456 王旭辉, 等 DAPT 对食管鳞癌细胞株增殖与凋亡影响机制探讨 was(8.4±.60)% and (0.±5.90)%,whichwassignificantlyhigherthantheapoptosisrateofEca09andTE incontrolgroupthatwas(0.4

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1 中华肿瘤防治杂志 03 年 0 月第 0 卷第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,October03,Vol.0 No 前沿报道 / 论著 犇犃犘犜对食管鳞癌细胞株增殖与凋亡影响机制探讨 王旭辉, 花盛浩 王慧 王文红 刘强 陈艳 尤海燕 焦志军. 江苏大学附属医院检验科 镇江市医学免疫学重点实验室, 江苏镇江 00. 湖南省湘乡市人民医院检验科, 湖南湘乡 4400 摘要 目的 : 观察 γ 分泌酶抑制剂 DAPT 阻断 Notch 信号通路对食管鳞状细胞癌细胞株增殖和凋亡的影响, 并初步探讨其作用机制 方法 : 采用 γ 分泌酶抑制剂 DAPT 处理培养的食管鳞癌 Eca09 和 TE 细胞株以阻断 Notch 信号, 分别应用 CCK 8 试剂和流式细胞术检测两种食管鳞癌细胞株的增殖与凋亡情况 ; 同时采用定量 PCR 检测细胞 Notch 受体及靶基因 Hes mrna 的表达, 蛋白质印迹法检测与细胞增殖 凋亡相关蛋白 CyclinD 和 Bcl 的表达 结果 : DAPT 处理明显抑制了食管鳞癌 Eca09 和 TE 细胞株增殖,5μmol/LDAPT 处理 Eca09 细胞株 7h TE 细胞株 96h 后增殖抑制率分别为 (6.8±5.3)% 和 (59.8±.9)%, 与 DMSO 对照组 (7.±.6)% 和 (7.0±.)% 相比差异有统计学意义, 犘 =0.000 和犘 <0.000, 且抑制作用呈时间和浓度依赖关系 DAPT 可诱导 Eca09 和 TE 细胞株凋亡,5μmol/LDAPT 处理组 Eca09 细胞凋亡率在 4 和 48h 分别为 (8.4±.60)% 和 (.77±5.8)%, 与相应对照组 (0.49±.7)% 和 (9.74±3.38)% 相比凋亡率增加, 差异有统计学意义, 犘值分别为 和 ; 处理组 TE 细胞凋亡率在 4 和 48h 分别为 (0.±5.90)% 和 (3.4±5.9)%, 与相应对照组 (8.00±.84)% 和 (.59± 3.7)% 相比凋亡率增加, 差异有统计学意义, 犘值分别为 0.03 和 DAPT 处理下调两种细胞株 Notch 受体 Notch 信号靶基因 Hes 及 CyclinD 的表达水平 DAPT 处理可上调 Eca09 细胞 Bcl 水平, 但下调了 TE 细胞中 Bcl 水平 结论 :γ 分泌酶抑制剂 DAPT 可抑制食管鳞癌细胞株增殖并促进其凋亡, 其机制可能与 DAPT 阻断 Notch 信号活化 调控 CyclinD 和 Bcl 的表达有关, 阻断 Notch 信号通路有望成为食管鳞状细胞癌治疗的新靶点 关键词 食管肿瘤 ;DAPT; 细胞增殖 ; 细胞凋亡 ;Notch; 信号传导 ; 印迹法, 蛋白质 犈犳犲犮狋狊狅犳 γ 狊犲犮狉犲狋犪狊犲犻狀犺犻犫犻狋狅狉犇犃犘犜狅狀狋犺犲狆狉狅犾犻犳犲狉犪狋犻狅狀犪狀犱犪狆狅狆狋狅狊犻狊狅犳犲狊狅狆犺犪犵犲犪犾犮犲犾犾犻狀犲狊 中华肿瘤防治杂志,03,0(9): , 犠犃犖犌犡狌 犺狌犻, 犎犝犃犛犺犲狀犵 犺犪狅, 犠犃犖犌犎狌犻, 犠犃犖犌犠犲狀 犺狅狀犵, 犔犐犝犙犻犪狀犵, 犆犎犈犖犢犪狀, 犢犗犝犎犪犻 狔犪狀, 犑犐犃犗犣犺犻 犼狌狀. 犓犲狔犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔狅犳犕犲犱犻犮犪犾犐犿犿狌狀狅犾狅犵狔狅犳犣犺犲狀犼犻犪狀犵, 犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔犕犲犱犻犮犻狀犲, 犃犳犳犻犾犻犪狋犲犱犎狅狊狆犻狋犪犾狅犳犑犻犪狀犵狊狌犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犣犺犲狀犼犻犪狀犵 00, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪. 犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔犕犲犱犻犮犻狀犲, 犘犲狅狆犾犲 狊犎狅狊狆犻狋犪犾狅犳犡犻犪狀犵狓犻犪狀犵, 犡犻犪狀犵狓犻犪狀犵 4400, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪 [ 犃犅犛犜犚犃犆犜 ] 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 :ToinvestigatetheefectofinhibitingNotchsignalingpathwayontheproliferationandap optosisofesophagealcancercellinesthroughdapt. 犕犈犜犎犗犇犛 :γ secretaseinhibitordaptwasadministratedtoblock NotchsignalingpathwayinculturedesophagealcancercellineEca09andTE.Theproliferationandapoptosisofboth esophagealcancercellinesweredetectedbycck8andflowcytometry (FCM),respectively.Real timepolymerasechain reaction (PCR)wasperformedtoassessmRNAexpressionofNotchreceptorsandNotchtargetgeneHes.Inaddition, cyclindandbcl proteinweredetectedby Westernblot. 犚犈犛犝犔犜犛 :TheproliferationofEca09andTE wassignifi cantlyinhibitedbydaptinatime dependentanddose dependentmanner.underthetreatmentwith5μmol/ldapt,the inhibitoryratioofeca09for7hwas(6.8±5.3)% andtheinhibitoryratioofte for96hwas(59.8±.9)%,while incontrolgrouptheinhibitoryratiowas(7.±.6)% and (7.0±.)% ( 犘 =0.000and 犘 <0.000),respectively. DAPTinducedtheapoptosisofEca09and TE.TheapoptosisrateofEca09and TE intreatmentgroupat4h 基金项目 国家自然科学基金 (8787) 第一作者简介 王旭辉, 男, 湖南湘乡人, 硕士, 主管检验师, 主要从事医学免疫学的临床与基础研究工作 Tel: E mail:[email protected] 通讯作者简介 焦志军, 男, 江苏如皋人, 博士, 副教授, 硕士生导师, 主要从事医学免疫学临床与基础的研究工作 Tel: E mail:[email protected]

2 456 王旭辉, 等 DAPT 对食管鳞癌细胞株增殖与凋亡影响机制探讨 was(8.4±.60)% and (0.±5.90)%,whichwassignificantlyhigherthantheapoptosisrateofEca09andTE incontrolgroupthatwas(0.49±.7)% ( 犘 =0.078)and (8.00±.84)% ( 犘 =0.03).At48h,theapoptosisof Eca09andTE intreatmentgroupwere(.77±5.8)% and(3.4±5.9)% alsosignificantlyincreasedthanthatin controlgroupwhichwas(9.74±3.38)% ( 犘 =0.0364)and (.59±3.7)% ( 犘 =0.0084).ExpressionofNotch, HesandCyclinD wasdown regulatedbydapttreatment.additionaly,daptpromotedtheexpressionofbcl in Eca09.TheexpressionofBcl inte wasinhibitedbydapttreatment. 犆犗犖犆犔犝犛犐犗犖犛 :γ secretaseinhibitordapt caninhibittheproliferationandinducetheapoptosisofesophagealsquamouscarcinomacellinesanditsmechanismsmay involveinhibitingnotchsignalingandregulatingtheexpressionofcyclindandbcl.blockageofnotchsignalingpath waymayoferanewstrategyforthetreatmentofesophagealsquamouscelcarcinoma. [ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ] esophageal;dapt;proliferation;apoptosis;notch;signaltransduction;bloting,western 犆犺犻狀犑犆犪狀犮犲狉犘狉犲狏犜狉犲犪狋,03,0(9): 中图分类号 R735. 文献标识码 A 文章编号 (03) Notch 作为进化过程中高度保守介导细胞间相互作用的信号通路, 在决定细胞命运中发挥着重要作用, 近年来研究发现,Notch 信号活性变化与消化道肿瘤的 [] 发生 发展也有密切的关系 食管癌在我国是一种高发性的恶性肿瘤, 但其发病原因至今仍不完全清楚 已有文献报道, 在食管癌发病过程中存在 Notch 信号通路 [ 3] 异常改变 本研究采用 γ 分泌酶抑制剂 DAPT 阻断食管鳞癌细胞株的 Notch 信号通路, 观察对细胞增殖和凋亡的影响并初步探讨其机制, 以期为食管鳞癌的靶向治疗提供实验依据 材料与方法. 材料食管鳞状细胞癌细胞系 Eca09 和 TE 购自中国科学院上海典型培养物保藏委员会细胞库 ;RP MI640 培养液购自美国 Gibco 公司 ; 优级胎牛血清购自杭州四季青生物工程有限公司 ;CelCountingKit 8 (CCK 8) 购自碧云天公司 ;Trizol 购自美国 Invitro gen 公司 ; 胰蛋白酶购自美国 Sigma 公司 ; 逆转录和 PCR 试剂盒购自大连 TaKaRa 公司 ;FITC Annexin Ⅴ 凋亡检测试剂盒购自 BD 美国公司 ;Bcl Cyclin D 及相应二抗均来自美国 SantaCruz 公司. 方法.. 细胞培养人食管鳞状细胞癌细胞 Eca09 和 TE 培养于含 0% 胎牛血清的 RPMI640 培养基, 并添加 00U/mL 青霉素钠 00U/mL 硫酸链霉素, 于 37 5% CO 饱和湿度条件下培养, 每 3d 更换培养液 次 将对数生长期细胞用含 0.05%EDTA 的 0.5% 胰酶消化液消化后用于相应实验.. 细胞增殖按照 CCK 8 试剂盒说明书进行 经胰酶消化的细胞制成单个悬液并按 0 4 细胞 / 00μL3 复孔接种至 96 孔板, 贴壁 4h 后更换新鲜培养液, 加终浓度为 5 和 0μmol/L 的 DAPT, 再分别培养 和 0h 后弃培养上清, 加含 0% CCK 8 试剂的新鲜无血清 RPMI640 培养液 00μL,37 孵育 h; 吸移上清至新的 96 孔平底比色板, 于 450nm 波长酶标仪读吸光度, 计算细胞增殖抑制率, 描绘细胞增殖曲线 细胞增殖抑制率 (%)= 对照孔吸光度值 - 待测孔吸光度值对照孔吸光度值 00%..3 RT PCR 采用 TrizolReagent 提取各组细胞总 RNA, 按照反转录试剂盒说明进行 cdna 逆转录 ; 采用 SYBRPremixExTaq TM 试剂盒以 cdna 为模板进行实时荧光定量 PCR 扩增反应, 总反应体系为 0μL, 按试剂盒说明书操作 引物 Notch~4 Hes 和 β actin 均由上海生工生物工程公司合成, 以 β actin 为内参相对定量 mrna 的表达水平 [4]..4 蛋白质印迹法对照组或 DAPT 刺激培养的 Eca09 和 TE 细胞经冷 PBS 洗涤 RIPA(Sigma) 细胞裂解液 4 裂解细胞 30min 后,000r/min 离心 0min (r=9.5cm) 吸取上清测定蛋白浓度 取 50μg 总蛋白经 Bio Rad 电泳仪 SDS PAGE 分离后, 电转至 PVDF 膜 在含 5% 脱脂奶粉的 TBS 封闭 h 后, 分别加一抗 ( 鼠抗人 Bcl 单克隆抗体 兔抗人 CyclinD 多克隆抗体, 抗体工作液 000 稀释 )4 孵育过夜 TBS T 洗膜 3 次, 每次 5min, 加入相应来源 HRP 标记的 IgG( 5000 稀释 ) 37 孵育 h 经 SuperSignal 化学发光底物显色成像, 以 β actin 为内参, 应用 QuantityOne 软件分析结果..5 细胞凋亡检测根据 Annexin Ⅴ FITC 细胞凋亡说明书, 分别收集对照组和 DAPT 刺激 0 4 及 48h 培养后的细胞, 预冷 PBS 洗涤后 500r/min 离心 5min(r=cm) 去上清 ; 用 BindingBufer 按 0 6 L - 的密度重悬细胞, 取 00μL 细胞置于流式管中, 加入 Annexin Ⅴ FITC 和碘化丙啶 (PI) 各 5μL, 混匀避光孵育 5min 后流式细胞仪检测 0 4 个细胞 CelQuest 软件分析, 右下象限 Annexin Ⅴ 单阳性细胞为早期凋亡细胞, 右上象限 Annexin Ⅴ 和 PI 双阳性细胞为晚期凋亡或坏死细胞, 计算右下和右上

3 中华肿瘤防治杂志 03 年 0 月第 0 卷第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,October03,Vol.0 No.9 46 犖犇犚犌 狊犻犚犖犃对宫颈癌犎犲犾犪细胞顺铂化疗敏感性影响的研究 杨乐, 张健 刘军叶. 西安市中心医院肿瘤科, 陕西西安 第四军医大学 ( 放射医学教研室 : 刘军叶 ; 生物化学与分子生物学教研室 : 杨乐, 张健, 刘军叶 ), 陕西西安 7003 前沿报道 / 论著 摘要 目的 : 探讨人源 N myc 下游调节基因 (N Mycdownstream regulatedgene,ndrg) 小干扰 RNA(smalin terferingrna,sirna) 对宫颈癌 Hela 细胞的化疗增敏作用 方法 : 利用化学合成的针对 NDRG 特异性 sirna 借助脂质体转染宫颈癌 Hela 细胞 采用 RT PCR 和蛋白质印迹法检测 NDRG mrna 和蛋白在宫颈癌 Hela 细胞的表达情况 通过 MTT 法检测该细胞在顺铂作用下的体外存活率 结果 : 化学合成的 NDRG 特异性 sirnaoligomer 可使 He la 细胞的 NDRG 表达水平明显降低, 增强了顺铂对 Hela 细胞体外生存的抑制能力 转染 Negative controloligomer 的 Hela 细胞与转染 NDRGsiRNA oligomer HSS669 的 Hela 细胞相比, 其存活情况出现明显差异,IC50 值分别为 (6.69±0.33) 和 (.69±0.5) μ g/l, 差异有统计学意义, 狋 =7.3, 犘 =0.003 结论: 抑制 NDRG 表达可以提高宫颈癌 Hela 细胞对顺铂的化疗敏感性, 具有一定的临床应用前景 关键词 宫颈肿瘤 ;NDRG;RNA 干扰 ; 药物耐受性 ; 顺铂 ;Hela 细胞 ; 印迹法, 蛋白质 EfectofNDRGsiRNAsensitivityofcervicalcancerHelacelstocisplatin, 犢犃犖犌犔犲, 犣犎犃犖犌犑犻犪狀, 犔犐犝犑狌狀 狔犲. 犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犗狀犮狅犾狅犵狔, 犡犻 犪狀犆犲狀狋狉犪犾犎狅狊狆犻狋犪犾, 犡犻 犪狀 70003, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪. 犉狅狌狉狋犺犕犻犾犻狋犪狉狔犕犲犱犻犮犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犡犻 犪狀 7003, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪 中华肿瘤防治杂志,03,0(9): [ 犃犅犛犜犚犃犆犜 ] 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 :ToexploretheefectsofsmalinterferingRNA (sirna)specifictondrgonchemosen sitivitytocisplatinofcervicalcancerhelacels. 犕犈犜犎犗犇犛 :ThesiRNAspecificforNDRGwassynthesizedandtrans fectedintocervicalcancer Helacelsbylipofectamine.NDRGexpressionin Helacels wasdetectedby RT PCRand Westernblot.MTTassaywasusedtodeterminetheinhibitoryefectsofcisplatincombinedwithNDRGspecificsiRNA 犻狀狏犻狋狉狅. 犚犈犛犝犔犜犛 :RT PCRand WesternblotanalysisdemonstratedthatHelacelstransfectedwiththeNDRGsiRNA oligomersignificantlyreducedndrgtranscriptandproteinlevels.itincreasedtheinhibitoryefectsofcisplatintohela celsviability 犻狀狏犻狋狉狅.TheIC50forcisplatininHela negativecontrolcelswas(6.69±0.33) μ g L - butwasdecreased almost4 foldto(.69±0.5) μ g L - in Hela NDRG HSS669siRNAcels.Statisticalanalysisshowedthedifer enceoftheic50valuesbetweenthetwogroupstobehighlysignificant(t=7.3, 犘 =0.003). 犆犗犖犆犔犝犛犐犗犖 :Down regulationofndrgresultsinincreasedsensitivitytocisplatinincervicalcancerhelacelsandcanbeusedasapowerful adjuncttoconventionalchemotherapy. [ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ] cervicalneoplasms;ndrg;rnainterference;drugtolerance;cisplatin;helacels;bloting,western 犆犺犻狀犑犆犪狀犮犲狉犘狉犲狏犜狉犲犪狋,03,0(9): 中图分类号 R 文献标识码 A 文章编号 (03) 基金项目 国家自然科学基金 (306006;87490); 西安市卫生局 0 年度科研计划 (J003) 第一作者简介 杨乐, 男, 陕西西安人, 硕士, 主治医师, 主要从事实体肿瘤内科综合治疗的研究工作 E mail:[email protected] 通讯作者简介 刘军叶, 女, 陕西西安人, 博士, 副教授, 主要从事肿瘤生物学的研究工作 E mail:[email protected] 宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一, 发病率位于女性肿瘤第 位, 占女性恶性肿瘤 >50%, 严重威胁 [] 女性健康 作为中晚期宫颈癌治疗的常规标准, 放 [] 疗与含铂方案的化疗已广泛应用于临床 由于具有辐射抗性及化疗耐药的宫颈癌细胞的存在, 目前宫颈癌的综合疗效仍然受限 因而, 宫颈癌的分子生物学和肿瘤相关基因治疗的研究逐渐受到人们的重视 人源 N myc 下游调节基因 (N Mycdownstream regu

4 中华肿瘤防治杂志 03 年 0 月第 0 卷第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,October03,Vol.0 No 高危型犎犘犞感染者负性生活事件暴露与宫颈癌发生相关性分析 袁林徐又先 陈静覃莹莹陈广莉 流行病学研究 / 论著 柳州市人民医院 ( 肝胆外科 : 袁林 ; 妇科 : 徐又先, 陈静, 覃莹莹, 陈广莉 ), 广西柳州 摘要 目的 : 研究高危型人乳头状瘤病毒 (highriskhumanpapilomavirus,hr HPV) 感染者负性生活事件暴露与宫颈癌的相关性 方法 : 对 60 例感染 HR HPV 的宫颈癌患者进行 5 年回顾性研究, 并选取同时期 HR HPV 感染且未患宫颈病变者相应病例的年龄 性别 民族和学历配对的人群为对照组 采用 Logistic 回归分析探讨一般行为因素 饮食及心理因素等对 HR HPV 感染的影响 结果 : 宫颈癌患者血清锌 硒水平分别为 (0.79±0.63) 和 (0.079± 0.035)mg/mL, 均低于对照组的 (.09±0.) 和 (0.08±0.03)mg/mL, 差异有统计学意义, 狋值分别为 和 8.53, 犘值分别为 和 0.00 蛋白质摄入量 蔬果类摄入量高与 HR HPV 相关的宫颈癌呈密切负相关, 并有明显剂量效应关系 服避孕药 首次性交年龄 多个性伴侣与 HR HPV 相关的宫颈癌无关,~0 年有负性生活事件与 HR HPV 相关的宫颈癌相关 结论 : 低硒 低锌 长期蛋白质及蔬菜水果摄入量低 ~0 年有明显的负性生活事件与高危型 HPV 感染的致癌性有协同作用 关键词 宫颈肿瘤 ; 人乳头状瘤病毒 ; 负性生活事件 ; 回顾性研究 犚犲犾犪狋犻狅狀狊犺犻狆犫犲狋狑犲犲狀狀犲犵犪狋犻狏犲犾犻犳犲犲狏犲狀狋狊犲狓狆狅狊狌狉犲犪狀犱犻狀犮犻犱犲狀犮犲狅犳犮犲狉狏犻犮犪犾犮犪狉犮犻狀狅犿犪犪犿狅狀犵犎犘犞犻狀犳犲犮狋犻狅狀 犢犝犃犖犔犻狀, 犡犝犢狅狌 狓犻犪狀, 犆犎犈犖犑犻狀犵, 犙犐犖犢犻狀犵 狔犻狀犵, 犆犎犈犖犌狌犪狀犵 犾犻犘犲狅狆犾犲 狊犎狅狊狆犻狋犪犾狅犳犔犻狌狕犺狅狌, 犔犻狌狕犺狅狌 , 犘. 犚. 犆犺犻狀犪 中华肿瘤防治杂志,03,0(9): [ 犃犅犛犜犚犃犆犜 ] 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 :Tostudytherelationshipbetweennegativelifeeventsexpoureandcervicalcarcinomaamong highriskhumanpapilomavirus(hr HPV). 犕犈犜犎犗犇犛 :A5 yearretrospectivestudywascarriedoutinacohortof60 cervicalcarcinomawithhr HPVinfection,atthesametime: matched (age,gender,ethnic,education)60participants ofhr HPV withoutcervicallesion wereselected.logisticregressionanalysiswasusedtoexploretheassociationsbe tweenbehaviors,diethabitspsychologicalfactorsand HR HPV. 犚犈犛犝犔犜犛 :Serum ZnandSelevelsweresignificantly lowerinpatientswithcervicalcancer[(0.79±0.63)and(0.079±0.035)mg/ml]thanincontrolsubjects[(.09± 0.)and (0.08±0.03)mg/mL].Inthestudycases,themeanofseleniumandzincweresignificantlylowerthan thoseofcontrols( 狋 =6.094, 犘 =0.004; 狋 =8.53, 犘 =0.00).Aclosenegativecorrelationwasfoundbetweentheamount ofproteinandfruitthinningintakewiththeriskofcervicalcarcinomaamonghr HPV,andtherewasdoseresponserela tionship.therewerenorelationshipsbetweenhr HPVandusingcontraceptives,ageatfirstsexualintercourse,multiple sexualpartners,butitrelatedtoonetotenyearspsychictrauma. 犆犗犖犆犔犝犛犐犗犖 :Therewasasynergicintractionbetween HR HPVinfectionandlowselenium,lowzinc,lowproteinandfruitthinningintakesinalongterm,onetotenyearspsy chictrauma. [ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ] cervicalneoplasms;humanpapilomavirus;negativelifeevents;retrospectivestudy 犆犺犻狀犑犆犪狀犮犲狉犘狉犲狏犜狉犲犪狋,03,0(9): 中图分类号 R 文献标识码 A 文章编号 (03) 在本研究中与第一作者贡献相同 基金项目 国家自然科学基金 (860446); 广西科技厅青年科学基金 ( 桂科青 0999) 第一作者简介 袁林, 男, 湖北大冶人, 硕士, 副主任医师, 主要从事恶性肿瘤免疫学的研究工作 Tel: E mail:[email protected] 通讯作者简介 徐又先, 女, 湖北武汉人, 博士, 副主任医师, 副教授, 硕士生导师, 主要从事宫颈肿瘤防治的研究工作 Tel: E mail:[email protected]

5 中华肿瘤防治杂志 03 年 0 月第 0 卷第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,October03,Vol.0 No 鲁北地区子宫内膜癌发病因素病例对照研究 姜娜 贾改珍 孙红卫 张磊磊 刘书敏 张英姿. 滨州医学院附属医院妇产科, 山东滨州 滨州医学院统计与流行病学教研室, 山东滨州 流行病学研究 / 论著 摘要 目的 : 了解子宫内膜癌发病情况及相关因素, 为临床进行预防及治疗提供依据 方法 : 采用病例 对照流行病学分析方法, 对鲁北地区 6 所三级医院 病理确诊的 89 例子宫内膜癌患者及 74 例对照进行统一问卷调查 ; 采用单因素和多因素的 Logistic 回归分析, 以 OR 和 95% 可信区间为评价指标, 分析与子宫内膜癌有关联的危险性因素 结果 : 鲁北地区子宫内膜癌患者 89 例, 其中子宫内膜样腺癌 59 例 (90%); 非子宫内膜样腺癌 ( 浆液性腺癌, 透明细胞癌等 )30 例 (0%) Ⅰ 期患者 9 例 (76%),Ⅱ 期患者 9 例 (0%),Ⅲ~Ⅳ 期患者共 4 例 (4%) 子宫内膜癌的发病年龄为 5~78 岁, 平均发病年龄为 55.4 岁,58~6 岁为发病高峰 已绝经妇女占 6% 单因素分析结果表明, 高血压 (OR=3.67, χ =33.70, 犘 =0.00) 糖尿病 (OR=.9, χ =4.3, 犘 =0.04) 肥胖 (OR =4.63, χ =50.6, 犘 =0.00) 饮用茉莉花茶史 (OR =.63, χ =9.84, 犘 =0.00) 重体力劳动 (OR =.8, χ =9.8, 犘 =0.00) 月经不规律 (OR=.68, χ =07.0, 犘 =0.00) 口服中草药调经 (OR=5., χ =68.8, 犘 =0.00) 绝经年龄 (OR =.0, χ =.56, 犘 =0.00) 未产 (OR=9.07, χ =5.84, 犘 =0.00) 和一级亲属恶性肿瘤家族史 (OR=.9, χ =., 犘 =0.00) 等可增加子宫内膜癌发病风险 ; 使用宫内节育器 (intrauterinedevice,iud) 可降低子宫内膜癌发病风险,OR=0.9, χ = 37., 犘 =0.00 多因素 Logistic 回归分析结果表明, 高血压 (OR=3.69,95%CI:.89~7.) 肥胖 (OR=3.06, 95%CI:.6~5.75) 月经不规律 (OR=4.53,95%CI:.3~9.60) 口服中草药调经 (OR=9.3,95%CI:.9~ 9.76) 绝经年龄晚 (OR=.3,95%CI:.06~.0) 和一级亲属恶性肿瘤家族史 (OR=5.0,95%CI:.3~.73) 是内膜癌发病的危险因素 ; 使用 IUD 是内膜癌的保护性因素,OR=0.84,95%CI:0.79~0.88 结论: 高血压 肥胖和绝经年龄等因素可影响子宫内膜癌的发生, 应针对相关危险因素采取相应的预防措施 关键词 子宫内膜肿瘤 / 流行病学 ; 病例对照研究 ; 危险因素 ; 保护因素 中华肿瘤防治杂志,03,0(9): 犆犪狊犲 犮狅狀狋狉狅犾狊狋狌犱狔狅狀狉犻狊犽犳犪犮狋狅狉狊狅犳犲狀犱狅犿犲狋狉犻犪犾犮犪狀犮犲狉犻狀狀狅狉狋犺犲狉狀犛犺犪狀犱狅狀犵犪狉犲犪 犑犐犃犖犌犖犪, 犑犐犃犌犪犻 狕犺犲狀, 犛犝犖犎狅狀犵 狑犲犻, 犣犎犃犖犌犔犲犻 犾犲犻, 犔犐犝犛犺狌 犿犻狀, 犣犎犃犖犌犢犻狀犵 狕犻. 犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犗犫狊狋犲狋狉犻犮狊犪狀犱犌狔狀犲犮狅犾狅犵狔, 犃犳犳犻犾犻犪狋犲犱犎狅狊狆犻狋犪犾狅犳犅犻狀狕犺狅狌犕犲犱犻犮犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犅犻狀狕犺狅狌 56600, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪. 犚犲狊犲犪狉犮犺犛犲犮狋犻狅狀狅犳犛狋犪狋犻狊狋犻犮狊犪狀犱犈狆犻犱犲犿犻狅犾狅犵狔狅犳犅犻狀狕犺狅狌犕犲犱犻犮犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犅犻狀狕犺狅狌 56600, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪 [ 犃犅犛犜犚犃犆犜 ] 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 :Toexplorethemorbidityandrelevantfactorsofendometrialcancer,andtoprovideevidence forclinicpreventionandtreatment. 犕犈犜犎犗犇犛 :Thedataof89endometrialcarcinomaspathologicalydiagnosedinsix hospitalsinnorthernshandongareabetween and0 0 0andacontrolgroupof74healthypeoplewere analyzeduniformlywithacasecontrol studybasedonaepidemiologicalsurvey.weanalyzedthedatausingsinglefactora nalysisandmultivariateregressionanalysiswithorand95% confidenceintervalasevaluationindextolearntheriskfac torsassociatedwithendometrialcancer. 犚犈犛犝犔犜犛 :ThenumberofendometrialcancerinnorthernShandongareawas89. Thenumberofendometrioidcancerwas59(90%),andthenumberofnon endometrioidcancerwas30(0%).thenum berofpatientswithstageⅠ was9(76%),thenumberofpatientswithstageⅡ was9(0%),thenumberofpatients withstageⅢ and Ⅳ was4(4%).theageofthepatientsrangedfrom5to78withthemeanof55.4,andthepeak onsetagewas58to6.thenumberofpostmenopausalwomenaccountedfor6%.thesinglefactoranalysisshowedthat hypertension(or =3.67, χ = 33.70, 犘 =0.00),diabetesmelitus(OR=.9, χ =4.3, 犘 =0.04),obesity(OR=4.63, χ =50.6, 犘 =0.00),takingjasminetea(OR=.63,=9.84, 犘 =0.00),heavyphysicallabour(OR=.8, χ =9.8, 犘 =0.00),irregularmenstruation(OR=.68, χ =07.0, 犘 =0.00),takingChineseherbalmedicine (OR=5., 第一作者简介 姜娜, 女, 山东烟台人, 硕士, 主要从事妇科肿瘤的临床研究工作 E mail:[email protected] 通讯作者简介 张英姿, 女, 山东烟台人, 硕士, 教授, 硕士生导师, 主要从事妇科肿瘤的临床研究工作 E mail:[email protected]

6 470 姜娜, 等鲁北地区子宫内膜癌发病因素病例对照研究 χ =68.8, 犘 =0.00),ageofmenopause(OR=.0, χ =.56, 犘 =0.00),nulipara(OR=9.07, χ =5.84, 犘 = 0.00),familyhistoryofcancer(OR=.9, χ =., 犘 =0.00)couldincreasetheriskofendometrialcancer;andtheu singofintra uterinedevicecouldreducetheriskofendometrialcancer(or=0.9, χ =37., 犘 =0.00).Multiplefactors regressionanalysisshowedthattheor (95%CI)ofhypertension,obesity,irregularmenstruation,takingChineseherbal medicineforirregularmenstruation,ageofmenopause,familyhistoryofcancerwere3.69(.89-7.),3.06( ),4.53( ),9.3( ),.3(.06-.0),5.0(.3-.73)respectively.theor (95%CI) ofintra uterinedevicewas0.84( )andintra uterinedevicewastheprotectivefactorofendometrialcancer. 犆犗犖犆犔犝犛犐犗犖 :Factorssuchashypertension,obesity,ageofmenopausemaybetheinfluencefactorsonendomtialcancer andearlypreventiveproceduresshouldbetaken. [ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ] endometrialneoplasms/epidemiology;case controlstudy;riskfactor;protectivefactor 犆犺犻狀犑犆犪狀犮犲狉犘狉犲狏犜狉犲犪狋,03,0(9): 中图分类号 R 文献标识码 A 文章编号 (03) 近年来, 世界范围内子宫内膜癌的发病率均有上 [ ] 升, 并且具有年轻化趋势 但是子宫内膜癌的病因仍不十分清楚 因此, 了解子宫内膜癌发病的相关因素具有重要意义 本研究通过对鲁北地区女性流行病问卷调查, 了解子宫内膜癌发病情况及相关因素, 为临床早期诊断及早期治疗提供依据 对象与方法. 研究对象 收集鲁北地区 6 所三级及以上医院 ( 滨州医学院附属医院 滨州市人民医院 滨州市第二人民医院 东营市人民医院 东营市胜利油田医院和德州市人民医院 ) 手术治疗 且临床病理资料完整的子宫内膜癌患者共 30 例, 其中死亡 例, 给予剔除, 纳入统计的子宫内膜癌患者为 89 例 其中, 滨州医学院附属医院 90 例, 滨州市人民医院 60 例, 滨州市第二人民医院 0 例, 东营市人民医院 50 例, 东营市胜利油田医院 6 例, 德州市人民医院 53 例 取年龄相差 <5 岁 居住同一地区 相同职业 排除子宫肌瘤及其他恶性肿瘤的健康女性共 74 名作为对照组进行统计. 研究方法 调查时间 调查方法采用回顾性分析 建立问卷调查表和面对面访问患者及对照组 调查内容包括 :) 一般情况 : 年龄 身高 体质量 职业 文化程度 经济状况 居住环境和体力劳动程度等 ;) 生活习惯 : 饮茶史 吸烟和被动吸烟及饮酒史等 ;3) 月经婚育史 : 月经初潮年龄 绝经年龄 月经情况 分娩及流产次数 累计哺乳时间以及避孕措施等 ; 4) 既往史和家族史 对照组要求行彩超 妇科检查 宫颈涂片 ( 或活检 ) 以及诊断性刮宫等检查, 除外妇科恶性肿瘤, 对怀疑有恶性肿瘤者予以剔除.3 统计学方法 全部问卷经整理核对并录入 EXCEL003, 采用 单因素 ( 狋检验 χ 检验 ) 和多因素的 Logistic 回归分 析, 以 OR 和 95% 可信区间为评价指标,SPSS3.0 统计软件进行分析 检验水准 α=0.05 结果. 病例组与对照组的均衡性检验两组的均衡性检验见表 病例组年龄(55.4± 6.35) 岁, 对照组年龄 (55.03±5.864) 岁 经狋检验, 两组年龄差异无统计学意义, 犘 =0.5 表 89 例子宫内膜癌患者与 74 名对照组均衡性检验结果 ( 狀 ) 因素 对照组 病例组 χ 值 犘值 年龄 ( 岁 ) ~ ~ 职业 农民 非农民 居住地农村 08 5 城市 病例组的一般情况病例组的病理诊断分布包括子宫内膜样腺癌 59 例 (90%), 非子宫内膜样腺癌 ( 包括浆液性腺癌 透明细胞癌和鳞腺癌等 )30 例 (0%) 按照 988 年 FIGO 标准,Ⅰ 期 9 例 (76%),Ⅱ 期 9 例 (0%),Ⅲ~Ⅳ 期 4 例 (4%) 不规则阴道流血为主要临床表现.3 单因素分析变量定义如下, 子宫内膜癌患者中肥胖 :BMI<8 =0,BMI 8=; 高血压 : 否 =0, 是 =; 糖尿病 : 否 =0, 是 =; 从事重体力劳动 ( 指除了从事一般家务还从事大量农田等体力劳动 ): 否 =0, 是 =; 饮用茉莉花茶史 : 累计时间 <3 年 =0, 累计时间 3 年 =; 月经不规律 ( 既

7 中华肿瘤防治杂志 03 年 0 月第 0 卷第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,October03,Vol.0 No 实验研究 / 论著 右丙亚胺对表柔比星诱导大鼠心肌损伤干预机制研究 吴晖 欧阳取长 李晶 肖华伍 黄小平. 湖南省肿瘤医院 中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院乳腺内科, 湖南长沙 湖南中医药大学生理教研室, 湖南长沙 4008 摘要 目的 : 比较不同剂量右丙亚胺对表柔比星诱导大鼠心肌损伤的干预作用及可能机制 方法 :35 只 SD 大鼠随机分 5 组, 每组 7 只 对照组 : 于大鼠双侧腹腔分别注射生理盐水 5mL/kg, 间隔时间为 30min, 隔日 次, 共 4 次 (7d); 模型组 ( 表柔比星 + 生理盐水 ): 大鼠腹腔内注射表柔比星 4.5 mg/kg, 隔日 次, 共 4 次 (7d), 注射表柔比星前 30 min 于另一区域腹腔内注射生理盐水 5mL/kg; 表柔比星 + 低 中 高剂量右丙亚胺组 : 大鼠腹腔内注射表柔比星 4.5mg/kg, 隔日 次, 共 4 次 (7d), 注射表柔比星前 30min 于另一区域腹腔内注射右丙亚胺 和 90mg/kg, 隔日 次, 共 4 次 (7d) 处死大鼠后检测各组大鼠心肌组织微量丙二醛(MDA) 含量 总超氧化物歧化酶 (T SOD) 活性 血浆乳酸脱氢酶 (LDH) 及肌钙蛋白 I(cTnI) 水平, 观察心肌组织病理形态学改变及心肌细胞凋亡情况 结果 : 模型组较对照组 SOD 活性降低, 分别为 (75.0±5.4) 和 (0.8±3.)U/mL, 犉 =5.7, 犘 =0.00;MDA 含量升高, 分别为 (3.60±.88) 和 (5.8±3.4)nmol/mg, 犉 =7.3, 犘 =0.00; 血浆 LDH 升高, 分别为 (5.7±0.58) 0 3 和 (.3±0.47) 0 3 U/L, 犉 =3.7, 犘 =0.00;cTnI 升高, 分别为 (483.38±5.07) 和 (64.6±5.07) ρ g/ml, 犉 =0.3, 犘 =0.00; 心肌细胞病理评分升高, 分别为.70±0.0 和 0, 犉 =8.65, 犘 =0.00; 凋亡指数明显升高, 分别为 (66.54±3.46)% 和 (.55±0.74)%, 犉 =6.86, 犘 =0.00 而加用右丙亚胺各组均较模型组提高 SOD 活性, 降低 MDA 血浆 LDH 及 ctni 含量, 减少心肌病理评分及心肌细胞凋亡指数, 犘 <0.0 或犘 <0.05 结论: 右丙亚胺对表柔比星诱导的大鼠心肌损伤有保护作用, 其机制可能与减少氧自由基的产生 降低脂质过氧化物含量以及调节心肌细胞凋亡机制有关 关键词 表柔比星 ; 右丙亚胺 ; 心脏毒性 ; 细胞凋亡 ; 大鼠 中华肿瘤防治杂志,03,0(9): 犉狌狀犮狋犻狅狀犪狀犱犿犲犮犺犪狀犻狊犿狅犳犱犲狓狉犪狕狅狓犪狀犲犻狀狋犲狉狏犲狀狋犻狀犵犿狔狅犮犪狉犱犻犪犾犱犪犿犪犵犲犻狀犱狌犮犲犱犫狔犲狆犻狉狌犫犻犮犻狀犻狀狉犪狋狊 犠犝犎狌犻, 犗犝犢犃犖犌犙狌 犮犺犪狀犵, 犔犐犑犻狀犵, 犡犐犃犗犎狌犪 狑狌, 犎犝犃犖犌犡犻犪狅 狆犻狀犵. 犅狉犲犪狊狋犆犪狀犮犲狉犜狉犲犪狋犿犲狀狋犆犲狀狋狉犲, 犎狌狀犪狀犘狉狅狏犻狀犮犻犪犾犜狌犿狅狉犎狅狊狆犻狋犪犾, 犃犳犳犻犾犻犪狋犲犱犜狌犿狅狉犎狅狊狆犻狋犪犾狅犳犡犻犪狀犵狔犪犕犲犱犻犮犪犾犛犮犺狅狅犾狅犳犆犲狀狋狉犪犾犛狅狌狋犺犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犆犺犪狀犵狊犺犪 4003, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪. 犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犘犺狔狊犻狅犾狅犵狔, 犎狌狀犪狀犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔狅犳犆犺犻狀犲狊犲犕犲犱犻犮犻狀犲, 犆犺犪狀犵狊犺犪 4008, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪 [ 犃犅犛犜犚犃犆犜 ] 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 :Tostudytheinterventfunctionofdiferentdosesofdexrazoxaneon myocardialinjuryin ducedbyepirubicininratsanditsmechanism. 犕犈犜犎犗犇犛 :Thirty fivesdratswererandomlydividedintofivegroups,each ofseven.theratsincontrolgroupweregivenbilateralyintraperitonealinjectionofsaline5 ml/kg,theintervaltimeof 30min,everyotherday,4times(7d);Inmodelgrouptheratsweregivenintraperitonealinjectionepirubicin4.5mg/kg everyotherday,4times(7d),injectiontabledexrazoxane30minbeforeepirubicininotherareaintraperitonealinjectionof saline5ml/kg;inepirubicinandlow,mediumandhighdosedexrazoxanegrouptheratsweregivenintraperitonealinjec tionofepirubicin4.5mg/kg,everyotherday,4times(7d),thedexrazoxanewasinjected30minbeforeepirubicininjec tioninanotherareaintraperitonealy45,67.5,90mg/kg,everyotherday,4times(7d).thebiochemicalmarkersofmyo cardialtissueofratsineachgroupweredetected,whichincludedatraceofmyocardialtissuemalondialdehyde (MDA) contentandtotalsuperoxidedismutase(t SOD)activity,plasmalactatedehydrogenase(LDH)andtroponinI(cTnI)lev els,andobservemyocardialpathologicalchangesandcardiomyocyteapoptosis. 犚犈犛犝犔犜犛 :TheSODactivitywassignifi cantlylowerinmodelgroup (75.0±5.4)U/mLthanthatofthecontrolgroup (0.8±3.)U/mL,( 犉 =5.7, 基金项目 湖南省卫生厅科研计划 (B0 094) 第一作者简介 吴晖, 女, 湖南长沙人, 副主任医师, 主要从事乳腺癌内科治疗的基础与临床研究工作 Tel: E mail:[email protected] 通讯作者简介 欧阳取长, 男, 湖南娄底人, 博士, 主任医师, 主要从事乳腺癌内科治疗的基础与临床研究工作 Tel: E mail:[email protected]

8 474 吴晖, 等右丙亚胺对表柔比星诱导大鼠心肌损伤干预机制研究 犘 =0.00),MDAcontentwasincreased,(3.60±.88)nmol/mg 狏狊 (5.8±3.4)nmol/mg,( 犉 =7.3, 犘 =0.00).Plas maldh [(5.7±0.58) 0 3 U/L 狏狊 (.3±0.47) 0 3 U/L, 犉 =3.7, 犘 =0.00]andcTnIcontent [(483.38± 5.07) ρ g/ml 狏狊 (64.6±5.07) ρ g/ml, 犉 =0.3, 犘 =0.00],myocardialcelpathologyscore(.70±0.0 狏狊 0, 犉 = 8.65, 犘 =0.00)andapoptoticindex [(66.54±3.46)% 狏狊 (.55± 0.74)%, 犉 =6.86, 犘 =0.00]weresignificantly higherinepirubicinmodelgroupthanthatinthecontrolgroup ( 犘 <0.0).SODactivitywashigher,MDA,plasmaLDH andctnicontentwerelowerineachdexrazoxanegroupthanthatinepirubicinmodelgroup,thatreducedmyocardialpa thologyscoreandmyocyteapoptosisindex( 犘 <0.0or 犘 <0.05). 犆犗犖犆犔犝犛犐犗犖 :Dexrazoxanehasaprotectiveefectto myocardialinjuryinducedbyepirubicinininratsandthemechanism maybetoregulatemyocardialapoptosismechanism andreducethegenerationofoxygenfreeradicalsandlipidperoxidecontent. [ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ] epirubicin;dexrazoxane;cardiotoxicity;apoptosis;mice 犆犺犻狀犑犆犪狀犮犲狉犘狉犲狏犜狉犲犪狋,03,0(9): 中图分类号 R73-3 文献标识码 A 文章编号 (03) 表柔比星等蒽环类抗肿瘤抗生素广泛应用于治疗血液肿瘤和实体肿瘤, 但其在化疗过程中诱导的心脏毒性限制了其使用剂量, 也因此限制了患者从持续使用蒽环类药物中获益 目前国内外已有动物实验和临床研究表明, 应用右丙亚胺 (dexrazoxane,dex) 可以 [ ] 改善使用蒽环类药物治疗时对心脏的损害作用 本研究以表柔比星致大鼠心肌损伤为研究基础, 给予不同剂量右丙亚胺干预治疗, 通过检测各组大鼠心肌损伤生化指标 心肌组织病理形态学改变及心肌细胞凋亡情况来探讨右丙亚胺保护心肌组织的机制, 并比较不同剂量组的右丙亚胺对心肌组织保护的差异, 为临床用药提供实验依据 材料与方法. 动物 雌性健康 SD 大鼠 35 只, 体质量 (80±30)g, 购自湖南省疾病控制中心实验动物中心 合格证号 : SCXK(0 0004) 饲养于室温 5 湿度 45% 的环境. 主要试剂与仪器 微量丙二醛 (malondialdehyde,mda) 总超氧化物歧化酶 (suporoxidedismutase,sod) 乳酸脱氢酶 (lactatedehydrogenase,ldh) 及大鼠肌钙蛋白 Ⅰ (ctni) 测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所 ; TUNEL 试剂盒购自天津灏洋生物制品科技有限公司 紫外分光光度计产地为瑞士, 型号为 VATR OPEC4300PRO; 超低温冰箱产地为美国, 型号为 NU 663W34; 低速离心机产地为德国, 型号为 Biofuge Primo; 显微镜成像系统产地为日本, 型号为 Olympus BX5; 石蜡切片机产地为德国, 型号为 Leica RM35.3 药物 盐酸表柔比星 (E ADM) 由辉瑞制药 ( 无锡 ) 有限公司提供, 规格 :0 mg/ 支, 批准文号 : 国药准字 H , 产品批号 :0 56 右丙亚胺 (DEX) 由江苏奥赛康药业有限公司提供, 规格 :50 mg/ 瓶, 批准文号 : 国药准字 H00657, 产品批号 :E00.4 方法.4. 实验分组及给药方法 SD 大鼠随机分为对照组 模型组 ( 表柔比星 + 生理盐水 ) 表柔比星 + 低剂量右丙亚胺组 表柔比星 + 中剂量右丙亚胺组和表柔比星 + 高剂量右丙亚胺组 5 组, 每组 7 只 末次给药后 4h 采血 处死大鼠及采集标本 ) 对照组 : 于 SD 大鼠双侧腹腔分别注射生理盐水 5 ml/kg, 间隔时间为 30 min, 隔日 次, 共 4 次 (7d) ) 模型组 ( 表柔比星 + 生理盐水 ):SD 大鼠腹腔内注射表柔比星 4.5 mg/kg, 隔日 次, 共 4 次 (7d); 注射表柔比星前 30min 于另一区域腹腔内注射生理盐水 5mL/kg 3) 表柔比星 + 低剂量右丙亚胺组 :SD 大鼠腹腔内注射表柔比星 4.5 mg/kg, 隔日 次, 共 4 次 (7d); 注射表柔比星前 30min 于另一区域腹腔内注射右丙亚胺 45 mg/kg, 隔日 次, 共 4 次 (7d) 4) 表柔比星 + 中剂量右丙亚胺组 :SD 大鼠腹腔内注射表柔比星 4.5 mg/kg, 隔日 次, 共 4 次 (7d); 注射表柔比星前 30min 于另一区域腹腔内注射右丙亚胺 67.5 mg/kg, 隔日 次, 共 4 次 (7d) 5) 表柔比星 + 高剂量右丙亚胺组 :SD 大鼠腹腔内注射表柔比星 4.5mg/kg, 隔日 次, 共 4 次 (7d); 注射表柔比星前 30 min 于另一区域腹腔内注射右丙亚胺 90mg/kg, 隔日 次, 共 4 次 (7d).4. 观察及检测指标 ) 一般情况 : 每天观察各组大鼠的毛发 进食及活动等情况, 记录生存数, 隔天测体质量 次 ) 血浆 LDH 及 ctni 水平测定 : 末次给药后 4h 收集血液, 抗凝, 分离血浆,-0 以下保存 速率法测定血浆 LDH 含量, 放射免疫法定量分析测定 ctni 3) 心肌组织 MDA 含量和 SOD 活性的测定 :0% 心肌组织匀浆, 离心后取上清液, 黄嘌呤氧化酶法测定 SOD 活性, 硫代巴比妥酸法测定 MDA 的

9 478 倪晶, 等 SS PEI/ 核酸纳米复合物的构建分析 实验研究 / 论著 犛犛 犘犈犐 / 核酸纳米复合物的构建分析 倪晶 夏伟 王国玉 庄菊花 胡翠华. 上海市第七人民医院核医学科, 上海 上海市普陀区人民医院核医学科, 上海 摘要 目的 : 构建一种可生物降解的基因载体, 并观察其体外转染 DNA/siRNA 的效率和细胞毒性 方法 : 采用低分子质量 PEI 与 3,3 二硫代二丙酸在催化剂作用下合成可降解的 PEI 衍生物 SS PEI, 用红外波谱仪和核磁波谱仪分析其化学结构 ; 动态光散射分析动态光散射 (dynamiclightscatering,dls)ss PEI/DNA 和 SS PEI/siRNA 的粒径 ; 采用流式细胞技术 (FCM) 和荧光激活细胞分类术 (FACS) 分别分析 SS PEI 对 GFP DNA 和 FAM dsrna 的转染率 ; 通过 GFP 表达水平分析 SS PEI 对 GFP 质粒和 GFP sirna 的转染效率 ; 采用考马斯蓝法分析 SS PEI/DNA 和 SS PEI/siRNA 的细胞毒性 结果 : 红外波谱和核磁波谱与 SS PEI 理论波谱一致 ;DLS 结果显示,SS PEI/DNA 复合物粒径为 95~75nm,SS PEI/siRNA 平均粒径约 00nm FCM 结果显示,SS PEI 对 DNA 的最大转染率为 (5.±.3)%, 稍低于 HWPEI 组的 (33.8±3.)%;SS PEI/GFP DNA 转染后 GFP 的表达水平与 HWPEI 转染组接近 (50±7)FI(A.U.)/mg 蛋白狏狊 (68±8)FI(A.U.)/mg 蛋白, 差异无统计学意义, 狋 =.6, 犘 =0.8; 细胞毒性分析显示,SS PEI/DNA 组细胞活力 (89±5.)%, 显著高于 HWPEI/DNA 组的 (70±4.9)%, 差异有统计学意义, 狋 =4.6, 犘 =0.00 FACS 结果显示,SS PEI 对 FAM dsrna 的转染率为 (86.5±.5)%;SS PEI 转染 GFP sirna, 靶基因 GFP 被显著敲除, 相对表达水平为 (4±3.5)FI(A.U.)/mg 蛋白, 与对照组的 (79±0.8)FI(A.U.)/mg 蛋白相比差异有统计学意义, 狋 =5.64, 犘 =0.004 结论:SS PEI 的合成可明显提高装载核酸的效率, 具有低毒和高效等特点 关键词 聚乙烯亚胺 ;DNA; 小干扰 RNA; 质粒 ; 流式细胞术 犘狉犲狆犪狉犪狋犻狅狀犪狀犱犪狀犪犾狔狊犻狊犲狅犳犛犛 犘犈犐 / 狀狌犮犾犲犻犮犪犮犻犱犮狅犿狆犾犲狓犲狊 犖犐犑犻狀犵, 犡犐犃犠犲犻, 犠犃犖犌犌狌狅 狔狌, 犣犎犝犃犖犌犑狌 犺狌犪, 犎犝犆狌犻 犺狌犪 中华肿瘤防治杂志,03,0(9): 犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犖狌犮犾犲犪狉犕犲犱犻犮犻狀犲, 犛犺犪狀犵犺犪犻犛犲狏犲狀狋犺犘犲狅狆犾犲 狊犎狅狊狆犻狋犪犾, 犛犺犪狀犵犺犪犻 0037, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪. 犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犖狌犮犾犲犪狉犕犲犱犻犮犻狀犲, 犛犺犪狀犵犺犪犻犘狌狋狌狅犃狉犲犪犘犲狅狆犾犲 狊犎狅狊狆犻狋犪犾, 犛犺犪狀犵犺犪犻 00060, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪 [ 犃犅犛犜犚犃犆犜 ] 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 :TosynthesizeabioreduciblegenevectorSS PEIandtoanalyzeitscytotoxicityandcapacityofbind ingdnaandsirna. 犕犈犜犎犗犇犛 :SS PEIwassynthesizedbychemicalcouplingofthe3 dithiobispropanoicacidwiththelowmolec ularweightpei(800da)viaanedc/nhsactivationreaction.theh NMRspectraandFouriertransforminfrared(FTIR)spectra ofthess PEIpolymerweredetected,respctrively.ThesizeofSS PEI/DNAandSS PEI/siRNA weremeasuredbybynamiclight scatering(dls).thetransfectionratesofss PEIoftransfectingDNAandsiRNAweretestedbyflowchtometry(FCM)andfluo rescence activatedcelsorting(facs),respectively.expressionlevelofgfpproteinwasmeasuredtoevaluatethetransfectioncapaci tyofss PEImediatingDNAandsiRNAdelivery.ThecytotoxicityofSS PEIwasdeterminedusingcoomassiebluestaining. 犚犈 犛犝犔犜犛 :H NMRandFTIRspectraofthepolymerwereinfulaccordancewiththeexpectedstructure.ThesizesofSS PEI/DNA wereintherangefrom95to75nmandtheaveragediameterofss PEI/siRNAwas00nm.FCMindicatedthatthehighesttrans fectionrateofss PEI/DNAwas(5.±.3)% whichwasslightlylowerthanthatofthehwpei/dna (33.8±3.)%.Theex pressionlevelofgfpproteininthegroupss PEI/GFP DNAwassimilartothatofthegroupHWPEI/GFP DNA [(50±7)FI(A. U.)/mgproteinvs(68±8)FI(A.U.)/mgprotein; 狋 =.6, 犘 =0.8].However,thecelviabilityofthegroupSS PEI/DNAwas significantlyhigherthanthatofthegrouphwpei/dna [(89±5.)% 狏狊 (70±4.9)%, 狋 =4.6, 犘 =0.00].FACSindicatedthat transfectionrateofss PEI/siRNAwas(86.5±.5)%,andtheexpressionlevelofGFPproteinaftertransfectingSS PEI/GFP sir NAwasnotablydescendedthanthatofthecontrolgroup,whichwere(4±3.5)and(79±0.8)FI(A.U.)/mgprotein,( 狋 =5.64, 犘 =0.004). 犆犗犖犆犔犝犛犐犗犖 :SS PEIcanenhancetheeficacyofloadingDNAandsiRNAanditissafeandinhighperformance. 基金项目 上海市第七人民医院 七院新星 基金 (XX0 08) 第一作者简介 倪晶, 女, 上海人, 技师, 主要从事分子生物学的研究工作 E mail:[email protected] 通讯作者简介 夏伟, 男, 河南商丘人, 博士, 主治医师, 主要从事分子生物学与分子影像学的研究工作 E mail:[email protected]

10 484 黄旭晖, 等小鼠肝癌休眠模型的建立 实验研究 / 论著 小鼠肝癌休眠模型的建立 黄旭晖 王昌俊 张晓文 林举择 付婷婷. 广东省人民医院 广东省医学科学院 广东省老年医学研究所中医科, 广东广州 广州市体育科学研究所, 广东广州 摘要 目的 : 建立小鼠肝癌休眠模型并验证休眠细胞的存在 方法 :30 只昆明种小鼠均右侧腋下接种 0 6 个 H 腹水型肝癌细胞, 常规喂养 周, 第 5 天选择表皮肿瘤直径 >0.5cm 的小鼠, 进行姑息性手术, 将肉眼可见肿瘤组织全部切除 手术后的小鼠再常规喂养 8 周, 如接种处未见肿瘤组织生长, 即认为肝癌小鼠休眠模型建立成功 ( 按照平均寿命折算, 小鼠生存期 8 周, 即相当于人类寿命 5 年 ) 其后模型小鼠分为复发对照组和复发实验组, 复发对照组小鼠常规喂养 ; 复发实验组模型小鼠给予连续外伤刺激 6 周后处死全部模型小鼠, 接种部位取材, 组织固定和 HE 染色观察肿瘤再生成情况确定休眠细胞的存在 结果 : 肝癌细胞接种于小鼠并行手术后, 有 0% 小鼠成瘤,80% 处于休眠状态 复发实验组给予连续外伤刺激 6 周后,00% 小鼠成瘤, 而复发对照组只有 8.3%, 两组差异有统计学意义, 犘 =0.000 结论 : 本方法成功建立了小鼠肝癌休眠模型, 并用外伤刺激引起肝癌休眠细胞增殖, 验证了休眠肿瘤细胞在体内的存在 关键词 肝肿瘤 ; 休眠 ; 疾病模型, 动物 ; 小鼠 犈狊狋犪犫犾犻狊犺犿犲狀狋狅犳狋狌犿狅狉犱狅狉犿犪狀犮狔犿狅犱犲犾狅犳犺犲狆犪狋狅犿犪犻狀犿狅狌狊犲 犎犝犃犖犌犡狌 犺狌犻, 犠犃犖犌犆犺犪狀犵 犼狌狀, 犣犎犃犖犌犡犻犪狅 狑犲狀, 犔犐犖犑狌 狕犲, 犉犝犜犻狀犵 狋犻狀犵 中华肿瘤防治杂志,03,0(9): 犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犜狉犪犱犻狋犻狅狀犪犾犆犺犻狀犲狊犲犕犲犱犻犮犻狀犲, 犌狌犪狀犵犱狅狀犵犌犲狉犻犪狋狉犻犮犐狀狊狋犻狋狌狋犲, 犌狌犪狀犵犱狅狀犵犘犲狅狆犾犲 狊犎狅狊狆犻狋犪犾, 犌狌犪狀犵犱狅狀犵犃犮犪犱犲犿狔狅犳犕犲犱犻犮犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊, 犌狌犪狀犵狕犺狅狌 50080, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪. 犌狌犪狀狕犺狅狌犐狀狊狋犻狋狌狋犲狅犳犛狆狅狉狋狊犛犮犻犲狀犮犲, 犌狌犪狀犵狕犺狅狌 50650, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪 [ 犃犅犛犜犚犃犆犜 ] 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 :Toestablishamousehepatomadormancymodelandprovidetheprooffortheexistenceof dormanttumorcels. 犕犈犜犎犗犇犛 :ThehepatomaHcels( 0 6 cels)wereinjectedintoasubcutaneousofrightarmpit ofeachkunming (KM)mice.Then,paliativesurgerywasperformedinthemicewhichthediameteroftumorwaslarge than0.5cmatthe5thdayafterinoculation.afteranother8weeksthemicewithoutrecurrencewereregardedasthesuc cessfulhepatomadormancymodel.thosehepatomadormancymicewererandomlydividedintotwogroups,therecurrence groupandthecontrolgroup.then,cutofthetailofmiceintherecurrencegroupmmevery4daysandrepeatedfor5 times.themiceinbothgroupswerefednormalyduringthesametime.duringthetime,ifthetumorrecurrenceinmouse thetumorsizewasmeasured.thetumorcelswereassessedbyhistopathologywhenthemiceintwogroupsweresacri ficedin6weeks. 犚犈犛犝犔犜犛 :Theresultsshowedthatthesuccessrateofhepatomadormancymodelwas80%.Therecur rencerateofhepatomainrecurrencegroupwas00%,andincontrolgroupwas8.3% respectively.therecurrencerateof recurrencegroupwassignificantlyhigherthanthatincontrolgroup ( 犘 =0.000). 犆犗犖犆犔犝犛犐犗犖 :Themousehepatoma dormancymodelwassuccessfulyestablishedbypaliativesurgery,andtherecurrenceofhepatomacouldbeinducedby cutingofthetailofmicerepeatedly. [ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ] liverneoplasms;dormancy;diseasemodels,animal;mice 犆犺犻狀犑犆犪狀犮犲狉犘狉犲狏犜狉犲犪狋,03,0(9): 中图分类号 R735.7 文献标识码 A 文章编号 (03) 肿瘤休眠是指肿瘤细胞在宿主体内持续存在而没有明显生长的一种状态 许多临床报道证实, 在肿瘤 基金项目 广东省中医药局建设中医药强省科研课题 (0049) 通讯作者简介 黄旭晖, 男, 广东广州人, 硕士, 主治医师, 主要从事中西医结合治疗肿瘤的临床研究工作 Tel: E mail:[email protected] 原发灶切除以后, 可有少量休眠的肿瘤细胞在体内存在, 这些仍具有增殖分裂能力的休眠肿瘤细胞, 长期不被机体识别消灭, 又没有出现明显的增殖, 但可能在几年至几十年后, 由于各种诱因被再次激活并开始增殖, [] 从而导致肿瘤的复发转移 体内存在潜伏休眠肿瘤细胞是导致肿瘤复发转移的重要原因, 因此肿瘤休眠与肿瘤的预后密切相关 研究肿瘤细胞在体内休眠的

11 中华肿瘤防治杂志 03 年 0 月第 0 卷第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,October03,Vol.0 No 实验研究 / 论著 鸦胆子油乳对犎犲狆 细胞增殖与凋亡诱导作用的研究 马斌娟 卫旭东 高江霞 李娟 3 何健. 宁夏医科大学临床医学院, 宁夏银川 甘肃省人民医院耳鼻咽喉头颈外科, 甘肃兰州 兰州大学基础医学院实验中心, 甘肃兰州 摘要 目的 : 探讨鸦胆子油乳注射液对喉癌 Hep 细胞的增殖抑制及调亡诱导作用 方法 : 利用 MTT 比色法检测 5 个不同药物浓度 ( 和 0.8g/L) 对细胞的抑制率 ; 采用倒置显微镜观察细胞的形态变化 ; 流式细胞仪检测细胞凋亡率 ; 实时荧光定量 PCR 检测凋亡基因 Bcl 和 Bax 的表达 结果 :MTT 显示, 鸦胆子油乳对 Hep 细胞的生长抑制作用呈剂量和时间依赖性 倒置显微镜下可见细胞凋亡的形态学改变, 显示加药组细胞染色体固缩, 聚集呈块状 新月状, 出现凋亡小体 流式细胞仪检测显示, 和 0.6g/L 药物作用 48h 后凋亡率分别为 (4.58±4.36)% (57.7± 3.07)% 和 (75.50±3.93)%, 显著高于对照组 (0.96±0.7)%, 差异有统计学意义, 犉 =8.8, 犘 =0.003; 实时荧光定量 PCR 结果显示, 随着鸦胆子油乳注射液的浓度增加,Bcl mrna 的表达减少,BaxmRNA 的表达量逐渐上升, 与对照组比较差异有统计学意义, 犘 <0.0 结论: 鸦胆子油乳能够抑制 Hep 细胞的增殖并诱导其凋亡, 作用呈剂量和时间依赖性 关键词 喉肿瘤 ; 鸦胆子油乳注射液 ;Hep 细胞 ; 细胞凋亡 ; 流式细胞术 犈犳犲犮狋狅犳犅狉狌犮犲犪犼犪狏犪狀犻犮犪狅犻犾犲犿狌犾狊犻狅狀狅狀狆狉狅犾犻犳犲狉犪狋犻狅狀犪狀犱犪狆狅狆狋狅狊犻狊狅犳犺狌犿犪狀犾犪狉狔狀犵犲犪犾犮犪狀犮犲狉犎犲狆 犮犲犾狊 犕犃犅犻狀 犼狌犪狀, 犠犈犐犡狌 犱狅狀犵, 犌犃犗犑犻犪狀犵 狓犻犪, 犔犐犑狌犪狀 3, 犎犈犑犻犪狀. 犆犾犻狀犻犮犪犾犕犲犱犻犮犻狀犲犆狅犾犲犵犲, 犖犻狀犵狓犻犪犕犲犱犻犮犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犖犻狀犵狓犻犪, 犢犻狀犮犺狌犪狀 , 犘. 犚. 犆犺犻狀犪 中华肿瘤防治杂志,03,0(9): 犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犗狋狅狉犺犻狀狅犾犪狉狔狀犵狅犾狅犵狔 犎犲犪犱犪狀犱犖犲犮犽犛狌狉犵犲狉狔, 犘犲狅狆犾犲 狊犎狅狊狆犻狋犪犾狅犳犌犪狀狊狌犘狉狅狏犻狀犮犲, 犔犪狀狕犺狅狌 , 犘. 犚. 犆犺犻狀犪 3. 犈狓狆犲狉犻犿犲狀狋犆犲狀狋犲狉狅犳犅犪狊犻犮犕犲犱犻犮犪犾犆狅犾犲犵犲, 犔犪狀狕犺狅狌犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犔犪狀狕犺狅狌 , 犘. 犚. 犆犺犻狀犪 [ 犃犅犛犜犚犃犆犜 ] 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 :ToexploretheefectofBruceajavanicaoilemulsionononthegrowthofhumanlaryngeal Hep cels. 犕犈犜犎犗犇犛 :MTTassaywasusedtoobservetheproliferationofhumanlaryngealcarcinomaHep celstrea tedwithvariousconcentrationsofbruceajavanicaoilemulsionatdiferenttimes.morphologicchangesofhep celswas observedbyinvertedmicroscopyaftertreated withbruceajavanicaoilemulsion;flowcytimetry (FCM)and Real time quantitativepcr wasappliedtomeasuretheapoptosisrateandtheexpressionofbcl andbaxmrnainthehep cels treatedwithbruceajavanicaoilemulsionat0.,0.4,0.6g/lfordiferenttime. 犚犈犛犝犔犜犛 :Bruceajavanicaoilemulsion inhibitedgrowthofhep celsindose dependentandtime dependentmanner( 犘 <0.0).Typicalmorphologicalchanges ofapoptoticcels,celularrounding up,cytoplasmiccontraction,chromatincondensationandparticularlyapoptoticbody, themainmorphologicalcharacteristicofapoptpsiswereobservedbyreservedmicroscopy.inhibitedcelproliferationand induceddeathwereinadose dependentmanner,withapoptoticrateof(4.58±4.36)%,(57.7±3.07)% and(75.50± 3.93)% accordingly.thereexistedastatisticalysignificantdiferencebetweentreatmentandcontrol( 犉 =8.8, 犘 = 0.003).Real timequantitativepcrshowedthatbruceajavanicaoilemulsioncouldreducethebcl geneexpressionand increasegeneexpressionofbax( 犘 <0.0). 犆犗犖犆犔犝犛犐犗犖 :Bruceajavanicaoilemulsionhasobviousinductionofapopto sisonhumanlaryngealcancerhep celsinadose dependentandtime dependentmanner. [ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ] laryngealneoplasms;bruceajavanicaoilemulsion;hep cels;apoptosis;flowcytometry 犆犺犻狀犑犆犪狀犮犲狉犘狉犲狏犜狉犲犪狋,03,0(9): 基金项目 甘肃省中医药科研立项课题 (GZK 00 43) 第一作者简介 马斌娟, 女, 甘肃甘谷人, 硕士, 主要从事头颈肿瘤基础与临床的研究工作 Tel: E mail:[email protected] 通讯作者简介 卫旭东, 男, 甘肃灵台人, 博士, 副主任医师, 主要从事头颈肿瘤基础与临床的研究工作 Tel: E mail:[email protected]

12 中华肿瘤防治杂志 03 年 0 月第 0 卷第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,October03,Vol.0 No.9 49 实验研究 / 论著 犈钙黏蛋白对犕犖犖犌诱导犌犈犛 增殖影响及其与犌犾犻 基因相关性研究 闫慧明贾彬陈栋张明明孙志涛 山西医科大学第二医院普外科, 山西太原 摘要 目的 : 研究 E 钙黏蛋白 (E Cad) 在甲基硝基亚硝基胍 (MNNG) 作用于人胃黏膜 GES 永生化细胞生成 MC 细胞后对增殖能力的影响, 并探讨其与 Gli 基因的相关性 方法 :MTT 比色法观察 GES 细胞组 MC 细胞组及环靶明干扰细胞组的生长周期表达 半定量 RT PCR 观察 3 组细胞 Shh 和 Gli 基因的表达 荧光共聚焦观察 3 组细胞 E Cad 的表达 结果 :MTT 比色实验绘制生长曲线显示,MC 组 > 环靶明干扰组 >GES 细胞组, 差异有统计学意义, 犘 < 0.05 半定量 RT PCR 显示,MC 细胞组的 Gli mrna 相对表达水平为 0.454±0.0084, 高于环靶明干扰组的 0.448±0.006, 狋 =6.735, 犘 =0.05; 荧光免疫显示,GES 细胞组与环靶明干扰细胞组 E Cad 的平均荧光强度分别为 79±4 与 78±43, 均明显高于 MC 细胞组的 64±4, 狋值分别为 和 4.357, 犘值分别为 0.00 和 0.00 结论 :Gli 可能参与调控 E Cad 的表达, 使其在 MC 细胞的表达减少, 增强 MC 细胞的体外增殖活性 关键词 胃肿瘤 ;E 钙黏蛋白 ;MNNG;SHH 信号传导 ; 基因,Gli;GES 细胞 ; 比色法中华肿瘤防治杂志,03,0(9): 犈 犆犪犱犺犲狉犻狀犲狓狆狉犲狊犻狅狀犻狀犕犖犖犌犻狀犱狌犮犲犱犌犈犛 狑犻狋犺狆狉狅犾犻犳犲狉犪狋犻狅狀犪狀犱犻狋狊狉犲犾犪狋犻狅狀狊犺犻狆狑犻狋犺狋犺犲犲狓狆狉犲狊犻狅狀狅犳犌犾犻 犢犃犖犎狌犻 犿犻狀犵, 犑犐犃犅犻狀, 犆犎犈犖犇狅狀犵, 犣犎犃犖犌犕犻狀犵 犿犻狀犵, 犛犝犖犣犺犻 狋犪狅犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犌犲狀犲狉犪犾犛狌狉犵犲狉狔, 犛犲犮狅狀犱犎狅狊狆犻狋犪犾狅犳犛犺犪狀狓犻犕犲犱犻犮犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犜犪犻狔狌犪狀 03000, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪 [ 犃犅犛犜犚犃犆犜 ] 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 :ToexploreE Cadherin(E Cad)expressioninmethylationnitroiminotetrahydroofnitrogua nidine(mnng)inducedges to MCcelsanditsrelationshipwiththeexpressionofGli. 犕犈犜犎犗犇犛 :TheMTT was usedtoobserveges celsgrew,mccelgrewandcyclopamineinterferencegroup scelgrowthcycle.fluorescence confocalmicroscopyand Semi quantitative RT PCR wereusedtoobserveexpression of E Cadherin,ShhmDNA and GlimDNA. 犚犈犛犝犔犜犛 :MTTcolorimetricexperimentalgrowthcurvedisplayed MCcelgrew> MCcels>GES cels grew ( 犘 <0.05).Semi quantitativert PCRshowedthattheMCcel sglimrna was0.454±0.0084,itwashigher thanthatofcyclopamineinterferencegroup s0.448±0.006( 狋 =6.735, 犘 =0.05).Thefluorescenceimmunoassay showedthatges celsandcyclopamineinterferencegroup smeanfluorescenceintensitywas79±4and78±43, significantlyhigherthanthatofthe MCcelsgroup s64±4( 狋 =9.437, 犘 =0.00; 狋 =4.357, 犘 =0.00). 犆犗犖犆犔犝 犛犐犗犖 :GlimaybeinvolvedintheregulationE CadherinexpressionbydecreasingtheexpressioninMCcelstostrength entheproliferativeactivityin MCcels. [ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ] stomachneoplasms;e Cadherin;MNNG;SHHsignaltransduction;genes,Gli;GES cels;colori metry 犆犺犻狀犑犆犪狀犮犲狉犘狉犲狏犜狉犲犪狋,03,0(9): 中图分类号 R735. 文献标识码 A 文章编号 (03) 基金项目 山西省卫生厅科技攻关项目 (0090) 第一作者简介 闫慧明, 男, 山西太原人, 博士, 主任医师, 主要从事胃肠道肿瘤的研究工作 Tel: E mail:[email protected] 通讯作者简介 贾彬, 男, 山西太原人, 博士, 主任医师, 主要从事肝胆微创的研究工作 Tel: E mail:[email protected]

13 中华肿瘤防治杂志 03 年 0 月第 0 卷第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,October03,Vol.0 No 实验研究 / 论著 人热休克蛋白对树突状细胞表面共刺激分子表达影响的研究 林晓为陈雪芳汪相如谢云青龚福生郑秋红应敏刚 福建医科大学教学医院 福建省肿瘤医院肿瘤研究所肿瘤外科研究室, 福建福州 摘要 目的 : 研究人热休克肿瘤抗原复合物对树突状细胞 (dendriticcels,dc) 表面共刺激分子表达的影响 方法 : 分离培养人外周血来源的 DC 细胞, 在培养过程中加入分离纯化的人热休克蛋白 70(HSP70) 抗原复合物及肿瘤细胞裂解物, 流式细胞技术分析比较负载 HSP70 肿瘤抗原复合物 负载肿瘤细胞裂解物及负载前 DC 细胞表面分子 CD80 CD83 CD86 及 HLA DR 表达水平的变化 结果 : 培养基中加入 HSP70 肿瘤抗原复合物后, 其表面共刺激分子 CD80 CD86 和成熟标记分子 CD83 的表达水平分别为 (98.9±.5)% (98.3±.3)% 和 (53.±0.8)%, 与负载前 CD80 CD86 和 CD83 的 (66.±.6)% (94.±.0)% 和 (6.3±.4)% 相比显著提高, 犘 =0.03; 与肿瘤细胞裂解物负载的 DC 表面 CD80 CD86 和 CD83 的 (86.±.9)% (96.5±.)% 和 (55.±.0)% 相比, 共刺激分子 CD80 的表达显著提高, 犘 = 0.00 结论: 人热休克肿瘤抗原复合物可提高 DC 表面共刺激分子的表达水平, 促进 DC 功能活化, 有可能在抗肿瘤免疫机制中起重要作用 关键词 肿瘤 ;HSP70 抗原复合物 ; 树突细胞 ; 成熟 ; 流式细胞术中华肿瘤防治杂志,03,0(9): 犈犳犲犮狋狅犳犺犲犪狋狊犺狅犮犽狆狉狅狋犲犻狀狋狅犱犲狀犱狉犻狋犻犮犮犲犾狊犫狔狋犺犲犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀狅犳犿犲犿犫狉犪狀犲狊狌狉犳犪犮犲犿狅犾犲犮狌犾犪狉 犔犐犖犡犻犪狅 狑犲犻, 犆犎犈犖犡狌犲 犳犪狀犵, 犠犃犖犌犡犻犪狀犵 狉狌, 犡犐犈犢狌狀 狇犻狀犵, 犌犗犖犌犉狌 狊犺犲狀犵, 犣犎犈犖犌犙犻狌 犺狅狀犵, 犢犐犖犌犕犻狀 犵犪狀犵犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犛狌狉犵犲狉狔, 犉狌犼犻犪狀犜狌犿狅狉犚犲狊犲犪狉犮犺犐狀狊狋犻狋狌狋犲, 犉狌犼犻犪狀犜狌犿狅狉犎狅狊狆犻狋犪犾, 犜犲犪犮犺犻狀犵犎狅狊狆犻狋犪犾狅狉犉狌犼犻犪狀犕犲犱犻犮犻狀犲犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犉狌狕犺狅狌 35004, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪 [ 犃犅犛犜犚犃犆犜 ] 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 :Tostudytheefectofhumanshockproteinondendriticcel(DCs)surfacecostimulating moleculesexpression. 犕犈犜犎犗犇犛 :DCcelswereisolatedandculturedfrom peripheralblood,loadedby HSP70peptides complexandtumorcelslysates,andthentheexpressionofdccelsmembranesurfacemolecularcd80,cd83,cd86and HLA DR weredetectedbyflowcytometrybeforeandafterloaded. 犚犈犛犝犔犜犛 :Theexpressionofco stimulatorymolecular CD80,CD86andmaturelabeledmolecularCD83ofDCcelsloadedwith HSP70peptidescomplexwere(98.9±.5)%, (98.3±.3)% and (53.±0.8)%,which wereraisedbycontroled withdcbeforeloaded (66.±.6)%,(94.±.0)% and (6.3±.4)% ( 犘 =0.03),andcontroledwithDCloadedwithtumorcelslysates(86.±.9)%,(96.5±.)% and (55.±.0)%.CD80wasraised ( 犘 =0.00). 犆犗犖犆犔犝犛犐犗犖 :ItissuggestedthatHsp70peptidecomplex canimprovetheexpressionofco stimulatorymolecularofdcs,activatedcfunctionsdirectly,whichmaypossessimpor tantefectinimmunologicanti tumormechanism. [ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ] neoplasms;hsp70peptideprotein;dendriticcels;mature;flowcytometry 犆犺犻狀犑犆犪狀犮犲狉犘狉犲狏犜狉犲犪狋,03,0(9): 中图分类号 R73-3 文献标识码 A 文章编号 (03) 基金项目 福建省科技厅重点项目 (007Y004) 第一作者简介 林晓为, 女, 福建福州人, 技师, 主要从事肿瘤免疫学的研究工作 Tel: 通讯作者简介 应敏刚, 男, 福建福州人, 主任医师, 主要从事腹部外科的临床与基础研究工作 Tel: E mail:[email protected]

14 中华肿瘤防治杂志 03 年 0 月第 0 卷第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,October03,Vol.0 No 犡犃犉 基因对顺铂诱导肺腺癌犃 549 细胞凋亡作用的研究 朱传东王礼学郭晶晶耿杰徐瀚峰张全安郑勤 东南大学附属第二医院肿瘤科, 江苏南京 0003 实验研究 / 论著 摘要 目的 : 通过顺铂诱导人肺腺癌细胞 A549 的凋亡, 研究 X 染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子 (X linkedinhibi torofapoptosisproteinassociatedfactor,xaf) 基因在 A549 细胞中的表达情况, 初步探讨该基因在凋亡中的作用 方法 : 采用 4μg/mL 浓度的顺铂处理 A549 细胞,MTT 法检测细胞的增殖抑制率 ;AnnexinⅤ/7 AAD 检测 A549 细胞凋亡情况 ;RT PCR 和蛋白质印迹法分别检测 A549 凋亡后 XAFmRNA 和蛋白的表达 ;Caspase 3 试剂盒检测 A549 细胞凋亡后 Caspase 3 的活性 结果 : 用 4μg/mL 浓度顺铂处理 A549 细胞 和 4h 后,A549 细胞增殖抑制率分别为 (3.40±0.65)% (8.3±0.73)% 和 (4.7±0.4)%, 与对照组 (.03±0.8)% 相比均明显增高, 犘值分别为 和 0.000, 细胞增殖抑制率随时间增加而增强 ;A549 细胞凋亡率分别为 (4.35±0.95)% (9.69±.60)% 和 (.35±.4)%, 与对照组 (.39±0.)% 相比均明显增加, 犘值分别为 和 0.000, 细胞凋亡率随顺铂作用时间延长而增加 ; 实验组 XAFmRNA 表达水平分别为 (0.99±0.09) (0.654±0.093) 和 (.6±0.0), 对照组为 (0.09±0.00),XAFmRNA 表达水平随作用时间的延长呈增加趋势, 犘值分别为 和 0.000; 实验组 XAF 蛋白表达水平分别为 (0.3±0.04) (0.508±0.04) 和 (0.90±0.04), 对照组为 (0.4±0.007),XAF 蛋白表达水平随作用时间的延长呈增加趋势, 犘值分别为 和 0.000;Caspase 3 活性 (A405nm) 分别为 (34.745±3.78) (69.54±3.096) 和 (94.787±5.49), 对照组为 (.94±.96),Caspase 3 活性随顺铂作用时间的延长而增加 结论 : 顺铂诱导 A549 细胞凋亡可以引起 XAF 表达增加, 且随细胞凋亡水平的提高而增加, 提示 XAF 可能参与顺铂诱导人肺腺癌 A549 细胞的凋亡过程 关键词 肺肿瘤 ; 顺铂 ;A549 细胞 ;X 染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子 ; 细胞凋亡 ; 印迹法, 蛋白质中华肿瘤防治杂志,03,0(9): 犈犳犲犮狋狅犳犡犃犉 犵犲狀犲狅狀犾狌狀犵犪犱犲狀狅犮犪狉犮犻狀狅犿犪犃 549 犮犲犾犪狆狅狆狋狅狊犻狊犻狀犱狌犮犲犱犫狔犮犻狊狆犾犪狋犻狀 犣犎犝犆犺狌犪狀 犱狅狀犵, 犠犃犖犌犔犻 狓狌犲, 犌犝犗犑犻狀犵 犼犻狀犵, 犌犈犖犌犑犻犲, 犡犝犎犪狀 犳犲狀犵, 犣犎犃犖犌犙狌犪狀 犪狀, 犣犎犈犖犌犙犻狀犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犗狀犮狅犾狅犵狔, 犛犲犮狅狀犱犎狅狊狆犻狋犪犾犃犳犳犻犾犻犪狋犲犱狋狅犛狅狌狋犺犲犪狊狋犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犖犪狀犼犻狀犵 0003, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪 [ 犃犅犛犜犚犃犆犜 ] 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 :BasedontheapoptosisprocessofA549celsinducedbycisplatin,weresearchedtheexpres sionandfunctionsofthexafgene. 犕犈犜犎犗犇犛 :TheproliferationinhibitionrateafterA549celstreatedwiththecispla tinof4μg/mlwasdetectedby MTT.TheA549celapoptosiswasdetectedbyAnnexinⅤ/7 AAD.TheXAF mrna andproteinexpressionwasmonitoredbythert PCRandwesternbloting.TheCaspase 3activityinapoptoticA549cels wasdetectedbythecaspase 3assay. 犚犈犛犝犔犜犛 :Thecelproliferationinhibitionrateincreasedwiththecisplatintreating duration.thecelproliferationinhibitionratesoftheexperimentgroupwereh(3.40±0.65)%,h(8.3±0.73)%, and4h(4.7±0.4)% respectively.comparedwiththecelproliferationinhibitionrate(.03±0.8)% ofthecontrol group, 犘 valueswere0.004,0.000,and0.000respectively.thecelapoptosisrateincreasedwiththecisplatintreatingdu ration.theapoptosisrateswereh (4.35±0.95)%,h (9.69±.60)%,and4h (.35±.4)% respectively. Comparedwiththecelapoptosisrate(.39±0.)% ofthecontrolgroup, 犘 valueswere0.006,0.005,and0.000re spectively.themrnaexpressionsoftheexperimentgroupwereh (0.99±0.09),h (0.654±0.093),and4h (.6±0.0)respectively,whilethemRNAexpressionofthecontrolgroupwas(0.09±0.00).TheXAFmRNA expressionincreasedwiththecelapoptosisrate.comparedwiththemrnaexpressionofthecontrolgroup, 犘 valueswere 0.006,0.00,and0.000respectively.TheXAFproteinexpressionsoftheexperimentgroupwereh (0.3±0.04), h (0.508±0.04),and4h (0.90±0.04)respectively,whiletheXAFproteinexpressionofthecontrolgroup 第一作者简介 朱传东, 男, 安徽颍上人, 博士, 住院医师, 主要从事肿瘤内科的临床与基础研究工作 Tel: E mail:[email protected] 通讯作者简介 郑勤, 男, 江苏高淳人, 主任医师, 硕士生导师, 主要从事肿瘤临床与生物治疗的研究工作 Tel: E mail:[email protected]

15 500 朱传东, 等 XAF 基因对顺铂诱导肺腺癌 A549 细胞凋亡作用的研究 was(0.4±0.007).theproteinexpressionoftheexperimentgroupwasincreasedwiththecelapoptosisrate.com paredwiththexafproteinexpressionofthecontrolgroup, 犘 valueswere0.00,0.000,and0.000respectively.the Caspase 3activityincreased withthecisplatintreatingduration.thecaspase 3activityvaluesoftheexperimentgroup wereh (34.745±3.78),h (69.54±3.096),and4h (94.787±5.49)respectively.TheCaspase 3activityvalue ofthecontrolgroupwere(.94±.96). 犆犗犖犆犔犝犛犐犗犖犛 :A549celapoptosisinducedbycisplatinmayincreasethe XAFgeneexpression.TheexpressionlevelincreasesaccordingtotheimprovementofA549celapoptosislevel,whichin dicatesthatthexafgenetakesefectsintheapoptosisprocessofa549celsinducedbycisplatin. [ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ] lungneoplasms;cisplatin;a549cel;x linkedinhibitorofapoptosisproteinassociatedfactor ;apop tosis;bloting,western 犆犺犻狀犑犆犪狀犮犲狉犘狉犲狏犜狉犲犪狋,03,0(9): 中图分类号 R734. 文献标识码 A 文章编号 (03) 近年来, 在发展中国家, 尤其是中国, 肺癌的发病 [ ] 率呈明显上升趋势 关于肺癌的发生发展机制及治疗新策略的探索是学术界关注的焦点之一 X 染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子 (X linkedinhibitorof apoptosisproteinassociatedfactor,xaf) 是一个新发现的拮抗凋亡蛋白抑制因子 (inhibitorofapopto sisprotein,iap), 可以促进肿瘤细胞凋亡 有研究表明,XAF 在胚胎组织及成人正常组织中广泛表达, 但是在肿瘤细胞株以及肿瘤组织中低表达甚至不表达, [3 5] 是一个潜在的抑癌基因 本研究采用肺癌化疗的基本药物顺铂来诱导人肺腺癌细胞的凋亡, 观察细胞凋亡过程中细胞内 XAF 基因表达的变化, 初步探讨 XAF 在细胞凋亡中的作用 材料与方法. 材料人肺腺癌细胞 A549 为我院肝病研究室保存, 细胞用含 0% 胎牛血清的 MEM 培养液培养于 37 5% CO 孵箱内, 每 ~3d 换液传代 胎牛血清购自杭州四季青公司 ; 顺铂为齐鲁制药厂生产, 批号 : 0004DB;RT PCR 试剂盒和质粒抽提纯化试剂盒购自 Promega 公司 ;TaqDNA 聚合酶 dntps T4 DNA 连接酶和 DNA Marker 购自 Takara 公司 ;DNA 电泳凝胶回收试剂盒购自上海华舜生物工程公司 ; 琼脂粉购自上海药物所 ; 寡核苷酸引物由上海博亚生物技术有限公司合成 ;RPMI640 MEM 和 OPTI MEM 培养基为美国 Gibco 产品 ;Trizol 试剂购自 Invitrogen 公司 ; 碘化丙锭 (propidiumiodide,pi) 购自 Sigma 公司 ; 电泳级琼脂糖 (Agarose) 为 MBI 进口分装 ;An nexin Ⅴ/7AAD 购自 BD 公司 鼠抗人 XAF 单克隆抗体 C 6 购自 SantaCruz 公司 ; β actin 单克隆抗体购自 Sigma 公司 ; 辣根过氧化酶连接的二抗购自 San tacruz 公司 ; 硝酸纤维膜购自 Bio Rad 公司 ;ECL 购自 Amersham Biosci ences 公司 ;Caspase 3 活性检测试剂盒为 Clintech 公司产品. 方法.. MTT 测定细胞增殖抑制率取对数生长期的细胞, 调整细胞密度至 0 4 个 /ml, 接种于 96 孔细胞培养板, 每孔 00μL, 于细胞悬液中分别加入 8μg/mL 的顺铂 00μL,37 5% CO 孵箱中培养 和 4 h 后, 每孔分别加入 5 mg/ml MTT 0μL,37 培养箱孵育 4h, 弃 MTT, 加入 DMSO 00μL/ 孔,0.5h 后于波长 570nm 处检测吸光度值 (A), 计算细胞增殖抑制率 (IR) 每组浓度设 6 个复孔, 实验重复 3 次 处理组 A 值 IR(%)=(- 对照组 A 值 ) 00%.. AnnexinⅤ/7 AAD 检测细胞凋亡率将 A549 细胞在含 4μg/mL 的顺铂培养基中孵育 和 4h 后, 取对照组和药物处理组细胞, 参照 Annex inⅤ/7 AAD 凋亡检测试剂盒说明书, 流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况, 每组实验重复 3 次..3 RT PCR 检测 XAFmRNA 表达变化收集经 4μg/mL 顺铂处理的 和 4h 及对照组未经处理的 A549 细胞, 每组细胞为 0 6 个,Trizol 法提取细胞总 RNA 逆转录反应合成 cdna 第 条链, 以 GAPDH 为内参照, 运用 PCR 技术检测细胞 XAF mrna 的表达 反应条件为 95 3min;94 45s, 57 45s,7 45s,3 个循环 ;7 延长 0 min PCR 产物在含 0.5%EB 的.% 琼脂糖凝胶电泳分离 XAF 的上游引物为 5 GAGGAGATAAAG CAGCCTATGAC 3, 下游引物为 5 CTCTTGCCT GATTGCTGTGG 3,PCR 产物长度大小 50 bp; GAPDH 的上游引物为 5 CAACTAAGCGGCA CAGAATG 3, 下游引物为 5 GCCAGTGGACTC CACGAC 3,PCR 产物长度大小 30bp..4 蛋白质印迹法检测 XAF 蛋白的表达收集细胞离心沉淀后加入细胞裂解液, 蛋白含量用蛋白检测试剂盒检测 取 5μg 蛋白进行变性聚丙烯酰氨凝胶电泳, 转移蛋白至硝酸纤维膜先后与特异性抗体

16 中华肿瘤防治杂志 03 年 0 月第 0 卷第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,October03,Vol.0 No 犿犻犚 34 犪稳定表达株构建及其对宫颈癌犆犪狊犽犻细胞功能影响的观察 汤文凡 佐满珍 刘朝奇 查锦芬 汤超. 三峡大学人民医院妇产科, 湖北宜昌 三峡大学医学院, 湖北宜昌 实验研究 / 论著 摘要 目的 : 构建人 mir 34a 的真核表达载体, 并研究其对宫颈癌细胞株 Caski 细胞活性的影响 方法 : 以人正常组织基因组 DNA 为模板, 用 PCR 法扩增得到 mir 34a 的前体序列, 构建 mir 34a 真核表达载体 pegfp C mir34a 同时用重组载体 pegfp C mir34a 转染宫颈癌细胞株 Caski 细胞, 筛选 mir 34a 稳定表达细胞系作为实验组,pEGFP C 转染组为对照组 (Control), 用 RT PCR 及 RealtimeRT RCR 法鉴定 mir 34a 在克隆细胞中的表达, 并用 MTT FCM 分析 mir 34a 的生物学特性,RT PCR 研究检测其靶基因表达改变 结果 : 成功构建了人 mir 34a 真核表达载体 pegfp C mir34a, 并在宫颈癌 Caski 细胞中上调 mir 34a 的表达, 实验组 mir 34a 的表达相对于对照组升高约 3.3 倍 ;MTT 提示, 实验组 mir 34a 能够显著的抑制 Caski 细胞增殖, 差异有统计学意义, 犘 =0.08; 实验组 G0/G 期百分率为 77.7%, 与对照组的 50% 比较, 差异有统计学意义, 犘 =0.004; 而实验组 S 期百分率为 0.3%, 对照组为 35.4%, 两组比较差异有统计学意义, 犘 =0.07; 实验组细胞 mir 34a 靶基因细胞周期基因 CDK4 CDK6 CyclinE 和 EFmRNA 的表达下调, 与对照组比较差异有统计学意义, 犘 =0.00 结论: 成功构建人 mir 34a 的真核表达载体, 并能显著抑制宫颈癌细胞株 Caski 细胞活性, 为进一步研究 mir 34a 在宫颈癌中的功能及基因调控机制奠定了实验基础 关键词 宫颈肿瘤 ; 微小 RNAs;miR 34a; 表达载体 ; 基因表达 ; 细胞周期 ; 细胞增殖 中华肿瘤防治杂志,03,0(9): 犆狅狀狊狋狉狌犮狋犻狅狀狅犳犿犻犚 34 犪狊狋犪犫犾犲犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀狊狋狉犪犻狀犻狀犮犲狉狏犻犮犪犾犮犪狀犮犲狉犆犪狊犽犻犮犲犾犪狀犱狆狉犲犾犻犿犻狀犪狉狔狊狋狌犱狔狅犳犻狋狊犳狌狀犮狋犻狅狀 犜犃犖犌犠犲狀 犳犪狀, 犣犝犗犕犪狀 狕犺犲狀, 犔犐犝犆犺犪狅 狇犻, 犣犎犃犑犻狀 犳犲狀, 犜犃犖犌犆犺犪狅. 犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犗犫狊狋犲狋狉犻犮狊犪狀犱犌狔狀犲犮狅犾狅犵狔, 犘犲狅狆犾犲 狊犎狅狊狆犻狋犪犾狅犳犆犺犻狀犪犜犺狉犲犲犌狅狉犵犲狊犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犢犻犮犺犪狀犵 , 犘. 犚. 犆犺犻狀犵. 犕犲犱犻犮犪犾犆狅犾犲犵犲狅犳犆犺犻狀犪犜犺狉犲犲犌狅狉犵犲狊犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犢犻犮犺犪狀犵 44300, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪 [ 犃犅犛犜犚犃犆犜 ] 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 :ToconstructaneukaryoticexpressionvectorofmiR 34aandexploreitsinfluenceonthecel viabilityincervicalcancercellinescaskicels. 犕犈犜犎犗犇犛 :ThemiR 34aprecursorsequenceswereamplificatedbyPCR withhumangenomicdnaastemplate.theeukaryoticexpressionvectorofpegfp C mir34awasconstructed.thecer vicalcancercellinescaskicelsweretransfectedwiththevectorpegfp C mir34ainexperimentalgroupandcaskicels weretransfectedwithpegfp Cvectorascontrolgroup.RT PCRandReal timercr wereusedtoidentifymir 34aeu karyoticexpressioninclonecels.thebiologicalcharacteristicsofthemir 34aincaskicelswerestudiedby MTT,FCM andrt PCR methods,theexpressionlevelsofcelcyclegenecdk4,cdk6,cyclin E,EF mrna weretestedby RT PCR. 犚犈犛犝犔犜犛 :TheeukaryoticexpressionvectorofmiR 34apEGFP C mir 34awassuccessfulyconstructedandit couldbeexpressedin cervicalcancercellines Caskicels.Expression of mir 34aintheexperimentalgroup was 3.3timeshigherthanthatofthecontrolgroup;MTTsuggestedthatmiR 34acansignificantlyinhibittheproliferation ofcaskicels,andthere wasstatisticalsignificance ( 犘 =0.08);celcycleofG0/Gintheexperimentalgroup was 77.7%,whilethecontrolgroupwas50%,andthediferencewasstatisticalysignificant( 犘 =0.004).ThepercentageofS phasecelsinexperimentalgroupwas0.3%,comparedwiththecontrolgroup (35.4%)thediferencewasstatisticaly 基金项目 三峡大学硕士学位论文培优基金 (0PY048) 第一作者简介 汤文凡, 男, 湖北咸宁人, 硕士, 主要从事 microrna 对妇科肿瘤调控的研究工作 E mail:[email protected] 通讯作者简介 佐满珍, 女, 湖北咸宁人, 主任医师, 硕士生导师, 主要从事妇科肿瘤方面的研究工作 E mail:[email protected]

17 504 汤文凡, 等 mir 34a 稳定表达株构建及其对宫颈癌 Caski 细胞功能影响的观察 significant( 犘 =0.07);ThedownregulatedexpressionofthemiR 34atargetgenesofcelcyclegenesCDK4,CDK6,Cyc line,ef mrnainexperimentgrouphadstatisticalysignificantdiferencecompared withthecontrolgroup ( 犘 = 0.00). 犆犗犖犆犔犝犛犐犗犖 :TheeukaryoticexpressionvectorofmiR 34acanbeefectivelyexpressedincervicalcancercel linescaskicels,inhibitthecelproliferationanddownregulatethemrnaexpressionofcelcyclegenescdk4,cdk6,cy cline,ef,whichhaslaidtheexperimentalfoundationforfurtherstudyingthefunctionofmir 34aincervicalcancer anditsgeneregulatorymechanisms. [ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ] cervicalneoplasms;micrornas;mir 34a;expressionvectors;geneexpression;celcycle;celprolif eration 犆犺犻狀犑犆犪狀犮犲狉犘狉犲狏犜狉犲犪狋,03,0(9): 中图分类号 R 文献标识码 A 文章编号 (03) mirna 是一类内源性非编码单链小分子 RNA, 可作为原癌基因或者抑癌基因, 在肿瘤的发生和发展 [] 中扮演着重要的角色 编码 mir 34a 的基因定位于染色体 p36, 这一位点经常伴随多个基因的缺失突变而导致肿瘤的发生 异常的 mir 34 表达可诱导细胞 [ 3] 凋亡 细胞周期阻滞或衰老 ;mir 34a 受经典抑癌因子 p53 的直接调控,miR 34a 通过下调 CDK4 CDK6 EF3 EF5 和 C MET 等发挥其肿瘤抑制作 [4] 用 p53 引起细胞周期的 G 期阻滞 细胞衰老和凋 [5] 亡,miR 34a 起着重要的调控作用 mir 34a 的失 [6] 活或缺失可能与多种肿瘤的发病机制有关, 但目前 mir 34a 在宫颈癌中的功能鲜有报道 本研究通过构建人 mir 34a 真核表达载体, 转染宫颈癌 Caski 细胞并筛选出 mir 34a 稳定表达细胞系, 为进一步研究 mir 34a 在宫颈癌中的功能及基因调控机制奠定基础 材料与方法. 材料 pegfp C 质粒 EcoliDH5α 感受态细胞和宫颈癌 Caski 细胞株由三峡大学分子生物学研究所实验室提供 Lipofectamine TM 000Reagent 为 Invitrogen 公司产品 ;TaqDNA 聚合酶 限制性内切酶 凝胶回收试剂盒和 T4DNA 连接酶均为 Fermentas 公司产品 ; DNA 提取试剂盒和质粒抽提试剂盒为 OMEGA 公司产品. 方法.. 引物合成从 mirbase 数据库中得到 mir 34a 和 Pre mir34a 的序列, 搜索人类基因组数据库 (GeneBank), 获得 Pre mir34a 对应的基因组序列及其两侧约 300nt 的侧翼序列 依据该序列利用 prime 5.0 设计引物, 引入酶切位点 BamHⅠ EcoRⅠ 和保护碱基 同时合成 pegfp C 通用引物 T7 和 BGH 引物由上海生物工程有限公司合成 Pri mir34a: 上游引物 5 CGGAATTCGTAATTTCCTTCTTATC AACAGGTGC 3, 下游引物 5 CGGGATCCCAAA CTTCTCCCAGCCAA 3.. 重组质粒 pegfp C mir34a 的构建与鉴定 提取人正常细胞基因组 DNA, 利用引物 Pri mir34a 进行 PCR 扩增, 反应条件为 94 3 min,94 30s, 60 30s,7 30s,30 个循环后 % 琼脂糖凝胶电泳酶切, 获得目的基因 将线性化空载体 pegfp C 质粒与目的基因片段于 6 连接过夜, 转化 EcoliDH5α 感受态细胞, 涂于 LB 含有卡那霉素平皿上,37 培养过夜 挑取菌落克隆扩大培养, 抽提质粒后对酶切鉴定正确的克隆进一步测序鉴定..3 细胞转染与稳定转染细胞系的筛选用含 0% NCBS 的 RPMI640 完全培养基于 37 5% CO 培养箱中培养细胞 细胞转染前 4h, 收集对数生长期细胞接种于 6 孔板 当细胞数目达到 80% 时, 用脂质体转染试剂 Lipofectamine TM 000Reagent 于无抗生素无血清培养基中进行质粒转染, 转染后 6h 更换为完全培养基 培养 4h 后用终浓度 500μg/mL 的 G48 筛选 5 周, 于 00μg/mL 维持浓度压力筛选下扩大培养, 并在荧光显微镜下挑取单克隆细胞株..4 转染细胞 mir 34a 表达的 RealtimeRT PCR 检测 以总 RNA 在反转录酶作用下反转录形成得第 链 cdna 为模板, 由 Prime5.0 设计的实时定量 mirna 特异引物进行 PCR 反应, 使用 Lightcycler faststartdna mastersybrgreenⅠ 试剂盒, 反应条件为 94 变性 30s,60 退火 30s,7 荧光检测 3s, 重复 40 个循环 70~95 绘制溶解曲线, 电泳检测 PCR 扩增情况, 并进行数据分析 PCR 反应以 U6 RNA 作为内参照 mir 34a 的反转录引物为 5 GT CGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCAC TGGATACGACTACAAC 3,miR 34a 实时定量 PCR 引物序列为上游引物 5 GCCCGCTGGCAGT GTCTTAGCTG 3 和下游引物 5 GTGCAGGGTC CGAGGT 3..5 转染细胞 mir 34a 下游靶基因的 RT PCR 检测总 RNA 在反转录酶作用下以 Olig(DT) 为引物

18 508 曾四元, 等宫颈腺癌组织 ERK/ 和 p6 INK4a 及 P gp 表达与耐药相关性分析 临床基础研究 / 论著 犐犖犓 4 犪宫颈腺癌组织犈犚犓 / 和狆 6 及犘 犵狆表达与耐药相关性分析, 曾四元江维梁美蓉李凌钟美玲. 南昌大学医学院, 江西南昌 江西省妇幼保健院肿瘤科, 江西南昌 摘要 目的 : 探讨细胞外信号调节激酶 /(ERK/) p6 INK4a 及 P 糖蛋白 (P gp) 与宫颈腺癌耐药的关系 方法 : PV9000 免疫组化二步法检测化疗敏感组 (4 例 ) 及耐药组 (5 例 ) 宫颈腺癌活检组织中 ERK/ p6 INK4a 及 P gp 蛋白的表达情况, 分析 ERK/ p6 INK4a 及 P gp 在两组的表达差异 3 者的表达相关性及与宫颈腺癌患者 3 年生存率的关系 结果 :ERK/ 在耐药组及敏感组的高表达率分别为 7.0%(8/5) 及 35.7%(5/4), 差异有统计学意义, 犝 =96, 犘 = 0.06;P gp 在耐药组的高表达率为 76.0%(9/5), 显著高于敏感组的 8.6%(4/4), 差异有统计学意义, 犝 =0, 犘 = 0.06;p6 INK4a 蛋白在耐药组及敏感组的表达差异无统计学意义, 犝 =9, 犘 =0.40 ERK/ 与 p6 INK4a 的表达呈正相关, 狉 =0.57, 犘 <0.00;ERK/ 与 P gp 的表达呈正相关, 狉 =0.364, 犘 =0.03;p6 INK4a 与 P gp 的表达无明显相关性, 狉 =0.54, 犘 =0.3 ERK/ 高表达与低表达患者的 3 年生存率分别为 60.9%(4/3) 和 93.8%(5/6), 差异有统计学意义, χ =4.73, 犘 =0.030; 而 p6 INK4a 高表达与低表达患者的 3 年生存率分别为 68.0%(7/5) 和 85.7%(/4), 差异无统计学意义, χ =.355, 犘 =0.44;P gp 高表达与低表达患者的 3 年生存率分别为 65.% (5/3) 和 87.5% (4/6), 差异无统计学意义, χ =.347, 犘 =0.5 结论:ERK/ 和 P gp 的高表达与宫颈腺癌耐药相关 ;ERK/ 的表达情况不仅可为宫颈腺癌化疗用药提供参考, 而且可作为宫颈腺癌判断预后的指标 关键词 宫颈肿瘤 ;ERK/ 蛋白 ;p6 INK4a 蛋白 ;P 糖蛋白 ; 抗药性, 多药中华肿瘤防治杂志,03,0(9):508-5 犐犖犓 4 犪犈狓狆狉犲狊犻狅狀狊狅犳犈犚犓 /, 狆 6 犪狀犱犘 犵狆犻狀犮犲狉狏犻犮犪犾犪犱犲狀狅犮犪狉犮犻狀狅犿犪犪狀犱犻狋狊狉犲犾犪狋犻狅狀狋狅犮犺犲犿狅狉犲狊犻狊狋犪狀犮犲, 犣犈犖犌犛犻 狔狌犪狀, 犑犐犃犖犌犠犲犻, 犔犐犃犖犌犕犲犻 狉狅狀犵, 犔犐犔犻狀犵, 犣犎犗犖犌犕犲犻 犾犻狀犵. 犕犲犱犻犮犪犾犆狅犾犲犵犲狅犳犖犪狀犮犺犪狀犵犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犖犪狀犮犺犪狀犵 , 犘. 犚. 犆犺犻狀犪. 犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犗狀犮狅犾狅犵狔, 犑犻犪狀犵狓犻犕犪狋犲狉狀犪犾犪狀犱犆犺犻犾犱犎犲犪犾狋犺犎狅狊狆犻狋犪犾, 犖犪狀犮犺犪狀犵 , 犘. 犚. 犆犺犻狀犪 [ 犃犅犛犜犚犃犆犜 ] 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 :Toexplorerelationbetweentheexpressionsofextracelularsignal regulatedkinase/ (ERK/),p6 INK4a,P glycoprotein (P gp)andthechemoresistanceofcervicaladenocarcinoma. 犕犈犜犎犗犇犛 :PV9000im munohistochemistrywasusedtodetecttheexpressionsoferk/,p6 INK4a andp gpinthebiopsyspecimensofcervical adenocarcinomaofchemosensitivegroup (4patients)andchemoresistantgroup (5patients).Expressiondiferencesof ERK/,p6 INK4a andp gpbetweenthechemosensitivegroupandchemoresistantgroupandthecorrelationamongthem wereanalyzed.therelationbetweentheexpressionsoferk/,p6 INK4a andp gpandthe3 yearsurvivalrateofthepa tientswithcervicaladenocarcinoma wasanalyzed. 犚犈犛犝犔犜犛 :ThehighlyexpressedratesofERK/inchemoresistant groupandchemosensitivegroupwere7.0%(8/5)and35.7%(5/4)respectively,andtherewasstatisticalsignificance betweenthem ( 犝 =96, 犘 =0.06);thehighlyexpressedrateofP gpwas76.0%(9/5)inchemoresistantgroupwhich wasobviouslyhigherthanthatofchemosensitivegroup8.6% (4/4),andthisdiferencewasstatisticalysignificant ( 犝 =0, 犘 =0.06);whiletheexpressiondiferencesofp6 INK4a betweenthechemoresistantgroupandchemosensitive groupwerenotstatisticalysignificant( 犝 =9, 犘 =0.40).TheexpressionofERK/waspositivelycorrelatedwith 基金项目 国家自然科学基金 (860383) 通讯作者简介 曾四元, 男, 江西遂川人, 硕士, 主任医师, 主要从事妇科肿瘤的研究工作 Tel: E mail:[email protected]

19 中华肿瘤防治杂志 03 年 0 月第 0 卷第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,October03,Vol.0 No thatofp6 INk4a ( 狉 =0.57, 犘 <0.00),andtheexpressionofERK/ waspositivelycorrelated withthatofp gp ( 狉 = 0.364, 犘 =0.03),whiletherewasnoobviouscorrelationbetweentheexpressionofp6 INK4a andtheexpressionofp gp ( 狉 =0.54, 犘 =0.3).The3 yearsurvivalratesoferk/highlyexpressedpatientsandlowlyexpressedpatientswere 60.9%(4/3)and93.8% (5/6)respectively,andtherewasstatisticalysignificantbetweenthem ( χ =4.73, 犘 = 0.030);whilethe3 yearsurvivalratesofp6 INK4a highlyexpressedpatientsandlowlyexpressedpatientswere68.0% (7/5)and85.7%(/4),therewasnostatisticalsignificancebetweenthem ( χ =.355, 犘 =0.44);the3 yearsur vivalratesofp gphighlyexpressedpatientsandlowlyexpressedpatientswere65.%(5/3)and87.5%(4/6),there wasnostatisticalsignificancebetweenthem ( χ =.347, 犘 =0.5). 犆犗犖犆犔犝犛犐犗犖犛 :ThehighexpressionofERK/ andp gpassociateswiththechemoresistanceofcervicaladenocarcinoma.erk/maybeusedasapredictorfortheselec tionofchemotherapyregimenandtheprognosisofcervicalcanceradenocarcinoma. [ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ] cervicalneoplasis;erk/protein;p6 INK4a protein;p glycoprotein;drugresistance,multiple 犆犺犻狀犑犆犪狀犮犲狉犘狉犲狏犜狉犲犪狋,03,0(9):508-5 中图分类号 R 文献标识码 A 文章编号 (03) 宫颈腺癌是除鳞癌外最常见的的宫颈癌病理类 [ ] 型, 其发病呈现上升及年轻化的趋势 以铂类为基础化疗是当前宫颈腺癌常规治疗的重要部分, 而耐药是宫颈腺癌化疗成功的最大障碍, 并成为宫颈腺癌复 [3 4] 发和治疗失败的主要原因之一 目前研究已表明, 许多肿瘤细胞在化疗药物的作用下, 出现了 P 糖蛋白 (P glycoprotein,p gp) 的表达增加, 与此同时也伴随着细胞外信号调节激酶 /(extracelularsignal regu lated kinase /,ERK/) 及 p6 INK4a 活性的改 [5 ] 变 但 P gp ERK/ 及 p6 INK4a 与宫颈腺癌耐药关系的研究甚少 本研究旨在探讨 ERK/ p6 INK4a 及 P gp 表达与宫颈腺癌耐药的关系, 同时分析其表达情况与宫颈腺癌患者 3 年生存率的关系, 以期为宫颈腺癌耐药的临床个体化治疗提供参考, 并初步评估宫颈腺癌患者的预后 材料与方法. 标本来源 收集 在江西省妇幼保健院初治的, 并完成 个周期以铂类为基础新辅助化疗宫颈腺癌患者治疗前的活检组织石蜡标本, 共 39 例 患者年龄 0~65 岁, 中位年龄 40 岁 按照 009 年国际妇产科联盟 (FIGO) 临床分期标准,ⅠB 期 8 例,Ⅰ B 期 6 例,ⅡA 期 8 例,ⅡB 期 7 例 39 例患者均经病理组织学确诊为宫颈腺癌, 并经病理科主任复阅再次确认, 同一患者在入院时及 个周期化疗结束后 3 周均由同一主任医师进行妇科检查并进行 B 超等影像学检查 参照实体瘤疗效评价标准 (000), 将 39 例患者分为化疗敏感组及耐药组 其中化疗耐药组 5 例, 年龄 0~65 岁, 平均年龄 (37.80±0.79) 岁, 中位年龄 35 岁 ; 化疗敏感组 4 例, 年龄 0~54 岁, 平均年龄 (4.80±8.74) 岁, 中位年龄 40 岁 两组患者的临床病理资料均衡, 且经统计学检验差异无统计学意义 ( 表 ) 39 例患者中有 例因 个周期化疗后宫颈局部肿瘤进展, 手术困难而改行同步放化疗治疗, 其余患者行手术治疗 临床病理因素 临床分期 表 39 例宫颈腺癌患者临床病理资料的比较 耐药组 ( 狀 =5) ⅠB~ⅠB 5 9 ⅡA~ⅡB 0 5 病理类型 黏液腺癌 4 5 子宫内膜样腺癌 4 透明细胞癌 5 6 宫颈腺癌非特指 病理分级 Ⅰ 5 Ⅱ 5 Ⅲ 4 注 : 透明细胞癌不进行病理分级. 主要试剂与仪器 敏感组 ( 狀 =4) χ 值犘值 ERK/ 鼠抗人单克隆抗体 ( 浓缩型 ) 购自美国 CST 公司 ; 鼠抗人 p6 INK4a 单克隆抗体 ( 即用型 ) 及鼠抗人 P gp 单克隆抗体 ( 即用型 ) 购自福州迈新生物科技公司 组织切片机为 Leica 公司产品 ;Anke TDL80 B 离心机 ; 电热恒温培养箱为上海一恒科技有限公司产品 ; 显微镜为 Olympus 公司产品.3 方法 宫颈腺癌组织石蜡块 4μm 连续切片后, 采用 PV9000 免疫组化二步法对活检组织石蜡标本进行 ERK/ p6 INK4a 及 P gp 的染色, 操作步骤按说明书进行 PV9000 二步法是多聚合物酶法, 运用一种具有惰性的多聚化合物为骨架, 使特异性抗体和辣根过氧化酶 (HRP) 同时标记于多聚合物分子上, 形成 HRP 多聚合物 特异性抗体复合物, 从而使一个抗体

20 中华肿瘤防治杂志 03 年 0 月第 0 卷第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,October03,Vol.0 No.9 53 临床基础研究 / 论著 宫颈癌犛犗犡 9 基因甲基化水平的研究 巫剑红梁学爱代荫梅首都医科大学附属北京妇产医院微创中心, 北京 0006 摘要 目的 : 通过全基因组的甲基化芯片, 筛选出宫颈癌新的甲基化基因, 并在宫颈脱落细胞中验证其检测宫颈癌的应用价值 方法 : 采用 CpG 岛富集化分析甲基化芯片 (methylated CpGislandrecoveryassay,MIRA) 技术在宫颈癌和正常宫颈组织中筛选异常甲基化基因, 选择甲基化水平较高的性别决定基因 9(sexdeterminingregionY box9,sox9), 应用亚硫酸氢钠 限制性酶切法在 48 例宫颈癌和 48 例正常宫颈脱落细胞中检测 SOX9 基因甲基化状态 结果 :) 通过 MIRA 技术可确定宫颈癌组织中 504 个 CpG 岛, 对应 378 个基因为异常甲基化基因,30 个为显著甲基化基因, 其中 LMXA 和 ZNF35 已在宫颈癌中有所报道,TLX3 TLX PAX6 EN EFNA5 TBX5 SOX9 HOXB3 BCLB LHX DLX4 TLX PKLR 和 OLIG 已在其他肿瘤组织中发生甲基化, 其余 4 个基因鲜见甲基化的相关报道 这 30 个基因中,SOX9 为甲基化水平较高的基因 )48 例宫颈癌脱落细胞中 3 例发生 SOX9 甲基化,48 例正常宫颈脱落细胞中未发现发生甲基化 宫颈癌脱落细胞中 SOX9 甲基化水平显著高于正常宫颈脱落细胞, 差异有统计学意义, χ = , 犘 =0.000 SOX9 基因甲基化检测宫颈癌的敏感度为 67%(3/48), 特异度为 00%(48/48) 结论:SOX9 基因在宫颈癌中频繁发生甲基化, 甲基化 SOX9 可能成为宫颈癌检测的分子标志 关键词 宫颈肿瘤 ;DNA 甲基化 ; 染色体性别决定基因 9; 微阵列中华肿瘤防治杂志,03,0(9):53-56 犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳犇犖犃犿犲狋犺狔犾犪狋犻狅狀狅犳犛犗犡 9 犻狀犮犲狉狏犻犮犪犾犮犪狀犮犲狉狌狊犻狀犵犿犲狋犺狔犾犪狋犲犱 犆狆犌犻狊犾犪狀犱狉犲犮狅狏犲狉狔犪狉狉犪狔 犠犝犑犻犪狀 犺狅狀犵, 犔犐犃犖犌犡狌犲 犪犻, 犇犃犐犢犻狀 犿犲犻犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犕犻狀犻犿犪犾犐狀狏犪狊犻狏犲犌狔狀犲犮狅犾狅犵狔犆犲狀狋犲狉, 犅犲犻犼犻狀犵犗犫狊狋犲狋狉犻犮狊犪狀犱犌狔狀犲犮狅犾狅犵狔犎狅狊狆犻狋犪犾, 犆犪狆犻狋犪犾犕犲犱犻犮犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犅犲犻犼犻狀犵 0006, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪 [ 犃犅犛犜犚犃犆犜 ] 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 :Toidentifynovelcandidatemethylation markersforcervicalcancerdetection,andthento validatethesignificantlyhypermethylatedgenesincervicalscrapings. 犕犈犜犎犗犇犛 :MIRA basedarraywascarriedoutin dyeswapwayincervicaltissuestoscreensignificantlyhypermethylatedgenesincervicalcancer.cobraassayinaninde pendentsetof48cervicalcancerand48normalcervicalscrapingswasconductedtodetectthemethylationlevelofsox9. 犚犈犛犝犔犜犛 :Totaly504CpGislands,correspondingto378genes,wereidentifiedtobediferentialy methylatedbetween cervicalcancerand normalcervicaltissues,30 genes werefoundto besignificantly hypermethylated.amongthem, LMXAandZNF35hadbeenpreviouslyreportedashypermethylatedincervicalcancer.TLX3,TLX,PAX6,EN,EF NA5,TBX5,SOX9,HOXB3,BCLB,LHX,DLX4,TLX,PKLRandOLIGhadbeenreportedashypermethylatedin othercancers.amongthe30genes,sox9hadthehighestmethylationlevel.methylatedsox9 wasdetectedin0of48 controlsandin3of48cervicalcancers.sox9methylationlevelincervicalcancerscrapingswassignificantlyhigherthan thatinnormalcervicalscrapings( χ =48.000, 犘 =0.000).ThesensitivityandspecificityofSOX9genemethylationfor cervicalcancerdetection was67% (3/48)and00% (48/48),respectively. 犆犗犖犆犔犝犛犐犗犖 :SOX9 methylationisfre quentlyinvolvedincervicalcarcinogenesis,andmayprovideavaluablemarkerforimproveddetectionofcervicalcancer. [ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ] cervicalneoplasms;dna methylation;sexdeterminingregiony box9;microarrays 犆犺犻狀犑犆犪狀犮犲狉犘狉犲狏犜狉犲犪狋,03,0(9):53-56 基金项目 北京市教委科技计划面上项目 (KM000050); 北京市科技计划项目 (D ); 北京市科委重大项目 (D ) 第一作者简介 巫剑红, 女, 江西宜春人, 硕士, 主要从事妇科肿瘤早期诊断的研究工作 E mail:[email protected] 通讯作者简介 代荫梅, 女, 河北沧州人, 博士, 主任医师, 硕士生导师, 主要从事妇科肿瘤临床和科研的研究工作 E mail:[email protected]

21 中华肿瘤防治杂志 03 年 0 月第 0 卷第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,October03,Vol.0 No.9 57 卵巢浆液性腺癌组织犆犺犽 和犚狊犳 蛋白表达临床意义研究 吴春 郭庆 韦玮 余波 章如松 陆珍凤 刘琦 石群立 临床基础研究 / 论著. 南京大学医学院临床学院 南京军区南京总医院 ( 病理科 : 吴春, 郭庆, 余波, 章如松, 陆珍凤, 石群立 ; 妇产科 : 刘琦 ), 江苏南京 000. 南京市妇幼保健院病理科, 江苏南京 009 摘要 目的 : 探讨检测点激酶 (checkpointkinase,chk) 和重构剪切因子 (remodelingandspacingfactor,rsf) 在卵巢浆液性腺癌 (ovarianserousadenocarcinoma,osa) 中表达及其临床意义 方法 : 采用免疫组化 SP 法检测 58 例高级别 OSA 4 例低级别 OSA 中 Chk 和 Rsf 蛋白的表达水平, 分析与临床病理参数的关系 并检测 7 例卵巢交界性浆液性肿瘤 (ovarianborderlineseroustumor,obst) 中两种蛋白的表达水平, 与 OSA 进行对比分析 结果 :Chk 在高级别和低级别 OSA 中阳性率分别为 79.3%(46/58) 和 50.0%(7/4), 差异有统计学意义, χ =4.99, 犘 =0.06; 在 OSA 和 OBST 中阳性率分别为 77.8% (56/7) 和 44.4% (/7), 差异有统计学意义, χ =7.4, 犘 =0.006 Chk 的表达与 OSA 复发及 3 年生存期有相关性, 犘 <0.05; 而与年龄 肿瘤最大径 淋巴结有无转移 发病部位及 ptnm 分期无关, 犘 > 0.05 Rsf 在高级别和低级别 OSA 中阳性率分别为 86.% (50/58) 和 57.% (8/4), 差异有统计学意义, χ =6.08, 犘 =0.03; 在 OSA 及 OBST 中阳性率分别为 79.% (57/7) 和 5.9% (4/7), 差异有统计学意义, χ =8.6, 犘 = Rsf 的表达与 OSA 复发及 ptnm 分期有相关性, 犘 <0.05; 而与年龄 肿瘤大小 淋巴结有无转移 发病部位及 3 年生存期无关, 犘 >0.05 Chk 和 Rsf 的表达存在明显相关性, 狉 =0.343, 犘 =0.003 结论:Chk 与 Rsf 在 OSA 的发生发展中起重要作用, 可作为临床指导治疗和评价患者预后的重要标志 关键词 卵巢肿瘤 ; 浆液性腺癌 ; 交界性肿瘤 ;Chk;Rsf; 免疫组织化学 中华肿瘤防治杂志,03,0(9):57-5 犈狓狆狉犲狊犻狅狀狊狅犳犆犺犽 犪狀犱犚狊犳 犪狀犱狋犺犲犻狉狊犻犵狀犻犳犻犮犪狀犮犲犻狀狅狏犪狉犻犪狀狊犲狉狅狌狊犪犱犲狀狅犮犪狉犮犻狀狅犿犪狋犻狊狌犲狊 犠犝犆犺狌狀, 犌犝犗犙犻狀犵, 犠犈犐犠犲犻, 犢犝犅狅, 犣犎犃犖犌犚狌 狊狅狀犵, 犔犝犣犺犲狀 犳犲狀犵, 犔犐犝犙犻, 犛犎犐犙狌狀 犾犻. 犖犪狀犼犻狀犵犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔犕犲犱犻犮犪犾犆狅犾犲犵犲, 犖犪狀犼犻狀犵犌犲狀犲狉犪犾犎狅狊狆犻狋犪犾狅犳犖犪狀犼犻狀犵犆狅犿犿犪狀犱狅犳犘犔犃, 犖犪狀犼犻狀犵 000, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪. 犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犘犪狋犺狅犾狅犵狔, 犖犪狀犼犻狀犵犕犪狋犲狉狀犪犾犪狀犱犆犺犻犾犱犎犲犪犾狋犺犎狅狊狆犻狋犪犾, 犖犪狀犼犻狀犵 000, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪 [ 犃犅犛犜犚犃犆犜 ] 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 :ToinvestigatetheexpressionofChkandRsfinovarianserousadenocarcinoma (OSA) andtheircorrelations. 犕犈犜犎犗犇犛 :Immunohistochemicalstaining (SP method)wasusedtoexamineexpressionofchk andrsfin58high gradeosaand4low gradeosa,andtheircorrelationswithclinicopathologicalparameterswereas sayed.twenty sevenovarianborderlineseroustumors(obst)wereexaminedforthepurposeofcomparisonwithosa. 犚犈犛犝犔犜犛 :ThepositiveratesofChkinhigh gradeosaandlow gradeosa were79.3%(46/58)and50.0%(7/4)re spectively,showingsignificantstatisticaldiference( χ =4.99, 犘 =0.06),andthepositiveratesinOSAandOBST were 77.8%(56/7)and44.4%(/7)respectively,withsignificantstatisticaldiference ( χ =7.4, 犘 =0.006).Chkex pressionwasassociatedwithosarecurrenceand3 yearsurvival,buthadnostatisticdiferencewithpatients age,tumor diameter,lymphaticmetastasis,pathogenicsiteandptnmstage( 犘 >0.05).ThepositiveratesofRsfinhigh gradeosa andlow gradeosa were86.%(50/58)and57.%(8/4)respectively,showingsignificantstatisticaldiference ( χ = 6.08, 犘 =0.03),andthepositiveratesinOSAandOBST were79.% (57/7)and5.9% (4/7)respectively,with significantstatisticaldiference ( χ =8.6, 犘 =0.004).Rsfexpression wasrelevantto OSA recurrenceandptnm 基金项目 南京军区面上课题 (07M084) 第一作者简介 吴春, 女, 江苏扬州人, 硕士, 主治医师, 主要从事肿瘤病理诊治的研究工作 现工作于扬州友好医院 ( 江苏油田总医院 ) 病理科 Tel: E mail:[email protected] 通讯作者简介 石群立, 男, 浙江渚暨人, 主任医师, 教授, 硕士生导师, 主要从事妇科肿瘤和恶性淋巴瘤的基础与临床研究工作 Tel: E mail:[email protected]

22 58 吴春, 等卵巢浆液性腺癌组织 Chk 和 Rsf 蛋白表达临床意义研究 stage( 犘 <0.05),butithadnostatisticdiferencewithpatients age,tumordiameter,lymphaticmetastasis,pathogenic siteand3yearsurvival( 犘 >0.05).TherewasasignificantcorrelationbetweenChkandRsf( 狉 =0.343, 犘 =0.003). 犆犗犖犆犔犝犛犐犗犖 :TheexpressionsofChkandRsfarecloselyrelatedwiththedevelopmentofOSAandtheycanbeused asimportantindicatorsinguidingtreatmentandpredictingprognosis. [ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ] ovarianneoplasms;serousadenocarcinoma;borderlineseroustumor;chk;rsf;immunohistochemistry 犆犺犻狀犑犆犪狀犮犲狉犘狉犲狏犜狉犲犪狋,03,0(9):57-5 中图分类号 R737.3 文献标识码 A 文章编号 (03) 卵巢癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一, 预后不良, [] 其中老年患者生存率明显低于年青患者, 且早期与 [] 晚期患者的预后差异大 卵巢浆液性腺癌(ovarian serousadenocarcinoma,osa) 是卵巢癌中最常见的组织学亚型之一 为了更好地进行卵巢癌的组织学分级和判断不同级别卵巢癌患者的预后, 本研究运用免疫组织化学方法检测检测点激酶 (check pointki nase,chk) 及重构剪切因子 (remodelingandspac ingfactor,rsf) 在 OSA 中的表达情况, 分析其与临床病理参数的关系, 并与卵巢交界性浆液性肿瘤 (o varianborderlineseroustumor,obst) 进行对比, 探讨两种蛋白在 OSA 发生发展中的意义, 旨在为临床治疗和预后判断寻找理论依据 材料与方法. 标本来源 收集南京军区南京总医院病理科 手术切除的 OSA 组织标本 7 例, 患者年龄 ~79 岁, 中位年龄 53 岁 ; 肿瘤最大径为 ~ cm, 平均 7.8cm; 肿瘤单侧发病 7 例, 双侧发病 45 例 ; 有淋巴结转移 4 例, 无转移 48 例 ; 肿瘤复发 49 例, 无复发 3 例 根据 AJCC 癌症分期手册 00 年第 7 版 ptnm 分期标准,T 期 0 例,T 期 0 例,T 3 期 43 例,M 期 9 例 根据 004 年 MDACC 分级标准, 低级别 OSA4 例, 高级别 OSA58 例 同时收集南京市妇幼保健院 收治的 7 例 OBST 标本作为对照, 患者年龄 9~70 岁, 中位年龄 35. 岁 ; 肿瘤最大径 3~cm, 平均 9.7cm;FIGO 分期,Ⅰ 期 0 例,Ⅱ 期 6 例,Ⅲ 期 例 ; 肿瘤单侧发病 例, 双侧发病 6 例 ; 复发 4 例, 无复发 3 例 入组 [3] 的所有病例, 参照 004 年 MDACC 病理分级系统, 经 3 位病理医师复习切片, 确定组织类型, 并排除卵巢黏液性肿瘤 ( 交界性肿瘤 黏液性癌和肠型腺癌 ) 子宫内膜样癌 透明细胞癌以及未分化癌等其他类型. 实验方法 免疫组织化学试剂 Chk 为兔抗人单克隆抗体 (EPR3749 ), 购自 EPITOMICS 公司, 稀释度 50 Rsf 为兔抗人单克隆抗体 (EPR435), 购自 EPITO MICS 公司, 稀释度 00 所有标本经 4% 甲醛固定, 石蜡包埋,4μm 厚连续切片 免疫组织化学染色采用 SP 二步免疫法, 操作步骤按说明书进行 以 PBS 代替一抗作为阴性对照, 以已知的阳性对照片作为阳性对照.3 判断标准及评分 免疫组织化学标志 Chk 及 Rsf 阳性部位均定位于肿瘤细胞核, 为黄色至棕黄色颗粒样着色 阳性结果及评分根据阳性细胞百分率和染色强度的乘积为总分进行判断 ) 阳性细胞百分率 : 选染色均匀的阳性表达肿瘤区域 ( 5 个高倍视野 ), 计数阳性细胞数, 以阳性细胞数占计数肿瘤细胞总数的百分率分 5 级计分, 即阳性细胞百分率 5% 为 0 分 ;>5%~5% 为 分 ;>5% ~50% 为 分 ;>50% ~75% 为 3 分 ;> 75% 为 4 分 ) 染色强度 : 不着色为 0 分 ; 浅黄色为 分 ; 棕黄色为 分 ; 黄褐色为 3 分 ; 染色强度依背景着色进行对比 两项得分相乘 :0~3 分为阴性 (-);4~ 5 分为弱阳性 (+);6~8 分为阳性 (++);9~ 分为强阳性 (+++) 其中 (+)~ (+++ ) 定义为阳性表达.4 统计学方法 采用 SPSS6.0 统计软件处理 频数资料组间比较采用 χ 检验或 Fisher 确切概率法 ; 生存分析用 Ka plan Meier 法 Log rank 检验 检验水准 α=0.05 结果. 犗犛犃组织学形态 图 A 所示, 低级别 OSA 癌组织呈腺管状 乳头状或实性排列 ; 腺管大小不一, 形状不规则 ; 癌细胞形态较一致, 核圆形或卵圆形, 染色质匀细, 核分裂像较少 图 B 所示, 高级别 OSA 呈实性片块状, 癌细胞异型明显, 核大小不一, 染色质粗, 核仁明显, 可见瘤巨细胞, 核分裂像多见. 犆犺犽 和犚狊犳 的表达与临床病理参数的关系 Chk 阳性表达定位于细胞核 ( 图 A 和图 B), 在高级别 OSA 中阳性率为 79.3%, 在低级别 OSA 中

23 5 朱红荣, 等宫颈癌远处转移 37 例临床分析 临床应用研究 / 论著 宫颈癌远处转移 37 例临床分析 朱红荣 马德花 鲁强 赵淑萍. 青岛大学医学院附属医院妇科, 山东青岛 泰山医学院附属医院妇产科, 山东泰安 7000 摘要 目的 : 探讨宫颈癌远处转移的发生率 危险期 好发部位 治疗疗效及影响远处转移时间的高危因素 方法 : 回顾性分析 我院收治的 89 例宫颈癌患者中发生远处转移的 37 例患者的临床资料 结果 : 宫颈癌远处转移发生率为 4.%(37/89); 远处转移的发生时间大都在治疗开始 年内, 占 73%(7/37); 远处转移部位以远处淋巴结居多 ( 除外盆腔内淋巴结 ), 占 5.4% (9/37), 肺占 37.8% (4/37) 骨占 4.3% (9/37) 肝及其他部位占 4.3%(9/37) 宫颈癌患者盆腔复发率为.9%(06/89), 其远处转移患者中伴盆腔复发为 78.4%(9/37), 单纯盆腔复发患者的同步放化疗 年生存率较远处转移患者高, χ =.47, 犘 =0.000 宫颈癌远处转移时间的危险因素: 高分化患者发生远处转移的时间明显长于低 中分化, 犘值分别为 和 0.00; 但是中分化与低分化患者发生远处转移的时间差异无统计学意义, 犘 =0.40 <60 岁的患者发生远处转移的时间均明显早于 >60 岁的患者, 犘值分别为 0.00 和 0.00; 但是 <60 岁的患者中,<40 岁与 40~60 岁的患者发生远处转移的时间差异无统计学意义, 犘 =0.956 ⅠB 与 Ⅱ A,ⅡA 与 ⅡB,Ⅲ 与 Ⅳ 期患者发生远处转移的时间差异均无统计学意义, 犘值分别为 和 0.695; 但是 ⅡB 期发生远处转移时间明显晚于 Ⅲ Ⅳ 期, 犘值分别为 0.0 和 0.03 结论: 子宫颈癌远处转移大都出现在治疗开始 年内, 以淋巴结 肺等为主要转移部位且治疗疗效较差, 分化差 分期晚的年轻患者更易出现远处转移, 提示出临床上应加强易发宫颈癌远处转移的高危人群的监测和随访 关键词 宫颈肿瘤 / 病理学 ; 远处转移 ; 高危因素 ; 回顾性研究 中华肿瘤防治杂志,03,0(9):5-54 犆犾犻狀犻犮犪犾狊狋狌犱狔狅狀犱犻狊狋犪狀狋犿犲狋犪狊狋犪狊犻狊狅犳犮犲狉狏犻犮犪犾犿犪犾犻犵狀犪狀狋狋狌犿狅狉 : 犃狉犲狆狅狉狋狅犳 37 犮犪狊犲狊 犣犎犝犎狅狀犵 狉狅狀犵, 犕犃犇犲 犺狌犪, 犔犝犙犻犪狀犵, 犣犎犃犗犛犺狌 狆犻狀犵. 犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犌狔狀犪犲犮狅犾狅犵狔, 犃犳犳犻犾犻犪狋犲犱犎狅狊狆犻狋犪犾狅犳犕犲犱犻犮犪犾犆狅犾犲犵犲, 犙犻狀犵犱犪狅犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犙犻狀犵犱犪狅 66003, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪. 犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犌狔狀犪犲犮狅犾狅犵狔犪狀犱犗犫狊狋犲狋狉犻犮狊, 犃犳犳犻犾犻犪狋犲犱犎狅狊狆犻狋犪犾狅犳犜犪犻狊犺犪狀犕犲犱犻犮犪犾犆狅犾犲犵犲, 犜犪犻犪狀 7000, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪 [ 犃犅犛犜犚犃犆犜 ] 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 :Toexplorethepredilectionsites,crisesandhigh riskfactorsforcervicalcarcinomawithdis tantmetastasis. 犕犈犜犎犗犇犛 :Screening37casesofcervicalcancerpatientswithdistantmetastasisfrom89patientsfor retrospectiveanalysis. 犚犈犛犝犔犜犛 :Theincidenceofcervicalcancerpatients withdistantmetastasisaccountedfor4.% (37/89)andtheymostlyoccurredwithinyearsafterthestartoftreatment,andthemostpredilectionsitewaslymph nodeswhichaccountedfor5.4% (9/37)exceptthepelviclymphnodes,theremainingparts werethelung37.8% (4/37),bone4.3% (9/37),liverandothers4.3% (9/37).Therateofcervicalcancerpatientswithpelvicrecurrence was.9%(06/89).therewere78.4%(9/37)cervicalcancerpatientswithdistantmetastasesincludingpelvicrecur rence.two yearsurvivalrateofconcurrentchemoradiotherapyforcervicalcancerpatients withpelvicrecurrence was muchbeterthanthatofdistantmetastases( χ =.47; 犘 =0.000).Theefectionofriskfacrorsfordistantmetastasis time:thetimeofwel diferentiatedcervicalcancerpatientswithdistantmetastasiswassignificantlylongerthanthatof thelowgradecases( 犘 =0.000; 犘 =0.00),buttherewasnosignificantdiferenceinthelowdiferentiationofcervical cancer( 犘 =0.40).Thetimeofdistantmetastasisinyoungerpatientsoccurredsignificantlyearlierthanthatofolderthan 60 year oldones( 犘 =0.00; 犘 =0.00),butnosignificantdiferencewasfoundbetweenthelessthan40 year oldpatients andtheamong40 60year oldones( 犘 =0.956).Thecomparisonbetweenthetimeofcervicalcancerwithdistantmetasta sisandthestagingofcervicalcancershowedthattherewerenosignificantdiferencesbetweenthegroupsofphase ⅠB andphaseⅡa,phaseⅡaandphaseⅡb,phaseⅢ andphaseⅣ( 犘 =0.706; 犘 =0.05; 犘 =0.695),butthetimeofphase Ⅱbofcervicalcancerwithdistantmetastasisoccurredsignificantlylaterthanthatofphase Ⅲ andphase Ⅳ ofcervical 第一作者简介 朱红荣, 女, 山东沂南人, 硕士, 主要从事妇科肿瘤及内分泌的研究工作 E mail:[email protected] 通讯作者简介 赵淑萍, 女, 山东青岛人, 博士, 主任医师, 教授, 博士生导师, 主要从事妇科肿瘤及内分泌的研究工作 E mail:[email protected]

24 中华肿瘤防治杂志 03 年 0 月第 0 卷第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,October03,Vol.0 No.9 53 cancer( 犘 =0.0; 犘 =0.03). 犆犗犖犆犔犝犛犐犗犖犛 :Thepatientsofcervicalcancerwithdistantmetastasis mostlyoccurs withinyearsafterthestartoftreatment.themainlymetastaticsitesarelymphnodesandlungandthetreatmenteficacy wasusualypoor.poorlydiferentiatedandlatestageyoungerpatientsweremorelikelytohavedistantmetastases. [ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ] cervicalneoplasms/pathology;distantmetastasis;riskfactor;retrospectivestudies 犆犺犻狀犑犆犪狀犮犲狉犘狉犲狏犜狉犲犪狋,03,0(9):5-54 中图分类号 R 文献标识码 A 文章编号 (03) 宫颈癌是最常见的恶性肿瘤之一, 仅次于乳腺癌, [] 居我国妇女恶性肿瘤的第 位 随着诊疗技术的进步及医疗水平的提高, 治疗效果得到明显改善, 但是发生远处转移的患者预后较差, 文献报道宫颈癌治疗后复发率为 35%, 其中远处转移 % ~6% [ 3] 宫颈癌的转移方式主要为局部浸润扩散和淋巴途径转移, 远处转移少见且多为血性转移 本研究回顾性分析 89 例宫颈癌中发生远处转移的 37 例患者临床资料, 以探讨宫颈癌发生远处转移时的好发部位 危险期及影响远处转移时间的高危因素 对象与方法. 病例选择及一般资料 选择 青岛大学医学院附属医院收治的 89 例宫颈癌患者中发生远处转移的 37 例患者作为研究对象, 所有病例均经 ECT CT X 射线 B 超 病理或针吸细胞学等检查中一项以上方法确诊且资料完整 发生远处转移的 37 例患者, 年龄 30~7 岁, 中位年龄 48 岁, 均为已生育女性, 均依据患者确诊治疗时最新 NCCN 指南进行了肿瘤标准化治疗, 且依从性良好. 发生远处转移患者的病理类型及分化程度 37 例发生远处转移的宫颈癌患者中, 鳞癌 33 例, 其中低分化 9 例, 中分化 例, 高分化 例 ; 腺癌 例, 其中低分化 例, 高分化 例 ; 腺鳞癌 例, 均为中分化.3 发生远处转移患者的临床分期及肿瘤直径 37 例发生远处转移的宫颈癌患者根据 995 年 FIGO 临床分期标准,ⅠB 期 3 例 (ⅠB 期 6 例,ⅠB 期 7 例 ),ⅡA 期 6 例 (ⅡA 期 4 例,ⅡA 期 例 ),Ⅱ B 期 8 例,Ⅲ 期 5 例 (ⅢA 期 0 例,ⅢB 期 5 例 ) 和 Ⅳ 期 5 例 (ⅣA 期 0 例,ⅣB 期 5 例 ); 肿瘤直径 <4cm 者 6 例, 4cm 者 例.4 统计学方法 应用 SPSS7.0 软件进行统计学分析, 采用单因素方差分析及 χ 检验 Fisher 确切概率法 检验水准 α=0.05 结果. 随访 89 例患者确诊后即通过入院 门诊或电话随访截止至死亡 失访或 0 0, 随访率为 99.% (884/89) 所有资料录入 SPSS7.0 统计软件, 采用 Kaplan Meier 法计算累计生存率,89 例宫颈癌患者的 5 年生存率为 9.5%(85/89). 远处转移发生率和时间及好发部位 经分析发现, 宫颈癌发生远处转移率为 4.% (37/89), 发生远处转移的患者中 73.0% (7/37) 的患者在治疗开始 年内发生远处转移 ; 好发转移部位以远处淋巴结居多 ( 除外盆腔内淋巴结 ), 占 5.4% (9/37); 其次, 肺占 37.8% (4/37), 骨占 4.3% (9/37), 肝及其他部位占 4.3%(9/37).3 远处转移与盆腔复发疗效的比较 同期统计数据分析发现, 宫颈癌患者盆腔复发率为.9%(06/89), 远处转移患者中 78.4%(9/37) 伴盆腔复发 ; 远处转移患者同步放化疗与非同步放化疗 年生存率分别为 70.3% (6/37) 和 6.% (3/37), 差异无统计学意义, χ =0.544, 犘 =0.46; 盆腔复发患者同步放化疗 年生存率为 97.% (03/06), 与远处转移患者的同步放化疗 年生存率比较, 差异有统计学意义, χ =.47, 犘 = 远处转移时间与危险因素关系 统计分析如表 显示, 高分化宫颈癌患者发生远处转移的时间明显长于低及中分化患者, 犘值分别为 和 0.00; 但是中分化与低分化患者发生远处转移的时间差异无统计学意义, 犘 =0.40 <60 岁的患者发生远处转移的时间明显早于 >60 岁的患者, 犘值分别为 0.00 和 0.00; 但是 <60 岁的患者中,<40 岁与 40~60 岁的患者发生远处转移的时间差异无统计学意义, 犘 =0.956 ⅠB 与 ⅡA 期 ⅡA 与 ⅡB 期 Ⅲ 与 Ⅳ 期患者发生远处转移的时间差异均无统计学意义, 犘值分别为 和 0.695; 但是 ⅡB 期患者发生远处转移时间明显晚于 Ⅲ Ⅳ 期患者, 犘值分别为 0.0 和 讨论 早在 00 年有文献报道, 宫颈癌治疗后复发率为 35%, 其中远处转移为 % ~6% [ 3] 对青岛大学医学院附属医院近 0 年宫颈癌患者进行分析发现, 盆

25 中华肿瘤防治杂志 03 年 0 月第 0 卷第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,October03,Vol.0 No.9 55 荟萃分析 / 论著 咖啡与子宫内膜癌发病风险的犕犲狋犪分析 黄世金徐红韦玮广西医科大学第一附属医院妇科, 广西南宁 5300 摘要 目的 : 探讨咖啡摄入与子宫内膜癌发病风险的关系 方法 : 计算机检索 CBM CNKI 万方数据 PubMed EM BASE 和 Cochrane 图书馆等数据库, 收集 0 0 以前发表的关于子宫内膜癌与咖啡关系的符合纳入标准的前瞻性研究, 由 位评价员按纳入与排除标准独立筛选文献 提取资料并用卡斯尔 渥太华量表 (NOS) 评价质量后, 用 STATA.0 软件进行统计分析, 采用 Q 检验和 I 进行异质性检验 以咖啡摄入 4 杯 /d 为截点, 分别合并计算纳入研究的相对危险度 (RR) 或风险比值 (HR) 及其 95% 可信区间 (CI), 并按研究地区行亚组分析 另对咖啡摄入与子宫内膜癌发病风险关系进行剂量 效应 Meta 分析 结果 : 共纳入 0 个队列研究, 参与者 5386 人, 包括 4484 例子宫内膜癌患者 异质性检验未发现各研究间存在明显异质性 Meta 分析结果显示, 与很少饮用或不饮用咖啡的人群相比, 饮用咖啡 4 杯 /d (RR=0.74,95%CI:0.67~0.83) 或 <4 杯 /d (RR=0.87,95%CI:0.8~0.93) 的女性人群罹患子宫内膜癌的风险降低 按研究地区的亚组分析与总体结果一致 剂量 效应关系分析显示, 饮用咖啡与子宫内膜癌风险之间存在线性剂量 效应关系 ( 犘非线性 =0.707), 饮用咖啡每增加 杯 /d, 患子宫内膜癌的风险减少了 5% (RR=0.85,95%CI: 0.75~0.98) 结论: 子宫内膜癌的发病风险随着饮用咖啡量的增加而逐渐降低 关键词 子宫内膜肿瘤 ; 咖啡 ; 系统评价 ;Meta 分析中华肿瘤防治杂志,03,0(9): 犆狅犳犲犲犮狅狀狊狌犿狆狋犻狅狀犪狀犱狉犻狊犽狅犳犲狀犱狅犿犲狋狉犻犪犾犮犪狀犮犲狉 : 犃狊狔狊狋犲犿犪狋犻犮狉犲狏犻犲狑犪狀犱犕犲狋犪 犪狀犪犾狔狊犻狊狅犳狆狉狅狊狆犲犮狋犻狏犲狊狋狌犱犻犲狊 犎犝犃犖犌犛犺犻 犼犻狀, 犡犝犎狅狀犵, 犠犈犐犠犲犻犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犌狔狀犲犮狅犾狅犵狔, 犉犻狉狊狋犃犳犳犻犾犻犪狋犲犱犎狅狊狆犻狋犪犾狅犳犌狌犪狀犵狓犻犕犲犱犻犮犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犖犪狀狀犻狀犵 5300, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪 [ 犃犅犛犜犚犃犆犜 ] 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 :Toassesstheassociationbetweencofeeconsumptionandriskofendometrialcancer. 犕犈犜犎犗犇犛 :Wesearchedreferencesfrom CBM,CNKI,Wangfangdata,PubMed,EMBASEandtheCochraneLibrarybe foreoctober0toselectarticlesontheassociationbetweencofeeconsumptionandriskofendometrialcancerwhich metinitialcriteria.twoevaluatorsindependentlyreviewedandselectedarticlesbasedonpredeterminedselectioncriteria andassessarticleswithnewcastle OtawaQualityScale,NOS.Stata.0wasusedtoconductmeta analysis.qtestandi wereusedtohaveheterogeneitytest.wesetcofeedrinking4cups/dayasacut pointandcombinedrelativeriskorhazard ratioandcorresponding95% confidenceintervalsforcofeedrinking.wealsoperformedsubgroupanalysesbygeographic region.moreover,weconductedadose responsemeta analysisontheassociationbetweencofeeconsumptionandriskof endometrialcancer. 犚犈犛犝犔犜犛 :Atotalof0cohortstudieswereincludedinthefinalanalyses,involved5386partici pantsand4484casesofendometrialcancer.nosignificantheterogeneitywasfoundbetweenstudies.comparedwiththe non/lowestcofeeconsumption,cofeedrinking 4cups/dayor<4cups/daywasassociatedwithreductionofendometri alcancerrisk.thesummaryrrofendometrialcancerwas0.74(95%ci: )for 4cups/dayofcofeecon sumptionand0.87(95%ci: )for<4cups/dayofcofeeconsumption.subgroupanalyseswereconsistentwith theoveralanalyses.dose responseanalysisindicatedthatadose responserelationshipwaspresentbetweencofeedrink ingandendometrialcancerrisk(pnon linearity=0.707)andincrementcups/dayofcofeeconsumptionwasassociated withreduced5% endometrialcancerrisk(rr=0.85,95%ci: ). 犆犗犖犆犔犝犛犐犗犖 :Ourmeta analysissuggests thatcofeeconsumptionisassociatedwithreducedendometrialcancerrisk. [ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ] endometrialneoplasms;cofee;systematicreview;meta analysis 犆犺犻狀犑犆犪狀犮犲狉犘狉犲狏犜狉犲犪狋,03,0(9): 第一作者简介 黄世金, 男, 广东茂名人, 硕士, 主要从事妇科肿瘤的研究工作 Tel: E mail:[email protected] 通讯作者简介 徐红, 女, 广西南宁人, 主任医师, 教授, 博士生导师, 主要从事妇科肿瘤及子宫内膜异位症的研究工作 Tel: E mail:[email protected]

26 中华肿瘤防治杂志 03 年 0 月第 0 卷第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,October03,Vol.0 No.9 53 短篇报道 / 论著 卵巢甲状腺肿类癌的临床病理分析 田保玲高霭峰马颖周欣杨向红 中国医科大学附属盛京医院 ( 病理科 : 田保玲, 高霭峰, 马颖, 杨向红 ; 妇科 : 周欣 ), 辽宁沈阳 0004 关键词 卵巢 ; 甲状腺肿类癌 ; 畸胎瘤 ; 免疫组织化学 中图分类号 R734. 文献标识码 D 文章编号 (03) 卵巢甲状腺肿类癌是由甲状腺组织和类癌组织密切 [] 混合构成的卵巢生殖细胞肿瘤 自 970 年 Sculy 提出 [] 此命名以来, 国内外报道鲜见 本研究分析了 7 例卵巢甲状腺肿类癌患者的临床资料, 并结合文献对其临床及病理学特点进行分析, 以提高对这一疾病的认识 临床资料. 临床表现 收集 中国医科大学附属盛京医院病理科卵巢甲状腺肿类癌 7 例, 其中 6 例伴囊性成熟型畸胎瘤 患者均为女性 年龄 34~65 岁, 平均年龄 5 岁, 中位年龄 54 岁 例无明显症状,4 例下腹部隐痛不适 腹胀, 例月经紊乱 阴道不规则出血 三维彩超或盆腔 CT 发现附件区肿物, 多考虑为畸胎瘤, 其中 例伴腹水, 其他部位及实验室检查无明显异常 术中见肿物包膜完整, 与周围脏器无粘连, 盆腔未见种植及转移灶 6 例行双侧附件 全子宫 大网膜 阑尾和左右盆腔淋巴结清除术, 部分术后予以化疗 ; 例行双侧附件切除术. 方法 复习原病理切片, 并收集相应的临床资料 所有病例均经免疫组化染色确诊 免疫组化在自动免疫组化染色机中进行, 所用抗体包括 Thyroglobulin CK CD56 Syn CgA Ki 67 和 NSE, 均为即用型抗体, 购自 BioGenex 公司.3 免疫组化判定标准 肿瘤细胞阳性细胞数 <5% 为阴性, 5% 为阳性 其中 5%~50% 为 (+),>50%~75% 为 (++), >75%~00% 为 (+++) Ki 67 阳性为细胞核棕褐色着色, 其余阳性均为细胞质棕黄色着色.4 随访 采用电话随访, 术后随访 3~96 个月, 中位随访时 通讯作者简介 田保玲, 女, 山东临沂人, 博士, 讲师, 主要从事妇科肿瘤的研究工作 Tel: E mail:[email protected] 间 4 个月, 随访截止时间 结果.5. 大体检查 6 例卵巢甲状腺肿类癌为囊实性, 最大径 3.5~.0cm, 包膜完整, 囊内含油脂毛发等畸胎瘤成分,4 例囊壁见实性结节 0.5~4.0cm, 结节灰白 黄白, 质软, 界限清楚, 未见出血及坏死 ; 例未见明显结节, 仅囊壁局部增厚 例为实性, 最大径 8cm, 包膜完整, 切面淡黄色胶冻状, 部分黄白色质软细腻, 未见出血及坏死.5. 镜下表现肿物囊壁内实性结节为甲状腺肿类癌, 均由类癌和甲状腺组织密切混合构成 ( 图 A) 类癌组织以梁状结构为主, 混有少量岛状结构, 瘤细胞短梭形, 大小较一致, 胞质中等, 嗜酸, 核圆形或卵圆形, 染色质均匀细致, 核仁不明显, 未找到核分裂像, 无出血坏死 ( 图 B) 甲状腺组织由类似甲状腺滤泡型腺瘤的甲状腺滤泡构成, 滤泡上皮扁平或立方, 滤泡腔内含甲状腺胶质 类癌和甲状腺组织紧密相连, 部分可见两者间的移行带, 部分甲状腺滤泡被类癌组织取代, 残留甲状腺胶质 此外,6 例见成熟皮肤及附属器 呼吸道上皮 消化道上皮 软骨和神经组织等畸胎瘤成分 ; 实性的 例为单纯的卵巢甲状腺肿类癌 例对侧卵巢同时发生囊性成熟型畸胎瘤, 例子宫有平滑肌瘤, 其余对侧卵巢 全子宫 大网膜 阑尾和左右盆腔淋巴结无异常.5.3 免疫组化检测如图 所示, 甲状腺肿区域 Thyroglobulin 和 CK7 阳性, 均为 (+++);CD56 Syn CgA NSE 和 Ki 67 均阴性 类癌区域 CD56 Syn CgA 和 NSE 阳性, 均为 (+++);Ki 67<% 细胞阳性着色 ; CK 部分阳性,(+)~(++); 甲状腺球蛋白阴性.5.4 诊断结果 6 例诊断为卵巢甲状腺肿类癌伴囊性成熟型畸胎瘤, 例为卵巢甲状腺肿类癌 7 例患者均为临床 Ⅰ 期, 部分患者术后进行化疗.5.5 随访结果 例患者失访, 其余患者至随访截止日期均生存, 无复发转移 讨论 类癌通常发生于胃肠道和肺, 原发卵巢类癌非常

27 中华肿瘤防治杂志 03 年 0 月第 0 卷第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,October03,Vol.0 No 短篇报道 / 论著 儿童膀胱侵袭性血管黏液瘤一例报告 骆强翔 刘春晓 南方医科大学珠江医院泌尿外科, 广东广州 5080 关键词 膀胱 ; 血管肿瘤 ; 黏液瘤 ; 病例报告 中图分类号 R737.4 文献标识码 D 文章编号 (03) 病例报告 患儿女, 岁 因 尿频 尿急和尿痛 3 周 于 入院 在外院查尿常规示, 红细胞 (+++), 白细胞 (++), 血 便常规及血生化均未见明显异常 按 急性膀胱炎 治疗 周无效, 查泌尿系超声及盆腔 CT 均发现膀胱左侧壁巨大占位性病变, 考虑膀胱横纹肌肉瘤可能性大 肿物局部活检病理示, 慢性炎症伴大片坏死, 另见小片状增生的移行上皮 为求进一步诊治入我院, 查体未见明确阳性体征, 查血尿便常规 血生化结果与外院类似 ; 复查 CT 示, 膀胱左前壁见软组织密度肿块影, 呈浅分叶状, 边界清, 范围 4.8cm 3.5cm, 病灶大部密度较均匀 ; 平扫 CT 值约 3Hu, 边缘密度较高, 约 55 Hu; 增强扫描明显强化,CT 值约 86 Hu, 盆腔内未见肿大淋巴结 ( 图 A) 肿物局部活检, 考虑膀胱横纹肌肉瘤可能性大, 但由于送检组织量少, 病理科建议取大标本进一步诊断 于 在硬腰联合阻滞麻醉下行经尿道膀胱肿瘤电切术, 术中见肿物血管丰富, 基底宽, 呈浸润性生长征象, 术中难以将肿物完全切除 术后病理示, 膀胱血管瘤, 伴腺性膀胱炎 病理切片请两家三甲医院病理科会诊, 分别考虑腺性膀胱炎 息肉样膀胱炎伴囊性腺性膀胱炎 患儿术后恢复良好, 遂办理出院, 嘱密切随访 患儿于 返院复查,CT 提示肿物复发, 范围增至 5.6cm 4.cm, 盆腔内未见明确肿大的淋巴结 ( 图 B) 考虑到肿物的复发性, 第一作者简介 骆强翔, 男, 湖北黄冈人, 博士, 主要从事膀胱肿瘤的临床研究工作 E mail:[email protected] 通讯作者简介 刘春晓, 男, 福建厦门人, 主任医师, 教授, 博士生导师, 主要从事膀胱肿瘤的微创治疗 全去带乙状结肠原位新膀胱术 前列腺增生 ( 经尿道前列腺剜除术 ) 及前列腺癌的基础与临床研究工作 E mail:[email protected] 且病理未提示恶性肿瘤, 于 在气管内全麻下行单孔腹腔镜下膀胱部分切除术 术后病理示, 瘤组织由散在纤细薄壁和厚壁血管 梭形细胞 星形细胞和散在平滑肌束组成, 局部血管内皮细胞增生活跃, 细胞大小规则, 核分裂像难见, 间质明显水肿 黏液变, 局部表面糜烂, 散在淋巴细胞等浸润 ( 图 ) 免疫组化: VIM(+) SMA(+) CD3(+) CD34(+) PR(+) EMA(+) S 00(-) Myogenin(- ) CK(- ) ER (-) 和 Ki 67 约 3%(+); 特染 : 黏液 AB PAS(+, 蓝色 ) 病理诊断为膀胱侵袭性血管黏液瘤 (aggressive angiomyxomaofbladder,aab) 术后治疗 : 第 次术后予留置尿管 周, 余为补液抗感染治疗 3d; 第 次术后予留置尿管 5d, 余无特殊治疗, 酌情补液 本例患儿出院后嘱其密切复查, 图 C 所示, 至 入院复查 CT 未见肿瘤复发 讨论 侵袭性血管黏液瘤 (aggressiveangiomyxoma, [] AA) 是一种罕见的间质来源非恶性肿瘤, 多见于育 [] 龄期女性, 好发于外阴 盆腔和腹膜后等部位 局部侵袭性 复发性是 AA 的重要特征, 但由于一般不会出现淋巴结转移及远处转移, 所以常将其界定为良性肿瘤 ; 但仍有个案报道肿瘤转移致死, 因此也有学者将其 [3] 界定为交界性肿瘤 光镜下,AA 主要由血管及黏液构成, 含有星形细胞 纺锤形细胞 成纤维细胞和成肌纤维细胞, 细胞间大量黏液填充 ; 免疫组织化学无特 [4] 异性特征 AA 诊断较困难, 易误诊, 文献报道其误诊率 >80% [5] AAB 则更为罕见, 截至 0,CNKI 及 PubMed 上查阅仅报道数例 本例患者为儿童, 非该病常见的发病年龄 ; 病变部位在膀胱, 非该病常见的发病部位 ; 结合本院 CT 局部活检结果, 初期本研究也认为膀胱横纹肌肉瘤可能性大 肿瘤电切术后大量碎渣样标本送检, 仍得出与临床特点不甚一致的结果 ; 两

28 中华肿瘤防治杂志 03 年 0 月第 0 卷第 9 期 CHINJCANCERPREV TREAT,October03,Vol.0 No 综述 讲座 犚犈犐犆抑制肿瘤细胞生长机制研究进展 耿英刘东屏中国医科大学附属第一医院消化科, 辽宁沈阳 000 摘要 目的 : 总结 REIC 抑制人类肿瘤细胞生长的机制 方法 : 应用 PubMed CNKI 期刊全文数据库检索系统, 以 REIC 细胞凋亡 等为关键词, 检索 年的相关文献 纳入标准 :)REIC 的一般特性 ;)REIC 的细胞免疫学特性 ;3)REIC 诱导肿瘤细胞凋亡 ;4)REIC 细胞内作用配体 排除标准 :REIC 抑制肿瘤细胞生长的病理意义 符合要求纳入分析的文献 5 篇 结果 :REIC 是新近发现的肿瘤抑制基因, 具有诱导细胞凋亡和抑制肿瘤生长的作用 其机制为 a 型 REIC/DKK 3 启动子高度甲基化导致 REIC/DKK 3 表达下调 ;REIC 蛋白诱导 CD4 + 单核细胞分化募集树突状细胞, 加强脾抗肿瘤溶细胞活性从而抑制肿瘤细胞的生长 ;REIC 激发内质网紧张度诱导 IL 7 上调进而作用于自然杀伤细胞产生间接抗肿瘤作用 ;REIC/DKK 3 高表达下调分化抑制蛋白促使 JNK 激酶磷酸化, 进而诱导细胞凋亡 ;REIC 蛋白的过表达激活 TGF β 受体, 从而导致 Smad 蛋白磷酸化 结论 : 在肿瘤中 REIC 启动子高甲基化致其表达水平降低, 造成其诱导细胞分化 下调分化抑制蛋白和激活 TGF β 受体的能力下降, 致肿瘤细胞凋亡水平降低, 增殖能力增高 关键词 肿瘤 ; 基因,REIC; 综述文献中华肿瘤防治杂志,03,0(9): 犚犲狊犲犪狉犮犺狆狉狅犵狉犲狊狊狅犳狋犺犲犿犲犮犺犪狀犻狊犿狊狅犳犚犈犐犆犵犲狀犲犻狀犻狀犺犻犫犻狋犻狀犵狋犺犲狋狌犿狅狉犵狉狅狑狋犺 犌犈犖犌犢犻狀犵, 犔犐犝犇狅狀犵 狆犻狀犵犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犇犻犵犲狊狋犻狏犲, 犉犻狉狊狋犃犳犳犻犾犻犪狋犲犱犎狅狊狆犻狋犪犾狅犳犆犺犻狀犪犕犲犱犻犮犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犛犺犲狀狔犪狀犵 000, 犘. 犚. 犆犺犻狀犪 [ 犃犅犛犜犚犃犆犜 ] 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 :TosummarizethemechanismsofREICininhibitionoftumorgrowth. 犕犈犜犎犗犇犛 :Tore trievetherelevantliteraturespanning005-0yearsbythepubmed,cnkijournalfultextdatabaseretrievalsystem, using REIC,celapoptosis askeywords.theinclusioncriteriawereasfolows:)reicgeneralcharacteristics;)reic celulaimmunologiccharacteristics;3)reicinducingtumorcelapoptosis;4)theintracelularinteractionpartnersofre IC.Exclusioncriteria:PathologicalsignificanceofREICinhibitingtumorgrowth.Twenty fivearticlesmeetingthecriteria wereusedforanalysis. 犚犈犛犝犔犜犛 :REICisanoveltumorsuppressor,itsoverexpressioncaninducecelapoptosisandin hibittumorgrowth.themechanismsofreicininhibitingtumorgrowthincludehypermethylationofreictype adown regulatesitsexpression;cd4 + monocytesdiferentiationresultinginassemblingofdendriticcelstostrengthentheanti tumoractivityofspleencelstoinhibittumorcelgrowth,reictriggerserstressthatcaninduceil 7up regulation makinganindirectantitumorefect;reicoverexpressioninducesthephosphorylationofjnkkinasebydown regulating theinhibitionofdiferentiation (Id );TGF βreceptorwasactivatedbytheoverexpressionofreicprotein,leadingto thephosphorylationofsmad. 犆犗犖犆犔犝犛犐犗犖 :HypermethylationofREICleadstopromoterdownregulatesitsexpression, whichcausesthelowlevelofapoptosisandhighlevelofproliferationbythedecreasedabilitiesininducingceldiferentia tion,down regulatingid andactivatingtgf βreceptorintumorcels. [ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ] neoplasms;genes,reic;reviewliteratur 犆犺犻狀犑犆犪狀犮犲狉犘狉犲狏犜狉犲犪狋,03,0(9): 中图分类号 R73-3 文献标识码 A 文章编号 (03) 第一作者简介 耿英, 女, 内蒙古赤峰人, 主要从事 HP 感染与胃癌癌前病变基因监控及意义的研究工作 E mail:[email protected] 通讯作者简介 刘东屏, 女, 辽宁沈阳人, 博士, 教授, 硕士生导师, 主要从事 HP 感染与胃癌癌前病变基因监控及意义的研究工作 E mail:[email protected]

29 附 动态 简讯 中华肿瘤防治杂志 稿约 中华肿瘤防治杂志 是经国家科学技术部和国家新闻出版总署批准, 由中华人民共和国卫生部主管 中华预防医学会和山东省肿瘤防治研究院主办的肿瘤专业学术期刊, 隶属于中华预防医学会系列杂志 本刊的办刊宗旨 : 以防为主 ( 三级预防 ), 防治并举 办刊理念 : 传播肿瘤科学研究的信息, 营造百家争鸣的学术氛围 ; 科学为本的学术导向, 质量至上的采编原则 ; 成就作者, 服务读者 以从事肿瘤学基础理论研究 临床研究工作者及医学院校师生为主要读者对象 本刊被国家新闻出版总署列为 中国期刊方阵 ( 双效期刊 ), 为中华预防医学会系列杂志优秀期刊 系北京大学中文核心期刊 中国生物医学核心期刊 中国科技核心期刊 中国国家科技部中国科技论文统计源期刊 美国 化学文摘 (CA) 来源期刊 俄罗斯 ABSTRACT JOURNALS 来源期刊和波兰 哥白尼索引 (IC) 来源期刊 由 中国期刊网 中国学术期刊 ( 光盘版 ) 全文收录, 被 中国学术期刊综合评价数据库 全文收录, 被中国国家 九五 重点攻关项目 万方数据网 中文生物医学期刊文献数据库 中国生物医学文献数据库 全文收录 中华肿瘤防治杂志 为半月刊, 国际标准 A4 开本,80 页码 主要栏目有高端述评 前沿报道 / 论著 流行病学研究 / 论著 实验研究 / 论著 临床基础研究 / 论著 临床应用研究 / 论著 荟萃分析 / 论著 短篇报道 / 论著 综述 讲座和动态 简讯等 投稿须知. 基本要求文稿应选题新颖, 具有先进性 科学性 逻辑性, 论点鲜明 数据可靠 结论明确 层次清楚 文笔流畅 用字及标点准确规范. 排版格式来稿请用 word 排版,.5 倍行距 小 4 号字 稿件内容排列顺序 ( 论著类 ) 依次为中文文题 作者 作者单位和单位所在地 邮编 ; 英文文题 作者 作者单位和单位所在地英译名 邮编 ; 中 英文摘要及中 英文关键词 ; 正文 参考文献 ( 具体请参照 的杂志电子版 ) 同时, 请在稿件后附页介绍第一作者及通讯作者的姓名 性别 籍贯 ( 省 市 / 县人 ) 最高学历 职称 研究方向 工作单位和详细的通讯地址 邮 政编码 联系电话 ( 手机 单位 住宅和传真等 ) 及 E mail 地址.3 投稿方式本刊只接受网站投稿, 来稿请登陆 org, 点击 作者中心 自行网上注册上传稿件, 注册后请记住用户名与密码, 以便以后自行查询稿件进度 网站投稿后须将第一作者单位推荐信通过邮局邮寄至本刊, 作者单位负责稿件真实性与保密性的审查 若为基金资助项目, 请在首页用脚注形式按国家规定的正式名称填写并在圆括号内注明项目编号, 如 : 国家自然科学基金 ( ) 请寄:507, 山东省济南市济兖路 440 号, 中华肿瘤防治杂志 社 ( 勿寄个人 ) 本刊编辑部保留对来稿编辑责任范围内的删修权 作者接到收稿回执后 3 个月内未收到稿件处理意见, 则稿件仍在审理中, 如作者欲投他刊, 敬请与本刊编辑部联系 来稿同时需交付稿件处理费 60 元 ( 邮寄地址同上, 勿寄个人 ) 决定采用后即通知第一作者交付发表版面费 出刊后赠当期杂志 册.4 推荐审稿人投稿的同时, 您可以在投稿系统的留言栏中推荐 3 名非本单位的权威专家作为您的审稿人, 我们将根据相关情况选择加入我刊编委会, 请投稿时务必将推荐审稿人的详细简介 电子邮箱和电话等确切联系方式以附件形式上传 文稿写作的一些注意事项. 文题顶格书写, 力戒冗长, 简明确切地反映文章主题, 中文文题一般不超过 0 个汉字, 题目中尽量避免标点符号. 作者文章署名作者均应具备作者资格 :) 参与选题和设计, 或对资料进行分析和解释者 ;) 起草或修改论文中关键性的重要理论内容者 ;3) 最终同意论文发表者 署名一般不宜超过 6 人, 置于文题下顶格书写 如果署名作者不是一个单位, 必须在导言或相应的内容中说明文章所用资料的具体来源出处, 避免用 我院 ( 校 所等 ) 代过 集体署名的文章必须明确论文首席负责人 作者的署名及署名排序应在投稿时确定, 不得在编排过程中再作更改

30 附.3 摘要论著和综述类稿件需中 英文摘要各 份, 中 英文摘要的内容要一致 摘要内容要涵概全文的主要内容, 论著和综述类文章均采用目的 方法 结果和结论 4 段式, 摘要均采用 大摘要 形式, 字数不限, 文题 目的 结论 要呼应, 结果 结论 相互支持 摘要应是一篇独立的 能高度概括文章内容具有 自明性 的短文.3. 目的 ( 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 ) 简要说明研究或资料总结的目的, 说明提出问题的缘由, 要与文题相呼应.3. 方法 ( 犕犈犜犎犗犇犛 ) 简要而重点的说明课题研究的基本思路和设计 技术路线和实验方法 临床资料截取时间与样本量 观察项目和数据的获得以及统计学处理方法等.3.3 结果 ( 犚犈犛犝犔犜犛 ) 提炼出文章能说明结论的主要结果和主要发现, 说明结果的置信值 详实的实验结果数据 统计学检验的确切值 结果必须能够满足导出结论的要求.3.4 结论 ( 犆犗犖犆犔犝犛犐犗犖犛 ) 通过研究结果说明所研究内容的理论价值或应用价值, 要言简意赅, 与研究目的相呼应, 与研究结果相印证.4 关键词论著性文章需标引关键词 应针对文章所涉及的重点内容标引主题词, 请以最新版美国国立医学图书馆编辑的 IndexMedicus 中的医学主题词表 (MeSH) 内所列的词为准 中文译名参照 医学主题词注释字顺表 和 中医药主题词表, 药名参照 英汉汉英药名词汇 和最新版的 中华人民共和国药典 关键词选取要全面涵盖文章的主要内容, 以免文章发表后, 相关检索因缺乏体现重要内容的关键词而漏检, 关键词以不少于 4 个为宜.5 正文.5. 层次与序号尽量减少层次, 一般是有标题内容才列序号 ( 没有标题的内容用自然段形式起始 ) 序号层次书写方法如下 : ( 一级标题, 顶格, 占 行, 标题后不用标点符号 ). ( 二级标题, 顶格, 占 行, 标题后不用标点符号 ).. ( 三级标题, 顶格, 标题后不用标点符号, 空 个汉字接正文 ) ) :( 子标题, 空 个汉字, 标题后用 : 接正文 ).5. 表格和插图应用表或图时应避免表 图内容与文字说明内容重复 表格放在正文出现的位置, 一律用 三线表, 主谓语要符合逻辑, 位置正确 表内数字纵行要以小数点或 ± 对齐, 小数点后位数要一致 - 代表阴性未发现, 空白 表示无此项或未测 图附于文末, 图线条应均匀 清晰 光滑, 图面要整洁 照片图要求有良好的清晰度和对比度, 图下应有图序 图题 图注 组织病理学图片一律用彩色, 并注明染色方法和放大倍数.5.3 医学名词及简称与略语医学名词的使用以全国自然科学名词审定委员会审定公布的 医学名词 ( 科学出版社 ) 为准, 暂无审定公布者参照 英汉医学词汇 ( 人民卫生出版社 ) 药物名称以最新版的 中华人民共和国药典 为准 专业名词 术语原则上应写全称, 对一些已通用且文中反复出现的简称或略语, 应在首次出现时用全称及括号注明简称 文题一般不用简称或略语.5.4 计量单位及数字一律按照 中华人民共和国国家标准 (GB300~30-93) 量或单位 书写 在一个组合单位代号内, 只用一条斜线, 如 mg/kg/d 应写为 mg/(kg d) 或每天 mg/kg 作为量词的计数 计量 ( 包括正负数 分数 小数 百分率等 ) 和年 月 日时间均用阿拉伯数字多位数字的书写实行 3 分节法, 数字相乘表示面积或体积时, 每数字后均写单位, 如 3cm 4cm 5cm, 不应写成 3 4 5cm 或 3 4 5cm 统计学符号统一按国家标准 GB 统计学名词及符号 中有关规定书写, 一律用斜体 书写时需特别注意这些字母是英文还是希文 是大写还是小写 字母顶端的标记及上下角注等.5.6 讨论请作者依据自己研究的结果, 参考相关文献进行讨论, 要紧扣自己研究的目的, 通过对自己研究的结果解释并与所引用相关研究的文献对比等, 导出结论!.6 参考文献仅标注和列出作者亲自阅读过的 国内外公开发行的书籍或刊物中的有关文献, 内部资料 非正式刊物登载的会议资料 课题鉴定资料均不能列为参考文献 参考文献用原来语种列出, 日文汉字不应与我国汉字及简化字混淆应用 参考文献的编号按正文出现的先后顺序连续排列, 在文中相关部位文字的右上角用阿拉伯数字加方括号标注 文献序号作正文叙述时, 用与正文同号的数字并排 作者必须对所引用的文献仔细地与原文核对, 因引用错误等引发的纠纷由作者自负其责 请严格按我刊格式以引用的先后顺序将参考文献排列于文末 论著稿件文献不少于 8 条 近 3 年的文献必须 60% 参考文献要全面检索, 对该领域有影响的文献, 尤其是发表在学术地位较高杂志上的文献一定要有引用, 并以此展开撰写讨论! 同时, 国内的研究务必不要忽略!

31 毣 櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥毣 环境与职业医学 杂志 03 年征订通知 动态 简讯 附 3 创刊于 984 年的 环境与职业医学 杂志, 为中华预防医学会系列杂志优秀期刊, 系由上海市疾病预防控制中心 中华预防医学会主办的国内外公开发行的专业学术期刊 (ISSN ,CN3 879/R,CODEN HYZYAZ) 本刊已连续多次被评为中国中文核心期刊和中国科技核心期刊 ; 并被美国化学文摘 (CA) 美国乌利希国际期刊指南 (UIPD) 英国国际农业与生物科学研究中心 (CABI) 波兰哥白尼索引 (IC) 美国剑桥科学文摘 ( 自然科学 )[CSA(NS)] 等著名国际数据库所收录 本刊内容主要介绍国内外劳动卫生与职业病防治工作 环境危害因素及其治理, 以及有关环境与职业医学的学术研究 科研成果和实践经验 包括职业与环境卫生 环境与健康 环境流行病学 环境检测 环境毒理 生态与健康 职业病临床 化学应急救援 卫生管理 环境污染与治理 职业病防治等其他各方面的公共卫生实践的论著 实验研究 方法研究 调查研究 综述 短篇报道 病例报告等 可供广大疾病控制 卫生监督部门, 厂矿劳动安全 卫生与职业病防治, 环境保护 环境科学研究等相关单位专业人员, 医学院校教学 科研等人员参考, 欢迎订阅 本刊为月刊, 大 6 开,80 页, 每月 5 日出版, 每期定价 0 元, 全年定价 0.00 元 ( 含包装及平邮邮资, 需挂号或速递者邮资另计 ) 由邮局及自办结合发行, 本刊邮发代号 :4 568, 邮局可办理 03 年征订工作 以下征订单回执, 请阅读者务必填写清楚, 字体切勿潦草, 回执上请填上详细地址 单位及收件人姓名和邮政编码. 银行汇款 : 户名 : 上海市疾病预防控制中心 ; 账号 : ; 开户 : 上海银行白玉支行. 邮局汇款 : 上海市延安西路 36 号生物大厦 楼 环境与职业医学 杂志编辑部, 邮编 :0005 读者如需单本或合订本, 可直接向编辑部联系邮购 对历年本刊所出的专题专刊 ( 含会议论文集 ), 需要者亦可联系邮购 联系人 : 葛宏妍 电话 :(0) ; 传真 :(0)608459;E mail:[email protected]; 网址 :htp://jeom.scdc.sh.cn:808 毣 毣 櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥毣 动态 简讯 毣 欢迎订阅 03 年 循证医学 杂志 循证医学 是经国家新闻出版署批准, 广东省卫生厅主管, 由广东省循证医学科研中心 广东省人民医院和中山大学附属第三医院主办的医学学术期刊 现为 中国科技论文统计源期刊 ( 中国科技核心期刊 ), CNKI 中国期刊全文数据库 万方数据 数字化期刊群 全文收录期刊, 中国学术期刊综合评价数据库 统计源期刊, 中国科学引文数据库 中国生物医学文献数据库 中国核心期刊 ( 遴选 ) 数据库 中文生物医学期刊文献数据库 中文科技期刊数据库 来源期刊, 荣获首届 CAJ CD 规范 执行优秀期刊奖 主编吴一龙 ( 广东省人民医院副院长 广东省人民医院肿瘤中心主任 广东省肺癌研究所所长 广东省循证医学科研中心主任, 中山大学 南方医科大学 汕头大学 广东省心血管病研究所肿瘤学教授, 博士生导师 ) 本刊以广大医药卫生技术人员和医疗 教学 科研管理工作者为读者对象, 立足临床医学, 介绍循证医学 (evidence basedmedicine,ebm) 的理念 方法及相关知识, 探讨符合中国国情的循证医学实践, 促进国内外医学学术交流和医学科学发展 本刊以临床实践指导性为特色, 设置的主要栏目有 : 先睹为快 述评 特别报告 循证评价 论著 ( 包括诊断性研究 疗效研究 病因学研究 疾病的预后研究等 ) 证据的寻求与评价 循证医学中的医学统计学问题 循证医学理论与方法研究 综述与讲座 教育与争鸣 循证医学在线 循证病例讨论 临床指引与共识等 诚挚欢迎投稿 循证医学 杂志的国际标准刊号 :ISSN67 544, 国内统一刊号 :CN44 548, 双月刊 大 6 开本 64 页, 国内定价每期 0 元, 全年 60 元 欲订阅者请从全国各地邮局订购, 邮发代号 :46 36, 也可直接从本刊编辑部邮购 欢迎新老朋友订阅本刊 地址 : 广州市中山二路 06 号广东省人民医院 循证医学 编辑部 (50080) 电话 : , ; 传真 : 网址 : mail:[email protected] 毣 毣

32 附 4 毣 櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥櫥毣 动态 简讯 中华肿瘤防治杂志 年发表文章被引用情况及奖励办法 中华肿瘤防治杂志 自 994 年创刊以来, 学术影响力日益扩大, 先后被中国中文核心 ( 北大核心 ) 期刊 中国生物医学核心期刊 中国科技核心期刊 中国国家科技部中国科技论文统计源期刊 美国 化学文摘 (CA) 等多家国内外知名数据库收录 为了感谢各位作者对我刊发展做出的贡献, 我刊统计了 年发表文章最近 5 年被引用情况, 对发表论著类文章被引用前 0 名的作者给予奖励 数据来源 : 中国知网数据库, 中国科学引文数据库 (CSCD) 具体奖励措施 : ) 赠送第一作者和通讯作者未来 3 年的 中华肿瘤防治杂志 全年杂志 份 ) 第一作者和通讯作者在我刊如有投稿, 稿件经过审理被录用后, 将给予优先并免费发表 ( 每人限 篇 ) 奖励名单 : [] 赵充, 管迅行. 鼻咽癌放化综合治疗临床研究现状 [J]. 中华肿瘤防治杂志,006,3(6): [] 毕晔, 边莉, 黄椠, 等. 我国乳腺癌热点问题研究的现状分析 [J]. 中华肿瘤防治杂志,006,3(6):05. [3] 王立东, 樊慧, 焦新英, 等. 河南食管癌高发区 95 对单卵双胞胎疾病谱和 33 例食管癌患者家族史调查 [J]. 中华肿瘤防治杂志,006,3(0):5 54. [4] 谷俊朝, 余微波, 王宇, 等. 黄芪多糖对 TA 小鼠乳腺癌 MA 89 移植瘤生长及 HSP70 表达的影响 [J]. 中华肿瘤防治杂志,006,3(0): [5] 徐敏, 李建彬, 田世禹. 放射性皮炎的防治研究现状 [J]. 中华肿瘤防治杂志,007,4(7): [6] 钱海洪, 胡义德. 青蒿素类药物抗肿瘤作用机制的研究进展 [J]. 中华肿瘤防治杂志,006,3(): [7] 施军涛, 许娟, 张安秦. 乳管内视镜检查 337 例乳头溢液患者误诊原因分析 [J]. 中华肿瘤防治杂志,006,3 (3):8 0. [8] 潘建基, 林少俊, 张瑜. 鼻咽癌调强放疗初步结果 [J]. 中华肿瘤防治杂志,006,3(9): [9] 罗景玉, 杨长征, 李道堂. 非小细胞肺癌组织中 VEGFR 3 的表达及临床意义 [J]. 中华肿瘤防治杂志,006,3 (5): [0] 牛丽娟, 王勇, 朱利. 彩超诊断甲状腺癌颈部淋巴结转移的临床价值 [J]. 中华肿瘤防治杂志,007,4(4):00 0. [] 何迎春, 田道法, 贺安意. 重组质粒 plmp p53mt 在人鼻咽癌 HNE 和人宫颈癌 HeLa 细胞中的表达分析 [J]. 中华肿瘤防治杂志,006,3(6): [] 张亚冰, 赵立群, 裘宋良. 河南省林州市 004 与 980 年食管癌前病变和食管癌患病率的比较研究 [J]. 中华肿瘤防治杂志,006,3(5): [3] 周艳红, 徐瑞成, 呼文亮. 维甲酸对胃癌细胞生长抑制及凋亡的诱导作用 [J]. 中华肿瘤防治杂志,006,3(5): [4] 陈延治, 李建军, 顾菲. 缺氧对肝癌 BEL 740 细胞周期及放射敏感性的影响 [J]. 中华肿瘤防治杂志,006,3 (0): [5] 古模发, 杜玉忠, 陈新林. 鼻咽癌患者中 SF 36 量表的信度和效度的研究 [J]. 中华肿瘤防治杂志,007,4(8): [6] 沈莉, 单保恩, 张莉. 放射性食管炎动物模型的构建 [J]. 中华肿瘤防治杂志,007,4():3 6. 毣 毣