定量PCR技术在临床检测中的应用和进展2 [兼容模式]

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1 实时荧光定量 PCR 技术 在宫颈癌 (HPV) 筛查中的应用 及核酸自动提取技术 西安天隆科技有限公司 河北 2010 年 7 月

2 一 PCR 原理 历史及发展应用

3 1.1 PCR 发展史 v PCR 最大的特点就是能不断推出新形式 摘自 [Making PCR: A Story of Biotechnology by Paul Rabinow] v 1983 Cetus 公司的 K. Mullis(12 月 16 日第一次成功实验 ) 发明了 PCR v v 1987 当年 7 月 Cetus 公司在美国获得 PCR 基本技术专利批准 PECI 仪器公司于这一年推出了世界第一个 PCR 试剂产品及世界第一台热循环仪 1992 当年 3 月 Cetus 公司获得 Taq 酶 热循环扩增仪等专利 v 1993 AMPLICOR HCV* 首次用于临床 RNA PCR 标准试剂盒 Kary Mullis 因 PCR 的发明获得诺贝尔化学奖 v 1996 年实时荧光 PCR 技术由美国 PE 公司发明提出 v 1999 年实时荧光 PCR 技术开始在中国较广泛的应用于临床检测

4 1.2 PCR 的定义 v PCR(Polymerase Chain Reaction) 即聚合酶链反应技术, 是指利用耐热 DNA 聚合酶的反复催化作用, 通过变性 - 退火 - 延伸的循环操作, 在体外迅速将 DNA 模板扩增数百万倍的一种操作技术 v 变性 (denature):dna 双链解螺旋 v 退火 (annealing), 也叫复性 杂交 : 引物与模板结合 v 延伸 ( extension):dna 聚合酶沿着引物和模板复合物由 5 3 延伸

5 1.3 PCR 的原理

6 1.4 PCR 的分类 根据模板的不同,PCR 分为 PCR 和 RT-PCR; 模板为 DNA 的可以直接进行扩增 ; 而模板为 RNA 的, 要先反转录成 cdna, 然后以 cdna 为模板转录成 DNA HCV HIV 均为 RNA 病毒, 采用 RT-PCR 方法 ; 而 HBV HPV 为 DNA 病毒, 结核杆菌 支原体 衣原体等都采用 PCR 方法检测

7 PCR 应用领域

8 1.5 PCR 在医学领域的应用 v 疾病基因检测 / 遗传病的产前诊断 v 致病病原体的检测 v 肿瘤治疗中癌基因的检测 会推广到大部分疾病治疗前的检测 v DNA 指纹 个体识别 亲子关系鉴别 v SNP 分析, 遗传背景分析

9 1.6 PCR 历史发展的三个阶段 v 定性 PCR( 电泳法 ) v 酶免法定量 PCR v 实时荧光定量 PCR(PCR 技术的飞跃 )

10 1.7 什么是荧光定量 PCR?

11 1.7 什么是荧光定量 PCR? v 在 PCR 反应体系中加入荧光基团, 利用荧光信号积累, 最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 v 荧光定量 PCR 是荧光示踪技术 探针杂交技术和 PCR 技术的完美结合 v 荧光定量 PCR 是在定性 PCR 基础上的一次 DNA/RNA 检测的革命 v 分为终点法和实时定量 PCR 两种

12 1.8 荧光定量 PCR 的要素 1 引物 2 Taq 酶 3 dntps 4 模板 5 探针 ( 染料 ) 6 Mg 2+

13 1.9 荧光定量 PCR 类型 非特异性染料 SYBR Green I 结合法 Taqman 探针法 分子信标探针标记法 双探针标记法

14 1.9 荧光定量 PCR 类型 Taqman 荧光定量 PCR 中的概念 vtaqman 法 v 荧光探针 v 实时定量 v 终点法 v 荧光共振能量转移

15 1.9 荧光定量 PCR 类型 v Taqman 原理 v PCR 扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针, 该探针为一寡核苷酸, 两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团 探针完整时, 报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收 ;PCR 扩增时,Taq 酶的 5-3 外切酶活性将探针酶切降解, 使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离, 从而荧光监测系统可接收到荧光信号, 即每扩增一条 DNA 链, 就有一个荧光分子形成, 实现了荧光信号的累积与 PCR 产物形成完全同步

16 1.9 荧光定量 PCR 类型 TaqMan 荧光探针的概念能与长链 DNA 结合的 DNA 片段, 带有荧光基团等示踪物质 荧光探针的组成 DNA 片段 ( 探针 ) 报告子和淬灭子

17 1.9 荧光定量 PCR 类型 v 什么是报告子和淬灭子 有机化学小分子 报告子是一个荧光基团 常用报告子 : FITC ( 异硫氰酸荧光素 ) FAM ( 羧基荧光素 )VIC 等 淬灭子是一个阻碍报告子荧光释放的基团 常用淬灭子 : TAMRA (6- 羧基四甲基若丹明 )

18 1.9 荧光定量 PCR 类型实时荧光定量 PCR 反应模型 荧光定量 PCR 扩增曲线可以分成三个阶段 : 荧光背景信号阶段 ( 基线期 ), 荧光信号指数扩增阶段 ( 对数期 ) 和平台期

19 G T C A T G G C C T A G T C A T G C T G A G T C A T A C T G A T T A C T C G G A T C A G T A C G A C T C A G T A T G A C T A A T G A G C C T A G T C A T G C T G A G T C A T A C T G A T T A C T C G G A T C A G T A C G A C T C A G T A A T G A

20 G T C A T G G C C T A A T T A C T C G G A T C A G T A C G A C T C A G T A T G A C T A A T G A G C C T A G T C A T G C T G A G T C A T A C T G C T C A G T A A T G A

21 A T T A C T C G G A T C A G T A C G A C T C A G T A T G A C T A A T G A G C C T A G T T C A A T T G C T G A G T C A T A C T G A T T A C T C G G A T C A G T A C G A C T C A G T A A T G A G C C T A G T C A T G C T G A G T C A T A C T G

22 1.10 荧光定量 PCR 的优点 荧光定量重复性

23 1.10 荧光定量 PCR 的优点 荧光定量动力学定量范围宽, 可达 Standard 1.0E E+9 1.0E+8 1.0E+7 1.0E+6 1.0E+5 1.0E+4 1.0E+3 1.0E+2 1.0E+1 H 2 O Calculated concentration 9.522E E E E E E E E E E+1 H 2 O

24 1.11 荧光定量 PCR 的优点 快速 v 在 30 分钟内完成 40 个循环 敏感 v 在一个人基因组当量中检出单拷贝基因 特异 v 可进行定量 PCR( 内 外标 ), 突变检测, 熔解曲线分析, 混合 PCR 检测 定量 v 定量 PCR 测定的测定点为 PCR 扩增的指数扩增期

25 1.11 PCR 三个阶段方法对比 荧光法电泳法 ELISA 法 灵敏度 10 2 copies/ml 10 4 copies/ml 10 3 copies/ml 特异性 强 差, 无法区分非特异产物 强 抗污染强, 避免假阳性差, 易产生假阳性差, 易产生假阳性 易操作性易易操作复杂 定性可可可 定量定量范围 不能定量定量范围

26 二 荧光定量 PCR 在临床中的应用

27 2.1 实验室规范 v 临床基因扩增检验实验室管理暂行办法 卫医发 [2002]10 号 v 临床基因扩增检验实验室工作规范 卫检字 [2002]8 号

28 2.1 实验室规范 v 原则上应分为四个隔开的工作区域, 每一区域都应有专用的仪器设备 即 (1) 试剂贮存和准备区 ; (2) 标本制备区 ;(3) 扩增反应混合物配制和扩增区 ; 和 (4) 扩增产物分析区 v 与特定实验区有关的各个房间必须有明确的标记, 以避免不同工作区内的设备物品如加样器 试剂等的移出或不同工作区物品的混淆

29 2.2 荧光定量 PCR 实验基本流程 1. 准备模板 (DNA 或 RNA,RNA 反转录成 cdna) 2.PCR 反应 (DNA/cDNA+ 引物探针 +PCR mix) 3. 填样品表 ( 样品名 孔位, 样品类型 探针颜色 ) 4. 设置参数 ( 循环参数 反应体积 熔解曲线 ) 5. 运行 PCR, 自动分析数据 6. 进一步分析数据 ( 基线 阈值 CT 值 相对表达等 )

30 2.3 房间布局

31 2.3 房间布局及室内器具配置 试剂储备和准备区 缓冲区 2 缓冲区缓冲区 2 2 标本制备区 基因扩增与产物分析区 标注 : 1 排风扇或抽气扇 2 衣帽架 / 鞋架 3 水池 4 冰箱 5 超净工作台 6 微量加样器 7 工作台 8 混匀器 9 移动紫外灯 1 样本传递窗 1 高速离心机 1 水浴箱 1 天隆定量 PCR 仪 1 计算机 1 打印机 1 座椅

32 2.4 实验室所需仪器以及耗材 v 仪器 : 分析天平 台式冷冻高速离心机 生物安全柜 真空干燥器 制冰机 荧光定量 PCR 仪 液氮或 -70 冰箱 微波炉 组织研磨器 -20 冰箱 可调移液器 (2ul 20ul 200ul 1000ul) v 耗材 : 眼科剪 眼科镊 称量纸 20ml 一次性注射器 1.5ml 经焦炭酸二乙酯 (DEPC) 水处理的灭菌离心管 吸头 (10ul 200ul 1000ul) 电泳级琼脂糖 量筒 锥形瓶 灭菌双蒸水

33 2.5 样品的采集 样品采集部位准备 : 适度清洁消毒可去掉污染的微生物或其它杂物, 过度清洁消毒有可能会去掉或破坏靶微生物 标本的类型和采集量 : 根据所测病原体而定 一般来说, 采集标本的量和对病原体培养所需量相同 如果进行定量检测, 则要求标本的收集更为精确

34 2.6 样品的运输 采集的样品, 迅速放入 50% 甘油 PBS 中 (PH7.2),2-8 保存, 迅速送实验室检测或直接使用 0 冰壶运送 采集的样品, 短期内可保存于 -20, 长期保存可置于 -70, 但不能超过 6 个月

35 2.7 样品的保存 采集的样品, 迅速放入 50% 甘油 PBS 中 (PH7.2),2-8 保存, 迅速送实验室检测或直接使用 0 冰壶运送 使用 GITC 作为稳定剂保存标本, 标本可在室温下稳定约 7 天 采集的样品, 短期内可保存于 -20, 长期保存可置于 -70, 但不能超过 6 个月

36 2.8 荧光定量 PCR 检测临床开展项目 90% 以上荧光定量 PCR 仪用户只开展 : HBV-DNA HCV-RNA 还能开展的项目 : 巨细胞病毒 单纯疱疹病毒 风疹病毒 弓形虫 解脲支原体 人乳头瘤病毒

37 2.8 荧光定量 PCR 检测临床开展项目 随着人民生活水平的提高, 人们对生活质量也提出了更高的要求, 特别是近年来研究发现 HPV 感染可导致女性生殖系统恶肿瘤, 在增加任何设备的情况下, 依赖固有的荧光定量 PCR 检测仪器便可开展 HPV 的检测

38 宫颈癌现状 HPV 与宫颈癌宫颈癌筛查 HPV 检测方法比较 HPV 检测在宫颈癌筛查中的应用

39 一 宫颈癌现状 宫颈癌发病率 宫颈癌死亡率 发展中国家 双高 原因 发达国家和发展中国家年龄标准化子宫颈癌发病率 (2005 年 ) 根据 WHO 统计 (2005): (1) 新发病例> 50 万 / 年 (2)90% 来自发展中国家 (3) 世界范围总数> 100 万 中国 : 每年约有 15 万新发病例占世界新发病例的 30%! 数据来源 : Tunstall-Pedoe H. Preventing Chronic Diseases. A Vital Investment: WHO Global Report. Geneva: World Health Organization, pp 200.

40 一 宫颈癌现状 宫癌发病发病率 宫颈癌死亡死亡率 发展中国家 双高 原因 世界 (2005) 约 26 万妇女死于宫颈癌 发达国家和发展中国家各年龄段子宫颈癌的死亡率 (2005 年 ) 约 95% 在发展中国家 中国 : 每年约有 8 万人死于宫颈癌占世界死亡人数的 31%! 数据来源 :Tunstall-Pedoe H. Preventing Chronic Diseases. A Vital Investment: WHO Global Report. Geneva: World Health Organization, pp 200.

41 一 宫颈癌现状 宫颈癌发病发病率 宫颈癌死亡率 发展中国家 双高 原因 v 发展中国家高发病率和死亡率的主要原因 : 认识不够 筛查水平低 卫生资源有限 缺乏有效的转诊体系

42 二 HPV 与宫颈癌 导致宫颈癌的因素 HPV 分型 HPV 型别分布 宫颈癌发病过程 HPV( 人乳头瘤病毒 ) 感染是导致宫颈癌的罪魁祸首! 哈拉尔德 楚尔 豪森这一发现已获得 2008 年度诺贝尔生理学与医学奖 HPV 持续感染是宫颈癌的主要致病因素 99.7% 宫颈癌患者存在 HPV 感染

43 二 HPV 与宫颈癌 导致宫颈癌的因素 HPV 分型 HPV 型别分布 宫颈癌发病过程 v 低危型 :HPV 等, 常引起外生殖道湿疣等良性病变 v 高危型 :HPV 等, 常引起子宫颈癌及子宫颈上皮内瘤变 (CIN2/3)

44 导致宫颈癌的因素 二 HPV 与宫颈癌 HPV 分型 HPV 型别分布 宫颈癌发病过程 亚洲地区,5954 例宫颈癌中最常见 HPV 型别的比例 ( 试验方法为 PCR) 数据来源 :Bao Y-P, Li N, Smith JS, et al. HPV type distribution in women from Asia: a meta-analysis. International Journal of Gynecological Cancer 2008, 18,

45 导致宫颈癌的因素 HPV 型别在亚洲 例妇女各级宫颈病变中的分布 ( 试验方法为 PCR) SCC: 鳞状细胞癌 ADC: 腺癌 HSIL: 高度鳞状上皮内病变 LSIL: 低度鳞状上皮内病变 二 HPV 与宫颈癌 HPV 分型 HPV 型别分布 宫颈癌发病过程 数据来源 :Bao Y-P, Li N, Smith JS, et al. HPV type distribution in women from Asia: a meta-analysis. International Journal of Gynecological Cancer 2008, 18,

46 二 HPV 与宫颈癌 导致宫颈癌的因素 HPV 分型 HPV 型别分布 宫颈癌发病过程 在中国 2698 例宫颈癌妇女中最常见的 8 种 HPV 型别的分布 ( 试验方法为 PCR) 数据来源 :Bao Y-P, Li N, Smith JS, et al. HPV type distribution in women from Asia: a meta-analysis. International Journal of Gynecological Cancer 2008, 18,

47 导致宫颈癌的因素 二 HPV 与宫颈癌 HPV 分型 HPV 型别分布 宫颈癌发病过程 377 例 HPV 阳性样本 ( 测序后 ) 的型别分布情况 百分比 (%) HPV 型别 数据来源 : 复星人乳头瘤病毒 (HPV) 荧光 PCR 检测试剂盒临床考核报告

48 导致宫颈癌的因素 二 HPV 与宫颈癌 HPV 分型 HPV 型别分布 宫颈癌发病过程 HPV 感染后发展为子宫颈癌的过程 一过性感染 持续感染 HPV 正常宫颈 感染 进展 消退 炎症 进展 消退 癌前病变 进展 癌 数据来源 :Thomas C. Wright, Jr., M.D., Mark Schiffman, M.D. Adding a Test for Human Papillomavirus DNA to Cervical-Cancer Screening. The New England Journal of Medicine. 2003, 490.

49 三 宫颈癌筛查 宫颈癌筛查的必要性 宫颈癌筛查方法 各方法优缺点 v 宫颈癌是人类目前所有癌症中唯一原因明确 早 发现可治疗的癌症, 系统有效的筛查是降低宫颈 癌发病率和死亡率的最有效手段

50 三 宫颈癌筛查 宫颈癌筛查的必要性 宫颈癌筛查方法 各方法优缺点 1 细胞学方法 : 巴氏涂片法和液基 细胞学 (LBC) 2 肉眼筛查方法 : 醋酸染色肉眼观察法 (VIA ) 和卢格式碘染色肉眼观察法 (VILI) 3 HPV DNA 检测 LBC: liquid-based cytology VIA :visual inspection of the cervix after swabbing it with vinegar

51 宫颈癌筛查的必要性 三 宫颈癌筛查 宫颈癌筛查方法 细胞学与 HPV 检测比较 HPV 和细胞学检测在宫颈癌筛查中的对比 HPV 细胞学 肿瘤发生的阶段 早 晚 特异性 高 低 阴性预测值 高 低 检测的客观性 高 低

52 宫颈癌筛查的必要性 三 宫颈癌筛查 宫颈癌筛查方法 各方法优缺点 高危型 HPV DNA 检测与细胞学检查相结合的宫颈癌筛查方法, 其对宫颈高度病变的检出率以及阴性预测值均接近 100%! 各国均推荐 高危型 HPV DNA 检测与细胞学检查相结合 是宫颈癌筛查的最佳方案

53 HPV 检测方法 四 HPV 检测方法 各方法原理及优缺点 常用 HPV 检测方法比较 v 细胞形态学检查 v 血清学检查 vdna 印迹法 v 原位杂交法 v 杂交捕获法 (HC-Ⅱ) v 基因芯片法 v 实时荧光 PCR 技术

54 四 HPV 检测方法 HPV 检测方法 各方法原理及优缺点 常用 HPV 检测方法比较 方法检测依据影响因素缺点 细胞病理学检查 血清学检查 凹空细胞 抗体 取材好坏 标本制备 医生读片技术熟练水平 HPV 不能体外培养, 免疫原性较弱, 人体免疫应答有延迟 灵敏度低, 特异性差, 假阴性 假阳性率高 灵敏度低, 对无免疫应答和 HPV 感染潜伏期感染者易漏检 DNA 印迹法 DNA 需新鲜组织标本操作麻烦 耗时 费用高 原位杂交法 DNA 探针杂交杂交链的稳定性 杂交率降低, 影响 HPV DNA 检出率, 降低临床使用 杂交捕获 (HC-II) 抗体信号放大 易交叉污染, 费用昂贵, 与低危型有交叉反应 基因芯片法 DNA 探针杂交费用昂贵 实时 PCR 法 DNA 快速 简便 准确, 成本较低, 适合群体筛查

55 四 HPV 检测方法 HPV 检测方法 各方法原理及优缺点 常用 HPV 检测方法比较 实时 PCR 技术杂交捕获法 (HC-Ⅱ) 基因芯片法 检测过程 样本采集 DNA 提取 PCR 扩增 结果分析 样本采集 DNA 裂解 DNA/RNA 杂交 抗体捕获 信号放大 荧光读数 样本采集 DNA 提取 PCR 扩增 杂交 显色 结果分析 耗 时 2 小时 4 小时 6-7 小时 需要仪器 PCR 仪 基因杂交信号扩大仪 PCR 仪 杂交仪 灵敏度 2500 copies/ml 10 5 copies/ml 10 3 copies/ml 特异性 >98% 与低危型存在交叉污染 容易污染, 出现假阳性 准确性 高 高 高 基因型数 8-13 个型 13 个型 23 个型 成 本 低 高 高 大规模筛查 适用 适用 不适用

56 四 HPV 检测方法 HPV 检测方法 各方法原理及优缺点 常用 HPV 检测方法比较 v 实时 PCR 优势 : v 简便 快速, 不需要 PCR 之后的后处理 ; v 灵敏度高, 能进行早期诊断 ; v 特异性高, 假阳性判断结果少, 减少由此造成的不良影响 ; v 检测完全在全封闭的反应管中进行, 避免交叉污染引起的假阳性结果 ; v 适用于筛查高 低流行率人群

57 五 复星 HPV 检测试剂盒介绍 ( 实时 PCR 技术 ) 试剂特点配套的 HPV 检测系统复星 HPV 检测试剂优势 标本采集系统 + 全自动核酸提取仪 + 全自动荧光定量 PCR 仪

58 五 HPV 检测在宫颈癌筛查中的应用 HPV 检测意义 检测对象 检测方案 HPV 检测与基因分型 v 检测意义 : v (1)HPV 检测灵敏度和特异性高 操作方便, 易于在临床使用 v (2) 可有效减少细胞学检查的假阴性结果 v (3) 根据 HPV 感染型别预测受检者患宫颈癌的风险 v (4) 对意义未明确的非典型鳞状上皮细胞或腺上皮细胞, 应用 HPV 检测可进行有效的再分类 v (5) 可作为术后疗效判断和随访监测的手段, 预测其病变恶化或术后复发的风险

59 五 HPV 检测在宫颈癌筛查中的应用 HPV 检测意义 检测对象 检测方案 HPV 检测与基因分型 v 检测对象 : v30 岁以上女性 v 以及 30 岁以下的高危人群 ( 性生活过早 有多个性伴侣 免疫功能低下 多次怀孕 感染 HIV 的妇女 吸烟 卫生条件差和性保健知识缺乏的女性 )

60 HPV 检测意义 六 HPV 检测在宫颈癌筛查中的应用 v 检测间隔 : 检测对象 检测方案 HPV 检测与基因分型 v30 岁以后进行 HPV 检测, 常规检测每 3 年 1 次, 连续 2 次 HPV 和细胞学正常可延至 5~8 年 高危人群应每 1 ~2 年筛查一次 70 岁以后,3 次以上细胞学正常, 并且在过去 10 年内都正常, 可停止筛查

61 HPV 检测意义 图 1 五 HPV 检测在宫颈癌筛查中的应用 检测对象 检测方案 高危型 HPV DNA 检测 + 细胞学检查 HPV 检测与基因分型 HPV(-) 细胞学阴性 HPV(+) 细胞学阴性 HPV (+) ASC-US ( 非典型鳞状上皮细胞 ) HPV(-) ASC-US 常规筛查次 /3 年 一年后 HPV 和细胞学检查 阴道镜检查 一年后重复细胞学检查 结果都为阴性 HPV(+) 细胞学阴性 HPV(+)/(-) ASC-US 宫颈上皮内瘤变 无 CIN CIN 常规筛查 3 年 / 次 阴道镜检查 HPV(-) 一年后重复细胞学检查 HPV(+) 一年后 HPV 检测或 6 和 12 个月细胞学检查 见图 选自 : 美国阴道镜和宫颈病理学会 (ASCCP) consensus guidelines for the management of women with abnormal cervical cancer screening tests.

62 五 HPV 检测在宫颈癌筛查中的应用 HPV 检测意义 图 2 检测对象 检测方案 高危型 HPV 阳性和细胞学阴性 HPV 检测与基因分型 HPV 16/18(+) HPV 16/18(-) 1 年后重复 HPV 高危型和细胞学检测 结果都为阴性 HPV(+) 细胞学阳性 HPV(+)/(-) ASC-US 阴道镜检查 常规筛查次 /3 年 阴道镜检查 阴道镜检查或 1 年后细胞学检查 选自 :ASCCP consensus guidelines for the management of women with abnormal cervical cancer screening tests.

63 五 HPV 检测在宫颈癌筛查中的应用 HPV 检测意义 检测对象 检测方案 HPV 检测与基因分型 总结 HPV DNA 和细胞学检测均为阴性 :3 年后重新筛查 对于 HPV 阳性, 细胞学阴性 :12 个月后重复检测 v 若重复检测结果持续阳性 : 阴道镜检查 ; v 若两个检测结果都为阴性 :3 年后重复筛查 HPV DNA 阴性 细胞学阳性 :12 个月后细胞学检测 HPV DNA 阳性 细胞学阳性 : 阴道镜检查

64 HPV 分型检测系统 标本采集系统 + 全自动核酸提取仪 + 全自动荧光定量 PCR 仪

65 三 PCR 样本处理的新发展

66 1 传统 PCR 模板提取方法 样本 裂解液 PCR 模板 样本中加入裂解液, 煮沸, 高速离心样本中加入裂解液, 硅胶膜吸附, 高速离心 纯水洗脱 离心

67 1 传统 PCR 模板提取方法 传统 PCR 模板提取方法缺点 : 1 模板纯度低, 抑制 PCR 反应 2 模板浓度受操作手法影响较大, 结果一致性差 3 提取过程繁琐, 需要 转以上的高速离心, 很难实行自动化 4 操作员工作任务繁重 5 模板提取过程会造成不同程度的人身健康伤害

68

69 2 最新的磁珠法 DNA 模板提取 磁珠法核酸提取纯化原理 : 利用游离在液体中的核酸能在高盐 高醇环境下, 会特异性的吸附于磁珠表面, 而在低盐环境下又可脱离磁珠的特性, 使核酸达到提取和纯化的目的

70 原理图如下 : 2 最新的磁珠法 DNA 模板提取

71 2 最新的磁珠法 PCR 模板提取 磁珠法 PCR 模板提取方法优点 : 1 模板纯度高, 不影响 PCR 反应 2 模板浓度结果一致性好 3 提取过程简单, 容易实现自动化 4 模板提取过程会造成不同程度的人身健康伤害

72 2 最新的磁珠法 PCR 模板提取 v 提取速度快, 操作时间短,30-60 分钟 / 次, v 样品通量大, 可同时提取 32 个样本 v 内部集成有紫外灯消毒, 可最大限度减少标本污染 v 安全可靠 v 智能化操作, 避免有害物质对人体的危害 v 不需要高速离心, 仪器结构简单, 故障率低

73 磁珠法核酸提取仪试验结果

74 磁珠法核酸提取仪实验结果 采用北京金麦格 RNA 提取试剂盒提取禽流感梯度稀释标本结果 : 标本 : 1 禽流感培养液 ( 灭活 ) 2 禽流感培养液 10 倍稀释 3 禽流感培养液 100 倍稀释 4 禽流感培养液 1000 倍稀释 5 禽流感培养液 倍稀释

75 NP968 自动核酸提取仪 v 实现自动化 v 灵敏度高 v 稳定性强 v 避免了人工操作带来的误差 v 有效保护了操作人员

76 自动核酸提取仪配套试剂 核酸提取试剂种类 全血基因组 DNA 提取试剂盒动物组织 / 细胞基因组 DNA 提取试剂盒细菌基因组 DNA 提取试剂盒病毒 DNA/RNA 提取试剂盒血清游离 DNA 提取试剂盒病毒 DNA 提取试剂盒

77 自动核酸提取仪配套试剂 核酸提取试剂用途 全血基因组 DNA 提取试剂盒 : 提取人类基因组 DNA 最常用的就是血液, 提取出的 DNA 可以用来做 SNP 分析, DNA 测序等, 一般医院领域的科研人员会用到这个产品 动物组织 / 细胞基因组 DNA 提取试剂盒 : 解脲支原体 沙眼衣原体 梅毒螺旋体 弓形虫 细菌基因组 DNA 提取试剂盒 : 结核杆菌 志贺氏菌 沙门氏菌 大肠杆菌 单增李斯特 金黄色葡萄球菌 创伤弧菌 溶澡弧菌 耶尔森菌 副溶血弧菌 幽门螺杆菌 空肠弯曲菌 白色念珠菌

78 自动核酸提取仪配套试剂 核酸提取试剂用途 病毒 DNA/RNA 提取试剂盒 : 禽流感 新城疫 H1N1 EV71 柯萨奇 A16 HIV 轮状病毒 RV 病毒 口蹄疫病毒 病毒 DNA 提取试剂盒 : HBV( 除丙肝之外的各型肝炎 ) HPV HSV EB 病毒 狂犬病毒 血清游离 DNA 提取试剂盒 : 血清游离 DNA, 英文为 circulating DNA, 指的是一种游离于血液中的破碎细胞的 DNA 片段 ( 平均 200bp), 主要有两大应用, 其一为新生儿筛查, 即孕妇怀孕期间其血液中存在胎儿的游离 DNA, 通过对该种 DNA 的分析可以判断该胎儿是否患有先天性遗传疾病 ; 其二为肿瘤诊断, 通过检测病人血液中游离的破碎肿瘤细胞释放的 DNA, 进行肿瘤类型的诊断, 帮助治疗

79 积极营销 注重出口 2008 年 1 月联合国开发计划署招标实时定量 PCR 仪产品用于全球艾滋病病毒查

80 公司网址 :

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untitled 宫颈上皮内瘤变的阴道镜检查和治疗院初学者手册 CIN3 相当于重度不典型增生和 CIS 遥 19 世纪 80 年代袁与 HPV 感染有关的挖空细胞或湿疣样非典型细胞的病理变化越来越被人们认识遥挖空细胞是核周凹空或胞浆有空穴的不典型细胞袁是 HPV 感染的细胞病理改变遥产生了二个级别的简单的组织学系统袁 1990 年根据这两个分级袁组织病理学命名为院低度 CIN 袁涵盖了挖空的非典型细胞和 CIN 玉以及高度

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