液 10mL, 置 100mL 量瓶中, 加水稀释至刻度, 摇匀, 即得每 1mL 相当于 10µg Fe 的标准溶液 干扰排除 : 如供试管与对照管色调不一致时, 可分别移至分液漏斗中, 各加正丁醇 20mL 提取, 俟分层后, 将正丁醇层移置 50mL 纳氏比色管中, 再用正丁醇稀释至 25mL, 比较, 即得 实验二 气相色谱法测定药物中有机溶剂残留量 一 目的要求 1. 掌握内标法 外标法计算杂质含量 2. 熟悉气相色谱 - 氢火焰离子化检测器法 (GC-FID) 测定原料药中残留有机溶剂的方法 3. 熟悉气相色谱仪的工作原理和操作方法 4. 了解顶空气相色谱仪的作用原理二 主要仪器与药品气相色谱仪, 弱极性或中等极性气相色谱柱,1~5μL 微量注射器 ; 甲醇 乙腈 二氯甲烷 三氯甲烷 丙酮 正丙醇 地塞米松磷酸钠原料药 三 实验方法 ( 一 ) 地塞米松磷酸钠 (Dexamethasone Sodium Phosphate) 中甲醇和丙酮的检查 Na C 3 P Na C 3 C 3 F (C FNa 2 8 P ) 1. 色谱条件色谱柱 :3% V-17 玻璃柱, 柱长 2m, 内径 3mm 检测器:FID 柱温:50 o C, 气化室温度 :120 o C, 检测器温度 :140 o C, 载气 :N2, 流速 :30mL/min, 空气 :0.5 kg/cm 2, 2:0.7 kg/cm 2, 灵敏度 :10 2, 进样 :2μL 2. 溶液制备与测定精密量取甲醇 10µL( 相当于 7.9mg) 与丙酮 100µL( 相当于 79mg), 置 100mL 量瓶中, 精密加 0.1%(mL/mL) 正丙醇 ( 内标物质 ) 溶液 20mL, 加水稀释至刻度, 摇匀, 作为对照溶液 ; 另取本品约 0.16g, 精密称定, 置 10mL 量瓶中, 精密加入上述内标溶液 2mL, 加水溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为供试品溶液 取上述溶液, 照气相色谱法 ( 附录 A), 按正丙醇计算的理论板数应大于 700 含丙酮不得过 5.0%(g/g), 并不得出现甲醇峰 3. 计算按下式计算定量校正因子 (f) 和检品中丙酮的含量 (g/g): 27

28 A 丙醇 定量校正因子 (f)= A 丙酮 G 丙酮 G 丙醇 供试品中丙酮峰面积 f G 丙醇样品中丙酮的百分含量 (g/g)= 供试品中正丙醇峰面积 100% 式中 A 为峰面积,G 为含量 (g/ml) 样品取样量 /10 ( 二 ) 顶空气相色谱法测定有机溶剂甲醇 乙腈 二氯甲烷 三氯甲烷 1. 色谱条件色谱柱 :P-5 毛细管柱 (5% phenyl methyl siloxane, 30m 0.25mm) 柱温 45, 气化室温 180, 检测室温 200 (FID) 氢气 40mL min -1, 空气 450mL min -1, 氮气 1mL min -1, 分流比 1 3 样品液 90 加热 10min,( 自动 ) 顶空进样 2. 溶液制备 (1) 取甲醇 100μL, 乙腈 30μL, 二氯甲烷 10μL, 三氯甲烷 10μL, 分别加无有机物 的水至 100mL, 作为定位溶液 (2) 另取上述同样量有机溶剂, 混合, 加无有机物的水至 100.0mL, 作为有机残留溶 剂的限度试验对照溶液 取 1 ml 对照溶液, 加水至 ml, 测定有机溶剂的检测限 (3) 取某药物约 0.3g, 精密称定, 加 3.0mL 无有机物的水使溶解 [ 如果样品在水中不 溶, 可用适当浓度的二甲基甲酰胺 (DMF) 水溶液溶解样品 ], 作为供试品溶液 3. 分离度与系统适用性试验取定位溶液在上述色谱条件下测定, 记录色谱图和保留时 间 取对照溶液重复进样, 计算各成分峰的分离度 柱效及色谱峰面积的相对标准差 另取对照溶液的稀释液进样, 计算药物中各有机溶剂的检测限 参照下表格式记录色谱参数 : 有机溶剂 保留时间 峰面积 ( 重复进样 ) RSD(%) 柱效 (n) 分离度 (R) 检测限溶液 (min) 峰面积 甲 醇 乙 腈 二氯甲烷 三氯甲烷 4. 样品测定取供试品溶液, 在上述色谱条件下进样, 记录色谱图, 外标法计算含量 四 注意事项 1. 色谱柱的使用温度 各种固定相均有最高使用温度的限制, 为延长色谱柱的使用寿命, 在分离度达到要求的情况下尽可能选择低的柱温 开机时, 要先通载气, 再升高气化室 检测室温度和分析柱温度, 为使检测室温度始终高于分析柱温度, 可先加热检测室, 待检测室温度升至近设定温度时再升高分析柱温度 ; 关机前须先降温, 待柱温降至 50 以下时, 才可停止通载气 关机 2. 进样操作 为获得较好的精密度和色谱峰形状, 进样时速度要快而果断, 并且每次进样速度 留针时间应保持一致 28

29 3. 检测器的使用 为避免被测物冷凝在检测器上而污染检测器, 检测器的温度必 须高于柱温 30, 并不得低于 100 FID 点火时应关小空气流量和开大 2 流量, 待点燃 后, 慢慢调整到工作比例, 一般空气与 2的流量比为 10:1, 载气 (N 2) 与 2 的流量比为 1:1~1:1.5 用峰高定量时, 需保持载气流速恒定 五 附录 A. 气相色谱法 1 对仪器的一般要求通常所用载气为氮气 ; 色谱柱为填充柱或毛细管柱, 填充柱 的材质为不锈钢或玻璃, 载体用直径 0.25~0.18mm 0.18~0.15mm 或 0.15~0.125mm 经酸 洗并硅烷化处理的硅藻土或高分子多孔小球 ; 常用玻璃或弹性石英毛细管柱的内径为 0.20mm 或 0.32mm 进样口温度应高于柱温 30~50 ; 进样量一般不超过数微升 ; 柱径越细进样量应越少 检测器为氢火焰离子化检测器, 检测温度一般高于柱温, 并不得低于 100, 以避免水汽凝结, 通常为 250~350 药典各品种项下规定的条件, 除检测器种类 固定液品种及特殊指定的色谱柱材料不得任意改变外, 其余如色谱柱内径 长度 载体牌号 粒度 固定液涂布浓度 载气流速 柱温 进样量 检测器的灵敏度等, 均可适当改变, 以适应具体品种并符合系统适用性试验的要求 一般色谱图约于 30 分钟内记录完毕 2 系统适用性试验用规定的对照品对仪器进行试验和调整, 分析测试色谱柱的理论板数 分离度 重复性和拖尾因子, 以达到规定的要求, 保证分析的精确性 (1) 色谱柱的理论板数 (n) 在选定的条件下, 注入各品种项下规定的供试品溶液或内标物质溶液, 记录色谱图, 量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间 (t R ) 和半峰高宽 (W h / 2 ), 按 n=5.54(t R /W h / 2 ) 2 计算色谱柱的理论板数 如果测得理论板数低于规定的理论板数, 应改变色谱柱的某些条件 ( 如柱长 载体性能 色谱柱充填的优劣等 ), 使理论板数达到要求 注意 : 测得的各项参数可以采用时间或长度计, 但必须取相同单位 (2) 分离度要求被测物色谱峰与其他峰或内标峰之间的分离度应大于 1.5 或各品种项下规定的值 分离度 (R) 的计算公式如下 : 2( t R t ) 2 R1 R = W + W 式中和 t 为相邻两峰的保留时间,W 1 及 W 2 为此相邻两峰的峰宽, 保留时间和峰宽可 t R 1 R2 以采用时间或长度计, 但两者必须取相同单位 ( 图 2-2) (3) 进样重复性取对照溶液, 连续进样 5 次, 其峰面积测量值的相对标准偏差应小于 2.0% 也可按校正因子测定项下, 配制相当于 80% 100% 和 120% 的对照品溶液, 加入规定量的内标溶液, 配成 3 种不同浓度的溶液, 分别进样 3 次, 计算平均校正因子, 其相对标准偏差也应小于 2.0% (4) 拖尾因子取对照溶液或样品溶液进样, 记录色谱图, 计算拖尾因子 (T), 要求 T 在 0.95~1.05 之间 1 W T = 2d 0.05h 式中 W 为 0.05 峰高处的峰宽 ;d 为峰极大至峰前沿之间的距离 ( 图 2-2) 0.05h

30 h W h/2 W 0.05h d 1 t R1 t R2 W 1 W 2 图 2-2 色谱图 3 测定法定量测定时, 可根据供试品的具体情况采用峰面积法或峰高法 测定杂质含量时, 须采用峰面积法 (1) 内标法加校正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量校正因子测定 : 精密称 ( 量 ) 取对照品和内标物质, 分别配成溶液, 精密量取各溶液适量, 混合, 配成校正因子测定液 取一定量注入仪器, 记录色谱图 测量对照品和内标物质的峰面积或峰高, 按下式计算校正因子 : A 校正因子 (f)= A 式中 As 和 A R 分别为内标物质和对照品的峰面积或峰高 ;Cs 和 C R 分别为内标物质和对照品的浓度 样品测定 : 精密称 ( 量 ) 取样品适量, 配成溶液 精密量取样品溶液与内标溶液适量, 混合, 配成样品测定液 取一定量注入色谱仪, 记录色谱图 测量供试品溶液中待测成分 ( 或其杂质 ) 和内标物质的峰面积或峰高, 按下式计算含量 : s R s / C / C Ax 含量 (C X )=f A / C 式中 Ax 为供试品 ( 或其杂质 ) 峰面积或峰高 ;Cx 为供试品 ( 或其杂质 ) 的浓度 f As 和 Cs 的意义同前 s R s 30

31 当配制校正因子测定用的对照溶液和含有内标物质的供试品溶液使用同一份内标物 质溶液时, 则配制内标物质溶液不必精密称 ( 量 ) 取 (2) 外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量精密称 ( 量 ) 取对照品和供试品, 配制成溶液, 分别精密取一定量, 注入仪器, 记录色谱图, 测量对照品和供试品溶液中待测成分的峰面积 ( 或峰高 ), 按下式计算含量 : AX 含量 (C X )=C R A 注意事项 : 气相色谱法为手工进样, 进样量不易精确控制, 应特别注意留针时间和室温的影响 B. 有机溶剂残留量测定法本法目的是检查药物在生产过程中引入的有害有机溶剂残留量是否符合规定要求 系统适用性试验应符合下列要求 : (1) 用待测物的色谱峰计算的理论板数应大于 1000; (2) 以内标法测定时, 内标物与待测物的两个色谱峰的分离度应大于 1.5; (3) 以内标法测定时, 每个标准溶液进样 5 次, 所得待测物与内标物峰面积之比的相对标准偏差不大于 5%, 若以外标法测定, 所得待测物峰面积的相对标准偏差不大于 10% 测定方法 1. 直接进样法取标准溶液和供试品溶液, 分别连续进样 3 次, 每次 2μL, 测得相应的峰面积, 以内标法测定时, 计算待测物峰面积与内标物峰面积之比, 供试品溶液所得的峰面积比的平均值不得大于由标准溶液所得的峰面积比的平均值 以外标法测定时, 供试品溶液所得的待测物峰的平均面积不得大于由标准溶液所得的待测物峰的平均面积 2. 顶空进样法精密量取标准溶液和供试品溶液各 3~5mL, 分别置于容积为 10mL~ 20 ml 的带螺扣具孔盖的顶空取样瓶中, 瓶口带隔膜垫, 与顶部空气接触的隔膜垫上应有聚四氟乙烯膜使与橡胶垫隔开, 各瓶在 60~90 的水浴 ( 或空气浴 ) 中加热 10~80 分钟, 用在同一水浴 ( 或空气浴 ) 中的空试管中加热的注射器抽取顶空气 1mL, 进样 ( 自动或手工 ), 重复进样 3 次, 按第一法中所述方法测定 计算与处理 中国药典收载的部分有机溶剂及其残留量的限度见表 2-1 表 2-1 部分有机溶剂及其残留量的限度有机溶剂限度 (%) 有机溶剂限度 (%) 苯 氯仿 二氧六环 二氯甲烷 吡啶 甲苯 环氧乙烷 注意事项 : 从方法的精密度考虑, 二氧六环 吡啶宜用第一法 ; 苯 甲苯 氯仿 二氯甲烷可以用第一法或第二法 ; 环氧乙烷直接用第二法 如果用第一法时, 样品本身会给色谱系统带来干扰或严重污染, 则宜采用第二法 供试品取用量决定于其溶解度, 如供试品在水中难溶, 可以改用酸 碱溶液溶解, 或用适当浓度的二甲基甲酰胺水溶液溶解样品 有机溶剂标准液的量取决于供试品取用量及残留有机溶剂的限度 人用药品国际注册的药学研究技术要求 (IC) 根据危害程度将有机溶剂分为三类, 第一类为人体致癌物 疑为人体致癌物或环境污染物, 是药品生产中应避免的溶剂 R 31

32 第二类为非遗传毒性动物致癌或可能导致其他不可逆毒性 ( 如神经毒性 致崎性 ); 疑具 有其他严重的但可逆的毒性, 属应限制的溶剂 第三类为对人体低毒 无接触限度, 属低毒性溶剂 表 2 和表 3 列出了一 二类溶剂及其限量 表 2-2 药品中含第一类溶剂的限度溶剂浓度限度 (ppm) 备注 苯 2 致癌物 四氯化碳 4 毒性及环境公害 1,2- 二氯乙烷 5 毒性 1,1- 二氯乙烷 8 毒性 1,1,1- 三氯乙烷 1500 环境公害 表 2-3 药品中含第二类溶剂的限度溶剂 PDE* 浓度限度溶剂 PDE* 浓度限度 (mg/ 天 ) (ppm) (mg/ 天 ) (ppm) 乙腈 正己烷 氯苯 甲醇 氯仿 甲氧基乙醇 环氧乙烷 甲基丁酮 ,2- 二氯乙烯 甲基环己烷 二氯甲烷 N- 甲基吡咯烷酮 ,2- 二甲亚砜 硝基甲烷 N,N- 二甲乙酰胺 吡啶 N,N- 二甲基甲酰胺 四氢噻吩砜 ,4- 二恶烷 四氯化萘 乙氧基乙醇 三氯乙烯 乙二醇 二甲苯 甲酰胺 *PDE: 允许的日接触量 实验三 氧瓶燃烧法测定含碘药物的含量一 目的要求 1. 掌握氧瓶燃烧法破坏药物的原理与操作 2. 掌握碘量法测定药物的原理与操作 3. 掌握氧瓶燃烧 - 碘量法测定有机含碘药物的化学计量关系与含量计算方法 二 主要仪器与试药 500mL 燃烧瓶, 氧气钢瓶, 皮老虎, 剪刀, 酒精灯, 分析天平 ; 盐酸胺碘酮和泛影酸原料药 32

33 三 实验方法 [ 原理 ] 本法测定是基于药物在充满氧气的燃烧瓶中燃烧, 使有机分子破坏, 有机结合状态的碘转变为无机的游离碘而为氢氧化钠溶液吸收 : 2 药物 I2 燃烧 I 2 + 2Na NaI + NaI + 2 3NaI NaI 3 + 2NaI NaI + 3Br Ac I Br Br 2 ( 过量 )+ C C + 2Br 2 I KI I K + I 2 + 2Na2S2 3 2NaI + Na 2 S 4 6 ( 一 ) 泛影酸 (Diatrizoic Acid) 的含量测定 I I C N I N C 3 (C 11 9 I N ) 本品为 3,5- 双 ( 乙酰氨基 )-2,4,6- 三碘苯甲酸二水合物 以干燥品计, 含 C I N 不得少于 98.5 % 取 130 干燥至恒重的泛影酸 15mg, 精密称定, 照氧瓶燃烧法 ( 附录 ) 进行有机破 坏, 用氢氧化钠试液 2mL 与水 10mL 为吸收液 俟吸收完全后, 加溴醋酸溶液 ( 取醋酸钾 10g, 加冰醋酸适量使溶解, 加溴 0.4mL, 再加冰醋酸使成 100mL)10mL, 密塞, 振摇, 放置数分钟, 加甲酸约 1mL, 用水洗涤瓶口, 并通入空气流约 3~5 分钟以除去剩余的溴 蒸气, 加碘化钾 2g, 密塞, 摇匀, 用硫代硫酸钠滴定液 (0.02mol/L) 滴定, 至近终点时, 加淀粉指示液 1mL, 继续滴定至蓝色消失, 并将滴定结果用空白试验校正 每 1mL 硫代 硫酸钠滴定液 (0.02mol/L) 相当于 mg 的 C 119I3N 2 4 ( 二 ) 盐酸胺碘酮 (Amiodarone ydrochloride) 中碘含量测定 I C 3 3 C Cl I N C 3 33

34 (C I2N 3 Cl ) 本品为 (2- 丁基 -3- 苯并呋喃基 )[4-[2-( 二乙氨基 ) 乙氧基 ]-3,5- 二碘苯基 ] 甲酮盐酸 盐 按干燥品计算, 含 C I 2 N 3 Cl 不得少于 98.5%; 含碘 (I) 应为 36.0%~38.0% 碘取本品约 20mg, 精密称定, 照氧瓶燃烧法 ( 附录 ) 进行有机破坏, 用氢氧化钠 试液 2mL 与水 10mL 为吸收液, 俟吸收完全后, 加溴醋酸溶液 ( 取醋酸钾 10g, 加冰醋酸 适量使溶解, 加溴 0.4mL, 再加冰醋酸使成 100mL)10mL, 密塞, 振摇, 放置数分钟, 加甲酸约 1mL, 用水洗涤瓶口并通入空气流约 3~5 分钟以除去剩余的溴蒸气, 加碘化钾 2g, 密塞, 摇匀, 用硫代硫酸钠滴定液 (0.02mol/L) 滴定, 至近终点时, 加淀粉指示液 1mL, 继续滴定至蓝色消失, 并将滴定的结果用空白试验校正 每 1mL 硫代硫酸钠滴定 液 (0.02mol/L) 相当于 0.423mg 的碘 (I) 四 注意事项 操作 1 使用氧气钢瓶及燃烧时, 要特别注意安全 2 使用的燃烧瓶必须绝对干净, 不得残留有机溶剂 3 必须使样品燃烧完全 ( 溶液中无黑色碎片 ) 五 附录 4 燃烧完毕后应充分振摇并放置一段时间, 待烟雾消失, 吸收完全后再进行下一步 5 加碘化钾后应盖紧瓶塞, 暗处放置, 以防止碘的挥发 氧化 氧瓶燃烧法 仪器装置 : 燃烧瓶为 500mL 磨口 硬质玻璃锥形瓶, 瓶塞应严密 空心 底部熔封 铂丝一根 ( 直径为 1mm), 铂丝下端做成网状或螺旋状, 长度约为瓶身长度的 2/3, 如图 2-3-A 操作方法 : 精密称取规定量供试品 ( 研细 ), 置于无灰滤纸 ( 如图 2-3-B) 中心, 按虚 线折叠 ( 如图 2-3-C) 后, 固定于铂丝下端的网内或螺旋处, 使尾部露出 另在燃烧瓶内 按规定加入吸收液, 并将瓶口用水湿润, 小心急速通入氧气约 1 分钟 ( 通气管应接近液面, 使瓶内空气排尽 ), 立即用表面皿覆盖瓶口, 移置他处 ; 点燃包有供试品的滤纸尾部, 迅速放入燃烧瓶中, 按紧瓶塞, 用水少量封闭瓶口, 俟燃烧完毕 ( 应无黑色碎片 ), 充分振摇, 使生成的烟雾完全吸入吸收液中, 放置 15 分钟, 用水少量冲洗瓶塞及铂丝, 合并洗液及吸收液 同法作空白试验 然后按规定的方法进行检查或测定 图 2-3. 氧瓶燃烧装置图 实验四 葡萄糖注射液分析 一 目的要求 1. 掌握 p 值测定原理和 p 计的正确操作 34

35 2. 掌握比旋度的概念 求算方法和旋光法测定旋光性物质含量的原理与计算 3. 熟悉紫外法检查杂质的原理与方法 4. 熟悉折光法测定葡萄糖注射液含量原理与计算 5. 了解注射液杂质检查的一般项目 二 主要仪器与药品 WZZ-1 自动指示旋光仪, 阿培氏折光仪,p 酸度计, 纳氏比色管, 紫外分光光度仪 10% 葡萄糖注射液 三 实验方法 2 Glucose (C ) 本品为葡萄糖或无水葡萄糖的灭菌水溶液 含葡萄糖 (C ) 应为标示量的 95.0%~105.0% [ 鉴别 ] 原理 : C C C C C CNa C C 2 C C Cu C C 2 C C Cu 2 () 2 ( 黄色 ) C CK C CK C 2 C 2 葡萄糖 Fehling 试剂葡萄糖酸 Cu 2 () 2 Cu 2 2 ( 红色 ) 方法 : 取本品, 缓缓滴入温热的碱性酒石酸铜试液中, 即生成氧化亚铜的红色沉淀 [ 检查 ] p 值应为 3.2~5.5( 附录 A) 5- 羟甲基糠醛原理 : 葡萄糖注射液在高温加热灭菌时, 易分解产生 5- 羟甲基糠醛 : C C C 2 2 C C 葡萄糖 5- 羟甲基糠醛 利用 5- 羟甲基糠醛在 284nm 的波长处有吸收, 而葡萄糖无吸收, 将样品配制成一定 浓度的溶液, 在 284nm 的波长处测定, 规定吸收度不得大于 0.32 来控制 5- 羟甲基糠醛的 35

36 量 方法 : 精密量取本品适量 ( 约相当于葡萄糖 1.0g), 置 100mL 量瓶中, 加水稀释至刻 度, 摇匀, 在 284nm 的波长处测定, 吸收度不得大于 0.32 重金属取本品适量 ( 约相当于葡萄糖 3g), 必要时, 蒸发至约 20mL, 放冷, 加醋 酸盐缓冲液 (p3.5)2ml 与水适量使成 25mL, 置 25mL 纳氏比色管中 另取标准铅溶液 一定量与醋酸盐缓冲液 (p3.5)2ml 后, 加水稀释成 25mL, 置另一 25mL 纳氏比色管中 若供试液带颜色, 可在标准管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液, 使之与样品管颜色一致 ; 再在两管中分别加硫代乙酰胺试液各 2mL, 摇匀, 放置 2 分钟, 同置白纸上, 自上向下透视, 样品管所显颜色与标准管比较, 不得更深 ( 见实验一附录 F) 按葡萄糖含量计算, 含重金属不得过百万分之五 [ 含量测定 ] 1. 旋光法 ( 附录 B) 原理 : 葡萄糖分子中含不对称碳原子, 具有旋光性, 在一定条件下, 其水溶液的比旋度 [α] t D 为 ~+53.0, 根据旋光度 α 与浓度 C 的比例关系可进行含量测定 : α=[α] t D L C 式中 L 为液层厚度 (dm),c 为溶液的百分浓度 (g/ml, 按干燥品或无水物计算 ) 所以 : C = α 100/[α] t D L 方法 : 精密量取本品适量 ( 约相当于葡萄糖 10g), 置 100mL 量瓶中, 加氨试液 0.2mL (10% 或 10% 以下规格的本品可直接取样测定 ), 用水稀释至刻度, 摇匀, 静置 10 分钟, 测定旋光度 用读数至 0.01 并经过检定的旋光计, 将测定管 ( 长度为 1dm) 用供试液体冲洗数次, 缓缓注入供试液体适量 ( 注意勿使发生气泡 ), 置于旋光计内检测读数, 记录旋光度, 同法读取旋光度 3 次, 取 3 次的平均值作为样品的旋光度 与 相乘, 即得 100mL 供试液中含有 C 的重量 (g) 测定前用水校正零点, 测定后再用水核对零点, 若零点变动, 应重测 2. 折光法 ( 附录 C) 原理 : 采用折光率因素法测定葡萄糖注射液含量 在一定条件下, 溶液的折光率 (n) 与同温度下溶剂的折光率 (n ) 的差值即为溶质的折光率, 其与被测物的浓度成正比 根据折光率因素 (F) 值, 可求得葡萄糖注射液的浓度 : C 样 (%)=(n-n )/ F 式中 F 是由药物对照品经实验测得的, 在一定浓度范围内是一常数, 其物理意义为溶液浓度每增加 1% 时的折光率增加值 F=(n-n )/ C 对 (%) 折光仪校正 : 将阿培氏折光计置于光线充足的台面上, 打开棱镜的锁扣, 分开两面棱镜, 用擦镜纸将镜面轻轻拂试清洁后 ( 或用少量乙醚清洁镜面, 挥干乙醚 ), 在下面的棱镜中央滴加蒸馏水 2~3 滴, 合闭棱镜, 锁紧锁扣 将反射镜对准光线, 调节反射镜和目镜的焦距, 使目镜中十字线清晰 同时打开刻度标尺一侧圆盘上的小反光镜, 使刻度标尺上读数清晰 转动补偿棱镜的旋扭, 消除彩虹, 使明暗分界线清晰 调节读数旋扭, 使标尺读数等于测定温度时水的折光率, 然后用折光仪上带有的小钥匙, 插入镜筒上小孔, 轻轻旋转一定角度, 使明暗交界线对准十字线交点上, 小心取出小钥匙, 校正完毕 ( 见图 2-4) 样品测定 : 打开棱镜, 轻轻擦干镜面上的水, 滴加样品溶液 2~3 滴, 合闭棱镜, 消除彩虹, 将明暗交界线对准十字线交点, 从刻度标尺上读取折光率, 读数应精确至小数点后第四位 ( 最后一位为估计值 ) 轮流从一边再从另一边将分界线对准十字线交点, 重复 36

37 观察读数三次, 读数间差应不大于 , 取平均值计算注射液的百分含量 糖 % 明暗视野镜 刻度标尺 四 注意事项 图 2-4 折光计视野镜与读数表尺示意图 1. p 值测定时, 每次更换标准缓冲液或供试液前, 应用纯化水充分洗涤电极, 然后 将水吸尽, 也可用所换的标准缓冲液或供试液洗涤 配制标准缓冲液与溶解供试品的水, 应是新沸过的冷蒸馏水, 其 p 值应为 5.5~ 旋光仪接通电源后需预热 5~20 分钟 每次测定前后应用溶剂作空白校正 配制溶液及测定时, 均应调节温度至 20 ±0.5 ( 除另有规定外 ) 供试溶液应澄清, 如显浑浊或含有混悬的小粒, 应预先滤过, 并弃去初滤液 旋光管装样时应注意光路中不应有气泡, 使用后应立即用水洗净晾干, 切勿用刷子刷, 也不能用高温烘烤 3. 折光率测定时, 先用水校正折光计读数, 注意刻度标尺读数方向 水的折光率 20 时为 , 25 时为 ,40 时为 折光计棱镜不得接触强酸 强碱等腐蚀性液体, 也不能用硬物碰擦镜面 使用完毕后, 用少量水冲洗棱镜, 并擦干水迹 若液体折光率读数不在 1.3~1.7 之间, 则不能用阿培氏折光计测定 4. 标示量 = 规格 = 处方量 表示单位制剂内 ( 例如 : 每片, 每丸 每毫升 每瓶等 ) 所含主药的量 五 附录 A.p 值测定法水溶液的 p 值应以玻璃电极为指示电极, 氯化钾饱和甘汞电极为参比电极, 用酸度计进行测定 酸度计需用标准缓冲液进行校正, 药典规定仪器校正用的缓冲液 p 值见表 2-4 表 2-4 不同温度时标准缓冲液的 p 值 温度 草酸三氢钾 邻苯二甲酸氢钾 磷酸盐标准缓冲液 磷酸盐标准缓冲液 硼砂标准缓 标准缓冲液 标准缓冲液 (p6.8) (p7.4) 冲液

38 标准缓冲液一般可保存 2~3 个月, 但若有浑浊 发霉或沉淀等现象时则不能继续使用 测定前, 选择二种 p 值约相差 3 个单位的标准缓冲液, 使供试液的 p 值处于二者之间 测定时, 取与供试液 p 值较近的第一种标准缓冲液对仪器进行校正 ( 定位 ), 使仪器示值与表列数值一致 再用第二种标准缓冲液核对仪器示值, 误差应不大于 ±0.02p 单位 若大于此偏差, 则应小心调节斜率, 使示值与第二种标准缓冲液的表列数值相符 重复上述定位与斜率调节操作, 至仪器示值与标准缓冲液的规定数值相差不大于 0.02p 单位 否则, 须检查仪器或更换电极后, 再行校正至符合要求 B. 旋光度测定法比旋度定义 : 平面偏振光通过含有某些光学活性的化合物液体或溶液时, 能引起旋光现象, 使偏振光的平面向左或向右旋转 旋转的度数, 称为旋光度 偏振光透过长 1dm 并每 1mL 中含有旋光性物质 1g 的溶液, 在一定波长与温度下测得的旋光度称为比旋度, 用 [α] t D 表示 t 为测定时的温度 (20 ),D 为钠光谱的 D 线 (589.3nm) 测定与计算 : 使偏振光向右旋转者 ( 顺时针方向 ) 为右旋, 以 + 符号表示 ; 使偏振光向左旋转者 ( 反时针方向 ) 为左旋, 以 符号表示 同法读取旋光度 3 次, 取 3 次的平均数, 照下列公式计算, 即得供试品的比旋度 t α 液体供试品 [ α ] D = ld t 固体供试品 [ α] 100α D = lc 式中 l 为测定管长度 (dm);α 为测得的旋光度 ;d 为液体的相对密度 ;c 为每 100mL 溶液中含有被测物质的重量 (g, 按干燥品或无水物计算 ) C. 折光率测定法折光率定义 : 光线自一种透明介质进入另一透明介质的时候, 由于两种介质的密度不同, 光的进行速度发生变化, 即发生折射现象 一般折光率系指光线在空气中进行的速度与在供试品中进行速度的比值 根据折射定律, 折光率是光线入射角的正弦与折射角的正弦的比值, 即 sin i n = sin r 式中 n 为折光率 ;sin i 为光线的入射角的正弦 ;sin r 为折射角的正弦 影响因素 : 物质的折光率因温度或光线波长的不同而改变, 透光物质的温度升高, 折光率变小 ; 光线的波长越短, 折光率越大 折光率以 n t D 表示,D 为钠光谱的 D 线 (589.3nm, 如用阿培氏折光计, 可用白光光源 ),t 为测定时的温度 (20 ) 一 目的要求 : 实验五 双波长分光光度法测定复方制剂含量 38

39 1 掌握双波长分光光度法消除干扰的原理和波长选择原则 2 掌握紫外 - 标准对照法测定药物含量及计算方法 3 熟悉紫外分光光度仪的构造和使用操作 二 主要仪器与试药 751 紫外分光光度仪, 石英比色皿,100mL 容量瓶, 移液管 磺胺嘧啶对照品, 甲氧苄啶 对照品, 复方磺胺嘧啶片, 安替比林对照品, 安痛定注射液 三 实验方法 ( 一 ) 复方磺胺嘧啶片 (Compound Sulfadiazine Tablets) 本品每片中含磺胺嘧啶 (C N 4 2 S) 应为 0.360~0.440g; 含甲氧苄啶 (C N 4 3 ) 应为 45.0~55.0mg [ 处方 ] 磺胺嘧啶 400g 甲氧苄啶 50g 制成 1000 片 [ 原理 ] 复方磺胺嘧啶片系由磺胺嘧啶和甲氧苄啶组成的复方制剂 两者在紫外区有较强的吸收 ( 见图 2-5) 在盐酸溶液(9 1000) 中, 磺胺嘧啶在 308nm 处有吸收, 而甲氧苄啶在此波长处无吸收, 故可在此波长处直接测定磺胺嘧啶的吸收度而求得含量 甲氧苄啶在 277.4nm 波长处有较大吸收, 而磺胺嘧啶在 277.4nm 处与 308nm 处有等吸收点 故可采用双波长法以 277.4nm 为测定波长,308nm 为参比波长, 测定甲氧苄啶在该两波长处的 ΔA(ΔA=A 277nm -A 308nm ) 值来计算含量 [ 含量测定 ] 磺胺嘧啶取本品 10 片, 精密称定, 研细, 精密称取适量 ( 约相当于磺胺嘧啶 0.2g), 置 100mL 量瓶中, 加 0.4% 氢氧化钠溶液适量, 振摇使磺胺嘧啶溶解, 并稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 精密量取续滤液 2mL, 置另一 100mL 量瓶中, 加盐酸溶液 (9 1000) 稀释至刻度, 摇匀, 照分光光度法 ( 附录 ), 在 308nm 的波长处测定吸收度 ; 另取 105 干燥至恒重的磺胺嘧啶对照品适量, 精密称定, 加盐酸溶液 (9 1000) 溶解并定量稀释制成每 1mL 中约含 40μg 的溶液, 同法测定 ; 计算, 即得 甲氧苄啶精密称取上述研细的细粉适量 ( 约相当于甲氧苄啶 40mg), 置 100mL 量瓶中, 加冰醋酸 30mL 振摇使甲氧苄啶溶解, 加水稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液作为供试品溶液 ; 另精密称取甲氧苄啶对照品 40mg 与磺胺嘧啶对照品约 0.3g, 分置 100mL 量瓶中, 各加冰醋酸 30mL 溶解, 加水稀释至刻度, 摇匀, 前者作为对照品溶液 (1), 后者滤过, 取续滤液作为对照品溶液 (2) 精密量取供试品溶液与对照品溶液(1) (2) 各 5mL, 分置 100mL 量瓶中, 各加盐酸溶液 (9 1000) 稀释至刻度, 摇匀, 照分光光度法测定 取对照品溶液 (2) 的稀释液, 以 308.0nm 为参比波长 λ 1, 在 277.4nm 波长附近 ( 每间隔 0.2nm) 选择等吸收点波长为测定波长 (λ 2 ), 要求 ΔA=Aλ2-Aλ1=0 再在 λ2 和 λ1 波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液 (1) 的稀释液的吸收度, 求出各自的吸收度差值 (ΔA), 计算, 即得 ( 二 ) 复方氨基比林注射液(Compound Aminopyrine Injection) 本品每 1mL 注射液中含氨基比林 (C N 3 ) 应为 47.5~52.5mg, 含安替比林 (C N2) 应为 18.0~22.0mg, 含巴比妥 (C8 12 N 2 3 ) 应为 8.55~9.45mg [ 处方 ] 氨基比林 50g 安替比林 20g 巴比妥 9 g 注射用水适量制成 1000mL 39

40 [ 原理 ] 复方氨基比林注射液又称安痛定注射液, 系氨基比林 安替比林和巴比妥组成的复方制剂, 采用双波长分光光度法测定安替比林的含量 根据巴比妥在酸性溶液中不呈解离状态, 而无明显紫外吸收 ; 安替比林在 233nm 处有较强的吸收 ; 氨基比林在 233nm 和 268nm 处有等吸收 ( 见图 2-6), 选择安替比林的吸收峰波长 233nm 为测定波长 λ 1, 氨基比林的等吸收波长 268nm 为参比波长 λ 2, 则 A =A 233nm -A 268nm 只与安替比林的浓度有关, 而巴比妥 氨基比林及其他辅料不干扰测定 ( 图 2-6) [ 安替比林的含量测定 ] 精密量取本品注射液 1mL, 用 0.1mol/L 盐酸稀释至 100mL, 摇匀, 精密量取此液 2mL, 用 0.1mol/L 盐酸稀释至 100mL, 摇匀, 即得供试液 另精密称取安替比林对照品约 0.08g, 用 0.1mol/L 盐酸溶解并稀释至 100mL, 摇匀, 精密量取此液 1mL, 用 0.1mol/L 盐酸稀释至 100mL 摇匀, 即得对照液 ( 约为 8μg/mL) 取对照液和供试液分别置 1cm 石英吸收池中, 以溶剂为空白, 测定各自在 233nm 和 268nm 处的吸收度, 并计算两波长处的吸收度之差 ( A =A 233nm -A 268nm ) 按标准对照法计算供试液中安替比林的浓度, 并计算注射液中安替比林的含量 40

41 四 注意事项 1. 石英比色皿的正确使用和吸收度校正 2. 吸收度读数 3 次, 取平均值计算含量 3. 读数后及时关闭光闸以保护光电管 五 附录 紫外分光光度法 1 仪器校正与检定 (1) 波长校正 : 常用汞灯中的较强谱线 nm nm nm nm nm nm nm nm nm nm 与 nm, 或用仪 器中氚灯的 nm 与 nm 谱线进行校正, 钬玻璃在 279.4nm 287.5nm 333.7nm 360.9nm 418.5nm 460.0nm 484.5nm 536.2nm 与 637.5nm 波长处有尖锐吸收峰, 也可 作波长校正用, 但来源不同会有微小的差别, 使用时应注意 由于温度变化对机械部分的影响, 仪器的波长经常会略有变动, 因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外, 还应于测定前校正测定波长 (2) 吸收度的准确度检定 : 用重铬酸钾的硫酸溶液检定 取在 120 干燥至恒重的基准重铬酸钾约 60mg, 精密称定, 用 0.005mol/L 硫酸溶液溶解并稀释至 1000mL, 在规定的波长处测定并计算其吸收系数, 与下表规定的吸收系数比较, 相对偏差应在 ±1% 以内 波长 (nm) 235( 最小 ) 257( 最大 ) 313( 最小 ) 350( 最大 ) 1% 吸收系数 E cm (3) 杂散光的检查 : 按下表的试剂和浓度, 配制成水溶液, 置 1cm 石英吸收池中, 在规定的波长处测定透光率, 应符合表中的规定 试剂浓度 %(g/ml) 测定用波长 (nm) 透光率 % 碘化钠 <0.8 亚硝酸钠 <0.8 2 对溶剂的要求测定供试品前, 应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求, 即用 1cm 石英吸收池盛溶剂, 以空气为空白 ( 即空白光路中不置任何物质 ) 测定其吸收度 溶剂和吸收池的吸收度, 在 220~240nm 范围内不得超过 0.40, 在 241~250nm 范围内不得超过 0.20, 在 251~300nm 范围内不得超过 0.10, 在 300nm 以上时不得超过 测定要求 (1) 测定波长核对 : 以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照, 采用 1cm 的石英吸收池, 在规定的吸收峰波长 ±2nm 以内测试几个点的吸收度, 以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确 吸收峰波长应在该品种项下规定的波长 ±2nm 以内, 否则应考虑该试样的真伪 纯度以及仪器波长的准确度, 并以吸收度最大的波长作为测定波长 (2) 吸收度读数范围 : 一般供试品溶液的吸收度读数, 应控制在 0.3~0.7 之间, 此时测定误差最小 (3) 仪器的狭缝宽度 : 狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度, 否则测得的吸收度会偏低 狭缝宽度的选择, 应以减小狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准 (4) 空白试验 : 由于吸收池和溶剂本身可能有吸收, 因此测定供试品前, 应用溶解样品的同批溶剂进行空白试验, 记录空白吸收读数 并将样品测得的吸收度减去空白读数, 再计算含量 4 测定法 (1) 对照品比较法 : 分别配制供试品溶液和对照品溶液, 对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分标示量的 100%±10%, 所用溶剂也应完全一致, 在规 41

42 定的波长下测定供试品溶液和对照品溶液的吸收度后, 按下式计算供试品溶液中被测物的浓度 : C 供试 = A 供试 A 对照 C 对照 (2) 吸收系数法 : 按规定配制供试品溶液, 并在规定的波长处测定其吸收度, 以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量 被测溶液的百分浓度 C 按下式计算 : C(%)= A E 1% cm L 式中 A 为样品液的吸收度,L 为液层厚度 (cm) (3) 计算分光光度法 : 本法有多种, 使用时应注意当吸收度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时, 波长的微小变化可对测定结果造成显著影响, 故对照品和供试品测试条件应尽可能一致 1% 5 吸收系数 (E cm ) 的测定方法精密称取被测物对照品适量 ( 双份 ), 加溶剂溶 解并定量稀释成一定浓度的溶液, 使溶液的浓度能满足测得的吸收度介于 0.6~0.8 之间, 然后精密吸取适量, 用同批溶剂将溶液稀释一倍, 在规定波长分别将高低浓度的溶液于五 种不同型号的紫外分光光度仪上以溶剂为空白测定各自的吸收度, 并注明测定时的温度 计算吸收系数 (E 1% cm) 值, 同一台仪器测定二份间结果的偏差应不超过 1% 对各台仪器 测得的 E 1% cm 值进行统计, 相对标准差应不超过 1.5%, 取平均值作为该药物的吸收系数 实验六片剂的含量均匀度测定和溶出度测定一 目的要求 1. 掌握紫外分光光度法测定药物制剂含量的原理与计算方法 2. 掌握含量均匀度检查意义 原理与计算方法 3. 熟悉溶出度测定的方法与原理 二 主要仪器与药品紫外分光光度仪, 药物溶出仪,10~25mL 注射器,0.8μm 微孔滤膜,100mL 200mL 容量瓶 苯巴比妥对照品, 苯巴比妥片 ( 规格 15mg 或 30mg), 马来酸氯苯那敏片 ( 规格 4 mg) 三 实验方法 ( 一 ) 苯巴比妥(Phenobarbital) 片 N 3 C N (C N ) 42

43 本品为白色片, 含苯巴比妥 (C N 2 3 ) 应为标示量的 93.0%~107.0% 含量均匀度取本品 1 片 (15mg 规格或 30mg 规格 ), 置 100mL 量瓶中, 加乙醇 - 硼 酸氯化钾缓冲液 *(1:20) 适量, 振摇, 使苯巴比妥溶解, 加上述缓冲液稀释至刻度, 摇 匀, 滤过, 精密量取续滤液适量, 加上述缓冲液稀释制成每 1mL 中约含 10µg 的溶液, 作 为供试品溶液 ; 另取苯巴比妥对照品, 精密称取适量, 加上述缓冲液溶解并定量稀释制成每 1mL 中约含 10µg 的溶液, 作为对照品溶液 取上述两种溶液, 照分光光度法 ( 见实验五附录 ), 在 240nm 的波长处分别测定吸收度, 计算含量, 应符合规定 ( 附录 A) 溶出度取本品, 照溶出度测定法 ( 附录 B 第二法 ), 以水 900mL 为溶剂, 转速为 50r/min, 依法操作, 经 45min 时, 取溶液滤过, 精密量取续滤液 3mL(100mg 规格 ) 或 10mL (30mg 规格 ) 或 20mL(15mg 规格 ), 加硼酸氯化钾缓冲液 (p9.6) 定量稀释成 50mL, 摇匀 ; 另取苯巴比妥对照品适量, 精密称定, 加上述缓冲液溶解并定量稀释制成每 1mL 中含 5µg 的溶液 取上述两种溶液, 照分光光度法在 240nm 的波长处分别测定吸收度, 计算出每片的溶出量 限度为标示量的 75%, 应符合规定 * 硼酸氯化钾缓冲液的制备 : 取硼酸 12.37g 与氯化钾 14.91g, 加水至 1000mL, 振摇使溶解, 量取 50mL, 加氢氧化钾试液 36.9mL, 加水稀释成 200mL, 必要时, 用 1mol/L 盐酸或氢氧化钾试液调节 p 值至 9.6 ( 二 ) 马来酸氯苯那敏(Chlorphenamine Maleate) 片 N C 3 N C 3 Cl (C ClN 2 C ) 本品为白色片, 含马来酸氯苯那敏 (C ClN 2 C ) 应为标示量的 93.0% ~107.0%. 含量均匀度取本品 1 片, 置 200mL 量瓶中, 加水约 50mL, 振摇使崩解后, 加稀盐 酸 2mL, 用水稀释至刻度, 摇匀, 静置, 滤过, 取续滤液在 264nm 波长处测定吸收度, 按 1% C1619ClN 2 C 的吸收系数 (E cm ) 为 217, 计算含量, 应符合规定 ( 附录 A) 溶出度取本品, 照溶出度测定法 ( 附录 B 第三法 ), 以稀盐酸 2.5mL 加水至 250mL 为溶剂, 转速为 50r/min, 依法操作, 经 45min, 取溶液 10mL 滤过, 取续滤液, 照分光光 度法, 在 264nm 的波长处测定吸收度, 按 C16 19 ClN 2 C 的吸收系数 (E 1cm ) 为 217 计算出每片的溶出量 限度为标示量的 75%, 应符合规定 四 注意事项 1. 含量均匀度测定中必须使被测组分完全溶解后再进行过滤 测定 2. 过滤用漏斗 烧杯必须干燥, 弃取初滤液, 量取规定量续滤液 3. 溶出度测定中所用溶剂应经过脱气处理 4. 溶出液必须经过过滤后, 取续滤液进行测定 五 附录 A. 含量均匀度检查法 1. 定义 : 含量均匀度系指小剂量口服固体制剂 粉雾剂或注射用无菌粉末中的每片 ( 个 ) 含量偏离标示量的程度 2. 规定 : 片剂 胶囊剂或注射用无菌粉末, 每片 ( 个 ) 标示量小于 10mg 或主药含量 1% 43

44 小于每片 ( 个 ) 重量 5% 者 ; 其他制剂, 每个标示量小于 2mg 或主药含量小于每个重量 2% 者, 均应检查含量均匀度 复方制剂仅检查符合上述条件的组分 凡检查含量均匀度的制剂, 不再检查重 ( 装 ) 量差异 3. 方法 : 取供试品 10 片 ( 个 ), 照各药品项下规定的方法, 分别测定每片以标示量为 100 的相对含量 X, 求其均值 X 和标准差 S( s = Σ( X X ) n 1 2 ) 以及标示量与均值之差的 绝对值 A(A= 100-X ); 如 A+1.80S 15.0, 即供试品的含量均匀度符合规定 ; 若 A+S>15.0, 则不符合规定 ; 若 A+1.80S>15.0, 且 A+S 15.0, 则应另取 20 片 ( 个 ) 复试 根据初 复 试结果, 计算 30 片 ( 个 ) 的均值 X 标准差 S 和标示量与均值之差的绝对值 A; 如 A+1.45S 15.0, 即供试品的含量均匀度符合规定 ; 若 A+1.45S>15.0, 则不符合规定 判断式中的 15.0 为含量均匀度的限度, 若药品项下规定的含量均匀度的限度为其他数值时, 应改为相应的规定数值 如药品项下规定含量均匀度的限度为 ±20%, 则应将 15.0 改为 20.0 B. 溶出度测定法 1. 定义 : 溶出度系指药物从片剂或胶囊剂等固体制剂在规定溶剂中溶出的速度和程度 凡检查溶出度的制剂, 不再进行崩解时限的检查 2. 测定方法 : (1) 第一法 ( 转篮法 ) 仪器装有 6 套操作装置, 可一次测定 6 份供试品 操作容器为 1000mL 的圆底烧杯 量取经脱气处理的溶剂 900mL, 注入每个操作容器内, 加温使溶剂温度保持在 37 ±0.5, 调整转速使其稳定 取供试品 6 片 ( 个 ), 分别投入 6 个转篮内, 将转篮降入容器中 ( 转篮底部离烧杯底部的距离为 25mm±2mm ), 立即开始计时, 除另有规定外, 至 45 分钟时, 在规定取样点吸取溶液适量 ( 取样点位置应在转篮上端距液面中间, 离烧杯壁 10mm 处 ), 立即经不大于 0.8μm 微孔滤膜滤过, 自取样至滤过应在 30 秒钟内完成 取滤液, 照各药品项下规定的方法测定, 算出每片 ( 个 ) 的溶出量 (2) 第二法 ( 桨法 ) 除将转篮换成搅拌桨外, 其他装置和要求与第一法同 (3) 第三法 ( 小杯桨法 ) 操作容器为 250mL 的圆底烧杯, 桨叶底部离烧杯底部的距离为 15mm±1mm 量取经脱气处理的溶剂 100~250mL 注入每个操作容器内 取样点应在桨叶上端距液面中间, 离烧杯壁 6mm 处 其他要求同上 3. 结果判断 : 6 片 ( 个 ) 中每片 ( 个 ) 的溶出量, 按标示含量计算, 均应不低于规定限度 (Q); 除另有规定外, 限度 (Q) 为标示含量的 70% 如 6 片 ( 个 ) 中仅有 1 片 ( 个 ) 低于规定限度, 但不低于 Q-10%, 且其平均溶出量不低于规定限度时, 仍可判断为符合规定 如 6 片 ( 个 ) 中有 1 片 ( 个 ) 低于 Q-10%, 应另取 6 片 ( 个 ) 复试 ; 初 复试的 12 片 ( 个 ) 中仅有 2 片 ( 个 ) 低于 Q-10%, 且其平均溶出量不低于规定限度时, 亦可判为符合规定 供试品的取用量如为 2 片 ( 个 ) 或 2 片 ( 个 ) 以上时, 算出每片 ( 个 ) 的平均溶出量, 均不得低于规定限度 (Q); 不再复试 实验七 异烟肼片含量测定一 目的要求 1. 掌握溴酸钾法测定异烟肼的原理与操作 2. 掌握容量法测定药物片剂的含量计算方法 3. 掌握滴定度 片剂取样量 标示量的概念与计算 44

45 4. 掌握容量仪器的正确操作 二 主要仪器与试药 25mL 滴定管,100mL 容量瓶,25mL 移液管, 研钵 异烟肼片 ( 规格 100mg) 三 实验方法 N N N 2 Isoniazid Tablets (C 6 N ) 7 3 本品为白色片, 含异烟肼 (C 6 N 7 3 ) 应为标示量的 95.0%~105.0% 原理 : N 2 3 N 2KBr Cl 3 3 N N 3N KBr 取本品 20 片, 精密称定, 研细, 精密称取适量 ( 约相当于异烟肼 0.2g), 置 100mL 量瓶中, 加水适量, 振摇使异烟肼溶解并稀释至刻度, 摇匀, 用干燥滤纸滤过, 精密量取续滤液 25mL, 加水 50mL 盐酸 20mL 与甲基橙指示液 1 滴, 用溴酸钾滴定液 ( mol/L) 缓缓滴定 ( 温度保持在 18~25 ) 至粉红色消失 每 1mL 溴酸钾滴定液 ( mol/L) 相当于 3.429mg 的 C 6 7 N3 四 注意事项 1. 指示剂褪色是不可逆的, 滴定过程中必须充分振摇, 以避免滴定剂局部过浓而引起指示剂提前褪色, 可补加 1 滴指示剂以验证终点是否真正到达 2. 过滤前必须充分振摇, 使异烟肼完全溶解 3. 过滤用漏斗 烧杯必须干燥, 弃去初滤液 实验八 有关物质的色谱检查一 目的要求 1. 掌握 PLC 法测定原料药中有关物质的原理与限量计算方法 2. 掌握 TLC 法测定原料药中有关物质的原理与测定方法 3. 熟悉高效液相色谱仪的工作原理和操作方法 4. 熟悉黏合薄层板的制备与活化 5. 了解高效液相色谱仪的主要部件和日常维护 二 主要仪器与药品高效液相色谱仪, DS 柱, 层析缸, 玻板, 喷雾器, 点样用微量注射器或微量吸管 硅胶, 硅胶 GF 254, 对二甲氨基苯甲醛, 盐酸普鲁卡因注射液, 马来酸氯苯那敏及氧氟沙星原料药三 实验方法 45

46 ( 一 ) 盐酸普鲁卡因 (Procaine ydrochloride) 注射液中对氨基苯甲酸检查 C 3 N C 3 Cl 2 N (C N 2 2 Cl ) 精密量取本品, 加乙醇制成每 1mL 中含盐酸普鲁卡因 2.5mg 的溶液, 作为供试品溶液 另取对氨基苯甲酸对照品, 加乙醇制成每 1mL 中含 30μg 的溶液, 作为对照品溶液 照薄层色谱法 ( 附录 A) 试验, 吸取上述两种溶液各 10μl, 分别点于含有羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 薄层板上, 用苯 - 冰醋酸 - 丙酮 - 甲醇 (14:1:1:4) 为展开剂, 展开后, 取出晾干, 用对二甲氨基苯甲醛溶液 (2% 对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液 100mL, 加冰醋酸 5mL 制成 ) 喷雾显色 供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点, 其颜色与对照品溶液的主斑点比较, 不得更深 ( 二 ) 马来酸氯苯那敏的(Chlorphenamine Maleate) 有关物质检查 C 3 N C 3 N Cl (C ClN 2 C ) 取本品, 加氯仿制成每 1mL 中含 50mg 的溶液, 作为供试品溶液 ; 精密量取适量, 加 氯仿稀释成每 1mL 中含 0.10mg 的溶液, 作为对照溶液 照薄层色谱法 ( 附录 A) 试验, 吸 取上述两种溶液各 10μL, 分别点于同一硅胶 GF 254 薄层板上, 以醋酸乙酯 - 甲醇 - 稀醋酸 (5: 3:2) 为展开剂, 展开后, 晾干, 在紫外光灯 (254nm) 下检视 供试品溶液除显氯苯那 敏与马来酸两个斑点外, 如显其他杂质斑点, 与对照溶液的主斑点比较, 不得更深 ( 三 ) 氧氟沙星的 (floxacin) 有关物质检查 F N N 3 C N C 3 (C FN ) 3 4 照高效液相色谱法测定 ( 附录 B) 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ; 以 0.05mol/L 枸橼 酸溶液 - 乙腈 (79:21) 用三乙胺调节 p 值至 4.0 为流动相 ; 流速约为 1.2mL/min; 检测 46

47 波长为 293nm 理论板数按氧氟沙星峰计算应不低于 2500 测定法取本品, 加流动相制成每 1mL 中含 1mg 的溶液, 作为供试品溶液 ; 量取适量, 加流动相稀释成每 1mL 中含 0.05mg 的溶液, 作为对照溶液 取对照溶液 10μl 注入液相色谱仪, 调节检测灵敏度, 使主成分色谱峰的峰高为满量程的 20%; 再取供试品溶液 10μl 注入液相色谱仪, 记录色谱图至主成分峰保留时间的 2 倍, 供试品溶液色谱图上各杂质峰面积的和不得大于对照溶液色谱图主峰面积的 1/5 四 注意事项 1. 薄层色谱分析中为使斑点集中, 点样应分次点加, 每次点加后, 俟其自然干燥 低温烘干或经温热气流吹干 2. 薄层板放入层析缸时, 薄板底边应水平浸入展开剂中, 待展开至溶剂前沿距玻板顶端 2~3cm 时, 取出薄层板 3. 展开缸必须密封, 为使缸内展开剂饱和, 薄层板放入前可在层析缸内壁贴滤纸条, 让滤纸条一端浸入展开剂中, 密封层析缸, 待系统平衡后再将薄层板放入, 展开 4. PLC 测定中流动相使用前必须经过滤膜过滤和超声脱气 5. PLC 测定完毕后, 必须用水冲洗系统 30 分钟以上, 然后再用甲醇冲洗 更换流动相时必须先停泵, 待压力降至零时, 将滤头提出液面, 置另一流动相溶液中 五 附录 A. 薄层色谱法 1 仪器与材料 (1) 玻板用 5cm 20cm 或 10cm 20cm 的规格, 要求光滑 平整, 洗净后不附水珠, 晾干 (2) 固定相常用固定相有硅胶 G 硅胶 GF 254 硅胶 硅胶 F 254 等 其颗粒大小, 一般要求直径为 10~40μm 取各品种项下规定的固定相一定量, 按 薄层板制备 方法制备薄层板 (3) 薄层涂布, 一般可分无黏合剂和含黏合剂两种 ; 前者系将固定相直接涂布于玻板上, 后者系在固定相中加入一定量的黏合剂, 一般常用 10%~15% 煅石膏 (CaS 在 140 加热 4 小时 ), 混匀后加水适量使用, 或用羧甲基纤维素钠水溶液 (0.5%~0.7%) 适量调成糊状, 均匀涂布于玻板上 (4) 展开室应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸, 并有严密的盖子, 底部应平整光滑, 便于观察 2 操作方法 (1) 薄层板制备根据各品种项下规定, 取 1 份固定相和 3 份水 ( 或黏合剂 ) 在研钵中向一方向研磨混合, 去除表面的气泡后, 用倾注法或平铺法或涂布器法, 在玻板上涂布成厚度为 0.2~0.3mm 的薄层板, 将涂好薄层的玻板置水平台上, 于室温下晾干后在 110 烘 30 分钟, 即置有干燥剂的干燥箱中备用 使用前检查其均匀度 ( 可通过透射光和反射光检视 ) (2) 点样用微量注射器或微量吸管吸取规定量样品溶液, 点样于薄层板上, 一般为圆点, 点样基线距底边 2.0cm, 样点直径为 2~4mm, 点间距离约为 1.5~2.0cm, 点样时必须注意勿损伤薄层表面 (3) 展开展开缸如需预先用展开剂饱和, 可在缸中加入足够量的展开剂, 并在壁上贴两条与缸一样高 宽的滤纸条, 一端浸入展开剂中, 密封缸顶的盖, 使系统平衡 将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中, 浸入展开剂的深度为距薄层板底边 0.5~1.0cm( 切勿将样点浸入展开剂中 ), 密封缸盖, 待展开至规定距离 ( 一般为 10~15cm), 47