696 检验医学 2017 年 8 月第 32 卷第 8 期 Laboratory Medicine,August 2017,Vol. 32,No. 8 人乳头瘤病毒 (human papillomavirus, HPV) 是一种无包膜的双连闭环 DNA 病毒, 属乳多空病毒科乳头瘤病毒属 人乳头瘤

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1 695 文章编号 : (2017) 中图分类号 :R446.5 文献标志码 :A DOI : /j.issn 上海市松江区人乳头瘤病毒感染情况分析 黄路遥, 许燕燕, 娄晓丽, 曹辉, 夏万宝, 侯彦强 ( 上海市松江区中心医院检验科, 上海 ) 摘要 : 目的探讨上海市松江区不同年龄段妇女人乳头瘤病毒 (HPV) 感染情况及亚型分布, 并结合病理结果分析 HPV 对宫颈细胞的致病性, 为松江区宫颈癌的防治提供依据 方法收集上海市松江区中心医院 2016 年 2 月 1 日 -3 月 31 日妇科门诊 例患者的宫颈分泌物, 进行 HPV 基因分型检测, 并结合患者年龄 HPV 亚型以及病理结果分析松江区妇女 HPV 的感染及致病情况 结果在 例样本中 HPV 阳性 例, 感染率为 22.6%, 其中单一感染 798 例, 多重感染 342 例 ; 各年龄组 HPV 感染率为 :<20 岁组 29.5%,21~30 岁组 21.0%, 31~40 岁组 21.7%,41~50 岁组 21.7%,51~60 岁组 30.0%,>60 岁组 28.8%, 各年龄组 HPV 感染率差异有统计学意义 (P= ) 感染率排在前 5 位的 HPV 亚型分别是 16 型 (17.0%) 52 型 (14.6%) 58 型 (12.8%) 54 型 (8.2%) 和 51 型 (8.2%) HPV 高危组 (HPV16 型和 18 型 非典型鳞状上皮细胞 (ASCUS) 级别的病变明显高于 HPV 低危组 ( 除 HPV16 型和 18 型以外的亚型 ) 和阴性对照组 (P<0.05) 结论上海市松江区 51~60 岁妇女 HPV 的感染率最高,HPV16 型 18 型对宫颈细胞有较强的致病性, 对高危人群进行 HPV 筛查将为宫颈癌的防治提供依据 关键词 : 人乳头瘤病毒 ; 感染率 ; 亚型 ; 年龄分布 ; 致病性 ; 松江区 Human papillomavirus infection in Shanghai Songjiang HUANG Luyao,XU Yanyan,LOU Xiaoli,CAO Hui,XIA Wanbao,HOU Yanqiang.(Department of Clinical Laboratory,Shanghai Songjiang Central Hospital, Shanghai ,China) Abstract :Objective To investigate human papillomavirus(hpv)infection and subtype distribution in Shanghai Songjiang,to analyze HPV pathogenicity on cervical cells,and to provide a reference for the control and prevention of cervical cancer. Methods A total of female outpatients' cervical secretion samples from Shanghai Songjiang Central Hospital were collected from February 1st to March 31st in HPV genotyping was performed,and the subtype distribution in different ages was analyzed. HPV pathogenicity on cervical cells was evaluated. Results There were positive samples,including 798 cases of single infection and 342 cases of multiple infection,and the infection rate was 22.6%. The infection rates were 29.5% in < 20-year-old group,21.0% in year-old group,21.7% in year-old group,21.7% in year-old group,30.0% in year-old group and 28.8% in >60-year-old group(p= ). The top 5 subtypes were type 16(17.0%),52(14.6%), 58(12.8%),54(8.2%)and 51(8.2%). The proportion of lesion atypical squamous cells of undetermined significance (ASCUS)in high-risk HPV group(hpv type 16 and 18)was higher than those in low-risk HPV group (other subtypes,except HPV type 16 and 18)and negative control group(p<0.05). Conclusions HPV infection rate in year-old group is the highest in Shanghai Songjiang. HPV type 16 or 18 is more likely to cause cervical cell lesion. HPV screening for high-risk population is helpful for the prevention and treatment of cervical cancer. Key words :Human papillomavirus ;Infection rate ;Subtype ;Age distribution ;Pathogenicity ;Songjiang 基金项目 : 上海市松江区科学技术攻关项目 (16SJGG45) 作者简介 : 黄路遥, 男,1984 年生, 学士, 主管技师, 主要从事分子生物学检验工作 通信作者 : 侯彦强, 联系电话 :

2 696 检验医学 2017 年 8 月第 32 卷第 8 期 Laboratory Medicine,August 2017,Vol. 32,No. 8 人乳头瘤病毒 (human papillomavirus, HPV) 是一种无包膜的双连闭环 DNA 病毒, 属乳多空病毒科乳头瘤病毒属 人乳头瘤病毒 主要由性行为传播, 人是其唯一的宿主 有研 究表明,HPV 感染可诱发多种肿瘤的发生, 如 结膜鳞状细胞癌 头颈部肿瘤 食管癌 乳腺 癌 宫颈癌 前列腺癌 阴茎癌等 [1] 目前有 200 多种 HPV 的基因型被确定, 其中 40 多种与宫 颈感染和病变相关 [2], 目前已知 HPV16 型 18 型 31 型 33 型 39 型 45 型 51 型 52 型 56 型 58 型 59 型和 68 型等属于高危型, 与宫 颈癌及宫颈上皮内瘤变的发生相关, 而 HPV6 型 11 型 42 型 43 型和 44 型等属于低危型, 与性传播疣和尖锐湿疣有关, 一般不诱发癌 变 [3] 本研究对上海市松江区不同年龄段妇女 HPV 的感染情况进行调查, 旨在为该地区的宫 颈癌防治提供依据 1 材料和方法 1.1 研究对象 2016 年 2 月 1 日 -3 月 31 日来上海市松江区中心医院妇科门诊就诊的患者 例, 年龄 (46.04±4.35) 岁 1.2 仪器及试剂 7500Real Time PCR System HPV 分型基因芯片检测阅读系统 HPV 分型检测试剂盒由港龙生物技术 ( 深圳 ) 有限公司提供, 试剂盒包括 DNA 提取液 聚合酶链反应 (polymerase chain reaction,pcr) 的反应液 Taq 酶 阴性质控品 阳性质控品 杂交中和液 变性液 洗液 A 洗液 B 洗液 C 显色液 A 显色液 B 酶标原液 基因芯片 1.3 样本采集与处理所有样本的采集均在非月经期进行, 被采集对象在 48 h 内没有性行为, 没有进行阴道冲洗或使用避孕药膏等阴道内使用的药物 采样前拭去宫颈口过多的分泌物, 将宫颈刷于宫颈口轻压并依顺时针方向旋转 3~4 周, 取得脱落细胞, 浸入盛有 1 ml 无菌生理盐水的样本管中, 充分漂洗, 并在操作前充分振荡混匀 1.4 HPV 的基因型检测采用港龙生物技术 ( 深圳 ) 有限公司生产的 HPV 分型检测试剂盒, 先对样本进行 DNA 抽 提, 然后将抽提的 DNA 在 7500Real Time PCR System 上扩增, 再将反向引物标记生物素的 PCR 扩增产物与固定在基因芯片上的 HPV DNA 探针杂交及酶标显色, 最后将杂交好的基因芯片放入 HPV 分型基因芯片检测阅读系统中进行图像扫描分析, 以确定 HPV 的基因型 1.5 鳞状上皮细胞病理分级与分析采用新柏氏液基薄层细胞学技术, 运用 Bethesda 系统以描述性分级报告方式进行细胞学诊断, 将宫颈细胞学结果分为未见上皮内病变 / 恶性肿瘤 (negative for intraepithelial lesion or malignancy,nilm) 非典型鳞状上皮细胞 (atypical squamous cells of undetermined significance,ascus) 低级别鳞状上皮内病变 (low-grade squamous intraepithelial lesion, LSIL) 高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion,hsil) 鳞状细胞癌 (squamous cell carcinoma,scc) 1.6 统计学方法采用 SPSS 14.0 软件进行统计分析, 率的比较采用 χ 2 检验或精确概率法, 以 P<0.05 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 HPV 的感染率在 例样本中 HPV 阳性 例, 阳性率为 22.6%, 其中单一感染 798 例, 多重感染 342 例 ( 二重感染 245 例 三重感染 74 例 四重感染 13 例 其他多重感染 10 例 ) 单一感染与多重感染之比为 , 在多重感染中, 以二重感染最为多见, 占多重感染的 71.6% 2.2 不同年龄组 HPV 的感染率将研究对象按年龄分组, 各年龄组 HPV 的感染率为 :<20 岁组 29.5%,21~30 岁组 21.0%, 31~40 岁组 21.7%,41~50 岁组 21.7%,51~60 岁组 30.0%,>60 岁组 28.8%, 各年龄组间差异有统计学意义 (χ 2 =24.669,P= ) <20 岁和 >50 岁妇女是 HPV 感染的高发人群 见表 HPV 感染的亚型分析在 例 HPV 阳性样本中共检出 HPV1 627 株, 其中高危型 株, 低危型 415 株, 感染率排在前 5 位的亚型分别为 16 型 (17.0%) 52 型 (14.6%) 58 型 (12.8%) 54 型 (8.2%) 和

3 697 表 1 不同年龄组 HPV 的感染率 年龄组别 ( 岁 ) 例数 阳性例数 阳性率 (%) < ~ ~ ~ ~ > 合计 型 (8.2%), 其中感染率排在前 5 位的高危型 亚型分别为 16 型 52 型 58 型 51 型和 33 型, 感染率前 5 位的低危型亚型分别为 54 型 6 型 55 型 40 型 11 型和 43 型 见表 2 表 2 HPV 感染亚型的分布 HPV 型别 例数 百分比 (%) 高危型 16 型 型 型 型 型 型 型 型 型 型 型 型 型 型 型 型 型 低危型 6 型 型 型 型 型 型 型 型 型 HPV16 型在人群中的分布 本研究共检出 HPV16 型 196 例, 其中单独感 染 112 例, 和其他亚型混合感染 84 例, 在各年龄 组的分布情况见表 3 表 3 HPV16 型在各年龄组中的分布 年龄组别 ( 岁 ) 例数阳性例数阳性率 (%) < ~ ~ ~ ~ > 合计 HPV 感染的宫颈细胞病理分析 表 4 各组 NILM ASCUS 病理结果的比较 组别例数 NILM ASCUS 阴性对照组 HPV 低危组 HPV 高危组 *# # P<0.05 注 : 与阴性对照组比较,*P<0.05; 与 HPV 低危组比较, 表 5 各组 NILM+ASCUS LSIL+HSIL+SCC 病理结果的比较 组别例数 NILM+ASCUS LSIL+HSIL+SCC 阴性对照组 HPV 低危组 HPV 高危组 *# #P<0.05 将 HPV 感染样本分为 HPV 低危组 ( 除 HPV16 型和 18 型以外的亚型 ) 和 HPV 高危组 (HPV16 型 和 18 型 ), 将 HPV 感染阴性样本设为阴性对照 组, 共收集 PHPV 高危组样本 132 例,HPV 低危 组样本 108 例, 阴性对照组样本 162 例, 由 2~3 位 病理医师对 3 组样本病理诊断的结果进行分析 结果显示,HPV 高危组 ASCUS 级别的病变明 显高于阴性对照组和 HPV 低危组 (P<0.05), HPV 低危组与阴性对照组间差异无统计学意义 (P>0.05) HPV 高危组 LSIL+HSIL+SCC 级 别的病变明显高于阴性对照组和 HPV 低危组 (P<0.05),HPV 低危组与对照组间差异无统计 学意义 (P>0.05) 见表 4 表 5 注 : 与阴性对照组比较,*P<0.05; 与 HPV 低危组比较,

4 698 检验医学 2017 年 8 月第 32 卷第 8 期 Laboratory Medicine,August 2017,Vol. 32,No. 8 3 讨论 宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤, 据统计 全球每年新发病例 (40~50) 万例, 我国每年 新发病例约为 13 万例, 占全球女性宫颈癌新发 病例的 1/3 HPV 感染是宫颈癌和癌前病变的 主要病因,90% 以上的宫颈上皮内瘤样病变和 宫颈癌组织能检出 HPV 有研究发现, 约 70% 具有侵袭性或恶性程度高的宫颈癌由 HPV16 型 和 18 型引起, 所以认为感染 HPV16 型和 18 型的 妇女是宫颈癌发病的高危人群, 其他高危型如 皮肤高危型与疣状表皮发育不良及其他恶性肿 瘤如外阴癌 阴茎癌等有关 [4-6] 据文献报道, 在我国宫颈癌的高发地区,HPV 的感染率为 10%~20%, 而在宫颈癌的低发地区,HPV 的感 染率为 5%~10% [7] 本研究统计的是来上海市 松江区中心医院就诊的患者,HPV 的感染率为 22.6% 这主要是因为来上海市松江区中心医院 就诊的妇女多已有临床症状, 所以 HPV 的感染 率比正常人群高 HPV 的感染率有比较明显的年龄分布特 点, 有研究显示, 发展中国家 HPV 感染的年 龄组别分布呈 U 型曲线, 而发达国家 HPV 感染 高峰通常出现在 25 岁以下, 并随年龄的增加 而下降 [8-9] 本研究统计 <20 岁人群的感染率为 29.5%,21~30 31~40 41~50 岁组的感染率 基本接近, 约为 21.0%,51 岁以上组感染率上升 至 30.0% 左右, 形成感染率的 2 个高峰, 与 U 型分 [10] 布相符 SELLORS 等的研究显示, 在 HPV 感 染的第 1 个年龄高峰期中, 初次性生活年龄 <20 岁以及没有固定的性伙伴是感染的主要原因, 而第 2 个高峰则考虑为女性既往感染 HPV 后病 毒潜伏, 随着年龄的增长, 机体免疫力下降, 病毒再次被激活而引起感染所致 [10] 与发达国 家不同的是, 在本研究中,<20 岁和 >60 岁组的 HPV 感染率高并不能代表松江区该年龄段妇女 的感染率, 因为这 2 个年龄段的就诊患者往往是 出现某些妇科临床症状才会就诊, 不同于有妇 科筛查意识的 20~50 岁年龄段妇女 有文献报道 HPV 感染以单一感染为主, 单一感染与多重感染的比例约为 3 1 [11] 在 本研究中,HPV 单一感染与多重感染之比为 , 与文献报道接近 在多重感染中, 以 二重感染为主, 二重感染占多重感染的 71.6% 已有研究表明,HPV 单一感染使宫颈癌的患病 风险增加 19.9 倍, 而多重感染会使宫颈癌患病风 险增加 31.8 倍, 且多重感染病毒载量更高, 患宫 颈癌的风险更高 [12-14] 从正常的宫颈发展为宫颈上皮内瘤样病 变, 再发展为浸润癌是一个连续的长期的过 程 一般来说,HPV 感染 8~12 个月后可发展 为宫颈上皮内瘤样病变, 再经过 8~12 年可发展 为宫颈癌, 只有持续的 HPV 感染才有可能发展 为宫颈上皮内瘤样病变或宫颈癌 高危 HPV16 型 18 型与宫颈癌关系密切,HPV16 型与宫颈 鳞癌有关,HPV18 型与宫颈腺癌有关 HPV16 型和 18 型混合感染的致病性更强, 目前在所收 集的病例中 HPV16 型或 18 型单独感染的病例也 较多, 相关研究发现单独 HPV16 型感染也具 有较强的致病性 [15] WU 等 [16] 研究发现 HPV16 型在宫颈癌中占主导地位, 随着恶性程度升高 HPV16 型感染率也增加, 而 HPV18 型在癌前病 变患者中感染率较低, 但在宫颈癌患者中的感 [17] 染率增加 SMITH 等研究发现, 基底宫颈上 皮细胞感染高危 HPV16 型及其 E6/7 蛋白的累积表 达导致了宫颈 SCC 的发生, 说明 HPV16 型单独感 染具有较强的致病性 本研究提示, 与其他亚 型相比,HPV16 型 18 型对宫颈细胞具有更强 的致病作用, 更容易导致宫颈细胞癌变 目前 世界范围内感染率最高的基因型是 HPV16 型, HPV16 型也被认为是与宫颈癌和癌前病变相关 的致癌性最高的型别 >40 岁的妇女是宫颈癌的 高发人群, 因此对适龄女性定期进行 HPV 筛查 对宫颈癌的防治具有重要的意义 [1] [2] 参考文献 NO J H,KIM M K,JEON Y T,et al. Human papillomavirus vaccine:widening the scope for cancer prevention[j]. Mol Carcinog,2011,50 (4): HEARD I,TONDEUR L,AROWAS L,et al. Human papillomavirus types distribution in organised

5 699 cervical cancer screening in France[J]. PLoS One, [10] S E L L O R S J W, K A RWA L A J T Y S T L, 2013,8(11):e KACZOROWSKI J A,et al. Prevalence of infection [3] SERRANO B,DE SANJOSÉ S,TOUS S,et al. with carcinogenic human papillomavirus among older Human papillomavirus genotype attribution for HPVs women[j]. CMAJ,2002,167(8): ,11,16,18,31,33,45,52 and 58 in female [11] 姜丹, 叶劲东, 张晓平, 等. 深圳市万名流动妇女 anogenital lesions[j]. Eur J Cancer,2015,51 HPV 感染现状分析 [J]. 中国公共卫生管理,2012, (13): (6): [4] [5] [6] [7] [8] [9] HARIRI S,UNGER E R,POWELL S E,et al. Human papillomavirus genotypes in high-grade cervical lesions in the United States[J]. J Infect Dis, 2012,206(12): NICCOLAI L M,RUSS C,JULIAN P J,et al. Individual and geographic disparities in human papillomavirus types 16/18 in high-grade cervical lesions:associations with race,ethnicity,and poverty[j]. Cancer,2013,119(16): VIDAL A C,SMITH J S,VALEA F,et al. HPV genotypes and cervical intraepithelial neoplasia in a multiethnic cohort in the southeastern USA[J]. Cancer Causes Control,2014,25(8): 赵方辉, 戎寿德, 乔友林, 等. 山西省襄垣县妇女人乳头瘤病毒感染与宫颈癌关系的研究 [J]. 中华流行病学杂志,2001,22(5): OGEMBO R K,GONA P N,SEYMOUR A J, et al. Prevalence of human papillomavirus genotypes among African women with normal cervical cytology and neoplasia:a systematic review and metaanalysis[j]. PLoS One,2015,10(4):e HOLL K,NOWAKOWSKI A M,POWELL N, et al. Human papillomavirus prevalence and typedistribution in cervical glandular neoplasias:results from a European multinational epidemiological study[j]. Int J Cancer,2015,137(12):2858- [12] [13] [14] [15] [16] [17] LEE S A,KANG D,SEO S S,et al. Multiple HPV infection in cervical cancer screened by HPV DNA chip[j]. Cancer Lett,2003,198(2): 范文生, 李亚里, 杨怡卓, 等. 基因芯片技术检测宫颈病变中 HPV 感染的临床研究 [J]. 中华医院感染学杂志,2009,19(7): ZHAO R,ZHANG W Y,WU M H,et al. Human papillomavirus infection in Beijing,People' Republic of China:a population-based study[j]. Br J Cancer, 2009,101(9): LI Y,WANG X,NI T,et al. Human papillomavirus type 58 genome variations and RNA expression in cervical lesions[j]. J Virol,2013,87(16): WU Z,QIN Y,YU L,et al. Association between human papillomavirus(hpv)16,hpv18, and other HR-HPV viral load and the histological classification of cervical lesions:results from a largescale cross-sectional study[j]. J Med Virol,2017,89 (3): SMITH S P,SCARPINI C G,GROVES I J,et al. Identification of host transcriptional networks showing concentration-dependent regulation by HPV16 E6 and E7 proteins in basal cervical squamous epithelial cells[j]. Sci Rep,2016,6: ( 收稿日期 : ) ( 本文编辑 : 姜敏 )

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