中华人民共和国国家标准 GB 201 食品安全国家标准 食品营养强化剂维生素 E 琥珀酸钙 ( 征求意见稿 ) 201X-XX-XX 发布 XXXX-XX-XX 实施

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1 中华人民共和国国家标准 GB 201 食品安全国家标准 食品营养强化剂维生素 E 琥珀酸钙 ( 征求意见稿 ) 201X-XX-XX 发布 XXXX-XX-XX 实施

2 食品安全国家标准 食品营养强化剂维生素 E 琥珀酸钙 1 范围 本标准适用于以天然维生素 E(d-α- 生育酚 ) 或以异植物醇和三甲基氢醌为原料合成维生素 E(dl-α- 生育酚 ), 与琥珀酸酐进行酯化反应, 再与钙盐进行成盐反应形成的食品营养强化剂维生素 E 琥珀酸钙 ( 天然型 / 合成型 ) 2 分子式 结构式和相对分子质量 2.1 分子式 C 66 H 106 CaO 结构式 O CH3 OC(CH2)2CO O CH3 CH3 CH3 (CH2)3CH(CH2)3CH(CH2)3CH 2+ Ca CH3 O CH3 CH3 2.3 相对分子质量 CH ( 按 2007 年国际相对原子质量计 ) 3 技术要求 3.1 感官要求感官要求应符合表 1 的规定 表 1 感官要求 项目 要求 检验方法 色泽 白色至浅黄固体粉末 将适量试样置于清洁 干燥的白瓷点滴板中, 在自然 状态 颗粒具有流动性, 无杂质, 无粘结 光线下, 观察其色泽和状态 3.2 理化指标 理化指标应符合表 2 的规定

3 表 2 理化指标 项 目 指 标 检验方法 天然型 合成型 溶液色泽 符合规定 附录 A 中 A.4 含量 ( 以干燥品计算 ), w /% 96.0~102.0 附录 A 中 A.5 碱度符合规定附录 A 中 A.6 吸光度, 1% E1 cm(286 nm ) 36.0~40.0 附录 A 中 A.7 干燥减量, w /% 2.0 附录 A 中 A.8 α- 生育酚, w /% 0.5 附录 A 中 A.9 氯化物 ( 以 Cl 计 ), w /% 附录 A 中 A 比旋光度,[α]D /( ) dm 2 kg ±0.05 附录 A 中 A.11 总砷 ( 以 As 计 )/(mg/kg) 2.0 GB/T 铅 (Pb)/(mg/kg) 2.0 GB

4 附录 A 检验方法 A.1 安全提示本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性, 按相关规定操作, 使用时需小心谨慎 若溅到皮肤上应立即用水冲洗, 严重者应立即治疗 在使用挥发性酸时, 应在通风厨中进行 A.2 一般规定 本标准除另有规定外, 所用试剂的纯度应在分析纯以上, 所用标准滴定溶液 杂质测定用标准溶液 制剂及制品, 应按 GB/T 601 GB/T 602 GB/T 603 的规定制备, 实验用水应符合 GB/T 中二级水的规定 试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时, 均指水溶液 A.3 鉴别试验 A.3.1 溶解性不溶于水 95% 的乙醇 丙酮, 易溶于氯仿 四氯化碳, 溶于乙酸 ( 取试样 1 g, 加 7 ml 乙酸振摇溶解, 放置后产生浑浊 ) A.3.2 硝酸呈色反应 A 试剂和材料 A 乙酸 A 无水乙醇 A 硝酸 A 分析步骤称取试样 0.05 g, 加 1 ml 乙酸溶解, 加 9 ml 无水乙醇混合, 再加入 2 ml 硝酸,75 水浴加热 15 min, 呈现浅红色至橙色 A.3.3 钙盐定性反应 A 试剂和材料 A 氯仿 A 盐酸 A 氨水溶液 (10%): 取 400 ml 氨水加水定容至 1000 ml A 碳酸铵溶液 : 溶解 20 g 碳酸铵于 20 ml10% 的氨水中, 用水定容至 100 ml A 草酸铵溶液 : 溶解 3.5 g 一水草酸铵于水中, 并用水定容至 100 ml A 乙酸 A 铬酸钾溶液 : 溶解 10 g 铬酸钾于水中, 并用水定容至 100 ml A 分析步骤称取试样 5 g 加入 30 ml 氯仿溶解, 再加 10 ml 盐酸, 振荡混合 10 min; 分取水相, 加入氨水溶液进行中和, 取该溶液进行钙盐的定性反应 A 取铂丝, 用盐酸湿润后, 蘸取上述溶液, 在无色火焰中燃烧, 火焰即显砖红色 ; A 加碳酸铵溶液, 产生白色沉淀 ; A 加草酸铵溶液, 产生白色沉淀, 沉淀加乙酸不溶解, 但随后加盐酸溶解 ; A 加 10 滴铬酸钾溶液, 加热不产生沉淀 A.3.4 红外光谱

5 A 仪器和设备 红外光谱仪 A 分析步骤称取干燥后试样 0.08 g, 加入 0.2 ml 四氯化碳溶解, 以此溶液按液膜法测定红外光谱, 与标准图谱比较 红外图谱见附录 B 中图 B.1 A.4 溶液色泽的测定 A.4.1 试剂和材料 A 六水三氯化铁 (FeCl 3 6H 2 O) A 盐酸 A 碘化钾 A 硫代硫酸钠标准滴定溶液 :C(Na 2 S 2 O 3 )=0.1 mol/l A 盐酸溶液 :1+39 A 盐酸溶液 :0.5 mol/l A 淀粉指示液 :10 g/l A.4.2 仪器和设备 A 纳氏比色管 :10 ml A 比色管架 : 通常比色管托板为白色, 最好安装日光灯照明, 提高观察颜色的效果 A.4.3 分析步骤 A 三氯化铁比色储备液的制备 称取 55.0 g 六水三氯化铁溶于 25 ml 盐酸中, 转移至 1000 ml 容量瓶中, 用水定容 准确移取 10 ml 上述溶液 于 250 ml 碘量瓶中, 加入 15 ml 水和 3 g 碘化钾, 摇匀, 盖紧盖子, 置于暗处 15 min 取出, 加水 100 ml, 用 0.1 mol/l 硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定至溶液变为淡黄色, 加 1 ml 淀粉溶液, 继续滴定至溶液蓝色消失 记录硫代硫酸 钠标准滴定溶液体积 六水三氯化铁溶液浓度 w 以毫克每毫升 (mg/ml) 计, 按公式 (A.1) 计算 根据标定结 1 果, 用 1+39 盐酸溶液将六水三氯化铁溶液稀释成 45.0 mg/ml 的三氯化铁比色储备溶液 w 1 C V (A.1) 式中 : C 硫代硫酸钠标准滴定溶液的实际浓度, 单位为摩尔每升 (mol/l); V 消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积, 单位为毫升 (ml); 每毫升 0.1 mol/l 硫代硫酸钠标准滴定溶液相当于六水三氯化铁毫克数 A 三氯化铁标准比色液的制备 移取 0.5 ml 三氯化铁比色储备溶液于 100 ml 容量瓶中, 用 0.5 mol/l 的盐酸溶液定容 A 测定 称取 0.10 g 维生素 E 琥珀酸钙于 10 ml 纳氏比色管, 溶于氯仿, 并用氯仿定容至刻度线 ; 同时注入三氯化铁标 准比色液于另一纳氏比色管中至刻度线, 将两管一起置于比色管架上 各管外套一黑色纸筒, 避免侧面光的影 响 比较试样和三氯化铁标准比色液颜色 比色时正对着白色背景, 从上往下观测 A.4.4 结果判定 试样颜色不深于三氯化铁标准比色液的颜色, 即为通过试验 A.5 维生素 E 琥珀酸钙含量的测定 A.5.1 方法提要 维生素 E 琥珀酸钙在乙酸的作用下, 水解为维生素 E 琥珀酸酯, 再通过配紫外检测器的高效液相色谱测定,

6 外标法计算维生素 E 琥珀酸钙含量 A.5.2 试剂和材料 A 无水乙醇 A 乙酸 A 维生素 E 琥珀酸酯标准品 (Tocopherol acid Succinate, 分子式 :C 33 H 54 O 5, 分子量 :530.79, CAS No: ) A α- 生育酚标准品 (Alpha Tocopherol, 分子式 :C 29 H 50 O 2, 分子量 :430.71, CAS No : ) A 乙酸溶液 (1+5) A.5.3 仪器和设备 高效液相色谱仪 : 配紫外检测器, 或其他等效的检测器 A.5.4 参考色谱条件 A 色谱柱 :C18 液相色谱柱,4.6 mm 250 mm, 粒径 5 µm, 或同等性能的色谱柱 ; A 流动相 : 甲醇 - 水 - 乙酸 (97+2+1); A 柱温 : 室温 ; A 流速 :2.2 ml/min; A 检测波长 :284 nm; A 进样量 :20 μl A.5.5 分析步骤 A 标准溶液的制备 称取维生素 E 琥珀酸酯标准品 50 mg( 精确至 0.2 mg), 置于 50 ml 容量瓶中, 用无水乙醇 - 乙酸溶液的混合 溶液 (9+1) 溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为标准溶液 此标准溶液每毫升含有 1 mg 维生素 E 琥珀酸酯 A 试样溶液的制备 称取预先干燥的试样 50 mg( 精确至 0.2 mg), 置于 50 ml 容量瓶中, 用无水乙醇 - 乙酸溶液的混合溶液 (9+1) 溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为试样溶液 A 系统适用性试验 分别称取维生素 E 琥珀酸酯标准品和 α- 生育酚标准品各 50 mg, 置于 50 ml 容量瓶中, 用无水乙醇 - 乙酸溶 液的混合液 (9+1) 溶解并稀释至刻度, 摇匀 配制成每毫升无水乙醇 - 乙酸溶液的混合液中分别含有 1 mg 维生素 E 琥珀酸酯和 1 mgα- 生育酚标准品的混合溶液 A.5.4 参考色谱条件下, 多次进样, 对混合标准溶液进行色谱 分析 维生素 E 琥珀酸酯和 α- 生育酚分离度应不小于 2.0 取混合溶液连续进样 5 次, 维生素 E 琥珀酸酯峰面 积计算相对标准偏差不得大于 0.8% A 测定 在 A.5.4 参考色谱条件下, 分别对标准溶液和试样溶液进行色谱分析 记录标准溶液和试样溶液色谱图中维 生素 E 琥珀酸酯峰面积, 将相应的值分别记作 A s 和 A t 按公式 (A.2) 计算出试样中维生素 E 琥珀酸钙含量 A.5.6 结果计算 维生素 E 琥珀酸钙含量的质量分数 w 按公式 (A.2) 计算 : 2 w 2 W 标 At W A 样 s (A.2) 式中 : W 标 标准溶液中维生素 E 琥珀酸酯的质量, 单位为毫克 (mg); W 样 试样质量, 单位为毫克 (mg); A t 试样溶液色谱图中维生素 E 琥珀酸酯的峰面积值 ; A s 标准溶液色谱图中维生素 E 琥珀酸酯的峰面积值 ;

7 维生素 E 琥珀酸钙的分子量 ; 维生素 E 琥珀酸酯的分子量 实验结果以平行测定结果的算术平均值为准 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的 2% A.6 碱度的测定 A.6.1 试剂和材料 A 乙醚 A 盐酸溶液 :c(hcl)=0.1 mol/l A 酚酞指示液 :10 g/l A.6.2 分析步骤称取试样 0.20 g, 加 10 ml 乙醚,2 ml 水,1 滴酚酞指示液和 0.1 ml0.1 mol/l 盐酸溶液, 摇匀, 水层应不显红色 A.7 吸光度的测定 A.7.1 试剂和材料 氯仿 A.7.2 仪器和设备 分光光度计 A.7.3 分析步骤 称取试样 0.01 g( 精确至 g), 加氯仿溶解并稀释至 100 ml, 摇匀, 得到试样溶液 取此试样溶液于 1cm 比色皿, 以氯仿做空白对照, 用分光光度计在 286 nm 波长处测定其吸光度 A.7.4 结果计算 1% 吸光度 E1 cm(286 nm ) 按公式 (A.3) 计算 : 1% A E1 cm (286 nm) m 式中 : A 试样溶液的吸光度 ; m 样品重量, 单位为克 (g) (A.3) 实验结果以平行测定结果的算术平均值为准 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于 算术平均值的 2% A.8 干燥减量的测定 A.8.1 试剂和材料五氧化二磷 A.8.2 仪器和设备真空干燥箱 A.8.3 分析步骤取已恒重的称量瓶准确称取试样 1 g~2 g( 精确至 g), 试样平铺于称量瓶中, 厚度不得高于 5 mm 将其放入真空干燥箱中, 用五氧化二磷做干燥剂, 常温减压干燥 24 h 取出称量瓶, 称重, 并重复以上操作至恒重

8 A.8.4 结果计算 干燥减量 w 以质量分数 3 w 按公式 (A.4) 计算 : 3 w m m...(a.4) m 式中 : m1 干燥前称量瓶和试样质量, 单位为克 (g); m 2 干燥后称量瓶和试样重量, 单位为克 (g); m 试样质量, 单位为克 (g) 实验结果以平行测定结果的算术平均值为准 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的 10% A.9 α- 生育酚含量的测定 A.9.1 试剂和材料同 A.5.2 A.9.2 仪器和设备同 A.5.3 A.9.3 参考色谱条件同 A.5.4 A.9.4 分析步骤 A 标准溶液的制备称取 α- 生育酚标准品 50 mg( 准确至 0.2 mg), 置于 100 ml 容量瓶中, 用无水乙醇 - 乙酸溶液的混合液 (9+1) 溶解并稀释至刻度, 摇匀 准确吸取 1 ml 于 100 ml 容量瓶中, 用无水乙醇 - 乙酸溶液的混合液 (9+1) 溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为标准溶液 此标准溶液浓度为 5 mg/l A 试样溶液的制备称取干燥后的试样 100 mg( 准确至 0.2 mg), 置 100 ml 容量瓶中, 用无水乙醇 - 乙酸溶液的混合液 (9+1) 溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为试样溶液 A 系统适用性试验同 A A 测定在 A.5.4 参考色谱条件下, 分别对标准溶液和试样溶液进行色谱分析 记录标准溶液和试样溶液色谱图中峰 α- 生育酚峰面积 A.9.5 结果判定试样溶液中 α- 生育酚峰面积不得大于标准溶液峰面积 ( 即试样中 α- 生育酚含量不大于 0.5%) A.10 氯化物含量的测定 A.10.1 试剂和材料 A 乙酸 A 乙醚 A 盐酸溶液 :0.01 mol/l A 硝酸溶液 : 取硝酸 105 ml, 加水稀释至 1000 ml, 摇匀

9 A 硝酸银溶液 :0.1 mol/l A.10.2 测定取试样 0.10 g, 加 4 ml 乙酸溶解, 加 20 ml 水和 50 ml 乙醚, 充分振荡, 分取水相 ; 乙醚层加 10 ml 水振荡混合, 再分取水相 ; 合并水相 加入 6 ml 硝酸溶液, 用水定容至 50 ml 的比色管中, 以此溶液作为试样溶液 另取 0.6 ml 0.01 mol/l 盐酸溶液于 50 ml 的比色管中, 加入 6 ml 硝酸溶液, 用水定容至 50 ml 的比色管中, 以此溶液作为对照液 于试样溶液与对照溶液中分别加入硝酸银溶液 1.0 ml, 摇匀, 在暗处放置 5 min 同置黑色背景上从比色管上方比较两者浊度, 试样溶液浊度不得比对照溶液浊度更深 ( 0.212%) A.11 比旋光度的测定 A.11.1 方法提要即先通过皂化后再酸化的方法将维生素 E 琥珀酸钙转化为生育酚, 再通过正庚烷提取后于旋光仪上直接测定 A.11.2 试剂和材料 A % 乙醇 A 正庚烷 A 无水硫酸钠 : 于 650 下灼烧 4 h, 贮于密闭容器中备用 A 氢氧化钠饱和溶液 A 氢氧化钠溶液 :0.2 mol/l A 盐酸溶液 (1+1) A % 铁氰化钾溶液 : 取铁氰化钾 10.0 g, 加氢氧化钠溶液 (0.2 mol/l) 振摇使溶解, 并稀释至 100 ml A 酚酞指示液 :10 g/l A.11.3 仪器和设备采用 GB/T 613 中规定的仪器装置 A.11.4 测定称取 0.5 g( 精确至 g) 试样于锥形瓶中, 加 10 ml 95% 乙醇, 沸水浴加热回流 ( 注 : 溶液缓慢回流, 以使内容物不飞溅 ) 当溶液煮沸后, 从冷凝管上端加入 0.5 ml~1 ml NaOH 饱和溶液, 用少量水洗涤, 继续回流 30 min, 然后停止加热, 加 1 滴酚酞指示剂, 用 10 ml 盐酸溶液 (1+1) 趁热小心中和直至粉红色消失 ( 注意 : 反应为放热反应, 应使酸逐滴流入管中以防止飞溅 ) 冷却, 摇匀, 转移至分液漏斗中, 用少量乙醇洗涤锥形瓶 加入 25 ml 正庚烷至分液漏斗中, 塞上塞子, 振摇 1 min 以确保完全混合, 静置分层 弃去下层溶液, 上层有机相加入 10 ml 水, 塞上塞子, 振摇, 静置直至分层 弃去下层溶液, 上层有机相加入 10.0 ml10% 铁氰化钾溶液, 塞上塞子, 摇动 45 s, 静置分层 30 min 如果正庚烷层澄清, 直接取正庚烷层按照 GB/T 613 中规定的方法测定比旋光度, 如果不澄清, 则加无水硫酸钠干燥后再测比旋光度 A.11.5 结果计算 20 C 比旋光度值 [ ] ( ) dm 2 kg -1 按公式 (A.3) 计算 : D [ ] 20 C D V LXm (1 D) (A.3) 式中 : L 测定管的长度, 单位为分米 (dm); m 试样称量, 单位为克 (g); X 含量, 单位为百分数 (%); D 干燥减量, 单位为百分数 (%); 测得的旋光度 ;

10 V 测定溶液体积, 单位为毫升 (ml); α- 生育酚与维生素 E 琥珀酸钙的换算系数, 即 / 实验结果以平行测定结果的算术平均值为准 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的 5%

11 附录 B 维生素 E 琥珀酸钙的标准红外光谱图 维生素 E 琥珀酸钙的标准红外光谱图见图 B.1 波数 /(cm -1 ) 注 : 谱图来源于日本药典 (JP XⅥ,2011) 图 B.1 维生素 E 琥珀酸钙的标准红外谱图

12 附录 C 图 C.1 维生素 E 琥珀酸酯及 α- 生育酚的高效液相色谱图 (1000 mg/l) 1- 维生素 E 琥珀酸酯,2-α- 生育酚

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