14 临床与病理杂志, 218, 38(7) Keywords and 126 cervical biopsy tissue samples. Results: ositive rates of immunostaining for MCM2 on

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1 临床与病理杂志 J Clin athol Res 218, 38(7) doi: /j.issn View this article at: MCM2 与 16 在子宫颈病变细胞蜡块与活检标本中的表达左元元, 徐洪明, 黄建达, 毛海峰, 孙岳军 ( 江阴市人民医院病理科, 江苏江阴 2144) [ 摘要 ] 目的 : 探讨微型染色体维持蛋白 2(minichromosome maintenance protein 2,MCM2) 及 16 在子宫颈病变细胞蜡块及组织学标本中的表达方法 : 采用免疫组织化学染色 EnVision 法检测 118 例宫颈液基细胞学细胞蜡块,126 例宫颈活检组织中 MCM2 及 16 的表达结果 : 在无上皮内病变或恶性病变 (no intraepithelial or malignant lesions,nilm), 意义不明的非典型鳞状细胞 (atypical squamous cells with unclear significance,acs-us), 低度鳞状上皮内病变 (low degree squamous intraepithelial lesion,lsil), 非典型鳞状细胞, 不能排除高度鳞状上皮内病变 (atypical squamous cells, cannot exclude high-grade squamous intraepithelial lesion,asc-h) 及高度鳞状上皮内病变 (high degree squamous intraepithelial lesion,hsil) 的细胞蜡块样本中,MCM2 的阳性率分别为 %,22%,55%,86% 和 92%,16 的阳性率分别为 %,9%,27%,68% 和 1%, 差异有统计学意义 (<.1); 在宫颈上皮内瘤变 1 级 (cervical intraepithelial neoplasia grade 1,CIN1),CIN2, CIN3 和宫颈癌组织样本中,MCM2 的阳性率分别为 %, 5%, 81%, 97% 和 1%, 16 阳性率分别为 %,18%,77%,1% 和 1%, 差异有统计学意义 (<.1); 在人乳头瘤状病毒 (human papillomavirus,hv)16/18 感染, 其他高危型 HV 感染以及无 HV 感染的病例中,MCM2 的阳性率分别为 86%,36% 和 8%,16 的阳性率分别为 89%,14% 和 %, 差异有统计学意义 (<.1) 结论 :MCM2 和 16 与宫颈病变程度高度相关, 可用于非典型鳞状上皮细胞及低度鳞状上皮内病变人群的分流管理 [ 关键词 ] 微型染色体维持蛋白 2;16; 宫颈病变 ; 细胞蜡块 Expression of MCM2 and 16 in cell block and biopsy samples of cervical lesion ZUO Yuanyuan, XU Hongming, HUANG Jianda, MAO Haifeng, SUN Yuejun (Department of athology, Jiangyin eople s Hospital, Jiangyin Jiangsu 2144, China) Abstract Objective: To determine the expression of minichromosome maintenance protein 2 (MCM2) and 16 protein in cell block and tissue samples of cervical lesion. Methods: Immunohistochemical EnVision method was employed to investigate the expression of MCM2 and 16 in 118 cell blocks of liquid-based cytology of cervical screening 收稿日期 (Date of reception): 通信作者 (Corresponding author): 孙岳军, syj996633@126.com 基金项目 (Foundation item): 江阴市科技局社会发展科技示范项目 ( JYKJ338) This work was supported by the Jiangyin Municipal Transformation of Scientific and Technological Achievements roject, China ( JYKJ338).

2 14 临床与病理杂志, 218, 38(7) Keywords and 126 cervical biopsy tissue samples. Results: ositive rates of immunostaining for MCM2 on no intraepithelial or malignant lesions (NILM), atypical squamous cells with unclear significance (ACS-US), low degree squamous intraepithelial lesion (LSIL), atypical squamous cells, cannot exclude high-grade squamous intraepithelial lesion (ASC-H), high degree squamous intraepithelial lesion (HSIL) in cell block samples were %, 22%, 55%, 86%, and 92%, while positive rates of 16 were %, 9%, 27%, 68%, and 1%, with significant difference (<.1). ositive rates of MCM2 in the normal cervical epithelia, cervical intraepithelial neoplasia grade 1 (CIN1) group, CIN2 group, CIN3 group and cervical carcinoma were %, 5%, 81%, 97%, and 1% prespectively; while positive rates of 16 were %, 18%, 77%, 1%, and 1%, with significant difference (<.1). ositive rate of MCM2 were 86%, 36% and 8% in human papillomavirus (HV) 16/18 group, other high-risk HV group and HV negative group, while positive rates of 16 were 89%, 14%, and %, with significant difference (<.1). Conclusion: The expression of MCM2 and 16 is correlated with increased dysplasia and lesion severity and could triage effectively in patients with atypical squamous cells of undetermined signification (ASCUS) and low grade squamous intraepithelial lesion (LSIL). minichromosome maintenance protein 2; 16; cervical lesion; cell block 宫颈癌是威胁女性健康和生命的常见恶性肿瘤之一目前, 宫颈癌的筛查通常采用宫颈搔刮, 再使用薄层液基细胞学检测 (thinprep cytologic test, TCT) 制备细胞学压片, 对结果进行人工判读如果发现病变细胞, 则要进行阴道镜检查因此,TCT 结果判读至关重要但在常规工作中常见到难以明确诊断的细胞学形态, 而宫颈组织病变的免疫染色可以辅助诊断微小染色体维持蛋白 2(minichromosome maintenance protein 2, MCM2) 与 16 表达的检测结果可能有助于对患者进行分流管理本实验采用免疫组织化学 EnVision 法, 拟探讨 MCM2 及 16 在子宫颈病变细胞蜡块及组织学标本中的表达 1 材料与方法 1.1 材料收集 215 年 1 月至 217 年 8 月江阴市人民医院病理科的宫颈液基细胞学样本 118 例, 并制备细胞蜡块, 同时选取归档的宫颈组织活检样本 126 例样本均有明确的病理诊断结果本研究经过江阴市人民医院伦理委员会审核批准 1.2 方法细胞蜡块制备 TCT 样品倒入 5 ml 离心管,2 r/min, 5 min 离心 ; 弃上清, 加入 1% 中性缓冲甲醛溶液,2 r/min,5 min 离心 ; 静置过夜 ; 吸管将细胞沉淀轻轻吸起, 移入包埋纸, 打包, 放入包埋盒, 脱水过夜, 常规包埋切片免疫组织化学染色采用 EnVision 免疫组织化学两步法染色 : 4 μm 厚切片经脱蜡, 水化后, 行高温高压抗原修复 (1% 柠檬酸盐抗原修复缓冲液,pH 6.; 每张切片滴加 5 μl 一抗,4 孵育过夜,BS 冲洗 ; 每张切片滴加 5 μl EnVision 试剂, 室温下孵育 3 min; BS 冲洗,DAB 显色, 苏木精衬染, 脱水透明后中性树胶封片, 镜检一抗 : 小鼠抗人 MCM2 单克隆抗体 ( 克隆号 : UMAB238, 稀释度 :1: 2) 即用型小鼠抗人 p16ink4a( 克隆号 :ABM511-1) 购自北京中杉金桥生物技术有限公司二抗 :HR 标记的鼠兔通用型二抗购自美国 Roche 公司,DAB 显色液购自丹麦 DAKO 公司高危人乳头状瘤病毒检测采集宫颈分泌物样本, 通过实时荧光定量 CR 法, 采用针对 13 种人高危乳头状瘤病毒 (16,18, 31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68) 的特异性引物及荧光探针, 对 13 种特异性 DNA 片段进行定性检测 1.3 判读标准 MCM2 阳性定位于细胞核,16 阳性定

MCM2 与 16 在子宫颈病变细胞蜡块与活检标本中的表达左元元, 等 141 位于细胞核伴或不伴细胞质阳性计数 1 个高倍视野, 计算平均阳性细胞数,

9%; 在鳞状上皮内低度病变中的阳性率分别为 55% 和 27%; 在非典型鳞状上皮细胞不除外鳞状上皮内高度病变中阳性率分别为 86% 和 68%;

1, 表 1, 图 1) 表 1 MCM2 和 16 在细胞蜡块中的表达 Table 1 Expression of MCM2 and 16 in cell

2118 <.1 16 6 ASC-H 28 4 24 9 19 HSIL 24 2 22 24 67.8913 <.

3 MCM2 与 16 在子宫颈病变细胞蜡块与活检标本中的表达左元元, 等 141 位于细胞核伴或不伴细胞质阳性计数 1 个高倍视野, 计算平均阳性细胞数, 按阳性细胞所占比例分为 :<1%( ), 1%~25%(1+), 26%~5%(2+), 51%~1%(3+), 1+ 及其以上判读为阳性 1.4 统计学处理采用 Stata 14. 统计软件进行数据分析采用检验或 Fisher 确切概率法分析 MCM2 及 16 免疫组织化学染色在各临床病理参数之间的表达差异 <.5 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 MCM2 与 16 在宫颈病变细胞蜡块中的表达 MCM2 和 16 在无宫颈上皮内瘤变细胞蜡块中不表达, 在非典型鳞状上皮细胞中的阳性率分别为 22% 和 9%; 在鳞状上皮内低度病变中的阳性率分别为 55% 和 27%; 在非典型鳞状上皮细胞不除外鳞状上皮内高度病变中阳性率分别为 86% 和 68%; 在鳞状上皮内高度病变中的阳性率为 92% 和 1%, 差异有统计学意义 ( <.1, 表 1, 图 1) 表 1 MCM2 和 16 在细胞蜡块中的表达 Table 1 Expression of MCM2 and 16 in cell blocks 组别 n MCM2 16 阴性阳性阴性阳性 NILM ACS-US LSIL < ASC-H HSIL <.1 A B C D E F 图 1 16 与 MCM2 在细胞蜡块中的表达 (EnVision, 4) Figure 1 Expression of MCM2 and 16 in cell blocks (EnVision, 4) (A) NILM 中的 16;(B) NILM 中的 MCM2;(C) LSIL 中的 16;(D) LSIL 中的 MCM2;(E) HSIL 中的 16;(F) HSIL 中的 MCM2 (A) 16 in NILM; (B) MCM2 in NILM; (C) 16 in LSIL; (D) MCM2 in LSIL; (E) 16 in HSIL; (F) MCM2 in HSIL.

临床与病理杂志, 218, 38(7) http://lcbl.amegroups.com 142 2.

1 级 (ce r v i c a l i n t rae p i t h e l i a l neoplasia

% 和 7 7 % 在 CIN3中阳性率分别为97%和 1% 在宫颈癌中全部阳性表达差异有统计学意义( <.

and 16 in cervical tissue sample MCM2 组别 n 炎症 17 17 低度病变 28

1 16 阴性阳性 17 23 5 7 58 16 A B C D E F G H χ2 81.7315 <.

MCM2 and 16 in cervical tissue samples (EnVision, 4)

(E)宫颈HSIL中的16 (F)宫颈HSIL中的MCM2 (G)宫颈浸润性鳞癌中的16 (H)宫颈浸润性鳞癌中的16

inflammation; (C) 16 in LSIL; (D) MCM2 in LSIL; (E) 16 in

4 临床与病理杂志, 218, 38(7) MCM2 与 16 在宫颈组织学中的表达 MCM2和16在炎性病变的宫颈组织中不表达在宫颈上皮内瘤变 1 级 (ce r v i c a l i n t rae p i t h e l i a l neoplasia grade 1 CIN1) 中的阳性率分别为5%和 1 8 % 在 CI N 2 中的阳性率分别为 8 1 % 和 7 7 % 在 CIN3中阳性率分别为97%和 1% 在宫颈癌中全部阳性表达差异有统计学意义( <.1 表2 图2) 表2 MCM2和16在宫颈组织学样本中的表达 Table 2 Expression of MCM2 and 16 in cervical tissue sample MCM2 组别 n 炎症低度病变高度病变宫颈癌阴性阳性 χ <.1 16 阴性阳性 A B C D E F G H χ <.1 图2 16与MCM2在宫颈组织样本中的表达(EnVision 4) Figure 2 Expression of MCM2 and 16 in cervical tissue samples (EnVision, 4) (A)宫颈炎症中的16 (B)宫颈炎症中的MCM2 (C)宫颈LSIL中的16 (D)宫颈LSIL中的MCM2 (E)宫颈HSIL中的16 (F)宫颈HSIL中的MCM2 (G)宫颈浸润性鳞癌中的16 (H)宫颈浸润性鳞癌中的16 (A) 16 in cervical inflammation; (B) MCM2 in cervical inflammation; (C) 16 in LSIL; (D) MCM2 in LSIL; (E) 16 in HSIL; (F) MCM2 in HSIL; (G) 16 in cervical invasive squamous cell carcinoma; (H) MCM2 in cervical invasive squamous cell carcinoma.

5 MCM2 与 16 在子宫颈病变细胞蜡块与活检标本中的表达左元元, 等 MCM2 与 16 的表达与 HV 感染的相关性 MCM2 和 16 在 HV16 和 HV18 阳性的标本中阳性率分别为 86% 和 89%; 在其他类型的 HV 感染样本中阳性率为 36% 和 14%; 在无 HV 感染的样本中阳性率分别为 8% 和 %, 差异有统计学意义 (<.1, 表 3) 2.4 MCM2 与 16 表达的相关性 MCM2 与 16 在细胞蜡块 (r=.6437,<.1) 和组织学样本 (r=.7447,<.1) 中均有显著相关性表 3 MCM2 和 16 的表达与 HV 感染的相关性 Table 3 Correlation of the expression of MCM2 and 16 with HV infection 组别 n MCM2 16 阴性阳性阴性阳性 HV16/ HV 其他高危型 < 无 HV 感染 <.1 3 讨论宫颈 TCT 是一种十分有效的宫颈癌筛查方法尽管如此, 在某些病例, 如非典型鳞状上皮或者鳞状上皮内低度病变中, 仍有一定的局限性 [1] [2-4] 最近, 国外一些检测指南推荐采用 HV 检测及细胞学分流作为宫颈癌筛查的首选方案 : 如果检测 HV16 或 HV18 阳性, 无论是否有细胞学阳性结果均需要做阴道镜检查 ; 如果出现其他型 HV 感染且细胞学阴性, 则需在 1 年后复查这种筛查方法避免了检测结果为非典型鳞状上皮细胞的人群做阴道镜检查的必要但如何对鳞状上皮内低度病变的人群进行分流, 目前尚未有明 [5] 确的结论有研究采用免疫组织化学染色检测 CK7 的表达, 以分流鳞状上皮内低度病变人群但 CK7 的阳性判读标准较难掌握, 且国内缺乏相关数 [6] 据有研究认为 : 在 HV 阴性的病例中,16 能有效明确是否存在鳞状上皮内高度病变国内一 [7] 项研究表明 :16/MCM2 双染色比细胞学更为敏感, 且比 HV 检测更具特异性因此, 本研究单独采用 MCM2 及 16 染色, 检测在宫颈病变标本中的表达差异, 并探讨与 HV 检测结果的相关性 MCM 在细胞周期中形成 DNA 复制前复合物, 启动 DNA 复制, 是所有真核细胞 DNA 复制所必须的 MCM 家族蛋白中共 6 个成员, 分别 [8] 为 MCM2~7 Osaki 等研究发现 : 与常用的细胞增殖标记 Ki-67 和增殖细胞核抗原 (proliferating cell nuclear antigen,cna) 相比,MCM2 能更准确地反映细胞增殖情况由于 MCM2 与拓扑异构酶 IIa(topoisomerase IIα, TO2A) 均可在 HV 感 [9-1] 染的异常 S 期细胞中表达, 有研究将 MCM2 与 TO2A 制作成鸡尾酒抗体 roex C, 用于检测 [9] 宫颈上皮病变 Ge 等通过检测 25 例细胞蜡块发现 : 在 roex C 宫颈高度病变及小细胞癌中呈弥漫 [1] 强阳性, 在宫颈低度病变中不表达也有研究显示 : 在 CIN2 以上的病变中, 随着病变程度的加重,roEx C 的阳性率增加 ; 且在 CIN3 以上的病例中,roEx C 的敏感性优于 16 Zheng [11] 对 183 例液基细胞学样本直接进行 MCM2 染色, 发现 MCM2 阳性率随宫颈病变程度加重而增加, 并与 HV 类型有关本研究对 118 例宫颈液基细胞蜡块及 126 例宫颈活检样本进行 MCM2 免疫染色发现 :MCM2 在无宫颈上皮内瘤变细胞蜡块及正常宫颈组织中不表达, 在宫颈癌中全部表达, 并随着病变程度的加重, 其阳性率增加 MCM2 更易在 HV16 和 [1] HV18 感染的样本中表达与既往研究的结论一致提示 MCM2 单独染色可作为宫颈病变分级的参考标志物之一 16 是一种细胞周期依赖性激酶抑制性蛋白, 在 HV 感染的细胞中过表达在视网膜母细胞瘤蛋白失活的情况下,16 可下调 CDK4 和 CDK6 的 [12-13] 活性, 组织细胞由 G1 期进入 S 期研究显示 : 16 是对宫颈癌前病变进行分级以及低级别上皮 [14] 内瘤变患者分流的一个有效标志物 Wong 等对 57 例液基细胞样本进行 16 染色发现 :16 总阳性率为 63.2%, 在 CIN2 及以上的病变中敏感性和特 [15] 异性分别为 93.5% 和 6% Kanthiya 等通过检测 234 例宫颈组织发现 :16 在侵袭性癌中的阳性率为 91.3%, 在 CIN2/3 中阳性率为 78.7%, 在 CIN1 中阳性率为 1.4% 同时本研究结果显示 : 在宫颈癌

6 144 临床与病理杂志, 218, 38(7) 中,16 均呈阳性表达, 并随着宫颈病变程度的加重, 其阳性率增加 ;16 的表达与高危型 HV 感染, 尤其是 HV16/18 的感染具有相关性综上所述,MCM2 与 16 高表达于 CIN2 以上的病变中, 其阳性率随宫颈癌前病变程度加重而增加, 并与 HV 感染相关因此,MCM2 和 16 在宫颈病变的鉴别诊断中具有一定的应用价值参考文献 1. Wright TC Jr, Cox JT, Massad LS, et al. 21 consensus guidelines for the management of women with cervical cytological abnormalities[ J]. JAMA, 22, 287(16): Saslow D, Solomon D, Lawson HW, et al. American Cancer Society, American Society for Colposcopy and Cervical athology, and American Society for Clinical athology screening guidelines for the prevention and early detection of cervical cancer[ J]. Am J Clin athol, 212, 137(4): Rossi G, Ferroni E, Barca A, et al. Quality appraisal of documents producing recommendations for breast, colorectal and cervical cancer screening[ J]. Epidemiol Biostat ublic Health, 214, 11(3): e Wright TC, Stoler MH, Behrens CM, et al. rimary cervical cancer screening with human papillomavirus: end of study results from the ATHENA study using HV as the first-line screening test[ J]. Gynecol Oncol, 215, 136(2): Mills AM, aquette C, Terzic T, et al. CK7 immunohistochemistry as a predictor of CIN1 progression: a retrospective study of patients from the quadrivalent HV vaccine trials[ J]. Am J Surg athol, 217, 41(2): Zhang G, Yang B, Abdul-Karim FW. p16 immunohistochemistry is useful in confirming high-grade squamous intraepithelial lesions (HSIL) in women with negative HV testing[ J]. Int J Gynecol athol, 215, 34(2): 王海瑞, 廖光东, 江宇, 等. p16/mcm2 双染在宫颈上皮内瘤变的诊断价值及其与高危型 HV 感染的关系 [ J]. 中华流行病学杂志, 217, 38(9): WANG Hairui, LIAO Guangdong, JIANG Yu, et al. Diagnostic value of p16/mcm2 dual staining in cervical intraepithelial neoplasia and its association with high-risk HV infection[ J]. Chinese Journal of Epidemiology, 217, 38(9): Osaki M, Osaki M, Yamashita H, et al, 1Expression of minichromosome maintenance-2 in human malignant fibrous histiocytomas: correlations with Ki-67 and 53 expression, and apoptosis[ J]. Int J Mol Med, 22, 1(2): Ge Y, Mody DR, Smith D, et al. p16(ink4a) and roex C immunostains facilitate differential diagnosis of hyperchromatic crowded groups in liquid-based apanicolaou tests with menstrual contamination[ J]. Acta Cytol, 212, 56(1): Guo M, Baruch AC, Silva EG, et al. Efficacy of p16 and roexc immunostaining in the detection of high-grade cervical intraepithelial neoplasia and cervical carcinoma[ J]. Am J Clin athol, 211, 135(2): Zheng J. Diagnostic value of MCM2 immunocytochemical staining in cervical lesions and its relationship with HV infection[ J]. Int J Clin Exp athol, 215, 8(1): Denton KJ, Bergeron C, Klement, et al. The sensitivity and specificity of p16(ink4a) cytology vs HV testing for detecting high-grade cervical disease in the triage of ASC-US and LSIL pap cytology results[ J]. Am J Clin athol, 21, 134(1): Roelens J, Reuschenbach M, von Knebel Doeberitz M, et al. p16ink4a immunocytochemistry versus human papillomavirus testing for triage of women with minor cytologic abnormalities: a systematic review and meta-analysis[ J]. Cancer Cytopathol, 212, 12(5): Wong Y, Abdul Raub SH, Mohd Dali AZ, et al. 16INK4a: a potential diagnostic adjunct for prediction of high-grade cervical lesions in liquid-based cytology: with HV testing and histological correlation[ J]. Malays J athol, 216, 38(2): Kanthiya K, Khunnarong J, Tangjitgamol S, et al. Expression of the p16 and Ki-67 in cervical squamous intraepithelial lesions and cancer[ J]. Asian ac J Cancer rev, 216, 17(7): 本文引用 : 左元元, 徐洪明, 黄建达, 毛海峰, 孙岳军. MCM2 与 16 在子宫颈病变细胞蜡块与活检标本中的表达 [ J]. 临床与病理杂志, 218, 38(7): doi: /j.issn Cite this article as: ZUO Yuanyuan, XU hongming, HUANG Jianda, MAO Haifeng, SUN Yuejun. Expression of MCM2 and 16 in cell block and biopsy samples of cervical lesion[ J]. Journal of Clinical and athological Research, 218, 38(7): doi: / j.issn

戊酸雌二醇片联合宫颈注射利多卡因用于绝经后妇女取环的临床效果评价陆琴芬, 等 371 Keywords groups, no removal difficulties and failure, was statistically s

戊酸雌二醇片联合宫颈注射利多卡因用于绝经后妇女取环的临床效果评价陆琴芬, 等 371 Keywords groups, no removal difficulties and failure, was statistically s 370 临床与病理杂志 J Clin Pathol Res 2015, 35(3) http://www.lcbl.net doi: 10.3978/j.issn.2095-6959.2015.03.009 View this article at: http://dx.doi.org/10.3978/j.issn.2095-6959.2015.03.009 戊酸雌二醇片联