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1 报告人 : 李秀芬 1

2 主要内容 1 2 Click to 品种概述 add title in here Click 标准检验结果及分析 to add title in here 3 Click to add title in here 探索性研究结果及分析 4 Click 法定标准与探索性研究对比分析 to add title in here Click to add title in here 45 发现的问题及建议 2

3 品种概述 基本信息 : 枣仁安神颗粒是由炒酸枣仁 丹参 醋五味子三味药材组成的中药复方制剂, 为国家基本药物 规格 5g/ 袋, 包装材料为药用复合膜袋 功能主治 : 具有补心养肝, 安神益智的功效 用于治疗失眠健忘 头晕 头痛等症 不良反应 : 恶心等胃肠道反应 3

4 品种概述 生产企业和批准文号情况 55.5% 55.5% 全国共有 9 家生产企业,9 个批准文号 抽样涉及 5 家生产企业及 5 个批准文号, 覆盖率均为 55.5% 4

5 品种概述 抽样信息 共抽样 82 批次生产单位 7 批次经营单位 67 批次使用单位 8 批次应确认样品 75 批次确认率 100% 抽样单位性质分布图 5

6 品种概述 处方抽样涉及的 5 家生产企业共执行 4 个标准,3 种处 方, 不同处方药材及辅料使用量明显不同 执行标准 企业简称 炒酸枣仁 (g) 丹参 (g) 醋五味子 (g) 糊精 (g) 中药成方制剂第十一册 企业 A 企业 B YBZ 企业 C YBZ 企业 D YBZ 企业 E

7 品种概述 处方抽样涉及的 5 家生产企业共执行 3 种处方, 不同 处方药材及辅料使用量明显不同 执行标准 中药成方制剂第十一册 企业简称, 企业 A 企业 B 炒酸枣仁 (g) 丹参 (g) 醋五味子 (g) 糊精 (g) YBZ 企业 C YBZ 企业 D YBZ 企业 E

8 品种概述 处方抽样涉及的 5 家生产企业共执行 3 种处方, 不同 处方药材及辅料使用量明显不同 执行标准 中药成方制剂第十一册 企业简称, 企业 A 企业 B 炒酸枣仁 (g) 丹参 (g) 醋五味子 (g) 糊精 (g) YBZ 企业 C YBZ 企业 D YBZ 企业 E

9 品种概述 生产工艺三种药材水煎煮 过滤 浓缩制成清膏, 与糊精混合, 喷雾干燥制成颗粒剂 炒酸枣仁丹参醋五味子 水煎煮 滤过 浓缩 清膏 糊精 喷雾 颗粒剂 9

10 主要内容 1 2 Click to 品种概述 add title in here Click 标准检验结果及分析 to add title in here 3 Click to add title in here 探索性研究结果及分析 4 Click 法定标准与探索性研究对比分析 to add title in here Click to add title in here 45 发现的问题及建议 10

11 标准检验结果及分析 现行标准 5 家企业共执行 4 个现行标准, 不同标准鉴别项 检查和含量测定项存在差异 检验项目 执行标准 企业 性状鉴别粒度 含量测定 (/ 袋 ) 中药成方制剂第十一册 企业 A 企业 B 浅棕黄色 YBZ 企业 C 浅棕黄色 TLC 法 ( 丹参 ) HPLC 法 ( 丹参 ) HPLC 法, 丹参素钠 1.25mg YBZ 企业 D 浅棕黄色 TLC 法 ( 丹参 ) 薄层扫描法, 酸枣仁皂苷 A 0.20mg YBZ 企业 E 浅棕黄色 TLC 法 ( 丹参 五味子 ) 应符合规定 HPLC 法, 原儿茶醛 0.3mg 11

12 标准检验结果及分析 检验结果按现行标准检验,82 批次样品均 符合规定, 合格率 100% 12

13 标准检验结果及分析 性状 : 为浅棕黄色颗粒 ; 气香, 味酸 微苦 13

14 标准检验结果及分析 薄层色谱 : 应检出丹参 五味子 原儿茶醛 五味子醇甲 丹参 五味子 14

15 标准检验结果及分析 液相色谱 : 应检出原儿茶醛 ( 丹参 ) 对照品 供试品 15

16 标准检验结果及分析 水分测定 : 应不得过 6.0% 水分测定结果图 16

17 标准检验结果及分析 含量测定 : 三家企业进行含量测定, 测定指标均不同 生产企业 企业 C 企业 D 企业 E 执行标准 YBZ YBZ YBZ 测定指标 丹参素钠 酸枣仁皂苷 A 原儿茶醛 检验方法 HPLC 薄层扫描 HPLC 含量限度 (mg/ 袋 ) 含量结果 (mg/ 袋 ) 1.54~ ~ ~1.7 17

18 标准检验结果及分析 现行标准检验合格率 100%, 对不同检验项目结果进 行分析 : 性状鉴别水分含量 样品颜色企业内差异较小, 企业间差异较大 分析与投料药材质量和干燥方式有关 不同企业检验项目不同 企业内批间差别较小, 表明企业对薄层鉴别控制相对较好 测定结果离散程度较大, 表明各企业对水分控制相对较差 部分含量企业内批间差异大, 表明企业存在投料药材质量不稳定, 对产品质量控制不到位的情况 18

19 标准检验结果及分析 现行标准存在的问题 标准不统一 处方不统一 丹参鉴别方法不统一 含量测定指标不同 部分方法欠合理 丹参含量测定指标不合理 酸枣仁测定方法重复性较差 检验项目不全 检验项目不全 多数标准未进行五 味子鉴别 未有效控制酸枣仁 理枣仁混用的情况 含量测定指标不全 19

20 主要内容 1 2 Click to 品种概述 add title in here Click 标准检验结果及分析 to add title in here 3 Click to add title in here 探索性研究结果及分析 4 Click 法定标准与探索性研究对比分析 to add title in here Click to add title in here 45 发现的问题及建议 20

21 探索性研究结果及分析 针对法定标准存在的问题及样品可能存在的风险, 我们开展了 10 项探索性研究 其中围绕有效性 可控性开展 6 项探索性研究, 围绕安全性开展 4 项探索性研究 21

22 探索性研究结果及分析 (6) 南五味子的检查 (1) 原药材酸枣仁及其伪品考察 (5) 含量测定 有效性可控性 (2) 酸枣仁的 TLC 鉴别 (4) 特征图谱 (3) 酸枣仁伪品的检查 22

23 探索性研究结果及分析 (7) 镇静安神类药物检查 (10) 重金属及有害元素 安全性 (9) 黄曲霉毒素检查 (8) 染色剂检查 23

24 探索性研究结果及分析 1 原料药材酸枣仁及其伪品的鉴别 酸枣仁为本处方中的君药 通过调研发现, 目前市场上酸枣仁的伪品较多, 主要是其同科植物理枣仁和枳椇子 24

25 探索性研究结果及分析 采用 TLC 法对酸 酸枣仁有效成分 皂苷类成分 黄酮类成分 酸枣仁皂苷 A 酸枣仁皂苷 B 斯皮诺素 6 阿魏酰斯皮诺素 枣仁皂苷 A B 进行考察 25

26 探索性研究结果及分析 酸枣仁药材及其伪品中酸枣仁皂苷 A B 考察 提取方法 : 药材水煎 煮后用水饱和正丁醇提取, A B 氨试液洗涤 展开剂 : 水饱和正丁醇 显色及检视 :5% 香草醛浓硫酸, 日光下检视 酸枣仁理枣仁枳椇子 26

27 探索性研究结果及分析 酸枣仁化学成分 皂苷类成分 黄酮类成分 酸枣仁皂苷 A 酸枣仁皂苷 B 斯皮诺素 6 阿魏酰斯皮诺素 采用 HPLC 法, 对黄酮类成分进行考察, 可对酸枣仁及其伪品进 行有效区别 27

28 皮诺枳椇子斯探索性研究结果及分析 酸枣仁 6 阿魏素酰斯皮诺素 由液相色谱图可知, 酸枣仁药材中含斯皮诺素和 6 阿魏酰斯皮诺素, 而枳 椇子中不含上述两种成分 这一点完全可对酸枣仁和枳椇子进行区别 28

29 皮诺探索性研究结果及分析 6 阿魏素酰斯皮诺素 皮诺酸枣仁理枣仁斯素相同点 : 均含斯皮诺素和 6 阿魏酰斯皮诺素 6 阿魏酰斯皮诺素斯酸枣仁 不同点 : 理枣仁在 6 阿魏酰斯皮诺素前有一个特有的未知峰 这一点可对酸枣仁和理栆仁进行区别 29

30 探索性研究结果及分析 理枣仁未知成分研究 : 采用 DAD 检测器检测斯皮诺素和理枣仁 未知成分峰, 结果表明二者紫外吸收光谱相接近 斯皮诺素对照品 理枣仁未知成分 30

31 探索性研究结果及分析 斯皮诺素一级质谱 斯皮诺素二级质谱 未知成分一级质谱 未知成分二级质谱 未知成分三级质谱 质谱研究显示, 未知成分二级碎片以下断裂列方式与斯皮诺素完全一致, 结合 DAD 光谱信息, 推断未知成分为斯皮诺素的同系物 暂称为理枣仁特异黄酮 31

32 探索性研究结果及分析 2. 枣仁安神颗粒中酸枣仁皂苷 A B 的 TLC 鉴别 2.1 检验方法提取方法 : 用水饱和正丁醇提取, 氨试液洗涤 鉴别酸2.1 检验方法阴枣A B 性仁展开剂 : 水饱和正丁醇 显色及检视 :5% 香草 醛浓硫酸, 日光下检视 32

33 探索性研究结果及分析 均检出酸枣仁皂苷 A B, 企业为酸枣仁投料 不合格率企业 D 68.3% 均未检出酸枣仁皂苷 A, 企业存在以理枣仁投料的可能 企业 A 批间差异大, 企业存在以理枣仁掺伪投料或少投料的可能 企业 C 33

34 探索性研究结果及分析 枣仁安神颗粒 遵循检验经济学原则, 采用同一供试品溶液 同一液相色谱条件进行了 4 项探索性研究, 分别是 : 3 酸枣仁伪品检查 4 特征图谱 5 含量测定 6 南五味子检查 提取方法 :70% 甲醇超声提取流动相 : 乙腈 0.1% 冰醋酸溶液梯度洗脱 ; 色谱柱 :Zorbax Extend C18 ( mm)5µm 检测器 :DAD 检测器 34

35 探索性研究结果及分析 3 枣仁安神颗粒中酸枣仁伪品检查方法的建立 检验方法 : 检测波长 :320nm 以斯皮诺素 6 阿魏酰斯 皮诺素为对照品, 理枣仁为对照药材 结果判定 : 应检出斯皮诺素 6 阿魏酰斯皮诺素 ; 不得检 出理枣仁特异黄酮, 如检出, 其紫外光谱不得与理枣仁特异黄 酮相同 35

36 探索性研究结果及分析 样品中酸枣仁伪品检查结果 HPLC 该供试品检出理枣仁成分, 为伪品投 HPLC 料或掺伪投料 UV UV 理枣仁药材 枣仁安神颗粒 结果 : 理枣仁检出率 74.4%, 未检出枳椇子 说明企业均以理栆仁作为伪品投料 36

37 探索性研究结果及分析 4. 枣仁安神颗粒特征图谱的建立 1 号峰 炒酸枣仁 2 号峰 3 号峰 丹参 4 号峰 (S) 五味子 5 号峰 检验方法 : 以丹酚 酸 B 为参照物, 检测波长 250nm, 记录 110 分钟的色谱 图 结果判定 : 应有 5 个特征峰, 与 S 峰相 对保留时间应在规 定值的 ±5% 之内 37

38 探索性研究结果及分析 5 家生产企业特征图谱比较图 检查结果 : 不合格率为 2.4% 不同生产企业特征图谱特征 峰峰面积差异较大, 表明不同生产企业在药材投料量 原料药材 质量等方面存在显著差异 38

39 探索性研究结果及分析 5 枣仁安神颗粒中炒酸枣仁 丹参 醋五味子的含量测定采用双波长测定法以 250nm 320nm 为检测波长进行检测 对照品 斯皮诺素 丹酚酸 B 五味子醇甲 样品 以斯皮诺素为指标测定炒酸枣仁含量 以丹酚酸 B 为指标测定丹参含量 以五味子醇甲为指标测定五味子含量 39

40 探索性研究结果及分析 斯皮诺素含量测定箱图丹酚酸 B 含量测定箱图五味子醇甲含量测定箱图 含量测定不合格率 98.8% 40

41 探索性研究结果及分析 6. 枣仁安神颗粒中南五味子检查 对南五味子中特异成分五味子酯甲进行检查, 检测波长 250nm 五味子酯甲 全部样品均未检 出五味子酯甲 表 明枣仁安神颗粒不 供试品 存在南五味子替代 五味子投料的现象 41 41

42 安全性研究 探索性研究结果及分析 7. 镇静安神类药物检查 采用 LC-MS/MS 法对 21 种可能添加的镇静安神类药物进行检测, 结果均未检出 8. 染色剂检查 9. 黄曲霉毒素检查 采用 HPLC 法对胭脂红 赤藓红 酸性红 73 苋菜红 诱惑红 日落黄 6 种色素进行检测, 结果均未检出 采用 HPLC 柱后衍生法对 4 种黄曲霉毒素进行检测, 结果 5 批次检出, 但均未超限 10. 重金属及有害元素检查 采用 ICP-MS 法对 5 种元素进行检测, 结果均远低于规定值 结果表明 : 枣仁安神颗粒在上述四个方面不存在安全隐患 42

43 探索性研究结果及分析 11. 近红外快筛方法的考察 建立了枣仁安神颗粒的近红外一致性模型 企业 A 企业 D 43

44 探索性研究结果及分析 综合探索性研究检验结果, 发现影响本品 质量的主要因素如下 : 1 2 部分企业采用理枣仁替代酸枣仁投料或掺伪投料 部分企业不按照工艺生产, 偷工减料 少投料或不投料 44

45 综合评分 按照确定的评价指标和权重系数对样品进行综合评分, 以 排出质量优劣顺序, 结果与分析结论一致 序号 生产企业 综合评分 1 企业 B 企业 E 企业 D 企业 C 企业 A

46 主要内容 1 2 Click to 品种概述 add title in here Click 标准检验结果及分析 to add title in here 3 Click to add title in here 探索性研究结果及分析 4 Click 法定标准与探索性研究对比分析 to add title in here Click to add title in here 45 发现的问题及建议 46

47 法定标准与探索性研究对比分析 法定检验不合格率 0%; 探索研究不合格率 98.8% 通过上述检验项目, 对产品质量进行总体控制 稳定性 增加特征图谱鉴别 增加薄层色谱 酸枣仁及五味子伪品检查 含量测定 增加有害元素 染色剂 黄曲霉毒素 镇静安神类药物检查 安全性 有效性 可控性 47

48 主要内容 1 2 Click to 品种概述 add title in here Click 标准检验结果及分析 to add title in here 3 Click to add title in here 探索性研究结果及分析 4 Click 法定标准与探索性研究对比分析 to add title in here Click to add title in here 45 发现的问题及建议 48

49 发现的问题及建议 存在的问题风险分析解决的建议 质量标准 检验项目缺失 酸枣仁药材投料失控 增加酸枣仁的薄层色谱 鉴别 酸枣仁含量测定重复性差 不能保证产品的有效性 修订酸枣仁含量测定方法 含量测定指标不全面 不合理 不能保证产品的有效性 修订丹参含量测定项 增加酸枣仁 五味子专属性成分的含量测定 49

50 发现的问题及建议 存在的问题风险分析解决的建议 处方与工艺 处方量差别大 引起疗效和副作用等相关问题 辅料糊精量差别大 导致不同企业产品质量存在差异 统一处方 制法 工艺参数有所不同 导致不同企业产品质量存在差异 违规违法 违规违法生产问题 存在少投料 不投料的行为 企业不按处方生产 增加特征图谱检查 以酸枣仁伪品理枣仁替代投料或掺伪投料的现象 企业对药材质量把关不严 增加酸枣仁伪品的补充检验方法 50

51 综合评价 检验标准 卫生部药品标准中药成方制剂第十一册 局标准 YBZ YBZ YBZ 标准评价 不可行 质量状况 法定检验合格率为 100% 探索性研究合格率为 1.2% 枣仁安神颗粒质量总体评价 差 51

52 2015/12/1 52

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