90 筛选的顶孢霉 Ahy1 菌株分生孢子制剂有可湿性粉 [6] [7] 剂 乳悬剂 近年来随着有机食品需求越来越大, 蔬菜大棚应用越来越广泛, 筛选一种更适用于温室大棚环境的顶孢霉分生孢子制剂对温室蔬菜害虫的绿色防控有重要意义 微粉剂以单一粒子在空间悬浮 扩散, 可均匀附着在作物上 平均粒径在 5
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1 犘犾犪狀狋犘狉狅狋犲犮狋犻狅狀 顶孢霉犃犺狔 1 菌株微粉剂的配方筛选 郝雨, 杨顺义, 沈慧敏, 张新虎, 陈娥 ( 甘肃农业大学草业学院, 草业生态系统省部共建教育重点实验室, 中美草地畜牧业可持续发展中心, 兰州 ) 摘要采用室内生物测定的方法, 从 6 种载体 6 种分散剂 5 种黏着剂 5 种紫外保护剂中筛选适宜于顶孢霉 Ahy1 孢子粉微粉剂的助剂 结果表明, 载体硅藻土 紫外线保护剂荧光素钠和腐植酸 分散剂木质素磺酸钠 ( 或钙 ) 黏着剂羧甲基纤维素对顶孢霉孢子的生物活性无显著影响 用以上助剂加工的 20% 顶孢霉孢子粉微粉剂, 孢子含量为 个 /g, 干燥减量为 4.36%, 孢子萌发率为 90.23%, 比重为 0.37g/cm 3, 颗粒细度过 200 目筛, 粉粒直径约为 74μm,5 下贮藏 6 个月后孢子萌发率为 80%, 符合真菌农药粉剂国家标准 ( 标准号 GB/T ), 在微粉细度上符合制剂标准 关键词顶孢霉 ; 孢子粉 ; 粉剂 ; 载体 ; 分散剂 ; 黏着剂 ; 紫外保护剂中图分类号 : S 文献标识码 : A 犇犗犐 : /j.issn 犛犮狉犲犲狀犻狀犵犳狅狉狋犺犲犳狅狉犿狌犾犪狅犳犿犻犮狉狅犵狉犪狀狌犾犲狅犳犃犮狉犲犿狅狀犻狌犿犺犪狀狊犳狅狉犱犻犮狅狀犻犱犻犪 犎犪狅犢狌, 犢犪狀犵犛犺狌狀狔犻, 犛犺犲狀犎狌犻犿犻狀, 犣犺犪狀犵犡犻狀犺狌, 犆犺犲狀犈 ( 犘狉犪狋犪犮狌犾狋狌狉犪犾犆狅犾犲犵犲狅犳犌犪狀狊狌犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犓犲狔犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔狅犳犌狉犪狊犾犪狀犱犈犮狅狊狔狊狋犲犿犈犱狌犮犪狋犻狅狀犕犻狀犻狊狋狉狔 ; 犜犺犲犛犻狀狅 犝犛犆犲狀狋犲狉狊犳狅狉犌狉犪狕犻狀犵犾犪狀犱犈犮狅狊狔狊狋犲犿犛狌狊狋犪犻狀犪犫犻犾犻狋狔, 犔犪狀狕犺狅狌 , 犆犺犻狀犪 ) 犃犫狊狋狉犪犮狋犜犺狉狅狌犵犺犫犻狅犾狅犵犻犮犪犾犪狊犪狔狊犻狀狋犺犲犾犪犫狅狉犪狋狅狉狔, 犪犱犱犻狋犻狏犲犪犵犲狀狋狊犪狀犱犳狅狉犿狌犾犪狋犻狅狀犳狅狉犿犻犮狉狅狆狅狑犱犲狉狅犳犃犮狉犲 犿狅狀犻狌犿犺犪狀狊犳狅狉犱犻犮狅狀犻犱犻犪狑犲狉犲狊犲犾犲犮狋犲犱犳狉狅犿狊犻狓犮犪狉狉犻犲狉狊, 狊犻狓犱犻狊狆犲狉狊犻狀犵犪犵犲狀狋狊, 犳犻狏犲犪犵犵犾狌狋犻狀犪狀狋狊犪狀犱犳犻狏犲狌犾狋狉犪狏犻 狅犾犲狋狆狉狅狋犲犮狋狅狉狊. 犜犺犲狉犲狊狌犾狋狊犻狀犱犻犮犪狋犲犱狋犺犪狋狋犺犲犱犻犪狋狅犿犻狋犲 ( 犮犪狉狉犻犲狉 ), 狊狅犱犻狌犿犳犾狌狅狉犲狊犮犲犻狀犪狀犱犺狌犿犻犮犪犮犻犱狊 ( 犝犞狆狉狅 狋犲犮狋犪狀狋 ), 狊狅犱犻狌犿犾犻犵狀狅狊狌犾犳狅狀犪狋犲狅狉犮犪犾犮犻狌犿犾犻犵狀狅狊狌犾犳狅狀犪狋犲 ( 犱犻狊狆犲狉狊犻狀犵犪犵犲狀狋 ) 犪狀犱犮犪狉犫狅狓狔犿犲狋犺狔犾犮犲犾狌犾狅狊犲 ( 犪犵犵犾狌狋犻 狀犪狀狋 ) 犺犪犱犾犻狋犾犲犲犳犲犮狋狅狀犃. 犺犪狀狊犳狅狉犱犻犮狅狀犻犱犻犪. 犜犺犲狇狌犪犾犻狋狔犻狀犱犻犮犪狋狅狉狊狑犲狉犲犪狊犳狅犾狅狑犲犱 :20% 犿犻犮狉狅犵狉犪狀狌犾犲狅犳犃. 犺犪狀狊犳狅狉犱犻犮狅狀犻犱犻犪, 犮狅狀犻犱犻犪狀狌犿犫犲狉狅犳 犮狅狀犻犱犻犪 / 犵, 犾狅狊犳狉狅犿犱狉狔犻狀犵犫狔 4.36%, 犮狅狀犻犱犻犪犾犵犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狉犪狋犲狅犳 90.23%, 犫狌犾犽犱犲狀狊犻狋狔狅犳 0.37 犵 / 犮犿 3, 犵狉犪狀狌犾犲犳犻狀犲狀犲狊狅犳狆犪狊犻狀犵狋犺狉狅狌犵犺犪 200 犿犲狊犺狊犻犲狏犲, 犵狉犪狀狌犾犲狅犳犪 犫狅狌狋 74μ 犿犻狀犱犻犪犿犲狋犲狉, 犮狅狀犻犱犻犪犾犵犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狉犪狋犲狅犳 80% 犪犳狋犲狉狊狋狅狉犲犱犳狅狉 6 犿狅狀狋犺狊犪狋 5. 犜犺犲狊犲狇狌犪犾犻狋狔犻狀犱犻犮犪 狋狅狉狊犪狉犲犻狀犾犻狀犲狑犻狋犺狀犪狋犻狅狀犪犾狊狋犪狀犱犪狉犱狊犳狅狉狋犺犲犿犻犮狉狅狆狅狑犱犲狉狊狅犳犳狌狀犵犪犾犻狀狊犲犮狋犻犮犻犱犲狊狋犪狀犱犪狉犱犖狅. 犌犅 / 犜 ), 犪狀犱狋犺犲犵狉犪狀狌犾犲犳犻狀犲狀犲狊犻狊犻狀犾犻狀犲狑犻狋犺犿犻犮狉狅犵狉犪狀狌犾犲. 犓犲狔狑狅狉犱狊犃犮狉犲犿狅狀犻狌犿犺犪狀狊犳狅狉犱犻 ; 犮狅狀犻犱犻犪犾狆狅狑犱犲狉 ; 狆狅狑犱犲狉 ; 犮犪狉狉犻犲狉 ; 犱犻狊狆犲狉狊犻狀犵犪犵犲狀狋 ; 犪犵犵犾狌狋犻狀犪狀狋 ; 狌犾狋狉犪狏犻狅犾犲狋狆狉狅狋犲犮狋狅狉 真菌生防制剂是以有害生物的病原真菌为有效成分的生物农药, 具有触杀性 流行性 环境安全 不杀伤非目标生物等特点, 在病虫草害控制中具有巨 [1] 大潜力 随着微生物防治的日益发展, 病原微生 [2] 物的生产规模向制剂化及其商业化方向发展 球孢白僵菌的应用在昆虫病原真菌中是比较成功的例子, 其剂型从传统的粉剂 油悬浮剂 颗粒剂 可湿性粉剂到安全环保的水基性制剂均有登记注册, 利用 [3] 这些制剂防治农林业害虫也取得了巨大成效 汉逊顶孢霉 ( 犃犮狉犲犿狅狀犻狌犿犺犪狀狊犳狅狉犱犻 ) 是一种 [4] 虫生真菌 甘肃农业大学农药系从蚜虫上分离获 [5] 得一株顶孢霉菌株 Ahy1 宋丽雯研究证实该菌株对桃蚜 苜蓿斑蚜 豆无网长管蚜 黏虫和菜青虫均有较强的侵染力 开发适宜于甘肃省干旱条件下生产和应用的顶孢霉杀虫制剂, 对保护生态环境具有十分重要的意义 甘肃农业大学农药实验室已经 收稿日期 : 修订日期 : 基金项目 : 甘肃省科技支撑计划项目 (1204NKCA073) 通信作者 E mail:ndzxh@gsau.edu.cn
2 90 筛选的顶孢霉 Ahy1 菌株分生孢子制剂有可湿性粉 [6] [7] 剂 乳悬剂 近年来随着有机食品需求越来越大, 蔬菜大棚应用越来越广泛, 筛选一种更适用于温室大棚环境的顶孢霉分生孢子制剂对温室蔬菜害虫的绿色防控有重要意义 微粉剂以单一粒子在空间悬浮 扩散, 可均匀附着在作物上 平均粒径在 5μm 以下的细粉剂, 其特点是粉剂粒子不凝聚, 适用于从室外向温室 大棚内喷粉, 且操作简单 迅速 安全 粉粒在空气中的悬浮时间也比同等细度的雾滴长, 粉剂在棚室空间能够形成比较持久的粉雾现象 真菌孢子粉形成的粉雾在温室大棚中能够充分 扩散, 在叶上均匀分布, 其效果显著优于喷雾法 本文对顶孢霉 Ahy1 菌株分生孢子微粉剂配方进行了筛选, 旨在为研制顶孢霉新制剂提供依据 1 材料和方法 1.1 试验材料 菌株及孢子粉 : 顶孢霉 Ahy1 菌株及其孢子粉, 由甘肃农业大学农药实验室提供 载体 : 硅藻土 ( 天津市大茂化学试剂厂 ) 高岭土 ( 上海建信化工有限公司试剂厂 ) 白炭黑 ( 天津市大茂化学试剂厂 ) 碳酸钙 膨润土和滑石粉均由天津市光复精细化工研究所生产 分散剂 : 木质素磺酸钙 木质素磺酸钠 聚萘磺酸钠 二丁基萘磺酸钠 月桂酸钠均由天津市光复精细化工研究所提供, 辛基酚聚氧乙烯醚磺酸钠 ( 江苏省海安石油化工厂 ) 黏着剂 : 淀粉 聚乙烯醇 ( 苏州利源化工 ) 聚乙酸乙烯酯 ( 苏州利源化工 ) 羧甲基纤维素 ( 天津市光复精细化工研究所 ) 硅酸钠 ( 天津市光复精细化工研究所 ) 紫外保护剂 : 腐植酸 ( 乌海市全圣化工有限责任公司 ) 荧光素钠 ( 天津市光复精细化工研究所 ) 糊精 ( 天津市光复精细化工研究所 ) 抗坏血酸 ( 天津市光复精细化工研究所 ) 海藻酸钠 ( 分析纯 )( 山东昊洋海藻工业有限公司 ) 1.2 试验方法 载体筛选方法以 5% (W/V) 的比例将 6 种供试载体加入 PDA 培养基中混匀, 灭菌后制成平板 取 0.1mL 孢子浓度为 10 3 个 /ml 的顶孢霉孢子悬浮液, 涂布在含不同载体的各平板上 以不含载体的 PDA 平 板为对照, 每处理设置 3 个重复, 置于恒温培养箱中,(25±1) 下培养 3d 观察记录各平板长出的顶孢霉形成的菌落数量, 计算 1mL 孢子悬浮液形成菌落数 (cfu/ml) 按上述方法制备含各种载体的平板 在培养 5d 的菌落边缘生长旺盛的部分, 用打孔器 ( 犱 = 5mm) 打取菌块, 接种到含各载体的培养基上, 每处理设置 3 个重复, 置于恒温培养箱中,(25±1) 下培养 5d 后, 测出菌落直径, 计算菌落直径日增长量 : 菌落直径菌落直径日增长量 (mm)= 生长天数分别取 1g 孢子粉与 5g 不同载体粉末混匀, 置于棕色试剂瓶内, 封口后常温贮存, 分别于 和 120d 后取 0.5g 混合物加入 50mL 马铃薯葡萄糖培养液 (PDB) 中 在恒温振荡培养箱中,(25± 1) 下振荡培养 24h, 抽样镜检孢子萌发率 分散剂筛选方法将供试分散剂按 和 1000μg/mL 4 种浓度的比例与融化的 PDA 培养基混合, 灭菌后制成平板 取 0.1mL 孢子浓度为 10 3 个 /ml 的顶孢霉孢子悬浮液, 涂布在含不同分散剂的各平板上 以不含分散剂的 PDA 平板为对照 每处理设置 3 个重复, 置于恒温培养箱中,(25±1) 下培养 3d 观察各平板形成的菌落数量, 计算 1mL 孢子悬浮液形成菌落数 (cfu/ml) 菌落直径增长量的试验方法同 黏着剂的筛选 5 种黏着剂对顶孢霉菌丝生长和孢子萌发的影响测定方法同 分别取孢子粉 2g 与 0.1g 不同载体粉末混匀, 置于棕色试剂瓶内, 封口后常温贮存, 分别于 和 120d 后取 0.2g 混合物加入 20mL 马铃薯葡萄糖培养液 (PDB) 中 在恒温振荡培养箱中,(25± 1) 下振荡培养 24h, 抽样镜检孢子萌发率 紫外保护剂筛选取活化培养 7d 的新鲜菌株, 向培养皿中加入 10mL 无菌水洗脱孢子, 在显微镜下用血球计数板计数并计算孢子含量, 配制成浓度为 10 4 个 /ml 的孢子悬浮液, 然后将各种供试紫外保护剂按 0.3% 的比例加入孢子悬浮液中, 混合均匀 用移液器吸取 0.1mL 上述孢子悬浮液于无菌盖玻片上, 涂抹均匀 然后, 将各盖玻片置于紫外灯 ( 功率 30W, 光强 120lx) 下照
3 42 卷第 2 期郝雨等 : 顶孢霉 Ahy1 菌株微粉剂的配方筛选 91 射 1min 后, 将玻片平放在培养皿底部, 皿中用湿润的滤纸保湿 将培养皿放在 25 下黑暗培养, 以免孢子光复活 24h 后, 在显微镜下抽样计数萌发孢子数并计算出萌发率 以不加紫外保护剂的顶孢霉孢子悬浮液作照射和不照射的对照处理 % 顶孢霉 Ahy1 菌株微粉剂加工及质量检查方法 按照孢子粉含量 20%, 分散剂 5%, 紫外保护剂 1% 的比例加工顶孢霉微粉剂, 并对其质量指标进行检测 真菌孢子微粉剂的质量检测主要包含以下指标 : 含孢量 干燥减量 活孢率 细度和贮存稳定性 含孢量检测 : 用万分之一天平称取 1g 产品加入 100mL 蒸馏水中混匀, 用血球计数板计数孢子悬浮液浓度犮, 计算制剂孢子含量 制剂孢子含量 ( 个 /g)= 犮 100; 干燥减量检测 : 用万分之一天平称取 10g 产品, 置于恒温鼓风干燥箱中,120 下干燥 2h 后迅速称其重量犠, 计算干燥减量 干燥减量 (%)= 10- 犠 ; [9] 活孢率检测 : 取少许混合物加入 3mL 的营养液中, 振荡均匀 加入孢子的浓度以 400 倍显微镜下, 血球计数板每小格 4~8 个孢子为宜 将菌悬液涂成玻片,(25±1) 下培养 24h 后, 观察计数孢子的萌发率 取不同位置的 5 个视野, 分别观察萌发孢子数与孢子总数, 计算萌发率 活孢率 (%)= 萌发孢子数孢子总数 100; 微粉细度检测 : 容积比重测定方法 选取已知容积的塑料瓶, 把干燥的测试粉剂样品从光滑的纸上滑入塑料筒中直至药粉溢出筒口, 注意药粉不可急速冲入塑料筒中 静置约半分钟, 用一把直尺贴近筒口, 小心地从筒口平推, 把多余的药粉刮去, 使筒口的药粉成为平面状态 把筒内的药粉仔细倒出, 称出粉剂的质量 (g), 计算出单位体积的粉剂质量, 即得容积比重 (g/cm 3 ) 贮存稳定性检测 :5 贮存 180d, 每隔 15d 检查活孢率 活孢率检测方法同上 生物活性测定生物活性的测定采用喷粉法 将田间采集的甘蓝蚜 ( 犅狉犲狏犻犮狅狉狔狀犲犫狉犪狊犻犮犪犲 ) 转至室内盆栽的甘蓝苗上饲养, 定殖后选择龄期一致的无翅成蚜, 移入铺 有甘蓝叶片的培养皿 ( 直径 150mm, 底部用海绵和滤纸保湿 ) 中, 用浸渍十字花科营养液的消毒棉球包裹叶柄 使用小型塑料喷粉瓶在培养皿上均匀喷粉 每皿 30 头试虫, 重复 3 次, 并设不喷粉的对照 将喷粉处理的培养皿和对照置于光照培养箱 (25,RH=80%,L D=12h 12h) 中, 自第 3 天起每天观察一次, 记录试虫死亡 存活数目及虫体感病症状 每次检查时将虫尸移出培养皿, 根据虫尸表面是否有供试菌长出物而确定感染致死情况, 计算死亡率和校正死亡率 死亡虫数死亡率 (%)= 供试总虫数 100; 处理死亡率校正死亡率 - 对照死亡率 (%)= 1- 对照死亡率 结果与分析 2.1 载体的选择高岭土 硅藻土 碳酸钙 膨润土 白炭黑和滑石粉 6 种载体对顶孢霉菌株 Ahy1 菌丝生长和孢子萌发的影响测定结果见表 1 和图 1 6 种供试载体对顶孢霉菌株 Ahy1 菌落直径日增长量的影响与对照相比差异显著, 碳酸钙 硅藻土和白炭黑与顶孢霉混合后, 顶孢霉平均菌落直径日增长量分别为 和 13.00mm, 优于高岭土 膨润土和滑石粉 ; 6 种供试载体对菌落形成单位数的影响与对照相比差异显著, 硅藻土 碳酸钙和膨润土与 Ahy1 混合后平均菌落形成单位数分别为 和 cfu/ ml, 显著优于高岭土 白炭黑和滑石粉 6 种载体与 Ahy1 孢子粉混合对其孢子萌发率的影响见图 1 储存 120d 后对孢子萌发率影响最小的载体是硅藻土和碳酸钙 由于碳酸钙的分子量 (100.09) 和密度 (0.5g/ cm 3 ) 均大于硅藻土 ( 分子量 60.08, 密度 0.28g/ cm 3 ), 所以选择粒径更细 悬浮性能强的硅藻土作为 Ahy1 微粉剂的载体 2.2 分散剂的选择木质素磺酸钙 木质素磺酸钠 辛基酚聚氧乙烯醚磺酸钠 聚萘磺酸钠 二丁基萘磺酸钠 月桂酸钠 6 种分散剂对 Ahy1 菌丝生长和孢子萌发的影响见图 2 图 3 木质素磺酸钠和木质素磺酸钙在低浓度时对 Ahy1 菌丝生长和孢子萌发均无明显影响, 但在高浓度时对 Ahy1 菌落直径日增长量和孢子萌发有轻微的抑制作用 ; 其他 4 种分散剂在低浓度和高
4 92 浓度时均影响较大 因此选用木质素磺酸钠或木质 素磺酸钙作为 Ahy1 微粉剂的分散剂 供试载体 Carrier 表 1 6 种载体对犃犺狔 1 菌丝体生长的影响 1) 犜犪犫犾犲 1 犈犳犲犮狋狊狅犳狊犻狓犮犪狉狉犻犲狉狊狅狀犃犺狔 1 犿狔犮犲犾犻犪犾犵狉狅狑狋犺 菌落直径日增长量 /mm Dailyincrementofcolonydiameter 平均菌落数 /cfu ml -1 Averagenumberofcolonies CK 15.00a a 高岭土 Kaoline 10.74bc d 硅藻土 Diatomite 13.41b b 碳酸钙 Calciumcarbonate 13.58b bc 膨润土 Bentonite 10.23c c 白炭黑 Whitecarbonblack 13.00bc d 滑石粉 Talcumpowder 11.25bc e 1) 同列数据后不同小写字母表示在 0.05 水平差异显著 下同 Datafolowedbydiferentlowercaseletersinthesamecolumnaresignificantlydiferentatthe0.05levelbyDuncan stest.thesamebelow. 图 1 6 种载体对顶孢霉犃犺狔 1 孢子萌发的影响 犉犻犵.1 犈犳犲犮狋狊狅犳狊犻狓犮犪狉狉犻犲狉狊狅狀犃犺狔 1 犮狅狀犻犱犻犪犾犵犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀 图 2 6 种分散剂对顶孢霉犃犺狔 1 菌丝生长的影响 犉犻犵.2 犈犳犲犮狋狊狅犳狊犻狓犱犻狊狆犲狉狊犻狀犵犪犵犲狀狋狊狅狀犃犺狔 1 犿狔犮犲犾犻犪犾犵狉狅狑狋犺 2.3 黏着剂的选择淀粉 聚乙烯醇 聚乙酸乙烯酯 羧甲基纤维素 硅酸钠 5 种黏着剂对顶孢霉菌株 Ahy1 菌丝生长和孢子萌发的影响测定结果见表 2 和图 4 羧甲基纤维素和淀 粉对 Ahy1 菌丝生长和孢子萌发的影响均不显著, 处理后 Ahy1 平均菌落日增长量分别是 和 13.23mm, 平均形成菌落数分别是 和 cfu/mL;5 种分散剂与 Ahy1 孢子粉混合储存 120d 后对孢子萌发率影响最
5 42 卷第 2 期郝雨等 : 顶孢霉 Ahy1 菌株微粉剂的配方筛选 93 小的是羧甲基纤维素 ( 见图 4) 结果表明 : 羧甲基纤维 素可作为 Ahy1 微粉剂的黏着剂 图 3 6 种分散剂对顶孢霉犃犺狔 1 孢子萌发的影响 犉犻犵.3 犈犳犲犮狋狊狅犳狊犻狓犱犻狊狆犲狉狊犻狀犵犪犵犲狀狋狊狅狀犃犺狔 1 犮狅狀犻犱犻犪犾犵犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀 表 2 5 种黏着剂对犃犺狔 1 菌丝生长和孢子萌发的影响 犜犪犫犾犲 2 犈犳犲犮狋狊狅犳犳犻狏犲犪犵犵犾狌狋犻狀犪狀狋狊狅狀犃犺狔 1 犿狔犮犲犾犻犪犾犵狉狅狑狋犺犪狀犱犮狅狀犻犱犻犪犾犵犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀 黏着剂 Agglutinant 菌落直径日增长量 /mm Dailyincrementofcolonydiameter 平均菌落数 /cfu ml -1 Averagenumberofcolonies CK 14.23a a 羧甲基纤维素 CarboxymethylCelulose 13.74a a 淀粉 Amylum 13.23a a 聚乙酸乙烯酯 Polyvinylacetate 10.58b b 硅酸钠 Sodiumsilicate 9.67bc b 聚乙烯醇 Polyvinylalcohol 7.41c c 图 4 5 种黏着剂对顶孢霉犃犺狔 1 孢子萌发的影响 犉犻犵.4 犈犳犲犮狋狊狅犳犳犻狏犲犪犵犵犾狌狋犻狀犪狀狋狊狅狀犃犺狔 1 犮狅狀犻犱犻犪犾犵犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀 2.4 紫外保护剂的选择腐植酸 荧光素钠 糊精 抗坏血酸 海藻酸钠 5 种紫外保护剂对顶孢霉菌株 Ahy1 孢子萌发的影响结果见表 3 在紫外灯( 功率 30W, 光强 120lx) 下照射
6 94 40s 后,5 种紫外保护剂处理的 Ahy1 孢子萌发率与对照差异显著 其中腐植酸和荧光素钠处理后,Ahy1 孢子萌发率分别为 77.67% 和 75.67%; 其余 3 种紫外保护剂处理 Ahy1 孢子萌发率较低, 均在 30% 以下 结果表明紫外保护剂可选择腐植酸和荧光素钠 亿孢子 / 犵顶孢霉微粉剂生物活性测定结果通过对 98 亿孢子 /g 顶孢霉 Ahy1 微粉剂进行生物活性测定, 结果表明在第 8 天时死亡率达到 60%( 图 6) 表 3 5 种紫外保护剂对犃犺狔 1 孢子萌发率的影响 犜犪犫犾犲 3 犈犳犲犮狋狅犳犳犻狏犲犝犞狆狉狅狋犲犮狋犪狀狋狊狅狀犃犺狔 1 犮狅狀犻犱犻犪犾犵犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狉犪狋犲 处理 Treatment 孢子萌发率 /% Conidialgerminationrate 空白对照 CKBlankcontrol 83.00a 腐殖酸 Humicacid 77.67a 荧光素钠 Fluoresceinsodium 75.67a 糊精 Dextrin 24.67b 抗坏血酸 Ascorbicacid 15.33c 海藻酸钠 Sodiumalginate 12.00c 无保护剂 CKNoprotectiveagent 4.67d % 顶孢霉微粉剂加工与质量检测 亿孢子 /g 顶孢霉微粉剂配方与加工以木质素磺酸钠或木质素磺酸钙作分散剂 羧甲基纤维素作黏着剂 荧光素钠作紫外保护剂和孢子粉按照以下比例混合 : 孢子粉 20%, 分散剂 5%, 黏着剂 1%, 紫外保护剂 1%, 添加硅藻土填料至 100%, 用超细粉碎机将各成分混匀, 制成 98 亿孢子 /g 顶孢霉 Ahy1 菌株微粉剂 ( 中试产品 ) 亿孢子 /g 顶孢霉微粉剂的质量检测通过 98 亿孢子 /g 顶孢霉 Ahy1 微粉剂加工获得的中试产品, 质量检测结果为 : 孢子含量 个孢子 /g, 干燥减量 4.36%, 孢子萌发率 90.23%, 容积比重 0.37g/cm 3, 颗粒细度为过 200 目筛, 粉粒直径约 74μm,5 下贮藏 6 个月后孢子萌发率 80%( 图 5),20% 顶孢霉 Ahy1 微粉剂中试产品基本符合同类粉剂的国家标准 ( 标准号 GB/T ) [10] 图 5 贮存时间对顶孢霉犃犺狔 1 微粉剂孢子萌发的影响 (5 ) 犉犻犵.5 犈犳犲犮狋狊狅犳狊狋狅狉犪犵犲狋犻犿犲狅狀犮狅狀犻犱犻犪犾犵犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犃犺狔 1 犿犻犮狉狅犵狉犪狀狌犾犲 (5 ) 图 6 98 亿孢子 / 犵顶孢霉犃犺狔 1 微粉剂对甘蓝蚜生物活性测定结果 犉犻犵.6 犅犻狅犪狊犪狔狉犲狊狌犾狋狊狅犳 犮狅狀犻犱犻犪 / 犵犃犺狔 1 犮狅狀犻犱犻犪犾犿犻犮狉狅犵狉犪狀狌犾犲狋狅犅狉犲狏犻犮狅狉狔狀犲犫狉犪狊犻犮犪犲 3 结论与讨论 载体是微粉剂中的主要成分, 对粉剂的质量起着至关重要的作用 特别是对微生物制剂来说, 孢子是有效成分, 载体的优劣决定着孢子的成活率和贮存时间 试验结果表明, 碳酸钙和硅藻土是两种对 Ahy1 菌株菌落生长量和菌落形成数影响均较小的载体 但从 2 种载体本身性质及所要研究的剂型特点考虑, 硅藻土是较为理想的顶孢霉微粉剂载体 太阳辐射的紫外线能降低孢子的萌发率, 或延 [11] 缓孢子萌发, 因为紫外线有可能造成细胞中 DNA 分子结构的损伤, 特别是胸腺嘧啶二聚体的形 [12] 成, 使 DNA 复制受阻而导致细胞死亡 对紫外保护剂的筛选结果表明, 紫外保护剂效果最好的是腐植酸, 其次是荧光素钠 20% 顶孢霉 Ahy1 微粉剂加工获得的中试产品, 孢子含量为 个孢子 /g, 干燥减量为 4.36%, 孢子萌发率为 90.23%, 颗粒细度为过 200 目筛, 粉粒直径约为 74μm,5 下贮藏 6 个月后孢子萌发率为 80% 与球孢白僵菌粉剂国家标准( 标准号 GB/T , 含孢量 (100 土 10) 亿孢子 / g, 孢子萌发率 90%, 干燥减量 10%, 在 5 条件下贮存 180d, 孢子萌发率大于 80%, 细度为高孢粉全部通过 160 目筛, 低孢粉全部通过 35 目筛 ) 比较, 20% 顶孢霉 Ahy1 微粉剂中试产品基本符合低孢粉标准, 在颗粒细度上符合微粉剂的要求 ( 下转 108 页 )
7 108 [10] 金剑雪, 李凤良, 程英, 等. 七星瓢虫对豆蚜的功能反应 [J]. 植 [15]ClercqPD,MohagheghJ,TirryL.Efectofhostplantonthe 物保护,2011,37(4): [11] 封红兵, 徐静, 张青文, 等. 新疆棉区主要捕食性天敌对棉铃虫捕食功能反应的研究 [J]. 应用生态学报,2003,14(6): [12]FantinouAA,PerdikisDC,LabropoulosPD.Preferenceand consumptionof 犕犪犮狉狅犾狅狆犺狌狊狆狔犵犿犪犲狌狊 preyingonmixedin starassemblagesof 犕狔狕狌狊狆犲狉狊犻犮犪犲 [J].BiologicalControl, 2009,51(1): [13] 蒋杰贤, 梁广文. 叉角厉蝽对斜纹夜蛾不同龄期幼虫的选择捕食作用 [J]. 生态学报,2001,21(4): [14]PakyariH,FathipourY,RezapanahM.Temperature depend entfunctionalresponseof 犛犮狅犾狅狋犺狉犻狆狊犾狅狀犵犻犮狅狉狀犻狊 (Thysan optera:thripidae)preyingon 犜犲狋狉犪狀狔犮犺狌狊狌狉狋犻犮犪犲 [J].Journal functionalresponseofthepredator 犘狅犱犻狊狌狊狀犻犵狉犻狊狆犻狀狌狊 (Het eroptera:pentatomidae)[j].biologicalcontrol,2000,18(1): [16]RubiaEG,AlmazanLP,HeongK L.Predationofyelow stemborer(ysb)bywolfspider[j].internationalricere searchnewsleter,1990,15(4):22. [17] 李桂亭, 邹运鼎, 周夏芝. 干扰作用及空间异质性对大草蛉雄成虫捕食作用的影响 [J]. 应用生态学报,2002,13(4): [18] 杨国庆, 吴进才, 王洪全. 水对稻田蜘蛛捕食功能的影响 [J]. 生态学报,2003,4(4): [19] 吕仲贤, 俞晓平,HeongKL, 等. 稻田氮肥施用量对黑肩绿盲蝽捕食功能的影响 [J]. 昆虫学报,2005,48(1): ofasia pacificentomology,2009,12(1): ( 责任编辑 : 田?) 櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍 ( 上接 94 页 ) 在测定过程中, 由于每次检查时将虫尸移出培养皿, 减少了继续侵染的机会, 导致第 8 天以后试虫死亡率不再继续增大 而在田间应用中, 由于菌丝体产生的分生孢子能够再次侵染害虫, 所以持效期更长 微生物农药的剂型加工和贮存稳定性一直是制 [13] 约其发展和应用的重要因素之一 粉剂是微生物农药应用较早的一种剂型, 例如白僵菌粉剂用于森林虫害的防治 由于设施农业推广和温室经济作物的种植面积逐渐扩大, 设施大棚病虫害发生呈上升趋势, 鉴于温室大棚的小气候特别适合微粉剂的微生物杀虫剂, 借助于高温高湿, 真菌孢子可黏着在虫体上, 完成入侵和致病过程, 从而达到防治为害设施蔬菜害虫的效果, 因此研究顶孢霉微粉剂新剂型, 对于顶孢霉菌株在设施经济作物蚜虫等重要害虫的绿色防控具有重要意义 但是微粉剂的稳定性和田间防效还需进一步试验研究 学学报,1996,23(3): [3] 朱明媛, 田丽. 球孢白僵菌分生孢子制剂助剂及剂型研究进展 [J]. 山东轻工业学院学报 ( 自然科学版 ),2012,26(1): [4] 王四宝, 刘竟男, 黄勃, 等. 大别山地区虫生真菌群落结构与生态分布 [J]. 菌物学报,2004,23(2): [5] 宋丽雯. 顶孢霉菌株 ( 犃犮狉犲犿狅狀犻狌犿犺犪狀狊犳狅狉犱犻 ) 的生物学特性和对蚜虫致病机理的研究 [D]. 兰州 : 甘肃农业大学,2006: [6] 张莉. 顶孢霉菌株 ( 犃犮狉犲犿狅狀犻狌犿犺犪狀狊犳狅狉犱犻 ) 可湿性粉剂制剂加工及药效评价研究 [D]. 兰州 : 甘肃农业大学,2008: [7] 田大伟, 杨顺义, 张新虎, 等. 顶孢霉 Ahy1 菌株孢子乳悬剂的配方筛选 [J]. 植物保护,2009,35(4): 屠豫钦. 农药剂型与制剂及使用方法 [M]. 北京 : 金盾出版社, 2007: [9] 汤坚, 黄长春, 丁珊, 等. 球孢白僵菌制剂载体的筛选 [J]. 安徽农业大学学报,1996,23(3): [10] 郭志红, 李增智, 陈昌洁, 等.GB/T , 球孢白僵菌粉剂 [S]. 北京 : 中国标准出版社,2011. [11] 黄长春, 汤坚. 球孢白僵菌菌株抗紫外线能力与毒力的关系 [J]. 森林病虫通讯,1998(4): 参考文献 [1] 王中康, 殷幼平, 彭国雄, 等. 真菌生防制剂研发现状与发展趋势 [C] 大会组织委员会, 学术委员会. 第三届全国绿色环保农药新技术 新产品交流会暨第二届全国生物农药研讨会论文集.2004: [2] 王成树. 真菌杀虫剂剂型的研究现状 ( 综述 )[J]. 安徽农业大 [12]IgnofoC M,GarciaC.Influenceofconidialcoloroninactiva tionofseveralentomogenousfungi(hyphomycetes)bystimu latedsunlight[j].environmentalentomology,1992,21(4): [13] 王滨, 樊美珍, 李增智. 真菌杀虫剂剂型的研究与应用 ( 综述 ) [J]. 安徽农业大学学报,2003,30(2): ( 责任编辑 : 田?)
(CIP) /., ISBN Ⅰ. Ⅱ. Ⅲ. Ⅳ.F239.1 CIP (2001) ISBN /F
(CIP) /.,2001.7 ISBN7 301 05046 1 Ⅰ. Ⅱ. Ⅲ. Ⅳ.F239.1 CIP (2001)034699 ISBN7 301 05046 1/F 423 100871 62752015 62754140 62752027 787 10921620392 20017 20017 30.00 , ;, ; ;, ; ;, ,,,,,,,, ;, ; ; ;,,,,,,,,,,
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2005 年 5 月工业催化犕犪狔 2005 第 13 卷第 5 期犐犖犇犝犛犜犚犐犃犔犆犃犜犃犔犢犛犐犛犞狅犾.13 犖狅.5 石油化工与催化 生物柴油的合成和使用研究进展 张呈平, 杨建明, 吕剑 ( 西安近代化学研究所, 陕西西安 710065) 摘要 : 总结了近年来生物柴油的合成方法和使用方法 催化方法上, 生物柴油的合成方法有酸催化 碱催化 酶催化和超临界催化等 ; 工艺路线上, 生物柴油可由高温热裂解和酯交换两种路线合成
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犘犾犪狀狋犘狉狅狋犲犮狋犻狅狀 21% 氯氨吡啶酸水剂对不同生育期黄花棘豆的防控效果及对草地植被的影响 陈超, 王庆海, 武菊英, 莫重辉 3, 辛玉春 4 (1. 北京草业与环境研究发展中心, 北京 100097;2. 农业部都市农业 ( 北方 ) 重点实验室, 北京 100097;3. 青海大学农牧学院, 西宁 810016;4. 青海省草原总站, 西宁 810008) 摘要在黄花棘豆的不同生育期
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檯殔 暖通空调 犎犞牔犃犆 2012年第42卷第6期 1 檯檯檯檯檯檯檯檯殔 广州市设计院 60周年院庆 檯檯殔 栏 首 语 檯檯檯檯檯檯檯殔 广州市设计院成立于1952年 随着经济的发展 我院暖通专业也不断发展壮大 打造了一 批质量高 影响深远的建筑精品 如当时在华南地区第一个采用集中空调的剧院 友谊剧院 全国第一家五星级宾馆 白天鹅宾馆等 改革开放以来 我院暖通专业技术人员坚持技术创 新 锐意进取
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2007 E mail:sdyccs@63.com () () 2 (8) 3 (4) 4 (22) (33) (37) 5 (37) 6 (44) 7 (53) 8 (59) (69) (73) 9 (73) 0 (8) (85) 2 (89) (95) (99) 3 (00) 4 (06) 5 (2) 6 (7) (23) (29) (35) . 2. ( 3. ) 4. 5. : ; ;. 2..
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从类型学到动态研究 : 兼论信仰的流动 社会 2013 2 CJS 第 33 卷 卢云峰 摘要 : 自从杨庆 提出 混合宗教 与 制度化宗教 概念之后, 类型学建构成为华人宗教研究的主流 本文尝试进行视角的转换, 用 基于类型学基础上的动态研究 来分析华人社会中信仰的流动 该视角一方面强调类型学的重要性, 认为在研究中国宗教时有必要对 灵 义 等本土概念予以社会科学化 ; 另一方面它强调揭示类型之间的联系与变化,
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第 21 卷 6 期 2010 年 12 月 应用气象学报 JOURNALOFAPPLIED METEOROLOGICALSCIENCE Vol.21,No.6 December2010 热气候指数在人体舒适度预报中的适用性 郑有飞 1) 尹继福 2) 吴荣军 1)3) 叶殿秀 4) 1) ( 南京信息工程大学气象灾害省部共建教育部重点实验室, 南京 210044) 2) ( 南京信息工程大学大气物理学院,
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第 4 卷第 9 期中国激光 Vol.4,No.9 204 年 9 月犆犎犐犖犈犛犈犑犗犝犚犖犃犔犗犉犔犃犛犈犚犛犛犲狆狋犲犿犫犲狉,204 基于犗犆犜技术对古代瓷釉断面结构特征的初步研究 严鑫,2 董俊卿 李青会 郭木森 胡永庆 中国科学院上海光学精密机械研究所科技考古中心, 上海 20800 ( 2 中国科学院大学, 北京 00049; 河南省文物考古研究院, 河南郑州 ) 450000 摘要为了验证将光学相干层析
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第 40 卷第 1 期测绘学报犞狅犾.40, 犖狅.1 2011 年 2 月犃犮狋犪犌犲狅犱犪犲狋犻犮犪犲狋犆犪狉狋狅犵狉犪狆犺犻犮犪犛犻狀犻犮犪犉犲犫.,2011 文章编号 :1001 1595(2011)01 0125 07 基于有向属性关系图的典型道路交叉口结构识别方法 徐柱 1, 蒙艳姿 2, 李志林 3 1, 李木梓 1. 西南交通大学测量工程系, 四川成都 610031;2. 四川省遥感信息测绘院,
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障碍研究论述与社会参与 : 无障碍 通用设计 能力与差异 社会 2015 6 CJS 第 35 卷 王国羽 摘要 : 障碍研究在过去 40 年的发展奠定了其对公共政策影响的基础 障碍者社会参与的责任逐渐由以往个人承担与调适, 转向社会与国家承担 本文简述西方国家障碍研究的两个主要论述 社会模式与普同主义取向, 对比这两个主要论述所衍生出的政策 : 由早期的无障碍设施到通用设计, 至最近的能力取向 障碍者参与社会生活与活动是其基本权利的一部分,
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第 30 卷第 1 期 2011 年 1 月 食品与生物技术学报 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犉狅狅犱犛犮犻犲狀犮犲犪狀犱犅犻狅狋犲犮犺狀狅犾狅犵狔 Vol.30 No.1 Jan. 2011 文章编号 :1673 1689(2011)01 0342 06 松茸 黑牛肝菌 双孢白蘑菇提取物体外抗氧化性试验研究 黄俊丽, 张鳭 ( 食品科学与技术国家重点试验室江南大学, 江苏无锡 214122) 摘要 : 采用超氧阴离子
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32 2012 07 JOURNALOFDESERT RESEARCH Vol.32 No. Jul.2012 :1000 69X(2012)0 1053 09 2009!"#$%&'! 1,2, 1,2, 1,2, 1,2 (1. 9:; (!, :; 830002;2. 9 < =(0>?@ABC/ ABC, :; 830002) : 2009 F GH I JKLMNO F PQRST(TSP)
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第 25 卷, 第 11 期光谱学与光谱分析犞狅犾 25, 犖狅 11, 狆狆 1834 1838 2005 年 11 月犛狆犲犮狋狉狅狊犮狅狆狔犪狀犱犛狆犲犮狋狉犪犾犃狀犪犾狔狊犻狊犖狅狏犲犿犫犲狉, 2005 血浆中游离还原型及氧化型谷胱甘肽的荧光测定法 王秋林 1,2, 王浩毅 1, 丁怡 1, 乔小蓉 3, 彭克军 1, 林霞 4, 王树人 1 1 四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室,
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